JPS6260399B2

JPS6260399B2 -

Info

Publication number: JPS6260399B2
Application number: JP2455579A
Authority: JP
Inventors: Akio Fujii; Yasuhiko Muraoka; Takeyo Fukuoka; Tomohisa Takita; Hamao Umezawa
Original assignee: Nippon Kayaku Co Ltd
Current assignee: Nippon Kayaku Co Ltd
Priority date: 1979-03-05
Filing date: 1979-03-05
Publication date: 1987-12-16
Also published as: JPS55120598A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明はブレオマイシン群抗生物質に還元的メ
チル化反応を施し、部分構造式〔〕の第一級アミンをメチル化して、部分構造式
〔〕を有する新規なブレオマイシン群抗生物質を製造
する方法に関する。たとえばブレオマイシンは梅沢らにより発見さ
れた放線菌ストレプトミセス・バーチシラスによ
り生産される抗腫瘍性抗生物質で（梅沢ら：ジヤ
ーナル・オブ・アンチビオチクス19A巻、200
頁、1966年）、現在ブレオマイシンA₂とB₂を主な
成分とする混合物が癌の化学療法とくに、頭頚部
癌、皮膚癌、陰茎癌、子宮頚癌、食道癌、肺癌、
悪性リンパ腫などの領域で、主として扁平上皮癌
にすぐれた効果を発揮している。しかし、従来のブレオマイシンは不活化酵素の
作用により、次式〔式中、Ｚはブレオマイシン残基を示す。〕で表わ
されるように、部分構造（２・３−ジアミノプロ
ピオン酸アミド）が加水分解を受けることにより
不活化されることが、ネズミの肝臓などの器官を
用いて明らかにされ、また、ブレオマイシンが強
く作用する皮膚や肺ではブレオマイシンは比較的
不活化されず、ブレオマイシンが作用しないとい
われる胃などでは不活化され易いことがわかつ
た。さらに20メチルコラントレンで発生するネズ
ミの扁平上皮癌にはこの不活化力が低く、同じ原
因で発生する肉腫には高いことがわかつた（梅沢
ら：ジヤーナル・オブ・アンチビオチクス25巻、
409頁、1972年；梅沢ら：ジヤーナル・オブ・ア
ンチビオチクス27巻、419頁、1974年）。さらにまた、ヒトの頭頚部にできる扁平上皮癌
にもブレオマイシンを不活化する作用が認めら
れ、中でもブレオマイシンが比較的に効かないと
いわれる低分化型の扁平上皮癌に、この不活化が
顕著であることがわかつた（ミユラーら：カンサ
ー40巻、2787頁、1977年）。これらの知見からわかるように、不活化酵素の
作用の強い癌にはブレオマイシンは十分な効果を
発揮できない。現在、ブレオマイシンに一層の改
良が期待される理由の一つはこの点にある。そこで本発明者らは不活化酵素の作用を受けな
いブレオマイシン群抗生物質について種々検討し
た結果、前記式〔〕で表わされる部分構造式を
有するブレオマイシン群抗生物質（以下「Ｎ−メ
チル体」という）が不活化酵素の作用を全く受け
ないことを見出し、本発明を完成した。本発明の製造方法を実施するには前記式〔〕
で表わされる部分構造を有するブレオマイシン群
抗生物質の脱銅体に還元的メチル化反応を施せば
よい。すなわちブレオマイシン群抗生物質の脱銅
体と、それが溶解するメタノール、ジメチルホル
ムアミド、ジメチルスルホキシドなどの水溶性有
機溶媒、その含水溶媒または水に溶解し、これを
０℃乃至30℃の間の一定温度に保ち、撹拌しなが
らホルムアルデヒドおよび還元剤を添加し、１乃
至24時間反応させればよい。本発明の原料物質である前記式〔〕で表わさ
れる部分構造を有するブレオマイシン群抗生物質
としては、ストレプトミセス・バーチシラスの培
養液から公知の方法（梅沢ら：ジヤーナル・オ
ブ・アンチビオチクス19巻、210頁、1966年）に
より採取されるブレオマイシン類、培養に際しア
ミノ化合物を前駆物質として添加する方法（特公
昭48−32355、同48−32354）によつて製造される
ブレオマイシン類、ブレオマイシンの末端アミン
におけるＮ−置換誘導体（特公昭50−31122）、ス
トレプトミセス・ビキニエンシス・バリアント・
ゾルボネンシス（Streptomyces bikiniensis
var.zorbonensis）の生産するゾルボノマイシン
ＢおよびＣ（アルグデリスら：ジヤーナル・オ
ブ・アンチビオチクス24巻、543頁、1971年）、ス
トレプトスプランギウム・ビオラセオクロモゲネ
ス（Streptosporangium violaceochromogenes）
の生産するビクトマイシン（河本ら：ジヤーナ
ル・オブ・アンチビオチクス28巻、358頁、1975
年）、ストレプトスポランギウム・ビオラセオク
ロモゲネス・亜種グロボフイルム
（Streptosporangium violaceochromogenes sub
sp.globophilum）の生産するプラトマイシンＡお
よびＢ（高沢ら：ジヤーナル・オブ・アンチビオ
チクス28巻、366頁、1975年）およびアクチノミ
セーテス（Actinomycetes）に属するNo.E465−64
株の生産するタリソマイシンＡおよびＢ（川口
ら：ジヤーナル・オブ・アンチビオチクス30巻、
779頁、1977年。）などがあげられる。還元的メチル化反応に用いられる還元剤として
はシアノ水素化ホウ素ナトリウムなどの水素化ホ
ウ素化合物、ギ酸の誘導体などがあげられる。ま
たパラジウム−カーボンなどの触媒を用いて接触
還元をおこなつてもよい。なお還元的メチル化反応に用いられるホルムア
ルデヒドはブレオマイシン群抗生物質１モルに対
して1.0〜1.5モル使用するのがよく、また、還元
剤はブレオマイシン群抗生物質１モルに対し0.6
乃至２モル使用するのがよい。また、３−アミノプロピルアミノブレオマイシ
ンのように部分構造〔〕および式以外に芳香族一級アミンを除く遊離の一級アミン
を有するブレオマイシン群抗生物質を出発原料に
する場合にはそのアミンもメチル化されＮ−メチ
ル体の収率が低下する場合がある。この場合には
部分構造〔〕の一級アミンをあらかじめ銅など
とキレートさせて保護した後、公知の方法で上記
の遊離の一級アミンに三級ブトキシカルボニル基
などのアミンの保護基を導入し、次いで銅などの
キレート金属を除去したものを還元的メチル化
し、反応終了後、必要に応じ公知の方法、たとえ
ばトリフロロ酢酸などにより保護基を脱離させて
目的とするＮ−メチル体を収率よく得ることがで
きる。上記のようにして得られたＮ−メチル体を単離
するには、反応液のPHを水酸化ナトリウムで6.0
に合わせ、メタノールを減圧下で留去した後、脱
塩するため吸着樹脂たとえばアンバーライト
XAD−２（ローム・アンド・ハース社製）を蒸
留水を用いて充填したカラムに注入し目的物を吸
着する。蒸留水で塩類を洗い流した後、酸性の含
水メタノール、たとえば1/50規定塩酸水溶液−メ
タノール（１：4v／ｖ）で溶出し、波長290ミリ
ミクロン付近に吸収極大を示す分画を集める。陰
イオン交換樹脂、ダウエツクス44（OH^-型；
ザ・ダウ・ケミカル社製）で中和した後、減圧下
で濃縮して凍結乾燥するとＮ−メチル体の粗粉末
が得られる。この粗粉末をさらに精製する場合には次の操作
を行えばよい。すなわち、上記粗粉末を蒸留水に
溶解し、これに塩基性炭酸銅などの銅塩を加えて
撹拌し、Ｎ−メチル体の含銅体とする。これを予
めPH4.5、1/20モルの酢酸−酢酸ナトリウム緩衝
液で平衝化したCM−セフアデツクスＣ−25
（Na⁺型；フアルマシア・フアイン・ケミカルズ
社製）を充填したカラムに注入して吸着する。上
記の緩衝液に連続的に塩化ナトリウムを加えるこ
とによりナトリウム濃度を1.0モルまで徐々に上
昇させる直線勾配法により溶出すると、含銅Ｎ−
メチル体がその塩基性に応じて0.50乃至0.80モル
の間で帯状に溶出する。この時、未反応原料と副
生物はより早く溶出する性質があるので、紫外線
吸収モニター、たとえばユビコード（LKB社
製）を用いることにより検知して分離除去するこ
とが可能である。もし目的物の分画に不純物の混
入が認められれば、上記のクロマトグラフイーを
再度行い完全除去をはかればよい。このようにし
て得られる含銅Ｎ−メチル体の分画を、先に用い
たアンバーライトXAD−２脱塩法で脱塩し、そ
の後凍結乾燥すると精製された含銅Ｎ−メチル体
が得られる。このようにして得られた含銅Ｎ−メ
チル体を公知の方法、たとえばEDTAを用いる方
法（特公昭52−31875）で脱銅すれば目的とする
Ｎ−メチル体が得られる。その一例を説明すると、含銅体を蒸留水に溶解
し、これを蒸留水を用いて充填したアンバーライ
トXAD−２のカラムに注入し吸着する。その
カラムを２％の塩化ナトリウムと５％のエチレン
ジアミン四酢酸・２ナトリウム（以下、
「EDTA・Na₂」という。）からなる水溶液で洗
い、次に過剰のEDTA・Na₂を２％塩化ナトリウ
ム水溶液で除去後蒸留水で洗浄する。次に酸性の
含水メタノール、たとえば1/50規定塩酸水溶液−
メタノール（１：4v／ｖ）で溶出して波長290ミ
リミクロン付近に吸収極大を示す分画を集める。
ダウエツクス44（OH^-型）を用いてPH6.0に合
わせた後、減圧下で濃縮し、凍結乾燥するとＮ−
メチル体・塩酸塩の粉末が得られる。前記の塩酸
水溶液の代りに、たとえば硫酸水溶液を用いれば
目的物は硫酸塩で得られる。このように、上記の
溶出工程で用いられる酸を選択することにより、
薬剤学的に許容される任意の酸との間の非毒性塩
が得られる。以上により説明した方法により製造されるＮ−
メチル体の炭素13NMRスペクトル（重水中、プ
ロトン・ノイズ・デカツプリング法により測定し
た。）の中に、本発明の方法によつて導入された
メチル基のシグナルが、化学シフト32.7ppmに検
出された。また、Ｎ−メチル体を６規定の塩酸水
中で105℃、24時間の加水分解にかけると、３−
アミノ−２−メチルアミノプロピオン酸およびメ
チルアミンが加水分解液中に生成するのを確認し
た。同時に、ブレオマイシン類に共通するその他
の分解生成物が、２・３−ジアミノプロピオン酸
を除いて検出された。以上の事実は本発明の方法によつて製造される
化合物が、前記式〔〕で表わされる部分構造を
有することを裏づけている。次に代表的なＮ−メチル体および含銅Ｎ−メチ
ル体の理化学的性質を表１に、また紫外吸収スペ
クトルおよび赤外吸収スペクトルを第２図乃至第
７図に示す。次に本発明の方法によつて製造されるＮ−メチ
ル体の代表的なものの生物学的性質を次に示す。１不活化酵素に対する耐性 (1) 不活化酵素の抽出法雌性ドンリユー系ラツトの肝臓に２倍重量
の1/15モル、PH7.2のリン酸緩衝液を加えて
破砕し、組織乳剤とした。105000×Ｇで60分
間の遠心分離を行い、その上清液を透析し
た。この高分子分画を不活化酵素の抽出液と
して用いた。 (2) 不活化反応の測定法上記の抽出液１mlに、基質溶液１mlを加
え、37℃で15、30、60、および120分間の反
応を行つた。反応液0.3mlについて、除蛋白
した後、ミコバクテリウム・スメグマチ

【表】ス・ATCC607に対する残存活性を測定し
た。なお基質溶液は800mcgの試料（Ｎ−メチ
ルブレオマイシンA₂またはB₂）または対照試
料（ブレオマイシンA₂またはB₂）を含有して
いる。 (3) 結果結果を第１図に示す。この図から明らかな
ように、対照試料のブレオマイシンA₂、B₂
はともに不活化酵素の作用を大きく受け、酵
素反応開始60分後にはA₂で約41％B₂では実
に約77％もの活性低下が認められた。それに
対し、本発明の方法により製造したA₂、B₂
のＮ−メチル体は双方とも活性の低下が全く
認められなかつた。２無細胞でのDNA鎖切断活性ブレオマイシン類の制癌作用の機序はブレオ
マイシン、二鉄化、および分子状酸素が協力し
て行うDNA鎖切断であると考えられている。
そこでＮ−メチル体のDMA鎖切断活性につい
て試験を行つた。 (1) あらかじめ二価鉄と試料（Ｎ−メチルブレ
オマイシンA₂またはB₂）または対照試料（ブ
レオマイシンA₂またはB₂）を混合し、これを
1/10モル、PH7.4のリン酸緩衝液に、トリチ
ウム標識を施したDNAと共に溶解し、酸素
の存在下、37℃で５分間反応させた。反応液
に25％トリクロロ酢酸を添加し、次いで生じ
た沈澱を遠心分離により除去し、その上清液
（酸可溶性分画）について放射活性を測定し
て酸可溶化率を算出した。これをDNA切断
の程度を示す指標とした。 (2) 結果

【表】この表から明らかなように本発明の方法で
製造したＮ−メチル体は双方とも対応する対
照試料とほぼ同等の酸可溶化率を示した。３ HeLaS₃細胞に対する増殖阻害効果 (1) 試験方法プラスチツクシヤーレの培養基（10％仔牛
血清添加MEN培地を使用）にHeLaS₃細胞を
接種し、２日後に試料（Ｎ−メチルブレオマ
イシンA₂またはB₂）または対照試料（ブレオ
マイシンA₂またはB₂）を添加し、さらに３日
間培養した後、細胞数を測定し、試料無添加
の場合の細胞数から次式により阻害％を求
め、50％細胞増殖阻害濃度（ID50）を算出
した。阻害％＝〔１−Ｘ−Ｚ／Ｙ−Ｚ〕×100 Ｘ：被験試料添加後３日目の最終細胞数Ｙ：被験試料添加の場合の最終細胞数Ｚ：被験試料添加時の細胞数 (2) 結果結果を表３に示す。

【表】この表から明らかなように本発明の方法で
製造したＮ−メチル体は対応する対照試料と
比較してHeLaS₃細胞の増殖阻害活性も劣る
ことなく、特にＮ−メチルブレオマイシン
B₂においては対照試料に比し、倍以上の阻
害効果を示した。以上に記したように本発明の方法によつて
製造されるＮ−メチル体は不活化酵素により
不活化されず、また、DNA切断能力および
HeLaS₃細胞の増殖阻害活性も原料であるブ
レオマイシン群抗生物質とほぼ同一またはそ
れ以上である。これらの事実は本発明の方法
によつて製造されるＮ−メチル体の有用性を
裏付けるものである。次に実施例により本発明の製造方法を具体的に
説明する。実施例１Ｎ−メチルブレオマイシンA₂の合成Ａ−Step ブレオマイシンA₂（脱銅体）塩酸塩1.0ｇを70
mlのメタノールに溶解し、25℃で撹拌しながら30
mgのホルムアルデヒドを水溶液として添加し、次
いで29mgのシアノ水素化ホウ素ナトリウムを添加
した。16時間反応したのち、１規定塩酸水溶液で
反応液のPHを1.0に下げ、10分間放置して反応を
止めた。１規定苛性ソーダ水溶液で中和した後、メタノ
ールを減圧下で留去し、残液に蒸留水を加えて10
mlとした。これを脱塩するため、蒸留水で充填し
たアンバーライトXAD−２のカラム（300ml体
積）に注入し吸着させた。蒸留水で洗滌後、1/50
規定塩酸水溶液−メタノール（１：4v／ｖ）で
溶出し、波長290ミリミクロン付近に吸収極大を
示す分画を集めた。陰イオン交換樹脂ダウエツク
ス44（OH^-型）で中和したのち、減圧下で濃
縮し、凍結乾燥して粗粉末を得た。これを10mlの蒸留水に溶解し、113mgの塩基性
炭酸銅を加え、室温で２時間撹拌した。過剰の塩
基性炭酸銅を過し、得られる青色の液を予め
1/20モル、PH4.5の酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液
で平衡化したCM−セフアデツクスＣ−25
（Na⁺型）のカラム（200ml体積）に注入して吸着
した。上記の緩衝液に食塩を連続的に添加するこ
とにより、PHを変えないでナトリウム濃度を1.0
モルまで徐々に上昇させる直線勾配法により２
の溶出液を流し、0.65モル前後で溶出する青紫色
の分画を集め、純度を上げるため上記のカラムク
ロマトグラフイーに再びかけた後、アンバーライ
トXAD−２脱塩法で脱塩した。減圧濃縮し、
凍結乾燥して446mgのＮ−メチルブレオマイシン
A₂（含銅体）・塩酸塩の青紫色無定形粉末を得
た。収率42％。本品の紫外吸収極大値および抗菌力価は次の通
りだつた。紫外吸収極大：ミリミクロン（Ｅ^１％_１ｃｎ蒸留水） 292（122） 244（148）抗菌力価 520mcg力価／mg （注、抗菌力価はブレオマイシンA₂（脱銅体）を1000mcg力価／mgとし、ミコバクテリウム・ス
メグマチス・ATCC607を検定菌として測定した
ものである。以下も同様である。）Ｂ−Step Ａ−Stepで得た含銅体430mgを10mlの蒸留水に
溶解し、脱銅するためアンバーライトXAD−
２のカラム（200ml体積）に注入して吸着させ
た。２％の食塩と５％のEDTA・Na₂からなる水
溶液600ml、２％食塩水400ml、蒸留水250mlの順
序でカラムを洗滌した後、1/50規定塩酸水溶液−
メタノール（１：4v／ｖ）で溶出し、波長290ミ
リミクロン付近に吸収極大を示す分画を集めた。
陰イオン交換樹樹脂ダウエツクス44（OH^-
型）でPH6.0に合わせた後、減圧濃縮し、凍結乾
燥して380mgのＮ−メチルブレオマイシンA₂（脱
銅体）・塩酸塩の白色無定形粉末を得た。収率92
％。本品の紫外吸収極大値および抗菌力価は次の通
りだつた。紫外吸収極大：ミリミクロン（Ｅ^１％_１ｃｎ蒸留水） 291（93）抗菌力価：418mcg力価／mg 実施例２Ｎ−メチルブレオマイシンA₂の合成Ａ−Step ブレオマイシンA₂（脱銅体）・塩酸塩1.0ｇを70
mlのメタノールに溶解し、０℃で撹拌しながら25
mgのホルムアルデヒドを水溶液として添加し、次
いで29mgのシアノ水素化ホウ素ナトリウムを添加
した。24時間反応した後、PH1.0に下げて反応を
止めた。これを実施例１、Ａ−Stepの方法で処理し
て、191mgのＮ−メチルブレオマイシンA₂（含銅
体）・塩酸塩の青紫色無定形粉末を得た。収率18
％。本品の紫外吸収極大値および抗菌力価は次の通
りだつた。紫外吸収極大：ミリミクロン（Ｅ^１％_１ｃｎ蒸留水） 292（122） 244（148）抗菌力価：516mcg力価／mg Ｂ−Step Ａ−Stepで得た含銅体180mgを実施例１、Ｂ−
Stepの方法で脱銅して、157mgのＮ−メチルブレ
オマイシンA₂（脱銅体）・塩酸塩の白色無定形粉
末を得た。収率91％。本品の紫外吸収極大値および抗菌力価は次の通
りだつた。紫外吸収極大：ミリミクロン（Ｅ^１％_１ｃｎ蒸留水） 291（93）抗菌力価：427mcg力価／mg 実施例３Ｎ−メチルブレオマイシンA₂の合成Ａ−Step Ａ−Step ブレオマイシンA₂（脱銅体）・塩酸塩1.0ｇを70
mlのメタノールに溶解し、30℃で撹拌しながら25
mgのホルムアルデヒドを水溶液として添加し、次
いで29mgのシアノ水素化ホウ素ナトリウムを添加
した。10時間反応した後、PH1.0に下げて反応を
止めた。これを実施例１、Ａ−Stepの方法で処理し
て、209mgのＮ−メチルブレオマイシンA₂（含銅
体）・塩酸塩の青紫色無定形粉末を得た。収率20
％。本品の紫外吸収極大値および抗菌力価は次の通
りだつた。紫外吸収極大：ミリミクロン（Ｅ^１％_１ｃｎ蒸留水） 292（122） 244（148）抗菌力価：507mcg力価／mg Ｂ−Step Ａ−Stepで得た含銅体200mgを実施例１、Ｂ−
Stepの方法で脱銅して、173mgのＮ−メチルブレ
オマイシンA₂（脱銅体）・塩酸塩の白色無定形粉
末を得た。収率90％。本品の紫外吸収極大値および抗菌力価は次の通
りだつた。紫外吸収極大：ミリミクロン（Ｅ^１％_１ｃｎ蒸留水） 291（93）抗菌力価：420mcg力価／mg 実施例４Ｎ−メチルブレオマイシンB₂の合成Ａ−Step ブレオマイシンB₂（脱銅体）・塩酸塩1.0ｇを60
mlのメタノールに溶解し、25℃で撹拌しながら23
mgのホルムアルデヒドを水溶液として添加し、次
いで32mgのシアノ水素化ホウ素ナトリウムを添加
した。16時間反応した後、PH1.0に下げて反応を
止めた。これを実施例１、Ａ−Stepの方法で処理し
て、385mgのＮ−メチルブレオマイシンB₂（含銅
体）・塩酸塩の青紫色無定形粉末を得た。収率37
％。本品の紫外吸収極大値および抗菌力価は次の通
りだつた。紫外吸収極大：ミリミクロン（Ｅ^１％_１ｃｎ蒸留水） 292（123） 244（153）抗菌力価：1758mcg力価／mg Ｂ−Step Ａ−Stepで得た含銅体375mgを実施例１、Ｂ−
Stepの方法で脱銅して、335mgのＮ−メチルブレ
オマイシンB₂（脱銅体）・塩酸塩の白色無定形粉
末を得た。収率93％。本品の紫外吸収極大値および抗菌力価は次の通
りだつた。紫外吸収極大：ミリミクロン（Ｅ^１％_１ｃｎ蒸留水） 290（101）抗菌力価：1752mcg力価／mg 実施例５Ｎ−メチルブレオマイシンB₂の合成Ａ−Step ブレオマイシンB₂（脱銅体）・塩酸塩1.0ｇを70
mlのメタノールに溶解し、25℃で撹拌しながら30
mgのホルムアルデヒドを水溶液として添加し、次
いで63mgのシアノ水素化ホウ素ナトリウムを添加
した。２時間反応させた後、PH1.0に下げて反応
を止めた。これを実施例１、Ａ−Stepの方法で処理し
て、168mgのＮ−メチルブレオマイシンB₂（含銅
体）・塩酸塩の青紫色無定形粉末を得た。収率16
％。本品の紫外吸収極大値および抗菌力価は次の通
りだつた。紫外吸収極大：ミリミクロン（Ｅ^１％_１ｃｎ蒸留水） 292（123） 244（153）抗菌力価：1770mcg力価／mg Ｂ−Step Ａ−Stepで得た含銅体150mgを実施例１、Ｂ−
Stepの方法で脱銅して、127mgのＮ−メチルブレ
オマイシンB₂（脱銅体）・塩酸塩の白色無定形粉
末を得た。収率88％。本品の紫外吸収極大値および抗菌力価は次の通
りだつた。紫外吸収極大：ミリミクロン（Ｅ^１％_１ｃｎ蒸留水） 290（101）抗菌力価：1756mcg力価／mg 実施例６３−〔（ｓ）−1′−フエニルエチルアミノ〕プロ
ピルアミノ−Ｎ−メチルブレオマイシンの合成Ａ−Step ３−〔（ｓ）−1′−フエニルエチルアミノ〕プロ
ピルアミノブレオマイシン（脱銅体）・塩酸塩1.0
ｇを100mlのメタノールに溶解し、25℃で撹拌し
ながら19mgのホルムアルデヒドを水溶液として添
加し、次いで41mgのシアノ水素化ホウ素ナトリウ
ムを添加した。６時間反応した後、PH1.0に下げ
て反応を止めた。これを実施例１、Ａ−Stepの方法で処理し
て、86mgの３−〔（ｓ）−1′−フエニルエチルアミ
ノ〕プロピルアミノ−Ｎ−メチルブレオマイシン
（含銅体）・塩酸塩の青紫色無定形粉末を得た。収
率8.2％。本品の紫外吸収極大値および抗菌力価は次の通
りだつた。紫外吸収極大：ミリミクロン（Ｅ^１％_１ｃｎ蒸留水） 292（114） 243（140）抗菌力価：4320mcg力価／mg Ｂ−Step Ａ−Stepで得た含銅体80mgを実施例１、Ｂ−
Stepの方法で脱銅して、74mgの３−〔（ｓ）−1′−
フエニルエチルアミノ〕プロピルアミノ−Ｎ−メ
チルブレオマイシン（脱銅体）・塩酸塩の白色無
定形粉末を得た。収率96％。本品の紫外吸収極大値および抗菌力価はつぎの
通りだつた。紫外吸収極大：ミリミクロン（Ｅ^１％_１ｃｎ蒸留水） 290（101）抗菌力価：4280mcg力価／mg 実施例７３−（三級−ブトキシカルボニルアミノ）プロ
ピルアミノ−Ｎ−メチルブレオマイシンの合成Ａ−Step ３−（三級−ブトキシカルボニルアミノ）プロ
ピルアミノブレオマイシン（脱銅体）・塩酸塩1.0
ｇを75mlのメタノールに溶解し、27℃で撹拌しな
がら20mgのホルムアルデヒドを水溶液として添加
し、次いで55mgのシアノ水素化ホウ素ナトリウム
を添加した。14時間反応した後、PH1.0に下げて
反応を止めた。これを実施例１、Ａ−Stepの方法で処理して
（ただし、CM−セフアデツクス・クロマトグラ
フイーの0.50モル前後の分画を集めた。）335mgの
目的物（含銅体）・塩酸塩の青紫色無定形粉末を
得た。収率32％。本品の紫外吸収極大値は次の通りだつた。紫外吸収極大：ミリミクロン（Ｅ^１％_１ｃｎ蒸留水） 292（117） 243（147）Ｂ−Step Ａ−Stepで得た含銅体325mgを実施例１、Ｂ−
Stepの方法で脱銅して、269mgの目的物（脱銅
体）・塩酸塩の白色無定形粉末を得た。収率86
％。本品の紫外吸収極大値は次の通りだつた。紫外吸収極大：ミリミクロン（Ｅ^１％_１ｃｎ蒸留水） 291（100）参考例１３−アミノプロピルアミノブレオマイシンの三
級−ブトキシカルボニル化３−アミノプロピルアミノブレオマイシン（含
銅体）・塩酸塩750mgを４mlの蒸留水に溶解し、23
℃で撹拌しながら0.3mlのトリエチルアミンと134
mgの２−（三級−ブトキシカルボニルチオ）−４・
６−ジメチルピリミジンをジオキサン溶液として
添加した。12時間反応した後、200mlのアセトン
を添加して生成物を沈澱させた。沈澱部を20mlの
蒸留水に溶解し、１規定塩酸で中和した後、実施
例１、Ｂ−Stepの方法で脱銅して558mgの３−
（三級−ブトキシカルボニルアミノ）プロピルア
ミノブレオマイシン（脱銅体）・塩酸塩の白色無
定形粉末を得た。収率78％。本品の紫外吸収極大値は次の通りだつた。紫外吸収極大：ミリミクロン（Ｅ^１％_１ｃｎ蒸留水） 291（101）参考例２３−（三級−ブトキシカルボニルアミノ）プロ
ピルアミノ−Ｎ−メチルブレオマイシンの脱三
級−ブトキシカルボニル反応３−（三級−ブトキシカルボニルアミノ）プロ
ピルアミノ−Ｎ−メチルブレオマイシン（含銅
体）・塩酸塩80mgを3.6mlの蒸留水に溶解し、2.4
mlのトリフロロ酢酸を添加した。23℃で１時間反
応した後、減圧下でトリフロロ酢酸を留去し、１
規定苛性ソーダで中和した。これを実施例１、Ｂ−Stepの方法で脱銅し
て、48mgの３−アミノプロピルアミノ−Ｎ−メチ
ルブレオマイシン（脱銅体）・塩酸塩の白色無定
形粉末を得た。収率63％。本品の紫外吸収極大値および抗菌力価は次の通
りだつた。紫外吸収極大：ミリミクロン（Ｅ^１％_１ｃｎ蒸留水） 291（101）抗菌力価：618mcg力価／mg

【図面の簡単な説明】

第１図はブレオマイシン不活化酵素に対する耐
性について、その作用時間と残存力価との関係を
示したものである。Ａ：Ｎ−メチルブレオマイシンA₂（試料）、
ａ：ブレオマイシンA₂（対照試料）、Ｂ：Ｎ−メ
チルブレオマイシンB₂（試料）、ｂ：ブレオマイ
シンB₂（対照試料）。Ｎ−メチルブレオマイシンA₂（含銅体）塩酸
塩の紫外吸収スペクトルを第２図に、赤外吸収ス
ペクトルを第３図に示した。Ｎ−メチルブレオマ
イシンA₂（脱銅体）塩酸塩の紫外吸収スペクト
ルを第４図に、赤外吸収スペクトルを第５図に示
した。Ｎ−メチルブレオマイシンB₂（脱銅体）
塩酸塩の紫外吸収スペクトルを第６図に、赤外吸
収スペクトルを第７図に示した。

Claims

【特許請求の範囲】１ブレオマイシン群抗生物質に還元的メチル化
反応を施して部分構造式の一級アミンをメチル化することを特徴とする部
分構造式を有するブレオマイシン群抗生物質の製造方法。