JPS6259216A - ヒト単球細胞系統のチミジンキナ−ゼ（ｅｃ２．７．１．２１）欠乏突然変異体 - Google Patents
ヒト単球細胞系統のチミジンキナ−ゼ（ｅｃ２．７．１．２１）欠乏突然変異体Info
- Publication number
- JPS6259216A JPS6259216A JP61132935A JP13293586A JPS6259216A JP S6259216 A JPS6259216 A JP S6259216A JP 61132935 A JP61132935 A JP 61132935A JP 13293586 A JP13293586 A JP 13293586A JP S6259216 A JPS6259216 A JP S6259216A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- mutant
- thymidine kinase
- cell
- thymidine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
- C12N5/12—Fused cells, e.g. hybridomas
- C12N5/16—Animal cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/91—Cell lines ; Processes using cell lines
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は他の細胞の無限生存化に使用されうる永久的な
ヒト細胞系統の酵素欠乏突然変異体に関する。
ヒト細胞系統の酵素欠乏突然変異体に関する。
永久的な細胞系統の細胞との融合により細胞を無限生存
化させる技術は以前から知られている。かかるハイブリ
ッド細胞またはノ・イブリドーマは例えば血球を腫瘍細
胞と融合させることにより得られた。Ｋ′６ｈｌｅｒお
よびＭｉｌＳｔｅｉｎにより記載された方法（Ｎａｔｕ
ｒ８２５６．４９５〜４９７ （１９７５） ）のよう
な古典的な方法では、永久的に生育する腫瘍細胞として
のマウスのミエローマ細胞をマウスのＢ −１７７２球
と融合させた。かかる融合により得られるノ・イブリッ
ド細胞は例えばかかるハイブリッド細胞培養の上澄み液
から簡単にそして大量に単離されつる物質を分泌しうる
。
化させる技術は以前から知られている。かかるハイブリ
ッド細胞またはノ・イブリドーマは例えば血球を腫瘍細
胞と融合させることにより得られた。Ｋ′６ｈｌｅｒお
よびＭｉｌＳｔｅｉｎにより記載された方法（Ｎａｔｕ
ｒ８２５６．４９５〜４９７ （１９７５） ）のよう
な古典的な方法では、永久的に生育する腫瘍細胞として
のマウスのミエローマ細胞をマウスのＢ −１７７２球
と融合させた。かかる融合により得られるノ・イブリッ
ド細胞は例えばかかるハイブリッド細胞培養の上澄み液
から簡単にそして大量に単離されつる物質を分泌しうる
。
Ｂ−リンパ球をミエローマ細胞と融合させる場合、ハイ
ブリッド細胞は同質の抗体集団（モノクローナル抗体）
を産生じ、その場合適当な選択法により所望の特異性を
有するモノクローナル抗体を産生ずるノ・イブリッド細
胞クローンを単離しそしてさらに培養することができる
。
ブリッド細胞は同質の抗体集団（モノクローナル抗体）
を産生じ、その場合適当な選択法により所望の特異性を
有するモノクローナル抗体を産生ずるノ・イブリッド細
胞クローンを単離しそしてさらに培養することができる
。
どの物質をノ・イブリッド細胞が産生じつるかは原則的
には融合に用いられた融合相手細胞の如伺による。融合
相手としてマウスのＢ−リンパ球をミエローマ細胞と融
合させると、用いられたミエローマ細胞が人間起源のも
のであるかまたはネズミ起源のものであるかまたはクセ
ツバイブリッド細胞（人間／マウス）であるかにさえ拘
らず、かかるノ・イブリッド細胞から産生される物質は
ネズミ起源のモノクローナル抗体であり、一方ミエロー
マ細胞の融合相手としてヒトＢ −１７７２球が用いら
れた場合はそこから生成するハイブリッド細胞は人間の
免疫グロブリンのすべての特徴を有する抗体を産生する
。
には融合に用いられた融合相手細胞の如伺による。融合
相手としてマウスのＢ−リンパ球をミエローマ細胞と融
合させると、用いられたミエローマ細胞が人間起源のも
のであるかまたはネズミ起源のものであるかまたはクセ
ツバイブリッド細胞（人間／マウス）であるかにさえ拘
らず、かかるノ・イブリッド細胞から産生される物質は
ネズミ起源のモノクローナル抗体であり、一方ミエロー
マ細胞の融合相手としてヒトＢ −１７７２球が用いら
れた場合はそこから生成するハイブリッド細胞は人間の
免疫グロブリンのすべての特徴を有する抗体を産生する
。
Ｂ−＋Ｊン・９球を永久的に生育する細胞（選択された
ミエローマ系統）と融合させるのにしばしば行われたと
同じ方法で、’Ｉ”−１７７２球を適当な融合相手（Ｊ
、 Ｅｘｐ、 Ｍｅｄ、 １５４ 、１８２７〜１８３
７（１９８１））と融合させることも同様に行われた。
ミエローマ系統）と融合させるのにしばしば行われたと
同じ方法で、’Ｉ”−１７７２球を適当な融合相手（Ｊ
、 Ｅｘｐ、 Ｍｅｄ、 １５４ 、１８２７〜１８３
７（１９８１））と融合させることも同様に行われた。
かかるハイブリドーマ細胞から産生される物質はＴ−細
胞の性質に相当してＴ−ＩＪンバ球から産生されつると
同じ因子である。かかる因子は例工ばインターロイキン
、インターフェロン、リンフ才力インおよびその他の直
接または間接な免疫調節作用を有する物質でありうる。
胞の性質に相当してＴ−ＩＪンバ球から産生されつると
同じ因子である。かかる因子は例工ばインターロイキン
、インターフェロン、リンフ才力インおよびその他の直
接または間接な免疫調節作用を有する物質でありうる。
Ｂ−細胞ハイブリドーマに匹敵してかかるハイブリッド
も同様にこれら因子の産生源として用いられ得、その場
合適当な選択および試験法により排他的にあるいは特に
大量に所望の物質を産生ずるハイブリッド細胞がクロー
ンされそしてさらに培養されつる。
も同様にこれら因子の産生源として用いられ得、その場
合適当な選択および試験法により排他的にあるいは特に
大量に所望の物質を産生ずるハイブリッド細胞がクロー
ンされそしてさらに培養されつる。
Ｂ−リンパ球とミエローマ細胞との融合についてと同様
にＴ −ＩＪン、Ｊ球についてもこれまで少数の永久的
細胞系統しか適当な融合相手であることが判明していな
い。適当な融合相手は適当な相手細胞と融合できそして
融合後にハイブリッド細胞として所望の物質を分泌でき
そして相手細胞からもまた融合から生ずるノ・イブリッ
ド細胞からも分離されうる永久的に生育する細胞系統で
あると見なされる。相当する融合相手からハイブリッド
細胞を分離するには原則的にあらゆる弁別基準（例えば
表面抗原によっても表わされるような相異するマーカー
）が用いられつる。しかしながら特に適当な選択法とし
ては融合相手に比較してノ・イブリッド細胞の変化され
た生育性質を利用するという方法が示された。この目的
には永久的な生育が保証されているべぎでありかつそれ
らの生育性質が変化されている細胞として、例えばそれ
らが母細胞に比較してチミジンキナーゼ（以下ＴＫと略
記する。
にＴ −ＩＪン、Ｊ球についてもこれまで少数の永久的
細胞系統しか適当な融合相手であることが判明していな
い。適当な融合相手は適当な相手細胞と融合できそして
融合後にハイブリッド細胞として所望の物質を分泌でき
そして相手細胞からもまた融合から生ずるノ・イブリッ
ド細胞からも分離されうる永久的に生育する細胞系統で
あると見なされる。相当する融合相手からハイブリッド
細胞を分離するには原則的にあらゆる弁別基準（例えば
表面抗原によっても表わされるような相異するマーカー
）が用いられつる。しかしながら特に適当な選択法とし
ては融合相手に比較してノ・イブリッド細胞の変化され
た生育性質を利用するという方法が示された。この目的
には永久的な生育が保証されているべぎでありかつそれ
らの生育性質が変化されている細胞として、例えばそれ
らが母細胞に比較してチミジンキナーゼ（以下ＴＫと略
記する。
ＥＣ２，７，１，２１）を合成しえないという点で特定
の酵素欠陥を有する永久的な細胞系統の突然変異体（Ｔ
Ｋ−欠乏突然変異体）を使用しつる。永久細胞系統のか
かる酵素欠乏突然変異体は適当な選択的なヒポキサンチ
ン−アミノプテリン−チミジン培地（ＨＡＴ−培地）中
で生き残り得ない。
の酵素欠陥を有する永久的な細胞系統の突然変異体（Ｔ
Ｋ−欠乏突然変異体）を使用しつる。永久細胞系統のか
かる酵素欠乏突然変異体は適当な選択的なヒポキサンチ
ン−アミノプテリン−チミジン培地（ＨＡＴ−培地）中
で生き残り得ない。
かかる酵素欠乏突然変異体および例えば血球でありうる
ようなかかる欠陥を有しない細胞から得られるハイブリ
ドーマのみがかかる選択培地中で生存しつる。他の知ら
れた方法と比較して永久的に生育する細胞系統の細胞か
らのハイブリッド細胞のかかる選択的単離法は飛び抜け
て有効な方法である。しかしながらこの方法を用いるに
は適当な酵素欠乏を有しかつ融合能力のある永久的に生
育する細胞系統を入手しうろことが前提条件となる。
ようなかかる欠陥を有しない細胞から得られるハイブリ
ドーマのみがかかる選択培地中で生存しつる。他の知ら
れた方法と比較して永久的に生育する細胞系統の細胞か
らのハイブリッド細胞のかかる選択的単離法は飛び抜け
て有効な方法である。しかしながらこの方法を用いるに
は適当な酵素欠乏を有しかつ融合能力のある永久的に生
育する細胞系統を入手しうろことが前提条件となる。
本発明は細胞系統Ｕ−９３７の突然変異体として（Ｉｎ
ｉ、 Ｊ、 Ｃａｎｃｅｒ １７ 、５６５〜５７７
（１９７６））、チミジンキナーゼを合成できずそして
それゆえヒポキサンチン−アミノプテリン−チミジンを
含有する培地（ＲＡＴ−培地）中で生育できず死滅する
ところの融合能力のある細胞系統の製法について記載す
るものである。細胞系統Ｕ−９３７のこのＴＫ−欠乏突
然変異体は単球との融合に使用されつる。
ｉ、 Ｊ、 Ｃａｎｃｅｒ １７ 、５６５〜５７７
（１９７６））、チミジンキナーゼを合成できずそして
それゆえヒポキサンチン−アミノプテリン−チミジンを
含有する培地（ＲＡＴ−培地）中で生育できず死滅する
ところの融合能力のある細胞系統の製法について記載す
るものである。細胞系統Ｕ−９３７のこのＴＫ−欠乏突
然変異体は単球との融合に使用されつる。
単球は種々の物質を分泌し、そのうちインターロイキン
またはリンフ才力インおよびＴＮＦ（Ｍ瘍壊死因子）の
ようなものを比較的大量に製造しつるものが望ましいで
あろう。この目的には永久的に生育する単球ハイブリッ
ドが適当であろう。
またはリンフ才力インおよびＴＮＦ（Ｍ瘍壊死因子）の
ようなものを比較的大量に製造しつるものが望ましいで
あろう。この目的には永久的に生育する単球ハイブリッ
ドが適当であろう。
Ｂ −ＩＪンパ球に関する知識は他の免疫能のある細胞
に関するものと比較して非常に大ぎいが蓄歯動物および
人間におけるＴ −ＩＪンパ球および単球の性質に関す
る研究は下記事実により困難である、すなわち、たとえ
Ｔ＋ リンパ球および単球においである檻の機能的活性
が誘発されつるとしても、この刺激はさらに非特異的効
果を誘発しうる措置を必要とする。さらに刺激の再現性
が低くそして分泌された生成物は限定された量でしか得
られない。刺激される細胞集団も厳密に限定され得ない
、何故なら限定された生育速度しか有しないほんの少数
の細胞しか入手し得ないからである。小さな割合の夾雑
細胞ですらも篤くべぎ生物学的効果をもたらしつる事実
があるゆえに他の細胞型の少数の存在は無視できない。
に関するものと比較して非常に大ぎいが蓄歯動物および
人間におけるＴ −ＩＪンパ球および単球の性質に関す
る研究は下記事実により困難である、すなわち、たとえ
Ｔ＋ リンパ球および単球においである檻の機能的活性
が誘発されつるとしても、この刺激はさらに非特異的効
果を誘発しうる措置を必要とする。さらに刺激の再現性
が低くそして分泌された生成物は限定された量でしか得
られない。刺激される細胞集団も厳密に限定され得ない
、何故なら限定された生育速度しか有しないほんの少数
の細胞しか入手し得ないからである。小さな割合の夾雑
細胞ですらも篤くべぎ生物学的効果をもたらしつる事実
があるゆえに他の細胞型の少数の存在は無視できない。
Ｂ−細胞ハイブリッド細胞と対照的に単球ハイブリッド
では免疫グロブリン検出のような単一の試験系は伺ら可
能でない。未知因子についてこれまで手のかかる機能試
験系でのみしか試験できなかった。それゆえ、単球との
融合により永久的に生育する卓球ハイブリッドを調製で
きかつ単球の機能の研究におけるこれらの困難を克服す
る永久的な細胞系統の必要が存在した。
では免疫グロブリン検出のような単一の試験系は伺ら可
能でない。未知因子についてこれまで手のかかる機能試
験系でのみしか試験できなかった。それゆえ、単球との
融合により永久的に生育する卓球ハイブリッドを調製で
きかつ単球の機能の研究におけるこれらの困難を克服す
る永久的な細胞系統の必要が存在した。
今、驚くべきことに、例えば種々の細胞パンクから一般
的に入手しつる細胞系統Ｕ−９５７の細胞ヲエチルメタ
ンスルホネー） （ＥＭＳ ）で処！しそしてこれら細
胞を漸増濃度の５７−ブロモデオキシウリジン（以下５
’−ＢＵと略記する）で処理し、そしてそれぞれ生き残
る細胞を分離することによりチミジンキナーゼ（ＴＫ、
ＥＣ２，７，１，２１＞を合成できず（すなわちチミ
ジン−キナーゼ欠乏突然変異体）かつヒポキサンチン、
アミノプテリンおよびチミジンを含有する培地（ＨＡＴ
−培地）中で生育しえず死滅する突然変異した細胞が
得られた。
的に入手しつる細胞系統Ｕ−９５７の細胞ヲエチルメタ
ンスルホネー） （ＥＭＳ ）で処！しそしてこれら細
胞を漸増濃度の５７−ブロモデオキシウリジン（以下５
’−ＢＵと略記する）で処理し、そしてそれぞれ生き残
る細胞を分離することによりチミジンキナーゼ（ＴＫ、
ＥＣ２，７，１，２１＞を合成できず（すなわちチミ
ジン−キナーゼ欠乏突然変異体）かつヒポキサンチン、
アミノプテリンおよびチミジンを含有する培地（ＨＡＴ
−培地）中で生育しえず死滅する突然変異した細胞が
得られた。
それゆえ本発明は永久的なヒトの単球／マクロファージ
細胞系統Ｕ−９３７の酵素欠乏突然変異体であって、こ
の突然変異体の細胞はチミジンキナーゼを合成せずそし
てヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジンを含
有する培地（ＨＡＴ培地）中で死滅するものであるとこ
ろの突然変異体に関する。
細胞系統Ｕ−９３７の酵素欠乏突然変異体であって、こ
の突然変異体の細胞はチミジンキナーゼを合成せずそし
てヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジンを含
有する培地（ＨＡＴ培地）中で死滅するものであるとこ
ろの突然変異体に関する。
一１〇−
この突然変異体の細胞は単球の融合相手として適当であ
る。この方法で製造されたハイブリッドは半球から分泌
されたインターロイキンまたはＴＮＦのような物質を細
胞培養物中において得るのに適する。ここに記載された
Ｕ−９３７の突然変異体は適当なハイブリッドを得るた
めの中間体であると見なされつる。
る。この方法で製造されたハイブリッドは半球から分泌
されたインターロイキンまたはＴＮＦのような物質を細
胞培養物中において得るのに適する。ここに記載された
Ｕ−９３７の突然変異体は適当なハイブリッドを得るた
めの中間体であると見なされつる。
この突然変異体を得るには、細胞系統Ｕ−９３７の細胞
をＲＰＭ１１６４０のような培地中で抗生物質および場
合によりウシ胎児血清を添加して生育せしめる。対数的
生育を保証するためには細胞の濃度は５Ｘ１０５／−を
越えるべきでない。培地は毎週約２回交換された。
をＲＰＭ１１６４０のような培地中で抗生物質および場
合によりウシ胎児血清を添加して生育せしめる。対数的
生育を保証するためには細胞の濃度は５Ｘ１０５／−を
越えるべきでない。培地は毎週約２回交換された。
細胞を突然変異させるには、約１００μｙ／ｍｅのエチ
ルメタン−スルホネートを含有する培地中で約１２時間
培養した。次に細胞を正常な生育培地中で約６日間増殖
させた。
ルメタン−スルホネートを含有する培地中で約１２時間
培養した。次に細胞を正常な生育培地中で約６日間増殖
させた。
突然変異した細胞を選択するには次に正常な培養基、例
えばＲＰＭ工培地中の細胞の懸濁流に６μＶ／、ｔの５
’ −ＢＵを加えそして６日間作用せしめた。次に生き
残った細胞に１Ｘ１０−″９モル／ｌの濃度に達する１
２−０−テトラデカノイルホルボール−１３−アセテ−
）（ＴＰＡ）を添加しそして７２時間放置することによ
りガラス表面に付着させた。死滅した細胞はかくの如き
方法で除去した。次に５’−ＢＵを用いる選択は６．９
そして次に１８μｔ／ｙｘｔの濃度を用いて反復しそし
て各工程で生存する細胞をここに記載された方法で分離
した。１８μｔ／ｍｔの５’−ＢＵは生き残った細胞を
細胞密度Ｉ Ｘ １０４ ａ／−において３０．４２お
よび５０μｔ／ａｔの濃度の５’−ＢＵの作用にさらす
ことによる「セミ−クローニング工程」にかけた。次に
それぞれ細胞２０ｖ−をクローンしそして個個のクロー
ンをＨＡＴ培地（ヒポキサンチン１×１０−４モル／
ｔ Ｓアミノプテリン４Ｘ１０−７モル／ｌおよびチミ
ジン４ Ｘ １０−５モル／１ ）中でそれらの生育挙
動について検査し、次にさらに増殖させそして分析した
。
えばＲＰＭ工培地中の細胞の懸濁流に６μＶ／、ｔの５
’ −ＢＵを加えそして６日間作用せしめた。次に生き
残った細胞に１Ｘ１０−″９モル／ｌの濃度に達する１
２−０−テトラデカノイルホルボール−１３−アセテ−
）（ＴＰＡ）を添加しそして７２時間放置することによ
りガラス表面に付着させた。死滅した細胞はかくの如き
方法で除去した。次に５’−ＢＵを用いる選択は６．９
そして次に１８μｔ／ｙｘｔの濃度を用いて反復しそし
て各工程で生存する細胞をここに記載された方法で分離
した。１８μｔ／ｍｔの５’−ＢＵは生き残った細胞を
細胞密度Ｉ Ｘ １０４ ａ／−において３０．４２お
よび５０μｔ／ａｔの濃度の５’−ＢＵの作用にさらす
ことによる「セミ−クローニング工程」にかけた。次に
それぞれ細胞２０ｖ−をクローンしそして個個のクロー
ンをＨＡＴ培地（ヒポキサンチン１×１０−４モル／
ｔ Ｓアミノプテリン４Ｘ１０−７モル／ｌおよびチミ
ジン４ Ｘ １０−５モル／１ ）中でそれらの生育挙
動について検査し、次にさらに増殖させそして分析した
。
この細胞クローンをトリチウム標識されたチミジンを用
いオートラジオグラフィーまたはシンチレーション分光
測定によりチミジンキナーゼ活性の非存在について検査
した。正常なＵ−９３７細胞および培地はそれぞれ正お
よび負の対照として用いられた。
いオートラジオグラフィーまたはシンチレーション分光
測定によりチミジンキナーゼ活性の非存在について検査
した。正常なＵ−９３７細胞および培地はそれぞれ正お
よび負の対照として用いられた。
Ｕ−９５７細胞の約半分はトリ・々ンブルー排除試験で
示されうるようにエチルメタンスルホネートでの４８時
間処理および続く正常培地中での６日間を生き延びた。
示されうるようにエチルメタンスルホネートでの４８時
間処理および続く正常培地中での６日間を生き延びた。
漸増濃度の有毒なチミジン類似体を用いる選択段階では
それぞれ細胞の７０〜９０チが死滅した。選択された細
胞の生育速度はもとのＵ−９３７ＮＢ胞の値の約５０％
まで低下した。最終的なりローニング工程ではおよそ第
２バツチ毎に生育が観察された。
それぞれ細胞の７０〜９０チが死滅した。選択された細
胞の生育速度はもとのＵ−９３７ＮＢ胞の値の約５０％
まで低下した。最終的なりローニング工程ではおよそ第
２バツチ毎に生育が観察された。
正常培地中におけるそれらの比較的高い生育速度および
それらを４８時間内に完全に死滅させるところのＨＡＴ
培地に対するそれらの感度に基づき６種のクローンが選
択された。Ｕ−９３７の未処置出発細胞はオートラジオ
グラフィーにおいて核領域中に密な黒点集積を示したが
、一方ＴＫ−陰性クローンでは細胞１個当りで最高でも
１０個の黒点しか生ぜず、これらは恐ら＜ミトコンドリ
アと会合したＴＫ活性が低いゆえに細胞質全体に分配さ
れていた。この６種の選択されたクローンはもとの細胞
のそれの７．８ ％をこえないチミジンとり込みしか示
さなかった。相当する個々の値は６か力抜にもう一度測
定してもそれほど変化していなかった。
それらを４８時間内に完全に死滅させるところのＨＡＴ
培地に対するそれらの感度に基づき６種のクローンが選
択された。Ｕ−９３７の未処置出発細胞はオートラジオ
グラフィーにおいて核領域中に密な黒点集積を示したが
、一方ＴＫ−陰性クローンでは細胞１個当りで最高でも
１０個の黒点しか生ぜず、これらは恐ら＜ミトコンドリ
アと会合したＴＫ活性が低いゆえに細胞質全体に分配さ
れていた。この６種の選択されたクローンはもとの細胞
のそれの７．８ ％をこえないチミジンとり込みしか示
さなかった。相当する個々の値は６か力抜にもう一度測
定してもそれほど変化していなかった。
選択されたクローンを形態学的に検査しても何ら相異が
なかった。同じことは酵素細胞化学的特性にも言える。
なかった。同じことは酵素細胞化学的特性にも言える。
細胞は丸くなった核および薄い、わずかに好塩基性細胞
質縁辺を示した。
質縁辺を示した。
ナフトールＡｓ −Ｄ−クロロアセテートー二ステラー
ゼ活性についての検査は常に陰性であるが、一方酸性エ
ステラーゼおよび酸性ホスファターゼに関する検査は強
い拡散したかまたは粒状の反応パターンを示した。
ゼ活性についての検査は常に陰性であるが、一方酸性エ
ステラーゼおよび酸性ホスファターゼに関する検査は強
い拡散したかまたは粒状の反応パターンを示した。
等電果束における酸性エステラーゼおよび酸性ホスファ
ターゼの測定では記載した突然変異体は正常なヒトの単
球の典型的なイソ酵素、Ｊターンを示した。それゆえ５
種類の酸性エステラーゼイソ酵素がｐＨ５，７〜６．２
５の間に、ならびに酸性ホスファターゼの１１種のイソ
酵素がｐ）１４〜６．３の範囲内に見出された。
ターゼの測定では記載した突然変異体は正常なヒトの単
球の典型的なイソ酵素、Ｊターンを示した。それゆえ５
種類の酸性エステラーゼイソ酵素がｐＨ５，７〜６．２
５の間に、ならびに酸性ホスファターゼの１１種のイソ
酵素がｐ）１４〜６．３の範囲内に見出された。
酵素欠乏した突然変異体の前記した６種類のクローンの
細胞のそれぞれ８０％以上がＯＫＭ。
細胞のそれぞれ８０％以上がＯＫＭ。
Ｋｉ−Ｍ３およびＫｉ−Ｍ７なる名称の下に知られたモ
ノクローナル抗体と反応した。
ノクローナル抗体と反応した。
酵素欠乏した突然変異体の表現型を正常なＵ−９３７細
胞のそれと比較しても何ら実質的な相異は示されなかっ
た。
胞のそれと比較しても何ら実質的な相異は示されなかっ
た。
特許出願人 ベーリングヴエルケ・アクチェンゲゼル
シャフト
シャフト
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）永久的なヒトの単球／マクロファージ細胞系統Ｕ−
９３７の酸素欠乏突然変異体であつて、この突然変異体
の細胞はチミジンキナーゼ（ＥＣ２．７．１．２１）を
合成せずそしてヒポキサンチン、アミノプテリンおよび
チミジンを含有する培地（ＨＡＴ培地）中で死滅するも
のであるところの突然変異体。 ２）単球の融合相手としての前記特許請求の範囲第１項
記載の突然変異体細胞の使用。 ３）永久的なヒト単球／マクロファージ細胞系統Ｕ−９
３７の細胞を動物細胞の突然変異について知られた化学
的薬剤好ましくはエチルメタンスルホネートで処理し、
次に３〜少くとも５０μｇ／ｍｌまで段階的に増大する
濃度の５′−ブロモデオキシウリジンで処理し、その際
それぞれ生き残つた細胞を分離しそして次の段階に用い
そして実際上何らチミジンキナーゼを発現しない最終的
に得られた細胞を増殖させることを特徴とする前記特許
請求の範囲第１項記載の突然変異体の製法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19853520844 DE3520844A1 (de) | 1985-06-11 | 1985-06-11 | Thymidin-kinase (ec 2.7.1.21)-mangelmutanten einer humanen monocytischen zellinie |
| DE3520844.9 | 1985-06-11 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6259216A true JPS6259216A (ja) | 1987-03-14 |
Family
ID=6272941
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61132935A Pending JPS6259216A (ja) | 1985-06-11 | 1986-06-10 | ヒト単球細胞系統のチミジンキナ−ゼ（ｅｃ２．７．１．２１）欠乏突然変異体 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0205032A3 (ja) |
| JP (1) | JPS6259216A (ja) |
| AU (1) | AU5849886A (ja) |
| DE (1) | DE3520844A1 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3512559A1 (de) * | 1985-04-06 | 1986-10-16 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Hypoxanthin-guanin-phosphoribosyltransferase-negative mutante einer histiozytischen permanenten humanen zellinie |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4465769A (en) * | 1981-12-11 | 1984-08-14 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Non-transformed thymidine kinaseless cell line and its use for testing tumorigenic potential of genes |
| JPS59169492A (ja) * | 1983-03-15 | 1984-09-25 | Asahi Chem Ind Co Ltd | ヒト融合細胞からの生理活性物質の産生方法 |
| DE3512559A1 (de) * | 1985-04-06 | 1986-10-16 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Hypoxanthin-guanin-phosphoribosyltransferase-negative mutante einer histiozytischen permanenten humanen zellinie |
-
1985
- 1985-06-11 DE DE19853520844 patent/DE3520844A1/de not_active Withdrawn
-
1986
- 1986-05-27 EP EP86107162A patent/EP0205032A3/de not_active Withdrawn
- 1986-06-10 AU AU58498/86A patent/AU5849886A/en not_active Abandoned
- 1986-06-10 JP JP61132935A patent/JPS6259216A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3520844A1 (de) | 1986-12-11 |
| AU5849886A (en) | 1986-12-18 |
| EP0205032A3 (de) | 1989-03-29 |
| EP0205032A2 (de) | 1986-12-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Goding | Antibody production by hybridomas | |
| US4350683A (en) | Antibody production from hybrid cell line | |
| JPS61128886A (ja) | ヒト体細胞ハイブリドセルラインおよびその製造法 | |
| EP0093436B1 (de) | Verfahren zur Herstellung permanenter tierischer und humaner Zellinien und deren Verwendung | |
| US4544632A (en) | Human T cell lines and method of producing same | |
| EP0114670B1 (en) | Novel cell lines for use in the preparation of hybridoma cells | |
| US4407945A (en) | Constitutive production of interleukin 2 by a T cell hybridoma | |
| EP2009094B1 (en) | Fusion partner cells | |
| US4618585A (en) | Hybridoma cell lines producing monoclonal antibodies directed against cervical cancer cells | |
| JPS6259216A (ja) | ヒト単球細胞系統のチミジンキナ−ゼ（ｅｃ２．７．１．２１）欠乏突然変異体 | |
| EP0028902B1 (en) | Method for the preferential formation of hybrid cells making a desired antibody | |
| JPS61231995A (ja) | 永久的なヒト組織球細胞系統の突然変異体 | |
| Bleyman et al. | Sequential nuclear differentiation in Tetrahymena | |
| Buxbaum et al. | Analysis of Thy-1 variants of murine lymphoma cells | |
| EP0096839B1 (en) | Method for producing human antibody | |
| Gratecos et al. | A new approach to monoclonal antibody production In vitro immunization with antigens on nitrocellulose using Drosphila myosin heavy chain as an example | |
| DE60318271T2 (de) | Antikörper gegen allgegenwärtige mitochondriale Kreatinkinase und dessen Verwendung | |
| Pittman et al. | The procurement of biochemical mutants of Saccharomyces by the synergistic effect of ultraviolet radiation and 2, 6-diamino purine | |
| JPS59198970A (ja) | ハイブリドーマ細胞系 | |
| JPS602184A (ja) | 生きた単離可能な雑種細胞の製造方法 | |
| Whitney | The production of monoclonal antibodies against Bacillus cereus beta-lactamase I | |
| JPS59175896A (ja) | ヒト抗体産生方法 | |
| JPS6167482A (ja) | ヒトモノクロナル抗体産生細胞の無限増殖法 | |
| EP0121399A2 (en) | A method for producing hybrids between myeloma cells and normal cells |