JPS62503029A - 赤血球濃縮物の長期貯蔵用合成溶液 - Google Patents
赤血球濃縮物の長期貯蔵用合成溶液Info
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- JPS62503029A JPS62503029A JP61502539A JP50253986A JPS62503029A JP S62503029 A JPS62503029 A JP S62503029A JP 61502539 A JP61502539 A JP 61502539A JP 50253986 A JP50253986 A JP 50253986A JP S62503029 A JPS62503029 A JP S62503029A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
赤血球濃縮物の長期貯蔵用合成溶液
この発明は、調剤、輸血、生物学的エンジニアリング、たとえば細胞培養物や生
物学的科学の分野を含むもので、かつ赤血球濃縮物の長期貯蔵用合成溶液に関す
る。
この明細書では、次の略語が使用される。
EC赤血球濃縮物(crythrocyte concentrate )SA
G m水(saline) 、7−、:エン、/j)I、iコースSAG−Ma
nnitol Q水、7−rエン、’jル’:J−ス、マ二[・−ル
PAGGS ホスフェート、アデニン、グルコース、グアノシン、塩水
PAGGS−3orbitol ホスフェート、7 デニ:/、グルコース、グ
アノシン、塩
水、ソルビトール
DI−IA ジヒドロ°キシアセトン
ACD u、クエン酸塩、デキストロースATP アデノシン三g4酸
△DP アデノシンニ燐酸
2.3−DPG 2,3−ジホスホグリセレート)1b ヘモグロビン
mQ ミリグラム
μmol /!] Hb ヘモグロビンのg当りマイクロモルInQSIIl/
kg水 水kg当りミ’、Iオス−E/L。
6日
この発明は、ヒトまたは動物源で、好ましくは白血球ど血小板を除去した赤血球
濃縮物で+2℃〜+6℃の間で少なくとも8週間保存用の合成溶液に関する。こ
のように保存される赤血球は、その適用の全てにおいて、かつ特に臨床上の用途
や輸血または研究用の用途の場合に、新鮮赤血球にまたは適音の方法で保存され
るものにもどる。
全面の単位体は、−回でドナーから抗凝血剤上に採取された血液量で、すなわち
350〜450v1である。しかし、全血は、衿にしか使用されず、これは臨床
上線にしか必要としないからであり、特殊なフラクションの製造用に必要な血漿
をかなりすてることになる。そのため、一般に赤血球濃縮物を使用することが好
ましい。赤血球濃縮物(EC)は、この全面の単位体からの赤色血液細胞の塊り
で、閉鎖系で血漿から分離されており、70%〜80%の間のヘマトクリットを
有する。
このように定義されたECは、理論上、それの元である全面の単位体と同じ寿命
を有する。現実には、貯蔵中に観察される換気機能の低下は、全面より速く、貯
蔵1〜2週間後には、より多数のセンイ膀や白血球/血小板凝集物がみられ、輸
血をかなり遅延させる。
この欠点を克服するために、非常に乾燥したEC,すなわち85〜90%のオー
ダーのへマドクリットを有するECを作り、それにヘマトクリットを低下する合
成保存媒地を加える提案がなされており、これは赤血球の性質を改善し、一方向
時に血漿回収が最大とする。
かくして、ホッグマン(H6gmann (:、、F、、)(edlung K
。
及び5halestrom Y、:Naw Engl 、 JoMca、299
:1377 (1978) 、蛋白欠乏媒地中に保存の赤色細胞の臨床上の有用
性〕の開発したSAGは35日間の貯蔵ができる。しかし、溶血がかなりあり、
すなわら3〜4%のオーダーであり、2.3−DPGレベルは21日後で10%
以下で、ATPは35日後に2μmol /Q Hbの限界値に達する(P、
l−1erve ら:ヒト赤血球の液状態での保存:新媒地中での生物学的結果
、参照ン。
またホッグマンの提案したSAG−Mannitol (1−16gmannら
、Vox 5ana 、 41,274〜281 (1981) )は、溶血の
程度は低いがなお高い、すなわち0.5%と1%の間で、35日間貯蔵ができる
。この液は、赤血球の性質を改善しない。
AG−Mannitolの変異体を開示しており、このものは2.3−DPGの
急速な低下、5〜6週間後に達するATPの限界値、及び溶血度がなお高すぎる
という同様な結果を与える。
他の公知の保存培地は、ザイドル(3eidl)の提案し1.:P AGGSで
、35日間の貯蔵ができるが、実質的な溶面度、すなわち2〜3%がある。
ザイドルがまた提案したPAGGS−8orbitolは6週間の貯蔵ができる
。この2つの媒地が検討された(AnnalesPharmaceutique
s Francaises 、 J、 5aint−Blancard 。
1983年41巻、3号、213〜228頁(エンリッチした、しかし蛋白を含
まない平衡化した栄養液中の赤色血液細胞の貯蔵)参照〕、そこでは、溶血は0
.5〜1%で、ATPは42〜45日で限界値に達し、エネルギー含mは42日
で0.75であると記録されている。2.3−DPG1ノベルは、40日で10
%以下である。これは、今日使用される最良の媒地である。PAGGS−8or
bitol中赤血球潟縮物は、約2週間、新鮮血液の性質を保持し、5〜6週間
貯蔵できる。2.3−DPGが長時間保存されるので、換気機能は他の培地より
良好に保存される。
しかし、PAGGS−3orbiLol i、t、自発性m IIII カh
73 B <、すなわち42日で0.5%であり、2.3−DPGレベルは低く
35日後に19%のオーダーであり、貯蔵期間は最大5〜6週間に限定される。
東ドイツ特許明細店第152,719号には、グルコース、シュクロース、クエ
ン酸ナトリウム、クエン酸、塩化ナトリウム、燐酸二ナトリウム及び適宜、アデ
ニン硫酸とグアノシンを含有する溶液を用いて赤血球を貯蔵する方法を開示して
いる。シュクローズは、10〜100ミリモル/gの範囲で示されているが、5
8〜60ミリモル/ρのオーダーでの比較的高い割合存在し、マニトール、他の
ジサッカライド類まlζはアルコール類で置換できる。貯R6週間後に、赤血球
中のΔTPレベルは通常値の50%であり、溶血は、同期間後に1%のオーダー
であると述べら米国特許第A 4356172号明細内では、特に輸血に対し興
味の少ない溶液を記載している。事実、溶液は、イノシンを含有するため、使用
者は、活性炭での吸着を行い、次いで輸血できる前に赤血球を洗浄することが必
要である。
ヨーロッパ特許出願第99315号には、機能性細胞より訂しくは脱凍結した赤
血球を少なくとも1週間貯蔵づるための保護液を記載しており、その保護液は、
公知のように、アデニン、グルコースとv4酸緩衝液を含イ1しノ、特徴として
、比較的人聞のシュクロース(47g±2)を含み、¥f4酸緩衝液は、高温度
存在し、これが溶液に330±10mQ smの容量オスモル濃度とpH7,4
0±0.10を与える。
フランス特許第2j58,372号には、全面の貯蔵用抗凝血液を記載しており
、この液は、通電の抗凝血剤(クエン酸塩とクエン酸)に加えて、デキスト[X
l−ス、またはフルクトース、マンノースもしくはガラクトースのようなぞの均
等物の1つからなるエネルギー源を、3.4〜3.8g /ρ、保存血液中の2
.3− DP G +ノベルを増大し及び/または維持するのに役立つジヒドロ
キシアセ1〜ンの1Ω当り少なくとも5ミリモル、好ましくは5〜100ミリモ
ル、特に好ましくは10〜30ミリモルを含み、かつ必要により、アデニン(0
,1〜1.0ミリモル/Q)、イノシン(5〜30ミリモル/ρ)、ピルビンa
+= < o、i〜20ミリモル/リモル/g)と、適宜、第二燐酸す1ヘリウ
ムを含(これらの最後の成分は保護液中に対で存在できる)んでいる。この特許
に記載の溶液は、2.3−DPGレベルまたはATPレベルの悪化がなく血液を
少なくとも3週間貯蔵できると述べられているが、これを支持する実験結果は示
されていない。
ケミカル アブス1−ラクツ(Chemical Abstracts、 88
巻9号、(1978年2月27日)、アブス1〜ラクトNo 、 60556n
)には、全面または赤血球の貯蔵液を記載しており、これにはクエン酸塩、デキ
ストロース、アデニン、グアノシンと重炭酸プトリウムを含み、赤血球の貯蔵用
溶液の場合にはキシリトールと燐酸イオンを含む。ここでの貯蔵期間は3週間で
2.3−DPGレベルを保持するのに1−IC○3− イオンの存在が好影響す
る旨報告されている。
モーアら(Moore et at、 Transfusion 20巻、1号
(1980年1〜2月号)、24〜31頁〕には、抗凝血液にD I−I Aを
、適宜アデニンとグルコースと共に、加えることを記載し、+4℃で42日の貯
蔵後に赤血球中の2.3− D P Gレベルを保持し、かつこの期間後にAT
P濃度を゛十分″な値に保持するのを目的としている。しかし、DMAが高濃度
(30ミリモル)で溶液に使用され、一方グルコースが32ミリモル、アデニン
が0.5ミリモル存在する。同じ著者ら< T ransfusion、 21
巻、6号(1981年11〜12月号)、723〜731頁)で、また、上記の
成分に加えて(DHAが52ミリモルのより高い濃度含む)、アスコルビン酸2
−ホスフェートを含有する赤血球の貯蔵液を記載している。
2.3− D P Gレベルは42日後では満足されるものであるが、ATPの
保存は悪く42日後に40%に下がっている。
この発明の1つの目的は、赤血球を少なくとも8週間まで貯蔵する溶液を提供し
、同時に貯蔵期間中を通じてその性質、特に即時換気機能(immediate
ventilatory function)が、2,3−DPG、ATPレ
ベル、溶血パーセント、ヌクレメチドレベル等を長時間保存することにより改良
される。
この発明の他の目的は、大m輪面の場合に不必要な過負荷を避けるように、現在
の溶液と比較して、できる限り、アデニン、グルコース及び適宜シュクロースの
石を減少さすことにある。
この目的のため、この発明は、次の組成(ミリモル/ρ)シュクロース 18〜
28
アデニン 0.8〜1.6
グルコース 30〜80
G6P源を描成する基′1i17〜39第1燐酸す1−リウム 2.6〜4.2
第2燐酸ナトリウム 11〜17
赤血球代涛(プロモータ 4〜20.6グアノシン 1.4〜2.8
重炭酸ナトリウム 37〜73
塩化マグネシウム 0.2〜1.8
塩化ナトリウム 13〜31
蒸 留 水 加えて1000yf
を有するのが有利で、かつその溶液の容量オスモル濃度が300±20m05m
/kgでpHが7.80±0.20である、ヒトまたは動物源であって白血球が
除去されているかまたはされていなくてもよい赤血球濃縮物の長期貯蔵用合成溶
液に関する。
血液の容量オスモル濃度(O3mO1arity) 、すなわち300±20m
0 sm/ kaど同じ値への調整は、塩化ナトリウムを用いて行われ、これに
より赤血球を高張または低張ショックから防護することが可能となる。その上、
^pHは第1燐酸ナトリウム及び第2燐酸ナトリウム、及び重炭酸ナトリウムの
量を適切に比例さずことにより調整され、赤血球代謝が長期門灯われることを可
能にする。
この発明による溶液の1つの有利な具体例では、G61〕(グルコース6−ホス
フェート)源からなる基質はガラク1−−スであるのが有利であり、このものは
糖代謝の関連フェーズに関与するFf素、すなわちヘキソキナーゼ(HK )や
ホスホフルク1〜キナーゼ(PFK)が存在しない場合でもまたはこれらのI′
I5素の活性が低下した場合でもGBP源を構成する特性を有する。
この発明にJ:る溶液の他の右利な具体例では、赤血球代4(プロモータが、ジ
ヒドロキシアセトン(DHA) 、iaもしくは塩の形のグルクロン酸、キシリ
トール、グロネート及びキシルロースからなる群から選択される。
この具体例の有利な形態によれば、赤血球代謝プロモータがD N Aの場合に
、このものは組成物中4〜8ミリモル/i2の同存在づる。
この具体例の有利な形態によれば、赤血球代謝プロモータがグルクロン酸または
その塩の1つである場合に、このものは組成物中5〜21ミリモル/ρの同存在
する。
この具体例の有利な形態によれば、赤血球代謝プロモータがグOネートまたはキ
シルロースである揚台に、これらは溶液中5〜21ミリモル/ρの同存在する。
この具体例の他の有利な形態によれば、赤血球代謝プロモータがキシリトールで
ある場合に、このものは組成物中受なくとも10ミリモル/ρの同存在する。
文献には、シュクロースがかなりの割合存在する赤血球の貯蔵用溶液を記載して
いるが、この発明による組成物はシュクロースレベルをかなり減少できる。
同様に、DHAに言及している全ての著者は、この発明によって推奨したMより
少なくとも10倍太さなυ1合用いている。
この発明の溶液中に塩化マグネシウムを存在さすことは特に重要で、このマグネ
シウム(ま、マグネシウムを血漿と置換する目的で溶液に加えられ、マグネシウ
ムは、赤血球の代4(における多数の酵素反応に対する必須の助因子である。
この発明による溶液の好ましい具体例では、次の組成(ミリモル/Q)を有する
。
シュクロース 23±1
ガラクトース 22±2
!T1燐酸ナトリウム 3.4±0.2第2燐酸ナトリウム 14±2
ジヒドロキシアセトン 6±1
グアノシン 2.1±0.2
重炭酸ナトリウム 55±5
塩化マグネシウム 0.75±0.25塩化ナトリウム 22±2
水 加えて1000yf
溶液とECは、55%と65%の間の平均へマドクリットを得るため1/ 1.
8と1/ 2.5の間の別間で混合するのが有利である。
従って、このように処理されたECは、加熱以外の処理をせず、使用前2℃〜6
℃の温度で約8〜9週間貯蔵できる。この間、このように貯蔵された赤血球の生
存能力と機能性は優れたまま残存する。その上貯蔵中の赤血球の破壊は最低で何
れの場合も公知の溶液より低い。
かくして、この発明による溶液中で2℃〜6℃の温度で貯蔵されたECは、3〜
4週間新えr血液の性質ど、8〜9週間輸血可能な血液の性質を保持する。
使用例
ドナーから採取した400〜450〃の血液をクエン酸塩、燐酸塩、デキス1〜
ロースの抗凝血剤63ijを含有づ゛るPVCバックに入れる。血液採取後の次
の2〜3時間中に、バックを3000Gで10分遠心分離し、次いで血漿を傾瀉
し、白血球/血小板相を除去する。
次いで、かくして得たECにこの発明による溶液90〜110zfを加え、バッ
クを2℃〜6℃の温度で貯蔵する。当初のpHは1.20で、容量オスモル温度
は300rQOsm、’ kgでヘマトクリットは60%である。
この例では、使用した溶液は、この発明の好ましい具体例としてその組成を上記
した液である。
次の表は、5週間後と8週間後の結果を示す。
貯蔵時間 5週 8週
p)16,806.65
TP
(μmol ia Hb ) 4.07 (Ioy%) 2.87 (76%)
2.3− D P G
(μ問1 /Q Hb ) 3.6 (27%) 1.8 (14%)エネルギ
ー含量 0.82 0.75
ATP/ADP 3,6 2.4
ヌクレオタイドブール 0,340 0.288(mol /mol Hb )
燐酸化能 368 200
上の記載から明らかなように、この発明は、ここにより明白に記載されたこれら
の方法の手段、具体例適用法に限定されず、反対に、この発明の構成又は範囲か
ら逸脱することなく、当業者の行いうる全ての変形を含むものである。
国際調斉報告 イエIW、、9(,1゜nl<<A二;:IEX To zF、
E r::τ三R,NATIC)iへL S三、ユ+R口HRE?ORT ON
Claims (9)
- 1.次の組成(ミリモル/l) シュクロース 18〜28 アデニン 0.8〜1.6グルコース 30〜80 G6P源を構成する基質 17〜39 第1燐酸ナトリウム 2.6〜4.2第2燐酸ナトリウム 11〜17 赤血球代謝ブロモータ 4〜20.6グアノシン 1.4〜2. 8重炭酸ナトリウム 37〜73 塩化マグネシウム 0.2〜1.8塩化ナトリウム 13〜31 蒸留水 加えて1000mlを有するのが有利で、かつその溶 液の容量オスモル濃度が300±20mOsm/kgでpHが7.80±0.2 0である、ヒトまたは動物源であって白血球が除去されているかまたはされてい なくてもよい赤血球濃縮物の長期貯蔵用合成溶液。
- 2.G6P(グルコース6ーホスフェート)源を構成する基質が、有利には、糖 代謝の関連フェーズに関与する酵素、すなわちヘキソキナーゼ(HK)及びホス ホフルクトキナーゼ(PFK)が存在しなくても、またはこれらの酵素の活性が 低下した場合でもG6P源を構成する特性を有するガラクトースである請求の範 囲1項による溶液。
- 3.赤血球代謝ブロモータがジヒドロキシアセトン(DHA)、遊離もしくは塩 の形のグルクロン酸、キシリトール、グロネート及びキシルロースからなる群か ら選択される請求の範囲2項による溶液。
- 4.赤血球代謝ブロモータがDHAで、このものが組成中4〜8ミリモル/l量 存在する請求の範囲3項による溶液。
- 5.赤血球代謝ブロモータがグルクロン酸またはその塩であり、このものが組織 中5〜21ミリモル/lの量存在する請求の範囲3項による溶液。
- 6.赤血球代謝ブロモータがグロネートまたはキシルロースであり、このものが 溶液中5〜21ミリモル/l量存在する請求の範囲3項による溶液。
- 7.赤血球代謝ブロモータがキシリトールで、このものが組成中少なくとも10 ミリモル/l量存在する請求の範囲3項による溶液。
- 8.次の好ましい結成(ミリモル/l)シュクロース 23±1 アデニン 1.2±0.1グルコース 55±2 ガラクトース 22±2 第1燐酸ナトリウム 3.4±0.2第2燐酸ナトリウム 14±2 ジヒドロキシアセトン 6±1 グアノシン 2.1±0.2重炭酸ナトリウム 55±5 塩化マグネシウム 0.75±0.25塩化ナトリウム 22±2 水 加えて1000mlを有する請求の範囲4項による溶液 。
- 9.溶液に懸濁される赤血球濃縮物を1/1.8〜1/2.5の間の割合で混合 して55%〜65%の間の平均ヘマトクリットを与え、従ってこのように処理さ れる赤血球濃縮物は加熱以外の処理なしで、使用前+2℃〜+6℃の間の温度で 約8〜9週間貯蔵できる請求の範囲8項による溶液。
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