JPS62502616A - 成入呼吸困難症の処置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 Ｗ−症の几− 見所Ω分団 本発明は、成人呼吸困難症（ＡＲＤＳ）と敗血症に対する新規な処置方法を示す ものである。

発尻■貨景 成人呼吸困難症（ＡＲＤＳ）は一般的で、またしばしば致命的な敗血性のショッ クを併発する（参照：　Ｆｏｗｌｅｒ、　Ａ、Ａ、、　ｅｔ　ａｔ。

（１９８３）＋　”　Ａｄｕｌｔ　ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　ｄｉｓｔｒｅｓｓ 　ｓｙｎｄｒｏｍｅ　：　Ｒ１５ｋ　ｗｉｔｈｃｏｍｍｏｎ　ｐｒｅｄｉｓｐｏ ｓｉｔｉｏｎｓ、”　八ｎｎ、Ｉｎｔ、Ｍｅｄ、９８．　５９３−５９７．　ａ ｎｄＦｅｉｎ、　Ａ、Ｍ、、　ｅｔ　ａｌ、　（１９８３）＋　”　Ｔｈｅ　ｒ ｉｓｋ　ｆａｃｔｏｒｓ、　１ｎｃｉｄｅｎｃｅ。

好中球、血小板、線維素、アラキドニン酸代謝物、セロトニン、ヒスタミン、お よびＣ５ａを含むいくつかの細胞質や体液の要因が、　ＡＲＤＳの発生に関与し ている（参照：　５ｔｅｖｅｎｓ、Ｊ。

Ｈ，ａｎｄ　Ｔ、Ａ、Ｒａｆｆ１ｎ　（１９８４）、　”　Ａｄｕｌｔ　ｒｅｓ ｐｉｒａｔｏｒｙ　ｄｉｓｔｒｅｓｓｓｙｎｄｒｏｍｅ　−Ｉ　、　Ｅｔｉｏｌ ｏｇｙ　ａｎｄ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ、”　Ｐｏ５ｔ、ｌｒ＋Ｉｅｄ、　Ｊ。

皿、　５０５−５１３）。

最近の報文は、Ｃ５ａが好中球の誘引、集合、活性化を仲介し、その結果化じる 肺内皮の損傷力＜ＡＲＤＳの発病の決定的要因となることを示唆した（参照：　 Ｔａｔｅ、　Ｒ，Ｍ、　ａｎｄ　Ｊ、Ｅ、　Ｒｅｐｉｎｅ（１９８３）＋　”　 Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｄｕｌｔ　ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒ ｙ　ｄｉｓｔｒｅｓｓ８０２−８０６　；　５ａｃｋｓ、　Ｔ、、　ｅｔ　ａｌ 、（１９７８）、“Ｏｘｙｇｅｎ　ｒａｄｉｃａｌｓｒｎｅ６ｉａｔｅ　ｅｎｄ ｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅＸｌ　ｄａｍａｇｅ　ｂｙ　ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ　ｓ ｔｉｍｕｌａｔｅｄｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｓ、　Ａｎ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｍ ｏｄｅｌ　ｏｆ　ｉｍｍｕｎｅ　ｖａｓｃｕｌａｒ　ｄａｍａｇｅ、”／Ｊ、　 Ｃｌ１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、６１＋　１１６１−１１６７　；　ａｎｄ　Ｃｒａ ｄｄｏｃｋ、　Ｐ、Ｒ，＋ｅｔ　ａｌ、（１９７７Ｌ”　Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ 　（Ｃ５ａ）−ｉｎｄｕｃｅｄ　ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅａｇｇｒｅｇａｔｉｏ ｎ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　；　Ａ　ｐｏｓｓｉｂｌｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ 　ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ−ｉｎｄｕｃｅｄ　１ｅｕｋｏＳｔａｓｔｉｓ　ａｎｄ 　１ｅｕｋｏｐｅｎｉａ、”　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、Ｉｎｖｅｓｔ。

銭、　２６０−２６４）。　− これらの一連の事実は１敗血性ショックにおけるＡＲＤＳの発達の基本的病因機 構といえるだろう（参照：　５ｔｅｖｅｎｓ、　Ｊ、Ｈ。

ａｎｄ　Ｔ、Ａ、　Ｒａｆｆ１ｎ　（１９８４）　”　Ａｄｕｌｔ　ｒｅｓｐｉ ｒａｔｏｒｙ　ｄｉｓｔｒｅｓｓ　ｓｙｎ−ｄｒｏｍｅ−１、Ｅｔｉｏｌｏｇｙ 　ａｎｄ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　”　Ｐｏ５ｔ、　Ｍｅｃ！、　Ｊ、　６Ｑ＋ ５０５−５１３）。イン・ビトロの研究は、内毒素またはデモサン（Ｚｙｍｏｓ ａｎ　）−活性化プラズマから生じたＣ５ａが好中球の凝集をひきおこすことを 示した（参照：　Ｈａｍｍｅｒｓｃｈｍｉｄｔ、　ｏ、Ｅ、１ｅｔ　ａｌ、　（ １９８０）’　”　Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ　ａｇｇｒｅｇｏｍｅｔｒｙ　：　 Ａ　５ｅｎｓｉｔｉｖｅｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｃｌｅｔｅｃｔ ｉｏｎ　ｏｆ　Ｃ５ａ　ａｎｄ　ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ　ａｃｔｉｖａ−ｔｉｏ ｎ、’　Ｂｌｏｏｄ　５５．８９Ｂ−９０２）　、、それに加えて、Ｃ３ａ−活 性化好中球はより粘着性で１組織培養の内皮細胞に対し細胞変性的である（参照 ：　Ｔｏｎｎｅｓｅｎ＋　Ｍ、Ｇ、、　ｅｔ　ａｌ、　（１９８４）＋　”　Ｎ ｅｕｔｒｏｐｈｉｌ−ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌ　１ｎｔｅｒａｃｔｉ ｏｎｓ　：　ｔｌｏｄｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌａｄｈｅｓ ｉｖｅｎｅｓｓ　１ｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ　ｆｒａｇｍｅ ｎｔｓ　Ｃ５ａ　ａｒ＋ｄＣ５ａｄｅｓ　Ａｒｇ　ａｎｄ　ｆｏｒｍｙｌ−ｍｅ ｔｈｉｏｎｙｌ−１ｅｕｃｙｌ−ｐｈｅｎｙｌａｎａｌｉｎｅ　ｉｎ　ｖｉｔｒ ｏ。

遺伝的に０５を欠失したマウスを調べるイン・ビボの研究で。

Ｃ５は、肺炎球菌による敗血症、やけど傷および酸素過剰に対応しておこる肺浮 腫形成に必要であることが明らかとなった（参照：　）Ｉｏｓｅａ、　Ｓ、Ｆ、 、　ｅｔ　ａＬ、　（１９８０）、　”　Ｒｏｌｅ　ｏｆ　ｃｏｍｐｌｅｍｅｎ ｔａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｉｎ　ａ　ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　ａｄｕｌｔ　ｒｅｓｐ ｉｒａｔｏｒｙ　ｄｉｓｔｒｅｓｓ　ｓｙｎ−ｄｒｏｍｅ、”　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ 、　Ｉｎｖｅｓｔ、６６、３７５−３８２　；　Ｇｅ１ｆａｎｄ、　Ｊ、Ａ、。

ｅｔ　ａｌ、（１９８２）、″　八１ｔｅｒｎａｔｉｖｅ　ｃｏｍｐｌｅｍｅｎ ｔ　ｐａｔｈｗａｙ　ａｃｔｉｖａ−ｔｉｏｎ　１ｎｃｒｅａｓｅｓ　ｍｏｒｔ ａｌｉｔｙ　ｉｎ　ａ　ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　ｂｕｒｎ　１ｎｊｕｒｙ　ｉｎｍｉ ｃｅ、”　Ｊ、　Ｃ１１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、　Ｔｏ、　１１７０−１１７６　 ；　ａｎｄ　Ｐａｒｒｉｓｈ、　Ｄ。

Ａ、、　ｅｔ　ａｌ、　（１９８４）、　”　Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ　ｒｅｓｐｏ ｎｓｅ　ｏｆ　ｆｉｆｔｈ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｏｆ　ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ− ｓｕｆｆｉｃｉｅｎｔ　ａｎｄ−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ　ｍ１ｃｅ　ｔｏ　ｈｙｐ ｅｒｏｘｉａ、”Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、７４＋　９５６−９６５　 ）　ｏ　ＡＲＤＳを進展させるリスクの高い患者を予想的に追跡していく場合、 Ｃ５ａの増加を検出することは、　ＡＲＤＳの開始の有用な示標となった（参照 ：　Ｈａｍｍｅｒ−ｓｃｈｍｉｄｔ、　Ｄ、Ｅ、、　ｅｔ　ａｌ、　（１９８０ ）、　＋Ａｓ５ｏｃｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｃｔｉｖａｔ ｉｏｎ　ａｎｄ　ｅｌｅｖａｔｅｄ　ｐｌａｓｍａ−Ｃ５ａ　ｗｉｔｈ　ａｄｕ ｌｔ　ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｄｉｓｔｒｅｓｓ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ　：　Ｐａ ｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｒｅｌｅｖａｎｃｅ　ａｎｄｐｏｓｓｉｂ ｌｅ　ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ　ｖａｌｕｅ、”　Ｌａｎｃｅｔ上：　９４７−９ ４９）　、敗血症の患者４０人の予想研究（Ｐ、Ｓ、　Ｗｅｉｎｂｅｒｇ、　ｅ ｔ　ａｌ、　（１９８４）。

Ａｍ、　Ｒｅｖ、　Ｒｅ５ｐｉｒ、　Ｄｉｓ、１３０．７９１−７９６　）で、 はとんどすべての患者で、　Ｃ５ａ　ｃｌｅｓ　ＡｒｇとＣ３ａ　ｄｅｓ　Ａｒ ｇのレベルが上昇していたことがわかった。また、この患者集団のうち６０％は 深刻な肺病を持ち、２５％はＡＲＤＳにかかっていた。

本発明は、補体因子Ｃ５ａに対する抗体の投与を含む、　ＡＲＤＳと敗血症に対 する新規な処置方法を提供する。

光皿傅翌且 本発明は成人呼吸困難症（ＡＲＤＳ）の処置を必要とする患者におけるその処置 法であって、その愚者にＣ５ａ補体成分またはそのｄｅｓ　Ａｒｇ銹導体に対す る抗体を投与することを含む。

また本発明は１敗血症の処置や敗血症の徴候の軽減を必要とする。愚者における その処置法または軽減法を提供し、その、愚者に補体成分Ｃ５ａまたはＣ５ａ　 ｄｅｓ　Ａｒｇにり」する１に体を投与することを含む。本発明で用いる抗体は 、ポリクローナル抗体あるいはモノクローナル抗体である。

主班旦斤梃象址所 ＡＲＤＳは、非心臓性肺浮腫による急性呼吸不全によって特徴づけられ５　これ はしばしばショック、全身性敗＋ｆａ症、ｉ＃：場や高速道路での外傷、ウィル ス性呼吸感染およびさまざまな他の傷や状況の後効果である（参照：Ｒｉｎａｌ ｄｏ、　Ｊ、Ｅ、ａｎｄ　ａｎｄＲ，１１，Ｒｏｇｅｒｓ　（１９８１）＋　Ａ ｄｕｌｔ　Ｒｅ５ｐｉｒａｔｏｒｙ　Ｄｉｓｔｒｅｓｓ　Ｓｙｎｄｒｏｍｅ３０ ６、９００−９０９　）。今日のＡＲ［ｌＳ治療法は１強力な呼吸、心臓血管お よび栄養の支持を含んでいる。正の終末呼吸（ｅｎｄ−ｅｘｐｉｒａ　ｔｏｒｙ ）圧力で機械的に換気することが、　ＡＩ？ＤＳの患者に対する標準的呼吸管理 法である（参照：ＳＬｅνｅｎｓ、　Ｊ、Ｈ，ａｎｄＴ、Ａ、　Ｒａｆｆ１ｎ　 （１９８４）、　”　Ａｄｕｌｔ　ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　ｄｉｓｔｒｅｓｓ 　ｓｙｎｄｒｏｍｅ−１１、Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ、　”　Ｐｏ５ｔ（Ｈｒ、　 Ｍｅｄ、　Ｊ、　６０．５７３−５７６　）　６コルチコステロイド療法（Ｈａ ｍｍｅｒｓｃｈｍｉｄＬ、　ｅｔ　ａｔ、　（１９７９）、　”　Ｃｏｒｔｉｃ ｏ−ｓｔｅｒｏｉｄｓ　１ｎｈｉｂｉｔ　ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ　１ｎｄｕｃｅ ｄ　ｇｒａｎｕｌｏｃｙＬｅ　ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ、’Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　 Ｉｎｖｅｓｔ、６３．７９８−８０３参照）２例えばメチルプレドニソ゛ロン、 あるいは例えばプロスタグランジンＥのようなシクロオキシゲナーゼ阻害剤の投 与は、　ＡＲＤＳ恵者にとってただ限られた利益し７かもたらさない。敗血症の 臨床的発現および今日の処置法は、　Ｐ、　Ｄｕｆｆ、によってＪ、　Ｒｅｐｒ ｏｄ、　Ｍｅｄ、２４゜１０９−１１７　（１９８０）に記述されている。

本発明の方法はＡＲＤＳまたは敗血症の患者に対し、処置すべき状況の非常に初 期に実行されたり、あるいはより一層好ましくは２敗血症やＡＲＤＳのいかなる 明白な徴候でもその前に実行されるならば、最も効果的である。ＡＲＤＳの初期 の状態は。

Ｃ５ａあるいはＣ５ａ　ｄｅｓ　Ａｒｇをイムノアッセイすることでモニターで きる。３本発明の方法は他の治療法と組み合わせて使うことが好ましい。本発明 の方法は、　ＡＲＤＳｔ−滅弱化し、従ってＡＲＤＳの徴候を顕著に減じる。し かしながら、患者には必要に応じて、呼吸、心臓血管および栄養の補給が供され ることが予想される。加えて２本発明の方法は、　ＡＲＤＳや敗血症の処置につ いての他の薬理的方法と組み合わせてもよい。

本発明の方法は、Ｃ５ａあるいはそのｄｅｓ　Ａｒｇ誘導体を生じる補体の活性 化に関係するかまたはその結果おこったＡＲＤＳあるいは敗血症を持ついかなる 温血動物の処置にも使用できる。

本発明の好ましい実施態様は、　ＡＲＤＳのヒトの処置である。本発明の他の好 ましい実施態様は敗血症のヒトの処置である。

抗−ヒトＣ５ａ　ｄｅｓ　Ａｒｇを、約１から約１００　ｍｇ　／　ｋｇ体重／ 日量で、１〜３日間、処置の１日目から３日目にかけて投与量を減らして投与す るのが好ましい。たとえば、第−細目に２〜５ｇの抗体を投与し、第２日月は１ 〜３ｇ、第３日月は０．５〜２ｇ投与する。もちろん、治療を開始した時点での 患者の状態や治療に対する患者の応答によって、治療に必要な回数はより少なく なるかあるいはより多くなるであろう。抗体は通常静脈点滴によって注入する。

抗−ヒ）　Ｃ５ａ　ｄｅｓ　Ａｒｇは本発明の実施において好ましい抗体である が、ヒトＣ５ａあるいはＣ５ａ　ｄｅｓ　Ａｒｄと十分交差反応するものであれ ばあらゆる溢血種のＣ５ａあるいはＣ５ａ　ｄｅｓ　Ａｒｇに対する抗体が使用 できる。

補体成分Ｃ５ａは、血清カルボキシペプチダーゼによってイン・ビボで不活化さ れて補体Ｃ５ａ　ｄｅｓ　Ａｒｇになるポリペプチドで、この不活化はすべての 使用可能な白面細胞のＣ５ａ結合部位が飽和されてしまった後で初めて生じる（ Ｈｕｇｌｉ　Ｔ、Ｅ、　ａｎｄｆｌｕ、　Ｍｕｌｌｅｒ−Ｅｂｅｒｈａｒｄ　（ １９７８）＋　”　Ａｎａｐｈｙｌａｔｏｘｉｎｓ　：　Ｃ３ａ　ａｎｄＣ５ａ 　、”Ａｄｖ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　２６＋　１−５３）　ｏ従って補体Ｃ５ａ 抗体産生中、使用されるのは通常Ｃ５ａ　ｄｅｓ　Ａｒｇである。Ｃ５ａ　ｄｅ ｓ　Ａｒｇは生理学的に不活性であるが、免疫的原性であるのでＣ３ａｄｅｓＡ ｒｇの抗体は、イン・ビボでＣ５ａおよびＣ５ａ　ｄｅｓ　Ａｒｇと交差反応す るであろう抗体は、常法に従って、ある種由来のＣ３ａｄｅｓ　Ａｒｇを異なっ た種の動物に注射して産生ずる。たとえばヒトＣ５ａ　ｄｅｓ　Ａｒｇを、たと えばウサギ、ヤギ、ヒツジ、またはウマなどに注射し、抗−ヒトＣ５ａ　ｄｅｓ 　Ａｒｇを産生ずればよい。Ｃ５ａあるいはＣ５ａ　ｄｅｓ　Ａｒｇに対するモ ノクローナル抗体は、当業者によく知られた方法で、適当な溢血動物またはヒト から単離したＣ５ａあるいはＣ５ａ　ｄｅｓ　Ａｒｇ、あるいは化学合成したＣ ５ａあるいはＣ５ａ　ｄｅｓ　Ａｒｇを使って生成する。

以下の実験は本発明をさらに例証するものである。

ｊ”　−Ｃ５ａ　ｄｅｓ　Ａｒ　の言！Ｌｍ抗原は、デモサン−活性化ヒトプラ ズマから、）！ｕｇｌｉとＣｈｅｎｏｗｅｔｈ　（ｆｌｕｇｌｉ、　Ｔ、Ｅ、　 ａｎｄ　Ｄ、Ｅ、　Ｃｈｅｎｏｗｅｔｈ　（１９８０）＋“Ｂｉｏ−１ａｇｉｃ ａｌｌｙ　ａｃｔｉｖｅ　ｐｅｐｔｉｄｅｓ　ｏｆ　ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ　： 　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　ａｎｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ　ｏｆ　Ｃ３ａ　ａ ｎｄ　Ｃ５ａ　ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ、”　Ｉｎ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙａ ｎｄ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｍ ｅｄｉｃｉｎｅ、　Ｒ，Ｍ、　Ｎａｋａｍｕｒａ。

Ｗ、Ｒ，Ｄｉｔｔｏ、　Ｅ、Ｓ、　Ｔｕｃｋｅｒ　ｍ、　ｅｄｓ、＋　Ａｌａｎ 　Ｒ，Ｌｉ５ｓ、　Ｉｎｃ、。

Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　ＮＹ、　４４３−４６０　）に述べられた方法でゲル濾過 ／イオン交換クロマトグラフィーによって調製した。得られたＣ３ａｄｅｓ　Ａ ｒｇは、その純度を酢酸セルロース電気泳動とアミノ酸分析により検査し、免疫 原として使用した。ニューシーラント白ウサギを免疫原で免疫化し、ヒト補体Ｃ ５ａ　ｄｅｓ　Ａｒｇの抗血清を得た。抗−ヒ）　Ｃ５ａ　ｄｅｓ　Ａｒｇはヒ ）　Ｃ５ａと完全に交差反応する（Ｈｕｇｌｉ、　Ｔ、Ｅ、、　ｅｔ　ａｌ、　 （１９８１）、　”　ｌ５ｏｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｒｅｅｓｅｐａｒａｔｅ 　ａｎａｐｈｙｌａｔｏｘｉｎｓ　ｆｒｏｍ　ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ−ａｃｔｉ ｖａｔｅｄ　ｈｕｍａｎｓｅｒｕｍ、”　Ｍｏ１ｅｃ、　ＣｅｌｌＢｉｏｃｈｅ ｍ、　４Ｌ　５９−６６）。

ウサギの抗−ヒトＣ５ａ　ｄｅｓ　Ａｒｇは、ラジオイムノアッセイで滴定した （Ｕｐｊｏｈｎ　Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、　Ｔｈｅ　Ｕｐｊｏｈｎ　Ｃｏｍｐ ａｎｙ、　Ｋａｌａｍａ−ｚｏｏ、旧）。この実験に用いた抗血清の力価（％結 合価／合計価）は１　：　１２００であった。

イムノグロブリンは、ウマＩｇＧｇ４製法（Ｗｅｃｈｔｅｒ、　Ｗ、Ｊ、、　ｅ ｔＢｌ、（１９７９）、　’　Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ａｎｔｉ−ｔｈ ｙｍｏｃｙｔｅ　ｇｌｏｂｕｌｉｎ　（ＡＴＧＡＭ）　ｆｏｒ　ｃｌｉｎｉｃｏ ｌ　ｔｒｉａｌｓ、　”　Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏ。２８．３０３−３ｏ ７）の改良法により、ｌＱ滅の抗血清から調製した。抗血清からＯＩｇＧ画分の 最終溶液は、　１８．ＯＯＯｒｐｍで３０分で遠心分離して、微片のないものを 作製した。タンパク湯度は、紫外線（７）吸光度を２８０ｎｍ　（Ｅ２８０ｎｍ 、１　ｍｇ／−＝　１．５）で測定し、決定した。非免疫化ニューシーラント白 ウサギから非特異的イムノグロブリンを上記のように調製し、グループ■とＨの 動物に偽抗体として注入に使用した。

（以下余白） 迫ｍηｌ果 Ｍａｃａｃａ　ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ　ｐｒｉｍａｔｅｓから得た凝固阻止 化静脈血（１０Ｕヘパリン／−血液）を使用し、好中性白血球は、　Ｃｒａｄｄ ｏｃｋ等（前出）の方法を改良して得た。我々の改良法は、アルブミン入りＨａ ｎｋｓ調製塩溶液よりもむしろ９％グルコース入りリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳＧ ）を使用することによった。

プラズマは、０．４ｒｎｌのプラズマと２０μｐの２■／−内毒素（Ｅ、　ｃｏ ｌｉ　Ｊ９６　）とを、３７℃で３０分インキュベートし、そして５６℃で３０ 分インキュベートして調製した。プラズマは、内毒素とインキュベートした後、 　５０００ｇで１０分間遠心分離し。

微片を除去した。好中球の凝集は、アブレボメーター（ＰＡＰ４゜Ｂｉｏ／Ｄａ ｔａ　Ｃｏｒｐ、、　Ｗｉｌｌｏｉｙ　Ｇｒｏｖｅ、　ＰＡ）中での好中球（５ Ｘ１０６細胞／ｄ　ＰＢＳＧ）の凝集性で決定した。凝集の刺激は、（ａ）内毒 素で活性化したプラズマ、（ｂ）内毒素で活性化したプラズマを非特異的ウサギ ＩｇＧと１５分インキュベートしたもの、（Ｃ）内毒素で活性化したプラズマを 抗−Ｃ５ａ　ｄｅｓＡｒｇ　ＩｇＧと１５分インキュベートしたもの、であった 。凝集は、　２０μβの各刺激を２５０　μ！の好中球懸濁液に添加することに より誘導した。

肱息ｑ旧翌 ４．８〜７．２ｋｇの体重の１２頭のおとなオスのＭａｃａｃａ　ｆａｓｃｉｃ ｕｌａｒｉｓｐｒｉｍｅｎｔｅｓ　（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ）を実験に使用した （表Ｉ）。それらをまず２０■／　ｋｇのメトヘキシタールと５■／　ｋｇのサ クシニルコリンでＵ酔り、５■／　ｋｇ　／　ｈ　ｒのベンドパルビトールと０ ．１■／ｋｇ／ｈｒのパンキュロニウム（バーバード注入ポンプ）を維持し、加 熱パッドの上にあおむけに横たえた。動物に挿管し、潮流１５ｍｇ／ｋｇ量と、 呼吸率をＰａＣ０，が３５±３ｍｍ１ｇとなるように調整して、室内の空気を流 通させた（Ｈｅａｌｔｈ　Ｄｙｎｅ、　Ｍｏｄｅ１１２Ｌ　Ｍａｒｉｅｔｔａ； 　ＧＡ　）。

４Ｆ動脈管を、動脈圧と試料の動脈血気体を、測定するために、大腿部動脈を通 じて腹腔の大動脈に挿入した。５Ｆ熱量希釈Ｓｗａｎ−Ｇａｎｚカテーテルを、 肺動脈とウェッジの圧ツノを測定し、心拍出量をモニターするために（Ｅｄｗａ ｒｄｓ　Ｍｏｄｅｌ　９５２０ＡＴｈｅｒｍｏｄｉｌｕｔｉｏｎ　Ｃａｒｄｉａ ｃ　０ｕｔｐｕｔ　Ｃｏｍｐｕｔｅｒ　ａｎｄ　Ｃａｔｈｅｔｅｒｓ。

５ａｎｔａ　Ａｎａ、　ＣＡ）＋大腿部の静脈を通して肺動脈に挿入した。

カテーテルの位置は、４−チャンネルストリップチャートレコーダー（Ｈｅｗｌ ｅｔｔ　Ｐａｃｋａｒｄ、　Ｍｏｄｅｌ　８１０６４Ａ、　Ｐａ１ｏ　Ａｌｔｏ 、　ＣＡ）上で圧力を記録することで定めた。中央静脈管を１反対側の大腿部の 静脈を通して、抗体投与のため挿入した。胴内ＥＣＧ線を、心拍数とリズムを評 価するため設置した。

胤菌至■製 ：ｒ、、−ｆ：＋）’ｙ７・コリ　（Ｅ、ｃｏｌｉ）　Ｊ９６　（０４：　Ｋ６ 　：旧）は、ヒト菌血症−腎孟腎炎から単離されるが、溶血現象をひきおこし、 コリシン■陽性で２通常の血清中の凹皿作用に耐性で。

３　そして同時にマンノースとαＧａｌ　ＩＴ４−βＧａｌを結合する（Ｈｕｌ ｌ。

Ｒ，、ｅｔ　ａｌ、　（１９８１）＋　”　Ｃｏｎ５ｔｒｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ 　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｒｅ−ｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｐｌａｓｍｉｄｓ 　ｅｎｃｏｄｉｎｇ　Ｔｙｐｅｌ　ｏｒ　Ｄ−Ｍａｎｎｏｓｅ−Ｒｅｓｉｓｔａ ｎｔｐｉｌｉ　ｆｒｏｍ　ａ　ｕｒｉｎａｒｙ　ｔｒａｃｔ　１ｎｆｅｃｔｉｏ ｎ、ＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａＣｏｌｉｉｓｏｌａｔｅ’　Ｉｎｆｅｃｔ、　Ｉｍ ｍｕｎ、　３３＋　９３３−９３８　＞　６保存培養液は。

１０％グリセロースを含むシリアブロス中で一７０℃で保存した。

保存培養液を、トリビコース　ソイ　アガー（ＴＳＡ）プレート上に植菌し、３ ７℃で１８時間インキュベートした。１８時間のＴＳＡ培養液を、滅菌したファ イバー除去デークロンスワブを使って１通常の食塩水で回収した。通常食塩水１ ｍｌあたりのコロニー形成ユニット（ＣＦＵ）数は、　６２０ｎｍの吸光度（ｌ 　ｃｍ光通過）と寒天注入法による連続希釈培養液のＣＦＵ数との比較によって 構成した標準曲線で決定した。Ｊ９６のＣＦＬＩ標準曲線は、３通りの異なった 場合について各々３回ずつ作製した曲線が同一であると決定されたので、再現性 があった。保存静脈細菌の植菌は、２．ＯＸ　１０９細菌／−食塩水で行った。

この植菌量では、ＣＦＵ−吸光度標準曲線上でその直線部分にあり、これは実験 期間中４種の異なった場合について２回ずつの培養法によって無差別に調査し、 確認した。

ｙのプロトコール 動物を３つの実験群に分けた。１群（ｎ−４）は、非免疫化ウサギ（偽１ｇＧ） 由来のプールしであるＩｇＧ　５■と、偽エセリシア・コリ　（Ｅ、ｃｏｌｉ） 注入物としての無菌生理食塩水５　ｒｒｇ　／　ｋｇとを受ける。対照動物とし た。■群（ｎ＝４）は。

５■の偽ウサギＩｇＧと、５■／ｋｇのエセリシア・コリ　（Ｅ。

匹旦）の懸濁液（１ｘ　１０”／　ｋｇ）とを受ける２敗血症動物とした。■群 （ｎ＝４）は、５ｍｇのウサギ抗−ヒトＣ５ａ　ｄｅｓ　Ａｒｇと、５ｍｌ／ｋ ｇのエセリシア・コリ　（Ｅ、ｃｏｌｉ）の懸濁液とを受ける１敗血症動物とし た。

管の設置が完全に終了した後、肺毛細管ウェッジ圧（ＰＣＷＰ）を測定した。ｐ ｃ誓ｐ＜５＋ｗｎＨｇであれば、　ｐｃｉを５＊ｎＨｇにするために、前もって 決めたプロトコールにより、流体を投与した。

実験期間中、流体による意識回復のプロトコールを用いて。

ｐｃ旺を５ｍｍＨｇに維持した。

流体による意識回復のプロトコールは、普通の生理食塩水（Ｎ／Ｓ）を静脈注射 で投与してＰＣＷＰを５ｍｍＨｇに維持することから成る。ＰＣＷＰ測定は、最 小間隔０．２時間で行った。ＰＣＷＰがく５ｍｍ１ｇであれば、２０−〇Ｎ／Ｓ を１分間以上投与した。ＰＣＣ測測定、巨丸剤の投与終了後すぐに行った。ＰＣ ＷＰが一５ｍｍＨｇであれば、さらに流体を投与しなかった。ｐｃｈｐ＜　５　 ｍｉ＋Ｈｇであれば、４ＱｍＲのＮ／Ｓを１分間以上投与し、　ＰＣＷＰ測定を 行った。この一連のことを、　ＰＣＷＰ＝　５　ｖａｍＨｇになるまで、繰り返 した。肺動脈の拡張期（ＰＡＩ））圧を、　Ｎ／Ｓを注入中に、評価した。もし ＰＡＤ　＞　３　＋ｉｎＨｇの増加をしたなら、流体の投与を停止し、　Ｐ（Ｊ Ｐ測測定行った。ＰＣＷＰが＜５ｍｍＨｇであれば、流体の巨丸剤を完了した。

ＰＣＷＰが＝５ｍＨｇならば、さらに流体を投与しなかった。

ベースラインのデータは、　ＰＣＷＰが５ｍｍ）Ｉｇのときに得た。データには 、心拍数；収１ｉｉ期、拡張期、および平均の動脈圧（ＭＡＲ）；収縮期、拡張 期および平均の肺動脈圧（ＰＡＰ）　；肺毛細管ウェッジ圧（ＰＣＷＰ）　、中 心の静脈圧；熱量希釈心拍出量；動脈血のガス；および循環している末梢好中球 数、が含まれる。

ベースラインのデータが得られたらすぐに７抗体の注入を開始した。５■の偽の 、あるいは抗−Ｃ５ａ抗体を、４０−のｒ讐／ｓで希釈し、その溶液の３分の１ を１分間に渡り、巨丸剤として注入した。残りの抗体を、バーバード注入ポンプ を用いて２０分間に渡り注入した。

■群と■群では、エセリシア・コリ　（Ｅ、ｃｏ旦）の注入（１×１０Ｉ０エセ リシア・コリ　（Ｅ、ｃｏｌｉ）　／ｋｇ）を、巨丸剤の抗体注入開始後５分に 始め、バーバード注入ポンプを用いて３０分間、定流速で続けた。エセリシア・ コリ　（Ｅ、ｃｏｌｉ）の注入終了を０時間と表し、プロトコールを４時間実施 した。

４時間のプロトコールで生き残った動物を、４．２時間目に殺した。

動脈血のサンプルを毎時間、嫌気的に集め、ＰＯ２，ＰＣＯ□およびｐＨを、　 Ｃｏｒｎｉｎｇ血液ガスアナライザー（Ｃｏｒｎｉｎｇ、　Ｍｏｄｅ１１７８、 　Ｍｅｄｆｉｅｌｄ、　ＭＡ）を用いて測定した。肺胞対動脈の酵素差（ＡａＤ Ｏ□）を計算した（呼吸交換率を０．８とする）。血液の白血球の計算は、０か ら１時間までは０．２５時間ごとに、その後は１時ごとに行った。差次的な計算 はりｒｉｇｈｔ染色塗抹で２回繰り返して行った。末梢循環好中球数は、絶対的 な白血球細胞に沈降した好中球のパーセントと集まった好中球のパーセントとの 合計を掛けて得た。熱量希釈心拍出量の測定は。

Ｏから１時間までは０．２５時間ごとに、その後は１時間ごとに行った。０℃に まで冷やした通常の生理食塩水３艷を、　Ｓｗａｎ−Ｇａｎｚカテーテルの近位 置に注入し、最後の呼気で始めた３回の連続的な心拍出量測定の平均値を計算し た。

血車■凪回歎仕夏 ２．５時間目に、２艷の血液サンプルを、大腿部の動脈管より抜いた。サンプル は、１群の２匹の動物より、■群の３匹の動物より、そしてｍ群の３匹の動物よ り、得た。バイアルは、無菌的なヘパリンを含み、即座に処理して血中のＣＦＬ Ｉ数を決定した。一定量を無菌水で溶菌させ２口径を測定した白金耳を用いて、 　ＭａｃＣｏｎＫｅｙ　、血液、およびトリビコース　ソイ　アガープレートに 植菌した。プレートを３７℃で一晩インキユベートし、翌日増殖を読んだ。陽性 の培養液をダラム染色し、溶血素について評価し、そして他で述べられている（ ０’［（ａｎｌｅｙ、　ｅｔ　ａｌ＋　（１９８５）＋　”　Ｍｏ１ｅｃｕｌａ ｒ　ｂａｓｉｓ　ｏｆ　Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ　ｃｏｌｏｎｉｚａｔ ｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｕｐｐｅｒ　ｔｒａｃｔ　ｉｎ　Ｂａ１ｂ／Ｃｍ１ｃｅ ″Ｊ。

Ｃｌ１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、、　ｉｎ　ｐｒｅｓｓ）ように抗−Ｊ９６０抗原血 清を用いてスライドでの凝集を評価した。正常のウサギの抗血清を。

スライドでの凝集検定のネガティブな対照として用いた。

里量斑足分捉 ４時間の実験プロトコール終了時（あるいは死滅時）に。

１０．０００単位のヘパリンナトリウムを中心静脈管に注入した。

５分後、　２５０ｍｅｑの塩化カリウムを静脈注射で注入し、気管内の管を締め た。死滅時、正中胸骨切開を実施した。肺門を締めて、肺を削り取った。重量測 定分析を、　Ｍｉｈｍ、　ｅｔ　ａｌ、　（１９８２）。

”　Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ　ｌｕｎｇ　 ｗａｔｅｒ　ｉｎ　ｄｏｇｓ　ｕｓｉｎｇｔｈｅ　ｔｈｅｒｍａｌ−ｇｒｅｅｎ 　ｄｙｅ　ｄｉｌｕｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ、”　Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇ ｙ５７、１１６−１２２により詳細に述べられている方法を用いて行った。血管 外の肺水（ＥＶＬＷ）を計算し、　ｋｇ体重あたりの−として記録した。

秋肚望 比較は、非パラメーター性のウィルコクソン符号付ランク検定（Ｗｉｌｃｏｘｏ ｎ−ｓｉｇｎｅｄ　ｒａｎｋ　ｔｅｓｔ）　（Ｓｎｅｄｅｃｏｒ、　Ｇ、Ｗ、　 ａｎｄ　Ｗ。

Ｇ、　Ｃｏｃｈｒａｎ　（１９８０）、　’５ｔａｓｔｉｃａｌ　ｍｅｔｈｏｄ ｓ、”　ｒｏｗａ　５ｔａｔｅ　Ｕｎｉ−ｖｅｒｓｉｔｙ　Ｐｒｅｓｓ、　Ａｍ ｅｓ、　ＴＯｌＳｅｖｅｎｔｈ　Ｅｄ、、　１４４４４６）を用いて。

群間で行った。ｐ＜ｏ、ｏｓを有意であるとした。表９図、あるいは本文中のす べての値は、平均値±標準偏差である。

先の研究の結果を以下に要約する。

白血球の凝集 内毒素で活性化したプラズマ（ＥＡＰ）のみ、あるいはＥＡＰ＋非特異非特異的 ウサギ１ｇ口血球の凝集の潜在的刺激物として働く。ＥＡＰを抗−Ｃ５ａ抗体と インキュベートすると、刺激物の白血球凝集潜在力は完全に破壊された。

二玉類Φ　の生−と証′−重能データ １×１０Ｉ０エセリシア・コリ　（Ｅ、ｃｏｌｉ）　／ｋｇの静脈注入は。

■群の４匹の動物のうち３匹において致死的であることがわかった。■群の動物 は、心臓の不整脈や心臓血管虚脱により。

１０５、１５０および１８０分で死んだ。１５０と１８０分で死んだ動物ではま た。気管内の管で赤らんだ肺浮腫が見られた。■群の４番目の動物は実験プロト コールで生残し、４時間目で３５ｍｍ）ＩｇのＩ’ｌＡＰを示した（表Ｉ）。対 照的に全対照動物（１群）と抗−Ｃ５ａ抗体で処理した全動物（■群）は４時間 生残し、その後段した。

エセリシア・コリ　（ｈ　匹旦）を受容した全霊長類動物では、低血圧、頻脈、 そして減少した全血管抵抗（ＳＶＲ）により示される敗血症ショックが進退した （表Ｉ）。■群の全霊長類動物は生残し、１０５分でそのＩＩＡＰの初期の有意 な回復を示した（　Ｐ＜０．０５）。平均のＰＡＰ、　ＰＣＣＦ２あるいは心拍 出量においては、Ｉ、ＩＩおよび■群間で有意差はなかった。■群の敗血症の霊 長類動物は、１群の９±８ｍ！／ｋｇ／ｈｒ、あるいは■群の２３±ｌｌ−／ｋ ｇ／ｈｒに比べ、有意に大きな正味の流体取込み５２±１７　ｍｅ　／　ｋｇ　 ／　ｈｒを示した。１群と■群間では、正味の流体取込みに有意差はなかった。

Ｈ■批１ 肺の損傷は、　ＡａＤＯ□やＥＶＬ−を分析することにより、評価した。ベース ラインのＡａＤＯ２の結果は、Ｉ、ＩＩおよび■群間で有意差はなかった。死滅 直前に動脈血のガスから計算したＡａＤＯ２の結果は、対照（１群）の霊長類動 物の２３±６．５ｍｍ）Ｉｇ　、あるいは抗−Ｃ５ａ抗体（ｍ群）処理した霊長 類動物の２０±ｌ（ｂｍｌ（ｇに比べて、■群の動物では有意に増加し、６５± ２９ｆｌＨｇ　（Ｐ＜０．０５）だった。

ＥＶＬＷの結果は、対照の１．７±０．３ｍｆ／ｋｇあるいは抗−Ｃ５ａ抗体処 理した霊長類動物の２．６±０．４ｍＥ／ｋｇに比べて２敗血症の霊長類動物（ ■群）では有意に増加した肺水５．０±１．１ｍＡ　／　ｋｇ　（Ｐ　＜　０． ０５）を示した。■と■群間ではＥＶＬＷ４こ有意差はなかった。

末梢ＡＩＩＵＬ礼盛 末梢の好中球の数は、１群と比べると、■およびｍ群の動物では有意（Ｐ＜０． ０５）かつ維持された好中球減少を示した（表■）。■およびｍ群の動物間では 、循環している末梢好中球の数に差はなかった。

、証液沖！弓側汀玖 ２．５時間目に得た血液中の細菌増殖は、１群のサルより得たサンプルとインキ ュベートしたどのプレートでも検出されなかった。対照的に、　１．０　４．５ 　Ｘ　１０’　ＣＦＵ／　ｍｌの血液が■およびｍ群の動物で検出された。全培 養液は、プレート上では均一なコロニー形態を有するグラム陰性生物を、血液寒 天上では均一かつ溶血性コロニーを、そしてＭａｃＣｏｎｋｅｙ寒天では均一な 陽性の乳糖発酵性コロニーを示した。さらに、コロニーは抗−９６０抗血清だけ により凝集した。これらのデータから、エセリシア・コリ　（Ｐエ　ｃｏｌｉ） 　Ｊ９６を静脈注射したすべてのサルがこの生物による純粋な画面症であったこ とは明らかである。

（以下余白）

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. １．成人呼吸困難症（ＡＲＤＳ）の処置を必要とする患者におけるその処置法で あって，該患者に補体成分Ｃ５ａまたはそのｄｅｓ　Ａｒｇ誘導体に対する抗体 をＡＲＤＳを処置するに有効量投与することを含む方法。
2. ２．前記抗体投与量がＡＲＤＳを減弱化する請求の範囲第１項に記載の方法。
3. ３．前記抗体投与量がＡＲＤＳの徴候を軽減する請求の範囲第１項に記載の方法 。
4. ４．前記抗体がポリクローナル抗体である請求の範囲第１項に記載の方法。
5. ５．前記抗体がモノクローナル抗体である請求の範囲第１項に記載の方法。
6. ６．前記抗体が抗−ヒトＣ５ａまたは抗−ヒトＣ５ａ　ｄｅｓ　Ａｒｇである請 求の範囲第１項に記載の方法。
7. ７．前記抗体投与量が１回につき，１から１００ｍｇ／ｋｇ患者体重である請求 の範囲第１項に記載の方法。
8. ８．敗血症の処置を必要とする患者におけるその処置法であって，該患者に補体 成分Ｃ５ａまたはそのｄｅｓＡｒｇ誘導体に対する抗体を敗血症を処置するに有 効量投与することを含む方法。
9. ９．前記抗体がモノクローナル抗体である請求の範囲第８項に記載の方法。
10. １０．前記抗体投与量が１回につき，１から１００ｍｇ／ｋｇ患者体重である請 求の範囲第８項に記載の方法。