JPS62501973A - インフルエンザのワクチンに関する改良 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の名称 インフルエンザのワクチンに関する改良技術分野 本発明は、インフルエンザのワクチンに関り、、４？にインフルエンザ・ウィル スによる感染からの保護を与えることのできる抗原物質及びそのような抗原物質 の製造法と使用法に関する。

背景の技術 現存するインフルエンザのワクチンは普通２つの範ちゅう、即ち不活性化された 全ウィルス・ワクチン或いはＨＡ／ＮＡワクチンとして知られるサブユニット・ ワクチンの１つに分類される。ＨＡ／ＮＡサブユニット・ワクチンは全ウィルス の洗剤による分裂、続くノイラミニダーゼ（ＮＡ）画分の、宿主に導入した時に 宿主を悪性ウィルスの感染から保護する抗体の産生を誘発する画分であると思わ れる如き赤血球凝集素の一部と一緒の、回収によって得ることができる。全ウィ ルス・ワクチンとＨＡ／ＮＡサブユニット・ワクチンの双方は、それらが誘導す る保護抗体がＨＡ及びＮＡ分子の変異性の領域に向うという同一の欠点をもって いる。これはそのようなワクチンが、不活性化されたウィルス又はサブユニット ・ウィルスを得た同一種の悪性ウィルスによる続く感染に対して有効である傾向 にあるが、異なる種の悪性ウィルスに対しては保護しないということを意味する 。インフルエンザ・ウィルスの種は年から年へ、しばしばかなシ変化し、これは 現存する種特異的なワクチンが限られた有用性しか有さないことを意味している 。

最近ウィルス感染に対する免疫応答及びそれらの保護における細胞毒性Ｔ（Ｔｃ 　）及びヘルパー（ｈｅｌｐｅｒ）Ｔ（Ｔｈ）細胞の役割に興味が集ｔツーｃ’ イル。抗インフルエンザＴｃ細胞はある種のいずれかのインフルエンザ・ウィル スで感染された細胞を崩壊することが発見さね、またＴｈ細胞は同様にそのよう な感染された細胞に応答して増殖し且つリンフオキシ（ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ） を産成することができる。斯くしてＴ細胞の挙動は殆んど常にインフルエンザ種 に特異的である抗体のそれと対比することができる。現存の全ウィルスワクチン 及びＨＡ／ＮＡサブユニット・ウィルスワクチンは宿主中でインフルエンザ種に 特異的な抗体の産生を刺激するが、些細な量のＡ型つィルス交叉反応性Ｔｈ及び Ｔｃ細胞しか誘導しない。

今回、異なる種類のインフルエンザウィルス・サブユニット調製物が宿主中にお いてＴｃ及びＴｈ細胞をかなシ誘導することが発見された。

これは１つの種のインフルエンザウィルスから、ある特別な種類内の異なる種の インフルエンザウィルスによる後になっての感染から保護するワクチンを製造し うる可能性の道を開いた。

本発明は実質的に全感染性ウィルス、スクロース及び遊離の洗剤を含まないイン フルエンザウィルス核蛋白を含んでなるＴ細胞誘導物質を提供する。

この核蛋白（Ｎｐ）は、宿主中でＴ細胞の産生を誘導する有効なワクチン物質と して使用しうるために、ポリアクリルアミドゲルのクーマシー・ブルー（Ｃｏｏ ｍａｓｓｉｅ　Ｂｌｕｅ）染色で示されるような上述の３つの生成物の各、好ま しくは更ＩＣマトリックス蛋白を実質的に含有していてはならない。しかしなが らＮＰ動物質依然ウィルス起源の赤血球凝集素（ＨＡ）を含有していてもよい。

但しそのＨＡ量は３重量％以下であろう。

予備的な指摘は、本発明のＮＰ動物質ウィルスの糖蛋白によって過度に汚れてい るべきでなく、また以下に更に詳細に説明するようにＮＰ動物質全ウィルスに由 来するならば全ウィルスをウィルスの分裂前に適当な酵素で処理して分離される ＮＰ物質中のＨＡの比較的低量とＮＡの無視しうる量とを保証できることを示し ている。これはＮＰを全ウィルスから他の手段によって製造する可能性を排除す るものではない。

本発明の製造法において、ＮＰとＨＡは約５：１〜１００：１の重量比での存在 が有効であるが、Ｔ細胞の誘導に影響するように見える比はこれらの限界まで変 えうろことが発見された。

本発明のＮＰ動物質下記の方法によシ全ウィルスから簡便に得ることができるが 、ＮＰ動物質合成的Ｋ又は生合成的に製造することも可能である。ここに合成的 にとは適当なポリペプチドの化学合成を意味しそして生合成的とは適当な表現系 例えば微生物、イースト菌又は哺乳動物の細胞中にクローンを発生させる所望の ポリペプチドを符号化する遺伝子の表現を意味する。所望のポリペプチドは化学 合成で或いは遺伝子の表現により作られるかどうかに関係なく、インフルエンザ ウィルスから得られるＮＰ画分の構造に類似の構造のポリペプチド或いはアミノ 酸のシーケンスの変わっている部位を含むが天然物のイミュノジエン同等物であ る画分を意味する。

本発明の関係する及びＮＰサブユニットの起源であるインフルエンザウィルスは 普通人間のインフルエンザＡ型ウィルスであるが、本発明の本質はいずれの人間 のインフルエンザウィルス種Ａ、Ｂ又はＣ型或いは動物例えば馬又は家きん例え ばひよこに特異的なものを含むウィルス種に適用することができる。

予備的実験は、下記の実施例に記述する方法によシ全Ａ型ウィルスから得たＮＰ 動物質４９８個のアミノ酸単位を含むことを示す。

本発明の更なる特徴によれば、哺乳動物におけるＴ細胞応答を合む方法及び哺乳 動物をインフルエンザウィルスの感染から保護する方法、即ち本発明に従うＮＰ 動物質はそれを含む組成物の、哺乳動物への非経口投与を含んでなる方法が提供 される。本発明による非経口投与は皮下、腹腔内又は筋肉内に行なうことができ るが、特別な用途では他の非経口投与法も使用しうる。

本発明のＮＰ動物質、例えば無菌形で、例えばワクチンを臨床的に用いることが 意図されている場合には発熱質を含まない非経口的に許容しうる水性担体例えば 生理学的食塩水中の処方物に対する凍結乾燥物質の形で提供することによシ、ワ クチン産生のための生薬として使用することができる。ある条件では、ワクチン 補薬の混入が有利である。

上述のように本発明のＮＰ動物質宿主においてＴｃ及びＴｈ細胞応答を誘導する ことが発見された。斯くしてそのようなＮＰ動物質混入したワクチンは、ＮＰを 合成的に又は生合成的に製造する場合ＮＰに対する出発物質として又はＮＰに対 するモデルとして使用した種と異なる棟内のインフルエンザウィルスによる感染 から宿主を保護することの用途が発見された。

実際的観点では、本発明のＮＰ動物質、公知の方法により全悪性ウィルスの分裂 によって製造することが簡便である。インフルエンザウィルスの洗剤での分裂は 多年にわたって公知であり、存在するＨＡ／ＮＡサブユニット・ワクチンの産生 に対する全ウィルスの分裂に通常使用される方法のいずれかが本発明のＮＰ動物 質製造に適当である。この目的に広く許容されるようになった１つの洗剤はアン モニウムデオキシコレートである。このアンモニウムデオキシコレートを用いる 場合には、ウィルス粒子を緩衝溶液例えば塩化アンそニウム及び燐酸水素アンモ ニウムの溶液中に懸濁させ、そして洗剤の水溶液を導入することによってウィル スの分裂をもたらすことができる。次いでこの混合物を１５〜２５℃で数時間例 えば３〜２４時間放置させる。ウィルスの分裂の結果として、マトリックス蛋白 が沈殿する。これは低速遠心分離又は不溶性蛋白の他の分離法によって容易に分 離することができる。

非酵素的に処理したウィルスからマトリックスを分離した後に回収される上澄液 は核蛋白、ノイラミニダーゼ及び赤血球凝集素を含有し、これらの物質は異なる 分子の大きさの物質を分離するのに生化学で使用される常法のいずれかによって 互いに分離することができる。

減少した量のＨＡ及びＮＡを含むＮＰ画分を製造したい場合には、完全なウィル スを分裂前に酵素で処理するとよく、これには酵素プロメライン（ｂｒｏｍｅｌ ａｉｎ）　が特に有効であることがわかった。

記述される方法によシ酵素で処理したウィルスから得られるＮＰ動物質、感染性 ウィルスはど一般的に有効でないけれど、試験管内でねずみの記憶Ｔ細胞を再刺 激し、Ａ型インフルエンザウィルスに交叉反応するＴ細胞を与えうろことが発見 された。このＭ蛋白画分はＴｃ細胞のそのような刺激を与えない。ＮＰ動物質腹 腔内、筋肉内又は皮下に注射したマウスは抗インフルエンザＡｍ交叉反応性Ｔ細 胞に対して効果的に誘導（ｐｒｉｍｅ）されることが発見された。Ｔｃ細胞の誘 導はＭ蛋白画分で或いは適当な対照物で観察されなかった。

添付する図面において、 第４図は酵素で処理したＡ／Ｘ３１型インフルエンザウィルスのＮＰ画分のゲル 電気泳動図を示す。

第２図は本発明のＮＰ画分による試験管内でのＴｃ記憶の刺激の程度を示す。

第３図はマウスに腹腔内投与した本発明のＮＰ画分によって誘導された生体内Ｔ ｃ応答を示す。

第４図は本発明のＮＰ画分の筋肉内（ｉ、ｍ、）及び皮下（ｉ、ｓ、）投与によ る生体内Ｔｃ誘導を示す。

第１表は本発明のＮＰ画分を用いる生体内及び試験管内の双方でのＴｈ細胞の誘 導を表わす。。

第２表は致命的なインフルエンザウィルスの感染を撲滅するために本発明のＮＰ 画分を注射することによって供薬されたマウスの能力を検討した一連の実験を表 わす。

実施例１ Ａ／Ｘ３１型インフルエンザウィルスをプロメラインで処理して表面の糖蛋白の 大部分を放出させた。１ｍＭのＥＤＴＡ及び５０ｍＭの２−メルカプトエタノー ルを含有する１０ｍＭのトリス緩衝液（ｐＨ８）中において、２＃＋９／−のウ ィルスを１η／ｄのプロメラインで１６時間３５℃下に処理したウィルスの核を 遠心分離によって回収した。酵素処理過程をこの段階で繰返し或いはウィルス核 を＋４℃で貯蔵した。普通この工程によシウイルスの赤血球凝集活性の〉９５％ が減ぜられた。

核１％Ｗ／ＶＮＨ，ＯＨ及びＯ，ＯＩＭ（ＮＨ，）、ＨＰＯ，中１ｃ約５＃／ゴ まで再懸濁させ、この懸濁した核に５％Ｗ／Ｖ水性アンモニウムデオキシコレー トのおる量を２０℃で攪拌しながら添加ＬＡ！終のアンモニウムデオキシコレー トの濃度を０．２％Ｗ／Ｖとした。２０℃で５時間の後、試料を１０．０００５ ’で３０分間遠心分離Ｋかけ、これＫよシ凝集したマトリックス蛋白をペレット として沈降させた。

３回の分離調製物からの上澄液をＩＺ５％ゲルの５ＤＳ−ポリアクリルアミド・ ゲル電気泳動法によって分析した。これはレムリイ（Ｌａｅ−ｍ１１ｉ）の緩衝 系〔ネーチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、２２７．６８０〜６８５’　（１９７０）） を用い、非還元性条件下に行ない、クーマシー・ブルー（Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ　 Ｂｌｕｅ）で染色した。結果を添付する図面の第１図に示す。ここに４つの列は 次の通うである：（ａ）　全Ａ／Ｘ３１型ウィルス （′ｂ）〜（ｄ）Ａ／Ｘ３１型ウィルスに由来する本発明のアンモニウムデオキ シコレ−）（Ａｍ、ＤＯＣ）で処理し九ＮＰの３回の調製物。

インフルエンザウィルスは、その分子量基準に対する相対的易動性を比較するこ とによって及びイミュノブロツテイング（ｉｍｍｕｎｏｂｌｏ−ｔｔｉｎｇ）に よって同定した。

透明な上澄液を、０．０１Ｍ（Ｎｕ、）、１（ｐｏ、を含む２％Ｗ／Ｖ水性ＮＨ ４Ｃｌに対して４℃で２日間透析して洗剤を除去し、次いで燐酸塩で緩衝した食 塩水に対して夜通し透析し少量ずつ一７０℃で凍結させた。

これは以下において及び次の実施例においてＮＰとして言及される。

１０．０００Ｘｆで沈降するマトリックス（Ｍ）蛋白を１％Ｗ／Ｖ水性サーコシ す（Ｓａｒｋｏｓｙｌ）ＮＰ−９７に溶解しそしてｉｏｏ、ｏｏｏｘ？で１時間 遠心分離にかけ、上澄液を集め、上述のように透析して洗剤を除去した。

ＮＰが感染性ウィルスを含有してないことを保証するために１一部分（１μｉ） を３つの１１日口のＫわとシの受精卵に注射し九これらを３３℃で３日間保温し そして尿膜液１００μｔを新しい１１日口の卵中に更ＶＣ３日間通過させ九調節 された実験において、いずれの通過物からもＨＡ活性物は回収されなかつ九これ は上記のＮＰ画分が感染性のウィルス粒子を含んでいなかったことを示す。

本実施例及び続〈実施例で用いるインフルエンザウィルスのＡ／Ｘ３１型、Ａ／ ＵＳＳＲ／９０／７７型及びＢ／ホンコン／８／７３　型種は世界保健機構、世 界インフルエンザセンター、国立医学研究所（ＴｈｅＷｏｒｌｄ　Ｈｅａｌｔｈ 　Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ、Ｗｏｒｌｄ　ＩｎｆｌｕｅｎｚａＣｅｎｔｅｒ、 Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ　ｆｏｒ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｒｅ５ｅ− ａｒｃｈ、Ｔｈｅ　Ｒｉｄｇｅｗａｙ、Ｍｉｌｌ　Ｈｉｌｌ　、Ｌｏｎｄｏｎ　 ＭＷ　７１ＡＡＸＥｎｇｌａｎｄ）を含めて世界のウィルス保管所から広く入手 しうる。

実施例２ ＮＰ（第１ｂ、ｄ図）を１〜１０μ２／−で使用した。これはインフルエンザＡ 型ウィルスの交叉反応性Ｔｃ細胞を生体内で発生させることができた。Ａ／Ｘ３ １型ウイに７．を（ａ）１　／Ｊ　ｐ／＊ＮＰ、　（ｂ）ｔ　ｏ　ｐ　ｙ　／ａ ｔＮＰ又は（ｃ）Ａ／Ｘ３１型ウィルスで感染された細胞と共に鼻腔内的に与え たマウスからの膵臓細胞を５日間培養することＫよってＴｃ細胞を発生させた（ 第２図参照）。Ｐ８１５的状赤血球（ｔａｒｇｅｔ　ｃｅｌｌ）にウィルス〔同 類Ａ／Ｘ３１型（Ｈ３Ｎ２　）、異類Ａ／ＵＳＳＲ／９０／７７ｆｉ（ＨＩＮＩ 　）又はＢ／ホンコン／８／７３型ウィルスのいずれか〕を感染させ、／Ｃｒで １時間標識させ、ＲＰＭＩ／ｌＱ中で３時間培養し、再び洗浄しこれらを３時間 の細胞毒性分析における標的として役立たせた。崩壊（ｌｙｓｉｓ）％を先に記 述されているように計算した〔ツベーリンク（Ｚｗｅｅｒｉｎｋ）　ら、ニール ・ジエイ・イミュノルで標識した標的のバックグランドの放出は１０％以下であ った。

結果を第２図に示す。ここにに／Ｔ＝　２　Ｘ　１０’個の標的／井戸における キラー（Ｋｉｌｌｅｒ）と標的細胞の比。○−Ａ／Ｘ３１型で感染されたＰ８１ ５、Δ−Ａ／ＵＳＳＲ型で感染されたもの、ローＢ／ホンコン型で感染されたも の。

この実験において、ＮＰで刺激されたＴｃ細胞は、感染性ウィルスび異類のＡ型 ウィルスの双方で感染された標的細胞を崩壊した。Ｂ型ウィルスで感染された標 的の意味あるほどの崩壊はなかった。

実施例３ ＮＰが宿主の生体内においてＡ型ウィルスの交叉反応性抗インフルエンザＴｃ細 胞に対して誘導しうるかどうかを決定するために、特別な無菌状態で生れた生後 ３ケ月のパルプ（Ｂａｌｂ）／ｃ種のマウスを、燐酸塩緩衝の食塩水（ＰＨ７， ２）（ＰＢＳ／Ａ）　に懸濁させたＮＰ５Ｑμりの腹腔的注射によシ免疫化させ た。同様に１マウスにＰＢＳ／Ａのみ或いは同一のアンモニウムデオキシコレー ト調製物からのＭ蛋白画分５０μりを注射した。３週間後ＫＮＰ、Ｍ又は対照の 免疫化したマウスからの膵臓細胞を試験管内において、Ａ／Ｘ３１型ウィルスで 感染させた２×１０′個の先天性の膵臓細胞／１ｎｔの添加によってＲＰＭＩ／ １０中１×１０６個の細胞／ｄで再刺激した（ツベーリンクら、上記文献）。５ 日後にＴ細胞の中介する細胞毒性を上述の如く試験した。結果を第３図に示す（ 標的は次の通シである二〇−Ａ／Ｘ３１型で感染され九Ｐ８１５、Δ−Ａ／ＵＳ ＳＲで感染されたもの、及びローＢ／ホンコンで感染されたもの。分析は第２図 に対するもののように行なった）。

ＮＰ（第３図）を注射したマウスは明らかＫＡ型ウつルス交叉反応性ＴＣＫ対し て誘導され、一方Ｍ蛋白（第３ｂ図）又はＰＢＳ単独（第３ａ図）の供薬された マウスはそのような誘導を示さなかった。

実施例４ インフルエンザＡ型ウィルスのＮＰをワクチン接種後の試験管内における交叉反 応性Ｔｃ応答。Ｔｃ細胞を、（ａ）１０μｔＮＰを筋肉内に、０３）１ケ月間隔 で１０１１ｔＮＰを２回筋肉内に、（Ｃ）１０μｔＮＰを皮下に注射した或いは （ｄ）Ａ／Ｘ３１型ウィルスで鼻腔内を処置したパル１７０種のマウスから発生 させた。少くとも１ケ月後に、細胞毒性の試験に先立って膵臓細胞をＡ／Ｘ３１ 型の感染された先天性牌牌細胞と共に５日間共培養した。標的はＡ／Ｘ３１型の 感染したＰ８１５（Ｈ−２ｄ）細胞したＰ８１５（ロ）であった。Ｋ／Ｔ＝　２ 　Ｘ　１０’個の標的／井戸におけるキラ一対標的細胞の比。崩壊％は前述の如 く計算した。　Ｃｒのバックグランド放出は１０％より小さかった。

゛　第４図が示すように、マウスはＮＰのｉ、ｍ、（第４ａ図）又はＳ、　ｅ。

（第４ｂ図）投与によってＡ型ウィルスの交叉反応性ＴｃＶＣ対し明らかに誘導 された。Ｔｃの誘導の程度は鼻腔内感染後はど高くなかった。

実施例５ マウスをＡ型つィルス交叉反応性Ｔｈ細胞に対して誘導するためにＮＰを皮下投 与しも方法及び結果を第１表に示す。

第１表 精製ＮＰによるインフルエンザＡ型ウィルス交叉反応性Ｔ−ヘルパー細胞の誘導 −Ａ／ＪＡＰ注射　３０７　１．３ −　１μり／＊ＮＰ　ｔ９４　（ｔ Ａ／Ｘ３１１．Ｎ、　２３９ ｐ　Ａ／ＪＡＰ注射　５２，４１３　２１９ｐ　ｌμｔ／ｍｔＮＰ　１９，１８ ４　８６２０μｙＮＰ （Ｘ３１から）Ｓ、Ｃ，２ｘ　３１２ ｔｒ　Ａ／　Ｊ　Ａ　Ｐ注射　５３，２４２　１７０１　１μｔ／ｎｔＮＰ　２ ６，８９９　８６生体内で誘導する供与体は、試験管内での抗原による刺激時に インターｌＪユーキｙ（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｔｎ）　−２（Ｉ　Ｌ−２）を４８ 時間以内に放出するＴｈ記憶絽胞を発現し九ＩＬ−２の産生をＣＴＬＬ細胞系統 を用いて評価した。このＩＩ、−２の放出はＴ−ヘルパー細胞のマーカーＬ３Ｔ ４に対する抗体を用いることによって禁止される。Ａ／Ｘａｌ型ウィルスは１９ ３４ＮＰ遺伝子を有し一方Ａ／ＪＡＰ型は１９５７年に分離された変化したＮＰ 遺伝子を有する。

これらの実験から本発明によるＮＰ物質はＡ型つィルス交叉反応性Ｔｃ及びＴｈ 細胞の双方に対してマウスを効果的に誘導Ｌ／％また試験管内において交叉反応 性記憶Ｔｃ及びＴｈ細胞も再刺激するということが結論される。更ＫＮＰで誘導 したマウスは致命的なインフルエンザウィルスの感染から保護されるということ も示される。得られた方法及び結果を第２表に示す。この場合、本発明者は感染 からの回復がＴｃ細胞の中介であるという視点に立つものである。

第２表 実験番号　マウス数／群　生存数　投薬量　投与法（２０日後）　（μ２） ４　４　３　２０　ｓ、ｃ。

５　４　２　２０　ｓ、ｃ。

６　４　３　２０　ｓ、ｃ。

７　５　４　２０　ｓ、ｃ。

８　５　４　２０　ｓ、ｃ。

９　５　４　２０　ｓ、　ｃ。

１０　６　５　２０　ｓ、ｃ・ 合計　４５　３４ ＮＰワクチン接種後のインフルエンザＡ型ウィルスの致命的投与からの回復。

バルブ７０種マウスに、ＮＰ２×１０μ？投薬量を４週間間隔で皮下注射し、或 いは１×５０μ２投薬量を腹腔内投与しｆ？−１ケ月後マウスにＡ／ＰＲ／８／ ３４型ウィルス０．ＩＨＡＵを鼻腔内に投与した。各実験においてこの投与量は 血液等張のＰＢＳのみを予じめ注射した同一の年令及び種のマウス群にとって致 命的であシ、感染した対照群４５匹のうち１４日で生存が２匹であシ、２０日で すべてが死亡した。

ワクチン接種の目的に対して、究極的には体液及び細胞の双方の免疫応答を刺激 するのに効果的な調製物が選択されよう。ＮＰは抗体の産生を刺激しうろことが 受け入れられているけれど、そのような抗体の保護における役割は明白でない。

一方ＨＡに対する抗体は同一の亜種だけとはいえ遊離のウィルス粒子を中和する ことができる。斯くして抗ＨＡ抗体に対する誘導は、あどけない宿主例えば若い 子供において有利であシ、本発明者はそれがＴｃ応答に寄与しようがしまいがＨ Ａのワクチン調製物への包含を好むであろう。

ａｂｃｄ Ｆ／６．２゜ 国際調査報告 ｌ、ｌｌ＃ｒｈａｌｌｅ、ｌｌ＾ａｅｌ、ｃｓｂｅ＊Ｎ＋＋、ＰＣＴ／ＧＢ　８ ６１０００４４ＡＮＮＥＸ　Ｔｏ　ＴＦ、Ｅ　ＩＮＴＥＲＮＡＴＩＯＮＡＬ　Ｓ ＥＡ、ＲＣＨｌ三ＰＯＲＴ　ＯＮ！Ｎ：三ＲＮＡＴｒＯＮＡｒ、　Ａ？ＰＩＪＣ ＡＴＩＯＮ　Ｎｏ、　？ＣＴ７ＧＢ　８６１０００４４　（ＳＡ　１１９Ｂ９）

Claims (22)

【特許請求の範囲】
1. １．全感染性ウイルス、スクロース及び遊離の洗剤を実質的に含まないインフル エンザウイルスの核蛋白を含んでなるＴ細胞を誘導する物質。
2. ２．ノイラミニダーゼ及びマトリツクス蛋白を実質的に含まない請求の範囲第１ 項記載の物質。
3. ３．赤血球凝集素を高々３重量％で含有する請求の範囲第１又は２項記載の物質 。
4. ４．洗剤で分裂させたインフルエンザウイルスから分離される上記請求の範囲の いずれか１つによる物質。
5. ５．所望のポリペプチドシーケンスを符号化し且つ表現系にクローンを発生させ る遺伝子の表現によつて得られる上記請求の範囲のいずれか１つによる物質。
6. ６．核蛋白がＡ型ウイルスの核蛋白である上記請求の範囲のいずれか１つによる 物質。
7. ７．核蛋白が４９８のアミノ酸単位を含んでなる請求の範囲第６項記載の物質。
8. ８．無菌のインフルエンザウイルスの核蛋白を含んでなる非経口投与に適当な形 のＴ細胞を誘導する組成物。
9. ９．水性の発熱物質を含まない請求の範囲第８項記載の組成物。
10. １０．全インフルエンザウイルスを表面活性剤での処理によつて分裂させて核蛋 白を他のウイルス蛋白と共に含んでなる分裂生成物を与え、そして核蛋白をＴ細 胞に対する刺激系で分離することを含んでなるインフルエンザウイルスからＴ細 胞誘導核蛋白ウイルスを製造する方法。
11. １１．表面活性剤がカチオン性である請求の範囲第１０項記載の方法。
12. １２．表面活性剤がアンモニウムデオキシコレートである請求の範囲第１１項記 載の方法。
13. １３．分裂させたウイルス懸濁液を遠心分離にかけ、そして核蛋白を含有する上 澄液を、マトリツクス蛋白を含むベレツトから分離する請求の範囲第１０〜１２ 項記載のいずれか１つによる方法。
14. １４．全ウイルスの分裂に先立つて、全ウイルスをプロテアーゼで処理し、そし てウイルスの核をプロテアーゼからの分離後に表面活性剤での分裂に供し、これ によつてノイラミニダーゼを実質的に含まない核蛋白を分離する請求の範囲第１ ０〜１３項記載のいずれか１つによる方法。
15. １５．プロテアーゼがブロメラインである請求の範囲第１４項記載の方法。
16. １６．請求の範囲第１〜７項記載のいずれか１つの無菌物質を含んでなる非経口 投与に適当な組成物。
17. １７．水性の発熱物質を含まない懸濁液又は溶液の形態にある請求の範囲第１６ 項記載の組成物。
18. １８．人間又は動物の身体の外科又は治療による処置法もしくは人間又は動物の 身体について実施される診断法において用いるための請求の範囲第１〜７項記載 のいずれか１つの物質或いは請求の範囲第８、９、１６又は１７項記載の組成物 。
19. １９．人間又は動物の身体の、外科又は治療法における処置のための薬剤の製造 法或いは人間又は動物の身体について実施される診断法において使用する請求の 範囲第１〜７項記載のいずれか１つの物質或いは請求の範囲第８、９、１６又は １７項記載の組成物。
20. ２０．請求の範囲第１〜７項記載のいずれか１つの物質或いは請求の範囲第８、 ９、１６又は１７項記載の組成物の哺乳動物への非経口投与により哺乳動物のＴ 細胞応答を誘導する方法。
21. ２１．請求の範囲第１〜７項記載のいずれか１つの物質或いは請求の範囲第８、 ９、１６又は１７項記載の組成物の哺乳動物への非経口投与により哺乳動物をイ ンフルエンザウイルスの感染から保護する方法。
22. ２２．物質を皮下、腹腔内又は筋肉内経由で投与する請求の範囲第２０又は２１ 項記載の方法。