JPS6248697A - 生理活性のｌ−ジペプチドとｌ−トリペプチド、その製造方法、およびそれらを含有した医薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 この発明は生理活性のＬ−ジペプチドとＬ−トリペプチ
ド、その製造方法、及びそれらを含有した抗菌性の医薬
に関する。

〔従来技術〕

例えばアメリカ特許第４．０１６，１４８号とフランス
特許第７９〜１６９２４号とに開示されているジペプチ
ド、トリペプチド等のポリペプチドは特に好ましい抗菌
性を備えている。これらの抗菌性ポリペプチドはＬ型で
ある。

純粋にＬ型のみの化合物の調製は困難であり、従来の化
学的方法を用いる場合にはコストが高くなる。アミノカ
ルボン酸から出発するある種のポリペプチドについては
酵素を触媒として用いることが従来から勧められており
、この酵素は例えばキモトリプシン型のものであった。

〔発明が解決しようとする問題点〕

この発明は酵素を用いてのＬ−ホスホン酸ジペプチド及
びトリペプチドを高反応速度と高収率で、従って安価に
、製造する技術を提供しようとするものである。

Ｃ問題点を解決するための手段） 本願発明者らは上記課題を解決するべく種々研究の結果
として、パパイン、プロメリン（ｂｒｏｍｅｌａｉｎ）
、及びフィチンのなかから選ばれるチオール・プロテイ
ナーゼに属する酵素を触媒として用いるならば、Ｌ−ホ
スホン酸ジペプチド及びトリペプチドをはやい反応速度
と高収率のもとに好都合に合成することができることを
見出した。

本発明によれば、α−アミノ酸又はＬ−カルボン酸ジペ
プチドとα−アミノホスホン酸との反応、あるいは、α
−アミノカルボン酸とＬ−ホスホン酸ジペプチドとの反
応、によってＬ−ホスホン酸ジペプチドないしトリペプ
チドを合成する方法であって、次の各工程、すなわち（
１）α−アミノ酸と、２分子のＬ−ないしＤＬ−アミノ
カルボン酸の縮合により生成するＬ−カルボン酸ジペプ
チド、との中から選ばれた試薬が、ＤＬ−α−アミノホ
スホン酸と、このホスホン酸１分子にα−アミノカルボ
ン酸が縮合して生じるＬ−ホスホン酸ジペプチド、との
中から選ばれた試薬、 にパパインとキモパパインの中から選ばれた酵素の存在
下に接触させると共に、上記のアミノカルボン酸ないし
Ｌ−ジペプチドの１モルに対し上記ホスホン酸基含有の
Ｌ−アミノ酸を少くとも２モル以上の割合とする工程、
及びこれにつづいて、 （２）酸性の反応媒体中で１０〜７０℃の範囲内の温度
で反応させ、生成するポリペプチドを反応系から相分離
させる工程、 からなることを特徴とする方法が従供される。

現在工業的に利用されているパパインの主たるものはキ
モパパインであり、これが上記本発明方法において選択
される酵素である。

上記の水性溶媒とは、水を含んだ液であり、反応の出発
物質を溶存させうるものの意味である。したがって該水
性溶媒は純水であってもよく、あるいは、上記酵素の触
媒活性を発現させるに要する量の水が添加された水溶性
の溶媒であってもよい。

本発明方法における出発物質としては次の（Ａ）　、　
（Ｂ）各グループごとにその中のいずれかを用いること
ができる。

（Ａ）１．Ｌ型又はＬ型とＤ型の混合体としてのアミノ
カルボン酸。

２、アミノカルボン酸２分子が結合したＬ−ジペプチド
。

（Ｂ）１．次式で表わされるα−アミノホスホン酸 Ｒ。

ここにＲ１は水素、アルキル基（特 にメチル基）、又はアリール基 （ａｒｙｌ）であり、この酸は不斉炭素原子を含んでい
る場合にＬ型又はＬ型 とＤ型の混合体である。

２、上記のα−アミノ酸ホスホン酸がα−アミノカルボ
ン酸と結合したＬ− ホスホン酸ジペプチド。

上記（Ａ）グループのアミノ酸はそのアミノ基の作用を
封鎖した状態で用いられ、（Ｂ）グループのアミノ酸は
エステル（特にエチルエステル）のかたちで用いられる
。故に、本発明では（Ａ）グループのアミノ酸の酸基と
（Ｂ）グループのアミノ酸のアミノ基とが反応してアミ
ド結合を形成するのである。

（Ｂ）グループのＬ型アミノ酸は（八）グループのＬ型
アミノ酸のモル濃度の少くとも２倍のモル濃度でなけれ
ばならないであろう。

上記反応は約り０℃〜約７０°Ｃの温度範囲で行われ、
その下限温度は該反応を工業的規模で実施したときに反
応速度が遅すぎることになる温度であり、上限温度は使
用酵素の安定性によってきまる温度である。

一般の多種類の酵素反応とは異なり、本発明の反応はＰ
１１４〜５．５の酸性媒体の中でも起こる。

酵素の使用量は可変であるが、出発物質としての（Ａ）
グループのＬ−アミノカルボン酸又はジペプチドに対し
て酵素量を１０％から１００％に増加するに伴い反応速
度と最終収率が向上してい（ことが観察された。１００
％を超えれば反応速度と収率はほとんど変化しない。

上に示したように、反応生成物（ジペプチド又はトリペ
プチド）が水性の出発溶媒から分離した別の相を形成す
る条件で上記反応を行わねばならない。このような別の
相は、反応生成物が該溶媒から固形物又は油状物（これ
は反応容器の壁面へ沈着する）のかたちで沈澱する場合
には自然に形成されるが、もともと二相系の溶媒、つま
り上記水性溶媒とこれには不溶だが反応生成物をよく溶
かす別の溶媒とからなる二相系溶媒の中で反応を行わせ
てもよい。

本発明の範囲は上記方法を実施して得られる生成物にも
及ぶものであり、この生成物は他の方法で既に従来から
合成されている化合物のこともあれば、全く新規な化合
物であることもある。

本発明の反応生成物は次の４つの群に分類できる。

ｒ類ニアミノメチルホスホン酸から誘導されるジペプチ
ド これは次の（Ｉ）弐で表わされる。

ここに、×１−サルコシル（Ｓａｒ）、グリシル（Ｇｌ
ｙ）、アラニン（＾ｌａ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ
）　、ロイシン（Ｌｅｕ）、チロシン（Ｔｙｒ）、３−
ＮＯｚ−Ｔｙｒ、　（Ｆ−Ｐｈｅ、４−ＣＬ−Ｐｈｅ、
４−ＮＯｚ−Ｐｈｅ、　４−Ｎ）Ｉｚ−Ｐｈｅ、　２．
４−ＣＩ−Ｐｈｅ、　３．４−ＣＩ−Ｐｈｅ、β−メチ
ルフェニルアラニン、α−メチルアラニン、である。

ｎ類ニアミノメチルホスホン酸から誘導されるトリペプ
チド これは次の（ＩＩ）式で表わされる。

（Ｌ）　Ｘ　、　−（Ｌ）　Ｘ　２−　ＮＨ−ＣＩｌ□
−Ｐ−０１１・・・（ＩＩ）ここに、Ｘ、　＝ＧＩｙＸ
Ａｌａ、、Ｐｈｅ、　Ｌｅｕ、、Ｔｙｒ。

（Ｒ，−Ｒ２）−Ｐｈｅ、　Ｓａｒ、（Ｒ）−Ｎｌｌ−
Ｇｌｙ。

Ｘ２＝Ｇｌｙ、＾ｌａ、　Ｐｈｅ、　Ｌｅｕ、、Ｔｙｒ
ｓ　（Ｒ＋−Ｒｚ）−Ｐｈｅ。

Ｓａｒ、（Ｒ＋−Ｒｚ）−Ｔｙｒ。

Ｒ＝アルキル基、了り−ル（ａｒｙｌ）基、アシル基；
　　Ｒ，、Ｒ，＝ＮＯ□、Ｎ１１□、ハロゲン、アルキ
ル基、アリール（ａｒｙｌ）基、である。

■類：Ｌ−（１−アミノ）−エチルホスホン酸から誘導
されるジペプチド これは次の（Ｉｎ）式で表わされる。

ＣＩ Ｈ３０ ここに、Ｘ１＝Ｓａｒｓ　Ｇｌｙ、　Ａｌａ、　Ｐｈｅ
、　Ｌｅｕ、　Ｔｙｒ。

（Ｒ１−Ｒｚ）Ｐｈｅ、（Ｒ＋−Ｒｚ）−Ｔｙｒ、であ
り、Ｒ１とＲ２は上記と同じである。

■類：Ｌ−（１〜アミノ）−エチルホスホン酸から誘導
されるトリペプチドこ れは次の（ＩＶ）式で表わされる。

ｌｈＯ ここに、Ｘ＋＝（Ｒ）−Ｎ）ｌ−Ｇｌｙ、　Ｓａｒ、　
Ｇｌｙ、　ＡｌａＳＬｅｕ。

Ｐｈｅ、　Ｔｙｒ、　（Ｒ＋−Ｒｚ）−Ｐｈｅ、　（Ｒ
＋−Ｒｚ）−ＴｙｒｓＸ２−＝Ｇｌｙ、　Ａｌａ、、Ｌ
ｅｕ、　Ｐｈｅ、　Ｔｙｒｓ　（Ｒ＋−Ｒｚ）−Ｐｈｅ
。

（Ｒ＋−Ｒ２）Ｔｙｒ、 Ｒ＝アルキル基、アリール（ａｒｙｌ）基、アシル基、 Ｒ＋、Ｒｚ　”〜０２、Ｎｌ＋□、ハロゲン、アルキル
基、了り−ル（ａｒｙｌ）基、である。

」二記の４つの類に属する下記化合物は新規な合成物質
である。即ち： （１）式で表わされる新規物質は、（注Ｂ○○○等は標
識としての略称番号である） Ｂ９５１Ｌ−（４−フルオロ）−フェニルアラニル−ア
ミノメチルホスホン酸、 Ｂ９９７、Ｌ−（３−ニトロ）−チロシル−アミノメチ
ルホスホン酸、 Ｂ９８６、Ｌ−（４−アミノ）−フェニルアラニル−ア
ミノメチルホスホン酸、 Ｂ９３２、Ｌ−（２，４ジクロロ）−フェニルアラニル
−アミノメチルホスホン酸、 Ｂ９５２、Ｌ−（３，４ジクロロ）−フェニルアラニル
−アミノメチルホスホン酸、 ８９６８、Ｌ−Ｌ（β−メチル）−フェニルアラニル−
アミノメチルホスホン酸、 Ｂ９３４、（α−メチル）−アラニル−アミノメチルホ
スホン酸、 などである。

（ｎ）式で表わされる新規物質は、 ８９８０、　グリシル−し−バリル−アミノメチルホス
ホン酸、 Ｂ９９６、Ｌ−フェニルアラニル−し−ロイシル−アミ
ノメチルホスホン酸、 Ｂ９９４、Ｌ−ロイシル−し−ロイシル−アミノメチル
ホスホン酸、 Ｂ９９５、グリシル−し−チロシル−アミノメチルホス
ホン酸、 Ｂ１００５、Ｌ−アラニル−サルコシル−アミノメチル
ホスホン酸、 などである。

（Ｉ［Ｉ）式で表される新規物質は、 Ｂ１０３３、Ｌ−（３−ニトロ）−チロシル−Ｌ−（１
−アミノ）−エチルホスホン酸、Ｂ１０６５、Ｌ−アラ
ニル−Ｌ−（１−アミノ）−エチルホスホン酸のＬ−ア
ルギニン塩、Ｂ１０６７、Ｌ−アラニル−Ｌ−（１−ア
ミノ）−エチルホスホン酸の２−アミノ−２−（ヒドロ
キシメチル）−Ｌａ−プロパンジオール塩、及び、 官能基を有した樹脂とジペプチドとを共存させることに
よって得られる生成物（塩または付加反応生成物）であ
って次の如きもの、即ち、Ｂ１１２４、Ｌ〜アラニル−
し−（１−アミノ）−エチルホスホン酸を弱塩基性のホ
リアミンフェノール樹脂と共存させて得られる生成物、
Ｂ１１２１、Ｌ−アラニル−Ｌ−（１−アミノ）−エチ
ルホスホン酸をスルホン化ポリスチレン樹脂と共存させ
て得られる生成物、Ｂ１１２３、Ｌ−アラニル−Ｌ−（
１−アミノ）−エチルホスホン酸を強塩基性のポリスチ
レン樹脂と共存させて得られる生成物、などであり、上
記各樹脂は医薬原料として許容されるものの中から選ば
れたものである。

（ＩＶ）式で表わされる新規物質は、 Ｂ９８９、Ｌ−アラニル−Ｌ−ロイシル＝Ｌ−（１−ア
ミノ）−エチルホスホン酸、Ｂ　１００４、サルコシル
−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−（１−アミノ）−エチル
ホスホン酸、Ｂ１０２２、Ｌ−ロイシル−し−フェニル
アラニル−Ｌ−（１−アミノ）−エチルホスホン酸、Ｂ
１０４７、Ｌ−ロイシル−し−ロイシル−し−（１−ア
ミノ）−エチルホスホン酸、Ｂ１１２２、サルコシルー
−りロイシル−Ｌ−（１−アミノ）−エチルホスホン酸
、Ｂ１００２、Ｌ−ロイシル−し−アラニル−Ｌ、−（
１−アミノ）−エチルホスホン酸、Ｂ１０９２、グリシ
ル−Ｌ−ロイシル−し−（ｌ−アミノ）−エチルホスホ
ン酸、 Ｂ１０９３、（Ｎ−アセチル）−グリシル−Ｌ−ロイシ
ル−し−（１−アミノ）−エチルホスホン酸、 Ｂ１０９５、（Ｎ−ベンジル）−グリシル−Ｌ−ロイシ
ル−Ｌ−（１−アミノ）−エチルホスホン酸、 ＢＩｌｏｏ、サルコシル−し−チロシル−し−（１−ア
ミノ）−エチルホスホン酸、ＢＩＩＩＱ、Ｌ−プロピル
−し−ロイシル−し−（１−アミノ）−エチルホスホン
酸、などである。

上記の合成物質は（公知、新規の如何によらず）基本的
な薬理学的性質が同じであり、これらは種々のダラム陽
性菌とダラム陰性菌に対し活性を示す抗菌剤である。

例えば上記化合物の中の８１０６７を用い、ミリリット
ル当たりの菌数が１０４〜１０Ｓ個の接種材料（つまり
、イノキュラム）に対してゲロセ（ｇｅｌｏｓｅ）　（
つまり、アルミン、ｕｌｍｉｎ）媒質の中で最低阻害濃
度（ミニマム・インヒビット・コンセントレージョン）
（Ｍ、１．Ｃ）をμｇ／ｍ　１単位で測定した結果は次
の通りであった。

イー・コリ　（Ｅ、　Ｃｏ１１）　　ＣＮＣＭ　５４．
８　　０．２５Ｎ　　　　　　　　　　　　　　ＣＮＣ
Ｍ５３．１２６　０．２５タレプシエラ・ピー（Ｋｒｅ
ｂｓｉｅｌｌａ　ｐ、）Ｌａ４３３　　　　　　１６ セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）　　　２２．５７９　　
　３２〜６４サルモネラ・イー（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ
　Ｅ、）ＣＮＣＭ　５７．２９　　　１ ニス・アウレウス（Ｓ、ａｕｒｅｕｓ）ＡＴＣＣ６３，
５８３２ 〃　　　　　　　　　　　　　ＣＮＣＭ　　５２．１４
９　３２〃　　　　　　　　　　　　　ＡＴＣＣ２９２
１３８ニス・フェカリス（Ｓ、ｆａｅｃａｌｉｓ）ＡＴ
ＣＣ１４５０８３２ 上記諸物質の毒性は極めて低いか又は非毒性であるから
、経口投与用又は非経口的投与用の医薬の成分として用
いることができ、■投与単位当りの活性成分量は１００
〜１０００ｍｇとされる。

本発明に従い製造された活性成分を含む経口又は非経口
投与用のガレヌス製剤の成分を次に例示する。

１　、２５０ｍｇ錠剤 活性成分　　　　　　　　　　２５０ｍｇコーンスター
チ　　　　　　　　４０ｍｇラクトース　　　　　　　
　　　９８ｍｇステアリン酸マグネシウム　　　８ｍｇ
タルク　　　　　　　　　　　　　４１Ｉ１ｇ２．５０
０ｍｇ錠剤 活性成分　　　　　　　　　　５００ｍｇコーンスター
チ　　　　　　　　７０ｍｇポリビニルピロリドン　　
　　　３５ｍｇラクトース　　　　　　　　　　７４ｍ
ｇステアリン酸マグネシウム　　　１４ｍｇタルク　　
　　　　　　　　　　　７ｍｇ３．５００ｍｇカプセル 活性成分　　　　　　　　　　５ＱＯｍｇラクトース　
　　　　　　　　　５０ｍｇステアリン酸マグネシウム
　　　　５ｍｇ４、薬袋（サシ上５ａｃｈｅｔ、フラン
ス語）活性成分　　　　　　　　　　　１ｍｇラクトー
ス　　　　　　　　　　　４ｍｇ５、１００ｍｇ注射用
アンプル 活性成分　　　　　　　　　　１００ｍｇ注射液化のた
めの水　　　　　　１ｍｇキュー・ニス・ビー ｌアンプル 〔作　用〕 （１）Ｌ−αアミノ　（カルボン）酸とＬ−αアミノホ
スホン酸との酵素反応ではボスボン酸残基を有したＬ−
ジペプチドを生じる。　　　。

（２）Ｌ−（α−アミノ）カルボン酸ジペプチドとＬ−
α−アミノホスホン酸との酵素反応ではホスホン酸残基
を有したＬ−）ジペプチドを生じる。

（３）Ｌ−α−アミノカルボン酸とＬ−（アミノ）ホス
ホン酸ジペプチドとの酵素反応でもポスホン酸残基を有
したＬ−）ジペプチドを生じる。

これらジペプチドとトリペプチドを本明細書中では「ポ
リペプチド」と総称する。

これらポリペプチドが分子内に有するホスホン酸残基は
抗菌性であるが人体、家畜、愛玩動物などに対し無毒で
ある。

上記（１）〜（３）の酵素反応で生じるし一ポリペプチ
ドを反応系から容易に分離するべく、水性の基本の反応
媒体（主として水）とこれには不溶でポリペプチドをよ
く溶かす有機媒体とを混合して用いているから、ポリペ
プチドを溶存させた相を水相から簡単に、例えばデカン
テーション法で相分離することができる。

（発明の効果） 上記のように本発明ではホスホン酸残基含有ポリペプチ
ドの合成反応に最適の触媒がパパイン、キモパパイン等
であることを見出し、水性溶媒（水）と有機溶媒とから
なる二相系で反応を行うから、出発物質が水性溶媒中で
酵素作用を受けて生成するところのポリペプチドは有機
溶媒相へ移行するので反応速度が向上すると共に収率も
高（なる。

そして酵素を用いることから有用なＬ型ポリペプチドの
みが生産されるのである。

さらに本発明者らは反応系に残存したＤ型過剰の出発物
質は後述の酸性法、アルカリ性法、あるいは貯蔵法で簡
単にエピマー化してＤＬ型（ラセミ体）に再生できるの
で、これを酵素反応の出発物質として再利用できること
も見出した。これによりシステム全体としての総括的収
率は極めて高いものとなった。

〔実施例１〕 Ｌ−アジニル−し−（１−アミノ）−エチルホスホン酸
の合成 この実施例については合成操作段階を詳細に例示する。

第１工程 （Ｎ−ベンジルオキシカルボニル）Ｌ−アラニル−Ｌ−
（１−アミノ）−エチルホスホン酸の合成と不斉化 効果的な攪拌装置を備えた反応容器の中へ次の試薬を順
次添加してゆく。即ち、 −Ｉ　Ｎ　　水酸化ナトリウム溶液 ２７６０ｒａｊ！　　　　（Ｎａ０１１２．７６モル）
−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル）−Ｌ−アラニン　
６１５ｇ　　（２，７６モル）−Ｄ　Ｌ　−（１−アミ
ノ）−エチルホスホン酸のエチルエステル　２０００ｇ （１１，０５モル） □Ｌ−システィンーハイドロクロライド２ｇ −ＰＨ４，５のクエン酸緩衝液　　３．３１を順次添加
する。

この透明の反応系はｐＨ６，９２であり、これを５０℃
に調整する。

この温度において、パパイン（５０ｎＫａｔ／ｎ＋ｇ）
の６００ｇを水０．８１に溶かした溶液が添加される。

ｐＨは徐々に変化し６．８４で安定する。

粉末のクエン酸１１００ｇを添加するとｐＨは４．５３
（つまり４．５と４．６のあいだ）になる。この段階で
反応系はまだ透明である。

次に四塩化炭素１９ｊ！をよく攪拌しつつ加える。。

反応の進行と反応速度の測定は１時間ごとに有機溶媒相
１μｌをオー・ディー・ニス・ハイパーシル（０，Ｄ、
Ｓ、Ｈｙｐｅｒｓｉｌ）　５　、ｃｌ　（Ｓ、Ｆ、Ｃ，
Ｃ）のカラムへ注入し、メタノール：水：Ｒ水酸化アン
モニウム＝６７：３０：３の混合溶媒のヴイ・アール（
ｖＦｌ”）１．２〜１．４ｔａ　ｌで抽出する、という
方法でエッチ・ピー・エル・シー（ＨＰＬＣ）で行なっ
た。

１５時間後（反応時間は１０〜１５ｈｒのあいだ）に合
成反応を停止させたが、この時点での反応生成物の濃度
は有機溶媒（ＣＣ１，）相で０．１４モルであった。

反応系を冷却したあと有機溶媒相と水相とをデカンテー
ション法で分離したあと前者を水洗いし、次いで硫酸ナ
トリウムに通して乾燥濃縮し、１２５０ｇの収量を得た
。

次にこの濃縮物をメチレンクロライド１４１の中に入れ
、５％塩酸（４Ｎ）、水（４７り、０．ＩＮ水酸化ナト
リウム（４Ｉり、及び水（６Ａ’）で順次洗浄してＰＨ
６，５としたあと真空乾燥した。

このようにして得られた反応生成物の量は１０２１０２
Ｏ，６４モル）、収率は９６％であり、該生成物の比旋
光は 〔α）　　＝−３０°±２″、（Ｃ＝１）であった。

第■工程 光学（活性）的に純粋なし一アラニルーし−（ｌ−アミ
ノ）−エチルホスホン酸の調製上で得られた油状物を５
倍容ないし５１の、３３％臭化水素含有の酢酸に溶かし
た。この溶液は室温で攪拌下に５ｈｒ放置したあと、イ
ソプロピルエーテル２０βの中へ注いだ。Ｌ−アラニル
−Ｌ−（ｌ−アミノン−エチルホスホン酸の臭化水素付
加物が容器壁面に晶出したあと母液相をデカンテーショ
ン法で除去し、残渣はメタノール５１に？容かした。

この透明溶液に対し、プロピレンオキサイド０．６１が
メタノール２に溶かされている試薬溶液を加えた。急速
に沈澱を生じたが、結晶化させるため０℃で２ｈｒ放置
した。生成物は濾過、メタノール洗浄のあと６０℃で真
空乾燥した。

この乾燥後の生成物重量は５０２ｇ（２，５６モル）、
即ち収率９７％であって、これは水中での比旋光が 〔α）　　　＝−２２”±２″、　（Ｃ＝１）であった
。

上記生成物は沸騰水１．３１に溶かしアニマルブランク
２ＳＡで着色したあと、室温でよく攪拌しつつこれにエ
タノール１βを加えた。

室温にまで冷却させると結晶が沈澱した。

０℃で２ｈｒ放置したあと濾過し６０℃で真空乾燥し、
た。

目的生成物３５１　ｇ　（１，７９モル）が得られ、こ
れは７０％の収率であり、その比旋光は水中で〔α）　
　＝−４５″′±２″′、（Ｃ＝１）であった。

（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル）−Ｌ−アラニンに対
する光学活性的に純粋なし−アラニル−Ｌ−（１−アミ
ノ）−エチルホスホン酸の総括的収率は６５％である。

第■工程 エピマー化処理及び処理後の（１−アミノ）−エチルホ
スホン酸エチルエステルの再循環利用 この目的のためには次のＡ法又はＢ法のいずれかを採用
すればよい。

Ａ法・・・・・・酸性法 上記第１工程の酵素反応液の水相９．５１　（これは（
１−アミノ）−エチルホスホン酸エチルエステル１５２
０ｇ　（８，１４モル）を含有している〕を塩酸で酸性
化し、最終的には塩酸濃度６Ｎとなるようにした。

次にこれを５ｈｒのあいだ還流冷却しつつ加熱処理して
冷却後、アニマルブランク２Ｓ＾の層に通して着色した
のちレジン５８６１　（商標デュオライト）のカラムへ
流しパーコレーションを行なって無機及び有機不純物を
除去した。

この酸抽出物は真空乾燥法で濃縮したのち乾燥ピリジン
添加のメタノール２．７１へ攪拌下に溶解してｐＨ４，
５とした。

生成した多数の結晶は０℃で２ｈｒ放置した。

このようにして１０２１０２Ｏ，１７モル）のＤＬ−（
ｌ−アミノ）−エチルホスホン酸が得られた。

この生成物の融点は２６０　’ｊ：より高く、水中の比
旋光は 〔α）　　＝Ｏ’、（Ｃ＝１） であった。

この化合物を常法でエステル化し蒸留によって再利用可
能な１２０７ｇ（６，６７モル）のＤＬ−（１−アミノ
）−エチルホスホン酸が得られた。

Ｂ法・・・・・・アルカリ性法 上記の（１−アミノ）−エチルホスホン酸エチルエステ
ル１５２０ｇ　（８，１４モル）を含有している酵素反
応系の水相約９．５１をアルカリ性化してｐｌ＋を７．
５に上げるぺ＜４Ｎ水酸化ナトリウム溶液２１を添加し
た。

次いでジクロロメタン８！で３回抽出し、器壁に付着の
有機物相を硫酸ナト３．°ラムで乾燥した。この段階で 収量１４２０ｇ　、収率９３％ であった。

この薄黄色の油状生成物は、過剰のＤ型異性体のエピマ
ー化を完了させるべく減圧蒸留した。

この段階での収量は約１４００　ｇ　、　０．５ｍｍ１
１ｇでの沸点は７０〜７２℃であった。

次いでトリフルオロアセチル化し、さらにカイラルカラ
ム（ｃｈｉｒａｌ　ｃｏｌｕｍｎ）（Ｌ）ＳＰ　３００
（５％、１　ｍ）　ｒｌｎｊ、＝Ｄｅｔ＝２５０”ｃ　
；等温変化１４０”Ｃ）を用いて分離することにより、
この回収エステルはＬ型異性体（ｔＲ＝４．４ｍ１ｎ）
５０％と、Ｄ型異性体（ｔＲ＝５．２ｍ１ｎ）５０％を
含むことが確認された。

総括的収率約９３％で得られるこの生成物は前出の第１
工程で再利用される。

（エピマー化は上記抽出有機溶媒相の油状生成物を２４
ｈｒ貯蔵しておくことによっても起こることが観察され
た。） 現状ではこのアルカリ性法の方が望ましいと考えられる
。

〔実施例２〕 Ｌ−フェニルアラニン−アミノメチルホスホン酸の合成 温度計とマグネティック・スタークとを備えた反応容器
としてのエルレンマイヤーフラスコの中へ次の試薬、即
ち、 ＩＮ　水酸化ナトリウム溶液 ３３ｍ　Ａ　　　　　　（０，０３３モル）（Ｎ−ベン
ジルオキシカルボニル）− ＤＬ−フェニルアラニン　ｌｏｇ （０，０３３モル） アミノメチルホスホン酸　５．５１ｇ （０，０３３モル） を投入した。

この透明な溶液にシスティンハイドロクロライド０．４
２０ｇと、９１１４．５のクエン酸緩衝液４２．５ｍｊ
２と、水６０ｏ＋　１！とを加えた。

こうして調製した基質の濃度は０．２２モル／Ｐ、ｐ旧
よ７，３〜７．６であった。

この混合物の温度を４０℃に調整し、パパイン（７０ｎ
Ｋａｔ／ｍｇ）　５　ｇを４５ｍ１の水に溶解した液を
加えた。これに粉末状のクエン酸Ｌｏｇをを加えｐＨを
５．５とした。

この反応系は少し濁りを生じていき、徐々に結晶化する
油状生成物が器壁に沈積した。反応は５０℃で８ｈｒ継
続した。

クロマトグラフで分析したところ、上記沈積物は反応の
開始時点からすでにジペプチドとなっていることが確認
された。

この反応系は冷却後、クロロホルム５０ｍ１で３回抽出
し、そして器壁に付着の有機物相は水洗いした。

反応生成物は硫酸ナトリウムで乾燥濃縮した。

こうして（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル）−Ｌ−フェ
ニルアラニル−アミノメチルホスホン酸のエチルエステ
ルは結晶化する。

このエステルの収量は６．２３ｇ（０，０１３９モル）
であり収率は８４％、融点（コフラー・ヘンチ法、ｋｏ
ｆｌａｒ　ｂｅｎｃｈ）１０２〜１０４℃、比倫光はエ
タノール中で 〔α）　　＝−９，８°±２″、（Ｃ＝１）であった。

臭化水素を３３％溶解させた酢酸の中に上記生成物を投
入し攪拌しつつ５ｈｒ経過させたのち、硫酸エーテル２
６０ｍ　ｌの中へ注いだ。Ｌ−フェニルアラニル−アミ
ノメチルホスホン酸の臭化水素付加物が器壁へ晶出した
あと、油状の相をデカンテーションし残渣をメタノール
３０ｍ　ｆｔにとかした。メタノール８ＩＩｌＮにプロ
ピレンオキサイド４ｍｌを溶解させたものを添加した。

結晶性沈澱が急速に生成するので、０℃で２ｈｒ経過し
たのち、濾過し６０℃で真空乾燥した。

光学活性的に純粋なし一フェニルアラニルーアミノメチ
ルホスホン酸３．２ｇをこうして得た。

このホスホン酸（収率８９．２％）の融点は２６５〜２
６８℃で、水中の比倫光は 〔α）　　＝　＋７４．８　’±２６、（Ｃ＝１）であ
った。

酵素反応系の水相からは過剰のアミノメチルホスホン酸
のエチルエステルが上記実施例１と同様にして回収され
、再利用される。

〔実施例３〕 （Ｌ）−ロイシル−アミノメチルホスホン酸の合成 温度計とマグネティック・スタークとを備えた５００ｍ
　ｊ２のエルレンマイヤーフラスコの中へ次の試薬、即
ち、 □　Ｉ　Ｎ　　水酸化ナトリウム溶液　２０ｍ　ｌ（０
，０２０モル） −（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル）−り一ロイシル　
５．３ｇ　　（０，０２０モル）□アミノメチルホスホ
ン酸のエチルエステル　６．２ｇ　　　　　　（０゜０
３７モル）を入れた。

この透明溶液に、システィンの塩化水素添加物２４０ｍ
　ｌを水５．７ｍＡにとかしたもの、ｐｉｔ４．５のク
エン酸緩衝液２４ｍ　ｊｌ！、及び水１００ｍ　ｌを加
えた。

その結果、ｐＨ７，５３となった。

この溶液を恒温水槽で４０℃に加温し、２１ｍ　Ａの水
にパパイン１．７１ｇ（２６ｎＫａｔ／ｍｇ）を）容か
したものを加えたところｐＨ７，２５となった。

さらにクエン酸８ｇの添加によりｐｉｔ５．６とした。

油状生成物が器壁へ急速に沈着し、ゆっ（り結晶化する
。

８ｈｒ経過後に反応系を冷却し、上記沈着物をメチレン
クロライド１２０ｍ　ｌで抽出した。水３０ｍ　ｌ、５
％塩化水素溶液３０ｍ　ｌ、水３０ｍ１．０、ＩＮ水酸
化ナトリウム溶液、水（ｐｉｔ　６．５）３Ｏｎ＋ｊ！
で順次洗浄したのち、有機物相を硫酸ナトリウムで乾燥
させた。こうしてＬ−ロイシル−アミノメチルホスホン
酸のエチルエステルが６．９ｇ得られた。このエステル
の融点（コフラー・ベンチ）は８２〜８３℃、メタノー
ル中の比倫光は〔α）　　　　＝−２５’±２°、（Ｃ
＝１）であった。

酢酸に臭化水素３３％を溶解させたｆｊ、３３ａ＋４！
の中へ上記生成物を投入し、６　ｈｒＰＡ拌をつづけた
。

硫酸エーテル２５０ｍ　（！を加え、デカンテーション
法の後の残渣をメタノール３０ｍ　ｌに溶かした。

メタノール６ｒｎｌにプロピレンオキサイド３．５ｍａ
ｌを溶かしたものを加えた。

生じた沈澱は０℃で２ｈｒのあいだ結晶化させた。次い
で濾過し、６０℃で真空乾燥した。

こうしてＬ−ロイシル−アミノメチルホスホン酸３．５
４ｇを得た。この酸の融点は２４３〜２４７℃、水中の
比旋光は ［α）　　＝＋６０．５°±２６、（Ｃ＝１）であった
。

塩素化有機溶媒を用いれば反応時間は６ｈｒ、収率はほ
ぼ８５％である。

〔実施例４〕 Ｌ−アラニルＬ−アラニル−Ｌ−（１−アミノ）−エチ
ルホスホン酸の合成 第■工程 （Ｎ−ヘンシルオキシカルボニル）−Ｌ−アラニル−し
−アラニン（酸）の合成 （ａ）　（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル）−Ｌ−アラ
ニン（酸）のエチルエステルの合成マグネテインク・ス
ター５と温度計と水冷却器ヲ備えた５０抛ｌのエルレン
マイヤーフラスコに次の試薬、即ち、 −（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル）−ＤＬ−アラニン
　２０ｇ　　（０，０８９７モル）−２Ｎ水酸化ナトリ
ウム溶液　４５ｍ１゜Ｌ−システィンの塩化水素添加物 ０．２７ｇ ｐＨ４，５のクエン酸緩衝液　２７ｍ　！１を、入れた
。

ｐＨ５，６となったこの液を５０℃とし、パパイン（７
０ｎＫａ　ｔ／ｍｇ）　１０　ｇを添加して数分後にｐ
Ｈは５．３となった。

粉末のクエン酸１．５ｇを加えてρ１１４．５３とした
。

クロロホルム３３０ｍ　ｌにエタノール１０．３ｇ（０
，２２３モル）を溶かしたものを上記液に加えた。

エステル化反応の追跡はエッチ・ビー・エル・シー（Ｉ
ＩＰＬｃ）によって行ない、その条件は、オー・ディー
・ニス・ハイパーシル（０，Ｄ、Ｓ、ＩＩｙｐｅｒｓｉ
ｌ）カラム５μニス・エフ・シー・シー（Ｓ、Ｆ、Ｃ，
Ｃ）の使用、溶媒組織メタノール／水／　ｆ’ｆＭ水酸
化ア：／−１１−ニウム液＝６７／３０／３、ヴイ・ア
ール（ｖ、１）＝５．３〜５．４ｎｊ！とした。　反応
系を冷却したあとデカンテーション法で相分離を行い、
水相はクロロホルム１００ｍ　ｌで２回抽出し、器壁に
付着の有機物相は水１００ｍｊｌ！５％重炭酸化ナトリ
ウム液１００ｍ　ｌ、さらに水ｌｏｏｍ　ｌで２回の洗
浄を行い、ｐＨ６，５とした。

最後に硫酸ナトリウムで乾燥して（Ｎ−ベンジルオキシ
カルボニル）−Ｌ−アラニン（酸素）のエチルエステル
０．０２８モルを得た。

このエステルは油状であり、メタノール中での比旋光は ［α］　　−−３１，９”±２°、（Ｃ＝１）であった
。

（ｂ）　（Ｎ−ヘンシルオキシカルボニル）−Ｌ−アラ
ニル−Ｌ−アラニン（酸）のエチルエステルの合成 カナディアン・ジャーナル・イン・ケミストリー（Ｃａ
ｎ、Ｊ、Ｃ）Ｉｅｍ、）（１９７１）　４９１９６８の
ジェー・アール・コギンスとエフ・エル・ベノイトンの
報文に従い臭化水素を３７％の濃度で酢酸に溶かした液
で上記生成物に対し活性基封鎖解除（デプロテクション
）を行なって、収率９ｏ％で３．１６ｇのＮ−アラニン
エチルエチル３．１６ｇ（０，０２７モル）を得た。

２５０ｍ　ｌのエルレンマイヤーフラスコに次の試薬、
即ち −（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル）−ＤＬ−アラニン
　９．６２ｇ　（０，０４３モル）−２Ｎ水酸化ナトリ
ウム溶液　２１．５ｎｊ！、し−アラニンエチルエステ
ル　３．１６ｇ（０，０２７モル） システィンの塩化水素添加物　０．２６ｇｐＨ４，５の
クエン酸緩衝液　２６ｍ　ｌを入れた。

この溶液を５０℃にし、パパイン（７０ｎＫａｔ／ｍｇ
）４．８ｇを加えた状態でｐＨ５，９であった。

粉末クエン酸を加えてｐＨ４，５２とし、攪拌しつつク
ロロホルム１２０ｍ　Ｉｔを添加した。

反応の進行ヲエソチ・ピー・エル・シー（ＩＩＰＬＣ。

上記（ａ）項参照）でチェックしたところ、６ｈｒで完
結することが確認された。

上記（ａ）項の如くに処理して有機物相から（Ｎ−ベン
ジルオキシカルボニル）−Ｌ−アラニル−し−アラニン
（酸）のエチルエステル６．２３ｇ　（０，０１９３５
モル）を油状で得た。

（ｃ）　（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル）−Ｌ−アラ
ニル−し−アラニン（酸）の調製 ２Ｎの水酸化ナトリウムメタノール溶液を用い前出のジ
エー・アール・コギンスらの報文に従って上記（ｂ）項
での生成物を処理して、５．４ｇ（０，０１８４モル）
の（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル）−Ｌ−アラニル−
し−アラニンを得たが、これの融点は１５２〜１５４℃
、メタノール中での比倫光は 〔α）−＝−３５’±２°、（Ｃ＝１）であった。

第■工程　（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル）−Ｌ−ア
ラニル−し−アラニル− Ｌ−（１−アミノ）−エチルホスホ ン酸の合成 １００ｍのエルレンマイヤーフラスコ゛に次の試薬、即
ち −（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル）−Ｌ−アラニン−
Ｌ−アラニン ５．２９ｇ　（０，０４３モル） −２Ｎ水酸化ナトリウム溶液　９ｍ　ｌ、−Ｄ　Ｌ　−
（１−アミノ）−エチルホスホン酸１３ｇ　　（０，０
７２モル） □Ｌ−システィンの塩化水素添加物 ０．２８ｇ −ｐＨ４，５のクエン酸緩衝液　２８Ｉｌｌβ□パパイ
ン（７０ｎＫａｔ／ｍｇ）　　　５　ｇを入れた。

実施例１の第１工程の条件に準じ１０ｈｒ反応させて、
（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル）−Ｌ−アラニル−し
−アラニル−し−（１−アミノ）−エチルホスホン酸を
得たが、これの融点は１２７〜１２９℃、メタノール中
の比倫光は 〔α）　　＝−５３°±２″、（Ｃ＝１）であった。

次いで実施例１の第■工程の条件に卓じ活性基の封鎖解
除（デプロテクション）を行ない、そのあと再結晶させ
て２．７３８の、光学活性的に純粋なし一アラニルーし
一アラニルーＬ−（１−アミノ）エチルホスホン酸を得
た。

これは融点２７７〜２７９℃、水中の比倫光〔α）　　
＝−６８，５’±２°、（Ｃ＝１）であった。

ホスホン酸化された過剰の基質は酵素反応系の水相から
実施例１の第■工程によって７．２４　ｇ（収率７４％
）回収した。これは前の工程へ戻して再利用できるもの
である。

〔実施例５〕 Ｌ−アラニル−し−（１−アミノ）−エチルホスホン酸
の２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プ
ロパンジオール塩の合成 １００ｍ　ｌのエルレンマイヤーフラスコに次の試薬、
即ち、 □蒸留水　　　１５ｍ６ □Ｌ−アラニルーＬ−（１−アミノ）−エチルホスホン
酸 ５　ｇ　　（２５，５ミリモル） □２−アミノー２−（ヒドロキシメチル）−１，３−−
プロパンジオール ３．１ｇ　（２５，６ミリモル） を順次投入した。

こうして得られる塩の均一溶液は攪拌で４０℃に２ｈｒ
保った。

回転蒸発器で乾燥させたのち、純エタノール（１００％
）２０ｍ　ｌの中へ移して再び乾燥させた。

粘稠な残渣を純エタノール５０ｍ　ｌの中へ入れ攪拌し
つつ０〜５°Ｃで結晶化させた。

結晶を濾過し、フィルター上で純エタノールにより洗浄
したあと、乾燥剤（シリカゲル）収容のデシケータ内で
真空乾燥した。

目的生成物の収量は８ｇ、収率９９％、融点（分解点）
２５５〜２６０°Ｃ１水中での比倫光〔α）　　＝−１
７，９°±２．６°、（Ｃ＝１）であった・ 〔実施例６〕 Ｌ−アラニル−Ｌ−（１−アミノ）−エチルホスホン酸
とスルホン化ポリスチレン樹脂との付加物の調製 酸処理サイクルにおいて性状調製ずみの上記樹脂Ｌｏｏ
ｍ　ｊ２を長さ３０ｃｍ、直径１２．５ｃｍのガラス製
カラムに収納し、Ｌ−アラニル−Ｌ−（１−アミノ）−
エチルホスホン酸の水溶液を５１１１１／分の流量で該
カラムに貫流させ、いわゆるパーコレーションを行なっ
た。該ホスホン酸の流失がなくなる時点はニンヒドリン
を用いてチェックした。

このようにして有効成分（上記ホスホン酸）で飽和した
上記樹脂は数回水洗後に上記カラムから取出し、４０℃
で真空乾燥して、８３ｇの付加物を得たが、これのホス
ホン酸含有率は１９．５％であった。この含有率はクロ
マトグラフィーカラムを用い、これに充填した上記付加
物の層へ５％のアンモニア液を貫流させることでホスホ
ン酸を溶離し、ニンヒドリンを添加後の溶離液を比色定
量する、という方法で測定した。

〔実施例６〕 上述の方法で得られる製品のうちの上述以外の代表的な
ものは次の通りである。

（ａ）　（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル）−Ｌ−ロイ
シル−し−ロイシンとＤＬ−（１−アミノ）−エチルホ
スホン酸との縮合によって、Ｌ−ロイシル−ロイシル−
Ｌ−（１−アミノ）−エチルホスホン酸が総括収率６４
．５％で得られた。

これの融点は２６５〜２６８℃、０．ＩＮ水酸化ナトリ
ウム溶液中での比倫光は 〔α）　　＝−８３，５°±２°、（Ｃ＝１）であった
・ （ｂ）サルコシル−し−アラニル−（１−アミノ）−エ
チルホスホン酸：融点２４３〜２４７℃、水中での比倫
光 〔α）　　＝−８３，５°±２°、（Ｃ＝１）。

（ｃ）グリシル−し−チロシル−アミノメチルホスホン
酸：融点（分解を伴う）約３００℃、水中での比倫光 〔α）　　＝＋１５°±２°、（Ｃ＝１）。

（ｄ）Ｌ−（３−ニトロ）チロシル−アミノメチルホス
ホン酸：融点２５５〜２５７℃、０．ＩＮ水酸化ナトリ
ウム溶液中での比倫光 〔α）　　＝＋９．７°±２°、（Ｃ＝０．２５）。

（ｅ）グリシル−し−バリル−アミノメチルホスホン酸
：融点２７８な２８１℃、水中での比倫光　　　□〔α
）　　＝−３５°±２°、（Ｃ＝０．５）。

（ｆ）　　Ｌ−アラニル−し−（１−アミノ）−エチル
ホスホン酸のし一アルギニン塩；融点２００〜２０２℃
、水中での比倫光 〔α）　　＝　−９，６’±２°、（Ｃ＝１）。

輸）サルコシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−（１−アミノ）−
エチルホスホン酸：融点２７０〜２７４℃、水中での比
倫光 〔α〕　＝−５８°±２．５°、（Ｃ＝１）。

（ｈ）　Ｌ−アラニル−サルコシル−アミノメチルホス
ホン酸：融点２５２〜２５５°Ｃ１水中での比倫光 〔α）　　　＝＋１７．４’±２．５″、（Ｃ＝１）。

（ｉ）　　Ｌ−アラニル−Ｌ−（１−アミノ）−エチル
ホスホン酸と強塩基性ポリスチレン樹脂との付加物：該
ホスホン酸の含有率１２％。

（ｊ）Ｌ−アラニル−Ｌ−（１−アミノ）エチルホスホ
ン酸と弱塩基性フェノールポリアミン樹脂との付加物：
該ホスホン酸の含有率１０％。

＄１頁の続き ■Ｉｎｔ、ＣＩ、４　　　　　　　識別記号　　庁内整
理番号＠発明　　者　　ベルナール　ダンレー　　フラ
ンス国　７８３ｃオー　５９−２ ０発明者　　　オディール　シャツサ　　フランス国　
７８２２レイ　　　　　　　　　　　４０ ＠発明者　　　クロード　ルツソー　　フランス国７８
９１ｏ発　明　者　　ジャン・イブ　ラコー　　フラン
ス国７８８６ル　　　　　　　　　　　デンス・デュー
ノ寸０　プワシイ　ブールヴアール・ドウヴ０　ヴイロ
フレイ　リュ・ジャン・レイ０　オルジャリュ　グラン
ド・リュ　３００　サン・ツムＯうΦプレタシュ　レジ
ルク（無番地）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ［１］α−アミノ酸とＬ−カルボン酸ジペプチドのなか
   から選ばれたものと、α−アミノホスホン酸とのあいだ
   の反応、及びα−アミノカルボン酸とＬ−ホスホン酸ジ
   ペプチドとの反応、のなかのいずれかの反応によって生
   成するＬ−ホスホン酸ジペプチドとＬ−ホスホン酸トリ
   ペプチドの合成方法であって、 次の各工程、すなわち、 （１）α−アミノ酸と、２分子のＬ−ないしＤＬ−アミ
   ノカルボン酸の縮合により生成するＬ−カルボン酸ジペ
   プチド、との中から選ばれた試薬が、ＤＬ−α−アミノ
   ホスホン酸と、このホスホン酸１分子にα−アミノカル
   ボン酸が縮合して生じるＬ−ホスホン酸ジペプチド、と
   の中から選ばれた試薬、 にパパインとキモパパインの中から選ばれた酵素の存在
   下に接触させると共に、上記のアミノカルボン酸ないし
   Ｌ−ジペプチドの１モルに対し上記ホスホン酸基含有の
   Ｌ−アミノ酸を少くとも２モル以上の割合とする工程、
   及びこれにつづいて、 （２）酸性の反応媒体中で１０〜７０℃の範囲内の温度
   で反応させ、生成するポリペプチドを反応系から相分離
   させる工程、からなるＬ−ホスホン酸ジペプチドとＬ−
   ホスホン酸トリペプチドの合成方法。 ［２］前記の酵素が、キモパパインと、実質上キモパパ
   インからなる工業的パパイン、のなかから選ばれたもの
   である特許請求の範囲第［１］項に記載の合成方法。 ［３］前記の生成ポリペプチドの反応系からの相分離の
   ために、水性の反応媒体には不溶でポリペプチドはよく
   溶解する液体を用いる特許請求の範囲第［１］項又は第
   ［２］項に記載の合成方法。 ［４］α−アミノ酸とＬ−カルボン酸ジペプチドのなか
   から選ばれたものと、α−アミノホスホン酸とのあいだ
   の反応、及びα−アミノカルボン酸とＬ−ホスホン酸ジ
   ペプチドとの反応、のなかのいずれかの反応によって生
   成するＬ−ホスホン酸ジペプチドとＬ−ホスホン酸トリ
   ペプチドの合成方法であって、 次の各工程、すなわち、 （１）α−アミノ酸と、２分子のＬ−ないしＤＬ−アミ
   ノカルボン酸の縮合により生成するＬ−カルボン酸ジペ
   プチド、との中から選ばれた試薬が、ＤＬ−α−アミノ
   ホスホン酸と、このホスホン酸１分子にα−アミノカル
   ボン酸が縮合して生じるＬ−ホスホン酸ジペプチド、と
   の中から選ばれた試薬、 にパパインとキモパパインの中から選ばれた酵素の存在
   下に接触させると共に、上記のアミノカルボン酸ないし
   Ｌ−ジペプチドの１モルに対し上記ホスホン酸基含有の
   Ｌ−アミノ酸を少くとも２モル以上の割合とする工程、
   及びこれにつづいて、 （２）酸性の反応媒体中で１０〜７０℃の範囲内の温度
   で反応させ、生成するポリペプチドを反応系から相分離
   させる工程、からなる方法によって得られるホスホン酸
   ジペプチドとホスホン酸トリペプチド。 ［５］α−アミノ酸とＬ−カルボン酸ジペプチドのなか
   から選ばれたものと、α−アミノホスホン酸とのあいだ
   の反応、及びα−アミノカルボン酸とＬ−ホスホン酸ジ
   ペプチドとの反応、のなかのいずれかの反応によって生
   成するＬ−ホスホン酸ジペプチドとＬ−ホスホン酸トリ
   ペプチドの合成方法であって、 次の各工程、すなわち、 （１）α−アミノ酸と、２分子のＬ−ないしＤＬ−アミ
   ノカルボン酸の縮合により生成 するＬ−カルボン酸ジペプチド、との中から選ばれた試
   薬が、ＤＬ−α−アミノホスホン酸と、このホスホン酸
   １分子にα−アミノカルボン酸が縮合して生じるＬ−ホ
   スホン酸ジペプチド、との中から選ばれた試薬、 にパパインとキモパパインの中から選ばれた酵素の存在
   下に接触させると共に、上記のアミノカルボン酸ないし
   Ｌ−ジペプチドの１モルに対し上記ホスホン酸基含有の
   Ｌ−アミノ酸を少くとも２モル以上の割合とする工程、
   及びこれにつづいて、 （２）酸性の反応媒体中で１０〜７０℃の範囲内の温度
   で反応させ、生成するポリペプチドを反応系から相分離
   させる工程、からなる方法によって得られるホスホン酸
   ジペプチドとホスホン酸トリペプチドのうちの少くとも
   いずれかを薬効成分として含有している医薬。 ［６］ペプチド結合を有した新規な化合物及び、該化合
   物と他の物質とが結合した新規な複合物質、であって次
   の群、即ち、 Ｌ−（４−フルオロ）−フェニルアラニル−アミノメチ
   ルホスホン酸、 Ｌ−（３−ニトロ）−チロシル−アミノメチルホスホン
   酸、 Ｌ−（４−アミノ）−フェニルアラニル−アミノメチル
   ホスホン酸、 Ｌ−（２，４−ジクロロ）−フェニルアラニル−アミノ
   メチルホスホン酸、 Ｌ−（３，４−ジクロロ）−フェニルアラニル−アミノ
   メチルホスホン酸、 Ｌ−Ｌ（β−メチル）−フェニルアラニル−アミノメチ
   ルホスホン酸、 （α−メチル）−アラニル−アミノメチルホスホン酸、 グリシル−Ｌ−バリル−アミノメチルホスホン酸、 Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシル−アミノメチルホ
   スホン酸、 Ｌ−ロイシル−Ｌ−ロイシル−アミノメチルホスホン酸
   、 グリシル−Ｌ−チロシル−アミノメチルホスホン酸、 Ｌ−アラニル−サルコシル−アミノメチルホスホン酸、 Ｌ−（３−ニトロ）−チロシル−Ｌ−（１−アミノ）−
   エチルホスホン酸、 Ｌ−アラニル−Ｌ−（１−アミノ）−エチルホスホン酸
   のＬ−アルギニン塩、 Ｌ−アラニル−Ｌ−（１−アミノ）−エチルホスホン酸
   の２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プ
   ロパンジオール塩、 Ｌ−アラニル−Ｌ−（１−アミノ）−エチルホスホン酸
   を弱塩基性のポリアミンフェノール樹脂と共存させて得
   られる生成物、 Ｌ−アラニル−Ｌ−（１−アミノ）−エチルホスホン酸
   をスルホン化ポリスチレン樹脂と共存させて得られる生
   成物、 Ｌ−アラニル−Ｌ−（１−アミノ）−エチルホスホン酸
   を強塩基性のポリスチレン樹脂と共存させて得られる生
   成物、 Ｌ−アラニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−（１−アミノ）−エ
   チルホスホン酸、 サルコシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−（１−アミノ
   ）−エチルホスホン酸、 Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−（１−アミ
   ノ）−エチルホスホン酸 Ｌ−ロイシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−（１−アミノ）−エ
   チルホスホン酸、 サルコシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−（１−アミノ）−エチ
   ルホスホン酸、 Ｌ−ロイシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−（１−アミノ）−エ
   チルホスホン酸、 グリシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−（１−アミノ）−エチル
   ホスホン酸、 （Ｎ−アセチル）−グリシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−（１
   −アミノ）−エチルホスホン酸、（Ｎ−ベンジル）−グ
   リシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−（１−アミノ）−エチルホ
   スホン酸、サルコシル−Ｌ−チロシル−Ｌ−（１−アミ
   ノ）−エチルホスホン酸、及び Ｌ−プロピル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−（１−アミノ）−エ
   チルホスホン酸、 からなる群で規定されるもの。 ［７］ペプチド結合を有した化合物及び該化合物と他の
   物質との複合物質からなる次の群、即ち Ｌ−（４−フルオロ）−フェニルアラニル−アミノメチ
   ルホスホン酸、 Ｌ−（３−ニトロ）−チロシル−アミノメチルホスホン
   酸、 Ｌ−（４−アミノ）−フェニルアラニル−アミノメチル
   ホスホン酸、 Ｌ−（２，４−ジクロロ）−フェニルアラニル−アミノ
   メチルホスホン酸、 Ｌ−（３，４−ジクロロ）−フェニルアラニル−アミノ
   メチルホスホン酸、 Ｌ−Ｌ（β−メチル）−フェニルアラニル−アミノメチ
   ルホスホン酸、 （α−メチル）−アラニル−アミノメチルホスホン酸、 グリシル−Ｌ−バリル−アミノメチルホスホン酸、 Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシル−アミノメチルホ
   スホン酸、 Ｌ−ロイシル−Ｌ−ロイシル−アミノメチルホスホン酸
   、 グリシル−Ｌ−チロシル−アミノメチルホスホン酸、 Ｌ−アラニル−サルコシル−アミノメチルホスホン酸、 Ｌ−（３−ニトロ）−チロシル−Ｌ−（１−アミノ）−
   エチルホスホン酸 Ｌ−アラニル−Ｌ−（１−アミノ）−エチルホスホン酸
   のＬ−アルギニン塩、 Ｌ−アラニル−Ｌ−（１−アミノ）−エチルホスホン酸
   の２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プ
   ロパンジオール塩、 Ｌ−アラニル−Ｌ−（１−アミノ）−エチルホスホン酸
   を弱塩基性のポリアミンフェノール樹脂と共存させて得
   られる生成物、 Ｌ−アラニル−Ｌ−（１−アミノ）−エチルホスホン酸
   をスルホン化ポリスチレン樹脂と共存させて得られる生
   成物、 Ｌ−アラニル−Ｌ−（１−アミノ）−エチルホスホン酸
   を強塩基性のポリスチレン樹脂と共存させて得られる生
   成物、 Ｌ−アラニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−（１−アミノ）−エ
   チルホスホン酸、 サルコシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−（１−アミノ
   ）−エチルホスホン酸、 Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−（１−アミ
   ノ）−エチルホスホン酸、 Ｌ−ロイシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−（１−アミノ）−エ
   チルホスホン酸、 サルコシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−（１−アミノ）−エチ
   ルホスホン酸、 Ｌ−ロイシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−（１−アミノ）−エ
   チルホスホン酸、 グリシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−（１−アミノ）−エチル
   ホスホン酸、 （Ｎ−アセチル）−グリシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−（１
   −アミノ）−エチルホスホン酸、（Ｎ−ベンジル）−グ
   リシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−（１−アミノ）−エチルホ
   スホン酸、サルコシル−Ｌ−チロシル−Ｌ−（１−アミ
   ノ）−エチルホスホン酸、及び Ｌ−プロピル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−（１−アミノ）−エ
   チルホスホン酸、 からなる群の中から選ばれた少くとも１種の化合物ない
   し複合物質を薬効成分として含有し、これら薬効成分の
   医薬中での存在形態が次の２形態、即ち、 （１）遊離状態、 （２）薬理学に相溶性ないし親和性であるアミン、酸、
   官能基含有樹脂と結合した状態、 の中のいずれかの形態である抗菌性の医薬。