JPH0952900A

JPH0952900A - 亜鉛エンドペプチダーゼ２４−１５阻害剤として使用可能な新規ペプチド誘導体

Info

Publication number: JPH0952900A
Application number: JP8018967A
Authority: JP
Inventors: Vincent Dive; ディブビンセン; Jiri Jiracek; ジラセックジリ; Athanasios Yiotakis; イオタキスアサナシオス
Original assignee: Commissariat a lEnergie Atomique CEA
Current assignee: Commissariat a lEnergie Atomique et aux Energies Alternatives CEA
Priority date: 1995-02-06
Filing date: 1996-02-05
Publication date: 1997-02-25
Also published as: FR2730235A1; US5776903A; EP0725075A1; FR2730235B1

Abstract

(57)【要約】【課題】エンドペプチダーゼ２４−１５の強力且つ選
択的な阻害剤であるが、エンドペプチダーゼ２４−１
６、高血圧変換酵素、エンドペプチダーゼ２４−１１、
アミノペプチダーゼＭおよびＬ、およびカルボキシペプ
チダーゼＡおよびＢのような他の亜鉛ペプチダーゼに対
しては不活性なペプチド誘導体、その製造法、及びそれ
を含む組成物を提供する。【解決手段】新規なペプチド誘導体は、アミノ酸配列
−ＰｈｅΨ（ＰＯ₂ＣＨ ₂）−_(L,D)Ｘaa' −Ｙaa' −
Ｚaa' −（式中、Ψ（ＰＯ₂ＣＨ₂）は、ペプチド結合
（ＣＯＮＨ）がホスフィン結合（ＰＯ₂ＣＨ₂）に置換
されていることを表わし、Ｘaa' およびＺaa' は、同一
であるかまたは異なるものであることができ、それぞれ
の場合に天然アミノ酸またはアミノ擬酸(amino pseudo-
acid) を表わし、Ｙaa' は、ＡｒｇまたはＬｙｓを表わ
す）を有する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、亜鉛エンドペプチ
ダーゼE.C.3.4.24-15 の阻害剤として用いられる新規な
ペプチド誘導体に関する。

【０００２】更に詳細には、本発明は、エンドペプチダ
ーゼ２４−１５の強力且つ選択的な阻害剤であるが、エ
ンドペプチダーゼ２４−１６、高血圧変換酵素、エンド
ペプチダーゼ２４−１１、アミノペプチダーゼＭおよび
Ｌ、およびカルボキシペプチダーゼＡおよびＢのような
他の亜鉛ペプチダーゼに対しては不活性なペプチド誘導
体に関する。

【０００３】

【従来の技術および発明が解決しようとする課題】亜鉛
プロテアーゼ阻害剤を得ることは、薬理学的にかなり重
要である。例えば、哺乳動物でのタンパク質及びペプチ
ドの代謝において行う機能の結果として、多数の亜鉛金
属プロテアーゼが重要な生理学的機能に関与しており、
様々な病変の原因物質となることがある。中枢神経系及
び末梢神経系に関しては、所定数の亜鉛エンドペプチダ
ーゼ（エンドペプチダーゼ２４−１１、２４−１５及び
２４−１６）が多数の神経ペプチドの劣化または成熟に
関与している。循環器系に関しては、高血圧及びエンド
テリン変換酵素が、動脈血圧の調節において本質的な役
割を演じている。活性が老人性疾患や疾病、及び癌の転
移の発生と関連している亜鉛金属プロテアーゼもある
（コラゲナーゼ、エラスターゼ、ゼラチナーゼ、ストロ
メリシン）。場合によっては、このような金属プロテア
ーゼは、ある種の微生物のビルレンスと緊密に関連して
いるものと同定されている（ボツリヌス中毒及び破傷風
オキシン(oxines)、コレラヘマグルチン(hemagglutin
e)、シュドモナス・エルギノッサ(pseudomonas aerugin
osa)、膠原溶解細菌による歯周病）。

【０００４】それ故、これらのプロテアーゼの特異的阻
害剤を治療目的で得ることは、重要なことである。

【０００５】世界中の様々な研究グループが、このよう
な問題に興味を持っており、このような阻害剤を合成す
るための合理的な方法を開発している。これは、亜鉛金
属プロテアーゼの基本的特性、すなわちその活性部位に
おけるペプチド結合の加水分解の触媒作用に関与する亜
鉛原子の存在に基づいている。

【０００６】包括的には、この方法は、これらのプロテ
アーゼの基質と類似したペプチドであって、これらのプ
ロテアーゼによって開裂されたペプチド結合（ＣＯ−Ｎ
Ｈ）が、一方では遷移状態のペプチド結合と構造的及び
電子的に良好な類似性を有し、他方ではこのプロテアー
ゼの活性部位に存在する亜鉛原子と強力に相互作用する
ことができる化学性基で置換されているものを合成する
ことから成っている。

【０００７】図１〜３はこれらの酵素のペプチド基質の
基本的状態、及びその遷移状態（図２）、及びペプチド
基質の類似体によって構成された阻害剤であって、酵素
によって開裂されたＣＯ−ＮＨ結合がＰＯ₂−Ｘ（但
し、ＸはＮＨ、ＯまたはＣＨ₂を表わす）結合によって
置換されているものの遷移状態を示している。

【０００８】図１において、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ¹'、
Ｒ²'及びＲ³'は、酵素との反応に関与するペプチドまた
はホスフィン結合のいずれかの側のアミノ酸の側鎖を表
わす。

【０００９】したがって、このような阻害剤について
は、遷移状態のペプチド結合と構造的及び電子的に良好
な類似点を有するホスホンアミド（Ｘ＝ＮＨ）、ホスホ
ン（Ｘ＝Ｏ）またはホスフィン（Ｘ＝ＣＨ₂）型の化学
性基が今日まで用いられてきている。

【００１０】遷移状態におけるこれらの阻害剤と基質と
が類似していることから、通常はこれらの分子に著しい
親和性が生じる。

【００１１】基質へのホスホンアミド結合の導入が、Ｆ
Ｒ−Ａ−２，６５４，４３０号明細書に記載されてお
り、ある種の亜鉛プロテアーゼの強力な阻害剤を得る上
で極めて有効であることが明らかにされた。しかし、ホ
スホンアミド結合の化学的安定性は、その結合を取り囲
んでいるアミノ酸配列に大きく依存しており、不運なこ
とには、ある種の配列については、ホスホン結合が極め
て速やかに加水分解される。

【００１２】ホスホネート型結合を用いることが、Kapl
anら、Biochemistry, 30, 1991, pp8165-8170 に記載さ
れており、カルボキシペプチダーゼＡのこの具体的な場
合には酵素についてこれまでに報告された内で最も強力
な合成阻害剤を得ることができるようになった（阻害定
数Ｋ_i＝１０^-5Ｍ）。

【００１３】ホスフィン結合（Ｘ＝ＣＨ₂）を含む阻害
剤はＦＲ−Ａ−２，６７６，０５９号明細書に記載され
ており、細菌性コラゲナーゼの場合に極めて有効である
ことが明らかにされている。ＥＰ−Ａ−５６５，４５０
号明細書には、エンドペプチダーゼ２４−１５に対して
極めて有効なホスホンアミド結合（Ｘ＝ＮＨ）を含む阻
害剤が記載されているが、エンドペプチダーゼ２４−１
６の極めて良好な阻害剤も記載されている。

【００１４】

【課題を解決するための手段】本発明は、ホスフィン結
合を有し且つエンドペプチダーゼ２４−１５の阻害剤と
して強力であり且つ選択的である新規なペプチド誘導体
を開発した。これらの生成物は、他のプロテアーゼ、特
にエンドペプチダーゼ２４−１６、高血圧変換酵素、エ
ンドペプチダーゼ２４−１１、アミノペプチダーゼＭ及
びＬ、並びにカルボキシペプチダーゼＡ及びＢに関して
は特に不活性である。これらの誘導体は、ホスホンアミ
ドペプチド類よりも一層化学的に安定である。

【００１５】本発明によれば、これらの新規なペプチド
誘導体は、アミノ酸配列 −ＰｈｅΨ（ＰＯ₂ＣＨ₂）−_(L,D)Ｘaa' −Ｙaa' −
Ｚaa' − （式中、Ψ（ＰＯ₂ＣＨ₂）は、ペプチド結合（ＣＯＮ
Ｈ）がホスフィン結合（ＰＯ₂ＣＨ₂）に置換されてい
ることを表わし、Ｘaa' およびＺaa' は、同一であるか
または異なるものであることができ、それぞれの場合に
天然アミノ酸またはアミノ擬酸(amino pseudo-acid) を
表わし、Ｙaa' は、ＡｒｇまたはＬｙｓを表わす）を有
する。

【００１６】この配列では、基ＰＯ₂ＣＨ₂は、図３か
ら判るように、ＰＯ₂ ^-の形態である。従って、この基
は、Ｋ⁺、Ｎａ⁺または薬理学的見地から許容可能な任
意の他の金属対イオンと結合している。この対イオンの
性状は重要ではなく、水中では帯電した基は解離してい
るからである。

【００１７】本発明の一態様によれば、これらのペプチ
ド誘導体は、式Ｚ−_(L,D)ＰｈｅΨ（ＰＯ₂ＣＨ₂）−_(L,D)Ｘaa' −Ａｒｇ−Ｚaa' ＯＲ¹ (I) およびＺ−_(L,D)ＰｈｅΨ（ＰＯ₂ＣＨ₂）−_(L,D)Ｘaa' −Ｌｙｓ−Ｚaa' ＯＲ¹ (II) （式中、Ｚは、アセチルまたはベンジルオキシカルボニ
ル基のような通常のペプチド合成保護基を表わし、Ψ
（ＰＯ₂ＣＨ₂）は、ペプチド結合（ＣＯ−ＮＨ）がホ
スフィン結合（ＰＯ₂ＣＨ₂）に置換されていることを
表わし、Ｘaa' およびＺaa' は、同一であるかまたは異
なるものであることができ、それぞれの場合に天然アミ
ノ酸またはアミノ擬酸を表わし、Ｒ¹は、水素原子、Ｎ
Ｈ₄ ⁺、または薬学上許容可能な金属を表わす）の一つ
を満足する。

【００１８】前記式(I) 及び(II)において、Ｘaa' 及び
Ｚaa' に対して用いられるアミノ酸は、天然アミノ酸ま
たはアミノ擬酸であることができる。

【００１９】天然のアミノ酸は、アラニン、アルギニ
ン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グル
タミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロ
イシン、ロイシン、ノルロイシン、リシン、メチオニ
ン、フェニルアラニン、プロリン、ヒドロキシプロリ
ン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、
バリン、ニトロフェニルアラニン、ホモアルギニン、チ
アゾリジン、及びデヒドロプロリンの中から選択するこ
とができる。

【００２０】アミノ擬酸(amino pseudo-acid) は、アミ
ノまたはカルボニル官能基が別の化学性基によって置換
されているアミノ酸として定義することができる。

【００２１】Ｒ¹に用いられる金属は、ナトリウム、カ
リウムまたはリチウムのようなアルカリ金属であること
ができる。

【００２２】更に、式から判るように、アミノ酸Ｐｈｅ
及びＸaa' はＬまたはＤ型であることができる。式(I)
または(II)のペプチド誘導体は、４種類のジアステレオ
異性体の混合物またはそれらの異性体の１個だけによっ
て構成されることができる。

【００２３】好ましくは、前記式(I) 及び(II)におい
て、Ｘaa' はＧｌｙ、ＡｌａまたはＬｅｕを表わし、ホ
スフィン結合の付近にこのようなアミノ酸が存在する
と、極めて良好な阻害剤を得ることができるからであ
る。

【００２４】これらのペプチド誘導体は、Ｇｌｙ−Ｐｒ
ｏ結合（またはＰｒｏ類似体）またはＡｌａ−Ｐｒｏ結
合（またはＰｒｏ類似体）がホスフィン結合の付近に常
に存在するＥＰ−Ａ−５６５，４５０号明細書に記載さ
れているものとは異なる。本発明において、プロリン基
（ヒドロキシプロリン、チアゾリジンまたはデヒドロプ
ロリン）はアルギニンまたはリシン基によって置換され
ており、エンドペプチダーゼ２４−１６と比較してエン
ドペプチダーゼ２４−１５に対する選択性を極めて高く
することができる。

【００２５】したがって、これらの誘導体では、アルギ
ニン（式Ｉ）またはリシン（式II）を選択することによ
って、所望な特異性を得ることができる。

【００２６】したがって、ホスフィン結合を有する任意
のペプチドは、亜鉛金属プロテアーゼの群に属する様々
なプロテアーゼの阻害剤となることができることがあ
る。しかし、ホスフィン結合と活性部位の亜鉛原子との
相互作用とは異なり、ペプチドの親和性は、ホスフィン
単位（図３のＲ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ¹'、Ｒ²'及びＲ³'）
及びプロテアーゼの活性部位の様々なサブサイト（図１
のＳ¹、Ｓ²、Ｓ³、Ｓ ¹'、Ｓ²'及びＳ³'）のいずれか
の側のアミノ酸の間の相互作用にも依存している。

【００２７】本発明によれば、エンドペプチダーゼ２４
−１５の場合には、Ｒ²'位にアルギニンまたはリシンが
存在することにより、ペプチドにエンドペプチダーゼ２
４−１５のサブサイトに対する親和性が高くなり、他の
プロテアーゼのサブサイトに対してはほとんど親和性を
示さないことが明らかになった。

【００２８】本発明によれば、Ｚaa' を表わすアミノ酸
も極めて重要であり、これを選択することにより、阻害
剤とエンドペプチダーゼ２４−１５との相互作用を最適
にすることができ、エンドペプチダーゼ２４−１６及び
他のプロテアーゼと比較してその相互作用にとって好ま
しくないからである。好ましくは、本発明によれば、Ｚ
aa' はＭｅｔ、Ｎｌｅ、ＡｌａまたはＰｈｅである。

【００２９】式IIの誘導体の場合には、Ｚaa' がＬｅｕ
またはＩｌｅを表わすときに、良好な結果も得られる。

【００３０】式Ｉの誘導体の場合は、Ｘaa' がＡｌａを
表わし、Ｚaa' がＭｅｔを表わすときには、阻害剤の力
及び選択性に関して良好な結果が得られる。

【００３１】式IIの誘導体の場合には、Ｘaa' がＡｌａ
を表わし、Ｚaa' がＭｅｔまたはＰｈｅを表わすときに
は、良好な結果が得られる

【００３２】したがって、本発明によれば、哺乳動物ま
たはチメット(thimet)ペプチダーゼのエンドペプチダー
ゼ２５−１５の強力で選択的な阻害剤であるが、エンド
ペプチダーゼ２４−１６はほとんど阻害しないものが得
られる。これは非常に重要な結果であり、H. Barelli
ら、Biochem. J., 1992, 287, pp 621-625及びＥＰ−Ａ
−５６５，４５０号明細書に記載されているように、ペ
プチダーゼ２４−１５と２４−１６との特異性が極めて
近接しており、これまで入手可能であったものは総てが
これら２種類のペプチダーゼの混合阻害剤から成ってい
たからである。

【００３３】本発明によるペプチド誘導体は、ＦＲ−Ａ
−２，６７６，０５９号明細書に記載されているような
通常の方法によって製造することができる。

【００３４】しかしながら、式Ｚ−_(L,D)ＰｈｅΨ（ＰＯ（ＯＲ³）ＣＨ₂）−_(L,D)
Ｘaa' ＯＨ（式中、Ｚ、Ｐｈｅ、ΨおよびＸaa' は前記で定義した
通りであり、Ｒ³はアダマンチル基を表わす）のシント
ンに基づいた固相合成法による式(I) または(II)の誘導
体の製造の方が好ましい。

【００３５】本発明は、式(I) または(II)を満足するペ
プチド誘導体の製造法であって、式ＮＨ₂−Ａｒｇ−Ｚaa' Ｒ²またはＮＨ₂−Ｌｙｓ−Ｚ
aa' Ｒ² （式中、Ｚaa' は前記定義の意味を有し、Ｒ²は固相で
ある）の固相に固定したジペプチドと、式Ｚ−_(L,D)ＰｈｅΨ（ＰＯ（ＯＲ³）ＣＨ₂）−_(L,D)
Ｘaa' ＯＨ（式中、Ｚ、Ψ、Ｘaa' 及びＲ³は、前記で定義した通
りである）のシントンとカップリングした後、式Ｚ−_(L,D)ＰｈｅΨ（ＰＯ（ＯＲ³）ＣＨ₂）−_(L,D)
Ｘaa' −Ａｒｇ−Ｚaa'Ｒ²、またはＺ−_(L,D)Ｐｈｅ
Ψ（ＰＯ（ＯＲ³）ＣＨ₂）−_(L,D)Ｘaa' −Ｌｙｓ−
Ｚaa'Ｒ² のペプチド誘導体を固相Ｒ²から分離し、基Ｒ³を酸処
理によって除去することから成る方法にも関する。

【００３６】前記の方法では、ペプチド化学で一般的に
用いられる試薬及び溶媒を用いる通常の手順によって様
々な段階を行う。

【００３７】本発明は、エンドペプチダーゼ２４−１５
阻害剤を配合する薬学組成物において、前記阻害剤が、
アミノ酸配列 −ＰｈｅΨ（ＰＯ₂ＣＨ₂）−_(L,D)Ｘaa' −Ｙaa' −
Ｚaa' − を組み込みまたは前記式(I) 及び(II)の一つを満足する
ペプチド誘導体であることを特徴とする組成物にも関す
る。

【００３８】これらの阻害剤は、ヒトの多数の生物学的
ペプチド（ソマトスタチン、ブラジキニン、アンギオテ
ンシン、ニューロテンシンン、サブスタンスＰ、ダイノ
ルフィン、ＶＩＰ）の分解をイン・ビボでブロックし
て、これらの様々なペプチドの生物学的効果を可能性を
有するようにすることができる。したがって、これらの
生成物をイン・ビボで用いることにより、これらの生物
学的ペプチド及びエンドペプチダーゼ２４−１５による
それらの分解を包含する重要な薬理学的用途が開かれ
る。これらのペプチドは、アルツハイマー症、及び多種
多様な癌の形態の発現におけるキータンパク質であるラ
スタンパク質の成熟段階にも関与していることが最近に
なって判った。Barelli, H; Fox-Threlkeld, J.E.T.; D
ive, V.;Daniel, E.E.; Vincent, J.P.及びChecler,
F., (1994), Br. J. Pharmacol.,112, 127に記載されて
いるように、同様な生成物、すなわちリンシュードペ
プチダーゼについては、これらの分子はイヌでのイン・
ビボでは極めて低い阻害剤濃度についてニューロテンシ
ンの分解を効果的に阻害することができたことが試験に
より示されていることに留意すべきである。

【００３９】また、エンドペプチダーゼ２４−１５につ
いてこれまでに報告された内で最も強力で且つ選択的な
本発明の誘導体によるこのペプチダーゼの阻害は、多数
の薬理学的用途、更に詳細には、鎮痛薬として、及び低
体温症、動脈性高血圧、癌及びアルツハイマー症の治療
についての用途を有する。

【００４０】本発明の他の特徴及び利点は、添付図面に
関する下記の非制限的説明から明らかにすることができ
る。

【００４１】

【発明の実施の形態】下記の例により、本発明によるシ
ントン及びペプチド誘導体の製造、及び得られたペプチ
ドの特性を説明する。

【００４２】例１シントンＺ−ＰｈｅΨ（ＰＯ（ＯＲ
³）ＣＨ₂）ＧｌｙＯＨ（シントン１）の製造 a) Ｚ−ＰｈｅΨ（ＰＯ（ＯＲ³）ＣＨ₂）ＧｌｙＯＣ
₂Ｈ₅の製造この製造の出発生成物はＺ−ＰｈｅΨ−（ＰＯ₂Ｃ
Ｈ₂）ＧｌｙＯＣ₂Ｈ₅であり、これはＦＲ−Ａ−２，
６７６，０５９号明細書の例１に準じて得られる。この
生成物をエタノール（２０ｍｌ）及び水（５ｍｌ）の混
合物に溶解する。この溶液を、１Ｍ硝酸銀溶液（４ｍ
ｌ）に攪拌しながら加える。１０分後に、水２０ｍｌを
加えた後、形成されるエチルアルコールを真空で留去す
る。銀塩沈殿を含む残りの水性相を氷水槽で１時間冷却
した後、沈殿を濾過して、水で洗浄し、Ｐ₂Ｏ₅の存在
下で乾燥して、固形生成物（０．９５ｇ、収率９１％）
を得る。この銀塩（０．９５ｇ、１．８２ｍＭ）をクロ
ロホルム溶液（１５ｍｌ）懸濁し、これに臭化＝１−ア
ダマンチル（０．４７３ｇ、２．２ｍＭ）を加える。反
応混合物を３０分間還流する。臭化銀沈殿を濾去した
後、濾液を蒸発濃縮する。粗生成物を、シリカゲルカラ
ム上でクロロホルム：イソプロパノール（９７：３）混
合物を溶離剤として用いて精製する。これにより、純粋
な生成物Ｚ−Ｐｈｅ（ＰＯ（Ｏ−Ｒ³）ＣＨ₂）Ｇｌ
ｙＯＣ₂Ｈ₅（収率８１％）を０．６６ｇ、油状生成物
の形態で得る。（Ｒｆ（１）＝０．６３；Ｒｆ（２）＝
０．８２；分子量＝５５３．３４）。

【００４３】b) シントンＺ−ＰｈｅΨ（ＰＯ（Ｏ
Ｒ³）ＣＨ₂）ＧｌｙＯＨの製造 a)で得た生成物Ｚ−ＰｈｅΨ（ＰＯ（ＯＲ³）ＣＨ₂）
ＧｌｙＯＣ₂Ｈ₅ （０．５５ｇ、１ｍＭ）をエタノール（１０ｍｌ）に溶
解した後、この溶液に４Ｍソーダ１ｍｌを滴加する。周
囲温度で９０分後に、エタノールを真空で留去する。生
成物残渣を水（３０ｍｌ）に溶解する。溶液を氷水槽で
冷却した後、２ＭＨＣｌで酸性にする。沈殿する固形
生成物を酢酸エチルで抽出し、水で洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ
₄上で乾燥した後、濃縮し、固形生成物Ｚ−ＰｈｅΨ
（ＰＯ（ＯＲ³）ＣＨ₂）ＧｌｙＯＨ（０．４６ｇ、収
率８９％）を得る。Ｒｆ（２）＝０．３３；分子量＝５
２５．３４。

【００４４】例２シントンＺ−ＰｈｅΨ（ＰＯ（ＯＲ
³）ＣＨ₂）ＡｌａＯＨ（シントン２）の製造この製造のため、Ｚ−ＰｈｅΨ（ＰＯ₂ＣＨ₂）Ｇｌｙ
ＯＣ₂Ｈ₅と同様にして得た生成物Ｚ−ＰｈｅΨ（ＰＯ
₂ＣＨ₂）ＡｌａＯＣ₂Ｈ₅から出発して、例１の操作
手順を行う。得られた生成物は下記の特性を有する：Ｚ−ＰｈｅΨ（ＰＯ（ＯＲ³）ＣＨ₂）ＡｌａＯＣ₂Ｈ
₅：Ｒｆ（１）＝０．６６、分子量５６６．３５。Ｚ−ＰｈｅΨ（ＰＯ（ＯＲ³）ＣＨ₂）ＡｌａＯＨ：Ｒ
ｆ（１）＝０．４２、分子量＝５３８．３５。

【００４５】例３シントンＺ−ＰｈｅΨ（ＰＯ（ＯＲ
³）ＣＨ₂）ＬｅｕＯＨ（シントン３）の製造例１の操作手順を用いて、Ｚ−ＰｈｅΨ（ＰＯ₂Ｃ
Ｈ₂）ＧｌｙＯＣ₂Ｈ₅と同様にして得た生成物Ｚ−Ｐ
ｈｅΨ（ＰＯ₂ＣＨ₂）ＬｅｕＯＣ₂Ｈ₅からこのシン
トンを製造する。得られた生成物は下記の特性を有する：Ｚ−ＰｈｅΨ（ＰＯ（ＯＲ³）ＣＨ₂）ＬｅｕＯＣ₂Ｈ
₅：Ｒｆ（１）＝０．６４、分子量６１０．１。Ｚ−ＰｈｅΨ（ＰＯ（ＯＲ³）ＣＨ₂）ＬｅｕＯＨ：Ｒ
ｆ（１）＝０．５２、分子量＝５８２．１。

【００４６】例４Ｚ−ＰｈｅΨ（ＰＯ₂ＣＨ₂）Ｇｌ
ｙＡｒｇＭｅｔＯＨ（ペプチド１）の製造このペプチドを製造するため、最初にアミノ酸ＮＨ₂−
ＭｅｔＯＨを固相に固定して、図４に記載の固相合成法
を用いる。固相は２−クロロトリチル樹脂によって構成
されており、乾燥樹脂５０〜１００ｍｇに対してメチオ
ニン５０マイクロモルを用いる。

【００４７】a) ＦＭＯＣ−Ａｒｇ−Ｚaa' −Ｒ²（但
し、Ｚaa' はＭｅｔを表わし、Ｒ²は２−クロロトリチ
ル樹脂を表わし、ＦＭＯＣは９−フルオレニルメチルオ
キシカルボニルを表わす）の製造樹脂を、最初にジメチルホルムアミド中で前記の様にし
て固定したメチオニンと共に１５分間膨潤させた後、２
（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）＝１，１，
３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフ
ェート（ＨＢＴＵ）２〜４当量、ジイソプロピルアミン
（ＤＩＰＥＡ）２．５〜５当量、及びジメチルホルムア
ミドＤＭＦ（ＮＭＰ）１〜１．５ｍｌをカップリングに
対して用いてＦＭＯＣ−Ａｒｇ２〜４当量とカップリン
グさせ、カップリングは３０〜６０分間行う。操作の最
後に、ＤＭＦ２ｍｌで２回、ジクロロメタン（ＤＣＭ）
４ｍｌで１回、イソプロパノール２ｍｌで１回、及びＤ
ＭＦ２ｍｌで６回洗浄を行う。

【００４８】b) ＮＨ₂−Ａｒｇ−Ｚaa' −Ｒ²の製造この段階では、ピペリジン：ＤＭＦ混合物（１：１）
２．５ｍｌで３回それぞれ５．５〜１０分間ＦＭＯＣ基
の開裂を行う。この操作の後、ＤＭＦ２ｍｌで２回、Ｄ
ＣＭ４ｍｌで１回、イソプロパノール２ｍｌで１回、及
びＤＭＦ２ｍｌで６回洗浄を行う。

【００４９】c) ＰｈｅΨ（ＰＯ（ＯＲ³）ＣＨ₂）Ｘ
aa' −Ａｒｇ−Ｚaa' −Ｒ²（但し、Ｘaa' ＝Ｇｌｙ）
の製造この段階では、例１で得られたシントン１を用い、これ
を前段階で得られた生成物ＮＨ₂−Ａｒｇ−Ｍｅｔ−Ｒ
²とカップリングさせる。このカップリングのため、シ
ントン１１．５当量、ＨＢＴＵ３当量、ＤＩＰＥＡ
４当量、及びＤＭＦ１．５ｍｌを用い、反応を６０
分間行う。この後に、ＤＭＦ２ｍｌで２回、ＤＣＭ４ｍ
ｌで１回、イソプロパノール２ｍｌで１回、ＤＭＦ２ｍ
ｌで６回洗浄する。

【００５０】d) Ｚ−ＰｈｅΨ（ＰＯ（ＯＲ³）Ｃ
Ｈ₂）Ｘaa' −Ａｒｇ−Ｚaa' ＯＨの製造この段階では、ペプチドを固相Ｒ²から分離するのであ
り、開裂は酢酸、トリフルオロエタノール（ＴＦＥ）及
びＤＣＭ（２：２：６）の混合物５ｍｌで行う。１２０
分間接触させた後、ＤＣＭ１０ｍｌで洗浄し、乾燥を行
って乾固する。

【００５１】e) ペプチド１の製造この段階では、アダマンチル基Ｒ³が、下記の方法で操
作することによって除去される。前段階で得られたペプ
チドを、５０〜６０％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、５
％フェノール、５％水、５％チオアニソール、２．５％
エタンジチオール、及び４２．５〜３２．５％ＤＣＭを
含む混合物２．５ｍｌと接触させ、４０〜１８０分間操
作する。次に、これを乾燥して乾固し、重炭酸ナトリウ
ム３当量を水２ｍｌに溶解したもので処理し、不純物を
ジエチルエーテルに抽出する。得られた生成物を、次に
凍結乾燥する。

【００５２】開裂段階では、前記混合物の代わりに、５
０〜６０％ＴＦＡ、５％水及び４５〜３５％ＤＣＭの混
合物２．５ｍｌを用いることができる。得られたペプチ
ド１は下記の特性を有する。Ｒｆ＝０．７（プロパノール：水系、６４：３６）、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）：保持時間１
９．５分、線形グラディエント＝２８分、溶離剤Ａ
（０．１％トリフルオロ酢酸ＴＦＡを有する水性溶液）
及び溶離剤Ｂ（０．１％ＴＦＡを含む６５％アセトニト
リル水性溶液）。

【００５３】例５この例では、例４と同じ操作手順を行い、付表１に示し
たペプチド２〜２１を製造する。

【００５４】例６この例では、ペプチド１〜２１の生物学的活性を試験し
て、エンドペプチダーゼ２４−１５に対する阻害効果を
測定し、下記の方法で操作する。既知のエンドペプチダ
ーゼ２４−１５基質であるニューロテンシン２ナノモル
（２０マイクロモル／ｌ）を、トリス−ＨＣｌ緩衝液５
０ｎＭ、ｐＨ７．５１００μｌの最終容積中で精製した
エンドペプチダーゼ２４−１５７μｇと共に、阻害剤
の不在において（コントロール）または１０^-11〜１０
^-7モル／ｌの濃度で試験したペプチドの存在下にて、３
７℃で１時間インキュベーションする。１時間のインキ
ュベーションの後、溶液をＨＰＬＣで分析する。この分
析に基づいて、試験したペプチドの阻害定数Ｋｉを決定
する。得られた結果を、表１に示す。

【表１】ペプチド式 Ki24-15 Ki24-16 選択性 (nM) (nM) 1 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Gly-Arg-Met 0.35 132 377 2 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Gly-Arg-Nle 1.6 213 135 3 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Gly-Arg-Ala 2.2 201 91 4 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Gly-Arg-Phe 2.7 1103 409 5 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Gly-Arg-Tyr 3.6 596 165 6 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Gly-Arg-Leu 5.0 846 169 7 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Gly-Arg-Gln 6.1 690 113 8 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Gly-Arg-Val 9.3 1128 121 9 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Gly-Arg-Ile 9.6 589 61 10 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Gly-Arg-Trp 13.1 2664 203 11 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Gly-Arg-Gly 13.8 1661 120 12 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Gly-Arg-Arg 14.0 2037 145 13 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Gly-Arg-Asn 19.5 1380 71 14 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Gly-Arg-His 23.2 3009 129 15 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Gly-Arg-Ser1 28.8 2057 87 16 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Gly-Arg-Ser2 32.0 1379 43 17 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Gly-Arg-Thr 35.2 3636 103 18 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Gly-Arg-Lys 138 25700 186 19 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Gly-Arg-Glu 163 8149 50 20 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Gly-Arg-Asp 352 20373 58 21 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Gly-Arg-Pro 3520 36670 10

【００５５】例７この例では、エンドペプチダーゼ２４−１６に対する本
発明のペプチドの阻害効果を検討する。

【００５６】この目的のため、既知のエンドペプチダー
ゼ２４−１６基質であるニューロテンシン２ナノモル
（２０マイクロモル／ｌ）を、トリス−ＨＣｌ緩衝液５
０ｍＭ、ｐＨ７．５１００μｌの最終容積中で精製し
たエンドペプチダーゼ２４−１６８μｇと共に、ペプ
チドの不在下で（コントロール）または１０^-11〜１０
^-7モル／ｌの濃度で試験したペプチドの存在下にて、３
０℃で１時間インキュベーションする。１時間のインキ
ュベーションの後、溶液をＨＰＬＣで分析し、試験した
ペプチドの阻害定数Ｋｉを決定する。得られた結果を、
表１に示す。

【００５７】この表には、エンドペプチダーゼ２４−１
６に対するペプチドの選択性、すなわち比率Ｋｉ_24-16
／Ｋｉ_24-15も示している。表１の結果は、特にペプチ
ドの最終アミノ酸がＭｅｔ、Ｎｌｅ、Ａｌａ、Ｐｈｅ、
Ｔｙｒ、ＬｅｕまたはＧｌｎであるときには、極めて有
効なペプチドが得られることを示している。

【００５８】例えば、ペプチド１〜７では、既知の阻害
剤Ｃｐｐ−ＡｌａＰｒｏ−Ｐｈｅ−ｐＡｂよりも有効
な阻害剤が得られ、Dando ら、Biochem. J., 294, 199
3, pp451-457に記載のように、ラットのエンドペプチダ
ーゼ２４−１５に対しては、後者の阻害定数は７ｎＭで
ある。

【００５９】例８この例では、シントン２を用いること以外は例４の操作
手順に従って、式Ｚ−ＰｈｅΨ（ＰＯ₂ＣＨ₂）Ａｌａ
−Ｌｙｓ−Ｚaa' ＯＨのペプチドを製造する。

【００６０】次いで、例６及び７の操作手順に従い、エ
ンドペプチダーゼ２４−１５及び場合によってはエンド
ペプチダーゼ２４−１６に対するこれらのペプチドの阻
害効果を試験する。得られた結果を表２に示す。これら
の結果は、ペプチド２２〜３４が極めて強力なエンドペ
プチダーゼ２４−１５阻害剤であることを示している。

【表２】ペプチド式 Ki24-15 Ki24-16 選択性 (nM) (nM) 22 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Ala-Lys-Met 0.115 225 1957 23 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Ala-Lys-Nle 0.63 162 257 24 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Ala-Lys-Ala 0.83 436 525 25 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Ala-Lys-Phe 1.00 1652 1652 26 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Ala-Lys-Leu 1.82 893 491 27 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Ala-Lys-Ile 1.94 1265 652 28 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Ala-Lys-Gln 2.18 29 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Ala-Lys-Tyr 2.30 30 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Ala-Lys-Val 2.60 31 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Ala-Lys-Arg 3.17 32 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Ala-Lys-Asn 4.90 33 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Ala-Lys-Gly 5.10 34 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Ala-Lys-Trp 5.78 35 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Ala-Lys-His 7.13 36 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Ala-Lys-Thr 10.1 37 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Ala-Lys-Ser 11.9 38 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Ala-Lys-Lys 26.9 39 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Ala-Lys-Glu 53.5 40 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Ala-Lys-Asp 109.0 41 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Ala-Lys-Pro 1030

【００６１】比較のため、Ｚ−ＰｈｅΨ（ＰＯ₂Ｃ
Ｈ₂）Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｚaa' またはＺ−ＰｈｅΨ（Ｐ
Ｏ₂ＣＨ₂）Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｚaa' （式中、Ｚaa' は
２０個の天然アミノ酸を表わす）の型の混合物と比較し
たＺ−ＰｈｅΨ（ＰＯ₂ＣＨ₂）Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｚaa'
ＯＨまたはＺ−ＰｈｅΨ（ＰＯ₂ＣＨ₂）Ａｌａ−Ｎ
ｌｅ−Ｚaa' ＯＨの型のペプチドの混合物は、エンドペ
プチダーゼ２４−１６の阻害に対して、阻害定数Ｋｉが
遥かに小さく、選択性も極めて低いことに留意すべきで
ある。ペプチド Ki24-15 Ki24-16 選択性 (nM) (nM) Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Ala-Pro-Zaa'OH 35 60 1.7 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Ala-Nle-Zaa'OH 52 330 6.3 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Ala-Lys-Zaa'OH 3.5 900 257 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Ala-Lys-Zaa'OH 3.5 1600 457 したがって、ＡｒｇまたはＬｙｓをＰｒｏまたはＮｌｅ
に置換すると、エンドペプチダーゼ２４−１５に対して
最早余り選択的ではない阻害剤が得られることが判る。

【００６２】例９この例では、ペプチド４２及び４３に対してシントン２
から、ペプチド４４に対してシントン３から出発するこ
と以外は、例４の操作手順によりペプチド４２、４３及
び４４を製造する。

【００６３】エンドペプチダーゼ２４−１５及びエンド
ペプチダーゼ２４−１６に対して得られたペプチドの阻
害特性を、例６及び７の操作手順を採用して試験する。
結果を、表３に示す。

【表３】ペプチド式 Ki24-15 Ki24-16 選択性 (nM) (nM) 42 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Ala-Arg-Met 0.067 88 1312 1 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Gly-Arg-Met 0.35 132 377 43 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Ala-Arg-Phe 0.158 527 3335 4 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Gly-Arg-Phe 2.7 1103 409 44 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Leu-Arg-Phe 14 2285 164 25 Z-Phe Ψ（PO₂CH₂）Ala-Lys-Phe 1 1652 1652

【００６４】この表には、ペプチド４２、４３及び４４
と同じ鎖末端のアミノ酸を有するペプチド１、４及び２
５で得られた結果も示している。

【００６５】この表の結果は、ペプチド４３Ｚ−
_(D-L)ＰｈｅΨ（ＰＯ₂ＣＨ₂）_(D-L)Ａｌａ−Ａｒｇ
−ＰｈｅＯＨがエンドペプチダーゼ２４−１５に対して
知られている最も強力な阻害剤であり、極めて選択的で
あることを示している。エンドペプチダーゼ２４−１６
に対する選択性因子は３３３５である。例えば、既知の
阻害剤であるＣｐｐ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ｐＡｂ
は、ラットのエンドペプチダーゼ２４−１５に対してＫ
ｉは７ｎＭであるが、同じ条件下では４個のジアステレ
オ異性体を含む阻害剤Ｚ−_(D-L)ＰｈｅΨ（ＰＯ₂ＣＨ
₂）_(D-L)Ａｌａ−Ａｒｇ−ＰｈｅＯＨの混合物は、Ｋ
ｉが０．１６ｎＭである。これは混合物であるので、こ
れらのジアステレオ異性体の一つはＫｉが約４０ｐＭで
あり、すなわち生成物Ｃｐｐ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−ｐＡｂ
との親和性の差は約１７５であると予想することができ
る。同様に、ペプチド４２Ｚ−_(D-L)ＰｈｅΨ（ＰＯ
₂ＣＨ ₂）_(D-L)Ａｌａ−Ａｒｇ−ＭｅｔＯＨは、本発
明による試験したペプチドの最も強力な混合物を構成
し、Ｋｉは０．０６７ｎＭである。この混合物のジアス
テレオ異性体の一つは、明らかに親和性が約１５ｐＭで
あり、すなわち阻害力は４４０の因子だけ増加した。ま
た、これらのペプチドは総て、エンドペプチダーゼ２４
−１５に対して極めて選択的である。

【００６６】最後に、異なる種（ラット、ニワトリ、ヒ
ト）のエンドペプチダーゼ２４−１５の間の特異性は変
化せず、本発明によるペプチドはヒトにおけるエンドペ
プチダーゼ２４−１５の強力な阻害剤である点に留意す
ることが重要である。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明による酵素基質または阻害剤の酵素との
構造及び相互作用を示す。

【図２】本発明による酵素基質または阻害剤の酵素との
構造及び相互作用を示す。

【図３】本発明による酵素基質または阻害剤の酵素との
構造及び相互作用を示す。

【図４】本発明によるペプチド誘導体を合成する様々な
段階を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ０７Ｋ 1/04 Ａ６１Ｋ 37/64 ＡＡＨ 1/06 ＡＡＭ 14/81 ＡＢＵＣ１２Ｎ 9/99 ＡＤＵ (72)発明者アサナシオスイオタキスギリシャ国アテネ，エイジーパラスケビ，リュパラディソウ７

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】アミノ酸配列 −ＰｈｅΨ（ＰＯ₂ＣＨ₂）−_(L,D)Ｘaa' −Ｙaa' −
Ｚaa' − （式中、Ψ（ＰＯ₂ＣＨ₂）は、ペプチド結合（ＣＯＮ
Ｈ）がホスフィン結合（ＰＯ₂ＣＨ₂）に置換されてい
ることを表わし、Ｘaa' およびＺaa' は、同一であるか
または異なるものであることができ、それぞれの場合に
天然アミノ酸またはアミノ擬酸を表わし、Ｙaa' は、Ａ
ｒｇまたはＬｙｓを表わす）を有するペプチド誘導体。
【請求項２】式Ｚ−_(L,D)ＰｈｅΨ（ＰＯ₂ＣＨ₂）−_(L,D)Ｘaa' −Ａｒｇ−Ｚaa' ＯＲ¹ (I) およびＺ−_(L,D)ＰｈｅΨ（ＰＯ₂ＣＨ₂）−_(L,D)Ｘaa' −Ｌｙｓ−Ｚaa' ＯＲ¹ (II) （式中、Ｚは、アセチルまたはベンジルオキシカルボニ
ル基を表わし、Ψ（ＰＯ₂ＣＨ₂）は、ペプチド結合
（ＣＯ−ＮＨ）がホスフィン結合（ＰＯ₂ＣＨ₂）に置
換されていることを表わし、Ｘaa' およびＺaa' は、同
一であるかまたは異なるものであることができ、それぞ
れの場合に天然アミノ酸またはアミノ擬酸を表わし、Ｒ
¹は、水素原子、ＮＨ₄ ⁺、または薬学上許容可能な金
属を表わす）の一つによって表わされる、ペプチド誘導
体。
【請求項３】Ｘaa' が、Ｇｌｙ、ＡｌａまたはＬｅｕ
を表わす、請求項１に記載のペプチド誘導体。
【請求項４】Ｚaa' が、Ｍｅｔ、Ｎｌｅ、Ａｌａまた
はＰｈｅを表わす、請求項１に記載のペプチド誘導体。
【請求項５】式Ｚ−_(L,D)ＰｈｅΨ（ＰＯ₂ＣＨ₂）−_(L,D)Ｘaa' −ｌｙｓ−Ｚaa' ＯＲ¹ (II) （式中、Ｚは、ベンジルオキシカルボニル基を表わし、
Ψ（ＰＯ₂ＣＨ₂）は、ペプチド結合（ＣＯ−ＮＨ）が
ホスフィン結合（ＰＯ₂ＣＨ₂）に置換されていること
を表わし、Ｘaa' は、Ｇｌｙ、ＡｌａまたはＬｅｕを表
わし、Ｚaa' は、Ｍｅｔ、Ｎｌｅ、Ａｌａ、Ｐｈｅ、ま
たはＩｌｅを表わし、Ｒ¹は、水素原子、ＮＨ₄ ⁺、ま
たは薬学上許容可能な金属を表わす）によって表わされ
る、ペプチド誘導体。
【請求項６】Ｘaa' がＡｌａを表わし、Ｚaa' がＭｅ
ｔを表わし、Ｒ¹が水素原子を表わす、請求項５に記載
のペプチド誘導体。
【請求項７】式Ｚ−_(L,D)ＰｈｅΨ（ＰＯ₂ＣＨ₂）−_(L,D)Ｇｌｙ−
Ａｒｇ−Ｍｅｔ−ＯＨ（式中、Ｚはベンジルオキシカルボニル基を表わし、Ψ
（ＰＯ₂ＣＨ₂）は、ペプチド結合（ＣＯ−ＮＨ）がホ
スフィン結合（ＰＯ₂−ＣＨ₂）に置換されていること
を表わす）のペプチド誘導体。
【請求項８】式Ｚ−_(L,D)ＰｈｅΨ（ＰＯ₂ＣＨ₂）−_(L,D)Ａｌａ−
Ａｒｇ−Ｚaa' ＯＨ（式中、Ｚはベンジルオキシカルボニル基を表わし、Ψ
（ＰＯ₂ＣＨ₂）は、ペプチド結合（ＣＯ−ＮＨ）がホ
スフィン結合（ＰＯ₂ＣＨ₂）に置換されていることを
表わし、Ｚaa' はＭｅｔまたはＰｈｅを表わす）のペプ
チド誘導体。
【請求項９】式Ｚ−_(L,D)ＰｈｅΨ（ＰＯ₂ＣＨ₂）−_(L,D)Ｘaa' −Ａｒｇ−Ｚaa' ＯＲ (I) （式中、Ｚはベンジルオキシカルボニル基を表わし、Ψ
（ＰＯ₂ＣＨ₂）は、ペプチド結合（ＣＯ−ＮＨ）がホ
スフィン結合（ＰＯ₂−ＣＨ₂）に置換されていること
を表わし、Ｘaa' およびＺaa' は、同一であるかまたは
異なるものであることができ、それぞれ天然または合成
アミノ酸を表わし、Ｒ¹は、水素原子、ＮＨ₄ ⁺、また
は薬学上許容可能な金属を表わす）を満たすペプチド誘
導体の製造法において、式、ＮＨ₂−Ａｒｇ−Ｚaa' Ｒ² （式中、Ｚaa' は前記定義の意味を有し、Ｒ²は固相で
ある）の固相に固定したジペプチドと、式Ｚ−_(L,D)ＰｈｅΨ（ＰＯ（ＯＲ³）ＣＨ₂）−_(L,D)
Ｘaa' ＯＨ（式中、Ｚ、Ψ（ＰＯ₂ＣＨ₂）およびＸaa' は前記で
定義した通りであり、Ｒ³はアダマンチル基を表わす）
のジペプチドとカップリングした後、式Ｚ−_(L,D)ＰｈｅΨ（ＰＯ（ＯＲ³）ＣＨ₂）−_(L,D)
Ｘaa' −Ａｒｇ−Ｚaa'Ｒ² のペプチド誘導体を固相Ｒ²から分離し、基Ｒ³を酸処
理によって除去することから成ることを特徴とする、方
法。
【請求項１０】式(II) Ｚ−_(L,D)ＰｈｅΨ（ＰＯ₂ＣＨ₂）−_(L,D)Ｘaa' −Ｌｙｓ−Ｚaa' ＯＲ¹ (II) （式中、Ｚはベンジルオキシカルボニル基を表わし、Ψ
（ＰＯ₂ＣＨ₂）は、ペプチド結合（ＣＯ−ＮＨ）がホ
スフィン結合（ＰＯ₂−ＣＨ₂）に置換されていること
を表わし、Ｘaa' およびＺaa' は、同一であるかまたは
異なるものであることができ、それぞれ天然または合成
アミノ酸を表わし、Ｒ¹は、水素原子、ＮＨ₄ ⁺、また
は薬学上許容可能な金属を表わす）を満たすペプチド誘
導体の製造法において、式、ＮＨ₂−Ｌｙｓ−Ｚaa' Ｒ² （式中、Ｚaa' は前記定義の意味を有し、Ｒ²は固相で
ある）の固相に固定したジペプチドを、式Ｚ−_(L,D)ＰｈｅΨ（ＰＯ（ＯＲ³）ＣＨ₂）−_(L,D)
Ｘaa' ＯＨ（式中、Ｚ、Ψ（ＰＯ₂ＣＨ₂）およびＸaa' は前記で
定義した通りであり、Ｒ³はアダマンチル基を表わす）
のジペプチドにカップリングした後、式Ｚ−_(L,D)ＰｈｅΨ（ＰＯ（ＯＲ³）ＣＨ₂）−_(L,D)
Ｘaa' −Ｌｙｓ−Ｚaa'Ｒ² のジペプチド誘導体を固相Ｒ²から分離し、基Ｒ³を酸
処理によって除去することから成ることを特徴とする、
方法。
【請求項１１】エンドペプチダーゼ２４−１５阻害剤
を取り込む薬学組成物において、前記阻害剤が請求項１
に記載のペプチド誘導体であることを特徴とする、薬学
組成物。
【請求項１２】低体温症薬、鎮痛薬、または動脈性高
血圧、癌またはアルツハイマー症治療薬として用いられ
る請求項１１に記載の薬学組成物。
【請求項１３】ペプチド誘導体が、式Ｚ−_(L,D)ＰｈｅΨ（ＰＯ₂ＣＨ₂）−_(L,D)Ｘaa' −Ａｒｇ−Ｚaa' ＯＲ¹ (I) およびＺ−_(L,D)ＰｈｅΨ（ＰＯ₂ＣＨ₂）−_(L,D)Ｘaa' −Ｌｙｓ−Ｚaa' ＯＲ¹ (II) （式中、Ｚは、アセチルまたはベンジルオキシカルボニ
ル基を表わし、Ψ（ＰＯ₂ＣＨ₂）は、ペプチド結合
（ＣＯ−ＮＨ）がホスフィン結合（ＰＯ₂ＣＨ₂）に置
換されていることを表わし、Ｘaa' およびＺaa' は、同
一であるかまたは異なるものであることができ、それぞ
れの場合に天然アミノ酸またはアミノ擬酸を表わし、Ｒ
¹は、水素原子、ＮＨ₄ ⁺、または薬学上許容可能な金
属を表わす）の一つを満足する、請求項１１に記載の組
成物。
【請求項１４】ペプチド誘導体が、式Ｚ−_(L,D)ＰｈｅΨ（ＰＯ₂ＣＨ₂）−_(L,D)Ｘaa' ＬｙｓＺaa' ＯＲ¹ (II) （式中、Ｚは、ベンジルオキシカルボニル基を表わし、
Ψ（ＰＯ₂ＣＨ₂）は、ペプチド結合（ＣＯ−ＮＨ）が
ホスフィン結合（ＰＯ₂−ＣＨ₂）に置換されているこ
とを表わし、Ｘaa' は、Ｇｌｙ、ＡｌａまたはＬｅｕを
表わし、Ｚaa' は、Ｍｅｔ、Ｎｌｅ、Ａｌａ、Ｐｈｅ、
ＬｅｕまたはＩｌｅを表わし、Ｒ¹は、水素原子、ＮＨ
₄ ⁺、または薬学上許容可能な金属を表わす）を満足す
る、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１５】Ｘaa' がＡｌａを表わし、Ｚaa' がＭ
ｅｔを表わし、Ｒ¹が水素原子を表わす、請求項１３に
記載の組成物。
【請求項１６】ペプチド誘導体が、式Ｚ−_(L,D)ＰｈｅΨ（ＰＯ₂ＣＨ₂）−_(L,D)Ｇｌｙ−
Ａｒｇ−Ｍｅｔ−ＯＨ（式中、Ｚは、ベンジルオキシカルボニル基を表わし、
Ψ（ＰＯ₂ＣＨ₂）は、ペプチド結合（ＣＯ−ＮＨ）が
ホスフィン結合（ＰＯ₂ＣＨ₂）に置換されていること
を表わす）を満足する、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１７】ペプチド誘導体が、式Ｚ−_(L,D)ＰｈｅΨ（ＰＯ₂ＣＨ₂）−_(L,D)Ａｌａ−
Ａｒｇ−Ｚaa' ＯＨ（式中、Ｚは、ベンジルオキシカルボニル基を表わし、
Ψ（ＰＯ₂ＣＨ₂）は、ペプチド結合（ＣＯ−ＮＨ）が
ホスフィン結合（ＰＯ₂ＣＨ₂）に置換されていること
を表わし、Ｚaa' は、ＭｅｔまたはＰｈｅを表わす）を
満足する、請求項１１に記載の組成物。