JPS6242706A - ヌクレオシドとヌクレオチドの分離法 - Google Patents
ヌクレオシドとヌクレオチドの分離法Info
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- JPS6242706A JPS6242706A JP18118585A JP18118585A JPS6242706A JP S6242706 A JPS6242706 A JP S6242706A JP 18118585 A JP18118585 A JP 18118585A JP 18118585 A JP18118585 A JP 18118585A JP S6242706 A JPS6242706 A JP S6242706A
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- nucleosides
- nucleotides
- nucleoside
- synthetic adsorbent
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分針〕
本発明は、ヌクレオシドとヌクレオチドを分離する方法
に関するものであり、詳しくは、ヌクレオシドとスクレ
オチドｌ含む混合液から合成吸着剤と強塩基性陰イオン
交換樹脂を充填したカラムを用いてヌクレオシドとヌク
レオチドを相互分離する方法に関する。
に関するものであり、詳しくは、ヌクレオシドとスクレ
オチドｌ含む混合液から合成吸着剤と強塩基性陰イオン
交換樹脂を充填したカラムを用いてヌクレオシドとヌク
レオチドを相互分離する方法に関する。
各種のヌクレオシドまたはヌクレオチドは、デオ中シリ
ボ核醸あるいはリボ核酸の那水分解、酵素的分解、発酵
法等により製造されているが、いずれの方法によっても
各種のヌクレオシド、ヌクレオチドの混合物として得ら
れ、目的とするヌクレオシドまたはヌクレオチドを単独
に得られることはほとんどない。
ボ核醸あるいはリボ核酸の那水分解、酵素的分解、発酵
法等により製造されているが、いずれの方法によっても
各種のヌクレオシド、ヌクレオチドの混合物として得ら
れ、目的とするヌクレオシドまたはヌクレオチドを単独
に得られることはほとんどない。
従来、ヌクレオシドまたはヌクレオチドの凰離精製法と
して、沈澱法、塩析法、溶媒抽出法。
して、沈澱法、塩析法、溶媒抽出法。
吸着法を各々組合せて、目的のヌクレオシドまたはヌク
レオチドを取得しているが、ヌクレオシドとヌクレオチ
ドの混合液から複数のヌクレオシド°及びヌクレオチド
を単離するｋは、多段の操作’ｌ’ｉ！Ｌ、複雑で収率
もかならずしも演足するものではない。
レオチドを取得しているが、ヌクレオシドとヌクレオチ
ドの混合液から複数のヌクレオシド°及びヌクレオチド
を単離するｋは、多段の操作’ｌ’ｉ！Ｌ、複雑で収率
もかならずしも演足するものではない。
本発明は、上記状況に鑑み、ヌクレオシドとヌクレオチ
ドの混合液からヌクレオシドとヌクレオチドを相互分離
する為の簡便で効率的な分離方法を提供することにある
。
ドの混合液からヌクレオシドとヌクレオチドを相互分離
する為の簡便で効率的な分離方法を提供することにある
。
本発明者らは、ヌクレオシドとヌクレオチドの混合液か
らヌクレオシドとヌクレオチドの相互分離方法について
鋭意検討した結果、ヌクレオシドとヌクレオチドの混合
液を合成吸着剤と強塩基性陰イオン交換樹脂とｔ各々充
填したカラムでこの順序であるいは逆の原序で順次処理
することにより、簡便で効石的にヌクレオシドとヌクレ
オチドの相互分離ができることを見出し、本発明に到達
した。
らヌクレオシドとヌクレオチドの相互分離方法について
鋭意検討した結果、ヌクレオシドとヌクレオチドの混合
液を合成吸着剤と強塩基性陰イオン交換樹脂とｔ各々充
填したカラムでこの順序であるいは逆の原序で順次処理
することにより、簡便で効石的にヌクレオシドとヌクレ
オチドの相互分離ができることを見出し、本発明に到達
した。
本発明を更に詳しく説明すると、複数のヌクレオシドと
ヌクレオチドを含む混合液ヲ合成吸着剤と強塩基性陰イ
オン交換樹脂とを各々充填したカラムに順次通液し、合
成吸着剤でヌクレオシドを選択的に吸着させ、強塩基性
陰イオン交換樹脂でヌクレオチドを選択的に吸着させた
後、各々のカラムに通常の溶離剤を通液して。
ヌクレオチドを含む混合液ヲ合成吸着剤と強塩基性陰イ
オン交換樹脂とを各々充填したカラムに順次通液し、合
成吸着剤でヌクレオシドを選択的に吸着させ、強塩基性
陰イオン交換樹脂でヌクレオチドを選択的に吸着させた
後、各々のカラムに通常の溶離剤を通液して。
ヌクレオシド及びヌクレオチド！溶離回収することによ
り、ヌクレオシドとヌクレオチド１分離回収することヲ
特徴とするヌクレオシドとヌクレオチドの相互分離法で
ある。
り、ヌクレオシドとヌクレオチド１分離回収することヲ
特徴とするヌクレオシドとヌクレオチドの相互分離法で
ある。
本発明に於いて、ヌクレオシドとしては、アデノシン、
グアノシン、イノシン、シチジン、ウリジン、チミジン
などのモノリボヌクレオシドの他に、モツプオキシリボ
ヌクレオシドも含まれ、ヌクレオチドとしては、前述の
ヌクレオシドの糖部分がリン酸１分子又はそれ以上とエ
ステルン作っているモノリボヌクレオチドとモノデオ中
シリボヌクレオチドを主として対象とするが、ジー又は
トリヌクレオチド等のオリゴヌクレオチドであってもよ
い。混合溶液としては、ｆ７ヌクレオシドと−ｆ／ヌク
レオチドを各コ成分以上含み、且つ各成分が１０−１０
，０００ｍ９／ｌの濃度の混合液からの分離に好適であ
る。
グアノシン、イノシン、シチジン、ウリジン、チミジン
などのモノリボヌクレオシドの他に、モツプオキシリボ
ヌクレオシドも含まれ、ヌクレオチドとしては、前述の
ヌクレオシドの糖部分がリン酸１分子又はそれ以上とエ
ステルン作っているモノリボヌクレオチドとモノデオ中
シリボヌクレオチドを主として対象とするが、ジー又は
トリヌクレオチド等のオリゴヌクレオチドであってもよ
い。混合溶液としては、ｆ７ヌクレオシドと−ｆ／ヌク
レオチドを各コ成分以上含み、且つ各成分が１０−１０
，０００ｍ９／ｌの濃度の混合液からの分離に好適であ
る。
本発明に於いて、便用される合成吸着剤としては１種々
の有機性の重合性モノマー７重合。
の有機性の重合性モノマー７重合。
共重合または縮重合することによって得られた架橋重合
体あるいは程々の重合性モノマーを重合や縮重合した後
、後架橋して得られた架橋重合体からなり、有為量の比
表面積及び細孔容積ｔもつものであり、通常はコｏ ｏ
ｒｔ？／９以上、好ましくは３００〜／、ｓ ｏ ｏ
ｚｉｐの比表面積を有し、少なくとも０． ／ ｄ／
ｇ以上、好ましくはｏ、５ＩＬＩ／１１〜／、 ｊ ｒ
ａｔ／ｆｉの細孔容積を有するものが望ましい。
体あるいは程々の重合性モノマーを重合や縮重合した後
、後架橋して得られた架橋重合体からなり、有為量の比
表面積及び細孔容積ｔもつものであり、通常はコｏ ｏ
ｒｔ？／９以上、好ましくは３００〜／、ｓ ｏ ｏ
ｚｉｐの比表面積を有し、少なくとも０． ／ ｄ／
ｇ以上、好ましくはｏ、５ＩＬＩ／１１〜／、 ｊ ｒ
ａｔ／ｆｉの細孔容積を有するものが望ましい。
更に、ハロゲン原子を含有量がｊ−ｊＯ重量優の範四と
なる様にハクゲン化された合成吸着剤は、ヌクレオシド
に対する吸着力がより強（。
なる様にハクゲン化された合成吸着剤は、ヌクレオシド
に対する吸着力がより強（。
一層好適に使用される。
又、ヌクレオシドとヌクレオチドの混合液中に、不純物
として原料等に由来するポリヌクレオチドや蛋白質等が
共存する原液を処理する場合には、これらの高分子量物
質の吸着が起こり、ヌクレオシドの溶離回収液中に不純
物として混入し、ヌクレオシドの純度の低下をきたす。
として原料等に由来するポリヌクレオチドや蛋白質等が
共存する原液を処理する場合には、これらの高分子量物
質の吸着が起こり、ヌクレオシドの溶離回収液中に不純
物として混入し、ヌクレオシドの純度の低下をきたす。
又、蛋白質等は溶離され雛い為、吸脱着操作を繰り返す
と蛋白質等が合成吸着剤に蓄積し、ヌクレオシドの散漫
性能が低下する。この様な高分子量物質の吸着による性
能低下の少ない合成吸着剤として、少なくともコｏ ｏ
ｒｒ／９以上の比表面積を有し、且つ水置換性と窒素
吸着法により測、定した細孔径：１００＾以下の径ｔも
つ細孔の容積が総細孔容積の６０％以上！有する様な細
孔分布ｌもつ合成吸着剤が好適に使用される。
と蛋白質等が合成吸着剤に蓄積し、ヌクレオシドの散漫
性能が低下する。この様な高分子量物質の吸着による性
能低下の少ない合成吸着剤として、少なくともコｏ ｏ
ｒｒ／９以上の比表面積を有し、且つ水置換性と窒素
吸着法により測、定した細孔径：１００＾以下の径ｔも
つ細孔の容積が総細孔容積の６０％以上！有する様な細
孔分布ｌもつ合成吸着剤が好適に使用される。
この様な合成吸着剤としては、市販品として例えば、ダ
イヤイオンＨＰ１０％−〇、３０、参〇％！０、セパビ
ーズ８Ｐコ０６１．２０り。
イヤイオンＨＰ１０％−〇、３０、参〇％！０、セパビ
ーズ８Ｐコ０６１．２０り。
１００、ＹＯＯＣいずれも三菱化成工業＠製；登録商標
）等が挙げられる。
）等が挙げられる。
本発明に於いて便用される強塩基性陰イオン交換樹脂は
、四級アンモニウム基ン交換基としてもつものであり、
市販品として例えばダイヤイオン８Ａ／θＡ％ＳＡ、２
（７Ａ、 ＰＡ３１ｂ、ＦＡ参／弘Ｃ以上、三菱化成工
業■製］アンバーライト工Ｉ’ｊＡ−９００，工Ｉ’Ｌ
Ａ−ｑ１０．工ＨＡ−１４１１Ｃ以上ローム・アンド・
ハース社製、商標フ等が挙げられる。
、四級アンモニウム基ン交換基としてもつものであり、
市販品として例えばダイヤイオン８Ａ／θＡ％ＳＡ、２
（７Ａ、 ＰＡ３１ｂ、ＦＡ参／弘Ｃ以上、三菱化成工
業■製］アンバーライト工Ｉ’ｊＡ−９００，工Ｉ’Ｌ
Ａ−ｑ１０．工ＨＡ−１４１１Ｃ以上ローム・アンド・
ハース社製、商標フ等が挙げられる。
本発明に於ける処理方法としては、通常の合成吸着剤及
びイオン交換樹脂による処理方法〔吸着操作、溶離操作
〕であれば、いずれの方法でも良い。又、合成吸着剤と
強塩基性陰イオン交換樹脂との通液順序は、どちらが先
きでも良い。湖、本庄に於いて、合成吸着剤で選択的に
ヌクレオシドが吸着され、強塩基性陰イオン交換樹脂で
選択的にヌクレオチドが吸着されるが、更に合成吸着剤
によるヌクレオシド成分毎の選択性あるいは１強塩基性
陰イオン交換樹脂によるヌクレオチド成分毎の選択性を
利用して、強塩基性陰イオン交換樹脂乞前段とすれば、
強塩基性陰イオン交換樹脂の処理液はヌクレオシド群だ
ゆの溶液となり、後段の合成吸着剤に通液する方法とし
て先端分離法を採用すれば、ヌクレオシドとヌクレオチ
ドとの分離に加えて、一種類のヌクレオシド成分を単離
精製することができる。強塩基性陰イオン交換樹脂と合
成吸着剤との通液順序を変えれば、同様にしてヌクレオ
シドとヌクレオチドとの分離に加えて一種類のヌクレオ
チド成分を凰離精製することができる。
びイオン交換樹脂による処理方法〔吸着操作、溶離操作
〕であれば、いずれの方法でも良い。又、合成吸着剤と
強塩基性陰イオン交換樹脂との通液順序は、どちらが先
きでも良い。湖、本庄に於いて、合成吸着剤で選択的に
ヌクレオシドが吸着され、強塩基性陰イオン交換樹脂で
選択的にヌクレオチドが吸着されるが、更に合成吸着剤
によるヌクレオシド成分毎の選択性あるいは１強塩基性
陰イオン交換樹脂によるヌクレオチド成分毎の選択性を
利用して、強塩基性陰イオン交換樹脂乞前段とすれば、
強塩基性陰イオン交換樹脂の処理液はヌクレオシド群だ
ゆの溶液となり、後段の合成吸着剤に通液する方法とし
て先端分離法を採用すれば、ヌクレオシドとヌクレオチ
ドとの分離に加えて、一種類のヌクレオシド成分を単離
精製することができる。強塩基性陰イオン交換樹脂と合
成吸着剤との通液順序を変えれば、同様にしてヌクレオ
シドとヌクレオチドとの分離に加えて一種類のヌクレオ
チド成分を凰離精製することができる。
溶離に関して１合成吸着剤に対するヌクレオシドの吸着
挙動は、ヌクレオシドが非解離状態での吸着量に比べ解
離状態での吸着量が著しく小さい。この特性！巧みに利
用するごとくより、合成吸着剤に吸着した複数のヌクレ
オシド成分別回収することができる。詳細には、溶離液
として酸、アルカリ及びアルコール等の極性溶媒又は、
極性溶媒の混合液等により複数のヌクレオシドを溶離す
ることができるが、水とアルコールとの混合溶媒が好適
である。更に、合成吸着剤に吸着した各ヌクレオシドの
解離定数に着目して前記溶離液の単−又は混合液を適切
に選びＰＨの異なる溶離液で段階的に溶離することによ
り、複数のヌクレオシドを単離１回収することができる
。
挙動は、ヌクレオシドが非解離状態での吸着量に比べ解
離状態での吸着量が著しく小さい。この特性！巧みに利
用するごとくより、合成吸着剤に吸着した複数のヌクレ
オシド成分別回収することができる。詳細には、溶離液
として酸、アルカリ及びアルコール等の極性溶媒又は、
極性溶媒の混合液等により複数のヌクレオシドを溶離す
ることができるが、水とアルコールとの混合溶媒が好適
である。更に、合成吸着剤に吸着した各ヌクレオシドの
解離定数に着目して前記溶離液の単−又は混合液を適切
に選びＰＨの異なる溶離液で段階的に溶離することによ
り、複数のヌクレオシドを単離１回収することができる
。
−１、強塩基性陰イオン交換樹脂に吸着した複数のヌク
レオチドは、通常のアルカリ又は無機塩水溶液により溶
離することができる。
レオチドは、通常のアルカリ又は無機塩水溶液により溶
離することができる。
溶離操作後の合成吸着剤及び強塩基性陰イオン交換樹脂
は、水洗するだけで繰り返し！用することができ、工業
的に優れた分離方法である。
は、水洗するだけで繰り返し！用することができ、工業
的に優れた分離方法である。
以下、実施例により、より具体的に説明する。
実施例１
内径１ｏｔａのガラス製カラムに合成吸着剤セパビーズ
Ｆ３Ｆ、２０７ （三菱化成工業■製、臭素含有量３６
重量％、比表面８ｊ４１４（Ｏ１７ｇ、総細孔容積ｏ、
ｔｒｒｔｔｔｙｇ、 ｓ ｏ ＯＸ、以下の細孔容ｆｌ
Ｏ，ｌ、 ｔｄ／ｇ）を７７ｙｇｌ充填した。Ｃカラ
ムＡ）−万、内径１ｊｔ１ｍのガラス製カラムに強塩基
性陰イオン交換樹脂ダイヤイオンＳＡ２／ＡＣ三菱化成
工業■！１１３のｏ１型Ｙ／コｔｍＶ充填した。Ｃカラ
ムツノ 次ニ、アデノシンとグアノシンを各々ｉｚ。
Ｆ３Ｆ、２０７ （三菱化成工業■製、臭素含有量３６
重量％、比表面８ｊ４１４（Ｏ１７ｇ、総細孔容積ｏ、
ｔｒｒｔｔｔｙｇ、 ｓ ｏ ＯＸ、以下の細孔容ｆｌ
Ｏ，ｌ、 ｔｄ／ｇ）を７７ｙｇｌ充填した。Ｃカラ
ムＡ）−万、内径１ｊｔ１ｍのガラス製カラムに強塩基
性陰イオン交換樹脂ダイヤイオンＳＡ２／ＡＣ三菱化成
工業■！１１３のｏ１型Ｙ／コｔｍＶ充填した。Ｃカラ
ムツノ 次ニ、アデノシンとグアノシンを各々ｉｚ。
■／ｌ、シチジンー３′−モノリン酸〔よ’−ＣＭＦ）
とクリジン−３′−モノリン’ｒｌｔ （！ｒ’−ＵＭ
Ｐ ）！各々五次にカラムＢの順番で直列に通液した。
とクリジン−３′−モノリン’ｒｌｔ （！ｒ’−ＵＭ
Ｐ ）！各々五次にカラムＢの順番で直列に通液した。
カラムＡの下部からの流出液の一部を分取し、各成分の
濃度を高速液体クロマト法Ｃカラム：オクタデシル型シ
リカゲｙｖｔ、ｌｘ 、２ｒｏＬ、 展開液０．０１Ｍ
−ＫＨ，ＰＯ４＋４％ＭｅＯＨ（ｐ）Ｉ Ｊ−＆ ）、
展開液流速／ ｍ／ｍｉｎ、検出Ｕ’ＶＪｊ４ｔｎｍ）
テ測定した結果を第１図に、カラムＢからの流出液中の
各成分の濃度を測定した結果を第一図に示した。
濃度を高速液体クロマト法Ｃカラム：オクタデシル型シ
リカゲｙｖｔ、ｌｘ 、２ｒｏＬ、 展開液０．０１Ｍ
−ＫＨ，ＰＯ４＋４％ＭｅＯＨ（ｐ）Ｉ Ｊ−＆ ）、
展開液流速／ ｍ／ｍｉｎ、検出Ｕ’ＶＪｊ４ｔｎｍ）
テ測定した結果を第１図に、カラムＢからの流出液中の
各成分の濃度を測定した結果を第一図に示した。
第１図かられかるように、カラムＡからの流出液中には
１．！？’−ＣＭＦ、、ｔ’−ＵＭＰが通液初期から、
はぼ原液濃度で漏出してきたのに対して、グアノシンは
ｉ、ｔｌ、アデノシンは６．４Ｅ迄流出液中に検出され
ず、合成吸着剤はヌクレオシド！選択的に吸着した。
１．！？’−ＣＭＦ、、ｔ’−ＵＭＰが通液初期から、
はぼ原液濃度で漏出してきたのに対して、グアノシンは
ｉ、ｔｌ、アデノシンは６．４Ｅ迄流出液中に検出され
ず、合成吸着剤はヌクレオシド！選択的に吸着した。
−１、第一図かられかるようにカラムＢからの流出液中
には、グアノシンの漏出が２．３ｊかう始まりカラムＡ
からのグアノシンの破過のすぐ後に破過してきたのに対
して、ｊ５／−ＯＭＦは／ １１１９／ｌ 、 ｚ’−
ｏＭＰはＪ ！ｆＮ９／ｌ ｆ）定’ＭＨＩ出Ｙ：示す
が７．ＯＩｔ迄破過挙動奮示さず１強塩基性陰イオン交
換樹脂はヌクレオチドを選択的に吸着した。
には、グアノシンの漏出が２．３ｊかう始まりカラムＡ
からのグアノシンの破過のすぐ後に破過してきたのに対
して、ｊ５／−ＯＭＦは／ １１１９／ｌ 、 ｚ’−
ｏＭＰはＪ ！ｆＮ９／ｌ ｆ）定’ＭＨＩ出Ｙ：示す
が７．ＯＩｔ迄破過挙動奮示さず１強塩基性陰イオン交
換樹脂はヌクレオチドを選択的に吸着した。
続いて、カラムＡは、７ｌｍ、カラムＢは１２ｇ−の脱
塩水で水洗した。
塩水で水洗した。
次に、ヌクレオチドＶａ着したカラムＡにＭｅＯＨ／Ｈ
ＩＯ＝ ２０容積／ざ０容積のメタノール水溶Ｒｗ ｔ
ｒ ｓ ｍ／／ｈｒの流速で通液した。（第３図）その
流出液の７５ｄ〜／ダ０１を分取することにより、アデ
ノシン？、１．９とグアノシン／、６Ｉを得た。
ＩＯ＝ ２０容積／ざ０容積のメタノール水溶Ｒｗ ｔ
ｒ ｓ ｍ／／ｈｒの流速で通液した。（第３図）その
流出液の７５ｄ〜／ダ０１を分取することにより、アデ
ノシン？、１．９とグアノシン／、６Ｉを得た。
−１、ヌクレオチドを吸着したカラムＢにコ％ Ｎａ１
ｌ水浴液Ｙ ／ ＩＩ Ｏｍ／ｈｒの流速で通液した。
ｌ水浴液Ｙ ／ ＩＩ Ｏｍ／ｈｒの流速で通液した。
（＠り図）その流出液のりＯ―〜３よθゴを分取するこ
とにより１．ｔ’−ＣＭＰＯ，デｙとｊ′−〇ＭＮ’０
．Ｉｇ’を得た＠ 参考例１ アデノシンと！’−ＯＭ ！’と３’−ＵＭＰｙ各ｈｏ
、ｚ７７、Ｎａ１ｌ ｊ ｉ ’１ｊ（ｔ ００ｒｔｔ
ｌの脱塩水に溶解し。
とにより１．ｔ’−ＣＭＰＯ，デｙとｊ′−〇ＭＮ’０
．Ｉｇ’を得た＠ 参考例１ アデノシンと！’−ＯＭ ！’と３’−ＵＭＰｙ各ｈｏ
、ｚ７７、Ｎａ１ｌ ｊ ｉ ’１ｊ（ｔ ００ｒｔｔ
ｌの脱塩水に溶解し。
Ｎ−１１０１で溶液ｐＨｔダに調整した後、脱塩水を更
に原えて液量ｔ／ｌとした。
に原えて液量ｔ／ｌとした。
この溶液に、合成吸着剤を水中でよＱｄ秤取し、遠心分
離器で水分ン除去したものを浸漬し、コ！℃の恒温橿盪
槽中でココ時間振盪した。
離器で水分ン除去したものを浸漬し、コ！℃の恒温橿盪
槽中でココ時間振盪した。
その後、溶液中に残留しているアデノシンと！’−ＯＭ
Ｐと！’−ｔ１ＭＰの濃度を測定し、原液との差分から
合成吸着剤への吸潰ｉｔＹ：求めた。
Ｐと！’−ｔ１ＭＰの濃度を測定し、原液との差分から
合成吸着剤への吸潰ｉｔＹ：求めた。
合成吸着剤ダイヤイオンＨＰコｏ、ｍＰ、２ｉ、セパビ
ーズ８！’コ０り、ＢＸ’ｆ００ （いずれも三菱化成
工業ｅ製〕についての結果Ｚ第１表に示す。
ーズ８！’コ０り、ＢＸ’ｆ００ （いずれも三菱化成
工業ｅ製〕についての結果Ｚ第１表に示す。
合成吸着剤は、どの銘柄でもｊ’−ＯＭ Ｆと５′−〇
ＩＩＰの吸着量に比ベアデノシンの吸着量が非常に大き
い。特にハロゲン化された合成吸着剤８Ｐコ０りで顕著
であった。
ＩＩＰの吸着量に比ベアデノシンの吸着量が非常に大き
い。特にハロゲン化された合成吸着剤８Ｐコ０りで顕著
であった。
第１表
参考例コ
アデノシン、グアノシン、イノシン、シチジン、ウリジ
ン、チミジンの６成分を各々ｏ、、ｙｇ、−Ｎａ０１．
７１１ Ｙ ｇ ００ｙｄｆｊ脱塩水ニ溶解し、Ｎ−′
Ｈ０１でｆｆＩ液ｐＩ！ｖ参に調整した後、脱塩水を刀
０えてｌ！とした。以降の操作を参考例１と同様に行な
い合成吸着剤セパビーズＢＰ：１０りへの吸着量を求め
た結果、吸着剤７！当りの吸着量は、アデノシンａ、ｌ
１ｇ、グアノシン２．１！：９、イノシン１．りＩ、シ
チジン／、／ｉ、ウリジン輯ｐｙ。
ン、チミジンの６成分を各々ｏ、、ｙｇ、−Ｎａ０１．
７１１ Ｙ ｇ ００ｙｄｆｊ脱塩水ニ溶解し、Ｎ−′
Ｈ０１でｆｆＩ液ｐＩ！ｖ参に調整した後、脱塩水を刀
０えてｌ！とした。以降の操作を参考例１と同様に行な
い合成吸着剤セパビーズＢＰ：１０りへの吸着量を求め
た結果、吸着剤７！当りの吸着量は、アデノシンａ、ｌ
１ｇ、グアノシン２．１！：９、イノシン１．りＩ、シ
チジン／、／ｉ、ウリジン輯ｐｙ。
チきジンＪ、コＩであった。
参考例３
牛血清アルブミン／、／Ｉ、アデノシンｏ、ｚｐ、Ｍ！
ＬＯ１３ｉを脱塩水に溶解して／ｌとした。以降の操作
を参考例／と同様に行ない、合成吸着剤への牛血清アル
ブミンとアデノシンの吸着量を求めた。尚、牛血清アル
ブミンの分析は、高速液体りａマトーゲ〃Ｆ適法（カラ
ム：！曹Ｃｋｓｏｏｏａｗ り、！ダｘｔｏｏＨ１展
開ｇ ｏ、−Ｍ−リン酸緩衝液、展開液流速／ｊ！４／
ｍ１ｎ、検出ＵＶコｔＯｎｍ Ｊで測定した。
ＬＯ１３ｉを脱塩水に溶解して／ｌとした。以降の操作
を参考例／と同様に行ない、合成吸着剤への牛血清アル
ブミンとアデノシンの吸着量を求めた。尚、牛血清アル
ブミンの分析は、高速液体りａマトーゲ〃Ｆ適法（カラ
ム：！曹Ｃｋｓｏｏｏａｗ り、！ダｘｔｏｏＨ１展
開ｇ ｏ、−Ｍ−リン酸緩衝液、展開液流速／ｊ！４／
ｍ１ｎ、検出ＵＶコｔＯｎｍ Ｊで測定した。
合成吸着剤ダイヤイオンＨＰλＯ（三菱化成工業■製、
比表面積ｚ ７０ ｍ１１１ ％総則孔容積／、４ＣＭ
ｌ／ｉ、細孔径コｏｏλ以下の細孔容積０． ＆ ｒｔ
ｔｌ／ｉ〕とダイヤイオンＥＸ’−１（三菱化成工業■
裂、比表面積ｚ ｔ、ｏ ｒｒ？／１１−１％ 細孔容
積／、 Ｊ ｍｌ／ｌｌ 、 ｍ孔径コ００λ以下の細
孔容積０． ｔ ｄ７ｇ）及びセパビーズ８Ｆ？＜７０
（三菱化成工業■製、比表面積Ａ ！ ｏ ｔｒ７ｇ、
総則孔容積／、０１１１／ｌｌ、−〇〇λ以下の細孔容
積０． ｔ １４／ｌｉ ）への吸着量は第−表の通り
であった。
比表面積ｚ ７０ ｍ１１１ ％総則孔容積／、４ＣＭ
ｌ／ｉ、細孔径コｏｏλ以下の細孔容積０． ＆ ｒｔ
ｔｌ／ｉ〕とダイヤイオンＥＸ’−１（三菱化成工業■
裂、比表面積ｚ ｔ、ｏ ｒｒ？／１１−１％ 細孔容
積／、 Ｊ ｍｌ／ｌｌ 、 ｍ孔径コ００λ以下の細
孔容積０． ｔ ｄ７ｇ）及びセパビーズ８Ｆ？＜７０
（三菱化成工業■製、比表面積Ａ ！ ｏ ｔｒ７ｇ、
総則孔容積／、０１１１／ｌｌ、−〇〇λ以下の細孔容
積０． ｔ １４／ｌｉ ）への吸着量は第−表の通り
であった。
第−表
参考例１
内径１０ｍのガラス製カラムに合成吸着剤を４１０ｍ１
充填した。
充填した。
第１工程として、アデノシンｙ ／ ｓ ｏ １ｖ／ｌ
。
。
１０プ通液した。
第Ｊ工程としてＭｅＯＨ／馬ｏ＝ａｏ容積／１０ｔＯｄ
通液した。
通液した。
上記の第１工程、カ）ら第ダニ程までｔ／サイクルとし
て、！Ｑサイクル繰り返した。
て、！Ｑサイクル繰り返した。
合成吸着剤ダイヤイオンＨＰコ０（三菱化成工業■製、
比表面積ｚ ７０ ｒｙｅ／１１ 、総細孔容積／、ｌ
Ｉ纜し′ｉ、細孔径コｏｏ＾以下の細孔容積０． Ａ
ｌｌ／！Ｉ）とセパビーズ８２９００ （三菱化成工業
■製、比表面積４ Ａ ｏ ｍ／９、総細孔容積／、
Ｏｄ／ｌ１％コｏ。
比表面積ｚ ７０ ｒｙｅ／１１ 、総細孔容積／、ｌ
Ｉ纜し′ｉ、細孔径コｏｏ＾以下の細孔容積０． Ａ
ｌｌ／！Ｉ）とセパビーズ８２９００ （三菱化成工業
■製、比表面積４ Ａ ｏ ｍ／９、総細孔容積／、
Ｏｄ／ｌ１％コｏ。
Ａ以下の細孔容積０．９１ｄ／ｌｉ Ｊについて、各々
３０サイクル実施後の吸着剤ｔカラムから抜き出し、参
考例１と同じ操作を行ないアデノシンの吸着量を求めた
。
３０サイクル実施後の吸着剤ｔカラムから抜き出し、参
考例１と同じ操作を行ないアデノシンの吸着量を求めた
。
ダイヤイオンＨＰコ０の）０サイクル後のアデノシン吸
着量は、サイクル試験前（ｆｒ品）のアデノシン吸着量
の０．ｌＩ３であった。
着量は、サイクル試験前（ｆｒ品）のアデノシン吸着量
の０．ｌＩ３であった。
−万、セパビーズＢＸ’９００の５０サイクル後のアデ
ノシン吸着量は、サイクル試験前ＣＨ品ノのアデノシン
吸着量のＯ３ｊりであった。
ノシン吸着量は、サイクル試験前ＣＨ品ノのアデノシン
吸着量のＯ３ｊりであった。
参考例！
合成吸着剤７強塩基性陰イオン交換樹脂にした以外は、
参考例１と同じ操作を行ない、強塩基性陰イオン交換樹
脂ダイヤイオンＳＡ／＋７Ａ、ＥＩＡｊ（７Ａ％ＰＡＩ
Ｉ／＠（いずれも三菱化成工業■製）への吸着量を求め
た結果を第３表に示した。
参考例１と同じ操作を行ない、強塩基性陰イオン交換樹
脂ダイヤイオンＳＡ／＋７Ａ、ＥＩＡｊ（７Ａ％ＰＡＩ
Ｉ／＠（いずれも三菱化成工業■製）への吸着量を求め
た結果を第３表に示した。
これより、強塩基性陰イオン交換樹脂では、アデノシン
に比べｔ’−ｃＭＰ及び、ｔ’−［１１Ｍ Ｐのヌクレ
オチドの吸着量が大きいことがわかる。
に比べｔ’−ｃＭＰ及び、ｔ’−［１１Ｍ Ｐのヌクレ
オチドの吸着量が大きいことがわかる。
第３表
〔発明の効果〕
以上のように本願発明によるとヌクレオシドとヌクレオ
チドを混合液から簡便、かり効嘉的に分離することがで
きる。
チドを混合液から簡便、かり効嘉的に分離することがで
きる。
第１図は実施例１Ｋ於ける原液通液時の第１塔目である
合成吸着剤ｌ充填したカラム（カラムＡ］からの流出液
量と各成分の濃度との関係ｌ示す。 第一図は、実施例／に於けるｌ１Ｋｇ通液時の第コ塔目
である強塩基性陰イオン交換樹脂を充填したカラムＣカ
ラムＢ）からの流出液量と各成分の濃度との関係！示す
。 第３図は、実施例／に於いて、合成吸漫剤を充填したカ
ラム（カラ、ムＡ）ｙ！１′水洗し、続いてＭｅＯ！Ｅ
／Ｅ！２０ ＝−〇容積／１０容積（１）メタ）−ｙ水
溶液で溶離した時の流出液量と各成分の濃度ｌ示す溶離
曲線図である。 第≠図は、実施例１に於いて、強塩基性陰イオン交換樹
脂を充填したカラム（カラムＢ）を水洗し、続いて２％
Ｈａ（ｌ水溶液で溶離した時の流出液量と各成分の濃度
を示す溶離曲線図である。 出顕人 三菱化成工業株式会社
合成吸着剤ｌ充填したカラム（カラムＡ］からの流出液
量と各成分の濃度との関係ｌ示す。 第一図は、実施例／に於けるｌ１Ｋｇ通液時の第コ塔目
である強塩基性陰イオン交換樹脂を充填したカラムＣカ
ラムＢ）からの流出液量と各成分の濃度との関係！示す
。 第３図は、実施例／に於いて、合成吸漫剤を充填したカ
ラム（カラ、ムＡ）ｙ！１′水洗し、続いてＭｅＯ！Ｅ
／Ｅ！２０ ＝−〇容積／１０容積（１）メタ）−ｙ水
溶液で溶離した時の流出液量と各成分の濃度ｌ示す溶離
曲線図である。 第≠図は、実施例１に於いて、強塩基性陰イオン交換樹
脂を充填したカラム（カラムＢ）を水洗し、続いて２％
Ｈａ（ｌ水溶液で溶離した時の流出液量と各成分の濃度
を示す溶離曲線図である。 出顕人 三菱化成工業株式会社
Claims (3)
- （１）ヌクレオシドとヌクレオチドを含む混合液を、合
成吸着剤と強塩基性陰イオン交換樹脂とを各々充填した
カラムで、この順序であるいは逆の順序で、順次処理し
、ヌクレオシドとヌクレオチドを分離回収することを特
徴とするヌクレオシドとヌクレオチドの相互分離法。 - （２）合成吸着剤が、ハロゲン原子の含有量が３〜５０
重量％の範囲となるようにハロゲン化された合成吸着剤
であることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の分
離法。 - （３）合成吸着剤が、少なくとも２００ｍ＾２／ｇ以上
の比表面積を有し、かつ２００Å以下の径をもつ細孔の
容積が、総細孔容積の６０％以上を有するような細孔分
布をもつことを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の
分離法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18118585A JPS6242706A (ja) | 1985-08-19 | 1985-08-19 | ヌクレオシドとヌクレオチドの分離法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18118585A JPS6242706A (ja) | 1985-08-19 | 1985-08-19 | ヌクレオシドとヌクレオチドの分離法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6242706A true JPS6242706A (ja) | 1987-02-24 |
Family
ID=16096348
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18118585A Pending JPS6242706A (ja) | 1985-08-19 | 1985-08-19 | ヌクレオシドとヌクレオチドの分離法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6242706A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2020085623A (ja) * | 2018-11-22 | 2020-06-04 | フォーデイズ株式会社 | 核酸（ｄｎａ及びｒｎａ）由来のヌクレオチド、ヌクレオシド及び／又は塩基の定量方法 |
-
1985
- 1985-08-19 JP JP18118585A patent/JPS6242706A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2020085623A (ja) * | 2018-11-22 | 2020-06-04 | フォーデイズ株式会社 | 核酸（ｄｎａ及びｒｎａ）由来のヌクレオチド、ヌクレオシド及び／又は塩基の定量方法 |
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