JPS6240297A - 多型ｈｌａ決定基−ｂ２７に対するモノクロ−ナル抗体 - Google Patents
多型ｈｌａ決定基−ｂ２７に対するモノクロ−ナル抗体Info
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- JPS6240297A JPS6240297A JP61190688A JP19068886A JPS6240297A JP S6240297 A JPS6240297 A JP S6240297A JP 61190688 A JP61190688 A JP 61190688A JP 19068886 A JP19068886 A JP 19068886A JP S6240297 A JPS6240297 A JP S6240297A
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- antigen
- human
- hla
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- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56966—Animal cells
- G01N33/56977—HLA or MHC typing
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、ＨＬＡ−８２７抗原と特異的に反応する受容
体を分泌できる細胞系の増殖に関し、そして一層具体的
には、ヒ） ＨＬＡ−８２７抗原を認識するが、しかし
、他のヒトＨＬＡ抗原と最小の交差反応性を示すモノク
ローナル抗体の産生に関する。
体を分泌できる細胞系の増殖に関し、そして一層具体的
には、ヒ） ＨＬＡ−８２７抗原を認識するが、しかし
、他のヒトＨＬＡ抗原と最小の交差反応性を示すモノク
ローナル抗体の産生に関する。
以下余白
〔発明の背景〕
ＨＬＡ、（ヒト白血球抗原）又はいわゆる“組織適合性
抗原”は、人体中におけるすべての核保有体細胞及びす
べての白血球細胞の表面上で見出される糖タンパク質分
子である。ＨＬＡ抗原はヒト染色体６上で４つの遺伝子
座によってコードされる。おのおのの遺伝子座で高率の
多型現象が存在 ；する。初めに、これらの
抗原は、器官の移植のために調和する供与体−受容体に
主として使用された。これらの抗原のいくらかは、種々
の疾患に対 卜する感受性に関係することも
またすでに知られている。
抗原”は、人体中におけるすべての核保有体細胞及びす
べての白血球細胞の表面上で見出される糖タンパク質分
子である。ＨＬＡ抗原はヒト染色体６上で４つの遺伝子
座によってコードされる。おのおのの遺伝子座で高率の
多型現象が存在 ；する。初めに、これらの
抗原は、器官の移植のために調和する供与体−受容体に
主として使用された。これらの抗原のいくらかは、種々
の疾患に対 卜する感受性に関係することも
またすでに知られている。
特に、リウマチ疾患はＨＬＡ系にひじょうに関係してい
ると思われる。明らかに、仙腸骨関節炎及び血清陰性末
梢性関節炎によって特徴づけられる多くの疾患は、１つ
の抗原、すなわちＨＬＡ−８２７抗原との、報告されて
いる明確な関係を有する。
ると思われる。明らかに、仙腸骨関節炎及び血清陰性末
梢性関節炎によって特徴づけられる多くの疾患は、１つ
の抗原、すなわちＨＬＡ−８２７抗原との、報告されて
いる明確な関係を有する。
細胞が８２７抗原を示す個体に関しては、これらの疾患
の１つを明示するための相対的危険度は、Ｂ２７抗原を
有さない個体の３０〜２００倍の危険度である。また、
強直性を椎炎にかかる相対的危険度は、Ｂ２７−陰性個
体におけるよりもＢ２７−陽性個体において約２００倍
高い。。
の１つを明示するための相対的危険度は、Ｂ２７抗原を
有さない個体の３０〜２００倍の危険度である。また、
強直性を椎炎にかかる相対的危険度は、Ｂ２７−陰性個
体におけるよりもＢ２７−陽性個体において約２００倍
高い。。
現在、ＨＬＡ系は、ヒト白血球とアロ抗血清との反応に
よって定義される。それらの反応は、おのおのの遺伝子
座の生成物に対する複数特異性を一定着すると解釈され
てきた。これらはＩＩＬＡ−Ｂ抗原に対する４７個の既
知特異性（１つはＩＩＬＡ−８２７に対してである）で
ある。さらに、ＨＬＡ抗原は、種属グループの間のそれ
らの分布で異なる。従って、ＨＬＡ表現型を割り当てる
場合、個体の種属が考慮されるべきである。
よって定義される。それらの反応は、おのおのの遺伝子
座の生成物に対する複数特異性を一定着すると解釈され
てきた。これらはＩＩＬＡ−Ｂ抗原に対する４７個の既
知特異性（１つはＩＩＬＡ−８２７に対してである）で
ある。さらに、ＨＬＡ抗原は、種属グループの間のそれ
らの分布で異なる。従って、ＨＬＡ表現型を割り当てる
場合、個体の種属が考慮されるべきである。
一般的に、ＨＬＡ抗原に対する血清学的試験は、試薬血
清と該抗原との交差反応性に関して極度の注意を必要と
する。これは、特定の抗原の存在を決定するために利用
されるほとんどの抗血清がしばしば、他の抗原と交差反
応し、そして／又は他の抗原に対する抗体を含んでいる
という事実による。
清と該抗原との交差反応性に関して極度の注意を必要と
する。これは、特定の抗原の存在を決定するために利用
されるほとんどの抗血清がしばしば、他の抗原と交差反
応し、そして／又は他の抗原に対する抗体を含んでいる
という事実による。
１１ＬＡ−８２７に対する血清学的試験の場合、この抗
原と反応する抗血清はまた、しばしばＨＬＡ−ＢＹ 。
原と反応する抗血清はまた、しばしばＨＬＡ−ＢＹ 。
ＨＬＡ−Ｂ２２． ＨＬＡ−８４０及び他の抗原と交差
反応する。
反応する。
従って、現在、すべての検出可能なＩＩＬＡ−Ａ抗原及
びＨＬＡ−Ｂ抗原の完全な抗原性プロフィールが、ＨＬ
Ａ−８２７抗原の発現を正確に決定するために行なわれ
ることがしばしば勧められる。
びＨＬＡ−Ｂ抗原の完全な抗原性プロフィールが、ＨＬ
Ａ−８２７抗原の発現を正確に決定するために行なわれ
ることがしばしば勧められる。
このシステムを、モノクローナル抗体に基づくシステム
と交換する試みが行なわれた。モノクローナル抗体の純
粋且つ制限された特異性の点から、それらは、存在する
ＨＬＡ系の知識を洗練し、そして新規のＨＬＡ抗原関係
を定義するための可能性を有するであろうと思われる。
と交換する試みが行なわれた。モノクローナル抗体の純
粋且つ制限された特異性の点から、それらは、存在する
ＨＬＡ系の知識を洗練し、そして新規のＨＬＡ抗原関係
を定義するための可能性を有するであろうと思われる。
しかしながら、多くのモノクローナル抗体は実際、異な
った対立遺伝子及び時折、異なった遺伝子座の抗原によ
って共有される。認識された超典型的な特異性を作り出
す。従って、Ｂ２７抗原と反応する、いくらかの抗体が
単離されたが、それらはまた、多くの他のＢ抗原対立遺
伝子と交差反応する。一層制限された特異性を有するモ
ノクローナル抗体が最近報告されているが、しかし既知
の８２７変異体のすべてを結合する、相伴う能力の損失
を示す。
った対立遺伝子及び時折、異なった遺伝子座の抗原によ
って共有される。認識された超典型的な特異性を作り出
す。従って、Ｂ２７抗原と反応する、いくらかの抗体が
単離されたが、それらはまた、多くの他のＢ抗原対立遺
伝子と交差反応する。一層制限された特異性を有するモ
ノクローナル抗体が最近報告されているが、しかし既知
の８２７変異体のすべてを結合する、相伴う能力の損失
を示す。
従って、受容体、たとえばモノクローナル抗体を産生ず
ることができ、ヒトＨＬＡ−８２７抗原に対して特異的
であるが、しかし他のＨＬＡ抗原、特に他のＢ遺伝子座
の対立遺伝子と有意に交差反応しない細胞系が必要であ
る。さらに、その受容体又はモノクローナル抗体は、種
々の人種にわたってヒ）ＨＬＡ−８２７抗原の多型エピ
トープ部位を認識できるべきである０本発明はこの要求
を満たす。
ることができ、ヒトＨＬＡ−８２７抗原に対して特異的
であるが、しかし他のＨＬＡ抗原、特に他のＢ遺伝子座
の対立遺伝子と有意に交差反応しない細胞系が必要であ
る。さらに、その受容体又はモノクローナル抗体は、種
々の人種にわたってヒ）ＨＬＡ−８２７抗原の多型エピ
トープ部位を認識できるべきである０本発明はこの要求
を満たす。
１１ＬＡ−８２７抗原及びいくつかの他のＢ遺伝子座の
対立遺伝子と反応することができるいくつかの抗体が報
告されてきた。Ｅｌｌｉｓなど、 、 ）ｌｕｍ、 Ｉ
ｍ＋＋＋ｕｎｏｌ。
対立遺伝子と反応することができるいくつかの抗体が報
告されてきた。Ｅｌｌｉｓなど、 、 ）ｌｕｍ、 Ｉ
ｍ＋＋＋ｕｎｏｌ。
（１９Ｂ２） ５ ： ４９ ； Ｒｅｂａｉなど、
（１９８３）１７ ： ３５７ 。
（１９８３）１７ ： ３５７ 。
Ｔｒａｐａｎｉなど、、Ｈｕｍ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、（１
９８３） ？ ： ２０５ ＨＡｎｔｏｎｅｌｌｉなど
、 、 ＡＡＣＩＩ７摘要、 １９８３を参照のこと。
９８３） ？ ： ２０５ ＨＡｎｔｏｎｅｌｌｉなど
、 、 ＡＡＣＩＩ７摘要、 １９８３を参照のこと。
Ｇｒｕｍｅｔなど、、Ｈｕｍ、Ｉ＋ｌ１ｍｕｎｏ１．（
１９８２） ５ ： ６１は、ＨＬＡ−Ｂ２７を２つの
サブグループに分け、そしてまたＢ４７を認識するモノ
クローナル抗体（８２７Ｍ２）を記載する。従来の血清
又は細胞障害性Ｔリンパ球によりＢ２７のサブタイプの
可能な同定がｄｅ Ｗａａｌなど、＋Ｈｉｓｔｏｃｏｍ
ａｔｉｂｉｌｉｔ Ｔｅ５ｔｉｎ １９８４ ＋
Ｈ，Ｄ。
１９８２） ５ ： ６１は、ＨＬＡ−Ｂ２７を２つの
サブグループに分け、そしてまたＢ４７を認識するモノ
クローナル抗体（８２７Ｍ２）を記載する。従来の血清
又は細胞障害性Ｔリンパ球によりＢ２７のサブタイプの
可能な同定がｄｅ Ｗａａｌなど、＋Ｈｉｓｔｏｃｏｍ
ａｔｉｂｉｌｉｔ Ｔｅ５ｔｉｎ １９８４ ＋
Ｈ，Ｄ。
Ａｌｂｅｒｔなど、、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ
出版、ベルリン、１９８４．４１８ページ及びＢｒｅｕ
ｎｉｎｇなど、 、 Ｈｕｍ、Ｉｍｍｕｎｏｌ。
出版、ベルリン、１９８４．４１８ページ及びＢｒｅｕ
ｎｉｎｇなど、 、 Ｈｕｍ、Ｉｍｍｕｎｏｌ。
（１９Ｂ２） ５ ：２５９〜２６８に提供されている
。Ｂｒｅｕｒ及びＩｖａｎｙｉ、 Ｈｉｓｔｏｃｏｓ
ａｔｉｂｉｌｉｔ Ｔｅ５ｔｉｎ １９８４゜Ｈ，
Ｄ、Ａｌｂｅｒｔなど、 ＋ Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅ
ｒｌａｇ出版、ベルリン、１９８４．１４４ページは、
４種類の人種にわたって４種の抗−８２７単−特異性タ
イブの血清の性質を記載している。
。Ｂｒｅｕｒ及びＩｖａｎｙｉ、 Ｈｉｓｔｏｃｏｓ
ａｔｉｂｉｌｉｔ Ｔｅ５ｔｉｎ １９８４゜Ｈ，
Ｄ、Ａｌｂｅｒｔなど、 ＋ Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅ
ｒｌａｇ出版、ベルリン、１９８４．１４４ページは、
４種類の人種にわたって４種の抗−８２７単−特異性タ
イブの血清の性質を記載している。
ヒト１１ＬＡ−８２７抗原の特異的な検出を可能にする
方法及び組成物が提供される。ＩＩＬＡ−８２７抗原に
対して特異的であるがしかし他のＨＬＡアロ抗原と交差
反応しないモノクローナル抗体を分泌するハイブリッド
細胞系が生成される。そのハイブリッド細胞系は、ハイ
ブリッドＤＮＡ技法によって１１ＬＡ−８２７に対して
特異的な受容体の製造のための又は本発明の抗体の産生
のための遺伝子を担持する染色体をトランスファーする
ために他の細胞と融合するためのＤＮＡ源として働き、
従って、ＨＬＡ−８２７特異性受容体を産生ずるために
他の細胞性手段を提供する。 ＩＩＬ＾−Ｂ２７抗原に
対して特異的なモノクローナル抗体又は受容体は、診断
法及び療法に有用である。
方法及び組成物が提供される。ＩＩＬＡ−８２７抗原に
対して特異的であるがしかし他のＨＬＡアロ抗原と交差
反応しないモノクローナル抗体を分泌するハイブリッド
細胞系が生成される。そのハイブリッド細胞系は、ハイ
ブリッドＤＮＡ技法によって１１ＬＡ−８２７に対して
特異的な受容体の製造のための又は本発明の抗体の産生
のための遺伝子を担持する染色体をトランスファーする
ために他の細胞と融合するためのＤＮＡ源として働き、
従って、ＨＬＡ−８２７特異性受容体を産生ずるために
他の細胞性手段を提供する。 ＩＩＬ＾−Ｂ２７抗原に
対して特異的なモノクローナル抗体又は受容体は、診断
法及び療法に有用である。
本発明に従えば、新規細胞及び組成物がヒトアロ抗原Ｈ
ＬＡ−８２７の特異的な認識のために提供される。その
対象細胞は、同一の染色体を有し、そしてここで生殖細
胞系のＤＮＡがアロ抗原肛Ａ −８２７上に見出される
が、しかし他の関連する又は関連しないＨＬ Ａアロ抗
原上には見出されないエピトープ部位に対して特異的な
結合部位を有する受容体をコードするために再配列され
た。これらの受容体、典型的にはモノクローナル抗体は
、診断法及び療法を含む広範囲の種類の方法に使用され
得る。
ＬＡ−８２７の特異的な認識のために提供される。その
対象細胞は、同一の染色体を有し、そしてここで生殖細
胞系のＤＮＡがアロ抗原肛Ａ −８２７上に見出される
が、しかし他の関連する又は関連しないＨＬ Ａアロ抗
原上には見出されないエピトープ部位に対して特異的な
結合部位を有する受容体をコードするために再配列され
た。これらの受容体、典型的にはモノクローナル抗体は
、診断法及び療法を含む広範囲の種類の方法に使用され
得る。
モノクローナル抗体の製造は、ヒトＨＬＡ−８２７７’
ライベートエピトープに対して特異的な受容体を発現で
きる核配配列を不滅にし、そのような配列、典型的には
該受容体をコードするｃＤＮＡを、培養基中で培養でき
る宿主中に導入することによって行なわれ得る。その不
滅化された細胞系は、トランスフェクション、突然変異
又は同様のものによる発癌により形質転換された哺乳類
細胞系である。
ライベートエピトープに対して特異的な受容体を発現で
きる核配配列を不滅にし、そのような配列、典型的には
該受容体をコードするｃＤＮＡを、培養基中で培養でき
る宿主中に導入することによって行なわれ得る。その不
滅化された細胞系は、トランスフェクション、突然変異
又は同様のものによる発癌により形質転換された哺乳類
細胞系である。
そのような細胞は、４７ ビトロで受容体の発現又は
分泌を支持できる骨髄腫系、リンパ腫系又は他の細胞系
を含む。その受容体は、ハイブリッド細胞系を産生ずる
ために、リンパ球、特に牌細胞の形質転換によって、ウ
ィルスによって又は腫瘍細胞、たとえば骨髄腫とリンパ
球との融合によって生成される、人以外の哺乳類の天然
に存在する免疫グロブリンである。典型的には、その牌
細胞は、ヒ）Ｂ−２７抗原に対して免疫化された動物又
はエピトープ部位を含むそのフラグメントから得られる
であろう。免疫法は良く知られていて、そして効果を維
持しながら相当変化することができる（Ｇｏｌｄｉｎ
Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒ１
ｎｃｉ １ｅｓａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ＋Ａｃａｄｅ
ｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ ％ Ｎ、Ｙ（１９８３）（この開
示を引用によりこの明細書中に組み入れる）を参照のこ
と〕。
分泌を支持できる骨髄腫系、リンパ腫系又は他の細胞系
を含む。その受容体は、ハイブリッド細胞系を産生ずる
ために、リンパ球、特に牌細胞の形質転換によって、ウ
ィルスによって又は腫瘍細胞、たとえば骨髄腫とリンパ
球との融合によって生成される、人以外の哺乳類の天然
に存在する免疫グロブリンである。典型的には、その牌
細胞は、ヒ）Ｂ−２７抗原に対して免疫化された動物又
はエピトープ部位を含むそのフラグメントから得られる
であろう。免疫法は良く知られていて、そして効果を維
持しながら相当変化することができる（Ｇｏｌｄｉｎ
Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒ１
ｎｃｉ １ｅｓａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ＋Ａｃａｄｅ
ｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ ％ Ｎ、Ｙ（１９８３）（この開
示を引用によりこの明細書中に組み入れる）を参照のこ
と〕。
他方、受容体は、ハイブリッドＤＮＡ技法（たとえば、
抗−１１ＬＡ−８２７モノクロ一ナル抗体の一方又は両
者のＨ鎖及びＬ鎖をコードするゲノムＤＮＡ又はｃＯＮ
Ａが前記類の発現のために発現ベクター中に組込まれる
）によって生成される免疫グロブリンである。一般的に
、アメリカ特許第４．１７２．１２４：４．３５０．６
８３； ４．３６３．７９９； ４．３８１．２９２：
及び４，４２３．１４７号を参照のこと。また、Ｋｅｎ
ｎｅｔｔなど、、ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄ
ｉｅｓ、 Ｐｌｅｎｕｍｓ ニューヨーク、（１９８０
）を参照のこと、この開示のすべてを、引用によりこの
明細書中に組み入れる。
抗−１１ＬＡ−８２７モノクロ一ナル抗体の一方又は両
者のＨ鎖及びＬ鎖をコードするゲノムＤＮＡ又はｃＯＮ
Ａが前記類の発現のために発現ベクター中に組込まれる
）によって生成される免疫グロブリンである。一般的に
、アメリカ特許第４．１７２．１２４：４．３５０．６
８３； ４．３６３．７９９； ４．３８１．２９２：
及び４，４２３．１４７号を参照のこと。また、Ｋｅｎ
ｎｅｔｔなど、、ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄ
ｉｅｓ、 Ｐｌｅｎｕｍｓ ニューヨーク、（１９８０
）を参照のこと、この開示のすべてを、引用によりこの
明細書中に組み入れる。
ハイブリッド細胞系は、従来の技法に従ってクローン化
され、そしてスクリーンされ、そしてヒトＨＬＡ−８２
７決定基の冬型部位又はプライベート部位に結合するこ
とができる抗体が細胞上滑液中に検出される０次に、適
切なハイブリッド細胞系は、４７ Ｙ１旦で増殖され
又は腹水液の生産のため ；に適切な宿主の
腹膜腔内に注入され得る。Ｂ２７多 ｉ工、
。４．ヤ５、□７あ、。よヵ、１い、い、 ）本
発明の抗体を有することによって、その上清液を、コン
ペティティブアッセイにおいて対象のモ
１嘗 ツクローナル抗体と競争してスクリーンすること
）ができる。従って、ハイブリッド細胞系は、特
定 ｌト ■ の冬型部位に対して特異的な本発明の抗体の利用
［可能性に基づく種々の源から容易に産生され得
る。 ；他方、対象の冬型部位に対して特異
的な抗体を産れらのハイブリッド細胞系は、他の新生Ｂ
−細胞 ：生するハイブリッド細胞系が利用
できる場合、こ（ここで、そのような他のＢ−細胞は、
受容体を ）１し ニー、す、ゲ、よりＮＡ（７）ため０．受容菌としア働
（＜。よう、７ｏ、よ１，８８□６．４□
、６ｏ、 （ネズミの新生Ｂ−細胞が好ましいけれ
ども、他の Ｅ哺乳類種、たとえばウサギ類
、ウシ類、羊類、馬 ］ミ類、豚類、鳥類又
は同様のものも使用され得、そ ４１゛ してここでそれらの動物は、融合のために、リン
ｔパ球、特に牌細胞を提供することができ、そ
して抗原としてヒトＨＬＡ−８２７多型部位を認識する
であろう。そのモノクローナル抗体は、免疫グロブリン
のクラス又はサブクラス、たとえばＩｇＭ、 ＩｇＤ。
され、そしてスクリーンされ、そしてヒトＨＬＡ−８２
７決定基の冬型部位又はプライベート部位に結合するこ
とができる抗体が細胞上滑液中に検出される０次に、適
切なハイブリッド細胞系は、４７ Ｙ１旦で増殖され
又は腹水液の生産のため ；に適切な宿主の
腹膜腔内に注入され得る。Ｂ２７多 ｉ工、
。４．ヤ５、□７あ、。よヵ、１い、い、 ）本
発明の抗体を有することによって、その上清液を、コン
ペティティブアッセイにおいて対象のモ
１嘗 ツクローナル抗体と競争してスクリーンすること
）ができる。従って、ハイブリッド細胞系は、特
定 ｌト ■ の冬型部位に対して特異的な本発明の抗体の利用
［可能性に基づく種々の源から容易に産生され得
る。 ；他方、対象の冬型部位に対して特異
的な抗体を産れらのハイブリッド細胞系は、他の新生Ｂ
−細胞 ：生するハイブリッド細胞系が利用
できる場合、こ（ここで、そのような他のＢ−細胞は、
受容体を ）１し ニー、す、ゲ、よりＮＡ（７）ため０．受容菌としア働
（＜。よう、７ｏ、よ１，８８□６．４□
、６ｏ、 （ネズミの新生Ｂ−細胞が好ましいけれ
ども、他の Ｅ哺乳類種、たとえばウサギ類
、ウシ類、羊類、馬 ］ミ類、豚類、鳥類又
は同様のものも使用され得、そ ４１゛ してここでそれらの動物は、融合のために、リン
ｔパ球、特に牌細胞を提供することができ、そ
して抗原としてヒトＨＬＡ−８２７多型部位を認識する
であろう。そのモノクローナル抗体は、免疫グロブリン
のクラス又はサブクラス、たとえばＩｇＭ、 ＩｇＤ。
ＩｇＡ、ＩｇＧ、〜４又はＩｇＥのいづれかである。Ｉ
ｇＧは、診断アッセイに使用される最っとも日常のアイ
ソタイプであるので、そのＩｇＧが好ましい。
ｇＧは、診断アッセイに使用される最っとも日常のアイ
ソタイプであるので、そのＩｇＧが好ましい。
本発明の１つの特定の態様は、Ｂ２７−陽性ヒトリンパ
系細胞により免疫化されたＣＢ６Ｆ ｌ マウスからの
肺臓細胞とＭＳ−１骨髄腫細胞とを融合することによっ
て生成されたＧ５１４５．２と名曲されたハイブリッド
細胞系である。その融合は、Ｎｏ％１ｉｎｓｋｉなど、
。
系細胞により免疫化されたＣＢ６Ｆ ｌ マウスからの
肺臓細胞とＭＳ−１骨髄腫細胞とを融合することによっ
て生成されたＧ５１４５．２と名曲されたハイブリッド
細胞系である。その融合は、Ｎｏ％１ｉｎｓｋｉなど、
。
Ｖｉｒｏ圏［（１９７９）９３ ： １１１及び１置ａ
ｎｓｏｎなど、。
ｎｓｏｎなど、。
釦■匹り匹旦■（１９８０）一段：２４７に記載してい
るようにして行なわれた。制限希釈法による第１次スク
リーニング及びクローニングの後、クローンＧ５１４５
．２を用いて、ＢＡＬＢ／ｃマウス中に腹水液を産成し
、そしてそれは、ＩｇＧ、として特徴づけられ、そして
ヒトＨＬＡ−８２７の多型決定基に対して特異的である
免疫グロブリンを提供する。
るようにして行なわれた。制限希釈法による第１次スク
リーニング及びクローニングの後、クローンＧ５１４５
．２を用いて、ＢＡＬＢ／ｃマウス中に腹水液を産成し
、そしてそれは、ＩｇＧ、として特徴づけられ、そして
ヒトＨＬＡ−８２７の多型決定基に対して特異的である
免疫グロブリンを提供する。
ハイブリッドＤＮＡ技法によれば、本発明の受容体は、
種々の宿主中において産生され得（Ｂｏｓｓ。
種々の宿主中において産生され得（Ｂｏｓｓ。
など、、Ｎｕｃｌ、Ａｃ１ｄ、Ｒｅｓ、＋ １２ ：
３７９１及び−ｏｏｄなど、。
３７９１及び−ｏｏｄなど、。
Ｎａｔｕｒｅ ３１４ ： ４４６を参照のこと）、そ
してこの両者を引用によりこの明細書中に組み入れる。
してこの両者を引用によりこの明細書中に組み入れる。
たとえば、Ｇ５１４５．２細胞系によって産生されたモ
ノクローナル抗体のＬ鎖及びＨ鎖をコードする遺伝子か
ら転写されたａ＋ＲＮＡは、対象のクローンよりも他の
ＢＡＬＢ／ｃリンパ球からのｃＤＮＡを用いる分化ｃＤ
ＮＡハイブリダイゼーションによって単離され得る。ハ
イブリダイズしないＧ５１４５．２のａ＋ＲＮＡは、所
望の免疫グロブリン鎖をコードするメツセンジャーに富
゛んでいるであろう、必要ならば、この方法ばくり返え
され、所望のｍＲＮＡレベルをさらに増すことができる
。次に、減じられたｍＲＮＡ組成物を逆転写し、所望の
配列のために高められたｃＤＮＡ混合物を提供すること
ができる。そのＲＮＡを、適切なＲＮａｓｅにより加水
分解し、そしてその５ｓＤＮ＾を、ＤＮＡポリマラーゼ
Ｉ及びランダムブライマー、たとえばランダムに断片化
された子牛の胸腺ＤＮＡにより二重鎖にした１次に、得
られるｄｓＤＮＡを、適切なベクター、たとえばウィル
スベクター、たとえばλベクター又はプラスミドベクタ
ー（たとえば、ｐＢＲ３２２、ｐＡｃＹｃ１８４、等）
中に挿入することによってクローン化することができる
。Ｌ鎖及びＨ［の不変部のために、既知配列に基づくプ
ローブを開発することによって、所望のＬ鎖及びＩ（鎖
をコードする遺伝子を有するｃＤＮＡクローンを、ハイ
ブリダイゼーシロンによって同定することができる。
ノクローナル抗体のＬ鎖及びＨ鎖をコードする遺伝子か
ら転写されたａ＋ＲＮＡは、対象のクローンよりも他の
ＢＡＬＢ／ｃリンパ球からのｃＤＮＡを用いる分化ｃＤ
ＮＡハイブリダイゼーションによって単離され得る。ハ
イブリダイズしないＧ５１４５．２のａ＋ＲＮＡは、所
望の免疫グロブリン鎖をコードするメツセンジャーに富
゛んでいるであろう、必要ならば、この方法ばくり返え
され、所望のｍＲＮＡレベルをさらに増すことができる
。次に、減じられたｍＲＮＡ組成物を逆転写し、所望の
配列のために高められたｃＤＮＡ混合物を提供すること
ができる。そのＲＮＡを、適切なＲＮａｓｅにより加水
分解し、そしてその５ｓＤＮ＾を、ＤＮＡポリマラーゼ
Ｉ及びランダムブライマー、たとえばランダムに断片化
された子牛の胸腺ＤＮＡにより二重鎖にした１次に、得
られるｄｓＤＮＡを、適切なベクター、たとえばウィル
スベクター、たとえばλベクター又はプラスミドベクタ
ー（たとえば、ｐＢＲ３２２、ｐＡｃＹｃ１８４、等）
中に挿入することによってクローン化することができる
。Ｌ鎖及びＨ［の不変部のために、既知配列に基づくプ
ローブを開発することによって、所望のＬ鎖及びＩ（鎖
をコードする遺伝子を有するｃＤＮＡクローンを、ハイ
ブリダイゼーシロンによって同定することができる。
その後、その遺伝子を、そのプラスミドから切り出し、
開始コドンから上流の不必要なりＮＡを取り除くために
操作し、そして次に、宿主の形質転換及びその遺伝子の
根本的な発現のために適切なベクター中に挿入すること
ができる。
開始コドンから上流の不必要なりＮＡを取り除くために
操作し、そして次に、宿主の形質転換及びその遺伝子の
根本的な発現のために適切なベクター中に挿入すること
ができる。
便利には、完全な免疫グロブリンを生成し、そしてさら
に、所望により、リーダー配列を含まない免疫グロブリ
ンを分泌するために、Ｈ鎖及びＬ鎖を連結するような鎖
を正しくプロセスすることができる哺乳類宿主を使用す
ることができる。他方、２つの鎖を生成するために単細
胞微生物を使用することができ、そしてここで、Ｈ鎖を
コードする配列の５′末端で開始コドンを提供しながら
、分泌リーダー及びプロセシングシグナルをコードする
ＤＮＡ配列を取り除くために、さらに操作が要求される
。この方法においては、ネズミ細胞よりも他の細胞中で
アセンブリイされ、そしてグリコジル化されるように、
免疫グロブリンを調製し、ぞしてプロセスすることがで
きる。所望により、おのおのの鎖を、可変部を少なくと
も保持するよ ｉうに切断し、そして次に
、その領域を操作し、ヒト１ル＾−８２７多型決定基に
対して特異的な他め受容体を提供する１が７き６・
ｉ本発明のモノクロー
ナル抗体は、現在既知のす ［Ｓ”（１７
）Ｂ□７１１’１ｔａｌｉａ＆：ｌ？ニーｚ”？’、ｂ
１１（ＬＡ−８２７ｍ ’原に対するそれら
の特異性のために特に有用である。他の従来のモノクロ
ーナル抗体は、いくつかの定位供与体の細胞上で及びお
よそ２０％のカウカジマン（Ｃａｕｃａｓｉａｎ）供与
体の細胞上で８２７を認識しない、また、Ｇ５１４５．
２細胞系によって分泌されたモノクローナル抗体は、診
断アッセイ及び他の利用に容易に導入されるＩｇＧアイ
ソタイプのものである。
に、所望により、リーダー配列を含まない免疫グロブリ
ンを分泌するために、Ｈ鎖及びＬ鎖を連結するような鎖
を正しくプロセスすることができる哺乳類宿主を使用す
ることができる。他方、２つの鎖を生成するために単細
胞微生物を使用することができ、そしてここで、Ｈ鎖を
コードする配列の５′末端で開始コドンを提供しながら
、分泌リーダー及びプロセシングシグナルをコードする
ＤＮＡ配列を取り除くために、さらに操作が要求される
。この方法においては、ネズミ細胞よりも他の細胞中で
アセンブリイされ、そしてグリコジル化されるように、
免疫グロブリンを調製し、ぞしてプロセスすることがで
きる。所望により、おのおのの鎖を、可変部を少なくと
も保持するよ ｉうに切断し、そして次に
、その領域を操作し、ヒト１ル＾−８２７多型決定基に
対して特異的な他め受容体を提供する１が７き６・
ｉ本発明のモノクロー
ナル抗体は、現在既知のす ［Ｓ”（１７
）Ｂ□７１１’１ｔａｌｉａ＆：ｌ？ニーｚ”？’、ｂ
１１（ＬＡ−８２７ｍ ’原に対するそれら
の特異性のために特に有用である。他の従来のモノクロ
ーナル抗体は、いくつかの定位供与体の細胞上で及びお
よそ２０％のカウカジマン（Ｃａｕｃａｓｉａｎ）供与
体の細胞上で８２７を認識しない、また、Ｇ５１４５．
２細胞系によって分泌されたモノクローナル抗体は、診
断アッセイ及び他の利用に容易に導入されるＩｇＧアイ
ソタイプのものである。
本発明のモノクローナル抗体は、広範囲の種類の使用、
すなわち−１／ ｖ±及び−１’ ビトロの両者で
使用される。４ｙ ビトロ使用に関しては。
すなわち−１／ ｖ±及び−１’ ビトロの両者で
使用される。４ｙ ビトロ使用に関しては。
例によって、モノクローナル抗体が、細胞型を検出する
ために、Ｂ２７陽性細胞を単離するために、不均質混合
物の細胞において８２７陽性細胞を選択的に殺すために
又は同様のために使用され得る。
ために、Ｂ２７陽性細胞を単離するために、不均質混合
物の細胞において８２７陽性細胞を選択的に殺すために
又は同様のために使用され得る。
診断目的のためには、モノクローナル抗体を、標識又は
非標識のいづれかにすることができる。典型的には、診
断アッセイは、Ｂ２７抗原へのモノクローナル抗体の結
合による複合体の形成の検出を伴う、標識されていない
場合、抗体は、凝集アッセイ又は補体−仲介の細胞毒性
アッセイに、又はモノクローナル抗体、たとえば対象の
モノクローナル抗体の特定の宿主種の免疫グロブリンに
対して特異的な抗体と反応する他の標識されている抗体
（第二抗体）と−緒に使用される。広範囲の種類の標識
、たとえば放射性核種、フルオレサー（ｆｌｕｏｒｅｓ
ｃｅｒｓ） 、酵素、酵素基質、酵素補因子、酵素阻害
物質、リガンド（特にヘプテン）、等を使用することが
できる。多くのタイプの免疫アッセイが利用でき、そし
ていくらかはアメリカ特許第３．８１７．８２７； ３
，８５０．７５２； ３．９０１，６５４； ３，９３
５．０７４；３．９Ｂ４．５３３； ３．９９６，３４
５； ４．０３４，０７４；及び４，０９８，８７６号
に記載され、そしてこれらの開示を引用によりこの明細
書に組み入れる。
非標識のいづれかにすることができる。典型的には、診
断アッセイは、Ｂ２７抗原へのモノクローナル抗体の結
合による複合体の形成の検出を伴う、標識されていない
場合、抗体は、凝集アッセイ又は補体−仲介の細胞毒性
アッセイに、又はモノクローナル抗体、たとえば対象の
モノクローナル抗体の特定の宿主種の免疫グロブリンに
対して特異的な抗体と反応する他の標識されている抗体
（第二抗体）と−緒に使用される。広範囲の種類の標識
、たとえば放射性核種、フルオレサー（ｆｌｕｏｒｅｓ
ｃｅｒｓ） 、酵素、酵素基質、酵素補因子、酵素阻害
物質、リガンド（特にヘプテン）、等を使用することが
できる。多くのタイプの免疫アッセイが利用でき、そし
ていくらかはアメリカ特許第３．８１７．８２７； ３
，８５０．７５２； ３．９０１，６５４； ３，９３
５．０７４；３．９Ｂ４．５３３； ３．９９６，３４
５； ４．０３４，０７４；及び４，０９８，８７６号
に記載され、そしてこれらの開示を引用によりこの明細
書に組み入れる。
抗体は種々の市販のシステム、たとえば流動微小蛍光測
定器（ここで、螢光接合抗体が単独で又はＨＬＡ−抗原
に対して特異的な他の抗体と一緒に使用される）に使用
され得る。典型的には、それらの組織適合性タイプにつ
いて細胞を、計数し、そして選別する。対象のフルオレ
サーは、フルオレセイン、テキサスレッド（Ｔｅｘａｓ
ｒｅｄ）＋ローダミン、ウンベリフェロン、フィコビ
リプロティン、ダンシル及び同様のものを含む。
定器（ここで、螢光接合抗体が単独で又はＨＬＡ−抗原
に対して特異的な他の抗体と一緒に使用される）に使用
され得る。典型的には、それらの組織適合性タイプにつ
いて細胞を、計数し、そして選別する。対象のフルオレ
サーは、フルオレセイン、テキサスレッド（Ｔｅｘａｓ
ｒｅｄ）＋ローダミン、ウンベリフェロン、フィコビ
リプロティン、ダンシル及び同様のものを含む。
一般的に、本発明のモノクローナル抗体は、酵素免疫ア
ッセイ （ここで、対象抗体又は異なった種からの第二
抗体は酵素に接合される）に使用される。ヒト細胞、た
とえばヒト血液又はその溶解物を含むサンプルが対象の
抗体と共に混合される場合、該抗体と８２７抗原を示す
それらの細胞（又はタンパク質）との間で結合が生じる
０次に、そのような細胞を、結合材料から分離すること
ができ、そして第二抗体（酵素により標識された）を添
加する。その後、前記細胞に特異的に結合した抗体−抗
原接合体の存在を決定する。当業者に良く知られている
他の従来の技法もまた使用することができる。
ッセイ （ここで、対象抗体又は異なった種からの第二
抗体は酵素に接合される）に使用される。ヒト細胞、た
とえばヒト血液又はその溶解物を含むサンプルが対象の
抗体と共に混合される場合、該抗体と８２７抗原を示す
それらの細胞（又はタンパク質）との間で結合が生じる
０次に、そのような細胞を、結合材料から分離すること
ができ、そして第二抗体（酵素により標識された）を添
加する。その後、前記細胞に特異的に結合した抗体−抗
原接合体の存在を決定する。当業者に良く知られている
他の従来の技法もまた使用することができる。
キットがまた、ヒトＨＬ Ａ細胞タイプの検出に又はＢ
２７抗原の存在のために対象抗体を使用する゛ のに供
給され得る。従って、普通、凍結乾燥形の本発明の対象
のモノクローナル抗体組成物は、単独で又は他のＨＬＡ
アロ抗原に対して特異的な追加抗体と一緒に提供され得
る。標識に接合され得る又は接合され得ない抗体は、緩
衝液、たとえばＴ ｒ ｉ ｓ ＋ ’Ｊン酸塩、炭
酸塩、等、安定剤、殺生剤、不活性タンパク質、たとえ
ば牛血清アルブミン又は同様のものを含むキットに含ま
れる。一般的に、これらの材料は、活性抗体の量を基準
に約５重量％よりも少ない量で、そして抗体濃度を再び
基準に少なくとも約０．００１重量％の合計量で普通存
在するであろう。しばしば、活性成分を希釈するために
不活性増量剤又は行形剤（ここで該行形剤は、合計組成
物の約１〜９９重量％で存在することかできる）を含む
ことが好ましいであろう。モノクローナル抗体と結合で
きる第二抗体が使用される場合、これは普通別々のバイ
アル中に存在するであろう、その第二抗体は、典型的に
は標識に接合され、そして上に記載された抗体配合と類
似する方法で配合される。
２７抗原の存在のために対象抗体を使用する゛ のに供
給され得る。従って、普通、凍結乾燥形の本発明の対象
のモノクローナル抗体組成物は、単独で又は他のＨＬＡ
アロ抗原に対して特異的な追加抗体と一緒に提供され得
る。標識に接合され得る又は接合され得ない抗体は、緩
衝液、たとえばＴ ｒ ｉ ｓ ＋ ’Ｊン酸塩、炭
酸塩、等、安定剤、殺生剤、不活性タンパク質、たとえ
ば牛血清アルブミン又は同様のものを含むキットに含ま
れる。一般的に、これらの材料は、活性抗体の量を基準
に約５重量％よりも少ない量で、そして抗体濃度を再び
基準に少なくとも約０．００１重量％の合計量で普通存
在するであろう。しばしば、活性成分を希釈するために
不活性増量剤又は行形剤（ここで該行形剤は、合計組成
物の約１〜９９重量％で存在することかできる）を含む
ことが好ましいであろう。モノクローナル抗体と結合で
きる第二抗体が使用される場合、これは普通別々のバイ
アル中に存在するであろう、その第二抗体は、典型的に
は標識に接合され、そして上に記載された抗体配合と類
似する方法で配合される。
前もって示されたように、ＨＬＡ−８２７に関する個人
のタイプを検出することは、種々のリウマチ疾患の可能
性を診断するためにひじょうに有用である。当業者は、
本発明のモノクローナル抗体がまた、多くの追加方法、
たとえばアフィニティークロマトグラフィー、Ｂ２７抗
原の精製、そのようなＩｔｌｊＩ＆Ｉｃ ＜ ｔ！！Ａ
Ｎｌｒ゛６ Ｂ２ｔｔ７Ｃ［Ｇ＊ｔｒｌＢｔｍ（１）＊
！ 。
のタイプを検出することは、種々のリウマチ疾患の可能
性を診断するためにひじょうに有用である。当業者は、
本発明のモノクローナル抗体がまた、多くの追加方法、
たとえばアフィニティークロマトグラフィー、Ｂ２７抗
原の精製、そのようなＩｔｌｊＩ＆Ｉｃ ＜ ｔ！！Ａ
Ｎｌｒ゛６ Ｂ２ｔｔ７Ｃ［Ｇ＊ｔｒｌＢｔｍ（１）＊
！ 。
（典型的には細胞障害性反応を含む）及び同様′）（ｊ
。
。
ものに使用されるであうことを理解するであろう。
１−Ｉｍｍｕｎｏｌｏ １ｃａｌ Ｍｅｔｈｏ
ｄｓユ第１及び■巻＋ Ｌｅｆ ｋｏｖ ｉ ｔｓ ｔ
ｌ、及びＰｅｒｎｉｓ、 Ｖ、、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐ
ｒｅｓｓ、 ニュー ：１−り（１９７９及び１９８１
） ；及びｆｌａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘ ｅｒｉｍ
ｅｎｔａｌＩｍｍｕｎｏ土ｏ）７４． Ｗｅｉｒ＋Ｄ
、、 Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ ５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ
Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、セントルイス、ミズリイ（
１９７Ｂ）を一般的に参照のこと。そしてこの両者を、
引用によりこの明細書中に組み入れる。
１−Ｉｍｍｕｎｏｌｏ １ｃａｌ Ｍｅｔｈｏ
ｄｓユ第１及び■巻＋ Ｌｅｆ ｋｏｖ ｉ ｔｓ ｔ
ｌ、及びＰｅｒｎｉｓ、 Ｖ、、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐ
ｒｅｓｓ、 ニュー ：１−り（１９７９及び１９８１
） ；及びｆｌａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘ ｅｒｉｍ
ｅｎｔａｌＩｍｍｕｎｏ土ｏ）７４． Ｗｅｉｒ＋Ｄ
、、 Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ ５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ
Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、セントルイス、ミズリイ（
１９７Ｂ）を一般的に参照のこと。そしてこの両者を、
引用によりこの明細書中に組み入れる。
本発明の他の特徴及び利点は、次の実験記載（これは、
例によって本発明を説明する）から明らかになるであろ
う。この例は制限的でなく例示的に示されている。
例によって本発明を説明する）から明らかになるであろ
う。この例は制限的でなく例示的に示されている。
ＣＢ６Ｆ、マウスを、強直性を椎炎の患者から確立され
たＢリンパ芽球細胞上の旧、Ａ Ｂ２７抗原により免疫
化する。マウスを、一定の３２日間別々にアジュバント
なしで２回の皮下注射によって免疫化した。最後の注射
の後３日間で肺臓を取り出した。
たＢリンパ芽球細胞上の旧、Ａ Ｂ２７抗原により免疫
化する。マウスを、一定の３２日間別々にアジュバント
なしで２回の皮下注射によって免疫化した。最後の注射
の後３日間で肺臓を取り出した。
免疫化したマウスからの牌性Ｂリンパ球を、４０％（Ｗ
／Ｖ）ポリエチレングリコールを用いてＭＳＩ−１骨髄
腫細胞と融合した（Ｋｏｈｌｅｒ及びＭｉｌａｔｅｉｎ
。
／Ｖ）ポリエチレングリコールを用いてＭＳＩ−１骨髄
腫細胞と融合した（Ｋｏｈｌｅｒ及びＭｉｌａｔｅｉｎ
。
Ｎａｔｕｒｅ、 ２５６ ：４９５（１９７５） ）
、融合の後、その細胞混合物を、ハイブリッド細胞の増
殖について選択するためにＨＡＴ培地（２０％牛血清、
ｌＸ１０−’Ｍのヒボキサンチン、４Ｘ１０−？Ｍのア
ミノタンパク質及び１．６ Ｘ １０−’Ｍのチミジン
により補足されたＲＰＭＩ−１６４０培地）中に再懸濁
し、そして次に１ ′〜３Ｘ１０”細胞／ｍｌの濃度で
９６−ウェルマイ１クロ培養トレイ中に分配した。
、融合の後、その細胞混合物を、ハイブリッド細胞の増
殖について選択するためにＨＡＴ培地（２０％牛血清、
ｌＸ１０−’Ｍのヒボキサンチン、４Ｘ１０−？Ｍのア
ミノタンパク質及び１．６ Ｘ １０−’Ｍのチミジン
により補足されたＲＰＭＩ−１６４０培地）中に再懸濁
し、そして次に１ ′〜３Ｘ１０”細胞／ｍｌの濃度で
９６−ウェルマイ１クロ培養トレイ中に分配した。
Ｂ２７に対する抗体を産生ずる細胞を、ヒト白組球入の
結合を測定する酵素結合のマイクロ免疫アッセイによっ
て同定した（下を参照のこと）。そのハイブリッド細胞
系を、支持細胞として同系の胸腺細胞を用いて、限界希
釈法による３循環のクローニング（ｔｈｒｅｅ ｃｙｃ
ｌｅｓ ｏｆ ｃｌｏｎｉｎｇ）によって確立した。そ
の細胞系を１９８５年６月２８日Ａ、Ｔ、Ｃ，Ｃ。
結合を測定する酵素結合のマイクロ免疫アッセイによっ
て同定した（下を参照のこと）。そのハイブリッド細胞
系を、支持細胞として同系の胸腺細胞を用いて、限界希
釈法による３循環のクローニング（ｔｈｒｅｅ ｃｙｃ
ｌｅｓ ｏｆ ｃｌｏｎｉｎｇ）によって確立した。そ
の細胞系を１９８５年６月２８日Ａ、Ｔ、Ｃ，Ｃ。
に寄託し、そして寄託番号ＨＢ８８５６を得゛た。
モノクローナル抗体タンパク質を、イオン交換クロマト
グラフィーを用いて腹水液から従来の方法によって単離
した。１〜４週早くプリスタンの腹膜内注入により感作
された有性生殖マウスの腹膜腔にバイプリドーマ細胞を
増殖することによって腹水液を、得た。モノクローナル
抗体のアイソタイプは標準方法に従ってＥＬＩＳＡによ
って決定された。
グラフィーを用いて腹水液から従来の方法によって単離
した。１〜４週早くプリスタンの腹膜内注入により感作
された有性生殖マウスの腹膜腔にバイプリドーマ細胞を
増殖することによって腹水液を、得た。モノクローナル
抗体のアイソタイプは標準方法に従ってＥＬＩＳＡによ
って決定された。
寝ルシ（と
Ｇ５１４５．２の特異性を、４０人の正常な人からのＴ
リンパ球のパネル並びに１０人の強直性を椎炎患者及び
１５人の正常な人からのＢリンパ芽球細胞系のパネルに
対する反応性を検定することによって測定した。個々の
供与体のＨＬＡタイプを、通常のマイクロ細胞毒性アッ
セイ（ｍｉｃｒｏｃｙｔｏｔｃｘｉｃｉ Ｌｙａｓｓａ
ｙ）を用いて、インディペンデントリファーレンスＨＬ
Ａラボラトリ４ （ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｒｅｆｅ
ｒｅｎｃｅＨＬＡ 、１ａｂｏｒａＬｏｒｙ）で決定し
た。Ｔリンパ球を、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ及び
ナイロンウールによる通過を含む密度勾配遠心法によっ
て末梢血液から得た（Ｄａｎｉｌｏｖｓなど、＋ ８
ｔｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ旧ｓｔｏｃｏｍ ａ
ｔｉｂｉｌｉｔ Ｗｏｒｋｓｈｏ Ｎｅｗｓｌｅｔ
ｔｅｒ（１９７Ｂ）６：３）、Ｂリンパ芽球系を、Ｅｐ
ｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウィルスにより形質転換された末
梢Ｂリンパ球から得た。
リンパ球のパネル並びに１０人の強直性を椎炎患者及び
１５人の正常な人からのＢリンパ芽球細胞系のパネルに
対する反応性を検定することによって測定した。個々の
供与体のＨＬＡタイプを、通常のマイクロ細胞毒性アッ
セイ（ｍｉｃｒｏｃｙｔｏｔｃｘｉｃｉ Ｌｙａｓｓａ
ｙ）を用いて、インディペンデントリファーレンスＨＬ
Ａラボラトリ４ （ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｒｅｆｅ
ｒｅｎｃｅＨＬＡ 、１ａｂｏｒａＬｏｒｙ）で決定し
た。Ｔリンパ球を、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ及び
ナイロンウールによる通過を含む密度勾配遠心法によっ
て末梢血液から得た（Ｄａｎｉｌｏｖｓなど、＋ ８
ｔｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ旧ｓｔｏｃｏｍ ａ
ｔｉｂｉｌｉｔ Ｗｏｒｋｓｈｏ Ｎｅｗｓｌｅｔ
ｔｅｒ（１９７Ｂ）６：３）、Ｂリンパ芽球系を、Ｅｐ
ｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウィルスにより形質転換された末
梢Ｂリンパ球から得た。
このアッセイは、ｌルＡ−８２７抗原に対する抗体を
□分泌するハイプリドーマを同定するため
に間接的な方法で使用された。テラサキマイクロトレイ
を、リン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）中Ｌｔｔｇ／ｍｌのポリ
ーＬ−リシン溶液の５μｉをおのおののウェルに添加す
ることによって調製した。そのプレートを１時間３７℃
でインキュベートし、そして浸し、そしてデカントする
ことによってＰＢＳにより洗浄した。ヒトリンパ球を、
おのおののウェル中に分配した：核つェルは、血清を含
まないＲＰＭＩ−１６４０培地の１ｍｌ当り１〜５Ｘ１
０’の細胞の懸濁液の１μｌを含む、そのプレートを９
０ｇで３分間遠心分離した。０．２％アジ化物を含むＰ
ＢＳ中１％牛血清アルブミン（ＢＳＡ）の溶液を、プレ
ートに添加し、そして次にそれを４℃で１〜４８時間貯
蔵した。
□分泌するハイプリドーマを同定するため
に間接的な方法で使用された。テラサキマイクロトレイ
を、リン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）中Ｌｔｔｇ／ｍｌのポリ
ーＬ−リシン溶液の５μｉをおのおののウェルに添加す
ることによって調製した。そのプレートを１時間３７℃
でインキュベートし、そして浸し、そしてデカントする
ことによってＰＢＳにより洗浄した。ヒトリンパ球を、
おのおののウェル中に分配した：核つェルは、血清を含
まないＲＰＭＩ−１６４０培地の１ｍｌ当り１〜５Ｘ１
０’の細胞の懸濁液の１μｌを含む、そのプレートを９
０ｇで３分間遠心分離した。０．２％アジ化物を含むＰ
ＢＳ中１％牛血清アルブミン（ＢＳＡ）の溶液を、プレ
ートに添加し、そして次にそれを４℃で１〜４８時間貯
蔵した。
抗体を添加する前、そのプレートを３度洗浄した。
ウェル当り１μｌのモノクローナル抗体を添加した。室
温で１時間後、そのプレートを５度洗浄し、そしてホー
スラディシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）により結合さ
れた抗−免疫グロブリンのＦ（ａｂ’）、フラグメント
の溶液をウェル当り５μ！で添加した０次に、そのプレ
ートを室温で３０〜６０分間インキュベートした。
温で１時間後、そのプレートを５度洗浄し、そしてホー
スラディシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）により結合さ
れた抗−免疫グロブリンのＦ（ａｂ’）、フラグメント
の溶液をウェル当り５μ！で添加した０次に、そのプレ
ートを室温で３０〜６０分間インキュベートした。
抗体による処置の後、そのトレイを５度洗浄した。ウェ
ル中におけるＨＲＰ−抗体複合体の存在を、ｐＨ４，２
で０．１ Ｍクエン酸ナトリウム中基質、過酸化水素及
びクロマゲン、すなわちＡＢＴＳ＠（Ｂｏｅｈｒｉｎｇ
ｅｒ−Ｍａｎｎｈｅｉ＋ｗ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ
ｓ インディアナポリス、インディアナ）の溶液の添
加によって見えるようにした。室温で３０〜６０分のイ
ンキュベーションの後、ウェル中の色の進展が、これら
のウェル中において白血球へのモノクローナル抗体の結
合を示した。
ル中におけるＨＲＰ−抗体複合体の存在を、ｐＨ４，２
で０．１ Ｍクエン酸ナトリウム中基質、過酸化水素及
びクロマゲン、すなわちＡＢＴＳ＠（Ｂｏｅｈｒｉｎｇ
ｅｒ−Ｍａｎｎｈｅｉ＋ｗ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ
ｓ インディアナポリス、インディアナ）の溶液の添
加によって見えるようにした。室温で３０〜６０分のイ
ンキュベーションの後、ウェル中の色の進展が、これら
のウェル中において白血球へのモノクローナル抗体の結
合を示した。
以下余白
、ｆ れたＨＬＡ の ２ によるモノリンパ
芽球細胞の膜タンパク質を、ラクトペルオキシダーゼを
用いてｌ！Ｊにより標識した（Ｖｉｔｅｔｔａなど、
、 Ｌ１１Ｊ到よ（１９７１） １３４ ：２４２ ］
。
芽球細胞の膜タンパク質を、ラクトペルオキシダーゼを
用いてｌ！Ｊにより標識した（Ｖｉｔｅｔｔａなど、
、 Ｌ１１Ｊ到よ（１９７１） １３４ ：２４２ ］
。
細胞を、０．５％Ｎｏｎ１ｄｅｔ Ｐ−４０（Ｓｉｇｍ
ａ ＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｓｐａｎｇ）を含む緩衝液に
より破壊し、そして対照抗体及び固相免疫吸着剤の添加
の前及び後で、遠心分離することによって透明にした。
ａ ＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｓｐａｎｇ）を含む緩衝液に
より破壊し、そして対照抗体及び固相免疫吸着剤の添加
の前及び後で、遠心分離することによって透明にした。
モノクローナル抗体を、溶解物のアリコート及び固相に
結合されたマウス免疫グロブリンに対するウサギ抗体を
用いて沈殿された標識抗原と抗体との複合体゛のアリコ
ートに添加した。広範囲にやたって洗浄した後、その標
識された抗原を、ポリアクリルアミドゲルのＬａｅａｕ
ｓｌｉ電気泳動法（Ｎａｔｕｒｅ、 ２２７：６８０〜
６８５（１９７０） ）のために要求されるような又は
Ｙａｎｇなど、、Ｉｍａ＋ｕｎｏ ｅｎｅｔｉｃｓ、１
９： ２１７〜２３１（１９８４）のエレクトロフォー
カシングゲル電気泳動法のために規定されるようないづ
れかのサンプル電気泳動緩衝液の添加によって離した。
結合されたマウス免疫グロブリンに対するウサギ抗体を
用いて沈殿された標識抗原と抗体との複合体゛のアリコ
ートに添加した。広範囲にやたって洗浄した後、その標
識された抗原を、ポリアクリルアミドゲルのＬａｅａｕ
ｓｌｉ電気泳動法（Ｎａｔｕｒｅ、 ２２７：６８０〜
６８５（１９７０） ）のために要求されるような又は
Ｙａｎｇなど、、Ｉｍａ＋ｕｎｏ ｅｎｅｔｉｃｓ、１
９： ２１７〜２３１（１９８４）のエレクトロフォー
カシングゲル電気泳動法のために規定されるようないづ
れかのサンプル電気泳動緩衝液の添加によって離した。
電気泳動を、おのおのの方法に従って行なった。乾燥ゲ
ル中の標識されたタンパク質を、オートラジオグラフィ
ーによって同定した。
ル中の標識されたタンパク質を、オートラジオグラフィ
ーによって同定した。
腹水から単離されたモノクローナル抗体を、Ｇｏｄｉｎ
ｇの方法（Ｇｏｄｉｎ 、Ｊ、ｌｕ＋ｕｎｏ１．Ｍｅｔ
ｈｏｄｓ（１９７６）１３：２１５）に従ってＦＩＴＣ
に接合した０分析されるべき細胞を、ＰＩＴＣ−接合の
抗体の飽和量と共に混合し、そして４℃で３０分間イン
キエベートした。
ｇの方法（Ｇｏｄｉｎ 、Ｊ、ｌｕ＋ｕｎｏ１．Ｍｅｔ
ｈｏｄｓ（１９７６）１３：２１５）に従ってＦＩＴＣ
に接合した０分析されるべき細胞を、ＰＩＴＣ−接合の
抗体の飽和量と共に混合し、そして４℃で３０分間イン
キエベートした。
処理された細胞を洗浄し、そして対数増幅器を装置した
ＦＡＣ３Ｆ／ （Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）
上で試験抗体及び対照抗体と共にインキユベートされた
細胞のフルオレセンス度（平均法）を比較することによ
って、その結合した抗体の量を査定した。
ＦＡＣ３Ｆ／ （Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）
上で試験抗体及び対照抗体と共にインキユベートされた
細胞のフルオレセンス度（平均法）を比較することによ
って、その結合した抗体の量を査定した。
鈷−釆
一連の免疫化及び融合を、上に記載しているようにして
行ない、肛Ａ−８２７に対するモノクローナル抗体を生
成した。Ｇ５１４５．２を、スクリーンされたおよそ８
０００のうちの１つのウェルから選択した。
行ない、肛Ａ−８２７に対するモノクローナル抗体を生
成した。Ｇ５１４５．２を、スクリーンされたおよそ８
０００のうちの１つのウェルから選択した。
Ｇ５１４５．２によって産生された抗体は、ＩｇＧｔア
イソタイプのものであることが決定された。
イソタイプのものであることが決定された。
Ｇ５１４５．２の特異性を、マイクロエリサアッセイ（
＋＋＋１ｃｒｏｅｌｉｓａ ａｓｓａｙ）を用いて決定
した。それが、強直性を椎炎患者又は正常な人からの２
５のＢ−リンパ芽球細胞系に、及びＢ−２７又はＢ２７
と交差反応することが知られている対立遺伝子の発現の
ために選択された４０人の正常な人からのＴ細胞に試験
された。Ｇ５１４５．２は、Ｂ２７を発現するすべての
細胞と反応した。２５０Ｔ細胞に対するマイクロエリサ
アッセイの効果を第１表に示す。
＋＋＋１ｃｒｏｅｌｉｓａ ａｓｓａｙ）を用いて決定
した。それが、強直性を椎炎患者又は正常な人からの２
５のＢ−リンパ芽球細胞系に、及びＢ−２７又はＢ２７
と交差反応することが知られている対立遺伝子の発現の
ために選択された４０人の正常な人からのＴ細胞に試験
された。Ｇ５１４５．２は、Ｂ２７を発現するすべての
細胞と反応した。２５０Ｔ細胞に対するマイクロエリサ
アッセイの効果を第１表に示す。
以下余白
Ａ３．２６ Ｂ２ユ、３５＋
３．２５ ２７．３５ ＋２．１１
釘、３８＋ １１．３１ 釘、３５＋ ２．２８ 釘、６０＋ ２．２４ ２７．４４ ＋１．２６
２７．５７ ＋Ａ３．３１
Ｂ３５．３９ −１１．５２
５１．５９ −２．３ ５０．
６０ −２．２３ ４５．５５
−１．２ ５１．５７
−１ ７．８
−１ ８．４４ −１．３
０ １８．５７ −２
３５．３６ −２．３２ ４
４．Ｘ −２，２４１３，４４°
−２７、１４’ − １，２８８，４７− ３，２９８，４７− １，２６３８，５７− ２，３２３５，５７− ２６，３２５８，６０− １，２５１，５８− ＊インディペンデントリファーレンスラボラトリイでマ
イクロ細胞毒性試験によって決定された供与体のＨＬＡ
タイプ Ｇ５１４５．２は、ＨＬＡ−Ｂ２７を発現する７人のう
ちの７人からのＴ細胞と反応した。他の細胞は陽性を示
さなかった。陰性の細胞は、Ｂ７（３）、 Ｂ４７（
１）。
釘、３８＋ １１．３１ 釘、３５＋ ２．２８ 釘、６０＋ ２．２４ ２７．４４ ＋１．２６
２７．５７ ＋Ａ３．３１
Ｂ３５．３９ −１１．５２
５１．５９ −２．３ ５０．
６０ −２．２３ ４５．５５
−１．２ ５１．５７
−１ ７．８
−１ ８．４４ −１．３
０ １８．５７ −２
３５．３６ −２．３２ ４
４．Ｘ −２，２４１３，４４°
−２７、１４’ − １，２８８，４７− ３，２９８，４７− １，２６３８，５７− ２，３２３５，５７− ２６，３２５８，６０− １，２５１，５８− ＊インディペンデントリファーレンスラボラトリイでマ
イクロ細胞毒性試験によって決定された供与体のＨＬＡ
タイプ Ｇ５１４５．２は、ＨＬＡ−Ｂ２７を発現する７人のう
ちの７人からのＴ細胞と反応した。他の細胞は陽性を示
さなかった。陰性の細胞は、Ｂ７（３）、 Ｂ４７（
１）。
Ｂ ６０（３） 、 Ｂ １７（６） 、 Ｂ ２２（
２）又はＡ ３２ （４）を発現する細胞を包含した。
２）又はＡ ３２ （４）を発現する細胞を包含した。
これらのＨＬＡ−８対立遺伝子は、い（らかのアロ抗血
清又はｌ３２７に対する他のモノクローナル抗体により
陽性として試験をもたらす。
清又はｌ３２７に対する他のモノクローナル抗体により
陽性として試験をもたらす。
Ｇ５１４５．２の特異性をまた、間接的免疫螢光アッセ
イで試験した。使用される細胞は、１つのハブロタイブ
に対してＢ２７を発現するＢ−リンパ芽球細胞系（Ｔ５
１） 、低レベルの８２７を発現するＢ−リンパ芽球細
胞系に由来した突然変異細胞系（４゜５９．８）及びＢ
２７を発現しない無関係な細胞系（ＭＲＯ）であった。
イで試験した。使用される細胞は、１つのハブロタイブ
に対してＢ２７を発現するＢ−リンパ芽球細胞系（Ｔ５
１） 、低レベルの８２７を発現するＢ−リンパ芽球細
胞系に由来した突然変異細胞系（４゜５９．８）及びＢ
２７を発現しない無関係な細胞系（ＭＲＯ）であった。
Ｇ５１４５．２又は対照抗体の結合を、マウス免疫グロ
ブリンに対する螢光化された抗体を用いて検出し、そし
て対数増幅器を装置されたＦＡＣ５■細胞ソーター（Ｂ
ｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ｓマウンテンヴイユ
ウ、カリフォルニア）により分析した。その結果を第２
表に示す、その陽性細胞は、１つの不均斉ピークに分布
された。Ｇ５１４５．２と反応される場合、Ｂ２７陽性
細胞は、低レベルの８２７を発現する突然変異細胞より
も１００チヤンネル明るがった。
ブリンに対する螢光化された抗体を用いて検出し、そし
て対数増幅器を装置されたＦＡＣ５■細胞ソーター（Ｂ
ｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ｓマウンテンヴイユ
ウ、カリフォルニア）により分析した。その結果を第２
表に示す、その陽性細胞は、１つの不均斉ピークに分布
された。Ｇ５１４５．２と反応される場合、Ｂ２７陽性
細胞は、低レベルの８２７を発現する突然変異細胞より
も１００チヤンネル明るがった。
以下余白
フルオレスセンスのピー ン ル
Ｔ５１ ８．２７ ２０６ タ８２２５４
．５９．８ ８．− １０４ ５６
２０３ＰＩＲＱ ８．４４ ９５ ４６
１５３ＧＳ１４５．２がＢ２７に結合したと
いう確証は、放射性免疫沈殿法、次にポリアクリルアミ
ドゲル中での等電点分画電気泳動によって提供され、そ
してそれによって標識されたタンパク質を見えるように
した。ＨＬＡ抗原の源として使用されるＢ細胞系は、Ａ
Ｓ ４ （８２７，３８）及びＡ Ｓ ６ （８２７
，４０）であった。Ｂ２７に対応するバンドのみがＧ５
１４５．２沈殿物中に存在した。
．５９．８ ８．− １０４ ５６
２０３ＰＩＲＱ ８．４４ ９５ ４６
１５３ＧＳ１４５．２がＢ２７に結合したと
いう確証は、放射性免疫沈殿法、次にポリアクリルアミ
ドゲル中での等電点分画電気泳動によって提供され、そ
してそれによって標識されたタンパク質を見えるように
した。ＨＬＡ抗原の源として使用されるＢ細胞系は、Ａ
Ｓ ４ （８２７，３８）及びＡ Ｓ ６ （８２７
，４０）であった。Ｂ２７に対応するバンドのみがＧ５
１４５．２沈殿物中に存在した。
前記から、本発明の細胞系がヒトＩＩＬＡ−８２７抗原
に対して特異的であるが、しかし他のＨＬ Ａ抗原と実
質的に交差反応しないモノクローナル抗体及び他の受容
体を提供することが所望される。これは、密接に関係す
る他の抗原（たとえば、対立遺伝子）の存在下で細胞上
でこの抗原を検出するこ ′ ゛とができる
感受性アッセイの開発を可能にする。
に対して特異的であるが、しかし他のＨＬ Ａ抗原と実
質的に交差反応しないモノクローナル抗体及び他の受容
体を提供することが所望される。これは、密接に関係す
る他の抗原（たとえば、対立遺伝子）の存在下で細胞上
でこの抗原を検出するこ ′ ゛とができる
感受性アッセイの開発を可能にする。
さらに・その細胞系は、多量の受容体を容易に且つ経済
的に産生ずる方法を提供し、そしてそれはイムノアッセ
イ、免疫組織化学的染色法、免疫吸着法及び細胞選別法
に使用される。
的に産生ずる方法を提供し、そしてそれはイムノアッセ
イ、免疫組織化学的染色法、免疫吸着法及び細胞選別法
に使用される。
前述の発明は、明確に理解するために例示的且つ測的に
いくらか詳細に記載されているけれども、特許請求の範
囲内で修飾及び変更を行なうことができる。
いくらか詳細に記載されているけれども、特許請求の範
囲内で修飾及び変更を行なうことができる。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、ヒトＨＡＬ−Ｂ２７抗原に対して特異的で且つ他の
ＨＬＡ抗原と交差反応しないモノクローナル抗体組成物
。 ２、前記モノクローナル抗体がマウスからである特許請
求の範囲第１項記載のモノクローナル抗体組成物。 ３、前記モノクローナル抗体をＡＴＣＣ寄託番号ＨＢ−
８８５６と指定された細胞系から得る特許請求の範囲第
２項記載のモノクローナル抗体組成物。 ４、ＡＴＣＣ寄託番号ＨＢ−８８５６のモノクローナル
抗体組成物と交差反応する特許請求の範囲第１項記載の
モノクローナル抗体組成物。 ５、前記抗体がＩｇＧクラスからである特許請求の範囲
第１項記載のモノクローナル抗体組成物。 ６、検出可能なシグナルを提供することができるラベル
に結合する特許請求の範囲第１項記載のモノクローナル
抗体組成物。 ７、前記モノクローナル抗体組成物に対して特異的な第
二抗体に結合し、そして検出可能なシグナルを提供する
ことができるラベルに接合する特許請求の範囲第１項記
載のモノクローナル抗体組成物。 ８、前記ラベルがフルオレサー（螢光体）である特許請
求の範囲第６項又は第７項記載のモノクローナル抗体組
成物。 ９、前記ラベルが酵素である特許請求の範囲第６項又は
第７項記載のモノクローナル抗体組成物。 １０、ＨＬＡ−Ｂ２７抗原を有するヒト細胞の存在を検
出するための方法であって、ヒトＨＡＬ−Ｂ２７抗原に
対して特異的で且つ他のＨＬＡ抗原と交差反応しないモ
ノクローナル抗体組成物とヒト細胞とを組み合せ、そし
て複合形成体を検出することを含んで成る方法。 １１、前記複合形成体を補体仲介の溶菌によって検出す
る特許請求の範囲第１０項記載の方法。 １２、ＨＬＡ−Ｂ２７抗原を有するヒト細胞の存在を検
出することに使用のためのキットであって、ヒトＨＬＡ
−Ｂ２７抗原の多型エピトープ部位に対して特異的なモ
ノクローナル抗体組成物を含んで成り、そしてここで該
モノクローナル抗体組成物又は該モノクローナル抗体組
成物と反応する第二抗体のいづれかを、検出可能なシグ
ナルを提供するラベルに接合することを含んで成るキッ
ト。 １３、ヒトＨＬＡ−Ｂ２７抗原に対して特異的で且つ他
のＨＬＡ抗原と交差反応しないモノクローナル抗体の少
なくとも１つの鎖をコードするマウス遺伝子であって、
￥イン￥ ￥ヒドロ￥培養できる宿主中に導入される遺
伝子。 １４、ヒトＨＬＡ−Ｂ２７抗原に対して特異的なモノク
ローナル抗体を調製するための方法であって、抗−ヒト
ＨＬＡ−Ｂ２７抗原抗体産生細胞及び融合パートナー細
胞を融合し、ハイブリッド細胞系を形成し、該ハイブリ
ッド細胞系を増殖し、そして該ハイブリッド細胞系によ
って産生された、抗体（ここで、該抗体は他のヒトＨＬ
Ａ抗原と実質的に交差反応しない）を集めることを含ん
で成る方法。 １５、前記抗体産生細胞が脾臓又はリンパ節から得られ
るＢリンパ球である特許請求の範囲第１４項記載の方法
。 １６、前記ハイブリッド細胞系を￥イン￥ ￥ビボ￥又
は￥イン￥ ￥ヒドロ￥により増殖する特許請求の範囲
第１４項記載の方法。 １７、前記融合パートナー細胞が骨髄腫細胞又はハイブ
リッド細胞である特許請求の範囲第１４項記載の方法。 １８、ヒトＨＬＡ−Ｂ２７抗原に対して特異的で且つ他
のヒトＨＬＡ抗原と実質的に交差反応しないモノクロー
ナル抗体であって、抗−ヒトＨＬＡ−Ｂ２７抗原抗体産
生細胞及び融合パートナー細胞を融合し、ハイブリッド
細胞系を形成し、該ハイブリッド細胞系を増殖し、そし
て該ハイブリッド細胞系によって産生された抗体（ここ
で、該抗体は他のヒトＨＬＡ抗原と実質的に交差反応し
ない）を集めることを含んで成る方法によって製造され
るモノクローナル抗体。 １９、ＡＴＣＣ寄託番号ＨＢ−８８５６と指定されたハ
イブリッド細胞系。 ２０、ＡＴＣＣ寄託番号ＨＢ−８８５６と指定されたハ
イブリッド細胞系に由来するモノクローナル抗体であっ
て、マウスＩｇＧ＿１アイソタイプからであるモノクロ
ーナル抗体。 ２１、ヒトＨＬＡ−Ｂ２７抗原と反応するが、しかし他
のヒトＨＬＡ抗原とは反応しないモノクローナル抗体の
調製方法であって、ＡＴＣＣ寄託番号ＨＢ−８８５６と
指定されたハイブリッド細胞系を増殖し、そして前記抗
原を回収することを含んで成る方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US76673985A | 1985-08-16 | 1985-08-16 | |
| US766739 | 1985-08-16 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6240297A true JPS6240297A (ja) | 1987-02-21 |
| JP2536851B2 JP2536851B2 (ja) | 1996-09-25 |
Family
ID=25077383
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61190688A Expired - Fee Related JP2536851B2 (ja) | 1985-08-16 | 1986-08-15 | 多型ｈｌａ決定基−ｂ２７に対するモノクロ−ナル抗体 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0213824B1 (ja) |
| JP (1) | JP2536851B2 (ja) |
| CA (1) | CA1340610C (ja) |
| DE (1) | DE3650327T2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01227060A (ja) * | 1988-03-05 | 1989-09-11 | Tsunehiro Kitagawa | 固体抗原に対する抗体を用いるイムノアッセイ |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5633132A (en) * | 1994-04-28 | 1997-05-27 | Immunova Ltee | Determination of the presence of an antigen, particularly HLA-B27 antigen, at the surface of a cell, particularly lymphocytes, by cytotoxicity test combined with fluorescent staining |
| CN101775372B (zh) * | 2009-12-02 | 2012-01-11 | 桂耀庭 | 一种抗睾丸hT279蛋白的抗体或抗体片段及其应用 |
| TWI619729B (zh) * | 2012-04-02 | 2018-04-01 | 再生元醫藥公司 | 抗－ｈｌａ－ｂ*２７抗體及其用途 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1984003106A1 (en) * | 1983-02-04 | 1984-08-16 | Wadley Inst Of Molecular Medic | Production and characterization of hybridoma antibodies directed specifically against common determinant(s) present among closely related, but distinct proteins |
| JPS6225994A (ja) * | 1985-05-30 | 1987-02-03 | ジエネテイツク システムズ コ−ポレイシヨン | Ｈｌａタイプ分け用モノクロ−ナル抗体 |
| DE3545576A1 (de) * | 1985-11-28 | 1987-07-02 | Behringwerke Ag | Hla-b 27, dafuer codierende genomische dna und ihre verwendung |
| EP0258322A1 (en) * | 1986-02-26 | 1988-03-09 | The University Of Melbourne | Hla-b27 testing |
-
1986
- 1986-08-11 CA CA 515682 patent/CA1340610C/en not_active Expired - Fee Related
- 1986-08-11 DE DE19863650327 patent/DE3650327T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-08-11 EP EP86306175A patent/EP0213824B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-08-15 JP JP61190688A patent/JP2536851B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01227060A (ja) * | 1988-03-05 | 1989-09-11 | Tsunehiro Kitagawa | 固体抗原に対する抗体を用いるイムノアッセイ |
| JPH0752194B2 (ja) * | 1988-03-05 | 1995-06-05 | 常廣 北川 | 固体抗原に対する抗体を用いるイムノアッセイ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3650327T2 (de) | 1996-01-04 |
| EP0213824B1 (en) | 1995-05-24 |
| JP2536851B2 (ja) | 1996-09-25 |
| EP0213824A3 (en) | 1989-03-22 |
| DE3650327D1 (de) | 1995-06-29 |
| CA1340610C (en) | 1999-06-29 |
| EP0213824A2 (en) | 1987-03-11 |
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