JPS62283931A - プラスミノ−ゲンの安定化方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ３、発明の詳細な説明 〔産業上の利用分野〕 本発明は、ヒト血崇及びヒト胎盤由来のプラスミノーゲ
ンの安定化方法に関する。

〔従来技術・発明が解決しようとする問題点〕プラスミ
ノーゲンは、ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ等によ
って活性化されてプラスミンとなり、これがフィブリン
を分解して線溶現象を生起するので、ウロキナーゼやス
トレプトキナーゼとともに血栓症の治療の他、広く臨床
応用が可能な医薬品として注目されているが、加熱処理
、凍結乾燥処理などの苛酷な条件下あるいは長期保存す
ることにより失活することが知られている。

ところで、プラスミノーゲン製剤も他の血液製剤と同様
に、肝炎ウィルス等が混入してくる可能性があり、当該
製剤によるウィルスの伝播を防ぐために、たとえば６０
℃、１０時間の液状加熱処理を施す必要があるが、通常
の方法でこの処理を施すとプラスミノーゲンは大部分失
活する。

プラスミノーゲンの６０℃、１０時間の加熱処理に成功
した例としてＳｇｏｕｒｉｓ　らの酸処理法（Ｊ。

Ｔ、Ｓｇｏｕｒｉｓ：Ｖｏｗ　Ｓａｎｇ、　５，３５７
　（１９６０）　）が知られている。この方法は、低イ
オンン雇度下でｐｌｌを２に低下させ、不純物質を除去
した後、ｐＨ３〜５に修正して６０℃、１０時間の加熱
処理を行うものであるが、この方法で得られるプラスミ
ノーゲン（以下酸処理プラスミノーゲンという）は、中
性ｐＨで不溶性化する欠点が知られているため、医薬品
として用いるには不都合であった。

また、酸処理プラスミノーゲンの液状での安定性は非酸
処理プラスミノーゲンのそれと比べて著しく劣るとする
報告（Ｎｏｒｍａ　Ａｌｋｚａｅｒｓｉｇ：Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ。

Ｊ、９３，１７１．　（１９６４））や、非酸処理プラ
スミノーゲンは、ｐＨ９〜１０のアルカリ側で比較的安
定とする報告（Ｙ、Ａｂｉｋｏ、　Ｍ、　Ｉｗａｓｏｔ
ｏ、　Ｍ、Ｓｉｓ＋ｉｚｕ：Ｊ、Ｂｉｏｃｈｅｓ＋。

■（６）　、　７４３　（１９６８）　］等は知られて
いるが、これらは高々３７℃における安定性を検討した
報告であった・ 本発明の目的は、プラスミノーゲン含有水溶液に夾雑す
るウィルスを不活化するための加熱処理時におけるプラ
スミノーゲンの安定化方法を提供するにある。

〔問題点を解決するための手段〕

かかる目的を達成するために本発明者らは種々検討を重
ねた結果、無数にある化合物の中から特定の化合物を選
びだし、しかもその化合物を特定の割合でプラスミノー
ゲン水溶液中に添加すると、加熱処理の苛酷な条件下で
もプラスミノーゲンが安定化されることを見出し、さら
に研究を重ねた結果、本発明を完成した。

本発明は、プラスミノーゲン含有水溶液をシュークロー
スおよびアプロチニンの存在下に加熱処理することによ
るヒト血漿由来プラスミノーゲンの加熱処理時の安定化
法に関する。

本発明の方法が適用できるプラスミノーゲンを含有する
水ｔ８液は、特に限定されるものではないが、通常はヒ
ト血漿由来プラスミノーゲンである。

たとえばヒトの血漿中のフィブリノーゲン、γ−グロブ
リンおよびアルブミンなどの重要な生物学的薬剤の製造
に一般に用いられる血漿蛋白分画法における各種画分の
プラスミノーゲンを含有する水溶液などに適用できる。

また、この水溶液中のプラスミノーゲン精製度にも、特
に限定はなく、たとえば、固定化リジンによるアフィニ
ティークロマトグラフィー処理によって高度情調したも
のでもよく又、コーンの低温アルコール分画法の分画■
＋■あるいは■のように粗精製のものでもよい。従って
、本発明の加熱処理はプラスミノーゲンの分離、精製の
いずれの段階に適用してもよい。

本発明で使用されるシェークロース及びアプロチニンは
市販されており、市販品を使用すればよい。

本発明方法において、シェークロースはプラスミノーゲ
ン含有水溶液に対して、その最終濃度が０．５ｇ／ａｆ
から飽和濃度、好ましくは０．７ｇ／ａ／以上、より好
ましくはＩｇ／ｄ以上になるように添加される。また、
アプロチニンはプラスミノーゲン含有水溶液に対して、
その最終濃度が１．５ＫＩｔＪ／−以上、好ましくは２
〜５００ＫＩＵ／＋１１７になるように添加される。、
ＫＩＵはカリジノゲナーゼ不活性化物質単位で、１単位
はｐＨ８、室温、２時間でカリジノゲナーゼ２単位の効
力を半減させる量である。

本発明で使用される安定化剤は、透析等の処理によって
生理的に好ましい濃度、例えばＯ〜０．２に１ｔＪに調
製してもよい、プラスミノーゲン製剤中に安定化剤をそ
のまま残存させた場合、薬剤の経時安定性を高めるもの
である。

加熱処理は、プラスミノーゲンを不活化することなくプ
ラスミノーゲン中に夾雑するウィルス〔たとえば、肝炎
ウィルス、エイズウィルス、水庖性口内炎ウィルス（ｖ
ｅｓｉｃｕｌａｒ　ｓｔｏｍａｔｉｔｉｓ　ｖｉｒｕｓ
）、チクングニアウイルス（Ｃｈｉｋｕｎｇｕｎｙａ　
ｖｉｒｕｓ）−、種痘ウィルス　（ｖａｃｃｉｎｉａ）
　、エコーウィルス　（Ｅｃｈ。

ｖｉｒｕｓ）、ムンプスウィルス（Ｍｕｍｐｓ　ｖｉｒ
ｕｓ　％単純庖疹ウィルス（Ｈｅｌｐｅｓ　５ｉｐｌｅ
ｘ　ｖｉｒｕｓ）など〕を不活化させるに十分な温度及
び時間行われる８通常は５０−１００℃、好ましくは６
０〜７５℃において３〜２４時間、好ましくは１０〜２
０時間実施される。最適には６０℃程度、ｌＯ時間程度
の処理である。

加熱処理時に幇けるプラスミノーゲン含有水溶液のｐＨ
は特に限定されないが、好ましくはｐＨ２〜８、特に好
ましくはｐｉ（６〜８である。

〔作用・効果〕

本発明で使用されるサッカロースおよびアプロチニンは
加熱処理時におけるプラスミノーゲンの活性低下を防止
する作用を有するものであり、安定化剤として掻めて優
れたものである。

本発明の方法は、プラスミノーゲンのウィルス不活化の
だめの加熱処理工程中におけるプラスミノーゲンの安定
化効果を高め、製造工程中におけるプラスミノーゲンの
ｔ置火を最大限防御するものであり、さらに得られた当
該安定他剤含有プラスミノーゲン製剤は、保存安定性に
優れたものであり、プラスミノーゲンの工業的製法とし
てきわめて好ましい方法を提供するものである。

〔実施例〕

以下に本発明方法の効果を示す実施例を示す。

しかし本発明は、これらに限定されるものではない。

実験例１ コーンの冷エタノール分画法で得られた画分■＋■をｌ
Ｗ／ｖ％塩化ナトリウム、ＩＷ／Ｖ％グリシン溶液に懸
濁し、少時攪拌した後、遠心分離により上澄を分離した
。この上澄をＤｅｕｔｓｃｈ＋Ｄ、Ｇ。

ら（Ｓｃｉｅｎｃｅ、　１７０．１０９５．　（１９７
０）　）の方法に準じ、リジン−セファロースカラムに
注入し、プラスミノーゲンを吸着させ、次いで不純蛍白
を生理食塩溶液で洗浄した後、０．２５　Ｍリジンと０
．９％グリシンとを含む溶媒（ｐＨ７，２）を用いて吸
着したプラスミノーゲンを溶出せしめた。

この精製プラスミノーゲン液に各種安定化試剤を加え、
６０℃、１０時間加熱処理を行い、残存プラスミノーゲ
ンの力価を求めた。

プラスミノーゲンの力価は、Ｆｒｉｂｅｒｇｅｒ　らの
方法（Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ　Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ、　
１２８＋　１９７９　）に準じ発色合成基１ｓ−２２５
１を用いて測定した。安定他剤無添加、非加熱のプラス
ミノーゲンの活性を１００％として、各種安定化試剤添
加条件下における残存活性を百分率で示すと表１のとお
りであった・ この結果、本発明の方法は、シェークロースの単独添加
より約１．３倍以上の加熱安定化効果を提供するもので
ある。

（以下余白） 表１　（加熱処理後の残存活性） 手続主甫正書帽発） 昭和６１年７月７日

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. プラスミノーゲン含有水溶液をサッカロース及びアプロ
   チニンの存在下に加熱することを特徴とするプラスミノ
   ーゲンの加熱処理時の安定化方法。