JPS62276465A - 淋病および髄膜炎の診断方法および試薬 - Google Patents
淋病および髄膜炎の診断方法および試薬Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
３、発明の詳細な説明
（産業上の利用分野）
本発明は、酵素である免疫グロブリン
（ｉｍｍｕｎｏＨｌｏｂｕｌｉｎ） Ａプロテアーゼ（
ＩｇＡＰ）と、その基質である免疫グロブリンＡ亜鋼１
（ＩｇＡｌ）との反応により産生される小片の免疫検
定に関する。この免疫検定により、 ＩｇＡＰを分泌す
るバクテリアを検出でき、特に、淋菌の検出、および淋
病の診断に有益である。
ＩｇＡＰ）と、その基質である免疫グロブリンＡ亜鋼１
（ＩｇＡｌ）との反応により産生される小片の免疫検
定に関する。この免疫検定により、 ＩｇＡＰを分泌す
るバクテリアを検出でき、特に、淋菌の検出、および淋
病の診断に有益である。
（従来の技術およびその問題点）
免疫グロブリンＡプロテアーゼ（ＩｇＡＰ）は、その（
人体内）における発見以来、精深な研究テーマであった
。これは、病原バクテリアによって分泌され、これらバ
クテリアが引起す淋病、髄膜炎、およびインフルエンザ
等の疾病に関与している。
人体内）における発見以来、精深な研究テーマであった
。これは、病原バクテリアによって分泌され、これらバ
クテリアが引起す淋病、髄膜炎、およびインフルエンザ
等の疾病に関与している。
ＩｇＡＰの基質は、免疫グロブリンＡＭ鋼１ （ＩｇＡ
ｌ）であるが、これは、粘膜の自然免疫の一部として、
尿道生殖膜により１体内に自然分泌される。
ｌ）であるが、これは、粘膜の自然免疫の一部として、
尿道生殖膜により１体内に自然分泌される。
バクテリアめ病原性におけるＩｇＡＰの役割は明白では
ないが、 ＩｇＡＰ分泌バクテリアの防衛機序（ｄｅｆ
ｅｎｓｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ）であると思われる。
ないが、 ＩｇＡＰ分泌バクテリアの防衛機序（ｄｅｆ
ｅｎｓｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ）であると思われる。
酵素の迅速かつ簡単な検定方法があれば、ＩｇＡＰおよ
びＩｇＡ ｌとの反応の研究に助けとなるが、現行方法
は、手間と時間がかかる。
びＩｇＡ ｌとの反応の研究に助けとなるが、現行方法
は、手間と時間がかかる。
免疫電気泳動法は、反応生成物を、寸法および電荷に応
じて分離し、抗血清で識別するものであるが、複雑すぎ
る（プロー（ｐｌｏｕｔ）その他による論文、ｒ実験区
生物学の進歩（Ａｄｖ、 Ｅｘｐ、 Ｍｅｄ。
じて分離し、抗血清で識別するものであるが、複雑すぎ
る（プロー（ｐｌｏｕｔ）その他による論文、ｒ実験区
生物学の進歩（Ａｄｖ、 Ｅｘｐ、 Ｍｅｄ。
Ｂｉｏｌ、）４誌、１９７４年、４５号、２４５乃至２
４９ページ、およびメール、シー・ジェイ（Ｍａｌｅ、
Ｃ，Ｊ、）による論文、「免疫情報（Ｉｎｆ、 Ｉ＋
ａｍｕｓ）Ｊ誌、１９７８年、２６号、２５４乃至２６
１ページ）を参照されたい）。
４９ページ、およびメール、シー・ジェイ（Ｍａｌｅ、
Ｃ，Ｊ、）による論文、「免疫情報（Ｉｎｆ、 Ｉ＋
ａｍｕｓ）Ｊ誌、１９７８年、２６号、２５４乃至２６
１ページ）を参照されたい）。
また、１２５Ｉ札付８１ａｂｅｌｅｄ） ＩｇＡｌの５
Ｏ５−ＰＡＧＥ分析は、デリケートで時間がかかる（ブ
レイク（Ｂｌａｋｅ）その他による論文、「感染病ジャ
ーナル（Ｊ、 Ｉｎｆｅｃｔ、 Ｄｉｓ）Ｊ誌、１９７
９年、１３９号、８９乃至９２ページ、およびブレイク
（Ｂｌａｋｅ）・スワンソン（Ｓｗａｎｓｏｎ）共著の
論文、「免疫情報（Ｉｎｆ、 Ｉｍｍｕｍ、）Ｊ誌、１
９７８年、２２号、３５０乃至３５８ページを参照され
たい）。
Ｏ５−ＰＡＧＥ分析は、デリケートで時間がかかる（ブ
レイク（Ｂｌａｋｅ）その他による論文、「感染病ジャ
ーナル（Ｊ、 Ｉｎｆｅｃｔ、 Ｄｉｓ）Ｊ誌、１９７
９年、１３９号、８９乃至９２ページ、およびブレイク
（Ｂｌａｋｅ）・スワンソン（Ｓｗａｎｓｏｎ）共著の
論文、「免疫情報（Ｉｎｆ、 Ｉｍｍｕｍ、）Ｊ誌、１
９７８年、２２号、３５０乃至３５８ページを参照され
たい）。
リンダール（Ｌｉｎｄａｈｌ）は、Ａ群連鎖状球菌から
のＩｇＡ結合性蛋白質を利用する検定法を報告している
。これは、実験室条件下では有益であるが、時間と手間
がかかる。リンダ−ルウエル（Ｌｉｎｄａｈｌ。
のＩｇＡ結合性蛋白質を利用する検定法を報告している
。これは、実験室条件下では有益であるが、時間と手間
がかかる。リンダ−ルウエル（Ｌｉｎｄａｈｌ。
Ｌ、）による論文、「臨床微生物学ジャーナル（Ｊ。
（：ｌｉｎ、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、）Ｊ誌、１９８１
年、１３号、９９１乃至９９３ページを参照されたい）
。
年、１３号、９９１乃至９９３ページを参照されたい）
。
したがって、酵素分泌バクテリアを検出して。
これらバクテリアが引起す疾病の早期診断を可能にする
迅速かつ簡単なＩｇＡＰ検定法が求められてきた。
迅速かつ簡単なＩｇＡＰ検定法が求められてきた。
（問題を解決するための手段）
本発明によると、 ＩｇＡ１を免疫グロブリンＡ−プロ
テアーゼ（ＩｇＡＰ）で酵素分解して得られる免疫グロ
ブリンＡ亜鋼１ （ＩｇＡｌ）小片（ｆｒａｇｍｅｎｔ
ｓ）の検出方法が提供される。
テアーゼ（ＩｇＡＰ）で酵素分解して得られる免疫グロ
ブリンＡ亜鋼１ （ＩｇＡｌ）小片（ｆｒａｇｍｅｎｔ
ｓ）の検出方法が提供される。
この方法は、未分解ＩｇＡ１ではなく、ＩｇＡ１小片と
反応する抗体で免疫検定するものであり、抗体としては
、特にＩｇＡＰでＩｇＡｌを分解した後に産生されるＩ
ｇＡ １片に見られるネオエピトープ（ｎｅｏ−ｅｐｉ
ｔｏｐｅｓ）と反応するモノクローン（ｍｏｎｏｃｌｏ
ｎａｌ）抗体が好ましい。ちなみに、前記ネオエピトー
プは、無傷ＩｇＡ１にはみられない。
反応する抗体で免疫検定するものであり、抗体としては
、特にＩｇＡＰでＩｇＡｌを分解した後に産生されるＩ
ｇＡ １片に見られるネオエピトープ（ｎｅｏ−ｅｐｉ
ｔｏｐｅｓ）と反応するモノクローン（ｍｏｎｏｃｌｏ
ｎａｌ）抗体が好ましい。ちなみに、前記ネオエピトー
プは、無傷ＩｇＡ１にはみられない。
抗体を用いる免疫検定法としては、酵素連鎖性免疫検定
法（ＥＬＩＺＡ）、放射線免疫検定法、サンドイッチ検
定法、酵素抑制免疫検定法（ＥＩＩＡ）等がある。
法（ＥＬＩＺＡ）、放射線免疫検定法、サンドイッチ検
定法、酵素抑制免疫検定法（ＥＩＩＡ）等がある。
酵素抑制免疫検定法では、ＩｇＡ １の酵素分解で形成
されたネオエピトープに見られる全アミノ酸連鎖、また
はその一部を有するペプチドを用いるが、これは公知の
方法により、化学時または生化学的に合成されるクロー
ンＩｇＡ１小片であるＦｃまたはＦａｂ等である。
されたネオエピトープに見られる全アミノ酸連鎖、また
はその一部を有するペプチドを用いるが、これは公知の
方法により、化学時または生化学的に合成されるクロー
ンＩｇＡ１小片であるＦｃまたはＦａｂ等である。
ＩｇＡｌについては、ＩｇＡｌとＩｇＡＰとの反応に適
した条件下で、尿道生殖膜等の膜製抽出物標本、その他
の生物学的被検物と、ＩｇＡＰとを接触させて、ＩｇＡ
１小片を形成するとともに１本発明による免疫検定法に
より、該小片を検出することによって、前記標本中に検
出できる。
した条件下で、尿道生殖膜等の膜製抽出物標本、その他
の生物学的被検物と、ＩｇＡＰとを接触させて、ＩｇＡ
１小片を形成するとともに１本発明による免疫検定法に
より、該小片を検出することによって、前記標本中に検
出できる。
一方、 ＩｇＡＰについては、例えば１反応適切条件下
で、標本、すなわちＩｇＡＰを分泌するバクテリアの培
養物とＩｇＡ １とを接触させて、ＩｇＡ １小片を形
成するとともに１本発明の方法により、該小片を測定す
ることによって前記標本中に検出できる。
で、標本、すなわちＩｇＡＰを分泌するバクテリアの培
養物とＩｇＡ １とを接触させて、ＩｇＡ １小片を形
成するとともに１本発明の方法により、該小片を測定す
ることによって前記標本中に検出できる。
酵素ＩｇＡＰを分泌するバクテリアについては、ＩｇＡ
ＰとＩｇＡ １との反応に適した条件下で、バクテリア
とＩｇＡ １を接触させ、得られた小片を測定すること
により検出するが、これらバクテリアとしては。
ＰとＩｇＡ １との反応に適した条件下で、バクテリア
とＩｇＡ １を接触させ、得られた小片を測定すること
により検出するが、これらバクテリアとしては。
ある種のナイセリャ属（Ｎａｉｓｓａｒｉａ）、ヘモフ
ィラス属（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）、および連鎖球菌
属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ）があり、ＩｇＡＰ
［定量を増して検定感度を高めるため、ＩｇＡＰ検定前
に、前記バクテリアを含む標本を培養する。
ィラス属（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）、および連鎖球菌
属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ）があり、ＩｇＡＰ
［定量を増して検定感度を高めるため、ＩｇＡＰ検定前
に、前記バクテリアを含む標本を培養する。
本発明の方法により、Ｉ、ＡＰ分泌バクテリアを識別で
きる。すなわち、識別するべきバクテリアを、１、ＡＰ
とＩｇＡｌとの反応に適した条件下でＩｇＡｌと接触さ
せて、ＩｇＡＰ細菌源（ｂａｃｔｅｒｉａｌ ５ｏｕｒ
ｃｅ）のネオエピトープ特性を有する小片を形成し、得
られた小片を、特にネオエピトープと結合する抗体と接
触させる。
きる。すなわち、識別するべきバクテリアを、１、ＡＰ
とＩｇＡｌとの反応に適した条件下でＩｇＡｌと接触さ
せて、ＩｇＡＰ細菌源（ｂａｃｔｅｒｉａｌ ５ｏｕｒ
ｃｅ）のネオエピトープ特性を有する小片を形成し、得
られた小片を、特にネオエピトープと結合する抗体と接
触させる。
このように、ナイセリア属が産生じた１、Ａ １小片を
、 ＩｇＡｌとＩｇＡＰとの反応により、髄膜炎菌（Ｎ
ｅｉｓｓｅｒｉａ ｎ＋ｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）から
産生されたネオエピトープと特に反応する抗体、または
ＩｇＡｌとＩｇＡＰその他酵素との反応により淋菌（Ｎ
ｅｉｓｓｅｒｉａｇｏｎｏｒｒｈｅａ）から産生された
ネオエピトープと特に反応する抗体と接触させることに
より、淋菌と髄膜炎菌とを区別できる。
、 ＩｇＡｌとＩｇＡＰとの反応により、髄膜炎菌（Ｎ
ｅｉｓｓｅｒｉａ ｎ＋ｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）から
産生されたネオエピトープと特に反応する抗体、または
ＩｇＡｌとＩｇＡＰその他酵素との反応により淋菌（Ｎ
ｅｉｓｓｅｒｉａｇｏｎｏｒｒｈｅａ）から産生された
ネオエピトープと特に反応する抗体と接触させることに
より、淋菌と髄膜炎菌とを区別できる。
抗体と小片との結合については、ラベル（ｌａｂｅｌ）
、読出装置、ラテックス凝集ビーズ、その他公知の手段
によりＩｌ！察する６ 本発明の方法は、特に淋病の診断に有益である。
、読出装置、ラテックス凝集ビーズ、その他公知の手段
によりＩｌ！察する６ 本発明の方法は、特に淋病の診断に有益である。
淋病を引起す作用物である淋菌の病原菌株は、ＩｇＡＰ
を分泌する。
を分泌する。
淋菌にさせられた性尿器分泌物（ｕｒｏｇｅｎｉｔａｌ
ｓｅｃｒｅｔｉｏｎｓ）、腟壁および尿道からのＩｇＡ
ｌを、生体内で酵素によって分割（ｃｌｓａｖｅ） Ｌ
、得られた小片を、本発明の方法で検定するが、好適に
は、性尿器系から抽出した標本を、淋菌から得られたＩ
ｇＡＰその他酵素と尿道生殖膜から得たＩｇＡ ｌとの
反応により、生体内に産生されたＩｇＡ１小片のネオエ
ピトープと特に反応する１種以上の抗体と接触させる。
ｓｅｃｒｅｔｉｏｎｓ）、腟壁および尿道からのＩｇＡ
ｌを、生体内で酵素によって分割（ｃｌｓａｖｅ） Ｌ
、得られた小片を、本発明の方法で検定するが、好適に
は、性尿器系から抽出した標本を、淋菌から得られたＩ
ｇＡＰその他酵素と尿道生殖膜から得たＩｇＡ ｌとの
反応により、生体内に産生されたＩｇＡ１小片のネオエ
ピトープと特に反応する１種以上の抗体と接触させる。
ＩｇＡｌとＩｇＡＰとの加水分解中に形成されたネオ
エピトープを、淋菌から得られる水解酵素等のその他酵
素と反応させて、生体内で変性させる。
エピトープを、淋菌から得られる水解酵素等のその他酵
素と反応させて、生体内で変性させる。
本発明による診断方法では、生体内にできるＩｇＡ １
小片のネオエピトープと特に結合する抗体を用いる。
小片のネオエピトープと特に結合する抗体を用いる。
腔相（ｖａ（ｉｎａｌ ｆｌｏｒａ）のその他バクテリ
アは。
アは。
ＩｇＡＰを含有していないため、ＩｇＡｌを分割して小
片を形成できないばかりか、該小片を変性させる酵素も
含まないため、上記ネオエピトープは、淋菌に特徴的で
ある。
片を形成できないばかりか、該小片を変性させる酵素も
含まないため、上記ネオエピトープは、淋菌に特徴的で
ある。
例えば、尿道生殖膜をおかし易い髄膜炎菌は。
ＩｇＡ１小片を形成するＩｇＡＰを産生ずるが、淋菌が
産生ずる小片とは免疫学的に区別できる。
産生ずる小片とは免疫学的に区別できる。
淋菌からのＩｇＡＰその他の酵素を、 ＩｇＡ１産生膜
からのＩｇＡｌと反応させることにより、生体内に産生
されたＩｇＡ １小片上のエピトープと特に反応する１
種以上の抗体を用いて、前記膜を免疫検定することによ
りｌｆ膜炎菌の存在下でも淋菌を検出できる。すなわち
、上記抗体は、髄膜炎菌のＩｇＡＰが産生ずるＩｇＡ１
小片とは反応しない。
からのＩｇＡｌと反応させることにより、生体内に産生
されたＩｇＡ １小片上のエピトープと特に反応する１
種以上の抗体を用いて、前記膜を免疫検定することによ
りｌｆ膜炎菌の存在下でも淋菌を検出できる。すなわち
、上記抗体は、髄膜炎菌のＩｇＡＰが産生ずるＩｇＡ１
小片とは反応しない。
本発明の他の実施例では、 ＩｇＡＰ産生膜から得た噴
−標本から、淋菌と髄膜炎菌を検出する。すなわち、抽
出物、洗液（ｗａｓｈ） 、綿棒または滲出物を、淋菌
からのＩｇＡＰその他酵素の反応により、生体内に産生
じたＩｇＡ１小片上のネオエピトープと特に反応する抗
体群、および髄膜炎菌の抗原部である莢膜性多糖類、ま
たは細胞内抗原と特に反応する他の抗体群と接触させる
。
−標本から、淋菌と髄膜炎菌を検出する。すなわち、抽
出物、洗液（ｗａｓｈ） 、綿棒または滲出物を、淋菌
からのＩｇＡＰその他酵素の反応により、生体内に産生
じたＩｇＡ１小片上のネオエピトープと特に反応する抗
体群、および髄膜炎菌の抗原部である莢膜性多糖類、ま
たは細胞内抗原と特に反応する他の抗体群と接触させる
。
各抗体群を、中実支持体の２レーン上、または別々のラ
テックスビーズもしくは不活性条片上の異なる座位（ｌ
ｏｃｕｓ）に置く。このようにすると。
テックスビーズもしくは不活性条片上の異なる座位（ｌ
ｏｃｕｓ）に置く。このようにすると。
各抗体群の反応を個別ｗＡ察できるとともに、バクテリ
アの存在を同時確認できる。
アの存在を同時確認できる。
本発明の方法は、ＩｇＡＰを分泌するバクテリアに起因
するその他疾病の診断にも有益である。
するその他疾病の診断にも有益である。
例えば、髄膜炎菌から得たＩｇＡＰと、ＩｇＡ １分泌
膜から得たＩｇＡｌとの反応により、生体内に産生じた
ＩｇＡ ｌ小片上のネオエピトープと特に反応する抗体
を用いて、前記膜の抽出物を免疫検定することにより、
髄膜炎菌を検出する。また、 ＩｇＡｌを産生じない髄
液等の生物流体を、 ＩｇＡｌで培養し、本発明方法で
小片検定すれば、前記流体中の髄膜炎菌を発見できる。
膜から得たＩｇＡｌとの反応により、生体内に産生じた
ＩｇＡ ｌ小片上のネオエピトープと特に反応する抗体
を用いて、前記膜の抽出物を免疫検定することにより、
髄膜炎菌を検出する。また、 ＩｇＡｌを産生じない髄
液等の生物流体を、 ＩｇＡｌで培養し、本発明方法で
小片検定すれば、前記流体中の髄膜炎菌を発見できる。
同様に、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｉ
ｎｆｌｕｅｎｚａ）も識別できる。
ｎｆｌｕｅｎｚａ）も識別できる。
本発明の好適な方法では、膜の抽出物を、抗体と小片と
の結合に適した条件下で、特に小片のネオエピトープと
反応する１種以上の抗体と接触させて、該抗体の結合状
態をｗ４ｍする。
の結合に適した条件下で、特に小片のネオエピトープと
反応する１種以上の抗体と接触させて、該抗体の結合状
態をｗ４ｍする。
前記抗体については、観察可能基である放射性基酵素、
蛍光基、化学冷光（ｃｈｅｎ＋１ｌｕｎ＋１ｎｅｓｃｅ
ｎｔ）基。
蛍光基、化学冷光（ｃｈｅｎ＋１ｌｕｎ＋１ｎｅｓｃｅ
ｎｔ）基。
抗原基その他の公知の基でラベル付（ｌａｂｅｌ）する
。
。
乾燥化学・膜技法を用いるその他公知の読取法、ラテッ
クス凝集ビーズ、または免疫遺伝学的「浸捧（ｄｉｐ−
ｓｔｉｃｋ） Ｊを用いて、抗体・膜間の反応を観察で
きる。
クス凝集ビーズ、または免疫遺伝学的「浸捧（ｄｉｐ−
ｓｔｉｃｋ） Ｊを用いて、抗体・膜間の反応を観察で
きる。
ある実施例では、まず、抽出物その他の標本を、特にＩ
ｇＡ ｌのＦｃ部分と結合する物質と接触させ、標本か
ら、小片と無傷１．Ａ１を「探出（ｆｉｓｈ） Ｊする
。
ｇＡ ｌのＦｃ部分と結合する物質と接触させ、標本か
ら、小片と無傷１．Ａ１を「探出（ｆｉｓｈ） Ｊする
。
好適には、該物質を、中実支持体上に固定してから、支
持体を標本と接触させるとともに、小片、抗体、および
固定物質間の結合に適した条件下で、淋病ＩｇＡＰが産
生ずるＩｇＡ１小片上のエピトープと反応する抗体と接
触させて、ｒサンドイッチ（ｓａｎｄｗｉｃｈ）を形成
して、公知方法でＷｔ察する。
持体を標本と接触させるとともに、小片、抗体、および
固定物質間の結合に適した条件下で、淋病ＩｇＡＰが産
生ずるＩｇＡ１小片上のエピトープと反応する抗体と接
触させて、ｒサンドイッチ（ｓａｎｄｗｉｃｈ）を形成
して、公知方法でＷｔ察する。
他の好適実施例では、膜抽出物等の標本を、特に、小片
上のネオエピトープと結合する抗体と接触させてから、
定量中のネオエピトープのアミノ酸連結を有するペプチ
ドと接触させる。
上のネオエピトープと結合する抗体と接触させてから、
定量中のネオエピトープのアミノ酸連結を有するペプチ
ドと接触させる。
この場合、好適には、ペプチドを中実支持体に固定して
、抗体をｗｉ察可能基で札付する。ペプチド、抗体およ
び小片を反応させて、固体表面上または溶液中のラベル
（ｌａｂｅｌ）を観察する。
、抗体をｗｉ察可能基で札付する。ペプチド、抗体およ
び小片を反応させて、固体表面上または溶液中のラベル
（ｌａｂｅｌ）を観察する。
本発明は、さらに、ＩｇＡｌ、およびＩｇＡ ｌ小片上
のネオエピトープとは反応するが、無傷ＩｇＡ １とは
反応しない抗体から成るＩｇＡＰの酵素分解の結果であ
るＩｇＡ１小片検定試薬を提供している。
のネオエピトープとは反応するが、無傷ＩｇＡ １とは
反応しない抗体から成るＩｇＡＰの酵素分解の結果であ
るＩｇＡ１小片検定試薬を提供している。
該試薬は、好適には、宿主動物にネオエピトープの全ア
ミノ酸列、またはその一部から成るペプチドで免疫性を
与えることによって産生されるモノクローン抗体である
。ペプチドとしては、 ＩｇＡｌとＩｇＡＰとの酵素分
解の結果であるＦｃ、 Ｆａｂ、またはＦｃ−Ｆａｂ小
片の組合せがあり、化学的または生化学的に合成できる
。
ミノ酸列、またはその一部から成るペプチドで免疫性を
与えることによって産生されるモノクローン抗体である
。ペプチドとしては、 ＩｇＡｌとＩｇＡＰとの酵素分
解の結果であるＦｃ、 Ｆａｂ、またはＦｃ−Ｆａｂ小
片の組合せがあり、化学的または生化学的に合成できる
。
また１本発明の試薬を用いて、ＩｇＡ １、ＩｇＡＰ、
およびＩｇＡＰ分泌バクテリアを検出できる。
およびＩｇＡＰ分泌バクテリアを検出できる。
本発明による淋病診断用試薬は、淋菌から得たＩｇＡＰ
および水解酵素と、ＩｇＡ１分泌膜から得たＩｇＡｌと
の反応により、生体内で産生されるＩｇＡｌ小片と特に
反応する抗体から成り、好適には、 ＩｇＡｌと淋菌Ｉ
ｇＡＰとの反応で得られるＩｇＡ １小片上のネオエピ
トープと特に反応する１種以上の抗体から成っている。
および水解酵素と、ＩｇＡ１分泌膜から得たＩｇＡｌと
の反応により、生体内で産生されるＩｇＡｌ小片と特に
反応する抗体から成り、好適には、 ＩｇＡｌと淋菌Ｉ
ｇＡＰとの反応で得られるＩｇＡ １小片上のネオエピ
トープと特に反応する１種以上の抗体から成っている。
他の実施例によると、試薬は、Ｉ３Ａ １とＩｇＡＰと
の反応で得られるＩｇＡ１小片と、淋菌水解酵素との反
応で産生されるネオエピトープと特に反応する１種以上
の抗体から成っている。
の反応で得られるＩｇＡ１小片と、淋菌水解酵素との反
応で産生されるネオエピトープと特に反応する１種以上
の抗体から成っている。
さらに、淋病診断試薬は、淋菌酵素でＩ［Ａ １を分解
することにより、生体体に産生されるＩｇＡ ｌ小片上
の全ネオエピトープ、またはその一部のアミノ酸列を有
するペプチドから成っている。
することにより、生体体に産生されるＩｇＡ ｌ小片上
の全ネオエピトープ、またはその一部のアミノ酸列を有
するペプチドから成っている。
好適には、該ペプチドを中実支持体で固定する。
淋菌から得られるＩｇＡＰおよびその他酵素の反応によ
り、生体体に産生されるＩｇＡ ｌ小片上のネオエピト
ープと反応する１種以上の抗体、および得られた抗体と
ＩｇＡ １小片とを反応させる試薬から成る淋菌診断用
キットが提供されている６ また。 ＩｇＡｌと髄膜炎菌ＩｇＡＰとの反応により、
生体内に産生されるＩｇＡ１小片上のネオエピトープと
反応する１種以上の抗体、および前記抗体と小片とを反
応させる試薬から成る髄膜炎診断用キットが提供されて
いる。
り、生体体に産生されるＩｇＡ ｌ小片上のネオエピト
ープと反応する１種以上の抗体、および得られた抗体と
ＩｇＡ １小片とを反応させる試薬から成る淋菌診断用
キットが提供されている６ また。 ＩｇＡｌと髄膜炎菌ＩｇＡＰとの反応により、
生体内に産生されるＩｇＡ１小片上のネオエピトープと
反応する１種以上の抗体、および前記抗体と小片とを反
応させる試薬から成る髄膜炎診断用キットが提供されて
いる。
さらに、ＩｇＡｌと淋菌ＩｇＡＰとの反応で得られるＩ
ｇＡ１小片上のネオエピトープと反応する１種以上の抗
体、髄膜炎菌の抗原成分と反応する１種以上の抗体、お
よび前記抗体、小片および抗原を反応させる試薬から成
り、個体から採取した単一標本で、髄膜炎と淋病とを診
断するキットが提供されている。
ｇＡ１小片上のネオエピトープと反応する１種以上の抗
体、髄膜炎菌の抗原成分と反応する１種以上の抗体、お
よび前記抗体、小片および抗原を反応させる試薬から成
り、個体から採取した単一標本で、髄膜炎と淋病とを診
断するキットが提供されている。
前記キットの好適実施例では、抗体を、Ｉｉｌ！察可能
基である酵素、担色基、蛍光基、化学冷光基、放射性元
素、金属または抗原基等で札付するが、この場合、キッ
トとして、ラベル観察試薬を加えることができる。
基である酵素、担色基、蛍光基、化学冷光基、放射性元
素、金属または抗原基等で札付するが、この場合、キッ
トとして、ラベル観察試薬を加えることができる。
好ましくは、キットは、特にＩｇＡと結合する物質から
成り、最も好ましくは、該物質は、ＩｇＡｌのＦｃ部分
と結合する抗体であり、中実支持体上に固定される。
成り、最も好ましくは、該物質は、ＩｇＡｌのＦｃ部分
と結合する抗体であり、中実支持体上に固定される。
他の実施例によると、キットは、抗体とＩｇＡ１小片と
の反応を観察する手段から成り、好適には、読取装置、
ラテックス凝集反応ビーズ、または浸染捧である。
の反応を観察する手段から成り、好適には、読取装置、
ラテックス凝集反応ビーズ、または浸染捧である。
また、キットとして１個体から標本を採集する手段を加
えることができる。
えることができる。
酵素抑制免疫検定法で、抗体と小片との反応を観察する
他の実施例によると、キットとして、定量小片上のネオ
エピトープの全アミノ酸列、またはその一部を有するペ
プチドを加えることができるが、該ペプチドは、中実支
持体上に固定される。
他の実施例によると、キットとして、定量小片上のネオ
エピトープの全アミノ酸列、またはその一部を有するペ
プチドを加えることができるが、該ペプチドは、中実支
持体上に固定される。
（実施例）
本発明の方法では、酵素工ｇＡＰが、無傷ＩｇＡ １と
反応して、これを分割する際に得られるＩｇＡ １小片
と反応する抗体（好適には、モノクローン抗体）を用い
る免疫検定で、 ＩｇＡ１小片を定量する。
反応して、これを分割する際に得られるＩｇＡ １小片
と反応する抗体（好適には、モノクローン抗体）を用い
る免疫検定で、 ＩｇＡ１小片を定量する。
ＩｇＡ １は１次に示す構造を有している。
ＩｇＡＰは、Ａ−Ａ線で示す領域でＩｇＡ １を分割す
るが、正確な分割場所は、酵素のバクテリア源によって
異なる。
るが、正確な分割場所は、酵素のバクテリア源によって
異なる。
すなわち、淋菌ＩｇＡＰは、ヒンジ領域で、トレオニル
ープロピル（ｔｈｒｅｏｎｙｌ−ｐｒｏｐｙｌ）結合を
分割（残分２３５−２３６） Ｌ、 Ｗ膜炎菌（Ｎｅｉ
ｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ−１）ＩｇＡ
Ｐは、 ｐｒｏ−ｓｅｔ結合部でＩｇＡｌを分割８残分
２３７−２３８） Ｌ、またインフルエンザ菌（Ｈａｅ
ｍｏｐｈｉｌｕｓｉｎｆｌｕｅｎｚａ）ＩｇＡＰは、
ｐｒｏ −ｓａｒ結合部でＩｇＡ ｌを分割（残分２３
１−２３２）する。
ープロピル（ｔｈｒｅｏｎｙｌ−ｐｒｏｐｙｌ）結合を
分割（残分２３５−２３６） Ｌ、 Ｗ膜炎菌（Ｎｅｉ
ｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ−１）ＩｇＡ
Ｐは、 ｐｒｏ−ｓｅｔ結合部でＩｇＡｌを分割８残分
２３７−２３８） Ｌ、またインフルエンザ菌（Ｈａｅ
ｍｏｐｈｉｌｕｓｉｎｆｌｕｅｎｚａ）ＩｇＡＰは、
ｐｒｏ −ｓａｒ結合部でＩｇＡ ｌを分割（残分２３
１−２３２）する。
メニンギチディスー２セロタイプ（ｍｅｎｉｎｃｉｔｉ
ｄｉｓ−２５ｅｒｏｔｙｐｅ）は、淋菌Ｉ匹ＡＰが分割
したものと同様のｐｒｏ −ｔｈｒ結合部で、 ＩｇＡ
ｌを分割するＩｇＡＰを有する（コーンフェルト、ニス
（Ｋｏｒｎｆｅｌｄ、 Ｓ、）その他による論文、「伝
染病書評（Ｒａｙ、 ｏｆ １ｎｆｓｃｔｉｏｕｓＤｉ
ｓｅａｓｅｓ） Ｊ誌、 １９８１年、３号、５２１乃
至５３４ページ参照）。
ｄｉｓ−２５ｅｒｏｔｙｐｅ）は、淋菌Ｉ匹ＡＰが分割
したものと同様のｐｒｏ −ｔｈｒ結合部で、 ＩｇＡ
ｌを分割するＩｇＡＰを有する（コーンフェルト、ニス
（Ｋｏｒｎｆｅｌｄ、 Ｓ、）その他による論文、「伝
染病書評（Ｒａｙ、 ｏｆ １ｎｆｓｃｔｉｏｕｓＤｉ
ｓｅａｓｅｓ） Ｊ誌、 １９８１年、３号、５２１乃
至５３４ページ参照）。
その他、基負としてＩｇＡ １を有し、分割場所が異な
る１２種類以上のＩｇＡＰが報告されている（ブロー、
エイ（Ｐｌａｕｔ、 Ａ）による論文、［微生物学生評
（Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉａｔｚ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂ
ｉｏｌｏｇｙ）Ｊ誌、１９８３年。
る１２種類以上のＩｇＡＰが報告されている（ブロー、
エイ（Ｐｌａｕｔ、 Ａ）による論文、［微生物学生評
（Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉａｔｚ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂ
ｉｏｌｏｇｙ）Ｊ誌、１９８３年。
３８号、６０３乃至６２２ページ）参照）。
ＩｇＡＰがＩｇＡ ｌに作用してできる小片は、一般に
。
。
ＦｃおよびＦａｂ小片であるがアミノ酸から成り１分割
で露出した炭水化物を包囲するネオエピトープは、水解
剤として使用する細菌性ＩｇＡＰによって異なる。
で露出した炭水化物を包囲するネオエピトープは、水解
剤として使用する細菌性ＩｇＡＰによって異なる。
各細菌性ＩｇＡＰは、異なるアミノ酸対間のＩｇＡ １
アミノ酸連鎖を分割するため、得られる２小片は、Ｉｇ
Ａ １を分割した特定ＩｇＡＰの新しいエピトープ（「
ネオエピトープ（ｎｅｏ−ｅｐｉｔｏｐｅ） Ｊ特性を
形成する末端アミノ酸列を有する。
アミノ酸連鎖を分割するため、得られる２小片は、Ｉｇ
Ａ １を分割した特定ＩｇＡＰの新しいエピトープ（「
ネオエピトープ（ｎｅｏ−ｅｐｉｔｏｐｅ） Ｊ特性を
形成する末端アミノ酸列を有する。
各ネオエピトープは、特定の１個のネオエピトープと結
合するモノクローン抗体等の特異抗体によって、免疫学
的に認識できる。
合するモノクローン抗体等の特異抗体によって、免疫学
的に認識できる。
さらに、前記ネオエピトープは、無傷ＩｇＡ１では得ら
れないため、ネオエピトープと反応する特異抗体は、
ｆｉｊＪｉＩＩｇＡｌと反応しない。この特異性により
、抗体を用いて、 ＩｇＡ１小片と無ＷＩｇＡ１を区別
するとともに、無傷ＩｇＡ １の存在下で小片を検出で
きる。
れないため、ネオエピトープと反応する特異抗体は、
ｆｉｊＪｉＩＩｇＡｌと反応しない。この特異性により
、抗体を用いて、 ＩｇＡ１小片と無ＷＩｇＡ１を区別
するとともに、無傷ＩｇＡ １の存在下で小片を検出で
きる。
小片を定量する本免疫検定には、酵素連鎖免疫検定、ま
たは放射線免疫検定等の争奪結合性（ｃｏｍｐｅｔｉｔ
ｉｖｅ ｂｉｎｄｉｎｇ）検定、サンドイッチ検定、酵
素抑制免疫検定、またはその他の抗体と抗原との反応を
観察する公知の免疫検定が含まれる。この場合、公知の
読取手段で反応を観察するが、ラテックス凝集反応ビー
ズ、または乾燥化学条片および選択孔付膜が用いられる
。
たは放射線免疫検定等の争奪結合性（ｃｏｍｐｅｔｉｔ
ｉｖｅ ｂｉｎｄｉｎｇ）検定、サンドイッチ検定、酵
素抑制免疫検定、またはその他の抗体と抗原との反応を
観察する公知の免疫検定が含まれる。この場合、公知の
読取手段で反応を観察するが、ラテックス凝集反応ビー
ズ、または乾燥化学条片および選択孔付膜が用いられる
。
本発明の検定方法は、多数標本を選別する大型自動読取
り装置にも適応できる。
り装置にも適応できる。
本発明の好適実施例では、 ＩｇＡ１産生箇を、被検小
片上のネオエピトープと反応する１種以上の抗体と接触
させるが、好適には、［０可能基で抗体に札付するとと
もに、固体面上に固定する。
片上のネオエピトープと反応する１種以上の抗体と接触
させるが、好適には、［０可能基で抗体に札付するとと
もに、固体面上に固定する。
小片と抗体との結合状態を保ち、イオン塩と緩衝剤を加
えて反応を促進する。標本から、結合した抗体を取除い
て、結合抗体上または標本中のラベル測定を行う。
えて反応を促進する。標本から、結合した抗体を取除い
て、結合抗体上または標本中のラベル測定を行う。
他の好適実施例では、まず標本を、 ＩｇＡｌのＦｃま
たはＦａｂ部分と結合する物質と接触させる。適切な物
質としては、抗体（好適には、モノクローン抗体）、お
よびＩｇＡ結合蛋白質〔（ラッセル−ジョーンズ、ジー
（Ｒｕｓｓｅｌ−Ｊｏｎｅｓ、 Ｇ、）、ゴッシュリッ
ヒ。
たはＦａｂ部分と結合する物質と接触させる。適切な物
質としては、抗体（好適には、モノクローン抗体）、お
よびＩｇＡ結合蛋白質〔（ラッセル−ジョーンズ、ジー
（Ｒｕｓｓｅｌ−Ｊｏｎｅｓ、 Ｇ、）、ゴッシュリッ
ヒ。
イー（Ｇｏｔｓｃｈｌｉｃｈ、 Ｅ、）およびブレーク
、エム（Ｂｌａｋｅ、 Ｍ、）による論文（「実験医学
雑誌（Ｊ、 Ｅｘｐ。
、エム（Ｂｌａｋｅ、 Ｍ、）による論文（「実験医学
雑誌（Ｊ、 Ｅｘｐ。
Ｍｅｄ、）Ｊ、１９８４年、１６０号、１４６７乃至１
４７５ページ）がある。
４７５ページ）がある。
該物質は、標本中の無傷ＩεＡｌを含む全ＩｇＡＰと結
合するものであり、これを固体面上に固定し、該面にＩ
ｇＡｌおよびＩｇＡ１小片を結着させる。次に、該面を
、小片上のネオエピトープと結合する１種以上の抗体と
接触させて、結合を観察する。
合するものであり、これを固体面上に固定し、該面にＩ
ｇＡｌおよびＩｇＡ１小片を結着させる。次に、該面を
、小片上のネオエピトープと結合する１種以上の抗体と
接触させて、結合を観察する。
他の好適実施例は、酵素抑制免疫検定に関するものであ
り、ＩｇＡＰ産生膜産生物抽出物本を被検小片上のネオ
エピトープと反応する１種以上の抗体と接触させてから
、ネオエピトープのアミノ酸連結を有するペプチドと接
触させる。ちなみに、ペプチドを固定する場合は、ネオ
エピトープと反応する特異抗体を、先ず標本と反応させ
てから、固定ペプチドと反応させる。ネオエピトープを
含む標本が抗体と反応する結果、固定ペプチドと抗体と
の反応が乏しくなる。
り、ＩｇＡＰ産生膜産生物抽出物本を被検小片上のネオ
エピトープと反応する１種以上の抗体と接触させてから
、ネオエピトープのアミノ酸連結を有するペプチドと接
触させる。ちなみに、ペプチドを固定する場合は、ネオ
エピトープと反応する特異抗体を、先ず標本と反応させ
てから、固定ペプチドと反応させる。ネオエピトープを
含む標本が抗体と反応する結果、固定ペプチドと抗体と
の反応が乏しくなる。
本発明の方法は、ＩｇＡＰによる水解時に産生ずるＩｇ
Ａｌ小片を含む標本を、該小片上のネオエピトープ（無
傷ＩｇＡ ｌ上にはない）と反応する抗体と接触させる
ものである。小片と抗体を反応させる条件を設定するが
、イオン塩と緩衝剤とを小片溶液に加えることができる
。
Ａｌ小片を含む標本を、該小片上のネオエピトープ（無
傷ＩｇＡ ｌ上にはない）と反応する抗体と接触させる
ものである。小片と抗体を反応させる条件を設定するが
、イオン塩と緩衝剤とを小片溶液に加えることができる
。
好適な実施例では、抗体を、損色物質、酵素、蛍光基、
放射性基、金属、化学冷光基、抗原基。
放射性基、金属、化学冷光基、抗原基。
またはハプテン等の観察可能基で札付し、ラベル測定に
より、抗体と小片との反応をａｍする６ある実施例では
、ネオエピトープのアミノ酸連結を有するペプチドで、
酵素抑制免疫検定（ＥＩＩＡ）を行う。ペプチドを化学
的または生化学的に合成して、クローンＩｇＡ１小片、
すなわちＦｃまたはＦａｂにする。該小片を含有する標
本を、該小片上のネオエピトープおよびペプチドと反応
する抗体と接触させる。
より、抗体と小片との反応をａｍする６ある実施例では
、ネオエピトープのアミノ酸連結を有するペプチドで、
酵素抑制免疫検定（ＥＩＩＡ）を行う。ペプチドを化学
的または生化学的に合成して、クローンＩｇＡ１小片、
すなわちＦｃまたはＦａｂにする。該小片を含有する標
本を、該小片上のネオエピトープおよびペプチドと反応
する抗体と接触させる。
好適には、ペプチドを固体面上に固定するが、この代わ
りに、ペプチドを観察可能基で札付し、抗体を固体面上
に固定することもできるが、いずれの場合も、抗体とネ
オエピトープとを反応させ、ペプチドを加えてから、固
体面上または標本中のラベルをＥ察する。
りに、ペプチドを観察可能基で札付し、抗体を固体面上
に固定することもできるが、いずれの場合も、抗体とネ
オエピトープとを反応させ、ペプチドを加えてから、固
体面上または標本中のラベルをＥ察する。
その他の公知のＥＩＩＡ法についても、同様に利用でき
る（イングバル（Ｅｎｇｖａｌｌ）その他による、「酵
素学方法（ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｇｙｍｏｌｏｇ
ｙ）Ｊ（パートン舎アンド・パン・ニラペンベルブ（Ｂ
ｕｒｄｏｎ ａｎｄ ｖａｎＫｎｉｐｐｅｎｂｅｒｇ、
Ｅｄ、、）出版発行の「生化学と分子生物学（Ｂｉｏ
ｃｈｅ＋＋＋１ｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｄｅｒｎ Ｂｉ
ｏｌｏｇｙ）４誌、１９８０年、３５０乃至３５８ペー
ジ参照）。
る（イングバル（Ｅｎｇｖａｌｌ）その他による、「酵
素学方法（ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｇｙｍｏｌｏｇ
ｙ）Ｊ（パートン舎アンド・パン・ニラペンベルブ（Ｂ
ｕｒｄｏｎ ａｎｄ ｖａｎＫｎｉｐｐｅｎｂｅｒｇ、
Ｅｄ、、）出版発行の「生化学と分子生物学（Ｂｉｏ
ｃｈｅ＋＋＋１ｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｄｅｒｎ Ｂｉ
ｏｌｏｇｙ）４誌、１９８０年、３５０乃至３５８ペー
ジ参照）。
その他の好適実施例では、ＩｇＡ ｌ小片含有標本を。
ＩｇＡｌのＦｃ部分と反応する物質と接触させる。ちな
みに、該物質は、抗体、最も好ましくは、ＩｇＡｌのＦ
ｃ部分と結合するモノクローン抗体であるが、この代わ
りに、ラッセル−ジョーンズ（Ｒｕｓｓｅｌｌ−Ｊｏｎ
ｅｓ）その他の報告によるＩｇＡ結合蛋白質を用いるこ
とができる。
みに、該物質は、抗体、最も好ましくは、ＩｇＡｌのＦ
ｃ部分と結合するモノクローン抗体であるが、この代わ
りに、ラッセル−ジョーンズ（Ｒｕｓｓｅｌｌ−Ｊｏｎ
ｅｓ）その他の報告によるＩｇＡ結合蛋白質を用いるこ
とができる。
前記物質を、紙等の中実支持体、または平板ウェル（ｔ
ｉｓｌｌ）に固定する。先ず、標本をＩｇＡ １小片お
よび無傷ＩｇＡ １のＦｃ部分と結合する固定物質と接
触させてから、ＩｇＡｌの水解小片上のネオエピトープ
とだけ反応する抗体と接触させる。抗体は、該小片のみ
と結合し、無傷 ＩｇＡ １とは結合しない。これを、
適切手段で１！６する。
ｉｓｌｌ）に固定する。先ず、標本をＩｇＡ １小片お
よび無傷ＩｇＡ １のＦｃ部分と結合する固定物質と接
触させてから、ＩｇＡｌの水解小片上のネオエピトープ
とだけ反応する抗体と接触させる。抗体は、該小片のみ
と結合し、無傷 ＩｇＡ １とは結合しない。これを、
適切手段で１！６する。
ＩｇＡＰとの反応によって産生させるＩｇＡ １小片の
免疫検定法は、ＩｇＡ １．１．ＡＰの検定、ＩｇＡＰ
産生種の検出と識別、およびこれらバクテリアが引起す
疾病の診断に有益である。
免疫検定法は、ＩｇＡ １．１．ＡＰの検定、ＩｇＡＰ
産生種の検出と識別、およびこれらバクテリアが引起す
疾病の診断に有益である。
本発明による免疫検定法により、ＩｇＡ Ｌを確定でき
る。すなわち、 ＩＥＡＩを含有する標本を、適切緩衝
剤およびイオン塩とともに、ＩｇＡＰと接触させ、Ｉｇ
ＡｌとＩＥＡＰとの反応に適した条件をつくり出す。
る。すなわち、 ＩＥＡＩを含有する標本を、適切緩衝
剤およびイオン塩とともに、ＩｇＡＰと接触させ、Ｉｇ
ＡｌとＩＥＡＰとの反応に適した条件をつくり出す。
ＩｇＡＰによるネオエピトープを有する小片を形成し、
該小片を認識する抗体を用いた免疫検定により、該小片
を測定する。
該小片を認識する抗体を用いた免疫検定により、該小片
を測定する。
ＩｇＡ １に対して検定できる標本には１人の膜、血清
その他の生物源からの抽出物があるが、本発明の方法に
よって、ＩｇＡ １亜綱に属するモノクローン抗体も検
定できる。１綱以上のモノクローン抗体に係る標本また
は診断工程における２鋼杭体間の識別に有益である。
その他の生物源からの抽出物があるが、本発明の方法に
よって、ＩｇＡ １亜綱に属するモノクローン抗体も検
定できる。１綱以上のモノクローン抗体に係る標本また
は診断工程における２鋼杭体間の識別に有益である。
また、この方法を用いて、ＩｇＡ １およびＩｇＡ ２
を含有するＩｇＡから分離したＩｇＡ２の純度を検査で
きる。
を含有するＩｇＡから分離したＩｇＡ２の純度を検査で
きる。
ＩｇＡＰで処理後に、ＩｇＡ小片が存在する場合は。
ＩｇＡｌを示す。
また、本発明の方、法により、 ＩＥＡＰを確定できる
。
。
すなわち、 ＩｇＡＰ含有標本を、反応に適した条件下
でＩｇＡ ｌと接触させ、得られた小片を測定する。
でＩｇＡ ｌと接触させ、得られた小片を測定する。
本発明の方法は、特にＩｇＡＰを出すバクテリアの確定
に有益である。バクテリアを含有する標本を基質ＩｇＡ
Ｉと接触させてから、ＩｇＡＰとＩｇＡ １との反応で
得られる小片を検定するが、感度を高めるため、測定前
にバクテリアを培養しておく。この代わりに、個体から
採取した生物標本でバクテリアを確定できる。
に有益である。バクテリアを含有する標本を基質ＩｇＡ
Ｉと接触させてから、ＩｇＡＰとＩｇＡ １との反応で
得られる小片を検定するが、感度を高めるため、測定前
にバクテリアを培養しておく。この代わりに、個体から
採取した生物標本でバクテリアを確定できる。
洞室できる病原細菌としては、ナイセリア属（Ｎｅｉｓ
ｓｅｒｉａ）およびヘモフィラス属（Ｈａｅｍｏｐｈｉ
ｌａｅ）があり、本方法は、これらバクテリアに起因す
る疾病の診断に、特に有益である。
ｓｅｒｉａ）およびヘモフィラス属（Ｈａｅｍｏｐｈｉ
ｌａｅ）があり、本方法は、これらバクテリアに起因す
る疾病の診断に、特に有益である。
本発明の方法は、ＩｇＡＰを分泌するバクテリアが１種
以上存在する場合におけるこれらバクテリアの識別に、
特に有益である。
以上存在する場合におけるこれらバクテリアの識別に、
特に有益である。
すなわち、ＩｇＡ ｌにＩｇＡＰを作用させて得られた
小片を５該小片上のネオエピトープと反応する抗体で検
定するが１例えば、モノクローン抗体は、一方のバクテ
リアから得られたＩｇＡＰによる小片とは反応するが、
他方のバクテリアから得られたＩｇＡＰによる小片とは
反応しない非常に特異な試薬である。
小片を５該小片上のネオエピトープと反応する抗体で検
定するが１例えば、モノクローン抗体は、一方のバクテ
リアから得られたＩｇＡＰによる小片とは反応するが、
他方のバクテリアから得られたＩｇＡＰによる小片とは
反応しない非常に特異な試薬である。
各細菌ＩｇＡＰに対するＩｇＡｌ上の分割部は知られて
おり、各分割部で得られるネオエピトープに対して特異
性を示す抗体を形成できる。
おり、各分割部で得られるネオエピトープに対して特異
性を示す抗体を形成できる。
本発明では、咽喉綿棒等の個体標本を、 ＩｇＡｌ。
および適切緩衝剤とイオン塩と接触させ、ｅ４本中のＩ
ｇＡＰその他酵素と反応させて小片を形成し、本発明方
法で得られた小片を識別する。
ｇＡＰその他酵素と反応させて小片を形成し、本発明方
法で得られた小片を識別する。
特定の細菌ＩｇＡＰが産生する小片が、上記要領で画定
される場合は、バクテリアが識別される。生物標本中に
ＩｇＡ １が存在し、これが生体内でＩｇＡＰと反応す
る場合は、ＩｇＡｌを中途添加したり、試験管内でＩｇ
ＡＰと反応させることなく、膜抽出物を検定してＩｇＡ
１小片を識別する。
される場合は、バクテリアが識別される。生物標本中に
ＩｇＡ １が存在し、これが生体内でＩｇＡＰと反応す
る場合は、ＩｇＡｌを中途添加したり、試験管内でＩｇ
ＡＰと反応させることなく、膜抽出物を検定してＩｇＡ
１小片を識別する。
本発明の方法は、特に、淋病の早期診断に有益である。
尿道生殖膜等の膜は１通常、ＩｇＡ１を分泌する。淋菌
が存在すると、該ＩｇＡ １が、破砕されることが分っ
た。患者から採取した膣綿棒および尿道抽出物には、こ
れら小片が見られる。
が存在すると、該ＩｇＡ １が、破砕されることが分っ
た。患者から採取した膣綿棒および尿道抽出物には、こ
れら小片が見られる。
淋菌感染すると、ＩｇＡ１分泌レベルが上昇する（マル
クス、エム（Ｍｕｌｋｓ、 Ｍ、）その他の論文（「伝
染病雑誌（Ｊ、 Ｉｎｆｅｃｔ、 Ｄｉｓ、）Ｊ誌、１
９８４年、１５０号、７３４乃至７４４ページ）参照）
ため、存在するＩｇＡ １の量が重要であり、これは、
本発明方法により観察できる。
クス、エム（Ｍｕｌｋｓ、 Ｍ、）その他の論文（「伝
染病雑誌（Ｊ、 Ｉｎｆｅｃｔ、 Ｄｉｓ、）Ｊ誌、１
９８４年、１５０号、７３４乃至７４４ページ）参照）
ため、存在するＩｇＡ １の量が重要であり、これは、
本発明方法により観察できる。
ＩｇＡＰは、淋菌によって分泌され、生体内で工αＡ１
と反応して小片を形成するものと思われる。
と反応して小片を形成するものと思われる。
また、淋菌から得られるその他酵素が、これら小片を変
性させる。例えば、水解酵素は、ＩｇＡ １小片の終端
から末端プロリンを分割する〔チェノ。
性させる。例えば、水解酵素は、ＩｇＡ １小片の終端
から末端プロリンを分割する〔チェノ。
カーク（ｃｈｅｎ、 Ｋｉｒｋ）その他の論文（「生化
学雑誌（Ｊ、 Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、）Ｊ誌、１９８０
年、２５５号、１７０４乃至１７１０ページ）参照〕。
学雑誌（Ｊ、 Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、）Ｊ誌、１９８０
年、２５５号、１７０４乃至１７１０ページ）参照〕。
しかし、これら酵素は、無傷ＩＥＡ ｌをアタックでき
ないため、病原体である淋菌から出されるＩｇＡＰその
他酵素が、生体内で作用して、淋病感染の特徴であるネ
オエピトープを有する小片を形成する。
ないため、病原体である淋菌から出されるＩｇＡＰその
他酵素が、生体内で作用して、淋病感染の特徴であるネ
オエピトープを有する小片を形成する。
本発明の方法は、非常に特異な抗体で生体内に形成され
たこれら小片の免疫検定を行う。
たこれら小片の免疫検定を行う。
場合によっては、髄膜炎菌は、 ＩｇＡ１産生膜産生菌
と共存しており、その結果、淋菌ＩｇＡＰによる小片と
ともに、髄膜炎菌ＩｇＡＰおよびこれを特徴づけるＩｇ
Ａ ｌ小片が、生体内にできる。本発明の好適実施例は
、これら小片の識別方法、および極めて特異な淋病検定
方法を提供している。
と共存しており、その結果、淋菌ＩｇＡＰによる小片と
ともに、髄膜炎菌ＩｇＡＰおよびこれを特徴づけるＩｇ
Ａ ｌ小片が、生体内にできる。本発明の好適実施例は
、これら小片の識別方法、および極めて特異な淋病検定
方法を提供している。
淋菌から得られるＩｇＡＰその他酵素による小片と反応
し、Ｍ膜炎菌による小片とは反応しないモノクローン抗
体を用いて免疫検定するが、この代わりに、これら小片
を区別できない抗体を用いる場合には、髄膜炎を個別検
定する。髄膜炎抗原、表面抗原または細胞内成分を免疫
検定し、髄膜炎菌の存在を個別確認する。
し、Ｍ膜炎菌による小片とは反応しないモノクローン抗
体を用いて免疫検定するが、この代わりに、これら小片
を区別できない抗体を用いる場合には、髄膜炎を個別検
定する。髄膜炎抗原、表面抗原または細胞内成分を免疫
検定し、髄膜炎菌の存在を個別確認する。
また、本発明の方法により・、髄膜炎菌を検出できる。
例えば、髄膜炎１．ＡＰおよびＩＩＢＡ ｌの反応によ
り、生体内のＩｇＡＰ産生膜上に形成されるＩｇＡ １
小片と反応する抗体を用いる免疫検定により、該膜の細
菌を検出できる。この代わりに、該膜の抽出物、または
その他生物標本を、ＩｇＡＰとＩｇＡ １との反応に適
した条件下でＩｇＡｌと接触させて、 ＩｇＡｌ小片を
形成し、これを本発明方法で検定する。
り、生体内のＩｇＡＰ産生膜上に形成されるＩｇＡ １
小片と反応する抗体を用いる免疫検定により、該膜の細
菌を検出できる。この代わりに、該膜の抽出物、または
その他生物標本を、ＩｇＡＰとＩｇＡ １との反応に適
した条件下でＩｇＡｌと接触させて、 ＩｇＡｌ小片を
形成し、これを本発明方法で検定する。
また、ＩｇＡ １ ｇ：生膜から採取した同一標本から
、淋菌と髄膜炎菌とを検出できる。すなわち、前記膜の
抽出物、膣または頚管から取出した洗液または綿棒、ま
たは尿道排泄物標本を、淋菌から得られるＩｇＡＰその
他酵素の反応により、生体内にできるＩｇＡ１小片上の
ネオエピトープと反応する抗体と接触させるとともに、
髄膜炎菌の抗原部、多糖類莢膜または内部抗原と反応す
る抗体と接触させる。
、淋菌と髄膜炎菌とを検出できる。すなわち、前記膜の
抽出物、膣または頚管から取出した洗液または綿棒、ま
たは尿道排泄物標本を、淋菌から得られるＩｇＡＰその
他酵素の反応により、生体内にできるＩｇＡ１小片上の
ネオエピトープと反応する抗体と接触させるとともに、
髄膜炎菌の抗原部、多糖類莢膜または内部抗原と反応す
る抗体と接触させる。
個別反応させ得る要領で免疫検定するが、例えば、抗体
を固体面の個別レーンに固定することにより、ｒｌｆＬ
膜炎菌小片との反応と、淋菌小片との反応を個別観察す
るとともに、再反応またはいずれかの反応を注視できる
。
を固体面の個別レーンに固定することにより、ｒｌｆＬ
膜炎菌小片との反応と、淋菌小片との反応を個別観察す
るとともに、再反応またはいずれかの反応を注視できる
。
本発明の診断方法は、 ＩｇＡ１産生膜、膣または頚管
洗液または綿棒（女性の場合）、または尿道抽出物（男
性の場合）を、淋菌から得られたＩｇＡＰその他酵素と
、前記膜から得たＩｇＡｌとの反応により、生体内に形
成されたＩｇＡ １小片上のネオエピトープと反応する
１種以上の抗体、好適にはモノクローン抗体と接触させ
、前記抗体と小片とを反応させて、周知方法でＩｉｌ！
察する。
洗液または綿棒（女性の場合）、または尿道抽出物（男
性の場合）を、淋菌から得られたＩｇＡＰその他酵素と
、前記膜から得たＩｇＡｌとの反応により、生体内に形
成されたＩｇＡ １小片上のネオエピトープと反応する
１種以上の抗体、好適にはモノクローン抗体と接触させ
、前記抗体と小片とを反応させて、周知方法でＩｉｌ！
察する。
例えば、前記抗体を観察可能基で札付できる。
この場合は、結合抗体を溶液から除去し、結合抗体上ま
たは溶液中でラベル測定する。他の実施例では、抽出物
をＩｇＡ １のＦｃ部と結合する物質と接触させる。好
適には、該物質を中実支持体上に固定し、溶液から無傷
ＩｇＡ １と小片とを分離して１表面上の結合抗体をＩ
ｌｌ察する。適切な物質は、抗体（好適には、モノクロ
ーン抗体）、およびＩｇＡ結合蛋白質〔ラッセル−ジョ
ーンズ（Ｒｕｓｓｅｌｌ−Ｊｏｎｅｓ）その他の報告に
よる〕である。
たは溶液中でラベル測定する。他の実施例では、抽出物
をＩｇＡ １のＦｃ部と結合する物質と接触させる。好
適には、該物質を中実支持体上に固定し、溶液から無傷
ＩｇＡ １と小片とを分離して１表面上の結合抗体をＩ
ｌｌ察する。適切な物質は、抗体（好適には、モノクロ
ーン抗体）、およびＩｇＡ結合蛋白質〔ラッセル−ジョ
ーンズ（Ｒｕｓｓｅｌｌ−Ｊｏｎｅｓ）その他の報告に
よる〕である。
他の好適実施例は、酵素抑制免疫検定（ＥＩＩＡ）に係
り、小片を含有する標本を、該小片と結合する抗体、お
よび標本分析物（ｓａｍｐｌｅ ａｎａｌｙｔｅ）と反
応しない抗体と結合するペプチドと接触させる。
り、小片を含有する標本を、該小片と結合する抗体、お
よび標本分析物（ｓａｍｐｌｅ ａｎａｌｙｔｅ）と反
応しない抗体と結合するペプチドと接触させる。
公知のＥＩＩＡ方法を用いることができるが、好適には
、固体面上に固定され、淋菌から得た酵素で生体内に産
生されるＩｇＡ １小片のネオエピトープ連結を有する
アミノ酸から成るペプチドを用いる。
、固体面上に固定され、淋菌から得た酵素で生体内に産
生されるＩｇＡ １小片のネオエピトープ連結を有する
アミノ酸から成るペプチドを用いる。
また本発明は、前記小片上のネオエピトープと反応する
１種以上の抗体から成るＩｇＡＰとＩｇＡｌとの反応に
よって産生されるＩｇＡ １小片検出試薬ｔｉ−提供し
ている。
１種以上の抗体から成るＩｇＡＰとＩｇＡｌとの反応に
よって産生されるＩｇＡ １小片検出試薬ｔｉ−提供し
ている。
これらネオエピトープは、無傷ＩｇＡ１には存在せず、
また抗体は、無傷ＩｇＡ１、すなわち、ＩｇＡ １に共
通する小片上のネオエピトープ、および小片と反応しな
い。好適には、試薬は、ＢＬＡＢＩＣ・マウス等の宿主
動物を、ＩｇＡＰとＩｇＡ １との反応で得られるＦｃ
小片、 Ｆａｂ小片、またはこれらの組合せで免疫化
することにより産生されるモノクローン抗体である。
また抗体は、無傷ＩｇＡ１、すなわち、ＩｇＡ １に共
通する小片上のネオエピトープ、および小片と反応しな
い。好適には、試薬は、ＢＬＡＢＩＣ・マウス等の宿主
動物を、ＩｇＡＰとＩｇＡ １との反応で得られるＦｃ
小片、 Ｆａｂ小片、またはこれらの組合せで免疫化
することにより産生されるモノクローン抗体である。
この代わりに、該抗体を、被検ネオエピトープのアミノ
酸連結を有するペプチドで宿主動物を免疫化することに
より産生ずるとともに、前記ペプチドを小片のクローン
化等により、化学的または生化学的に合成し、得られた
モノクローン抗体をＩｇＡ ｌおよび小片に対して選別
し、小片と反応し無傷ＩｇＡ １とは反応しないモノク
ローン抗体を、試薬として利用できる。
酸連結を有するペプチドで宿主動物を免疫化することに
より産生ずるとともに、前記ペプチドを小片のクローン
化等により、化学的または生化学的に合成し、得られた
モノクローン抗体をＩｇＡ ｌおよび小片に対して選別
し、小片と反応し無傷ＩｇＡ １とは反応しないモノク
ローン抗体を、試薬として利用できる。
前記試薬を用いて、本発明の免疫検定法で１．ＡＰを産
生ずるＩｇＡ １、ＩｇＡＰおよびバクテリアを検出で
きる。
生ずるＩｇＡ １、ＩｇＡＰおよびバクテリアを検出で
きる。
好適実施例では、該試薬は、淋菌から得た酵素・ＩｇＡ
Ｐおよび水解酵素によって、生体内に産生されるＩｇＡ
１小片上のネオエピトープと反応する抗体、淋菌Ｉｇ
ＡＰとＩｇＡｌとの反応により得られるＦａｂ小片。
Ｐおよび水解酵素によって、生体内に産生されるＩｇＡ
１小片上のネオエピトープと反応する抗体、淋菌Ｉｇ
ＡＰとＩｇＡｌとの反応により得られるＦａｂ小片。
Ｆｃ小片のネオエピトープに対する抗体、および淋菌か
ら得られるプロリンイミノペプチダーゼ（ｐｒｏｌｉｎ
ｅ １ｍ１ｎｏｐｅｐｔｉｄａｓｅ）およびアミノペプ
チダーゼ−ｐ （ａｍｉｎｏｐｅｐｔｉｄａｓａ−ｐ）
等のその他水解酵素によって生体内に変成されるエピト
ープに対する抗体から成る。
ら得られるプロリンイミノペプチダーゼ（ｐｒｏｌｉｎ
ｅ １ｍ１ｎｏｐｅｐｔｉｄａｓｅ）およびアミノペプ
チダーゼ−ｐ （ａｍｉｎｏｐｅｐｔｉｄａｓａ−ｐ）
等のその他水解酵素によって生体内に変成されるエピト
ープに対する抗体から成る。
また診断試薬は、ＩｇＡ １小片上のネオエピトープ、
およびこれらネオエピトープと淋菌水解酵素との反応に
より得られるエピトープのアミノ酸連結を有するペプチ
ドから成り、該ペプチドは、好適には、固体面上に固定
される。
およびこれらネオエピトープと淋菌水解酵素との反応に
より得られるエピトープのアミノ酸連結を有するペプチ
ドから成り、該ペプチドは、好適には、固体面上に固定
される。
髄膜炎菌ＩｇＡＰとＩｇＡ １との反応により得られる
ネオエピトープと反応する１種以上の抗体から成る髄膜
炎診断試薬も提供されており、該試薬を用いて免疫検定
することにより、ＩｇＡ １産生膜上に髄膜炎を検出で
きる。
ネオエピトープと反応する１種以上の抗体から成る髄膜
炎診断試薬も提供されており、該試薬を用いて免疫検定
することにより、ＩｇＡ １産生膜上に髄膜炎を検出で
きる。
この代わりに、反応に適した条件下で、生物標木または
細菌培養をＩｇＡｌと接触させ、該試薬で得られた小片
を検定することにより、Ｍ膵炎を検出できる。
細菌培養をＩｇＡｌと接触させ、該試薬で得られた小片
を検定することにより、Ｍ膵炎を検出できる。
本発明はさらに、淋菌から得られたＩｇＡ １と、Ｉｇ
ＡＰおよびその他酵素との反応により、生体内に産生さ
れるＩｇＡ １小片上のネオエピトープと反応する１種
以上の抗体から成る個体の淋菌診断キットを提供してい
る。
ＡＰおよびその他酵素との反応により、生体内に産生さ
れるＩｇＡ １小片上のネオエピトープと反応する１種
以上の抗体から成る個体の淋菌診断キットを提供してい
る。
該試薬は、例えば、反応に適したイオン塩および緩衝剤
から成り、好適実施例では、酵素、蛍光基、化学冷光基
、担色基、金属、抗原またはハプテン等の観察可能基で
、抗体に札付けし、 ＥＬＩＺＡ、ＥＩＩＡ等の免疫検
定法、サンドイッチ免疫検定法、または大型の電子測定
装置を用いる自動システムに利用できる。また、湿式ま
たは乾式化学を用いる凝集反応、または浸捧（ｄｉｐ−
ｓｔｉｃｋ）等の読取法を用いて、比色定量（ｅｏｌｏ
ｍｅｔｒｉｅ）および同様の免疫検定法に用いる場合は
、抗体を中実支持体上に固定する。
から成り、好適実施例では、酵素、蛍光基、化学冷光基
、担色基、金属、抗原またはハプテン等の観察可能基で
、抗体に札付けし、 ＥＬＩＺＡ、ＥＩＩＡ等の免疫検
定法、サンドイッチ免疫検定法、または大型の電子測定
装置を用いる自動システムに利用できる。また、湿式ま
たは乾式化学を用いる凝集反応、または浸捧（ｄｉｐ−
ｓｔｉｃｋ）等の読取法を用いて、比色定量（ｅｏｌｏ
ｍｅｔｒｉｅ）および同様の免疫検定法に用いる場合は
、抗体を中実支持体上に固定する。
キットは、酵素札付用基質等の抗体ラベル観察試薬、好
適には、さらに、ＩｇＡ、特にＩ［Ａ ＩのＦｃ部分に
結着する物質（中実支持体上に固定する）、およびＥＩ
ＩＡ用キットとしては、被検ネオエピトープの全アミノ
酸連結、またはその一部を有するペプチド（中実支持体
上に固定する）、抗体とＩＥＡ １小片との反応を１１
察する手段、または患者から綿棒またはペディクル（ｐ
ｅｄｉｃｌｅ）等の標本を採集する手段から成る。
適には、さらに、ＩｇＡ、特にＩ［Ａ ＩのＦｃ部分に
結着する物質（中実支持体上に固定する）、およびＥＩ
ＩＡ用キットとしては、被検ネオエピトープの全アミノ
酸連結、またはその一部を有するペプチド（中実支持体
上に固定する）、抗体とＩＥＡ １小片との反応を１１
察する手段、または患者から綿棒またはペディクル（ｐ
ｅｄｉｃｌｅ）等の標本を採集する手段から成る。
次に、実験例を示す。ただし、これは本発明を例証する
ものであり、その適用範囲を限定するものではない。
ものであり、その適用範囲を限定するものではない。
去】ｕＬ乱
これは、男性または女性患者の淋病−次診断の一例であ
る。
る。
ハＬ塁本務處
感染部（女性では、膣、男性では尿管）から、吸収性無
菌ダクロン綿棒で分泌物を採集し、これをトウイーン（
Ｔｗｅｅｎ）２０および緩衝剤を含むｐＨ７，２の０．
５ｍ１２溶液に浸し、綿棒内容物を、繰り返し緩衝剤容
器に圧出して除去する。
菌ダクロン綿棒で分泌物を採集し、これをトウイーン（
Ｔｗｅｅｎ）２０および緩衝剤を含むｐＨ７，２の０．
５ｍ１２溶液に浸し、綿棒内容物を、繰り返し緩衝剤容
器に圧出して除去する。
ｂ 特 モノクローン 体の
コーラ−・ミルスタイン（Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉ
ｌｌｓｔｅｉｎ）技法により、淋菌から得られたＩｇＡ
Ｐで酵素分解することにより産生される１、Ａｌ小片で
ＢＡＬＢ／Ｃマウスを免疫化することによって、モノク
ローン抗体を形成する。マウス綽細胞をＳＰ−１細胞で
溶解して、ハイブリドーマ（Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ）
を形成し、ハイブリドーマ細胞をふるい分けして、前
記小片を結合するが、無傷 ＩｇＡ ｌとは結合しない
モノクローン抗体を産生ずるものを選別する。
ｌｌｓｔｅｉｎ）技法により、淋菌から得られたＩｇＡ
Ｐで酵素分解することにより産生される１、Ａｌ小片で
ＢＡＬＢ／Ｃマウスを免疫化することによって、モノク
ローン抗体を形成する。マウス綽細胞をＳＰ−１細胞で
溶解して、ハイブリドーマ（Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ）
を形成し、ハイブリドーマ細胞をふるい分けして、前
記小片を結合するが、無傷 ＩｇＡ ｌとは結合しない
モノクローン抗体を産生ずるものを選別する。
得られたモノクローン抗体を、周知方法により金球（ｇ
ｏｌｄ ５ｐｈｅｒｅｓ）に連結する。
ｏｌｄ ５ｐｈｅｒｅｓ）に連結する。
（ｃ） ＩｇＡｌおよび小片の標本分離周知方法で、ニ
トロセルロース紙上に、ＩｇＡ ＩＦｃ部に対するモノ
クローン抗体を固定する。標本に紙条を浸して放置し、
１５分間培養する。標本から不活性紙条を除去し、燐酸
塩緩衝生理的食塩水（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅ
ｒｅｄ ５ａｌｉｎｅ）（ＰＢＳ）ですすぐ。
トロセルロース紙上に、ＩｇＡ ＩＦｃ部に対するモノ
クローン抗体を固定する。標本に紙条を浸して放置し、
１５分間培養する。標本から不活性紙条を除去し、燐酸
塩緩衝生理的食塩水（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅ
ｒｅｄ ５ａｌｉｎｅ）（ＰＢＳ）ですすぐ。
（ｄ）小片検出
不活性紙条を、ステップｂ）から得た試薬を含む溶液中
に、塩および緩衝剤と共に入れて１紙条上の小片と、溶
液中の試薬とを反応させて、紙条の色を観察する。黒色
は、札付モノクローン抗体の結合を示し、淋病の陽性指
示薬である。非感染標本から得た対照条片は、モノクロ
ーン抗体と結合せず、白色のままである。
に、塩および緩衝剤と共に入れて１紙条上の小片と、溶
液中の試薬とを反応させて、紙条の色を観察する。黒色
は、札付モノクローン抗体の結合を示し、淋病の陽性指
示薬である。非感染標本から得た対照条片は、モノクロ
ーン抗体と結合せず、白色のままである。
Claims (47)
- （１）免疫グロブリンＡプロテアーゼ（ＩｇＡｐ）によ
って、酵素分解することにより産生される免疫グロブリ
ンＡ亜綱／（ＩｇＡ１）小片の定量方法であって、前記
酵素分解により得られるネオエピトープ（ｎｅｏ−ｅｐ
ｉｔｏｐｅ）と反応するが、無傷ＩｇＡ１とは反応しな
い抗体で、前記小片を免疫検定することを特徴とする方
法。 - （２）抗体が、ＩｇＡＰによるＩｇＡ１酵素分解で得ら
れる小片のネオエピトープであって、無傷ＩｇＡ１上に
は存在しないネオエピトープと反応するモノクローン抗
体であることを特徴とする特許請求の範囲第（１）項に
記載の方法。 - （３）免疫検定が、抗体を用いる放射線免疫検定、酵素
連鎖免疫検定、またはサンドイッチ免疫検定から成るこ
とを特徴とする特許請求の範囲第（１）項に記載の方法
。 - （４）免疫検定が、前記ネオエピトープの特徴であるア
ミノ酸連結の全部またはその一部を有するペプチドによ
る免疫抑制酵素検定から成ることを特徴とする特許請求
の範囲第（１）項に記載の方法。 - （５）ペプチドを、化学的または生化学的に合成するこ
とを特徴とする特許請求の範囲第（４）項に記載の方法
。 - （６）ペプチドが、クローンＩｇＡ１小片であることを
特徴とする特許請求の範囲第（４）項に記載の方法。 - （７）小片が、ＩｇＡ１のＦｃまたはＦａｂ部分である
ことを特徴とする特許請求の範囲第（１）項に記載の方
法。 - （８）（ａ）酵素分解に適した条件下で標本をＩｇＡＰ
と接触させて、ＩｇＡ１小片を形成する工程、および（
ｂ）前記酵素分解により得られるネオエピトープと反応
するが、無傷ＩｇＡ１とは反応しない抗体で免疫検定し
て、定量する方法により、前記小片を測定する工程から
成ることを特徴とする標本中のＩｇＡ１検出方法。 - （９）標本が、血液、血液分屑、ＩｇＡ１分泌膜エキス
、またはその他のＩｇＡ１を含む体液から成ることを特
徴とする特許請求の範囲第（８）項に記載の方法。 - （１０）標本中の酵素ＩｇＡＰを検出する方法であって
、（ａ）ＩｇＡＰとＩｇＡ１との反応に適した条件下で
、標本をＩｇＡ１と接触させて、ＩｇＡ１小片を形成す
る工程、および （ｂ）酵素分解により得られるネオエピトープと反応し
、無傷ＩｇＡ１とは反応しない抗体で、免疫検定して定
量する方法により、前記標本中の小片を検定する工程か
ら成ることを特徴とする方法。 - （１１）標本中の酵素ＩｇＡＰ分泌バクテリアを検出す
る方法であって、 （ａ）ＩｇＡＰとＩｇＡ１との反応に適した条件下で、
前記バクテリアをＩｇＡ１と接触させて、ＩｇＡ１小片
を形成する工程、および （ｂ）酵素分解により得られるネオエピトープと反応し
、無傷ＩｇＡ１とは反応しない抗体を用いて、免疫検定
することにより、前記小片を検出する工程から成ること
を特徴とする方法。 - （１２）バクテリアが、ナイセリア属（Ｎｅｉｓｓｅｒ
ｉａ）、ヘモフィラス属（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）、
または連鎖球菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）から
得られることを特徴とする特許請求の範囲（１１）項に
記載の方法。 - （１３）酵素の検定に先立ち、標本を培養することを特
徴とする特許請求の範囲第（１１）項に記載の方法。 - （１４）ＩｇＡＰを分泌するバクテリアを識別する方法
であって、 （ａ）ＩｇＡＰとＩｇＡ１との反応に適した条件下で、
前記バクテリアをＩｇＡ１と接触させることにより、Ｉ
ｇＡＰ細菌源を特徴づけるネオエピトープを有する小片
を形成する工程、 （ｂ）前記小片を、特に、前記ネオエピトープと結合す
る抗体と接触させる工程、および （ｃ）結合抗体を観察する工程から成ることを特徴とす
る方法。 - （１５）バクテリアが、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇ
ｏｎｏｒｒｈｅａ）と髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ
ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）とであって、前記小片を、 （ａ）ＩｇＡ１と、髄膜炎菌から得られるＩｇＡＰとの
反応により産生されるネオエピトープと、特に反応する
抗体、および （ｂ）結合に適した条件下で、ＩｇＡ１と、淋菌から得
られるＩｇＡＰその他酵素との反応により産生されるネ
オエピトープと特に反応する抗体と接触させることを特
徴とする特許請求の範囲第（１４）項に記載の方法。 - （１６）淋菌から得られるＩｇＡＰその他酵素と、個体
のＩｇＡ１産生膜から得られるＩｇＡ１との反応により
、生体内に産生されるＩｇＡ１小片上のネオエピトープ
と特に反応する抗体を用いて、前記ＩｇＡ１産生膜を免
疫検定することを特徴とする淋病の診断方法。 - （１７）ＩｇＡ１産生膜上における髄膜炎菌存在下にお
いて、前記膜上の淋菌を検出する方法であって、淋菌か
ら得られるＩｇＡＰその他の酵素と、前記膜のＩｇＡ１
との反応により、生体内に産生されるＩｇＡ１小片上の
エピトープと特に反応し、髄膜炎菌から得られるＩｇＡ
Ｐによって産生されるＩｇＡ１小片とは反応しない１種
以上の抗体を用いて、前記膜を免疫検定することを特徴
とする淋病の診断方法。 - （１８）ＩｇＡ１産生膜の上の髄膜炎菌を検出する方法
であって、髄膜炎菌ＩｇＡＰと前記膜のＩｇＡ１との反
応により、生体内に産生されるＩｇＡ１小片上のネオエ
ピトープと特に反応する抗体を用いて、前記膜のエキス
を免疫検定することを特徴とする髄膜炎の診断方法。 - （１９）ＩｇＡ１産生膜上の淋菌および髄膜炎菌を検出
する方法であって、 （ａ）淋菌から得られるＩｇＡＰその他酵素の反応によ
り、生体内に産生されるＩｇＡ１小片上のネオエピトー
プと特に反応する抗体、および （ｂ）髄膜炎菌上の抗原部と特に反応する抗体を用いて
、前記膜のエキスを免疫検定することを特徴とする方法
。 - （２０）（ａ）膜エキスを、結合に適当した条件下で、
前記小片上のネオエピトープと特に反応させるとともに
、観察可能基で札付けされた１種以上の抗体と接触させ
る工程、 （ｂ）結合抗体を用いて、前記標本と小片とを分解する
工程、および （ｃ）前記結合抗体上、または標本中のラベルを測定す
る工程から成ることを特徴とする特許請求の範囲第（１
９）項に記載の方法。 - （２１）（ａ）膜エキスを、 （ｉ）結合に適した条件下で、特にＩｇＡ１のＦｃ部分
と結合するとともに、中実支持体上に固定された物質、
および （ｉｉ）小片上のネオエピトープと特に結合するととも
に、観察可能基で札付けされた１種以上の抗体と接触さ
せる工程、 （ｂ）前記支持体とエキスとを分離する工程、および （ｃ）前記支持体上のラベルを観察する工程から成るこ
とを特徴とする特許請求の範囲第（１９）項に記載の方
法。 - （２２）（ａ）膜エキスを、 （ｉ）小片上のネオエピトープと特に結合するとともに
、観察可能基で札付けされた抗体、および （ｉｉ）結合に適した条件下で、前記ネオエピトープア
ミノ酸連結から成り、中実支持体上に固定されたペプチ
ドと接触させる工程、 （ｂ）前記標本と支持体とを分離する工程、および （ｃ）前記支持体上、または標本中のラベルを測定する
工程から成ることを特徴とする特許請求の範囲第（１９
）項に記載の方法。 - （２３）ＩｇＡ１とＩｇＡＰとの酵素分解から得られる
ＩｇＡ１小片の検定試薬であって、特に、前記小片上の
ネオエピトープと反応するが、無傷ＩｇＡ１とは反応し
ない抗体から成ることを特徴とする試薬。 - （２４）ネオエピトープの全アミノ酸連結またはその一
部から成るペプチドで、宿主動物を免疫化することによ
り得られるモノクローン （ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ）抗体から成ることを特徴とす
る特許請求の範囲第（２３）項に記載の試薬。 - （２５）ペプチドが、ＩｇＡ１とＩｇＡＰとの酵素分解
から得られたＦｃ部、Ｆａｂ部、またはこれらの組合せ
であることを特徴とする特許請求の範囲第（２４）項記
載の試薬。 - （２６）ペプチドが、化学的または生化学的に合成され
ることを特徴とする特許請求の範囲第（２４）項に記載
の試薬。 - （２７）ＩｇＡ１小片上のネオエピトープと反応するが
、無傷ＩｇＡ１とは反応しない抗体から成ることを特徴
とするＩｇＡ１検出試薬。 - （２８）ＩｇＡ１小片上のネオエピトープと反応するが
、無傷ＩｇＡ１とは反応しない抗体から成ることを特徴
とするＩｇＡ１検出試薬。 - （２９）ＩｇＡ１小片上のネオエピトープと反応するが
、無傷ＩｇＡ１とは反応しない抗体から成ることを特徴
とするバクテリア検定試薬。 - （３０）淋菌酵素とＩｇＡ１との反応により、生体内に
産生されるＩｇＡ１小片と特に反応する抗体から成るこ
とを特徴とする淋病診断試薬。 - （３１）ＩｇＡ１と淋菌ＩｇＡＰとの反応により得られ
るＩｇＡ１小片上のネオエピトープと特に反応する１種
以上の抗体から成ることを特徴とする特許請求の範囲第
（２７）項に記載の試薬。 - （３２）ＩｇＡ１とＩｇＡＰとの反応により得られるＩ
ｇＡ１小片と、淋菌水解酵素との反応により得られるネ
オエピトープと特に反応する１種以上の抗体から成るこ
とを特徴とする特許請求の範囲第（２７）項に記載の試
薬。 - （３３）淋菌から得られる酵素により、ＩｇＡ１を分解
することにより生体内に産生されるＩｇＡ１小片上の全
ネオエピトープ、またはその一部を構成するアミノ酸連
結を有するペプチドから成ることを特徴とする淋病診断
試薬。 - （３４）中実支持体上に固定されることを特徴とする特
許請求の範囲第（３３）項に記載の試薬。 - （３５）ＩｇＡ１と髄膜炎菌ＩｇＡＰとの反応により、
産生されるＩｇＡ１小片上のネオエピトープと特に反応
する抗体から成ることを特徴とする髄膜炎診断試薬。 - （３６）個体の淋病を診断するキットであって、（ａ）
ＩｇＡ１と淋菌酵素との反応により、生体内に産生され
るＩｇＡ１小片上のネオエピトープと特に反応する１種
以上の抗体、および （ｂ）前記１種またはそれ以上の抗体と、ＩｇＡ１小片
との反応に適した試薬から成ることを特徴とするキット
。 - （３７）前記１種以上の抗体が、観察可能基でラベル付
けされていることを特徴とする特許請求の範囲第（３６
）項に記載のキット。 - （３８）ラベルが、酵素、担色基、蛍光基、化学冷光基
、放射性元素、または抗原部であることを特徴とする特
許請求の範囲第（３７）項に記載のキット。 - （３９）ラベルの観察試薬を備えることを特徴とする特
許請求の範囲第（３７）項に記載のキット。 - （４０）特にＩｇＡ１と結合する物質を備えることを特
徴とする特許請求の範囲第（３６）項に記載のキット。 - （４１）物質が、ＩｇＡ１のＦｃ部に結合する抗体であ
ることを特徴とする特許請求の範囲第（４０）項に記載
のキット。 - （４２）抗体とＩｇＡ１小片との反応を観察する手段を
有することを特徴とする特許請求の範囲第（３６）項に
記載のキット。 - （４３）個体から、標本を採集する手段を有することを
特徴とする特許請求の範囲第（３６）項に記載のキット
。 - （４４）ネオエピトープの全アミノ酸連結、またはその
一部を有するアミノ酸で構成されるペプチドを有するこ
とを特徴とする特許請求の範囲第（３６）項に記載のキ
ット。 - （４５）ペプチドが、中実支持体上に固定されることを
特徴とする特許請求の範囲第（４４）項に記載のキット
。 - （４６）個体の髄膜炎を診断するキットであって、（ａ
）ＩｇＡ１と髄膜炎菌ＩｇＡＰとの反応により得られる
ＩｇＡ１小片上のネオエピトープと特に反応する１種以
上の抗体、および （ｂ）前記抗体と小片との反応に適した試薬から成るこ
とを特徴とするキット。 - （４７）個体から採取した単一標本から、髄膜炎と淋病
とを診断するキットであって、 （ａ）ＩｇＡ１と淋菌酵素との反応により、生体内に産
生されるＩｇＡ１小片上のネオエピトープと特に反応す
る１種以上の抗体、 （ｂ）髄膜炎菌の抗原成分と特に反応する１種以上の抗
体、および （ｃ）前記抗体とネオエピトープとの反応、および前記
抗体と抗原成分との反応に適した試薬から成ることを特
徴とするキット。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/826,227 US4795702A (en) | 1986-02-05 | 1986-02-05 | Diagnostic method for gonorrhea by assay of IgA1 fragments |
| US826227 | 1986-02-05 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62276465A true JPS62276465A (ja) | 1987-12-01 |
Family
ID=25246028
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62025559A Pending JPS62276465A (ja) | 1986-02-05 | 1987-02-05 | 淋病および髄膜炎の診断方法および試薬 |
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