JPS62270531A - 生体内でのイメ−ジング及び治療用の新規エアロゾル組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ３、発明の詳細な説明 本発明は、１としてはシンヂグラフイによって、なお又
その仙の診断技術、例えば核磁気共鳴又は蛍光の様な、
によって、特に生体内でのイメージングを目的とづる組
成物に関する。本発明は又蛍光又は放射性物質組成物を
添加された放射能抗体を使用する癌の体外診断に応用可
能である。

更に、放射性物質はそれ自体生体内で各種の腫ように固
着するので医薬をこれらの腫ように運搬する為のターゲ
ラ１〜キヤリアどして使用する事が出来る。

最後に、このｈり割竹物質は主として肝よう治療用の免
疫療法に使用Ｊる事が出来る。

シンチグラフイ（ｓｃ　ｉｎｔ　ｉｇｒａｐｈｙｌによ
る生体内イメージング？ＡＩま公知であり、放射性元素
でラベルした媒介剤を使用づる事から成るものであり、
この媒介剤は視覚しようとする細胞に特に結合する事と
なる。このタイプの検査は、特に、腫Ｊ：う、及び炎症
を含む病理学的状態を検出、証明するのに使用される。

本発明による組成物はこのタイプの応用において特に効
果的であることを示した。

本発明は、リポソーム中に封入された一種又は複数種の
細菌壁又は細胞のペプチド配糖体の可溶フラグメン１〜
又は等価の合成組成物と、エアロゾルによる投与に使用
可能の物質とを有する事を特徴とする人体又は動物に適
用づる為のエアロゾル組成物に関する。

更に特殊には、これらの組成物は腫ようの生体内イメー
ジング又は体外診断用のエアロゾル組成物であり、前記
組成物は、放射性、常磁性、又は蛍光物質によってラベ
ルされ、リポソーム中に１１人された一種又は数種の細
菌壁又は細胞ペプチド配糖体又は等価合成組成物の可溶
フラグメントと、エアロゾルとして投与可能のザブスト
レートとを有する。

これらの組成物は、一種又は複数種の細菌壁又は細胞ペ
プチド配糖体又は等価合成組成物が免疫療法として又は
これらに固定された医薬のターグツ１〜キトリアとして
使用される治療用組成物でもある。

以下記載の通り、本組成物は免疫療法、特に癌治療に使
用し得るが、尚、肝よう細胞へのサイトドキシツク（ｃ
ｙｔｏｔｏｘｉｃ）又はサイトスタデツク（ｃｙｔｏｓ
ｔａｔ　ｉｃ）医薬の様な活性医薬のターゲット用とし
ても使用し１！′Ｉるが、この秤のターゲッヂング及び
これに対応する技術は当業者に公知なものである。

これに加えて、ノカルヂア可溶ペプチド配糖体誘導体（
ＮＳＰＤ）と称するノカルヂアの特殊なフラクシ」ンを
免疫療法又はターゲットキャリアとして、特に−［ノキ
ン（Ｈｏｎｏｋ　ｉ　ｎｅ　）と組合わせて注射可能の
形式で使用することも出来る。

可溶ペプチド配糖体及びノカルヂア（Ｎｏｃａｒｄｉａ
ｌの細菌壁又は細菌からのペプチド配糖体の可溶フラグ
メントを含むフラクシヨン又は可溶ペプチド配糖体に関
してはフランス特許第２，３４５，４５８号、２．２６
８．５３１号、及び２，３４５，１５９号（米国特許第
４゜０４２．６７８号及び第４，２０７，７６８　）明
細書に記載されている。

これらは事実上非脂質化及び非蛋白化した壁又はノカル
ヂアの３種族、Ｎ、オパカ（Ｎ、ｏｐａｃａ）　。

Ｎ、Ｄラリナ（Ｎ、ｃｏｒａｌ　ｌ　１ｎａ）及びＮ、
ルブラ（Ｎ、ｒｕｂｒａ）の細胞から抽出されたもので
、これらは非脂質化、酵素処理の上各種の純化工程で処
理される。

得られたフラクションはそれらのミトゲン化性に加えて
多数の潜在能力を有する（Ｒ，シオルバリコ他、Ｉｎｆ
ｅｃｔ、　ｉｍｍｕｎ、　１９７５年１１．２５７）。

これらのフラクションはその他の一連の特性、例えば抗
腫よう性（Ｒ，バローシオルバリュ他、　Ｉｎｔ、ＪＩ
ｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ、　１９８１年３．１＋
５）、インターフェロン循環導出能力（Ｒ，バローシオ
ルバリュ他、ＩｎｒｅＣｔ、１ｍ１ｌＬ１１．　１９７
８年１９．３５３及びＪ、Ｒｅｔｉｃｕｌｏｅｎｄ。

ｔｈｅｌ、ｓｏｃ、　１９８１年３０．２１１７１　、
Ｎ　Ｋ細胞活性化（Ｒ、バローシオルバリ〕他、Ｊ、Ｅ
ｕｒｏｐｅａｎ、ＪｅｒｕｓａｌｅＩＩｌｃｏｎｇｒｅ
ｓｓ　９月訃１３日１９８５年）、及び肺転移の成長の
抑制（Ｒ，バローシオールバリュ他、Ｆｏｒｕｍｄｅ　
Ｃａｎｃｅｒｏｌｏｇｉｅパリ、　１０−１１／Ｖ１．
１９８５年）等を有する。マクロファージが直接又は間
接にこれらの活性の殆どに含まれており、事実、これら
のフラクションのマウス又はラットへの投与は腹膜内マ
クロファージの分泌を促し、更に、■１　及びその他の
モノキン（ｍｏｎｏｋｉｎｅｓ）を分泌させ込（Ｒ、バ
ローシオルバリコ他、Ｃ，Ｒ，Ａｃａｄ、Ｓｃ、パリ　
１９８４年ｖ、２９８．５ｅｒｉｅｓｌｌｌ、Ｎｏ、１
７１゜更に、これらのフラグメントを等価合成組成物で
置換覆る事も可能である。この組成物は合成又は半合成
で作られたもので、その分子式中に前記した可溶フラグ
メン］〜中に含まれている構造要素を含んでいる。これ
は特に、操作の容易な、単純化合成構造であってよい。

マイコバクテリウム　オバクス又はプロアクチノマイセ
ス　オーバクスと同意のＮ、オパカ（Ｎ、ｏｐａｃａ）
＾ＴＣＣ２１，９５３Ｉｌｌ胞（ダラム陽性、好気性、
非病原性）を前）ｄｉの特許明細書に記載の条件で培養
した。培養時間４８時間を２４時間に短縮した。

得られた細菌細胞を遠心法によってその培養母体から分
離する。濡れている細胞は次に一種乃至数種の有機溶媒
を使用して脂質の抽出のための処理を行う。

細胞は先ずその重量の３０＠のアセトンで室温で４８時
間磁気スターラ上で懸濁させる。この工程を数回繰返す
。細胞は次いで純粋溶媒（アセ］−ン、アルコール、エ
ーテル、りＯロフォルム、又は８３：１７クロロフオル
ム／メタノール共沸混合物）を使用してソクスレット（
Ｓｏｘｈｌｅｔ）形エキストラクタ中で逆流の下に膜脂
質化を行う。全抽出脂質は細胞の乾燥重量の４０％に達
する。細胞は続いてアセトン中で再懸濁され、傾斜分離
の上、乾燥される。

脱脂質した細胞はその１００倍の水中に懸濁し、懸濁液
ｉ　ｏｏｍ　＋当り０．２ｒＴＮＪ（７）ティーｆ　−
ゼ（ＤＮａｓｅ）をデオ゛キシリボ核酸の破壊のために
添加する。懸濁液は２７．５０００で４０℃で１時間遠
心分頗を行う。

細胞は再び０．１％の卵白リゾチームの存在下でＤＨ６
，２で０．１モルのｌ’ｉｔ酸アンモニウム中に懸濁し
、次いで１０時間３７℃で培養するが、汚染防止の為数
滴の１〜ルエンを添加する。

懸濁液を遠心分備し細胞を同一条件で第２回目の培養を
行う。両袖出物を混合し凍結乾燥を行い、酢酸アンモニ
ウムの除去の為に水で処理する。

得られた両袖出物は次いで室温でエーテルを使用して３
回順次叫脂する。５００ｍｏのノカルヂア抽出物を０．
１１１ニルの酢酸で平衡させたセファデックス（Ｓｅｐ
ｈａｄｅｘ）Ｇ−７５カラム（ｃｏｌｕｉｎｌＪ二に乗
せて、同一溶媒で抽出する。ＮＳＰＤとして知られてい
るフラクションは（Ｎ　Ｓ　Ｐ　Ｄ　：　ｎｏｃａｒｄ
ｉａｓｏｌｕｂｌｅ　ｐｅｐｔｉｄｏｇｌｉｃａｎ　ｄ
ｅｒｉｖａｔｉｖｅ）は１８乃至２０本のチコーブから
成り、その内容物は乳白色であるが、その内容物は再集
合の上凍結乾燥する。ＮＳＰＤフラクシ」ンは出Ｒ物質
のプールの５０％である。

ＮＳＰＤは羊毛状の外観を有する白色粉末である。０．
１−ＥルのＮ　ａ　Ｏ＋−１でアルカリ化した、ｐｌ−
１１０，５の、あるいは０．０３モルのくえん酸、０．
５モルのＮａＣｌのｐＨ９，８の水に可溶である。

元素化学分析の結果は次の通りであった。

製ｒ１００　当りのダラムで表した成分ＣＨＮ　　　　
５Ｐ ＮＳＰＤ　　１４．５７　５．８２　１１．６４　０．
１６　３．１５ＮＳＰＤは異方性である。以下を含有す
る。

中性シュガー　　　２５−３０％ アミノシュガー　　１９−２５％ アミノ酸　　　　　３２−３５％ ＤＡＰ（ジアミノビメリック酸） ２００ナノモル／ｍｇ 脂質　　　　　　　　７％ その異方性は若干の技術によって立証する事ができる。

即ち、 （１）変性メヂウム中での電気泳動によって、４３００
０乃至５０００の見掛上の分子量のりブフラクションが
立証しく！する。

（２）％ｍｑ／ｌＴ１１の濃麿におけるｕ−０，１゜Ｄ
Ｈｌｌ、８の燐酸塩バッファ内での２０℃での５９７８
　Ｏｒ　ｐ　ｍの速磨での沈澱により。ピークが得られ
たが明瞭に分離出来るものではなく、製品の異方性を示
している（ベックマン超遠心）。

（３）フォルシコ（Ｆｏｌｃｈ）泥液（クロロフォルム
／メタノール／水、１６：８：６、容積比で）処理によ
って、１６時間後３つの相が現れた、５０％　水性、３
０％有機、２０％インターフェース。

（４）ＴＳＫ　　２０００カラム上でのモレキコラーシ
ーブｌ−Ｉ　Ｐ　Ｉ　Ｃクロマトグラフィーにおいて、
４種のフラクシ］ンがＫＦられる。

本発明によるＮＳＰＤは、フＡルシコの混合液によって
処理しても、Ｉ−ＩＰＩｃで処理してす、３相又は明瞭
な４フラクシヨンが、夫々前られる事からして、異方性
にＪ：って特徴付【ノられる。

更に、１」Ｐ　Ｌ　ＣにＪ：る分離後、ＮＳＰＤ活性は
その１又はそれ以」ニのフラクシ三１ンで見出１事が出
来た。

前述の特許明細書に記載の通り、他の細菌の壁からベブ
ヂド配糖体を使用する事は勿論可能であるが、本発明の
内容から考えてノカルヂアの種から得られた、ｒＮＳＰ
ＤＪと称する上述の誘導体を使用するのは特に好ましい
。

ＮＳＰＤは化合物でラベルされるが、便宜上の理由から
、殆どの場合、この化合物は放射性である。９９ｍＴｃ
（テクネシウム）は、そのラベリング技術が信頼性があ
り迅速なので、しかもその半減期が人に対して行われる
シンチグラフ検査を可能とする程痕なので、使用が好ま
れる。

使用するりボソームについて言えば、これらは多ラメラ
−（ＭＬＶ）リポソームでもコニラメラ−リポソーム（
ＵＩ　Ｖ）でもよいが、特殊には燐脂質、例えばジバル
ミトイルフオスファチジルコリンとフォスファチジル廿
リンと、コレステロール、から成り、特にモル比が４＋
１：５である。

これらのリポソームは公知の技術で、例えば脂質の水和
によってパンガム（Ｂａｎｇｈａｍｌの方法で（Ｊ、Ｈ
ｏ１．Ｂｉｏｌ、　１９６５イｆ１３２３８−２５２＞
　、ツカ及びババハジョボウロス（Ｓｚｏｋａ　ａｎｄ
　Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｒｏｓ）による反転位相蒸
発によって（Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ。

ｔｌｓＡ、　４９７８年７５．４１９Ｖ＋−４ｔ９８）
　、アルイハ燐脂質の分散のソニケーシ〕ン（ｓｏｎｉ
ｃａｔｉｏｎ）によって（８ｉｏｃｈｅｍｉｓｔｏｒｙ
、　１９７７年１６．２８０６−２８１（１）　、その
他の方法で製造づる事が出来る。

試験の結果によると、リイズが５０％ｍ乃至５００ｎｍ
の間で、表面活性を有する少なくとも１種の燐脂質を含
む様に構成されたリポソームから同一の結果が得られた
。

ＮＳＰＤの封じ（ｅｎｃａｐｓｕ＋ａｔ＋ｏｎ）は、リ
ポソームの形成中に、水性相にこれを添加することによ
って、あるいはＮＳＰＤのアンフィフィリツクな（ａａ
＋ｐｈｉｐｈｉｌｉｃ）　ｌ’ｌ質を勘定にいれて、間
欠攪拌を行いながらの２０℃での３０分の培養によって
も行い得る。

本発明による組成物の重要な特徴は、これらがエアロゾ
ルで投！ｊＪるのに使用されると言う事である。

試験した例によると、実際には、エアロゾル以外のルー
トによる投与では何等の満足すべき結果をもたらさなか
った。

当然、リポソームとＮＳＰＤＩ１１を物からのエアロゾ
ルの形成は、１０マイクロメータ以下の直径の粒子をつ
くるのみである様な適当な装置を使用し、キャリアガス
としてもつとも普通な空気を使用して公知の技術で作る
事が出来る。

しかし、吸入プロセスを実施し利用した場合には、間違
ったシンチグラフイの陽性の結果を来たさない様にする
ため、エアロゾル形式の放射能製品による患者の外部的
汚染を避ける様に注意すべき事が推賞される。又、患者
への投与中エアロゾル形式での放射性製品による空気の
汚染の防止の為に設計された適当な吸入装置を設置する
事が望ましい。

本発明の組成物はＮＳＰＤ抽出物を分離する事によって
、又はその他の壁ペプチド配糖体の使用によってさらに
特定的なものとなし得る。本発明による組成物はペプチ
ド配糖体ボンドＮＳＰＤ又はペプチド配糖体フラグメン
トと一致する。しかし、非脂質化及び遠心分離後の酢酸
処理はペプチド配糖体の烈い沈澱フラクションを作るこ
とを可能とする。この！１ＩＩＪＦｉがＮＳＰＤと同一
条件で投与されるならば、同一シンヂグラフ結果を得る
事が出来る。これらの夫々のフラクションに対してそれ
らの特殊性を定める事が適当である。

ＮＳＰＤが紗ようと結合して活性化マクロファージを侵
入させるという仮説は腫ようイメージング結果及びその
他の生物学的データから確立された。これをコン１〜ロ
ールするため、ＤＢ／Ａ２マウス中の１）　３８８１）
　１マクロフアージがＥ、コリ（Ｅ、ｃｏｌｉ）リボポ
リラッカライド（１−Ｐ　Ｓ　）で活性化された。ｉ−
ｐ　ｓ投与−０後、腹膜マクロファージが集められてそ
の活性磨は化学ルミネッセント剤によってコントロール
された。ＬＰＳマクロファージの付活２４時間後、９９
ｍテクネシウムでラベルされリポソーム中に封入された
ＮＳＰＤがエアロゾルでマウスに投与された。２時間後
、放射性ＮＳＰＤの固着割合いはマクロファージで計算
された。

同様な実験はマクロファージ付活剤を与えられなかった
基準マウスに対して行われた。

９９ｍＴｃ−ＮＳＰＤのリポソーム中に封入された薬物
のエアロゾル投与後のＤＢ／Ａ２マウス中のＰ３８８Ｄ
１細胞による生体内取込み（実験のため付活Ｐ３Ｂ８Ｄ
１マクロファージを有する動物にはラベルなしＮＳＰＤ
又はＬ　Ｐ　Ｓ　１を試験の前日５０μｑ投与） この結果は付活マクロファージに対する顕著な付着と、
基準マクロファージへの僅かな割合Ｉ／Ｘのそれを示し
ている。第３動物ロフトにおｌ、Ｎて【ま、ＬＰＳの代
わりに非ラベルＮＳＰＤで行った子猫付活は同様な結果
をもたらした。同様な結果がＮＳＰＤに対して兎に用意
された抗体を有する免疫蛍光技術を使用して得られた。

蛍光マイクロスコピー又は細胞スクリーニングシステム
による実験の結果、ＮＳＰＤの固定は予備付活されたマ
クロファージ群により顕著に生じる事を確認する事が出
来た。

本発明のその他の長所及び特徴は以下の例示および図面
から明確となろう。

例　１　　（′Ｊｋ理学的データ） 以下に説明するシンチグラフ実験は肺肝よう及び転移の
検出に有用であることを示したＮＳＰＤ薬剤を使用して
患者の承計１後に、又トウール（フランス）のリン１〜
ルＡスピタリエコニベルシテール（ｃｅｎｔｒｅ　ＩＩ
ｏｓｐ＋ｔａｌ＋ｅｒ　１Ｉｎｉｖｅｒｓ＋Ｌａ１ｒｅ
）の］ミツシオンデチク（倫理委員会）の同意を得た後
に行われた。

無効性と熱の無いことを聴取した後（兎での生体内及び
［リムルス試験］マリンクＤツｌ〜会社、試験管内での
）アイソトニックな塩類溶液に溶解した薬剤は９９ｍＴ
ｃ−８ｎ複合物で、オスボーン他の技術（Ｉｎｔ、Ｊ、
Ｎｕｃｌ、Ｍ　ｅ　ｄ　、　Ｂｉｏｌ、１９８２年９４
７−５１１から導出した以下の■程によってラベリング
した、即ち、４００μｍの０．１５モルＮａＣ１に溶解
された４００μＱの凍結乾燥ＮＳＰＤが真空の下で無水
塩化錫６０μ０によって１５分間還元され、次いで発生
１Ｎ　（Ｃ，Ｆ、Ａ、、フランスの）から０．１５モル
のＮａＣｌ溶液によって使用時刻に抽出された４０乃至
８０ｍＣ１の９９ｍ−（バーテクネシウム酸ナトリウム
）で錯化する。

メタノール／水（７０：３０容積比）溶媒中でのパーテ
ィションクロア１〜グラフイーによって調査したＮＳＰ
Ｄのラベリングの完成率は少なくとも９９．５％でなけ
ればならない。

このラベル湾み薬剤を次に、例えばモル比４：１：５の
ジバルミトイルフＡスファヂジルコリン、フォスファヂ
ジルヒリン及びコレステロールから成るリポソーム中に
封入する。

リポソームの調製に採用された技術は以下の通りである
、即ち、燐脂質とコレステロールをり０ロフオルム内で
混合する。溶媒の蒸発後、脂質は容器の壁にフィルム状
に付着Ｊるが、残留溶媒を窒素流の下で３０乃至４５分
で除去する。脂質フィルムへ、水相中１ｎｏ／ｍ　ｌの
出来上がり燐脂質濃度が得られる様に、ｐｉ−１７，４
のＰＢＳバッファを添加する。窒素下での＋２℃での２
５分のソニケーション（ｓｏｎｉｃａＨｏｎ）の後、リ
ポソームの大きさのモニタリングを電子顕微鏡法によっ
て行う。

５ｍｌのリポソームの真空下での、及び室温でのラベル
演みＮＳＰＤ溶液の３０分の培養（ｉｎｃｕｂａｔｉＯ
ｎ）の後、最終薬剤は滅菌、無発熱のｐ　Ｈ７。

２乃至７．５のもので、′ＴｉＭ９９ｍＴｃは１％以下
である。

これが、Ｅ、Ｓ、ｌ空気フィルタフード（フランス製）
中の−ｒＶ６０００シーメンス製超音波マイクロ吸入器
（ドイツ製）を使用して患者に投与した薬剤である。

リポソーム中に封入され又は１１人されずにエアロゾル
で投与された肺吸収薬理学的実験を気管切開した犬に就
いて行った。

その結果は、これが単独で投与された場合には血中への
ＮＳＰＤ通過は殆どなく、ｐｃ−ｐｓ−］ル（ａｈ○１
）リポソーム中に１１人された時通〈２１） 過は最良であった。このｆｆｉ　Ｎ　Ｓ　Ｐ　Ｄは８激
にリンパ液及び細胞Ｎ　’ＩｄＩ液中に拡散して、生物
学的半減期１２０±３０分で尿中に除去される。

その他の１ヒ較桑剤を以下の通り使用した。

リポソームのみ オレイン配向Ｎ　Ｓ　Ｐ　Ｄ。

ＮＳＰＤ−ＰＳリポソーム ＮＳＰＤ−ＰＣリポソーム その結果を第１図に示すが、これは、時ｎ１１の関数と
しての、各トトラヘルの薬剤の吸入後の面液中の放Ｃ１
’ｌ性物質成分を比較しているものである。

例　２　（シンチグラフ　γ−タ） シンチグラフ試験をエアｆコゾル吸入後１「１間から２
４．　Ｒ間にｈっで高分解１指１４０キロ電子ボルトの
平行コリメ−りｆすのニコークリア　シカゴ裂のガンマ
カメラで行い、データは５１Ｍｌ５Ｉ１１コンヒ゛コ−
り（ソファン　メヂカルーフランス）で処理した。

患者の甲状腺は、−（験の１ｊｉｌ始３０分前に径口で
の４００ｍｑのＮａＣｌＯ４のＩＱ”ｉによッテ生体く
２２） 内での分解の可能性のあるテクネシウムの結合から保護
した。

唾液の分泌を低下させ、食通及び消化器官の早期の汚染
を防止するため、患者は又吸入４５分前に皮下に０．２
５乃至０．５０ｍＱの硫酸アトロピンを投与された。

試験は最初、誤ったネガヂブな結果が得られるのを避け
る為１力月以上にわたって化学療法乃至放ｔＡ線療法を
受番ノだ事のない患者に対して行われたが、その後行わ
れた最終試験では、これらの療法を受（）た患者に対し
ても略満足すべき結果を１９だ。

患者第１号 患者第１号のイメージングを第２図に示す。

この図は右眼の悪性黒色腫と頭蓋への転移のある患者の
全身シンチグラムを示す。

イメージは例１（前述）に記載の方法でリポソーム中に
封入した９９ｍＴｃ−ＮＳＰＤの吸入後作られた。上述
した２個の腫ようが証明され、バックグラウンドは非常
に弱い。

患者第２号 この患者は右肺に非角質化上皮癌腫を有する。

第３図はＡＩＬ：ＩＩ３いて、本発明によるリポソーム
の吸入中Ｏ乃至１６分の間に得られたダイナミックシン
チグラム（６０秒／イメージ）の各種露出を示す。

第３図Ｂは吸入１ｉ１始後２０分に得られたもの（スタ
ヂックシンヂグラム）であるが、合目的に腫ようの位置
する右肺のレベルにトレーサーの高度の結合と、問題領
域レベルでの放射能の定量と対称的な骨法領域レベルで
のそれが見られる。

第３図Ｃはクセノン１３３シンヂグラフイによる呼吸の
モニタに対応する。この実験は合目的に４０％の放射能
が位置づる腫ようを有する右肺の小呼吸を示ず反面１１
ｔ［な左肺は６０％の放射能を有する。コ（１）実験Ｉ
ｔ　９９　ｍ　Ｔ　ｃ−３ｎ　−Ｎ　Ｓ　Ｐ　Ｄ−リボ
ン−ム薬剤によって１１ノられ、Ａ図及び８図によって
示される初期結合の病巣が肝ようを保有する肺への１〜
レーサーの蓄積の真正な結果であって、呼吸による作用
に対応するものではない事を示している。

患者第３号 第４図に示すシンチグラムは、右足裏の及び右そけい部
の黒色肉腫の切除を受けた患者の右大腿の腫ようの侵入
（Ａ）及び右脚の前面（Ｂ）及び後面（Ｃ）を示す。シ
ンヂグラフィは本発明のリポソームの吸入後１時間行っ
た。両摘出腫ようの間に位置する評よう侵入の観察が健
康な反対側の脚の同一領域との比較で明らかな所である
。

患者第４号 第５図はラベルしたＮＳＰＤを有するリポソームの吸入
１時間３０分後の右大腿の黒色肉腫の皮下転移のチェイ
ンの可視化に相当する物である。

腫よう領域にお番プるトレーグー能力の定量化はシンチ
グラフイック　データ処理によって行われ、外科処置演
みの肝ようの直接力ウンヂングは吸入後１時間後に行っ
た。両者の場合、基準健康組織に対する濃縮率は等しく
、夫々１．３５±０゜５および１．４０±０．１であっ
た。

患者第５号 舌の小１ｌｌＩ胞癌肝の肺転移の可視化（第６図）。

本発明による５０ｒｎＣｉのテクネシウムの吸入後１時
間（Ａ）及び６時間（Ｂ）に得られたシンチグラム。６
時間後にシンヂグラフィ（Ｂ）で得られた転移の（９首
と肺放射Ｉ！像どの間に良好な関連性が存在する。

解剖病理学的検査によって確認された一次及び転移腫よ
うの保有者である５１人の患者から得られたシンチグラ
ムィの纏めであるが、頚部及び腹部は吸入にあたって汚
染したので青白に入れてない。

４　■その他肺肝ようｌ　１．１Ｏ−ｌ＝７０ス及び最
近の傷跡は顕著なＮＳＰＤの固着は普通見られなかった
。

偽陽性反応はある種の複合炎症と疑似肉腫の縦隔膜リン
パ節にのみ見られた。偽陰性反応が、非常にまれに見ら
れる、マクロファージによって進入する腫ようである悪
性黒色腫からの骨転移で観察された（−２０％）。

現在までの所、水沫で検出された最少の腫ようはミリメ
ートル程度の直径を有するもので、Ｘコンピュータート
モグラフィに必要な寸法よりも相当に小さい。この様な
分解能は免疫シンチグラフィで場合によっては得られる
かも知れない。にも拘らず、−人の同一の患者の抗原の
変動の可能性は免疫シンチグラフィが一次黒色腫の全て
の転移を検出し得ないであろう。本発明の方法はこの様
な制限は存在しない。

本発明が成した決定的な進歩は腫ようを外科的に除去し
た患者の不可視残留病巣の検出である。

例示すると、第７図は、数年前に手術を受けて、すべて
のイメージング検査で腫よう乃至転移はないと言われた
患者にリポソーム中９９ｍ丁Ｃ−ＮＳＰＤのエアロゾル
投与後に得られたシンヂグラフィを示す。前面の一件シ
ンチグラフィは、吸入後１時間３０分で、スカープス（
Ｓｃａｒｐｓｌ領域内に紳ようの侵入が見られたが、こ
れは組織学的に確認された。

例　３　（抗腫よう活性） マクロファージが各種の刺激物の影響の下に腫よう成長
に抗する能力を得る可能性のある事は周知の所である。

隔離され、次いで動物に注射されたノカルヂアフラクシ
ョンはＰ８１５マス１〜サイトｖ　（ｌｌａｓｔｏｃｙ
’ｔｏｓａｌ及びＣ５７Ｂ１／６マウス３Ｌ　Ｌルイス
癌腫の様な腫ようを有するターゲットに対して細胞毒的
、細胞溶解的活性を有する。

以下によるＰ８１５細胞の成長抑止率（Ｇｌ）Ａ）ＣＷ
−除去マクロファージ Ｂ）ＣＷ−除去マクロファージとＬＰＳ、試験管内 Ｃ）ＮＳＰＤ−除去マクロファージ Ｄ）ＮＳＰＤ−除去マクロ’７Ｆ−ジとＬＰｓ試験管内 ％Ｇｒは次式によるサイトスタデツク（ｃｙｔｏｓｔａ
ｔｉｃｌ活性を誘導する処理の能率を示す。

基準マクロファージのｃｐｍ− ＧＩ＝１００Ｘ−−〜−−−−−−−−−−−−基準マ
クロファージのｃｐｍ 処理マクロファージのＣｐＱｌ 結果は別々の６個の試験の平均：±ＳＤ。

この細胞毒活性はルイス癌における肺ミクロ転移の生体
内の衰退を含める事が出来、又、これらのフラクション
の作用はモノキンとの併用で可能化される。

３Ｌｌ−腫ようの局部肚よう成長及び肺転移の広がりに
対ＪるＮＣＤＭＳＮＳＰＤ、ＣＷ、モノキン及びモノキ
ンと各Ｎ、オパカ（Ｎ１０ｐａｃａｌフラクシヨンの作
用。。

クツ１−転移ラブドミオリルコ？　（ｒｈａｂａｏ＋ｎ
ｙｏｓａｒｃｏｍａ）、（９−４−（０）クロン６）の
場合、腫ようの退化は事実」二２カ月に乃る週２回の処
理の結果としての和である。

［ＮＳＰＤのウィスターＡＧラット中のＦ６移植ラブド
ミオサルコマの伝搬に対する作用）第８図はマクロファ
ージ付活ファクタで予め準備した＜Ａ）又番ま２；４半
としての単に培養基内で培養した（Ｂ）いずれかのヂオ
グリ］ラ−１へ導出腹膜マクロファージの同一ボビコレ
ーションによって導出された（１４Ｇ）イノシン−ラベ
ルした３１Ｌ腫よう細胞の消散のパーセンテージを示す
。

細胞の中に例えばリソソーム酵素及びベーターガラクト
シダーゼ及びアルカリ性フォスフＡジェステラーゼの様
なＪクトエンヂームの様な付活マーカーが存在する事に
注目すべきである。

特別の活性はノーノーしルの細胞蛋白の基体加水分解７
分／ｍＱで表示される：平均士ＳＤ、例外はプラスミノ
ゲン活性体。

ＮＳＰＤの及びその他のノカルヂアフラクションの生体
内及び生体外の腫よう及び若干の炎症状態の検出能力は
その中でマクロファージが活性化されるモノニュークリ
■−１〜されたファゴシチング細胞（ｌｏｎＯｎｕｃｌ
ｏａ＋［！ｄ　ｐｈａｇｏｃｙｔｉｎｇ　ｃｅｌｌ１群
を動作状態にする。

これらの細胞はこれらのフラクションに生体内で生体内
として固定する事が出来、次いで活性化マクロファージ
としての特性、即ち過酸化水素の強い産出と糖の消費の
増加をもたらす。

【図面の簡単な説明】

第１図は時間の関数としての各種ラベル付薬剤の吸入後
の血中放射能成分を示し、第２図は右眼内の悪性黒色腫
と頭蓋の転移を有する患者第１号のシンチグラムを示し
、第３図は右肺の非角質化上皮癌腫を持った患者第２号
の、３０ｍＣ１の９９　ｍ　Ｔ　ｃ　−Ｎ　Ｓ　Ｐ　Ｉ
）を含有（るリボン−ムの吸入後のシンチグラムィの結
果〈△及びＢ）及びクセノン１３３呼吸のモニタ結果（
Ｃ）を示し、第４図は右足裏の黒色肉紗摘出後大腿及び
脚への侵入及び右そ（）い転移神杆節に悩む患者第３号
に３０ｒｒ＋ＣｉのＴ（、−ＮＳＰＤを含むリポソーム
の吸入１時間後に得られたシンチグラムを示し、Ａ、Ｂ
及び０図は夫々大腿、膝、及び脚に対応するものであり
、第５図は右そけいの転移神軽節及び黒色肉腫の皮下転
移列に悩む患者第４号に３０ｍＣ１の９９ｍＴｃ−ＮＳ
ＰＤを有するリポソームの吸入１時間３０分後に得られ
た前面シンチグラムを示し、第６図は舌の基部の小細胞
癌腫の肺転移に悩む患者第５号のリポソーム中に封入さ
れた９９ｍＴ（、−ＮＳＰＤの吸入１時間（Ａ＞及び６
時間（Ｂ）後に得られたシンチグラム（胸部前面）を示
し、第７図は数年前に手術を受け、従来の検査法で腫よ
うのおそれ無しと不正確に告知されていた患者にリポソ
ーム中の９９ｍＴｃ−ＮＳＰＤをエアロゾル投与した後
に得られたシンチグラムを示し、第８図は、予めマクロ
ファージ付活因子でプライムした（Ａ）、又は単に培養
基で培養された標準としての（Ｂ）チオグリコレート−
抽出腹膜マクロファージの同−闇で誘発された（１４Ｃ
）イノシン−ラベル付３１Ｌ腫よう細胞の残存率を示す
。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）リポゾーム中に封入された一種又は複数種の細菌
   壁又は細胞のペプチド配糖体の可溶フラグメント又は等
   価の合成組成物と、エアロゾルによって投与するために
   使用し得るサブストレートとを有する事を特徴とする人
   体又は動物体に適用されるエアロゾル組成物。 （２）腫ようの生体内イメージング又は生体外診断の為
   に、前記組成物は、放射能を有する、常磁性の、又は蛍
   光を有する物質でラベルされた、リポソームに封入され
   た細菌壁又は細胞ペプチド配糖体の一種又は複数種の可
   溶フラグメント又は等価の合成組成物と、エアロゾル投
   与に使用可能のサブストレートとを有する事を特徴とす
   る特許請求の範囲第１項に記載のエアロゾル組成物。 （３）一種又は複数種の細菌壁又は細胞ペプチド配糖体
   の可溶フラグメント又は等価合成組成物が免疫療法用に
   、又はこれに結合された医薬のターゲットキャリヤとし
   て使用される、治療用の特許請求の範囲第１項に記載の
   エアロゾル組成物。 （４）細菌壁又は細胞の可溶フラグメントの一つはＮＳ
   ＰＤである、特許請求の範囲第２項に記載のエアロゾル
   組成物。 （５）ＮＳＰＤは９９ｍテクネシウム又はシンチグラフ
   イ又はカウンタによって検出可能の任意の放射性物質で
   ラベルされている、特許請求の範囲第２項又は第４項に
   記載のエアロゾル組成物。 （６）ＮＳＰＤが常磁性プローブでラベルされている、
   特許請求の範囲第２項又は第６項に記載のエアロゾル組
   成物。 （７）ＮＳＰＤが蛍光プローブによってラベルされてい
   る、特許請求の範囲第２項又は第４項に記載のエアロゾ
   ル組成物。 （８）等価合成組成物は合成又は半合成によって得られ
   た組成物でその分子式中に前記可溶フラグメント中に含
   まれる構造の要素が含まれている、特許請求の範囲１項
   に記載のエアロゾル組成物９）リポソームは界面活性を
   有する少なくとも一種の脂質から成る、特許請求の範囲
   第１項乃至第８項の１項に記載のエアロゾル組成物。 （１０）リポソームはヂパルミトイルフォスファトジル
   コリン／フォスファチジルセリン／コレステロール（ｄ
   ｉｐａｌｍｉｔｏｌ　ｐｈｏｓｐｈａｔｏｄｙｌｃｈｏ
   ｌｉｎｅ／ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ／ｃ
   ｈｏｒｅｓｔｅｒｏｌｌ）リポソームである、特許請求
   の範囲第９項に記載のエアロゾル組成物。 （１１）リポソームの成分のモル比は４：１：５である
   特許請求の範囲第１０項に記載のエアロゾル組成物。 （１２）ＮＳＰＤは表面活性作用を有する少なくとも１
   種の別の製品との組合わせである、特許請求の範囲第１
   項乃至第１１項の１項に記載のエアロゾル組成物。 （１３）ノカルデイア溶性ペプチド配糖体誘導物。 （１４）ノカルデイア溶性ペプチド配糖体誘導物から成
   る医薬組成物。 （１５）更にモノキンを有する、特許請求の範囲第１４
   項に記載の医薬組成物。 （１６）注射可能な形態の、特許請求の範囲第１４項及
   び第１５項に記載の医薬組成物。