JPS62259582A - ピキア・パストリスおよびその培養方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規微生物および単細胞タン白の生産にそれを
使用することに関する。−面では本発明は単細胞タン白
の製造に関する。別の面では本発明は新規酵母菌株に関
する。

世界的タン白不足を軽減する努力は種々の生合成方法を
包含した。その方法では甲細胞タン白（ＳＣＰ）が各種
の炭素含有基買上で１種もしくは別の各種微生物を生育
させることにＪ、り得られる。

炭素エネルギー基質は容易に人手でき、比較的安価で、
均一および安全であるべぎである。石油炭化水素は炭素
エネルギー源として使用されたが、水溶性が不足するこ
とおよび微生物変換を助けるためにかなりの分子状酸素
が消費されるために実用１困ｎであった。他の方法はＭ
素化飽和炭化水素誘導体の相対的水溶↑１により、それ
を供給原料として集中的に使われてきた。水性醗酵体の
取扱いが容易なことおよび微生物変換−生育方法に要す
る分子状酸素が実質的に減少するからである。

しかし、単細胞タン白ｇ！Ａ造の商業化上の限定因子は
、消費基質に基づき乾燥細胞の適度の収量を右Ｊると共
に、比較的適度の細胞密度に醗酵液を調整覆る必要性お
よびその消費、およびその結果適量のＳＣＰ物質を回収
するために大量の全醗酵流出液を処理する必要性であっ
た。大量の水性醗酵流出液の処理は遠心弁ｌｌｌ１１、
また洗滌および乾燥工程におけるように単細胞タン白生
成物の濃縮を複雑化する。

従来のいくつかの方法は一般にＭｍから得られる粗タン
白含量に比し、バクテリア細胞のそれは僅かに高いため
にバクテリアの培養に集中した。

しかし酵母は広く入手でき、比較的簡単に培養される。

酵母細胞は一般にバクテリア細胞に比し僅かに大きいか
ら、酵母細胞は醗酵流出液から一層容易に分離される傾
向がある。

細胞収量を増加させ、特に高ｌｌｌ１胞密度で操作する
手段および方法の発見は非常に望ましい。たとえば実質
的に少ないＷＪ酵流出液容量を取扱うことは、配管およ
びポンプの大きさを小さくし、所要殺菌の減少による所
要水の減少、そして凝固および分離工程に対する装置の
大きさや取扱い上の要件が減少するという大きな節約を
意味する。

特開昭５７−４３６８２号公報に記載の発明は醗酵器内
の醗酵体に無機塩高濃度を含む培地を添加することによ
り、通常得られない非常に高い細胞密度で醗酵器内の醗
酵液を操作し、高収量の酵母単細胞タン白生成物を生産
するＪ：うに酵母培養物を使用する連続的好気性醗酵方
法を開示する。

細胞密度とはＷＪＶｆ液１容につき乾物重量規準の細胞
５ｒｆＩを意味する。醗酵液は細胞を含む水性醗酵ブロ
スもしくは液の全容間を意味する。ＩＩｌ′ｌ胞密度は
通常９／１として表わす。収量は醗酵液に供給した炭素
エネルギー源もしくは基質重量で所定消費に対し産生さ
れた細胞重量を意味する。そして通例は９／９で表わさ
れる。

本発明方法により得ることのできる高細胞密度は非常に
能率化され、単５ｉｌｌ胞タン白生産コストを減少させ
る。多くの場合、遠心分離等により単細胞タン白生成物
を濃縮するのは非常に減少し、もしくは除かれることさ
えある。細胞生成物は必要なら、洗滌要素で洗滌して未
消費残存塩を除き、そして噴霧乾燥機のような乾燥要素
に直接移送することができる。洗滌液はＩ胞に摂取され
ない大部分の残存無機塩を含み、醗酵器に再循環するこ
どができる。したがって、ＩＩＮ工程に要する水は非常
に減少し、そして重要なことは廃棄を要する廃水がほと
んどもしくは全くないことである。別法として、所望の
場合残存瑞を含む全醗酵液を乾燥することができる。

これまで酵母培養物から単細胞タン白材利の連続的製造
方法は、一般には醗酵液１１につき約２０〜２５ｇの細
胞のような比較的低酵母細胞含量を有する醗酵流出液を
供した。しかし、本発明は醗酵液１ｊ！につき１００ｇ
以上のにうな比較的高レベルで酵母細胞を産生する醗酵
方法を供する。

酵母細胞の高収量と連結した醗酵液中のこのｊ：うな高
細胞密度は特に連続生産条件では一層有効、効率的生産
を意味する。

本発明はＰｉｃ、ｈｉａ　　ｐａｓｔｏｒｉｓ　　Ｎ　
ＲＲＩ　　Ｙ−１１４３０、Ｐｉｃｈｉａ　　ｐａｓｔ
ｏｒｉｓ　　ＮＲＲＩ　　Ｙ−１１４３１，１ｌａｎｓ
ｅｎｕｌａ　　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ　　Ｎ　ＲＲ１−
Ｙ−１１４，３２の酵母培養物およびその誘＞９物を供
し、炭素源が酸素化炭化水素の炭素である水性醗酵培地
にて好気培養した時、単細胞タン白の製造上特に有用で
ある。

本発明にＪ：れば、酵母は有効量の分子状酸素含有ガス
、同化性窒素源、栄養無機塩を使用し、必要の揚台、ビ
オチンやチアミンのようなビタミンなどのイ４加的栄養
有機物質を添加して、基質として適当な炭素エネルギー
源で実質的に連続好気水性醗酵条件下に生育させる。こ
の方法では、無機塩は後記するＪ：うに、高レベルで添
加でき、その結果高細胞密度で操作し、高１１■吊を得
るＷ！Ａ酵方法となる。高＊磨（比較的）無機塩をｗＪ
Ｍ液に添加して細胞にはと／υど強制的に供して高牛育
割含を１ｑる醗酵を行なうのに有用である。Ｆｇｌ酵液
白液自体澄液（すなわち細胞を除く醗酵液）中の無機塩
濃度は勿論比較的低レベルで残留する。それは塩が細胞
により生育および再生産に消費されるからである。従っ
て、１［１胞プラス上澄液中の塩濃度は非常に高い。

＃ｌ′！酊条骨 水性無Ｖｓ塩培地、炭素エネルギー源材料、分子状酸素
、同化性窒素、および勿論、使用田−る酵母の１種もし
くはそれ以上の特定種の出発接種月利より成る生育培地
で培養を行なう。

本発明方法では、高ｍ度の無機塩を醗酵液に供給でき、
高濃度は醗酵液に保持される。適当な微生物の生育を確
保するため、微生物変換方法において細胞による炭素お
よびエネルギー源の同化を最高にするため、そして醗酵
培地において最高の細胞密度で最高の細胞収量を達成す
るために、供給培地に一定割合の選択無機栄養素を適当
量、必要とする。

ｌ１ｉｌＩｌｉＩ液の組成は一部酵母および使用基質に
より広範囲に変化しうるが、本発明による醗酵液（すな
わち、液プラス細ＩＩり中の無機物金部は比較的高く、
これまで適当と考えられ、もしくは先行技術により実施
されたものより高レベルである。醗酵液中の各種要素の
最少の巾広いそして現在好ましい濃度範囲は以下の表に
示す。その濃度は要素のものとして表わすが、各々のす
べてもしくは一部は可溶性イオンの形で、もしくはＰの
ような場合にはリン酸塩のような結合形で存在しうるこ
とが認められる。各要素量は醗酵液（細胞を含む水↑１
相）１Ｊにつぎシもしくはｍｙで表ゎされる。

Ｐ　　　　１．９ｇ１．９〜２０９　　　２．２〜１（
Ｈ７に１　　ｇ　　　１　〜２ｏｇ１．５〜１０ｇＭｏ
　　　Ｏ，１５９０，１５〜３ｇ０．３〜１．２ｇＣａ
　　　０．０６　ｇ　　　０．０６〜１．６ｇＯ，０８
〜ｏ、ａｈＳ　　　０．１ｇＯ，１〜　ｅ、ｇ　　　ｏ
、２〜５９Ｆｅ６Ｉｌ１ｇ６〜１４ｏｒｎ９９〜８０ｍ
９７ｎ　　２　　ｔａ３　　２　〜１００ａ９３　〜４
０ｍｇＣＬＪ　　　０．６ｑ　　　０．６〜１６Ｉｎ９
１　〜１０ｍｇＭ　ｎ　　　ｏ、ｅＲ９０，６〜２ＣＨ
Ｄ９　０．９〜８ｍｌ硫黄は硫酸塩の形で使用すること
が望ましい。所要金属のいくつかは硫酸塩の形で添加す
ることが有利であるので、硫黄の最少温石は通常珀過す
る。

表示した任意の金属又はすべてはＶＡＮ塩どして使用し
もしくは含ませることができる。ＭＯ，Ｇａ。

Ｆｅ、Ｚｎ、ＣｕおよびＭｎは硫Ｍ塩もしくは塩化物の
形で、もしくはその場所で硫酸塩又は塩化物に変換する
化合物の形で使用するのがＪ：い。Ｋは硫酸塩、塩化物
、もしくはリン酸塩として、もしくはその場所で１ｉｉ
！！酸塩、塩化物もしくはリン酸塩に変換する化合物の
形で使用することが好ましい。Ｐはリン酸形又はリン酸
塩、たとえばカリもしくはアンモニウム塩のような１水
素リン酸塩もしくは２水素リン酸塩の形で、もしくはそ
の場所でこのような塩に変換する化合物として使用する
ことが好ましい。

少なくとも痕跡量で含ませることができる他の要素はた
とえばハロゲン化物もしくは硫酸塩のＮａおよびＣＯ；
たとえばモリブデン酸塩としてのＭＯ：たとえば硼酸塩
としてのＢ；たとえば亜セレン酸塩もしくはセレン酸塩
としてのＳｅ；又はたとえば沃化物としての１を含む。

代表的高細胞密度醗酵では、醗酵液は容量で約１／２上
澄培地および１／２ＩＴＩ胞から成る。しかし、これら
の１／２容量細胞は少なくとも約２７３の醗酵液の無機
塩含量を含む。

酵　母 　１１一 本発明方法は水性醗酵条件下で炭素含有基質に生育する
に適する酵母培養物を使用する。

本発明で使用する酵母は新規菌株 Ｐｉｃｈｉａ　　ｐａｓｔｏｒｉｓ　　ＮＲＲＩ　　Ｙ
−１１４３０、Ｐｉｃｈｉａ　　ｐａｓｔｏｒｉｓ　　
Ｎ　ＲＲＬ　　Ｙ−１１４３１およびＨａｎｓｅｎｕｌ
ａ　　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ　　Ｎ　ＲＲＬ　　Ｙ　−
１１４３２である。しかし、Ｃａｎｄｉｄａ　、　ｔｌ
ａｎｓｅｎｕｌａ　。

Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ、　Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ
　、　Ｐｉｃｈｉａ。

ＤｅｂａｒｙｏｍｙｃｅｓおよびＢｒｅｔｔａｎＯｍＶ
ＣｅＳ属由来の種を含む他のＭｌと併用することができ
る。好ましい属はＣａｎｄｉｄａ　、　　Ｈａｎｓｅｎ
ｕｌａ、　Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ、　Ｐｉｃｈｉａおよ
びｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓを含む。適当な種の例は
二Ｂｒｅｔｔａｒ４ｏｍｙｃｅｓ　ｐｃｔｒｏｐｈｉｌ
ｉｕｍ　　Ｐｉｃｈｉａ　ｆａｒｉｎｏｓａを含む。使
用特定酵母は一部使用する炭素含有基質による。その理
由は酵母が異るとしばしば＠善の生育をするためにいく
らか異る基質を要求することは周知であるからである。

たとえば、Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓのような上記
種の成る特定菌株はメタノールに生育しないことが認め
られる。

Ｐｉｃｈｉａ　　ｐａｓｔｏｒｉｓ　（力Ｊレチャー２
ｌ−２）ＮＲＲＬ　　Ｙ−１１４３１、Ｐｉｃｈｉａ　
　ｐａｓｔｏｒｉｓ（カルチャー２ｌ−１）ＮＲＲＬ　
　Ｙ−１１４３０、およびＨａｎｓｅｎｕｌａ　　ｐｏ
ｌｙｍｏｒｐｈａ　（カルチャー２ｌ−３）ＮＲＲＬ　
　’ｌ−１１４３２として寄託された特定菌株又はその
誘導菌株は高細胞密度で高収量を有するＳＣＰタンタン
料の製造に使用するのに特に適している。Ｐｉｃｈｉａ
　　ｐａｓｔｏｒｉｓ　（カルチャー２ｌ−２）ＮＲＲ
Ｌ　　Ｙ−１１１３１およびＰｉｃｈｉａ　　ｐａｓｔ
ｏｒｉｓ　（カルチャー２ｌ−１）ＮＲＲＬ　　ｌ−１
１４３０のこれら菌株の特徴はこれらの種に対し特に異
例と考えられる。何故ならば試験した４種のＰｉｃｈｉ
ａ　　ｐａｓｔＯｒｉｓ＠養物のうち、２種のみがとに
かくメタノール上に生育したからである。Ｐｉｃｈｉａ
　　ｐａｓｔｏｒ’ｓ　（カルチャー２ｌ−２）ＮＲＲ
Ｌ　　Ｙ−１１４３１、Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒ’３
　（カルチャー２１＝１）ＮＲＲＬ　　Ｙ−１１４３０
およびＩＩａｎＳｅｌｌｔｌｌａ　　ＤＯＩＶＩＩＩＯ
ｒｐｐ　（力）レチャー２ｌ−３）ＮＲＲＬ　　Ｙ−１
１４３２は新規且ユニークであると考えられる。

炭素エネルギー基質は酵ｆ１１基質として適する各種炭
水化物を含む酸素化炭化水素等を含む。特定酵母は各種
基質に対する好みで変わることが認められる。

水性醗酵条件に対し現在好ましい基質は炭素−酸素一水
索の高水溶性化合物である。「酸素化炭化水素」なる用
語は使用できる化合物を記載する本開示では総括的用語
を意味するもので、必ずしも基質源を意味する限定用語
ではない。本開示に対し、酸素化炭化水素は水溶性炭水
化物、ならびにこれらのアルコール、ケトン、エステル
、酸およびアルデヒド、および混合物を含み、それらは
１分子につき１〜２０炭素原子を有し一般的に有意に水
溶性のものである。一層適当な酸素化炭化水素は通例１
分子につき約１０個までの炭素原子を有覆る実質的によ
り大きい水溶性のものであるかもしくは一般的に水溶性
炭水化物である。

例示する炭水化物はグルコース、フラクトース、ガラク
ト−ス、ラクトース、シュクロース、澱粉、デキストリ
ンなどを単独もしくは混合物で含む。

酸素化炭化水素の他のタイプとしてはメタノール、エタ
ノール、エチレングリコール、プ［ｌピレングリコール
、１−プロパツール、２−プロパツール、グリセロール
、１−ブタノール、２−ブタノール、３−メチル−１−
ブタノール、１−ペンタノール、２−ヘキサナール、１
，７−ヘプタンジオール、１−オクタツール、２−デカ
ノール、１−へキサデカノール、１−エイコサノール、
アセトン、２−ブタノン、４−メチル−２−ペンタノン
、２−デカノン、３−ペンタデカノン、２−エイ］ザノ
ン、ホルムアルデヒド、アセトアルデヒド、プロピオン
アルデヒド、ブチルアルデヒド、ヘキサナール、７−メ
チルオクタナール、テトラデカナール、エイコサナール
、酢酸、プロピオン酸、醋酸、グルタール酸、５−メチ
ルヘキザン酸、アゼライン酸、ドデカン酸、エイコサノ
ン酸、蟻酸メチル、酢酸メチル、酢酸エチル、醋酸プロ
ピル、ヘキザノン酸イソプロピル、ヘキシル５−メチル
オクタナ−ル、ドデカノン酸オクチル等およびその混合
物を含む。

単細胞タン白の細胞から残存基質を除去することが時々
困難であるため余り好ましくはないが、本発明方法によ
り１分子につき１０〜２０個の炭素原子のようなノルマ
ルパラフィンを使用することもできる。酵母は一般に１
分子につき炭素原子１０個より少ないパラフィンを同化
しない。代表的にはこれらはデカン、ウンデカン、ドデ
カン、トリデカン、テトラデカン、ペンタデカン、ヘキ
サデカン、オクタデカン、■イコサン等およびその混合
物を含む。

炭素原子１〜４個の水溶性アルコール、炭素原子２〜４
個の水溶性酸および水溶性炭水化物が好ましい。水溶性
モノハイドリック脂肪族ハイドロカルビルアＪし］−ル
が好ましい。２−メチル−１一プロパツールは成る酵母
に対し田舎的であることはン１目すべきである。このよ
うな酵母による醗酵ではこのアルコールは避けるべきで
ある。炭素原子１〜４個のアルコール（２−メチル−１
−プロパツール以外の）が最も好ましい。これらのうち
メタノールおよびエタノールがその他のもの１ス上に好
ましい。そしてメタノールはこのような供給材料のうち
比較的低コストのため最も好ましい。

石油ガスは酸化することができる。そして各種のアルデ
ヒド、ケトン、酸などと共に相当するアルコールの優勢
混合物を供するために使用される、メタン、エタンなど
の酸化のような水溶竹材料、および同様に総合的精製・
化学処理］ンブレツクス、１１々ベトｎ］ンプレツクス
と呼ばれる内で製造された各種石油精製所源由来の適当
な炭化水素画分は醗酵の目的に使用することができる。

−ト澄液中の塩は比較的低濃度である。それは生育再生
産細胞による高摂取があるからである。細胞中の無磯塩
は、いくらかが結合有機形であるために供給、適用する
ことができない。勿論醗酵液の無機物の分析は全無機物
含量を反映するであろう。

無機塩の他にビタミン（有機生育因子）は当業者に公知
のように、選択した特定酵母の増殖にその存在が望まし
い場合には醗酵液に使用することができる。たとえば、
適当な増殖のために多くの酵母はビタミンのビオチンお
よびチアミンのうちの１種もしくは両者、もしくはこれ
らのビタミンを含む仙の培地成分、たとえば酵母エキス
の存在を必要とするらしい。従って、たとえば１１ａｎ
ｓｅｒＢ、ｕｌａ　　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａのような酵
母については水性ミネラル培地１１につき約０．０４〜
０．８ｍｇＦＢのビオ−チンおｊ；び水性ミネラル培地
１ｊ！につき約４〜８０ｍｇｆｆ１のチアミン塩酸塩を
使用することが望ましい。別法では、ビオチンおよびチ
アミンの全部もしくは一部は酵母エキスなどの使用によ
り供することができる。

水性好気醗酵方法において生育因子が添加される使用ミ
ネラル培地のｖｊＡ造において、ある国で精製処理Ｔ稈
による水に普通に遭遇するＪ：うな残留塩素量を含む水
の使用は、生育因子時（こビＡチンもしくはチアミンの
ようなビタミンを無効化する傾向があること、そしてこ
の上うなＦｉ１酵シフシステム残留塩素を含む水から製
造した水性ミネラル培地を使用覆る場合、生育因子の添
加前に塩素を除去すると生育因子のロスもしくは不活性
化を回避することが以前から分っていた。従って、残留
痕跡塩素を効果的に除去し、こうしてビタミンロスを避
けるように残留塩素含有水を処理する方法が開発された
。

これまで残留塩素の好ましくない量を含む水は、それに
も拘らずビタミンが水性栄養培地とは別の流れとして１
Ｉ１１酵帯に添加される場合、塩素によるビタミンの不
活性化を生ぜずにビタミンを使用するＩＩＩ酵方法で使
用できることが分った。従って、ミネラル栄養培地は痕
跡量の塩素を含む水を使用することができる。こうして
この手順は残留痕跡量の塩素を含む水の高価でおよび／
もしくは時間を消費する方法による前処理の必要を回避
する。

上記の醗酵帯へビタミンを別に添加することは、＝　２
０− 醗酵帯にこれらの材料を添加する前にビタミンを少なく
とも一部の好ましくは全部の炭素エネルギー基質の流れ
と混合することにより、好ましく、■有利に達成される
。ビタミンおよび炭素エネルギー基質の水性混合物が使
用される揚台、最初のビタミンの稀釈に使用する水は好
ましくはイオン除去水のような残留塩素の痕跡を含まぬ
ものであるべきで、メタノール水溶液のような水性炭素
基質と混合前にはどんな事前のロスをも避Ｉ−するべき
である。

所望の場合、そして好ましくは混合物は水およびメタノ
ールのような水溶性炭素基質たとえば約２０容吊％メタ
ノール水溶液から製造され、次にビタミンをメタノール
水溶液に溶解し、次に醗酵器に供給することができる。

この態様により、残留塩素は最初に除去する必要はない
が、尚ビタミンは完全に保存される。

一層好ましい態様では１１１ｇ酵帯へ０ビタミンの別の
添加はビタミン、上記の少なくとも一部の炭素エネルギ
ー基質および更に水性微量無機塩溶液を添加した混合物
を使用して達成される。微量無機塩はＣ０１Ｍ０１Ｂ、
Ｓｅ、Ｉ、Ｍｎ、Ｃｕ、７ｎおよびＦｅのような微量元
素どして上記したものより成る。この一層好ましい態様
の使用は水性無機塩培地に使用する水中の痕跡塩素によ
り生ずるビタミンの不活性化問題を避けるのみでなく、
醗酵方法でしばしば遭遇する別の問題をも回避する。こ
の問題はしばしば清浄化を要する水性無機塩培地を処理
するために使う加熱殺菌帯における沈澱物の形成である
。最初の無機栄養塩と通例混合する微量無機塩の存在は
加熱殺菌帯における厄介な沈澱の形成を明らかに促進す
る。従って、水性無機塩培地流に微量無機塩を含ませず
、しかしむしろその代りに微量無機塩をビタミンおよび
少なくとも一部の炭素エネルギー基質と混合して入れる
ことにより、２つの非常に厄介な問題を解決する。上記
のように微量無機塩、少なくとも一部の炭素エネルギー
基質およびビタミンの混合物を製造するために使用する
水は好ましくは残留痕跡塩素を含むべきではない。

ビタミン、一部の炭素エネルギー基質および微量ミネラ
ルにり成る流れは必要な場合濾過により無菌にすること
ができる。しかし、醗酵帯に入れる前にその流れと主な
炭素エネルギー基質とを組み合せ、醗酵帯に入れる直前
に全体の組み合せた流れを濾過することは好ましく、有
利である。

醗酵自体は分子状酸素を必要とする好気性方法であり、
それは空気、酸素の多い空気のような分子状酸素含有ガ
ス又は実質的に純粋な分子状酸素により供給され、増殖
様式で微生物の生長を助けるの、に有効な酸素分圧によ
り醗酵液を維持する。

酸素化炭化水素基質を使用することにより、微生物の生
育上の全酸素要求量は、パラフィンを使用する場合より
少ない。そうであっても、適当量の分子状酸素は生育の
ため供給しなければならない。

何故ならば基質の同化および微生物の相当する生育はい
く分かは燃焼過程であるからである。

分子状酸素を＃１ｇ酵液１供給づ゛る割合は、酵母の生
育が酸素の不足により制限されないようにすべきである
。醗酵槽のデザインは培養物に酸素を移送する能力を広
く変化させる。全体の通気割合はかなりの節回で変える
ことができるが、酸素移送に非常に効果的な醗酵槽では
、通気は一般に１分間当り醗酵槽中の液体容量について
分子状酸素含有ガス容量（使用圧および２５℃で）で約
０．５〜８、好ましくは約１〜６の割合で行なわれる。

この吊は反応器に供給される通常の酸素含量の空気およ
び純粋の分子状酸素に基づき、それぞれの範囲は１分間
当り醗酵槽内の液体容量について分子状酸素の容量（使
用圧おにび２５℃で）で約０．１〜１．７、もしくは好
ましくは約０．２〜１．３であろう。

微生物醗酵工程に使用する圧は広く変えることができる
。代表的圧は装置および運転コスト対達成される酸素溶
解度のバランスとして、約Ｏ〜１５０１１ＳｉＯ１好ま
しくは約ｏ〜６０ｐＳｉＯ１更に好ましくは少なくとも
大気圧より僅かに高いものである。大気圧より高い圧は
水性醗酵液において溶存酸素ａ度を増加させる傾向があ
ることで有利である。それは次に細胞の生育割合の増大
を助けることができる。同時に高圧は装置おｊ；び運転
コス！〜を増加させるという事実により相殺される。

醗酵温度はいくらか変えることができるが、一般に約２
５〜６５℃、好ましくは約２８〜５０℃である。ＮＲＲ
Ｌ　　Ｙ−１１４３１として寄託されたｐｔｃｈｔａ　
　Ｉ）ａｓｔｏｒｉｓ　　カルチャー２１−２おにびＮ
ＲＲｉ　　Ｙ−１１４３０，！＝して寄託されたＰｉｃ
ｈｉａ　　ｐａｓｔｏｒｉｓ　　カルチャー２１−１の
酵母培養物は一般に約３０℃の醗酵液温度を好む。

ＮＲＲＬ　　Ｙ−１１４３２として寄託された１ｌａｎ
ｓｅｎｕｌａ　　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ　　カルチャー
２１−３は約３８〜４０℃の醗酵温度を好むらしい。

酵母は同化性窒素源を必要とする。同化可能な窒素は酵
母の代謝利用に適する形の任意の窒素含有化合物もしく
は窒素を遊離できる化合物により供給することができる
。タン白加水分解物のにうな各種の有機窒素源化合物は
技術的に使用することができるが、通例はアンモニア、
水酸化アンモニウム、尿素のような安価な窒素含有化合
物およびリン酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、ピロ
〜　２５− リン酸アンモニウムおよび塩化アンモニウムのような各
種アンモニウム塩を使用することができる。

アンモニアガス自体は大規模操作には右利であり、適当
量で水性微生物醗酵液を泡立て使用することができる。

同時にこのようなアンモニアは０１１調整に役立つ。

水性微生物醗酵液のｐｉｌｌ囲は約３〜７、好ましくは
そして通例は約３．５〜５．５の範囲であるべきである
。ｐｌ＋範囲に対する成る種の微生物の好みは成る程度
まで使用培地により、および特定微生物による。従って
培地を変えていくらが変えることができ、当業者により
容易に決定できる。

醗酵槽内の醗酵液の平均保持時間は一部は醗酵温度およ
び使用酵母培養物によりかなり変えることができる。一
般に保持時間は平均保持を規準として約２〜３０時間、
好ましくは約４〜１４時間である。

高濃度の既述のいくつかの炭素およびエネルギー基質、
特にメタノール、もしくはホルムアルデヒドなどは満足
すべき微生物の生育に阻害的であり又は醗Ｍｗｌ生物に
有毒でさえある。従って、比較的高濃度の基質は避ける
べきであり、一般には最大の許容できるレベルでｍＷ液
の基質温度を維持することが望ましい。ある低級アルコ
ールについては、！ｌｌｌｌ中のこのレベルは一般に約
０．００１〜５容量％、好ましくは約０．０１〜０．０
５容量％であり、一方アルデヒドについては、餓死、も
しくは選択した微生物の生育割合を阻害しないように、
アルデヒドの毒性の点からこれらの１／１０であるべき
である。

炭素およびエネルギー源材料が微生物に対し有害可能量
のアルデヒドを含む場合、有害アルデヒド作用は基質を
適当量の窒素含有化合物、好ましくはアンモニア、水酸
化アンモニウム、もしくは伯の活性アンモウム化合物で
、アルデヒド１モルにつきこのような窒素含有化合物を
約０．０１〜１０モル当量の比率で最初に処理すること
により軽減することができる。次にこのような処理基質
は炭素エネルギー源のみだけでなく、少なくとも一部の
必要な同化可能な窒素を含む。

炭素含有基質は限定因子として調整することができ、そ
れによって炭素含有基質を酵母細胞に十分に変換させ、
実質量の未変換基質による酵母細胞の可能な汚染を避け
るような方法でｆｉｌ′Ｍを行なうのがよい。後者は水
溶性基質による問題ではない。何故ならいかなる残留痕
跡も容易に洗い出されるからである。しかし、適当な溶
媒洗滌Ｔ稈による残存炭化水素除去などの添加生成物処
理■程を必要とする、高級ｎ−パラフィンの如き非水溶
性基質の場合には問題がある。

連続運転は調整の容易さ、均−聞の均一生成物の製造お
よびすべての装置の最も経演的使用のため非常に好まし
い。連続方法では、基質として炭素およびエネルギー源
材料、水性ミネラル培地、同化可能な窒素源および分子
状酵素含有ガスは醗酵液の連続的回収と組み合せて醗酵
槽のＩ酢液に連続的に添加される。添加炭素エネルギー
基質：添加水性ミネラル培地の容量比は、一部は炭素含
有基質の性質により広節回に変化しうるが、一般には約
に〇〜６：４の範囲、好ましくは約２二８〜５：５の節
回である。

必要の場合、すべての炭素エネルギー源材料の一部分お
よび／もしくはアンモニアのような同化可能な窒素源の
一部分は、ＭＮ槽に水性ミネラル培地を通す前に水性ミ
ネラル培地に添加することができる。高細胞密度Ｆｉｌ
ｌ酵の本方法において約４０容量％アル］−ル対６０容
量％無機塩培地の供給比率の使用がもつとも有利であっ
た。

反応器に導入される名流れは所定の割合で、もしくは炭
素およびエネルギー基質濃度、ＤＨ１溶存酸素、醗酵槽
から排出されるガス中の酸素もしくは炭酸ガス、光透過
により測定できるＩＩＩ胞密度などを監視して測定でき
る要求に応じて調整される。

各種材料の供給割合は炭素およびエネルギー源の効率的
利用と一致させ、できるだけ早い細胞生育速度を得るよ
うに、添加基質に対する酵母細胞の収量をできるだけ高
く得るように変えることができる。本発明方法により、
酵母ＩＩＩＩ胞は、一部は使用する特定基質により、添
加基質１００ｇにつき約３０〜１１０ｇの収量で得るこ
とができる。

すべての装置、反応器、もしくは醗酵要素、容器、配管
、付属の循環もしくは冷却装置などは、通例は約２５０
°Ｆ（１２１℃）で少なくとも約１５分間のような蒸気
を使用して殺菌することが最も好ましい。殺菌した反応
器は分子状酸素おＪ：び炭素含有基質を含むすべての所
要栄養素の存在下に特定微生物の培養物を接種させる。

使用ｍ酊槽のタイプは、泡を満たした醗酵槽における操
作が好ましいが、本発明の醗酵方法の実施においては重
要ではない。生成泡の促進および保持するために考案さ
れたＷＪ酵槽は必要な高細胞密度および急速生育速度を
維持するために必要な酸素移送を増大させる方法には有
利である。

醗酵の出発において、水性ミネラル培地、適当な濃度の
炭素源、同化可能な窒素、必要の場合微量成分および酵
母の出発接種材料を殺菌した醗酵槽に入れ、酸素および
各種供給物の適当な流れを徐々に開始させる。必要の場
合、初めの醗酵基質はグルコースなどで、ｉｎ密度が高
まると共に徐徐にメタノールなどに変えることができる
。水性醗酵液においては低無機塩レベルで開始し、無機
塩の高ｍ度を有する水性ミネラル培地をＰＩＪ酵液酢液
給することにより高無機塩レベルに増強することができ
る。しかし、通常は単に初めに醸酵槽に高温培地を添加
し直ちに操作を開始する。当業者は接種材料が塩および
使用基質の完全な投入に対し、十分な細胞を形成する前
に出発後通例短かい遅延時間が生ずることは理解するで
あろう。

生成物の回収 本発明の高細胞密度方法により生産した酵母細胞は遠心
分離又は濾過のような常法により醗酵混合物流出液から
回収することができる。所望の場合、細胞外生成物は常
法により実質的に細胞を含まぬ残留上澄液から回収する
ことができる。実質的にｌ１ｌｌ胞を含まぬ流出部は、
たとえばアセトン又は低級アルコール（メタノールもし
くはエタノール）で処理し、ａｍ外に生産された任意の
高分子物質を沈澱させることができる。細胞を含まぬ流
出物は溶媒抽出および／もしくは塩基抽出ににり処理し
、所望の場合培養工程中に産生じた色素、、ビタミン、
又は有ｌ！酸のような他の細胞外生成物を回収すること
ができる。このような付随的処理をするか又はせずに、
細胞を含まぬ流出液は、水性成分の一部として、もしく
は水性成分の実質的もしくはほとんど全部として醗酵槽
に戻し、できる限り廃棄物問題を回避することができる
。

微生物細胞は通例加熱もしくは化学的手段により殺し、
これは醗酵流出物から細胞を分離する前後に行なうこと
ができる。酵母細胞は人間や動物にとって貴重なタン０
源である。人の消費に対し、必要に応じて細胞を処理し
て核酸を減少させることができるが、動物飼料目的に対
してはこのような処理は現在必要とは思われない。

本発明によれば、高細胞密度たとえば醗酵混合物１１１
につき乾燥規準で酵母細胞を約６０〜１６０ｇ、望まし
くは約７０〜１５０ｇの範囲内の細胞密度の操作を使用
して高収量を得ることができる。所望の場合、細胞は遠
心分離又は他の分離方法によりＩｌ′ｆｓ混合物から回
収することができる。

また、所望の場合、次に濃縮細胞を例えば水と混合して
洗滌しそして再遠心分離などにより分離し、もしくは遠
心分離前もしくは中に水を添加して、実質的にミネラル
培地のｍ胞をＴｉ離することができ、次に分離ミネラル
培地を含む洗滌液は水およびミネラル培地として醸酵槽
に戻し、こうして廃棄物問題を実質的に減少もしくは回
避することができる。次に回収細胞は単に乾燥し将来使
用のための乾燥生成物を製造することができる。所望の
場合、高Ｉ！Ｉｌ胞密度醗酵流出物は全体を乾燥して、
乾燥細胞および塩を含む残留水溶性物質の全乾燥生成物
を製造し、そしてこの全乾燥生成物は高タン白高塩性の
きわめて有用な動物飼料として使用することができる。

以下に本発明による方法を使用する試験を記載する。特
定量の材料、特定タイプの使用供給原料、酵母の特定種
もしくは菌株は例として考えるべきで、本発明の限定例
として考えるべきではない。

Ｊ 連続的好気醗酵方法条件下で行った試験では、それぞれ
３０．１５対６９．８５の容量比のメタノールおよび水
性無機塩培地をＮＲＲＬ　　Ｙ−１１４３１として寄託
したＮ母Ｐｉｃｈｉａ　　１ａｉ胆ｒ＋ｓカルチャー２
１−２を接種した醗酵槽に個々に供給した。前調整培地
もしくは基質は全く使用しなかった。醗酵槽は２１液容
の４１ｍＷｆＭで、ｐｌ＋、温度およびレベルの自動調
整付きであった。攪拌は１０００〜１２００ｒｐＩＩｌ
で回転する２Ｗで行なった。通気透電は十分な酸素を有
し供給空気を１分につき醗酵容積当り１〜１．５容（お
よそ大気圧および２５℃で）であり、大気圧および約３
０℃で空気を飽和した醗酵混合物に溶解するであろうそ
の約２０％石に等しい溶存酸素量を醗酵混合物に維持さ
せた。水性水酸化アンモニウム（Ｉｍ水酸化アンモニウ
ム２部およびイオン除去水１部）を１１酵混合物のｐＨ
を約３．５にＮ持するような割合で添加した。

使用した水性無機塩培地は１ｊ！溶液に対し、１２．５
Ｉｌｉ！の８５％　Ｈ３ＰＯ４，２，５ＳＦの８５％　
Ｋ　ＯＨ１８，５σ　ＫＣＪ２．７．０ｇＩｖｌｏＳ０
４−７Ｈ，，０，１，５ｇ　ＣａＣｊ！２−２　Ｈ２０
１２５ｍｅの微量ミネラル溶液Ａ、２５ｍｆ！の微量ミ
ネラル溶液Ｂ、１０１１１ｉ！のビオチンーヂアミン塩
酸塩溶液、約０．０８−の消泡剤（ｔ（ａｚｕＤＦ−３
７℃）、および十分なイオン除去水を混合して１（の溶
液を製造した。

微量ミネラル溶液Δは１ｐ溶液に対し、４．８９のＦｅ
Ｃｊ！　−６１−１２０，２，０ｇのＺｎ５Ｏ−７１−
１２０，０，０２９のｌ」３Ｂ０３、０．２０ｇのＮａ
　　ＭｏＯ−２Ｈ，，０゜０．３０９のＭｎＳＯ４’−
１−（２０，０，０８ｇのＫＴ、０．０６ｇのＣｕ５Ｏ
−５１−１２０，３ｄの１ｌｆｌ　ｌ−Ｉ　　８０４お
よび十分なイオン除去水を混合して１１の溶液を製造し
た。

微量ミネラル溶液Ｂは１ｐ溶液に対し、２．０ｇ　Ｆｅ
Ｃ１・６Ｈ２０，２，０ｇの ７ｎＳ０　・７Ｈ２０１０，３ｇのＭｎＳＯ４・１−１
２０，０．６９のＣｕＳＯ４・５１−１２０．２　ｍ（
１の濃１」２ＳＯ４、および十分なイオン除去水を混合
して１１の溶液を製造した。

ビオチン−チアミン塩酸塩溶液は２埒のビオチン、２０
０■のヂアミン塩酸塩および５０ＩｎＱのイオン除去水
を混合して製造した。

１１Ｅ！酵は約３０℃おＪ：びおよそ大気圧で、７．０
時間の保持時間で行なった。

酵母細胞は遠心分断によりｆｌｕ酵流川流出液分断し、
水サスペンションで洗滌し、再遠心分離し、１００℃で
一夜乾燥し、そして秤量した。乾燥規準で酵母細胞は供
給メタノール１００ｇにつき４２．３９の収量で産生し
た。細胞密度は流出液１ｊ！につき細胞１００．７ｇの
高レベルであった。

■ 別の醗酵試験を、水性無機塩培地の組成をいくらか変え
、メタノール対水性無機塩培地の容量比を４０．８対５
９．２とし、ｐｌ＋調整用水性水酸化アンモニウムを濃
水酸化アンモニウム３部およびイオン除去水１部により
調製し、そしてｆｆ１ｌ’Ｗ保持時間を８．３５時間と
したことを除いて、実質的に例■記載の方法を使用し行
なった。

この試験で使用する水性無機塩培地は、１１溶液に対し
、２０．０ｓｔｅの８５％ト１３ＰＯ４、４、（１（７
）８５％ＫＯＨ，１２，０ｇのＫＣｌ、１０．４ｇのＭ
ｏｎｏ　　−７Ｈ２０，２，４ｇのＣａＣ，ｉ！　　”
　２Ｈ２０、例■記載の微量ミネラル溶液△４０ｄ１４
０ｄ載の微量ミネラル溶液Ｂ４０＃１１２、例■記載の
ビオチン−チアミン塩酸塩溶液１６ｄ、約０．０８ｄの
消泡剤、および１１の溶液にするのに十分なイオン除去
水を混合して製造した。

Ｎ母細胞を醗酵流出液から分離し、洗滌し、そして例■
のように乾燥した。乾燥規準で、酵母細胞は供給メタノ
ール１００ｇにつき４１．４ｇの収量で産生じた。細胞
密度は流出液１ｊ！につき１３３．３９のきわめて望ま
しい高レベルであった。

■ 連続的好気ＷＪＷを、今回はＮＲＲＬ　　Ｙ−１１４３
２として寄託したｆ３　母ｔｌａｎｓｅｎｕｌａｐｏｌ
ｙｍｏｒｐｈａカルチャー２１−３を接種し、例工記載
のように醗酵槽中で行なった。醗酵槽に全溶液１Ｊ！に
つき３００Ｉｄメタノールを含むメタノールおよび水性
無ＩＮ塩培地混合物を供給した。攪拌醗酵混合物は、十
分な酸素を有し供給空気を１分につき醗酵容量当り２容
（およそ大気圧おにび約２５℃で）を醗酵槽に通すこと
によって通気し、醗酵混合物内に、大気圧および約３８
℃で空気を飽和した醗酵混合物に溶解するであろうその
約２０％に等しい溶存酸素量を維持させた。

水性水酸化アンモニウム（２部の濃水酸化アンモニウム
および１部のイオン除去水）をＩＮ！ｆ混合物のｐＨを
３．７〜４．１に維持する割合で添加した。

メタノールおよび水性無機塩培地の混合物は、溶液１１
に対し３００ｄのメタノール、６ｄの８５％　Ｈ３ＰＯ
４，３ｇのＫＣｌ、４．５９のＭｏｎｏ４−７Ｈ２０，
０，６ｇのＣａＣｌ２・２Ｈ，Ｏ，０，３９のＮａＣ１
，１０ｄの例■記載の微量ミネラル溶液Ａ、１０ｄ！の
例■記載の微量ミネラル溶液Ｂ、４ｄの例■記載のビオ
チン−チアミン塩酸塩溶液、４滴の消泡剤および１Ｊ！
溶液にするのに十分なイオン除去水を混合して製造した
。

醗酵は約３８℃および約大気圧で、５．６６時間の保持
時間により行なった。

酵母細胞はＷＪ醇原流出液ら分離し、洗滌しそして例■
のように乾燥した。乾燥規準で、酵母細胞は供給メタノ
ール１００ｇにつき３１．０ｇの収量で産生じた。細胞
密度は流出液１１につき７３．３ｇの細胞であった。

例ＩＶ 連続的好気醗酵方法において、それぞれ３６．９対６３
．１の容量比でメタノールおよび水性ミネラル培地を、
ＮＲＲＬ　　’ｌ−１１４３０として寄託したＶｆ母ｐ
ｔｃｈ＋ａ　　ｐａｓｔｏｒｔｓ　　カルチャー２１−
１を接種した醗酵槽に個々に供給した。

醗酵槽は約６００１の液体容量、１）１１、温度、レベ
ルの自動調整および通風管を備えた１　５００１の泡を
満たした醗酵槽であった。攪拌は通風管の下部の、７５
０　ｒａｍで駆動するタービンににり行なった。通気速
度は１分につきｌＩ！１Ｍ槽内の１１１１酵液容量当り
約１．６容の空気（約３８　ｐｓｉｇおよび約２５℃で
）であった。無水アンモニアを醗酵混合物のｐＨを約３
．５に紺持する割合で添加した。

最初の水性無機塩培地は、溶液１ｊ！に対し１２．２ｍ
の７５％　ｌ−Ｉ　　ＰＯ４，６，０ｇのＫＣｌ６．（
ｌのＭｏＳＯ４・７１−１２０゜０．８ｇのＣａＣ！　
　−２１−１２０，２，０ｇＵ）Ｂ５％ＫＯＨ，２，０
戒の微量ミネラル溶液Ｃ１０，８−のビオヂンーチアミ
ン塩Ｆｊ！塩溶液および溶液１１にするのに十分な飲料
水（飲料水は最初に十分なチオ硫酸ソーダで処理し、そ
こに含まれる遊離塩素と反応させる）を混合して製造し
た。

微量ミネラル溶液Ｃは、溶液１．１！に対し６５ｇのＦ
ｅＣｊ！　　・６Ｈ２０，１８ｇのｚｎｓｏ４”７日２
０．５．０ｇのＭｎＳＯ４”　１１２０゜６．０ｇのＣ
ＬＪ　Ｓ　Ｏ４・５１−１２０，２．０ｍｆ！の瀧１−
１　３０４および溶液１１にするのに十分なイＡン除去
水を混合して製造した。

ビオヂンーチアミン塩酸塩溶液は０．４ｇビオヂン対７
ＩＯｇチアミン塩酸塩の割合で１１のイオン除去水に成
分を混合して製造した。

醗酵は３０℃おにび３８　ｐｓ＋ａ圧で、１２．７時間
の保持時間により行なった。

酵母１飽は醗酵流出物から遠心分離により分離し、水ザ
スペンジョンで洗滌し、再遠心分離し、１００℃で一夜
乾燥し、そして秤量した。乾燥規準で［１細胞は供給メ
タノール１００ｇにつき３７ｇの収量で産生じた。細胞
密度は流出物１ｊ２につききわめて望ましい１１０．３
ｇの細胞であった。

例Ｖ 連続的好気醗酵方法において、それぞれ４０対６０の容
量比でメタノールおよび水性無機塩培地を、ＮＲＲＬ　
　Ｙ−１１４３０として寄託した酵１１Ｐｉｃｈｉａ　
　ｐａｓｔｏｒｉｓ　　カルチャー２１−１を接種した
醗酵槽に個々に供給した。醗酵槽は約６１０１の液体容
量、ｐＨ、温度およびレベルの自動調整を有する１　５
００１の泡を満たした醗酵槽であった。攪拌は１０００
　ｒｐｍで駆動する２個の通例のパドル−タイプタービ
ンにより行なった。通気速度は１分につきＩＩ酵槽内の
醗酵液１部当り約４部の空気（約３８　ｏｓ：ｏおよび
約２５℃で）であった。

無水アンモニアを醗酵混合物のｌ）Ｈを約３．５に頼持
する割合で添加した。

水性無機塩培地は、飲料水１１に対し、１５．８６１ｄ
の７５％　Ｈ３ＰＯ４，９，５３ｇのＫ　　Ｓｏ　　、
７．８ｇのＭ（ＪＳＯ４・７１−１２０゜０．６ｇのＣ
ａＣｊ！　−２１−１２０，および２．６９の８５％Ｋ
ＯＩ−１を混合して製造した。微量ミネラル溶液プラス
ビオチンはメタノール１ｊ！につぎ１０−の割合でメタ
ノール流を経て別々に供給した。微量ミネラル溶液プラ
スビオチンは７８０ｄの微量ミネラル溶液１’）、２０
ｍの水、２００ｍｆ！のメタノールおよび０．０３２ｇ
のビオチンを混合して製造した。

微量ミネラル溶液りは、溶液１１に対し、６５９のＦｅ
５０　−７Ｈ０１２０ｇの、７ｎＳＯ４−７１−１２０
，３，０’ｉのＭｎＳＯ４”　ｌ−１２０゜６、Ｏｇの
ＣｕＳ０　・５■２０．５．０−の濃硫酸および溶液１
１を作るのに十分なイオン除去水を混合して製造した。

水性無機塩培地は１時間につき３１．５１の割合で、メ
タノールは１時間につき２１１０割合で供給した。

１！［は３０℃および約３８　ｐｓｉｏ圧で、１１．６
時間の保持時間により行なった。

分析目的のために、酵母細胞を１１１１１１流出物から
遠心分離により分離し、水性サスペンションで洗滌し、
再遠心分離し、１００℃で一夜乾燥しそして秤量した。

乾燥規準で酵母細胞は供給メタノール１００ｇにつき４
０．６ｇの収量で産生じた。

細胞密度は流出物１ｊ！につききわめて望ましい１２８
．４９の細胞であった。醗酵液（醗酵槽がらの流出物）
の総置形含量は１１につき１３４．７９　（細胞プラス
溶解固形物）であった。

醗酵槽からの流出液は酵母を殺すために殺菌機を通し、
それ以上の濃縮もしくは処理することなく直接噴霧乾燥
機に供給した。

護Ｍ 連続的好気醗酵方法において、それぞれ２９対７１の容
量化でメタノールおよび水性無機塩培地を、酵母１１ａ
ｎｓｅｎｕｌａ　　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ　　Ｎ　ＲＲ
Ｉ　　Ｙ−１１１７０を接種した醸酵槽に個々に供給し
た。

醗酵槽は約５６０ｊ！の液体容量、Ｉ）１１、温度およ
びレベルの自動調整、および通気管を備えた１５００１
の泡を満たした醗酵槽であった。攪拌は通気管下部の、
８１０　ｐｐｍで駆動するタービンにより行なった。通
気速度は１分につき醗酵槽内の醗酵液１部当り約５部の
空気（約３８　ｐｓｉｏ＃３．Ｊ：び約２５℃で）であ
った。無水アンモニアを醗酵混合物のＤＨを約３．５に
維持する割合で添加した。

水性無機塩溶液は１０．３８ｄの７５％Ｈ３ＰＯ４，４
，２９ｓｌ）ＫＣｊ！、６．４４９のＭＧＳＯ４−７Ｈ
２０，０，８６ｇ（７）Ｃａｃｌ、。

−２ＨＯｌｏ、４３ｇ（７）ＮａＣＪ！、３．０Ｉｄ（
７）微量ミネラル溶液ｃ１および飲料水（飲料水は最初
に十分なチオ硫酸ソーダで処理し、そこに含まれる遊離
塩素と反応させる）１０００ｄ中のビオチン−チアミン
塩酸塩溶液０．６４ｄを混合して製造した。

醗酵は３９〜４０℃および３８　ｐｓｉｏ圧で、７．６
時間の保持時間により行なった。

分析のために酵母細胞はｒａｍ流出液から遠心分離にに
り分離し、水サスペンションで洗滌し、再遠心分離し１
００℃で一夜乾燥し、そして秤量した。乾燥規準で、酵
母細胞は供給メタノール１００ｇにつき３３．３９の収
量で産生した。細胞密度は流出液１１につき望ましい７
６．２９の細胞であった。

急速生育および高生産性の能力を有する酵母の発見は明
らかに有利である。

本発明は非常に望ましくＩｈ用性を有する３種のきわめ
て独特の酵母培養物、すなわちＮＲＲＬＹ−１１４３１
として寄託したＰｉｃｈｉａ　　ｐａｓｔｏｒｉｓ（カ
ルチャー２ｌ−２）、ＮＲＲＬ　　ｌ−１１４３０とし
て寄託したＰｉｃｈｉａ　　ｐａｓｔｏｒｉｓ　（カル
チャー２ｌ−１）、およびＮＲＲＩ　　’＋”−１１４
３２として寄託した１ｌａｎｓｅｎｕｌａ　　ｐｏｌｖ
ｍｏｒｐｈａ　（カルチャー２ｌ−３）を供する。これ
らの独特な培養物は高無機塩レベルおよび細胞密度で特
に良く生育する。

これらの３種の独特の酵母培養物は酸素を飽和させた炭
化水素、特に低級アルコール、もっとも好ましくはメタ
ノールもしくはエタノール上に高生産性で効果的に生育
する。これは新規Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉ３に関し
特に注目すべきである。何故なら種目ｃｈｉａ　　ｐａ
ｓｔｏｒｉｓのいくつかの培養物はメタノールに簡単に
生育しないからである。これらの独特の種は次のように
命名される： カルチャー名　　　本発明菌株　　寄託番号名　　称 Ｐｉｃｈｉａ　　ｐａｓｔｏｒｉｓ　　　　　２１−２
　　ＮＲＲＬ　Ｙ−１１４３１Ｐｉｃｈｉａ　　ｐａｓ
ｔｏｒｉｓ　　　　　２１−Ｉ　　ＨＲＲＬ　Ｙ−１１
４３０１１ａｎｓｅｎｕｌａ　Ｐｏｌｖｍｏｒｐｈａ　
２１−３　ＮＲＲＬ　Ｙ−１１４３２ＮＲＲＬ　Ｙ−１
１４３１、ＮＲＲＬ　Ｙ−１１４３０およびＮＲＲＬ　
　ｌ−１１４３２は新規酵母カルチャーを公式保管者、
１ｌｎｉｔｅｄ　ｓｔａｔｅｓＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ　
　ｏｆ　　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ、　　Ａｇｒｉｃｔ
目ｔｕｒａ＋Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　５ｅｒｖｉｃｅ、　Ｎ
ｏｒｔｈｅｒｎ　Ｒｅｇｉｏｎａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、　Ｐｅｏｒｉａ、　ｌ１ｌｉｎ
ｏｉｓ　６１６０４に各２個の傾斜寒天カルチャーを寄
託することにより出願人らが寄託し、そして保管者から
示すような個々にＮ　ＲＲＬ菌株番号を受けた。従って
、これらの寄託からもしくは寄託をなした出願人のカル
チャーからのカルチャー試料は出願人の発見した種に由
来する菌株を供する。

本発明は水性好気培養条件下で微生物の３種の新規カル
チャーもしくは菌株に属する酸素飽和炭化水素−同化性
微生物細胞の一面における培養方法を供する。これらの
菌株を分類した：Ｐｉｃｈｉａ　ｐａｓｔｏｒｉｓ カルチ八７−２ｌ−１ ＮＲＲＬ　　Ｙ−１１４３０ 部　　　門　　　　　　　　　　Ａｓｃｏｍｙｔ　ｉ　
ｎａ綱　　　　　　　　　　　　　　Ｉｔｅｍ　ｉ　ａ
ｓｃｏｍｙｃｅｔｅｓ目　　　　　　　　　　　　　　
　　　Ｅｎ（ｌｏｌＩＩＶｃｅｔａｌｅｓ利　　　　　
　　　　　　　　　　Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｔａｃ
ｅａｅ属　　　　　　　　　　　　Ｐｔｃｈｉａ新規且
独特の微生物は更に以下の表に示すＰｉｃｈｉａ　ｐａ
ｓｔＯｒｉｓ カルチャーの性質　　　　　カルチャー２１−１もしく
は試験結果＠　　　　ＮＲＲＬ　　’ｒ’−１１４３０
グラム　染色　　　　　　　　　　　十胞子の形成　　
　　　　　　　　　　十好気性　　　　　　　　　　　
　　　十凡その大きさ、μ　　　　　３〜５ 至適湿（資）１℃　　　　　　　３０ 至適　ｐＨ３，５〜５．５ 生育因子　　　　　　　　　ビオチン −４８＝ 即ｕ工回」厖Σｔｌａｎｓｅｎｔ山ρＯケ！！！！２卵
カルヂ＼７−２１−２　　　　　　　　　カルヂャー２
ｌ−３Ｈｒ３バ１−Ｙ−１１４３”Ｌ　　　　　ＮＲＲ
Ｉ−Ｙ−１１４，３２＾ＳＣＯｍｙｔｉｎａ　　　　　
　　　　　　　　　ＡＳＣＯｍＶｔｉｎａｌｌｅＩＩｌ
ｉ　ａｓｃｏｍｙｃｅｔｅｓ　　　　　　　　　　　１
Ｉｅｎ＋　ｉａｓｃｏｍｙｃｅｔｅｓＥｎｄｏｍｙｃｅ
ｔａｌｅｓ　　　　　　　　　　　　Ｅｎｄｏｍｙｃｅ
ｔａｌｅｓＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｔａｃｅａｅ　　
　　　　　　　Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｔａｃｅａｅ
Ｐｉｃｈｉａ　　　　　　　　　　　　　　　　１ｌａ
ｎｓｅｎｕｌａにうな性質で特徴づけることができる：
ＰＩＣｈｉａｌ）ａＳｔＯ「ｌ５ｌｌａｎｓｅｎｕｌａ
　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａカルチャー２１−２　　　　　
　　　カルヂャー２ｌ−３ＮＲＲＬ　　Ｙ１１４３１　
　　　　　ＮＲＲＬ　　Ｙ−１”１４３２＋　　　　　
　　　　　　　　　　　　＋＋　　　　　　　　　　　
　　　　　　＋＋　　　　　　　　　　　　　　　　　
＋３〜５　　　　　　　　　　　　　　３〜５３０　　
　　　　　　　　　　　　　３８〜４０３．５〜５．５
　　　　　　　　　　　３．５〜５．５ビオチン　　　
　　　　　　　　　　ビオチンおよびチアミン細胞の外
観　　　　　　　　　　　　　　コロニーは帽子形の胞
子のく麦芽エキス寒天）　　　　　　　　　　形成と共
に澗黄褐色に変るコロニーの外観　　　　　　　　　　
　　クリーム色、偽菌糸なしくＹＭ寒天） 塾の何化 グルコース　　　　　　　　　　　　　　　　　　＋ガ
ラク１〜−ス　　　　　　　　　　　　　　　　Ｗ／１
−１−−ゾルボース　　　　　　　　　　　　　　　　
−マルト−ス　　　　　　　　　　　　　　　　　−シ
ュクロース　　　　　　　　　　　　　　　　　−廿ロ
ビＡ−ス　　　　　　　　　　　　　　　　　−トリム
［１−ス　　　　　　　　　　　　　　　　　　−ラフ
１〜−ス　　　　　　　　　　　　　　　　　　−メリ
ビオース　　　　　　　　　　　　　　　　　−ラフィ
ノース　　　　　　　　　　　　　　　　　−メレヂト
ース　　　　　　　　　　　　　　　　−イヌリン　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　−可溶ｔ！ｌ澱粉
　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｗ／ｌ−キシロー
ス　　　　　　　　　　　　　　　　　　−１−−アラ
ビノース　　　　　　　　　　　　　　　−［〕−アラ
ビノース　　　　　　　　　　　　　　　−［）−リボ
ース　　　　　　　　　　　　　　　　−１−−ラムノ
ース　　　　　　　　　　　　　　　　−■チルアル］
−ル　　　　　　　　　　　　　　　＋メチルアルコー
ル　　　　　　　　　　　　　　　」−フオ−−ム（Ｆ
ｏｒｍ）　　　　　　　　　フオーム（Ｆｏｒｍ）帽子
形胞子　　　　　　　　　　　帽子形の胞子クリーム色
、偽菌糸なし　　　　　クリーム色、偽菌糸なし」−十 十　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　十＋
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　」〜＝
　４９− （つづき） グリセロール　　　　　　　　　　　　　　　＋■チリ
１ヘール　　　　　　　　　　　　　　　　−アドニト
ール　　　　　　　　　　　　　　　　　−ズルシ１−
−ル　　　　　　　　　　　　　　　　　−マンニトー
ル　　　　　　　　　　　　　　　　　−ソルビ１−−
ル　　　　　　　　　　　　　　　　＋メヂルーＤ−グ
ルコシド　　　　　　　　　　　　ト（Ｊ゛リシン　　
　　　　　　　　　　　　　　　　−イノシトール　　
　　　　　　　　　　　　　　御粘の醗酵 グルコース　　　　　　　　　　　　　　　　　　＋ガ
ラクトース　　　　　　　　　　　　　　　　　−シュ
クロース　　　　　　　　　　　　　　　　　−ラクト
ース　　　　　　　　　　　　　　　　　　　−マルト
ース　　　　　　　　　　　　　　　　　　−ラフイノ
ース　　　　　　　　　　　　　　　　　−トレハロー
ス　　　　　　　　　　　　　　　　　　−硝酸塩同化
　　　　　　　　　　　　　　　　　　−ウレアーゼ活
性　　　　　　　　　　　　　　　　−アルブチン分解
　　　　　　　　　　　　　　　　−偽菌糸もしくは菌
糸形成 ］−ンミール上に　　　　　　　　　　　　　　　−酵
母寒天−トに　　　　　　　　　　　　　　　　　　−
ＤＮＡのグアニン＋シトシン含量　　　　　　　４０％
＋。

―酔 Ｗ／ｌ　。

（２）。

＋　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　＋陽性 陰性 潜在的弱い反応 １直が示され行い場合は、測定せず 勿論すべての微生物のように、特徴のうちあるものは培
地および特別の条件によりいくらか変化を受けることが
できる。

例に示した培地処方は本発明の新規酵母種を培養するた
めに使用することができる。しかし、それらはメタノー
ル含有基質以外にも生育するであろう。これらの新規酵
母培養物は本明細書に記載の高温培地について使用でき
るのみでなく次のような培地を使用する通例の醗酵条件
で使用することもできる： Ｋ　トＩ　　２　　ＰＯ４５，Ｏｇ Ｍ（ＪＳｏ　　・７１−１２０　　　　０．５ｇＣａＣ
１−２目２０　　　　０．１９ ＫＣｊ２　　　　　　　　　　　０．５Ｓ？（Ｎ１−１
４）２Ｓ０４　　　　　３．０ｇビオチン　　　　　　
　　　　０．０４１１ｒ９チアミン　　　　　　　　　
　４．０ｍ９微量ミネラル溶液＠　　　　　２．５ｄ水
　　　　　　　　　　　　　　　　　　ｉ、　　ｏｏｏ
献殺菌メタノールυ　０．５〜１．０容１％（０下記の
処方参照 （ハ）　使用直前に添加 微量金属溶液 成　　分　　　　　　　　　　　　　　　量ＣｕＳＯ４
・５Ｈ，、ＯＯ’、０６ｇ ＫＩ　　　　　　　Ｏ，０８ｇ Ｍｎ５Ｏ４−Ｈ２Ｏ０，３ｇ Ｎａ２　ＭｏＯ２−２１−１２００，２ｇ１−１３ＢＯ
３０，０２ｇ ＺｎＳＯ４−７Ｈ２０２，（Ｉ ＦｅＣｊ！　　−６１−１２０４，８ｙ魚油水　　　　
　　　　　　１．０ＯＯＩＲｆ！１−＋２８０４０１ｉ
ｔり　　　　　　　　３ｄ資料を含む本開示は本発明の
価値および効果を例示する。

Claims (11)

【特許請求の範囲】
1. （１）単細胞タン白材料の製造方法において、￥ピキア
   ￥　￥パストリス￥　ＮＲＲＬ　Ｙ−１１４３０、￥ピ
   キア￥　￥パストリス￥　ＮＲＲＬ　Ｙ−１１４３１も
   しくは￥ハンセヌラ￥　￥ポリモルファ￥　ＮＲＲＬＹ
   −１１４３２として命名され、もしくは由来する酵母微
   生物菌株を炭素およびエネルギー基質として酸素飽和炭
   化水素を使用する水性培地で好気醗酵条件下に培養する
   ことを特徴とする、上記製造方法。
2. （２）単細胞タン白材料としてその培養培地からそのよ
   うに製造したその微生物細胞を分離し、回収する工程よ
   り成る、特許請求の範囲第１項記載の方法。
3. （３）酸素飽和炭化水素炭素およびエネルギー基質は１
   種もしくはそれ以上の実質的に水溶性アルコール、ケト
   ン、エステル、エーテル、酸もしくは１分子につき約１
   ０炭素原子までのアルデヒドより成る、特許請求の範囲
   第１項又は第２項記載の方法。
4. （４）炭素およびエネルギー基質は水溶性脂肪族モノハ
   イドリック、ハイドロカルビル　アルコールより成る、
   特許請求の範囲第３項記載の方法。
5. （５）アルコールは１分子につき１〜４炭素原子を含む
   、特許請求の範囲第４項記載の方法。
6. （６）アルコールはメタノールである、特許請求の範囲
   第５項記載の方法。
7. （７）Ｐｉｃｈｉａ　ｐａｓｔｏｒｉｓ　ＮＲＲＬ　Ｙ
   −１１４３０（ＦＲＩ受理番号５６８２）、Ｐｉｃｈｉ
   ａｐａｓｔｏｒｉｓ　ＮＲＲＬ　Ｙ−１１４３１（ＦＲ
   Ｉ受理番号５６８３）又はＨａｎｓｅｎｕｌａ　ｐｏｌ
   ｙｍｏｒｐｈａＮＲＲＬ　Ｙ−１１４３２（ＦＲＩ受理
   番号５６８４）として寄託された酵母の特長を有しおよ
   び／又はその酵母から誘導された、生物学的に純粋な酵
   母培養物。
8. （８）同化可能量の、酸素化炭化水素化合物の形で実質
   的に供される炭素、窒素、有機生長因子および無機栄養
   体を含有する水性栄養培地にて、好気性醗酵により回収
   可能量のＳＣＰを生成し得る、特許請求の範囲第７項記
   載の生物学的に純粋な培養物。
9. （９）長期間の対数期なしでメタノールの代謝能を有し
   かつ収量のロスなしで高細胞密度にメタノール生育能を
   有するＰｉｃｈｉａ　ｐａｓｔｏｒｉｓ（ＮＲＲＬＹ−
   １１４３０）。
10. （１０）メタノールに高細胞密度で生育させるために、
    ビオチン要求性を有するＰｉｃｈｉａ　ｐａｓｔｏｒｉ
    ｓ（ＮＲＲＬ　Ｙ−１１４３１）。
11. （１１）メタノールに高細胞密度で生育させるために、
    ビオチンとチアミンの要求性を有する Ｈａｎｓｅｎｕ１ａ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ（ＮＲＲＬ
    　Ｙ−１１４３２）。