JPS62201574A - 家禽用インフルエンザワクチン - Google Patents
家禽用インフルエンザワクチンInfo
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Landscapes
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野コ
この発明は、新規な家禽用インフルエンザワクチン（不
活化ワクチン）に関する。
活化ワクチン）に関する。
［発明の背景］
家禽のインフルエンザウィルスによる感染はきわめて激
しく、感染家禽のほとんど１００％が死亡し、伝染性も
極めて激烈である。このインフルエンザは昔から家禽ベ
ストとして非常に恐れられており、現在家禽の法定伝染
病に指定されている。
しく、感染家禽のほとんど１００％が死亡し、伝染性も
極めて激烈である。このインフルエンザは昔から家禽ベ
ストとして非常に恐れられており、現在家禽の法定伝染
病に指定されている。
諸外国では、七面鳥を中心とする家禽インフルエンザの
発生が毎年報告されており、特に、１９８３年４月から
アメリカ合衆国ペンシルバニア州の養鶏場を中心に大流
行したインフルエンザは養鶏家に大きな被害を与えた。
発生が毎年報告されており、特に、１９８３年４月から
アメリカ合衆国ペンシルバニア州の養鶏場を中心に大流
行したインフルエンザは養鶏家に大きな被害を与えた。
［発明が解決しようとする問題点］
我が国に於いては、幸いここ数ＩＯ年間、インフルエン
ザウィルスに基づく家禽病の大流行は報告されていない
。しかしながら、最近のウィルス学の発達により、家禽
インフルエンザの多くはカモ類を中心とする渡り鳥によ
って感染することが判明した為、渡り鳥が多数飛来する
我が国に於いては、かかる家禽インフルエンザに対する
警戒をおろそかにすることは許されない。事実、我が国
で捕獲された渡り鳥が種々の抗原型のインフルエンザウ
イルスを保有していることが、本発明者らの研究によっ
て確認されている［アクタ・バイオレット（Ａｃｔａ
ｖｉｒｏｌ、 ）２８ ：５２４．１９８４］。
ザウィルスに基づく家禽病の大流行は報告されていない
。しかしながら、最近のウィルス学の発達により、家禽
インフルエンザの多くはカモ類を中心とする渡り鳥によ
って感染することが判明した為、渡り鳥が多数飛来する
我が国に於いては、かかる家禽インフルエンザに対する
警戒をおろそかにすることは許されない。事実、我が国
で捕獲された渡り鳥が種々の抗原型のインフルエンザウ
イルスを保有していることが、本発明者らの研究によっ
て確認されている［アクタ・バイオレット（Ａｃｔａ
ｖｉｒｏｌ、 ）２８ ：５２４．１９８４］。
かかるインフルエンザウィルスの一種であって、英国で
既に分離されている８ ７Ｎ ７抗原型インフルエンザ
ウイルスに基づく家禽病が、将来養鶏場を中心に流行す
る可能性があるが、現在までのところこのウィルスに対
するワクチンの製造に成功したという報告は全くない。
既に分離されている８ ７Ｎ ７抗原型インフルエンザ
ウイルスに基づく家禽病が、将来養鶏場を中心に流行す
る可能性があるが、現在までのところこのウィルスに対
するワクチンの製造に成功したという報告は全くない。
従って、）（７Ｎ ７抗原型ウイルスに対するワクチン
の開発は、当業界に多大の貢献をなすものと期待されて
いる。
の開発は、当業界に多大の貢献をなすものと期待されて
いる。
［問題点を解決するための手段］
本発明者らは、我が国に飛来する渡り鳥から、インフル
エンザウィルストｈＮ７株を分離することに成功した［
Ｚｂｌ、 Ｂａｋｔ、 ｘ−ｔｙｇ、、 Ｉ 、 Ａ
ｂｔ。
エンザウィルストｈＮ７株を分離することに成功した［
Ｚｂｌ、 Ｂａｋｔ、 ｘ−ｔｙｇ、、 Ｉ 、 Ａ
ｂｔ。
Ｏｒｉｇ、 Ｂ上７３，４９４−５００．１９８１゜Ａ
ｖｉａｎ Ｄ １ｓｅａｓｅｓ、旦（２）、３ ［４
−３２０゜１９８２］（このＨｑ Ｎ ７株は、広島市
南区宇品神田町１−５９０在、広島系衛生研究所ウィル
ス研究室武井直己氏に分譲されている。分譲日：昭和６
１年２月２１日）。このウィルスＨ’ｒ Ｎ ７株のヒ
ナに対する感受性は古典的な家禽のインフルエンザウィ
ルスＨ７Ｎ ７株とは全く異なる。
ｖｉａｎ Ｄ １ｓｅａｓｅｓ、旦（２）、３ ［４
−３２０゜１９８２］（このＨｑ Ｎ ７株は、広島市
南区宇品神田町１−５９０在、広島系衛生研究所ウィル
ス研究室武井直己氏に分譲されている。分譲日：昭和６
１年２月２１日）。このウィルスＨ’ｒ Ｎ ７株のヒ
ナに対する感受性は古典的な家禽のインフルエンザウィ
ルスＨ７Ｎ ７株とは全く異なる。
本発明者らは、このウィルスＨ？ Ｎ ７株を培養し、
その培養液に不活化剤を添加してウィルスを不活化し、
次いで遠心してその上清を分離することによって不活化
ワクチンを製造したところ、この不活化ワクチンは接種
後約２〜３日目で家禽の免疫活性を高めること、および
その免疫活性は長く体内で持続することを確認し、かか
る不活化ワクチンは家禽のインフルエンザ感染を予防す
るのに極めて有用であることを見い出した。
その培養液に不活化剤を添加してウィルスを不活化し、
次いで遠心してその上清を分離することによって不活化
ワクチンを製造したところ、この不活化ワクチンは接種
後約２〜３日目で家禽の免疫活性を高めること、および
その免疫活性は長く体内で持続することを確認し、かか
る不活化ワクチンは家禽のインフルエンザ感染を予防す
るのに極めて有用であることを見い出した。
即ち、本発明は、不活化されたインフルエンザウィルス
Ｈ７Ｎ７株培養液の遠心上清を有効成分とする家禽用イ
ンフルエンザワクチンを提供するものである。
Ｈ７Ｎ７株培養液の遠心上清を有効成分とする家禽用イ
ンフルエンザワクチンを提供するものである。
本発明に係るインフルエンザ不活化ワクチンの製造法を
以下に詳述する。
以下に詳述する。
インフルエンザウィルスＨ？ Ｎ ７株の分離採取した
新鮮なコハクチョウの糞を大量の抗生物質（ペニシリン
：８，０ＯＯＵ／ｍｅおよびストレ。
新鮮なコハクチョウの糞を大量の抗生物質（ペニシリン
：８，０ＯＯＵ／ｍｅおよびストレ。
ブトマイシン：８，０００μｇ／ｍＱ）を含む燐酸緩衝
液（ｐＨ７，２）に混じて乳剤を調製し、この乳剤をｌ
Ｏ日日の発育鶏卵に接種する。３３℃で３日間インキュ
ベートした後漿尿液を採取し、鶏卵血球の凝集性を調べ
ることによりウィルス分離の有無を判定する。角界直球
凝集性を存する漿尿液を３゜０００回転で約３０分間遠
心して残渣を除くと、上清からウィルス８７Ｎ ”ｒ株
（Ａ／コハクチョウ／島根／４２／８０株）が得られる
。
液（ｐＨ７，２）に混じて乳剤を調製し、この乳剤をｌ
Ｏ日日の発育鶏卵に接種する。３３℃で３日間インキュ
ベートした後漿尿液を採取し、鶏卵血球の凝集性を調べ
ることによりウィルス分離の有無を判定する。角界直球
凝集性を存する漿尿液を３゜０００回転で約３０分間遠
心して残渣を除くと、上清からウィルス８７Ｎ ”ｒ株
（Ａ／コハクチョウ／島根／４２／８０株）が得られる
。
不活化ワクチンの製造
分離したウィルスＨ？ Ｎ ７株を岬卵の漿尿腔または
培養細胞に接種し、３０〜４０℃（好ましくは３４〜３
９℃）で増殖させ、漿尿液（卵黄を除きさえずれば、胎
児と漿尿液の混液でもよい）または培養細胞による増殖
液に不活化剤を添加して不活化する。ここで使用する培
養細胞としては、鶏、コハクチョウ、ウズラ、ハト、七
面鳥などの細胞が挙げられるが、これらに限定されるも
のではない。不活化剤としては、ホルマリン、石炭酸、
マーゾニン、マーゾニンと石炭酸との混合液、またはク
リスタルバイオレットなどを使用するのが好ましい。
培養細胞に接種し、３０〜４０℃（好ましくは３４〜３
９℃）で増殖させ、漿尿液（卵黄を除きさえずれば、胎
児と漿尿液の混液でもよい）または培養細胞による増殖
液に不活化剤を添加して不活化する。ここで使用する培
養細胞としては、鶏、コハクチョウ、ウズラ、ハト、七
面鳥などの細胞が挙げられるが、これらに限定されるも
のではない。不活化剤としては、ホルマリン、石炭酸、
マーゾニン、マーゾニンと石炭酸との混合液、またはク
リスタルバイオレットなどを使用するのが好ましい。
不活化増殖液から遠心により褥卵の残液または細胞を除
くと、上清（遠心上清という）に目的とする不活化ワク
チンが得られる。通常、この様にして得られた不活化ワ
クチンに、免疫活性を増強させるために水酸化アルミニ
ウムゲル、燐酸アルミニウムゲル、燐酸カルシウムゲル
または明ばんなどのアジュバントを加える。アジュバン
トの量は適当量でよく、ワクチン１００容量中に１〜９
５容量入っていればよい。本明細書に於いて「不活化ワ
クチン」とは、この様なアジュバントを含むもの、およ
び含まないもの、の両者を意味するものとする。
くと、上清（遠心上清という）に目的とする不活化ワク
チンが得られる。通常、この様にして得られた不活化ワ
クチンに、免疫活性を増強させるために水酸化アルミニ
ウムゲル、燐酸アルミニウムゲル、燐酸カルシウムゲル
または明ばんなどのアジュバントを加える。アジュバン
トの量は適当量でよく、ワクチン１００容量中に１〜９
５容量入っていればよい。本明細書に於いて「不活化ワ
クチン」とは、この様なアジュバントを含むもの、およ
び含まないもの、の両者を意味するものとする。
本発明の不活化ワクチンは、雑菌の繁殖を抑制するため
の防腐剤を含んでいてもよい。好ましい防腐剤としては
、マーゾニン、タイロシン、安息香酸、ホルマリン、サ
リチル酸、クリスタルバイオレット、ベンゼトニウムク
ロライドなどの界面活性剤、ポリミキシンまたはグラミ
シジンなどが挙げられる。
の防腐剤を含んでいてもよい。好ましい防腐剤としては
、マーゾニン、タイロシン、安息香酸、ホルマリン、サ
リチル酸、クリスタルバイオレット、ベンゼトニウムク
ロライドなどの界面活性剤、ポリミキシンまたはグラミ
シジンなどが挙げられる。
以上、インフルエンザウィルスＩ”１７Ｎ ７株を培養
して得られる家禽用インフルエンザワクチンの製造法に
ついて説明したが、Ｈ”ｒ Ｎ ’ｒ株と共通の抗原を
有するインフルエンザウィルス株を使用しても、同様の
不活化ワクチンを得ることができる。従って、本発明は
、Ｈ７Ｎ ’ｒ株という特定のウィルスの培養上清から
得られる不活化ワクチンに限定されるものではなく、Ｈ
７Ｎ ７株と共通の抗原を有するインフルエンザウィル
スから得られるものをも包含するものと解釈されねばな
らない。
して得られる家禽用インフルエンザワクチンの製造法に
ついて説明したが、Ｈ”ｒ Ｎ ’ｒ株と共通の抗原を
有するインフルエンザウィルス株を使用しても、同様の
不活化ワクチンを得ることができる。従って、本発明は
、Ｈ７Ｎ ’ｒ株という特定のウィルスの培養上清から
得られる不活化ワクチンに限定されるものではなく、Ｈ
７Ｎ ７株と共通の抗原を有するインフルエンザウィル
スから得られるものをも包含するものと解釈されねばな
らない。
本発明に係る不活化ワクチンは単独で、あるいは他のワ
クチンと混合した混合ワクチンの形で、鶏、七面鳥、ア
ヒル、ウズラなどのあらゆる家禽類に使用することがで
きる。投与法に特に制限はなく、筋肉的注射、皮下注射
または皮内注射のいずれであってもよい。投与量は家禽
１羽当り０．１〜１．０ｍ１２とするのが好ましい。
クチンと混合した混合ワクチンの形で、鶏、七面鳥、ア
ヒル、ウズラなどのあらゆる家禽類に使用することがで
きる。投与法に特に制限はなく、筋肉的注射、皮下注射
または皮内注射のいずれであってもよい。投与量は家禽
１羽当り０．１〜１．０ｍ１２とするのが好ましい。
以下に実施例および試験例を挙げ、本発明を更に詳細に
説明する。
説明する。
［実施例コ
ウィルスＨ７Ｎ ７株約１０３ＥＩＤｓ。を９〜１１日
目の酢卵の漿尿腔に接種し、３３℃の卿卵器で約３日間
増殖させた。貯卵の漿尿液を取り出し、この漿尿液に０
．０５％の濃度になるようにホルマリンを添加し、４℃
で７日間放置した。この漿尿液を３．Ｑ ＯＯ回転で約
３０分間遠心し、胛卵の残渣を除いてＨ？ Ｎ ７上清
を得、以下の不活化ワクチンを調製した。
目の酢卵の漿尿腔に接種し、３３℃の卿卵器で約３日間
増殖させた。貯卵の漿尿液を取り出し、この漿尿液に０
．０５％の濃度になるようにホルマリンを添加し、４℃
で７日間放置した。この漿尿液を３．Ｑ ＯＯ回転で約
３０分間遠心し、胛卵の残渣を除いてＨ？ Ｎ ７上清
を得、以下の不活化ワクチンを調製した。
１）４％不活化ワクチン
上記の方法で得たＨ ’ｒ Ｎ ’ｒ上清（ウィルスＨ
７Ｎ７株約１０＠〜１０’ＥＩＤｓｏ／ｍ１２）４．０
容量と水酸化アルミニウムゲル５０容量を混合し、その
混合液に滅菌燐酸緩衝食塩水４６容量を加えた。
７Ｎ７株約１０＠〜１０’ＥＩＤｓｏ／ｍ１２）４．０
容量と水酸化アルミニウムゲル５０容量を混合し、その
混合液に滅菌燐酸緩衝食塩水４６容量を加えた。
２）７．５％不活化ワクチン
上記のＨ？ Ｎ ？上清７．５容量と水酸化アルミニウ
ムゲル５０容量を混合し、その混合液に滅菌燐酸緩衝食
塩水４２．５容量を加えた。
ムゲル５０容量を混合し、その混合液に滅菌燐酸緩衝食
塩水４２．５容量を加えた。
３）７．５％不活化ワクチン
上記のＨ７Ｎ Ｔ上清７．５容量と燐酸アルミニウムゲ
ル５０容量を混合し、その混合液に滅菌燐酸緩衝食塩水
４２．５容量を加えた。
ル５０容量を混合し、その混合液に滅菌燐酸緩衝食塩水
４２．５容量を加えた。
４）１０％不活化ワクチン
上記のＨ７Ｎ７上清ｌＯ容量と水酸化アルミニウムゲル
５０容量を混合し、その混合液に滅菌燐酸緩衝食塩水４
０容量を加えた。
５０容量を混合し、その混合液に滅菌燐酸緩衝食塩水４
０容量を加えた。
これらの不活化ワクチンを８〜９週令の鶏のヒナに筋肉
内接種し、インフルエンザに対する免疫活性を判定した
。免疫活性の判定は、Ｉ−１１抗体価（赤血球凝集抑制
）の測定により行なった。
内接種し、インフルエンザに対する免疫活性を判定した
。免疫活性の判定は、Ｉ−１１抗体価（赤血球凝集抑制
）の測定により行なった。
Ｈ１抗体価の測定法
マイクロプレート（１２ｘ８穴）に燐酸緩衝液０゜０２
５ｄを分注した後、抗血清を加えて２倍段階希釈の抗血
清希釈列を作った。次いで、燐酸緩衝液で赤血球凝集抗
体が４ＨＡ単位含まれるように調製したウィルス液を０
．０２５ｍ１Ｊずつ加えた。
５ｄを分注した後、抗血清を加えて２倍段階希釈の抗血
清希釈列を作った。次いで、燐酸緩衝液で赤血球凝集抗
体が４ＨＡ単位含まれるように調製したウィルス液を０
．０２５ｍ１Ｊずつ加えた。
十分にマイクロプレートを振盪させた後、室温に１時間
静置した。次に０．５％鶏赤血球浮遊液を０．０５ｍｅ
加え、振盪後、室温に１時間静置して判定した。赤血球
凝集を抑制した抗血清の最大希釈倍数の逆数に４を乗じ
た数値をＩ（Ｉ抗体価とした。
静置した。次に０．５％鶏赤血球浮遊液を０．０５ｍｅ
加え、振盪後、室温に１時間静置して判定した。赤血球
凝集を抑制した抗血清の最大希釈倍数の逆数に４を乗じ
た数値をＩ（Ｉ抗体価とした。
実験結果
前記の不活化ワクチンについてＨＩ抗体価を測定した。
水酸化アルミニウムゲルを用いて製造した７、５％不活
化ワクチンを鶏のヒナに投与した時に産生されるＨＩ抗
体価（１群の幾何平均値）を下表１に示す。この表から
、本発明の不活化ワクチンが家禽のインフルエンザの予
防に有効であることがわかる。
化ワクチンを鶏のヒナに投与した時に産生されるＨＩ抗
体価（１群の幾何平均値）を下表１に示す。この表から
、本発明の不活化ワクチンが家禽のインフルエンザの予
防に有効であることがわかる。
（）の数字は４ＨＡウイルスを阻止する血清の希釈倍数
を示す。
を示す。
Claims (3)
- （１）インフルエンザウイルスＨ＿７Ｎ＿７株またはそ
のウイルス株と共通の抗原を有するインフルエンザウイ
ルス株を不活化した不活化ウイルス。 - （２）インフルエンザウイルスＨ＿７Ｎ＿７株またはそ
のウイルス株と共通の抗原を有するインフルエンザウイ
ルス株を不活化することを特徴とする不活化ウイルスの
製造法。 - （３）インフルエンザウイルスＨ＿７Ｎ＿７株またはそ
のウイルス株と共通の抗原を有するインフルエンザウイ
ルス株を不活化した不活化ウイルスを有効成分とする家
禽用インフルエンザワクチン。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4382586A JPS62201574A (ja) | 1986-02-27 | 1986-02-27 | 家禽用インフルエンザワクチン |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4382586A JPS62201574A (ja) | 1986-02-27 | 1986-02-27 | 家禽用インフルエンザワクチン |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62201574A true JPS62201574A (ja) | 1987-09-05 |
Family
ID=12674526
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4382586A Pending JPS62201574A (ja) | 1986-02-27 | 1986-02-27 | 家禽用インフルエンザワクチン |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS62201574A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AT407958B (de) * | 1999-02-11 | 2001-07-25 | Immuno Ag | Inaktivierte influenza-virus-vakzine zur nasalen oder oralen applikation |
| WO2007132763A1 (ja) * | 2006-05-11 | 2007-11-22 | Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | インフルエンザウイルスの増殖方法 |
-
1986
- 1986-02-27 JP JP4382586A patent/JPS62201574A/ja active Pending
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| AVIAN DISEASES=1982 * |
| ZBL.BART.HYG.,I.ABT.ORIG.B=1981 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AT407958B (de) * | 1999-02-11 | 2001-07-25 | Immuno Ag | Inaktivierte influenza-virus-vakzine zur nasalen oder oralen applikation |
| WO2007132763A1 (ja) * | 2006-05-11 | 2007-11-22 | Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | インフルエンザウイルスの増殖方法 |
| US7883844B2 (en) | 2006-05-11 | 2011-02-08 | Juridical Foundation The Chemosero-Therapeutic Research Institute | Method for propagating influenza virus |
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