JPS6212847A - 酵素／電極式中センサー - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、性質改善のために処理された膜、膜を処理す
る方法、処理された膜を有する酵素−電極式センサー、
及び処理された膜を有する酵素−電極式センサーを用い
ての分析方法に関する。

酵素電極は、医学及びその他の研究で、殊に血液及びそ
の他の生体液の試料類中のグルコース及び尿素のような
分析のために、次第に多く用いられつつある。そのよう
な電極は、多（の刊行物、特にクラーク（Ｃ１ａｒｋ）
及びリオンズ（Ｌｙｏｎｓ）の論文（「アンナルス・オ
ブ・ザ・ニュウヨーク・アカデミイ・オブ・サイエンス
」１０２巻、２９〜４５頁、１９６２年）、クラークの
米国特許第３５３９４５５号及びニュウマンの米国特許
第３９７９２７４号明細書に記載されている。自体では
電気化学的に活性ではないが、酵素電極によって容易に
検出されうる物質種を生じる物質を分析するために酵素
電極は普通使用される。酵素電極において酵素は、下張
り電極と密接した重合体膜上に配置されることが多い。

酵素電極πおいて使用するための膜の性質を改善するた
めに莫大な研究が実施されてきており、この目的のため
に多（膜が発生されてきている。

しばしば用いられるタイプの膜の一例は、ニュウマンに
よって米国特許第３９７９２７４号明細書に開示された
積層膜である。この膜は、酵素信号を妨害するおそれが
ある丁度低い分子量の物質の通過を防ぎうる実質的に均
質な材料、例えば酢酸セルロースの第１（すなわち内側
）層；酵素自体（これとブレンドされうるその他の材料
を加えまたは加えてない）の密着層；及び細胞及びコロ
イド状エレメントの通過を防ぎうる多孔性支持フィルム
の第２の層（この場合には外側層）；からなる。

グルコースの測定は、酵素電極による物質の測定の例と
見ることができる。グルコースオキシダーゼ酵素の存在
下で下記の反応が起こる。

グルコースオキシダーゼ グルコース＋０゜　　　　　　　　　グルコン酸＋Ｈ２
Ｏ２この反応で生成される過酸化水素は、米国特許第３
９７９２７４号明細書に記載される膜の如き膜の支持フ
ィルムを透過し、これは電極を使用して測定されうる。

生成される過酸化水素は試料中に存在するグルコースに
依存するので、グルコース濃度は適切にキャリプレー／
コンしたセンサーを用いて測定できる。

今日まで多数の困難により、酵素電極の利用が制限され
てきており、また例えば血液サンプルの日常的分析にお
ける酵素電極の使用規模が限定されている。これらの困
難（問題点）のうちの二つは下記の通りである。

１、生体液中の成分が（殊に血液中の成分が）膜の細孔
を閉塞し、または膜の透過性表面を被覆し、かくして膜
の有効寿命を短縮されるという傾向。

２６　　酵素触媒反応のための基質であるグルコ−スま
たは乳酸塩のような被分析物への電極の応答の直線性（
線型性）に限度があること。その応答は被分析物の限ら
れた範囲の低濃度にわたってのみ直線状（線型）である
ので、測定されるべき物質の濃度は低くなければならず
、従って普通は極めて稀釈されたサンプルを、酵素電極
使用分析のための試料に用いなければならない。研究室
外での日常的分析のために稀釈サンプルを作ることは必
ずしも実用的であり、また生体内モニターのためには不
可能である。

本発明によれば、１枚またはそれ以上の重合体物質の層
からなり、そのうちの少なくとも１枚の層が、反応性基
を有するオルガノシラン化合物を含む媒質で処理された
ものであることを特徴とする液体及び溶質透過性膜ｂ：
提供される。

また本発明によれば、液体及び溶質透過性であり、かつ
１枚またはそれ以上の重合体物質の層からなる膜を処理
する方法であって、反応性基を有するオルガノンラン化
合物を含む媒質を膜中の少なくとも１枚の層に適用する
ことを特徴とする上記処理方法が提供される。

また本発明によれば、液体及び溶質透過性膜を含む酵素
／電極式センサーであって： ｆａｔ　　該膜ｂ″−ビ）酵素と、１枚またはそれ以上
の重合体物質層とからなり、（ロ）また該センサーによ
って検出されうる物質へ、該酵素の存在下で、変化しう
る被分析物を含む試料と接触されうる外側層を有するこ
と、 （ｂ）（イ）該外側層及び／または（ロ）該外側層と酵
素との間にある別の層が１反応性基を有するオルガノシ
ラン化合物を含む媒質によって処理されたものであるこ
と。

を特徴とする上記センサーが提供される。

さらに本発明によれば、試料中の被分析物を分析する方
法であって： （１）（イ）液体及び溶質を透過させることができ、か
つ、（ロ）酵素及び１枚またはそれ以上の重合体物質層
からなる膜であり、該酵素が、その存在により、被分析
物を、その膜を含むセンサーによって検出されうる物質
に変えつるようなものである膜、の外側層に試料を接触
させ。

（１１）該物質へのセンサーの応答を測定することから
なり： かつ（イ）該外側層、及び／または（ロ）該外側層と酵
素との間の別の層ｂ″−１反応性基を有するオルガノシ
ラン化合物を含む媒質で処理されたものであることを特
徴とする上記分析方法が提供される。

本発明の膜の主用途は、酵素／電極タイプのセンサーに
ある。しかしこの膜は、液体及び／または溶質透過性膜
が必要とされる場合におけるその他の用途、殊に医学的
用途がある。本発明の膜のその他の医学的用途の例とし
ては、透析膜としての用途、移植に用いられる膜または
電池をカプセル化するのに用いられる膜としての用途が
ある。

本発明の膜はいずれのタイプσ）酵素／電極センサーに
おいても使用できる。かかる膜は、最も単純な形態にお
いては、酵素含有層と重合体物質から形成された層とか
ら構成される。この単純な形態の膜において重合体層は
外側層であり、本発明の被分析物分析方法において試料
に接触に接触される。

しかし、本発明の膜は、＠層膜であるのｂ″−好ましく
、米国特許第３９７９２７４号明細書に記載されたタイ
プのものは、その−例である。そのような膜は、酵素含
有層と電極との間に配置された第１（すなわち内側）層
；酵素含有層；及び酵素含有層の他の面上の重合体の第
２層；からなり、その第２層ｂ″−普通、シラン化合物
で処理される層である。

この明細書では、以下に説明する本発明のセンサーは、
積層膜を含むものであり、それは米国特許第３９７９２
７４号明細書に記載のタイプの膜であり、その−例は第
１の層と、シラン化合物で処理された第２の層とを有す
るものである。

本発明の膜は二層より多くの重合体物質の層を含みうろ
ことは了解されるべきである。例えば第２の層は必ずし
も膜の最外層ではなく、さらに１枚またはそれ以上の重
合体物質の層、すなわち第３、第４等の層ｔＪ″−１第
２の層（すなわち限定透過性膜）と試料との間になるよ
うにしてもよい。膜が第３及び／または第４の重合体層
を含む場合には、シラン化合物で処理されるのは必ずし
も最外層ではない。その場合、処理されるのは、内側の
、例えば第２の層であることもある。しかじなり；ら多
くの場合に第２の層は多側層であり、その外面ｂ−シラ
ン化合物で処理され、そして試料と接することとなろう
。本発明の膜は、着脱可能な膜として、あるいは使い捨
て式センサーに着けた膜の形で使用することもできる。

適当なセンサーで使用される材料としては、貴金属及び
／または炭素がある。

本発明の処理方法において使用するシラン化合物は、分
子中に１個またはそれ以上のケイ素原子を有しうる。好
ましくは、２個またはそれ以上の（特に３個の）反応性
基、特に塩素原子のようなハロゲン原子を有するシラン
化合物を使用する。

反応性基以外のものでケイ素原子に結合している基は、
適当にはアルキル基、特にメチル基であろう−１その他
の非反応性基、例えばフェニル基が結合していることも
ありうる。殊に適当なシラン化合物は、フェニルトリク
ロロ７ラン、ジメチルジクロロシラン及びメチルトリク
ロロシランである。

シラン化合物は、膜の外側層の外面に対して、溶剤に溶
解した状態で滴状に適用することができる。

適当な溶剤は、易蒸発性の不活性有機溶剤、例えばトリ
クロロエタンである。別法として、そして一層好ましく
は、処理されるべき層を、シラン化合物（例えば溶液の
形）に浸漬してから、積層膜を形成し、それをセンサー
に取り付ける。従って処理されるべき層（例えば第２の
層）のいずれかの面または両面が７ランで処理されうる
。シラン処理膜の形成のためには多くの可能な方法があ
り、例えば酵素なシラン処理層の内側面へ直接に（例え
ば架橋結合により）固定化することができ、あるいは、
酵素を予め形成された膜の形で、シラン処理層内側面へ
適用することができる。

米国特許第３９７９２７４号明細書に記載されたタイプ
の積層膜の第２層として適当な重合体材料の例としては
、ポリカーボネート類及び変性セルロースがあるが、好
ましくはポリカーボネート類である。極めて適当な変性
セルロース膜は、酢酸セルロース／硝酸セルロース混合
エステル超濾過膜である。第２の膜は、拡散バリヤーと
して作用し、高分子量化合物の通過を明止ないし制限し
、また膜ｂ″−その形状を維持しかつ電極との適切な接
触を保持しうるに足る強度を膜に付与するものである。

第２の膜は、２０ミクロン以下の厚さ、特に１〜１０ミ
クロンの範囲内の厚さを有するのが好ましい。我々の英
国特許出願第８５２２８３４号明細書に記載の如く、第
２の層の重合体材料は、１〜０．０５ミクロン（好まし
くはそれ以下）の範囲内の平均直径の細孔を有するのが
適当である。

積層膜の第１の層として適当な材料の例としては、ポリ
メタクリル酸メチル、酢酸セルロース、ポリウレタン、
あるいはアスコルビン酸及びチロシンのような電気的に
活性な妨害化合物の通過を制限ないし閉止するその他の
重合体材料がある。

第１の膜は０．５〜１．０ミクロンの範囲内の厚さであ
るのが適当である。また適当な材料としては。

予め定めた分子量以上、例えば１００以上、殊に５０以
上の分子量の物質様を排除する材料もある。

本発明のセンサー中に存在する酵素は、適宜な方法で膜
上に配置される。積層膜においては、酵素は２枚の重合
体物質層の間に存在してそれらの間に結合を形成してい
るのｂ≦好ましい。この場合、及び普通一般の場合に、
酵素は、架橋結合を生じさせる物質と混合することによ
り固定化されるのが好ましい。この目的のために非常に
適当な物質は、グルターフアルデヒドであるが、アルブ
ビンのような蛋白質及びそ９他の物質も使用されうる。

センサーからの迅速かつ安定な測定値読み取りを促進す
るには、酵素含有層が薄いこと、すなわち厚さ５ミクロ
ン以下であることｂ″−好ましい。

本発明のセンサーにおいて使用されるべき酵素は、濃度
測定されるべき被分析物により左右される。被分析物ｂ
″−グルコースあるならば、酵素は、グルコースオキシ
ダーゼとなる。膜に存在させうるその他の酵素としては
、尿酸及び乳酸をそれぞれ分析するためのウリカーゼ及
びラクテートオキシダーゼ等がある。

本発明の処理方法は、例えば、グルコースの測定のため
の酵素電極センサーに使用する膜を作るには、下記の諸
工程を用いて実施する。

１、７ラン化合物（例えばジメチルジクロロシラン）を
適当な溶剤（例えば１，１．１−）Ｕクロロエタン）に
溶解して、２％溶液を得る。

２、その溶液の約２［］Ｏμｍを、ガラス製スライド上
に置かれた１の２のポリカーボネート膜へ滴状に加える
。

６、　その溶液を数秒間ポリカーボネート膜中へ浸入さ
せる。

４、そのポリカーボネート膜を、第２のガラス製スライ
ドで覆い、それら２枚のスライドを５分間合せて把持す
る。その時間中に７ラン化合物のいく分かの重合が起こ
る。

５、　ポリカーボネート膜をスライドの間から取り出し
、ジェット水流ですすぎ洗いして未反応の反応性基を加
水分解させる。

６、　ポリカーボネート膜を風乾する。

１１ダのグルコースオキシダーゼを、１１００Ｉｎ／ｍ
ｌアルブメン液の５０μｔに溶解させる。

８．１２．５％グルタルアルデヒド溶液３μｔを、ガラ
ス製顕微鏡スライドの上で、上記酵素／アルブメン混合
物６μｔと混合する。

９　上記８で得られた混合物ｉ、ａｌを前記風乾ポリカ
ーボネート膜の片面上に置く。

１０、その酵素層の上面を、薄い酢酸セルロース膜で即
座に機い、得られた積層膜をガラス製スライドの間で６
分間把持する。スライドの間から取り出した後、上記の
諸工程により作られた積層膜は、その酢酸セルロース膜
が白金電極に最も近く面するようにして、白金電極上で
使用できる。

本発明の膜は、オルガノシラン化合物での処理により膜
の表面ｂ″−凝固血液で汚されるようになる傾向が低減
されるという一般的利点を有する。このことは、腎臓病
患者の透析濾過治療のように膜が血液と接触している状
況で使用される場合には利点である。オルガノシラン化
合物で同様に処理された透析膜も、表面活着の傾向が低
減するので、膜ｂ″−赤血球透析中に血液と接触される
場合に有利である。膜ｂ″−−血液成分の測定のための
センサーで用いられる場合、膜はその表面す１蛋白質や
細胞成分で被覆ないし閉塞される傾向が低いので、膜の
使用可能回数が非常に増加する。このことにより、シラ
ン処理膜な含むセンサーｂく血液の日常的分析作業にお
いて一層利用可能となる。

本発明の７ラン処理膜をセンサーに用いる場合には、濃
度：センサ一応答のグラフｂ″−線型である濃度範囲が
拡大するという別の利点もある。処理されていない膜で
はそのようなグラフの線型性（直線りは、グルコースに
ついてはほぼ５ｍＭの濃度がその上限にすぎない。しか
し、７ラン化合物で処理された膜では、グラフの線型性
範囲は５０ｍＭまたはさらに高いグルコース濃度にまで
及ぶほど拡大される。これは酵素層中への基質の侵入の
制限により達成されるので、感度がいく分か低下する。

かくして、線型性範囲は、血液試料中に予期されうるグ
ルコース濃度をカバーするようにでき、従って血液グル
コース濃度を一層容易に測定可能としうる。このことは
、多数の測定を定常的にしかも最低の試料調製で実施し
なければならない場合には、極めて有利である。

酵素電極センサーは、医学的使用以外にもその他の多く
の用途がある。例えば、工業的醗酵培地のモニター、研
究室規模の醗酵培地のモニター、ならびに多様な生体内
及び生体外での応用がある。

本発明を以下実施例により説明する。

実施例　１ 前記の工程１〜１０の処理法を用いて積層膜を作り、こ
れをポーラログラフ電極系の表面上に配置した。この電
極系は銀参照電極に関して＋〇、６Ｖで釣り合せた作用
（白金）電極を有するものであった。このようにして得
た膜被覆電極系を第１図に断面図で示す。第１図におい
て、１はジメチルジクロロシランで被覆した多孔質ポリ
カーボネートフィルム（０，０５ミクロン細孔寸法）か
ら形成した第２の層（外側層）であり、２はアルブタン
中に溶解されグルタルアルデヒドと混合されたグルコー
スオキシダーゼ酵素の層であり、６は酢酸セルロースか
ら形成した第１の層（内側層）であり、４は白金作用電
極であり、セして５は銀擬参照電極である。白金作用電
極４はアノードとして作用し、そして銀擬参照電極５は
カソードとして作用する。膜は、第２の層１の外縁辺６
のところで第２の層を下向きに圧する枠リング（図示せ
ず）に電極上の定位置に保持されている。

まず膜をグルコース不含有電解液（０，９％ＮａＣ１溶
液）で湿めらせて基底電流を与えた。一連の種々の濃度
の標準グルコース水溶液を順次に一滴の量適用して作用
電極４を覆うようにした。各尋装置についての安定測定
値を読み取った。それぞれの溶液を用いての分析毎に、
膜の表面を緩衝液ですすぎ洗いし、そしてｐ紙で軽く押
えて余分の液を除いた。

このグルコース溶液で得ろｉた安定（定常）読み値を用
いて第２図に示すキャリプレー／コングラフを作った。

このキャリブレーショングラフにおいて、縦軸は電流出
力（ミリアンペアンｃｒｎ２）であり、横軸はグルコー
スの濃度（ｍモル／ｌ）である。

第２図のキャリプレー７ヨングラフにおいて、このグラ
フは少なくとも、５ｍモル／ｌのグルコース濃度までは
直線であることが判る。この濃度は治療上重要である濃
度範囲をカバーするものである。

実施例　２ 実施例１に記載のものと類似の方法で積層膜を作ったが
、本例では鄭１図の第２の層（外側層）は、ニュクレオ
ポア（Ｎｕｃｌｅｏｐｏｒｅ　）社製（１）　０．２μ
細孔寸法ポリエステル膜を、ジメチル７りロロシランを
用いた前記の方法においてメチル！・リクロロシランを
用いて処理したものから形成した。

種々の濃度の多数のグルコース溶液を用いて得た測定値
から実施例１のようにしてキャリブレーショングラフを
作った。本例においては、グラフは８ｍモルまでほぼ直
線であった。これは、第２の層をシラン処理せずに同様
に構成した対照膜（２ミリモル以上のグルコース濃度に
対する応答の増大は著しくなかった）を用いて得られた
結果と比較して、特記すべき改善である。

このキャリブレーショングラフは第６図に示されており
、その縦軸は電流出力（ｍＡ／ｃｒｎ”）、横軸はグル
コース濃度（ｍモル／１）である。

実施例　６ 実施例１と類似の方法で積層膜を作ったが、本例では第
１図の第２の層（外側層）は、０．０５μ細孔寸法ポリ
カーボネート膜から形成した。このポリカーボネート膜
は、ジメチルジクロ１′：２７ランを用いた上記の処理
方法においてメチルトリクロロシランを用いて処理した
。

種々の濃度のグルコース溶液を用いて実施例１σ）よう
にしてキャリブレーショングラフな作った。

本例では、グラフは１０ｍＭまで（さらに測定を続けれ
ばおそらくもつと高い濃度まで）１α線である。午れは
、米国特許第３９７９２７４号明細書に記載のタイプの
膜、及び第２の膜を７ラン処理しなかった対照膜、の両
者を用いたときの結果と比較して著しい改善を示すもの
である。米国特許第３９７９２７４号の膜及び対照膜で
は２ｍＭ以上のグルコース濃度に対する応答の増大が著
しくない。

このキャリブレーショングラフを第４図に示す。

縦軸及び横軸は第２及び２図と同じである。

実施例　４ 前記の処理法を用いてまた一連の種々の７ラン化合物を
用いて、シラ／処理積層膜を作った。一連のグルコース
溶液を用いて測定を実施し、それぞれのシラン化合物に
ついて最高の線型性の度合（濃度）を測定した。この結
果を表１に示す。シラン処理しなかった対照膜は５ｍＭ
の最高線型性を与えた。

使用シラン化合物に応じて最高線型性は変る。

二つの場合に非常に高い最高線型性ｂ″−−観察た。

これらの線型性は、医学的応用に必要とされる範囲を著
しく超えるものである。しかし、これらはある種の工業
的用途１例えば醗酵槽中のグルコース濃度測定において
有用である。

表１ 応答ｂ−それに至るまで線型であ メチルトリク１コロ／ラン　　　　　　　　　５００フ
エニルトリクロロ７ラン　　　　　　　　５００ジメチ
ルジクロロシラン　　　　　　　　　　７０メチルトリ
クロロ７ラン　　　　　　　　　　　５０（無処理）　
　　　　５ 実施例　５ 酵素電極センサーの感度に対する血液の影響を、ホール
稀釈血液に対する酵素電極センサーの応答を試験するこ
とにより検討した。応答は、ｆａｌ血しようへ架橋結合
されたもののその他は変りＩ！ｌｌ″−ない酵素によっ
て電極ｂ″−覆われたとき、（ｂｌその酵素層Ｉ！１ｌ
−１［男プロファン（ＣＵＰＲＯ，ＰＨＡＮ）Ｊ　（商
標：変性セルロース重合体）の平滑層で覆われたとき、
及びｆｃｔ酵素層がメチルトリクロロンランで処理され
た「カプロファン」の層で覆われたとき、のそれぞれに
ついて研究した。酵素層の下の第１０重合体層は非選択
性フィルムであった（なんとなれば、これらの研究は応
答の低下だけを目的としたものであるからであった）。

使用血液は、攪拌された燐酸塩緩衝液（ｐＨ７，４）に
１：５０で稀釈し、分析した。測定は１０μモル／ｌの
グルコース標準溶液を用いて実施した。

結果を表２に示す。こσ）表から、（ａｔの場合は応答
の低下が極めて急速であるが、ｆｂｌの場合はそれほど
急激ではないことｂ″−判る。７ラン化合物を用いて処
理したｆｃｌの膜は応答の低下が著しく減少された。

表２ ｆａｌなし　　　　５７％ 忙）　シラン処理　　　　　　　５　　　　　　　０％
「カプロファン」　　　　　２０　　　　　　　　　２
％

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明による酵素電極センサーの一例の断面図
。 第２〜４図はグルコース濃度測定のキャリブレ・　−ジ
ョングラフ（実施例２〜４の結果）であり、縦軸は電流
出力（ｍＡ／ｃｒｎ２）、横軸はグルコース濃度（ｍＭ
／ｌ）である。 １：第２の層、　２：酵素含有層、　６：第１の層、　
４ニアノード（白金作用電極）、５：カンード（銀参照
電極）。 （外５名）

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. （１）１枚またはそれ以上の重合体物質の層からなり、
   そのうちの少なくとも１枚の層が、反応性基を有するオ
   ルガノシラン化合物を含む媒質で処理されたものである
   ことを特徴とする、液体及び溶質透過性膜。
2. （２）液体及び溶質透過性であり、かつ１枚またはそれ
   以上の重合体物質の層からなる膜を処理する方法であつ
   て、反応性基を有するオルガノシラン化合物を含む媒質
   を膜中の少なくとも１枚の層に適用することを特徴とす
   る上記処理方法。
3. （３）液体及び溶質透過性膜を含む酵素／電極式センサ
   ーであつて： （ａ）該膜が（イ）酵素と、１枚またはそれ以上の重合
   体物質層とからなり、（ロ）また該センサーによつて検
   出されうる物質へ、該酵素の存在下で、変化しうる被分
   析物を含む試料と接触されうる外側層を有すること、 （ｂ）（イ）該外側層及び／または（ロ）該外側層と酵
   素との間にある別の層が、反応性基を有するオルガノシ
   ラン化合物を含む媒質によつて処理されたものであるこ
   と、 を特徴とする上記センサー。
4. （４）第１の重合体層と第２の重合体層との間に配置さ
   れた酵素含有層からなる積層膜を含み、その第１層が酵
   素含有層とセンサーの電極との間に存する特許請求の範
   囲第３項に記載のセンサー。
5. （５）膜の第１の重合体層がポリメタクリル酸メチル、
   酢酸セルロースまたはポリウレタンから形成されたもの
   である特許請求の範囲第４項に記載のセンサー。
6. （６）膜の第２の重合体層がポリカーボネートまたは変
   性セルロースから形成されたものである特許請求の範囲
   第４または５項に記載のセンサー。
7. （７）膜の第２の重合体層が、０．０５ミクロン以下の
   平均直径の細孔を有する多孔性物質から形成されたもの
   である特許請求の範囲第４〜６項のいずれかに記載のセ
   ンサー。
8. （８）（イ）外側層、及び／または（ロ）外側層と酵素
   との間の別の層が、分子中に３個の反応性基を有するオ
   ルガノシラン化合物によつて処理されたものである特許
   請求の範囲第３〜７項のいずれかに記載のセンサー。
9. （９）（イ）外側層、及び／または（ロ）外側層と酵素
   との間の別の層が、フェニルトリクロロシラン、ジメチ
   ルジクロロシランまたはメチルトリクロロシランによつ
   て処理されたものである特許請求の範囲第６〜７項のい
   ずれかに記載のセンサー。
10. （１０）試料中の被分析物を分析する方法であつて、（
    ｉ）（イ）液体及び溶質を透過させることができかつ（
    ロ）酵素及び１枚またはそれ以上の重合体物質層からな
    る膜であり、該酵素が、その存在により、被分析物を、
    その膜を含むセンサーによつて検出される物質に変えう
    るようなものである膜、の外側層に試料を接触させ、 （ｉｉ）該物質へのセンサーの応答を測定することから
    なり； かつ（イ）該外側層、及び／または（ロ）該外側層と酵
    素との間の別の層が、反応性基を有するオルガノシラン
    化合物を含む媒質で処理されたものであることを特徴と
    する上記分析方法。