JPS6199841A - 電気泳動像の分析方法 - Google Patents

電気泳動像の分析方法

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JPS6199841A
JPS6199841A JP59221133A JP22113384A JPS6199841A JP S6199841 A JPS6199841 A JP S6199841A JP 59221133 A JP59221133 A JP 59221133A JP 22113384 A JP22113384 A JP 22113384A JP S6199841 A JPS6199841 A JP S6199841A
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秀彦 山本
Mutsuo Kashiba
睦朗 加柴
Ryuji Shinkawa
新川 竜二
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    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01BMEASURING LENGTH, THICKNESS OR SIMILAR LINEAR DIMENSIONS; MEASURING ANGLES; MEASURING AREAS; MEASURING IRREGULARITIES OF SURFACES OR CONTOURS
    • G01B11/00Measuring arrangements characterised by the use of optical techniques
    • G01B11/02Measuring arrangements characterised by the use of optical techniques for measuring length, width or thickness
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/26Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/416Systems
    • G01N27/447Systems using electrophoresis
    • G01N27/44704Details; Accessories
    • G01N27/44717Arrangements for investigating the separated zones, e.g. localising zones
    • G01N27/44721Arrangements for investigating the separated zones, e.g. localising zones by optical means

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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 (技術分野) 本発明は、電気泳動法により形成された泳動像の像中心
検出方法に1I=Jるものである。
(従来技術) 従来、蛋白質等の生体高分子を分析する装置として電気
泳動法を利用した自動化学分析装置が実用化されている
。この電気泳動法を利用した自動化学分析装置は、緩衝
液で湿潤したセルロースアセテート膜等の支持体−1に
面清等の検体を塗布し、検体を通電して電気泳動させ検
体中に含まれる各種成分を分@Ill I、た泳動像を
作り、この泳動像を染色してI11視像化し、この可視
像化された泳ilI像をデンシトメータを用いて光学走
査して分画像を作り、この分画像を演算処即して検体中
に含まれる各種成分を定量分析するように構成されてい
る。
この自動化学分析装おでは、泳動像と正確に対応した分
画像を作ることが要求され、分画像の形成は分析粘度を
高める[で極めて重要である。
第1図Aは泳動像の一例を示す線図であり、第1図Bは
第1図へに示J泳動像を光学走査して得られたデンシト
ダラムパターンである。泳動像から分画像を作るには、
電気泳動後に染色及び脱色■稈を粁だ支持体をデカリン
等の透明化液中に浸漬し、浸漬した状態でデンシトメー
タを用いて矢印Xで示ず泳動方向に光学的に走査し、そ
の透過光から泳動像の各成分の光学的II痕を測定して
第1B図に示すアン1−グラムパターンを作り、このパ
ターンから分画像を作るように構成されている。
デンジi・メータで光学走査するには、まず泳動像の泳
動方向Xと直交するY方向の中心点を検出しなければな
らず、中心点を正確に検出しないとデンシトメータから
発する光ビームがパターンからずれた位置を走査してし
まい正確なデンジトゲラムパターンを形成することかで
きなくなってしまう。
従来の泳動像の中心点を検出する方法して特開昭58−
45540号公報には、塗布した検体の一番近い位置に
できるアルブミン等の第1分画像をデンシトメータでY
方向に光学的に走査し、光学濃度が一番高い位置を中心
点どして検出する方法が記載されている。しかし、第1
分画像の泳動方向と直交するY方向の光学的濃度分布は
、第2図に示すように最大8I麿点が中心点とならない
パターンがしばしば発生する。特に第2図のa及びbに
示すように肩部の光学lI疫が高く中心部の濃度が低く
なる泳動像を生ずる場合が多く、従来の中心点検出方法
では泳動像の中心点を正確に検出することができない欠
点があった。特に像中心を正確に検出しないと、デンジ
トゲラムパターンを形成するに当り光ビームが斜行して
しまい泳動像からずれた位置を光学走査する不都合が生
ずるため、像中心を正確に検出できる像中心検出方法の
開発が要請されている。
(発明の目的) 本発明の目的は上述【ノだ欠点を除去し、泳動像の中心
点を正確に検出できる像中心検出方法を提供するもので
ある。
(発明の概要) 本発明による像中心検出り法は、検体の電気泳動像の像
中心を検出するに当り、泳動像の泳動方向と直交する方
向の少なくとも肩部までの濃度プロフィールを検出する
段階と、この濃度プロフィールの肩部を検出する段階と
、検出した肩部に基づいて像中心を決定する段階とを具
えることを特徴どするものである。
(実施例) 第3図は本発明による像中心検出方法を実施するための
比色定量装置の一例の構成を示す線図的断面図である。
染色及び脱色■稈を経た泳動像が形成されている細条状
の支持体1を、透明化液を満した透明容器2内に搬入す
る。透明容器2の入口部には一対の供給ローラ3及び4
を配置し、支持体1はこの供給ローラ3及び4により透
明容器2内に搬入され、まず、光源5と光検出器6から
なる先端検出センサによりその先端部が検出される。先
端部の検出後透明化液であるデカリン液内に浸入する。
この透明化液は支持体1だけを透明化するものであり、
デカリン内に浸入した支持体は、透明化された支持体上
に泳動像が形成された状態となる。次に、第1の搬送ロ
ーラ7及び8により透明容器2の底部に形成された測定
領域に搬入され、泳動像の光学濃度が測定される。測定
後筒2の搬送ローラ9及び10により挟持搬送され、排
出ローラ11及び12を経て外部に排出される。測定領
域には、透明容器2の下側に光源13、熱線吸収フィル
タ14、レンズ15、フィルタ16、直角プリズム11
及びスリット18から成る光源装置を設けると共に、透
明容器2のF側には受光器19を設置−J、この受光器
19を比色計20に接続する。光源13から=4− 発した光ビームはレンズ15及びスリット18によりス
ポット状に収束されて支持体1を透過し受光器19で受
光され、泳動像の光学濃度が比色計20により検出され
る。光源装置及び受光器19は、駆動装部(図示Iず)
に一体内に連結され各検体の泳動像が順次形成されてい
る支持体1の中方向、すなわち紙面に垂直方向に移動し
て支持体上に形成されている泳動像をその泳動方向に光
学的に走査する。また、第2の搬送ロー59及び10は
、パルスモータ(図示せず)に連結され支持体1を1ス
テツプずつ間欠的に搬送する。そして、第2の搬送ロー
ラ9及び10が1ピツチ移動する毎に光源装置及び受光
器19を支持体1の中方向に移動させて光学走査を行な
うように構成する。
第4図は光源装置から発づ°る光ビームの支持体上の軌
跡を示す線図である。支持体1上には、支持体の反搬送
方向であるY方向に順次多検体の泳動像が形成され、X
方向には検体の各成分の泳動像が順次形成されている。
本例では検体として自消を用い自消中に含まれる各種蛋
白質を定量分析するものとし、第1分両像としてアルブ
ミンの泳動像が形成され、法帖方向であるX方向に順次
α1グ[1プリン、α2グロブリン、βグロブリン及び
γグ[1プリンの泳動像が形成されている。本例では光
学走査にJ:り第1分画像であるアルブミンの泳動像か
ら電気泳動像の中心点を求める。支持体1は第2搬送ロ
ーラ9及び10にJ:す1ステツプずつ間欠的に−Y方
向に搬送され、光ビームは1スフツブ移動する毎にアル
ブミンの泳動像をほぼ越える位置まで移動する。これに
よりアルブミンの泳1jlJ像はX及びY方向に2次元
的に走査されることになる。そして、光ビームのX方向
の走査にお【)る光学濃度の最大値を用いてIl麿プロ
フィールを作る。このようにして得られたアルブミンの
潤度プ[]フィールを第5図に示1゜第5図は3個の検
体について連続して測定したものであり、アルブミンの
泳動像のプロフィールと正確に対応している。
各検体の濃度プロフィールは、IIFIの低い像間部a
から発し、濃度が急激に増加する前縁部すに移行し、肩
部Cを経て中央部dに達している。
濃度プロフィールの形態について種々の検討を加えた結
果、次のような特徴を有することが確認された。
(1)像間部aの濃度は、各検体間においC相異してい
るが、冬作の巾!0は一致している。
(2)前縁部すは直線的に濃度が増加して23す、その
勾配は各検体間においてほぼ一致している。
(3)肩部Cではゆるやかに濃度が増加しているため、
その発生位置の特定は若干誤差を生ずるおそれがある。
また、肩“部Cの淵度番、L温石が飽和しCいる中央部
dの濃度とほぼ一致しでいる。
(4)肩部間の巾β、は、各検体間においで若干相異し
ている。
(5)中央部dの濃度方弁は、各検体間におい−で′相
異し、級大′a度点は像中心と一致しCいない。
以上の結!I J:す、像中心を検出するに当り、次の
結論が得られる。
(1)像間部aの☆ち十がり点又は肩部の位置付近では
、位置に対して濃度がゆるやかに変化しているため、像
間部又は肩部の位置を基準にして像中心を求めると、誤
差が生じ易ザい。
(2)前縁部では製電が急激に増加しているから、濃度
変化に対°する位置の変化は極めτ°小さく、しかも前
線部りの淵痙勾配は各検体間においてほぼ一致しCいる
従っ°C1前縁部す十の特定濃度点を定め、この特定濃
度点の位置に所定の距離を加えれば各検体の濃度プロフ
ィールから誤差を生ずることなく像中心が求まる。
以上の考察より本発明では肩部Cの濃度を検出し、この
肩部の11度に対1ノで所定の割合にある前幹部す上の
特定濃度点を定め、この特定m1点の位置を基準にして
予め求めた所定の距111doを加えた点の位置を求め
、これを像中心とする。
次に本発明による像中心検出プロセスを第4図及び第6
図を参照しながら説明斐る。尚、第6図は光学上りに、
Lり得られ1.:デンシ:〜グラムパターン図である。
第21#J 3’ltローラ9及び10により、支持体
1をステップ送りし、これと同期して光源装賄及び受光
器19を支持体1の巾方向に移動させC光学走査をt−
J <Kい、第1分画像である)アルブミンの泳動像方
向と直交する方向のi11!度プ[1フイールを検出覆
る。澹唯ブI]フィールの作成は、第2搬送11−ノの
ステップ)スリ刊から位置を求め、その位置及びイの荀
西で検出しI、:光学濃度をそれぞれ記憶して行なう。
まず、検体と検体との中間の位置を基tV (f/装S
Oどしで定め、この基準位置SOの光学+1111 a
 D oを検出する。各検体の泳動像は、はぼ所定のヒ
ップ間隔e形成されているから、支持体1の先端検出操
作から正確に定めることができる。
次にIi!l侍[Soからステラ/ 11′!、りと同
期して1111度検出を行なう。像間部及び前縁部の検
出では、次式に?、Yう検出)「1t?スを行なう。
D n−D n−+  > C+    −(1)ここ
C゛、])n1.in番目に検出した!1kを示し、D
 n−+ はn−1番目に検出した濃度を示し、0゜は
基準濃度差で゛あり、各検体の前縁部の勾配に基き適切
な値を実験により予め求めCおく。
像間部では製電変化が小ざく、一方性縁部は急激な濃度
増加を9するから、直前に検出した濶1σどの濃度差が
C1より人きければ前縁部を検出しCいることになる。
次に肩部の位置及び濃度を検出する。肩部の位置検出は
次式に基き行なう。
Dn−Dn−+<02 Dn−+  −Dn−2’、C2−(2)肩部は前縁部
ど中央部との中間に位置し、急激<、rllI′Ii増
加からゆるやかな増加に移行する偏曲魚であるから、直
前に検出した濃度との濃度差が所定の値C2よりも小さ
くなる点が肩部となる。このC2の値も実験により適切
な値を求めており11本例では(2)式に基き肩部のイ
?装置S、を検出し、この肩部の濃度1)Hも検出Jる
。そして、検出1゜記憶されている前縁部のil[ブ[
1フイールから、肩部の濃度DHと1.を摩点帽1)0
との濶酊差の212分の澗1)に月H,5,Flる位置
S2を検出する。次に、検用lノI、−イ〜”lIg′
1181)に距1lIIIdOに相当づ−るパルス数を
1111え、λJ Lid、、リ−るf:I ii胃5
)3を求め°C像中心どする。
この揚合加λる距11i1i(loは、複数の検体につ
いて泪測した舶を統「11処理しC予め求めて入力して
a3 <。
次(こ、li”f部の位jβ8)2と像中心S3とのス
テップ差を検出し、このステップ数だ(プ移1−1シ、
俟1中心(、二到達した時、支持体1の全11まで光学
走査して、j゛ンシトグフムパターン作る。デンジ1〜
グシムパターンを検出した後、像間部まeの所定のステ
ップ乃に二(−+自Φ目的に送り、次の検出にHえる。
このように、胸部のイ)!置及びI! [から基準とな
る濶1α点をミ1ξめろ構成どηれば中央部P1で光学
走査することイνく像中心を検111でき、4杏時間を
短縮Cさろ効架1−)ある。
本5i明ILL 、liボした実施例にのみ限定ざねる
ものではlc<幾多の弯史や変形が可能である。例λば
L ;iliじノ、=実施例では、;4部の濶1身r+
Hと像間部のン)f’、! Ju l’) 0との澗I
′13差が14(こなるRi首を基準としたが、111
部ど像間部との間の前縁部であれば他の(i意の点をM
準どすることができ、濃度が14になる白に限定される
もので1.1ない。また、上述した′iミコ例では1日
部の淵葭1)Hど像間部の瀧磨D○どのmW差を検出し
たが、li]部より中心側にずれた位置の濃度と像間部
のII亀との濃度差を用いてt)J、い。更に、iI!
度差ひはなく肩部又はその近傍の濃度値をそのまま利用
して、この淵瓜値に対して所定の割合いと〆Cる前縁部
の位置を基準とすることもできる。ただし、この場合に
IJ像間部のf!度より高い位置になることが望ましい
(発明の効宋) 以に説明したように本発明IJJ、ねば、泳動像の濃度
プロフィールの背部を検出し、これに阜い?−C像中心
求めるようにしたため、像中心のfl IIIがどのよ
うなものC゛あっても像中心を常に正確に検出すること
ができる。さらに、泳動像中の一部のパターンの前縁部
を光学走査するだけで像中心を迅速かつ正確に検出する
ことができる。
【図面の簡単な説明】
第11り1△【、1泳動像の一例を示す線図、同図13
は泳動像を光学走査して得られたデンシトグノ11バク
ーン、 第2図は第1分画像の温度分布を示すグラフ、第51図
は本発明(二よる像中心検出方法を実/Il!iFrる
Iこめの比色定m装置の一例の構成を示寸線図的断面図
、 ダ1/1図(↓光源装置let tら発する光ビームの
支持体−1の軌跡を示づ線図、 第4)図は各秤検体の泳動り向と自交する方向のll1
fすl゛[1フイールを示1線図、第6図4.−1−t
゛ンシトηフムパターン図ある、。 119.−!j持体     2・・・透明容器3.4
・・・イ11給口−シ 5,13・・・光源6・・・光
検出器    7.8・・・第1搬送「1−ラ!1.I
n・・・第21!l送■−シ 11、13・・・tjl出[1−ラ 14・・・熱線吸
収フィルタ111・・用ソング     16・・・フ
ィルタ17− ii’1’ ((1’f II 7(ム
  18・・・スリット19・・・受光器     2
0・・・比色バ1特許出願人   オリンパス光学工業
株式会社=15− 第1図

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. 1、検体の電気泳動像の像中心を検出するに当り、泳動
    像の泳動方向と直交する方向の少なくとも肩部までの濃
    度プロフィールを検出する段階と、この濃度プロフィー
    ルの肩部を検出する段階と、検出した肩部に基づいて像
    中心を決定する段階とを具えることを特徴とする像中心
    検出方法。
JP59221133A 1984-10-23 1984-10-23 電気泳動像の分析方法 Expired - Lifetime JPH0621864B2 (ja)

Priority Applications (2)

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JP59221133A JPH0621864B2 (ja) 1984-10-23 1984-10-23 電気泳動像の分析方法
DE19853537199 DE3537199A1 (de) 1984-10-23 1985-10-18 Verfahren zum ermitteln des mittelpunktes eines elektrophoretischen bildes

Applications Claiming Priority (1)

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JP59221133A JPH0621864B2 (ja) 1984-10-23 1984-10-23 電気泳動像の分析方法

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JPS6199841A true JPS6199841A (ja) 1986-05-17
JPH0621864B2 JPH0621864B2 (ja) 1994-03-23

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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS57204437A (en) * 1981-06-11 1982-12-15 Hiranuma Sangyo Kk Measuring method for interval of inspection body in concentration measuring apparatus
JPS5845540A (ja) * 1981-09-14 1983-03-16 Toyo Kagaku Sangyo Kk デンシトメ−タ−における検体の中心部検出方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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Also Published As

Publication number Publication date
DE3537199A1 (de) 1986-04-24
DE3537199C2 (ja) 1989-03-30
JPH0621864B2 (ja) 1994-03-23

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