JPS61502840A - 抗体検出法 - Google Patents

抗体検出法

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JPS61502840A
JPS61502840A JP50337385A JP50337385A JPS61502840A JP S61502840 A JPS61502840 A JP S61502840A JP 50337385 A JP50337385 A JP 50337385A JP 50337385 A JP50337385 A JP 50337385A JP S61502840 A JPS61502840 A JP S61502840A
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スターカー,セルビイ,ジヨン
ウイリアムズ,グインフオー,リース
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コラル・ソシエダデ・ブラシレイラ・デ・ペスキサス・エ・デセンボルピメント・リミタダ
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 抗体検出法 発明の分野 本発明は、抗体検出法に関するものである。
発明の説明 本発明の抗体検出法は、 (1)抗原−結合抗体を含有している試料を処理して幾らかの抗体を除去し、さ らに残余の結合抗体をブロックし: (2)処理後の試料をモノクローナル抗体にざらし:(3)モノクローナル抗体 含有試料をマーカーで標識し: (4)このマーカーを検出することからなる。
発明の詳細な説明 本発明方法の第1段階として、結合した抗体の少くとも一部2通常はその大部分 を除去し、抗原がモノクローナル抗体と反応する様にする。試料は、例えば、抗 原−結合抗体を含有していると思われる細胞(例、腫瘍細胞)から採取される。
試料は、例えば、スライトガラス上に、組織切片の形で単離しても良い。次いで 抗体の一部を溶出等によって除去し、残余抗体をブロックする。本発明の検出法 にかけるために単離された特異抗体がヒトのものである場合には、ブロックは、 ヒト免疫グロブリンに対するヤギ抗血清による処理によって行われる。
本発明の第2段階に用いられるモノクローナル抗体は、検出すべき抗体と結合す る抗原に特異的であるものを選択する。本発明方法は、本方法のこの段階におい て様々なモノクローナル抗体を用いることにより、1以上の抗体の検出に使用し 得る。どの様な場合でも、対照として種々のモノクローナル抗体を用いることが 望ましい。
この段階において、試料は抗原と結合したモノクローナル抗体を含有している。
本発明方法の第3段階では、このモノクローナル抗体を螢光または他のラベルで 標識する。例えば、ヒトモノクローナル抗体ヲ、ペルオキシダーゼとフンシュゲ ートしているヒト免疫グロブリンに対するヤギ抗血清と反応させることにより標 識する。次いで、常法により検出を行う。
本発明方法は、同一人物または他の人物の腫瘍に対する抗体を簡単に検出するた めに用いることができる。
この方法は、ヒト組織から単離された細胞中の抗体を検出するために用いること ができる。この方法は、特に、アクフン・ヘルスケア・リミッティッド(Axo nHealthcareLtd、)スターキー(S、J、5tarkie)およ び’7イ’)7ムス(G、R,Williams)にょる1抗体生産(Anti bodyProduction)”と題する国際特許出願(出願日、1985年 7月30日9に記載されている方法で産生された抗体活性の検出に用いることが できる。
患者から切除した寡突起膠腫から単離したヒ)BU一部を液体窒素の温度で凍結 した:低温維持装置を使って5μmの切片を切り取り、スライドガラスに載せた 。これら切片をクエン酸−緩衝化食塩水(pH3,5)に60分間浸漬すること (こより、患者の抗体を除去した。これら切片を10分間、アセトンを用いて乾 燥させた。次いで切片を、ヒト免疫グロブリンに対するヤギ抗体の溶液(0,0 35fAl)に30分間浸漬することにより、残余抗体をブロックした。
切片をトリス−食塩水(pH7,6)で洗浄し、特異的なモノクローナル抗体に 60分間浸漬した:対照切片は、別のモノクローナル抗体中〔食塩水中(0,8 4g/l))に浸漬した。これらをトリス−食塩水で洗浄し、ヒト免疫グロブリ ンに対するヤギ抗血清(ペルオキシダーゼとコンジ五ゲートしたもの〕の1,1 5omHに30分間浸漬した。切片をトリス−食塩水で洗浄し、ジアミノベンジ ジン溶液中に1o分間浸漬した。蒸留水で洗浄し、ハリス・ヘマトキシリン(H arrishaematoxylim)に2分間浸漬した。次いで、これらを流 水(水道水〕で15分間洗った後゛、無水メタノール、次いでキジロールを用い て乾燥し、デペックス(Depex)を使ってカバーグラス下にのせた。モノク ローナル抗体との結合は、光学顕微鏡を用いて検査し、褐色の沈殿により検出し た。
ヒト卵巣ngから単離したリンパ球を用いる外は実施例1の方法に従って行った 。
組上 ヒト乳がん組織から単離したリンパ球を用いる外は実施例1の方法に従って行っ た。
実施例4 ヒト結腸腫瘍から単離したリンパ球を用いる外は実施例1の方法に従って行った 。
実施例5 患者および死体から切除した正常組織の一部を液体窒素の温度で凍結した。これ らを切片に切断し、がん患者から得たヒトモノクローナル抗体を用い、上記の実 施例と同一の方法で処理した。
溶出前には、正常組織の多くがヒト免疫グロブリンで被覆(コート)されていた が、PH3,5で溶出することにより、この免疫グロブリンは除去された。ヒト モノクローナル抗体と正常組織との結合は、抗体の結合特異性を示した。寡突起 膠腫患者(ns)由来の10個の抗体を用いたイムノペルオキシダーゼ・アッセ イにおける結合パターンを以下の表に示す。表中の値は、観察された結合の程度 を、0(結合せず〕から4までの階級(スケールノで表わしたものである(nt は試験を行わなかったことを意味する)。
1他の“組織とは、他の対象からの寡突起膠皿組織、大脳組織、小脳組織、中− 脳組織、2名の対象からの卵巣腫瘍組織、大腸組織、小腸組織、両組織、畢丸組 織、膵臓組織、甲状腺組織および早期胎盤組織である。
DS]A、N7300 DSIAN14400 DSIAN15210 DSIANA200 DSIANB100 DSIANC200 DSIAFA200 DSIAFB100 DSIANO2ntQ 国@!Ii’f報告

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 1.抗体の検出法であって、 (1)抗原−結合抗体を含有している試料を処理して幾らかの抗体を除去し、さ らに残余の結合抗体をブロックし; (2)処理後の試料をモノクローナル抗体にさらし;(3)モノクローナル抗体 含有試料をマーカーで標識し; (4)このマーカーを検出することからなる方法。 2.試料が腫瘍組織から得られたものである第1項記載の方法。 3.モノクローナル抗体が、検出すべき抗体と結合する抗原に関して特異的なも のである第1項または第2項記載の方法。
JP50337385A 1984-07-31 1985-07-30 抗体検出法 Pending JPS61502840A (ja)

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GB848419458A GB8419458D0 (en) 1984-07-31 1984-07-31 Antibody detection
GB8419458 1984-07-31

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JPS61502840A true JPS61502840A (ja) 1986-12-04

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JP50337385A Pending JPS61502840A (ja) 1984-07-31 1985-07-30 抗体検出法

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JP (1) JPS61502840A (ja)
GB (1) GB8419458D0 (ja)
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GB8419458D0 (en) 1984-09-05
WO1986000994A1 (en) 1986-02-13

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