JPS6146117B2 - - Google Patents

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Publication number
JPS6146117B2
JPS6146117B2 JP52089347A JP8934777A JPS6146117B2 JP S6146117 B2 JPS6146117 B2 JP S6146117B2 JP 52089347 A JP52089347 A JP 52089347A JP 8934777 A JP8934777 A JP 8934777A JP S6146117 B2 JPS6146117 B2 JP S6146117B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
lysine
enzyme
present
reagent
reaction
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired
Application number
JP52089347A
Other languages
English (en)
Other versions
JPS5424691A (en
Inventor
Kenji Soda
Toshiko Hirasawa
Toshiharu Yagi
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Mitsui Toatsu Chemicals Inc
Original Assignee
Mitsui Toatsu Chemicals Inc
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Filing date
Publication date
Application filed by Mitsui Toatsu Chemicals Inc filed Critical Mitsui Toatsu Chemicals Inc
Priority to JP8934777A priority Critical patent/JPS5424691A/ja
Publication of JPS5424691A publication Critical patent/JPS5424691A/ja
Publication of JPS6146117B2 publication Critical patent/JPS6146117B2/ja
Granted legal-status Critical Current

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  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Description

【発明の詳細な説明】
本発明はLーリジンの微量分析用試薬に関する
ものである。 本発明の目的は、たんぱく系食品、天然物、生
体試料、臨床検査用検体、化学反応生成物、培養
液などに含有されるLーリジンの定量分析用試薬
を提供することにある。 本発明試薬の特徴は、Lーリジンに特異性の高
いLーリジン−αケトグルタール酸ε−トランス
アミナーゼ(E,C,class 2,6,1,36)を
利用して他のアミノ酸の存在下でも、Lーリジン
のみを簡単な操作で、短時間に、しかも極めて正
確に比色定量するところにある。 従来、リジンの定量方法としては、マイクロバ
イオアツセイ法や、クロマトグラフイー・ニンヒ
ドリン法、およびリジン脱炭素酵素を用いる検圧
法などがあるが、マイクロバイオアツセイ法とニ
ンヒドリン法は、D−およびLーリジン双方に反
応する欠点を有しているし、検圧法は操作が非常
に繁雑である。 本発明者らは、上記の欠点を有しない、Lーリ
ジンのみを正確に定量できて、しかも操作が簡便
な比色定量法に用いる分析用試薬について種々、
研究を重ねた結果、Lーリジンのみに特異的に作
用するLーリジン−α−ケトグルタール酸ε−ト
ランスアミナーゼを含有する本発明試薬を利用す
ることにより、Lーリジンを高精度で定量できる
ことを見出して、本発明を完成した。 詳しくは、本発明は、Lーリジンを含有する分
析対象物に、該酵素含有液と充分量のα−ケトグ
ルタール酸を作用させて、その酵素作用により、
α−アミノアジピン酸δ−セミアルデヒドとL−
グルタミン酸とを生成する。生成したα−アミノ
アジピン酸δ−セミアルデヒドは不安定なため
に、脱水してΔ−ピペリジン−6−カルボン酸
になる。このΔ−ピペリジン−6−カルボン酸
は、発色試薬としてオルト−アミノベンズアルデ
ヒドが存在すると、オレンジ色の吸収極大465nm
の呈色物質を生成するので、この呈色物質を比色
定量すると元の分析対象物中のLーリジンが定量
できる。 これを化学反応式を用いて説明すれば次のよう
になる。
【表】 本発明に使用する前記の酵素は、該酵素生産能
を有するアクロモバクタ−リクイダム
(Achromobacter liquidum)IFO 3084,フラボ
バクテリウム フスカム(Flavobacterium
fuscum)IFO 12997,フラボバクテリウム フ
ラベセンス(Flavobacterium flavescens),のう
ち、いずれか1種又は2種以上の菌種を液体培養
し、その菌体より該酵素を採取するが、本発明者
の一人は、すでにアクロモバクタ−リクイダムか
ら単離・精製結晶化に成功している。
(Biochemistry 7,4102〜4109,4110〜4119
(1968))。 このようにして製造された該酵素は、純粋に結
晶化された世界最初の例であり、当然のことなが
らこの結晶酵素を用いる本発明の定量分析用試薬
は、該酵素の基質となるLーリジンを単独に定量
的に測定することを可能にした世界最初のLーリ
ジンの分析用試薬である。 次に該酵素を用いるLーリジンの定量操作につ
いて説明する。 本発明に使用する該酵素は、精製結晶化した標
品でもよいし、部分精製酵素でも合目的に使用で
きる。 本発明試薬を用いる場合の反応温度は、該酵素
最適温度、30〜40℃とりわけ37℃が望ましい。そ
の反応時間は、該酵素の必要反応時間40分間が望
ましく、そのPHは、該酵素の最適PH7.5〜8.5とり
わけPH8が望ましい。 本発明試薬によるLーリジン塩酸塩の定量可能
範囲は標準的な反応液組成物の場合、0.05〜2μ
molesであり、この範囲内において、Lーリジン
の量と吸光度の間には直線関係が成立する。 本発明に用いる標準的な反応液組成物の場合、
α−ケトグルタール酸は充分量を添加する必要が
あり、Lーリジン塩酸塩の定量範囲0.05〜2μ
molesの場合は、α−ケトグルタール酸は20μ
molesを添加するのが望ましい。 本発明に使用する該酵素は、補酵素として、ピ
リドキサール−5−燐酸を必要とするので、反応
液組成物には、必要量のピリドキサール−5−燐
酸を添加する。 更に反応液組成物には、発色試薬としてオルト
ーアミノベンズアルデヒドを存在させることが必
須であり、0.2M燐酸カリウム緩衝液(PH8)に
溶解したオルトーアミノベンズアルデヒドを必要
量添加する。 反応液のPHは、0.2M燐酸カリウム緩衝液でPH
8に保つ。必要な反応時間が経過後は、反応を停
止させるために、50%トリクロール酢酸液を必要
量添加する。反応の結果、分析対象物中に元来存
在していたLーリジンの量に比例して、呈色物質
が生成する。この呈色物質は吸収極大465nmであ
り、オレンジ色である。これを分光光度計を用い
て465nmで吸収を測定することにより、分析対象
物中のLーリジンの量を定量できる。 以下実施例によつて本発明の分析用試薬を用い
た比色定量反応の操作を説明する。 実施例 酵素反応液の組成を下記第1表の如く調整す
る。
【表】
【表】 以上の反応液組成物1.4mlを、そのまゝ遠心分
離できる試験管に入れ、37℃で40分間酵素反応を
おこない、50%トリクロール酢酸0.1mlを加えて
のち、遠心分離にかけて、その上澄の吸光度を
465nmで分光光度計を用いて測定する。 あらかじめ既知量のLーリジン塩酸塩により作
成した検量線と対比して、分析対象物中のLーリ
ジンの含量を知る。 測定結果を下記の第2表に示す。
【表】 更に本発明試薬の高い分析精度と正確な再現性
を証明するために、回収試験(Recovery Test)
を実施した。 即ち、天然物(微生物培養液)に既知量のLー
リジン・HC1を添加した区と、添加しない区とに
ついて、Lーリジンの量を本分析試薬を用いて測
定した結果、リカバリーは98.4%であつた。

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. 1 Lーリジン−α−ケトグルタール酸−ε−ト
    ランスアミナーゼ、α−ケトグルタール酸、ピリ
    ドキサール燐酸及びオルトーアミノベンズアルデ
    ヒドを含有することを特徴とするLーリジンの分
    析用試薬。
JP8934777A 1977-07-27 1977-07-27 Reagent for analyzing lllysin Granted JPS5424691A (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP8934777A JPS5424691A (en) 1977-07-27 1977-07-27 Reagent for analyzing lllysin

Applications Claiming Priority (1)

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JP8934777A JPS5424691A (en) 1977-07-27 1977-07-27 Reagent for analyzing lllysin

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPS5424691A JPS5424691A (en) 1979-02-24
JPS6146117B2 true JPS6146117B2 (ja) 1986-10-13

Family

ID=13968164

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP8934777A Granted JPS5424691A (en) 1977-07-27 1977-07-27 Reagent for analyzing lllysin

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JP (1) JPS5424691A (ja)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6057838A (ja) * 1983-09-09 1985-04-03 Konishiroku Photo Ind Co Ltd ハロゲン化銀カラ−写真感光材料

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6057838A (ja) * 1983-09-09 1985-04-03 Konishiroku Photo Ind Co Ltd ハロゲン化銀カラ−写真感光材料

Also Published As

Publication number Publication date
JPS5424691A (en) 1979-02-24

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