JPS6129764A - タンパク質又は核酸の高感度検出方法 - Google Patents
タンパク質又は核酸の高感度検出方法Info
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- JPS6129764A JPS6129764A JP59149574A JP14957484A JPS6129764A JP S6129764 A JPS6129764 A JP S6129764A JP 59149574 A JP59149574 A JP 59149574A JP 14957484 A JP14957484 A JP 14957484A JP S6129764 A JPS6129764 A JP S6129764A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、支持体中に電気泳動分離された生体成分の高
感度検出方法に関する。更に詳しくは、支持体中に電気
泳動分離されたタンパク質あるいは、核酸のような生体
成分を微量でも検出可能とする方法に関する。
感度検出方法に関する。更に詳しくは、支持体中に電気
泳動分離されたタンパク質あるいは、核酸のような生体
成分を微量でも検出可能とする方法に関する。
血漿、尿、脳を髄液、羊水等の体液中のタンパク質や、
ＤＮＡ、ＲＮＡ等の核酸などの検出及び同定には、支持
体を用いた電気泳動法が広く利用されており、生化学、
生物学、及び臨床医学の分野の研究に大きな貢献ｔして
きた。
ＤＮＡ、ＲＮＡ等の核酸などの検出及び同定には、支持
体を用いた電気泳動法が広く利用されており、生化学、
生物学、及び臨床医学の分野の研究に大きな貢献ｔして
きた。
通常、支持体としては、ゼラチン、寒天ゲル、１紙、デ
ンプングル、セルロースアセテート膜、ポリアクリルア
ミドゲル、アガロースゲル等が用いられ、電気泳動法Ｖ
ｃ＃：ｔ、ゲル電気泳動、ａＤ＆電気泳動、等電点電気
泳動、免疫電気泳動等がある。また、二次元電気泳動に
より、血漿タンパクのような複雑な組成のりｙ／シ質混
合物から の分離も可能となった。
ンプングル、セルロースアセテート膜、ポリアクリルア
ミドゲル、アガロースゲル等が用いられ、電気泳動法Ｖ
ｃ＃：ｔ、ゲル電気泳動、ａＤ＆電気泳動、等電点電気
泳動、免疫電気泳動等がある。また、二次元電気泳動に
より、血漿タンパクのような複雑な組成のりｙ／シ質混
合物から の分離も可能となった。
電気泳動分離され次タンパク質全検出する方法として、
従来色素により染色して行っていた。
従来色素により染色して行っていた。
最も普通に用いられている染料は、クニマッシーブリリ
アントブルーであり、その他に、アシドプラック、クリ
スタルバイオレット及ヒファストグリーン等が使用され
ている。また、電気泳動分離されたＤＮＡやＦＩＮＡｌ
ｊ、エチジウムブロマイトによる染色が行われている。
アントブルーであり、その他に、アシドプラック、クリ
スタルバイオレット及ヒファストグリーン等が使用され
ている。また、電気泳動分離されたＤＮＡやＦＩＮＡｌ
ｊ、エチジウムブロマイトによる染色が行われている。
しがし、これらの染色法では、検出感度が低いため、尿
や脳を髄液のようなタンバク質濃度の低い試料全分析す
る場合には、泳動前に濃縮操作が必要であり、そのため
分析の操作が煩雑となジ、また、濃縮時に、成分の変化
全件うという欠点がある。
や脳を髄液のようなタンバク質濃度の低い試料全分析す
る場合には、泳動前に濃縮操作が必要であり、そのため
分析の操作が煩雑となジ、また、濃縮時に、成分の変化
全件うという欠点がある。
また、高感度検出という点から、ラジオアイソトープに
よる標識をして、検出することが行われ、オートラジオ
グラフィーとして用いられているが、放射性物質全取扱
うことから、実験操作上の危険性、複雑さＶＣ加えて、
アイ・ソ） −プの廃棄の問題等容易に行える技術とは
、いい難い。
よる標識をして、検出することが行われ、オートラジオ
グラフィーとして用いられているが、放射性物質全取扱
うことから、実験操作上の危険性、複雑さＶＣ加えて、
アイ・ソ） −プの廃棄の問題等容易に行える技術とは
、いい難い。
近年、電気泳動により分離されたタンパク質及び核酸等
の島感度検出方法として銀染色法が開発された。銀染色
法の工程は、王に支持体中で分離されたクンバク質ある
いｉｊ：核酸上固定する工程、銀イオン又は銀錯イオン
浴液に浸漬して、銀と結合させる工程、及び還元剤で処
理する工程力）らなる。その例としては、クリニカルケ
ミストリー アクタ （Ｃ１１ｎｉｃａｌ Ｏｈｅｍｉ
ｓｔ−ｒｙ Ａａｔａ ）第５８巻第４６５〜４６７頁
（１９７２）、アナリチカル バイオケミストリー（Ａ
ｎａｌｙｔｉ−Ｏａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ）
第９８巻第２３１〜２５７頁（１９７９）、エレク
トロフオレシス（Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ）
第２巻第１３５頁及び第１４１頁（１９８１）、及び同
第３巻第１７へ２５頁（１９８２）等の文献に記載され
た諸方法があり、また「生化学」第５２巻第４１１〜４
．１３頁（１９８０）、「臨床検査」第２６巻第２１３
〜２２２頁（１９８２）及び「蛋白質−核酸・酵素」第
７２巻第１２７７〜１２７９頁（１９８２）等の総説が
ある。 ・〔発明が解決しよりとする問題点〕 これらの銀染色法は、前椰の色素染色による検出力法に
比べると高感度であるが、いまだ十分な検出力がおると
はいい難い。
の島感度検出方法として銀染色法が開発された。銀染色
法の工程は、王に支持体中で分離されたクンバク質ある
いｉｊ：核酸上固定する工程、銀イオン又は銀錯イオン
浴液に浸漬して、銀と結合させる工程、及び還元剤で処
理する工程力）らなる。その例としては、クリニカルケ
ミストリー アクタ （Ｃ１１ｎｉｃａｌ Ｏｈｅｍｉ
ｓｔ−ｒｙ Ａａｔａ ）第５８巻第４６５〜４６７頁
（１９７２）、アナリチカル バイオケミストリー（Ａ
ｎａｌｙｔｉ−Ｏａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ）
第９８巻第２３１〜２５７頁（１９７９）、エレク
トロフオレシス（Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ）
第２巻第１３５頁及び第１４１頁（１９８１）、及び同
第３巻第１７へ２５頁（１９８２）等の文献に記載され
た諸方法があり、また「生化学」第５２巻第４１１〜４
．１３頁（１９８０）、「臨床検査」第２６巻第２１３
〜２２２頁（１９８２）及び「蛋白質−核酸・酵素」第
７２巻第１２７７〜１２７９頁（１９８２）等の総説が
ある。 ・〔発明が解決しよりとする問題点〕 これらの銀染色法は、前椰の色素染色による検出力法に
比べると高感度であるが、いまだ十分な検出力がおると
はいい難い。
本発明の目的は、電気泳動により分離された生体成分、
特にタンパク質及び核酸金銀染色法により染色しＬ後、
高感度な検出上可能とする検出方法全提供することにあ
る。
特にタンパク質及び核酸金銀染色法により染色しＬ後、
高感度な検出上可能とする検出方法全提供することにあ
る。
本発明全概説すれば、本発明は分離タンパク質又は核酸
の高感度検出方法に関する発明であって、電気泳動によ
り分離された支持体中のタンパク質又は核酸金銀染色法
により染色する工程、及び得られた金属銀核に、酸化反
応により色変化を呈する物質の存在下、パーオキシ化合
物音作用させて、該銀核上で検知可能な化合物全形成さ
せる工程の各工程全包含することを特徴とする。
の高感度検出方法に関する発明であって、電気泳動によ
り分離された支持体中のタンパク質又は核酸金銀染色法
により染色する工程、及び得られた金属銀核に、酸化反
応により色変化を呈する物質の存在下、パーオキシ化合
物音作用させて、該銀核上で検知可能な化合物全形成さ
せる工程の各工程全包含することを特徴とする。
本発明でいう酸化反応とは、酸化反応を受けてそれ自身
が色変化を呈して検知可能な物質を形成する反応のみな
らず、ある種の化合物が酸化反応金堂けた後、該酸化体
が更にある種の化合物とカップリング反応會して検知可
能な化合物を形成する反応全も包含する。本発明におい
て検知可能な化合物としての好ましい例は色素である。
が色変化を呈して検知可能な物質を形成する反応のみな
らず、ある種の化合物が酸化反応金堂けた後、該酸化体
が更にある種の化合物とカップリング反応會して検知可
能な化合物を形成する反応全も包含する。本発明におい
て検知可能な化合物としての好ましい例は色素である。
したがって以下の説明では色素を例にとって説明するが
、これらに限定されるものではない。
、これらに限定されるものではない。
銀染色後に、色素前駆体を浸漬させ、次にパーオキシ化
合物？作用させると、銀核上でノく一オキシ化合物が接
触分解を受け、色素が形成され、結果として、タンパク
質及び核酸を銀グラス色素により染色することができる
。
合物？作用させると、銀核上でノく一オキシ化合物が接
触分解を受け、色素が形成され、結果として、タンパク
質及び核酸を銀グラス色素により染色することができる
。
この場合、パーオキシ化合物としては、無機パーオキシ
化合物、例えば、過酸化水素、過ホウ酸塩、過炭酸塩、
過硫酸塩等が挙げられ、また、有機パーオキシ化合物、
例えば過酸化ベンゾイル等も用いることができる。他方
、色素前駆体としては、酸化反応により色素を生成する
ような有機化合物が挙けられる。例えば、アミン及び／
又はヒドロキシ置換アリール化合物（例えばベンゼン系
又はナフタリン系の該化合物ン、アミノ及び／又はヒド
ロキシ置換複素環式化合物（例えば、ビロール系、ピリ
ジン系、ピラゾール糸、イミダゾール系、トリアゾール
系、ピリダジン系、ピリミジン系又は、ピラジノ系、イ
ンドール系、インダゾール系、キナゾリン系、キノキサ
リン系、アクリジン系、フェナジン系の環全有する化合
物ンが挙げられる。
化合物、例えば、過酸化水素、過ホウ酸塩、過炭酸塩、
過硫酸塩等が挙げられ、また、有機パーオキシ化合物、
例えば過酸化ベンゾイル等も用いることができる。他方
、色素前駆体としては、酸化反応により色素を生成する
ような有機化合物が挙けられる。例えば、アミン及び／
又はヒドロキシ置換アリール化合物（例えばベンゼン系
又はナフタリン系の該化合物ン、アミノ及び／又はヒド
ロキシ置換複素環式化合物（例えば、ビロール系、ピリ
ジン系、ピラゾール糸、イミダゾール系、トリアゾール
系、ピリダジン系、ピリミジン系又は、ピラジノ系、イ
ンドール系、インダゾール系、キナゾリン系、キノキサ
リン系、アクリジン系、フェナジン系の環全有する化合
物ンが挙げられる。
具体的には、フェノール、アニリン、ピロカテコール、
レゾルシノール、ヒドロキノン、０−ｌｍ−及Ｕｐ−フ
ェニレンジアミン、Ｎ、Ｎ−ジエチル−フェニレンジア
ミン、ｏ−ｌｍ−及ヒｐ−アミノフェノール、ｐ−メチ
ルアミノフェノール、２．４−ジアミノフェノール、１
，７−２１．５−又は２．５−ジヒドロキシナフタリン
、１゜６．７−）ジヒドロキシナフタリン、１．２−ジ
アミノナフタリン、１．８−ジアミノナフタリン、ベン
ジジン、２２２−ジヒドロキシベンジジン、２．４−ジ
アミノジフェニルアミン、３．８−ジヒドロキシキノリ
ン、５−ヒドロキシキノリン、２−ヒドロキシカルバゾ
ール、１−フェニルピラゾロン等が挙げられ、これらの
アミノ、ヒドロキシ、及びアミノヒドロキシ化合物は、
更に他の置換基金有してもよい。
レゾルシノール、ヒドロキノン、０−ｌｍ−及Ｕｐ−フ
ェニレンジアミン、Ｎ、Ｎ−ジエチル−フェニレンジア
ミン、ｏ−ｌｍ−及ヒｐ−アミノフェノール、ｐ−メチ
ルアミノフェノール、２．４−ジアミノフェノール、１
，７−２１．５−又は２．５−ジヒドロキシナフタリン
、１゜６．７−）ジヒドロキシナフタリン、１．２−ジ
アミノナフタリン、１．８−ジアミノナフタリン、ベン
ジジン、２２２−ジヒドロキシベンジジン、２．４−ジ
アミノジフェニルアミン、３．８−ジヒドロキシキノリ
ン、５−ヒドロキシキノリン、２−ヒドロキシカルバゾ
ール、１−フェニルピラゾロン等が挙げられ、これらの
アミノ、ヒドロキシ、及びアミノヒドロキシ化合物は、
更に他の置換基金有してもよい。
これらの化合物は、数種混合して用いることにより、個
々の成分よりも、酸化時に強力な。
々の成分よりも、酸化時に強力な。
染料生成作用を示すことがあり、例えば、〇−フェニレ
ンジアミンとピロカテコールとの混合物、Ｎ、Ｎ−ジエ
チルフェニレンジアミンとピロカテコールとの混合物等
である。芳香族のアミノ、ヒドロキシ及び／又はアミノ
ヒドロキシ化合物の酸化によりキノンイミン系及びアジ
ン系の単量体又に重合体である染料が生ずる。また酸化
により染料に変換できるバット染料及び無色染料化合物
（ロイコ色素）も用いることができる。
ンジアミンとピロカテコールとの混合物、Ｎ、Ｎ−ジエ
チルフェニレンジアミンとピロカテコールとの混合物等
である。芳香族のアミノ、ヒドロキシ及び／又はアミノ
ヒドロキシ化合物の酸化によりキノンイミン系及びアジ
ン系の単量体又に重合体である染料が生ずる。また酸化
により染料に変換できるバット染料及び無色染料化合物
（ロイコ色素）も用いることができる。
他の化合物との一連の反応を行ったと＠に、色素を形成
するような酸化可能な有機化合物も用いることができ、
一般にカップリングにより色素を形成する反応系が利用
できる。例えば、フェニレンジアミン系又はアミノピラ
ゾロン系のいわゆる写真用発色現像主薬が用いられる。
するような酸化可能な有機化合物も用いることができ、
一般にカップリングにより色素を形成する反応系が利用
できる。例えば、フェニレンジアミン系又はアミノピラ
ゾロン系のいわゆる写真用発色現像主薬が用いられる。
この点については、例えば、Ｔ、Ｈ，ジエムス（Ｔ。
ＨｌＪａｍｅｓ ）著「ザ・セオリー・オブ・ザ・フォ
トグラフィック番プロセスＪ （Ｔｈｅ Ｔｈθｏｒｙ
ｏｆｔｈｅ Ｐｈｏｔｏｇｒａｐｈｉｃ Ｐｒｏｃｅ
ｓｓ ） （第４版）２９１頁に詳しい。また、炭素環
式及び複素環式ヒドラジン類も適当な成分とのカップリ
ングにより色素音形成することができる。これら写真用
発色現像主薬は、金私銀（ｋ上で、パーオキシ化合物に
より接触酸化され、その酸化生成物は、あらかじめ、存
在させておいた、写真用カプラーと反応し、色素を形成
することができる。この目的のために任意のカラーカプ
ラーが利用でき、シアンカプラーとして例えばフェノー
ル系、ナフトール系カプラーが挙げられ、マゼンタカプ
ラーとして例えば、ピラゾロン系カグラーが挙げられ、
黄色カフーラーとして例えば、β−ジケトン系カプラー
が挙げられ、更に黒色カプラーとして例えばアミノフェ
ノール系カプラー等が挙げられる。
トグラフィック番プロセスＪ （Ｔｈｅ Ｔｈθｏｒｙ
ｏｆｔｈｅ Ｐｈｏｔｏｇｒａｐｈｉｃ Ｐｒｏｃｅ
ｓｓ ） （第４版）２９１頁に詳しい。また、炭素環
式及び複素環式ヒドラジン類も適当な成分とのカップリ
ングにより色素音形成することができる。これら写真用
発色現像主薬は、金私銀（ｋ上で、パーオキシ化合物に
より接触酸化され、その酸化生成物は、あらかじめ、存
在させておいた、写真用カプラーと反応し、色素を形成
することができる。この目的のために任意のカラーカプ
ラーが利用でき、シアンカプラーとして例えばフェノー
ル系、ナフトール系カプラーが挙げられ、マゼンタカプ
ラーとして例えば、ピラゾロン系カグラーが挙げられ、
黄色カフーラーとして例えば、β−ジケトン系カプラー
が挙げられ、更に黒色カプラーとして例えばアミノフェ
ノール系カプラー等が挙げられる。
本発明の検出方法においては、酸化反応により色変化音
量する物質は支持体中に含浸させるのが好ましい。この
場合、支持体全酸化反応により色変化？呈する物質の溶
液中に浸漬させる方法、あるいは該＃液金スプレーする
方法等がある。
量する物質は支持体中に含浸させるのが好ましい。この
場合、支持体全酸化反応により色変化？呈する物質の溶
液中に浸漬させる方法、あるいは該＃液金スプレーする
方法等がある。
パーオキシ化合物を金属銀核に作用させる方法としては
、上記と同様に、浴液を用いる浸漬又はスプレー等の方
法がある。
、上記と同様に、浴液を用いる浸漬又はスプレー等の方
法がある。
また、酸化反応により色変化を呈する物質とパーオキシ
化合物とを同一浴液として、１回の操作で支持体中に含
浸させることもできる。
化合物とを同一浴液として、１回の操作で支持体中に含
浸させることもできる。
検出方法としては、一般に、目視による検出方法が容易
であり、′！また色素濃度全測定することにより半定量
的に検出することができる。
であり、′！また色素濃度全測定することにより半定量
的に検出することができる。
以下、本発明全実施例により更に具体的に説明するが、
本発明はこれら実施例に限定きれない。
本発明はこれら実施例に限定きれない。
実施例１
ネーチャー（Ｎａｔｕｒｅ ） 第２２７巻第６８０
頁（１９７０）に示された方法金基に、１９ＤＳ −電
気泳動により、タンパク質の分離を行った。
頁（１９７０）に示された方法金基に、１９ＤＳ −電
気泳動により、タンパク質の分離を行った。
１０％ポリアクリルアミドゲル（１６ｃｎＸ１２３）、
厚さ１ｍ全作成して、電気泳動分離全行つ７’Ｃ後、エ
レクトロフォレシス（ｇｌｅｃｔｒｏｐｈｏ−ｒｅθ１
８）第２巻第１４１頁（１９８１）の方法に従って、銀
染色法により染色を行った。すなわち、ゲルｉ５０％メ
タノール７１０％酢酸水浴液２００−に５０分間浸漬し
、次に１５％メタノール水浴液２００−に１０分ずつ３
回浸漬後、６チグルタルアルデヒド２０Ｇ−に５０分間
浸漬、１５％メタノール水＃！液浸漬、更に水洗して、
メルカフ′トエタノール、ラウリル硫酸ナトリウムなど
の除去及びタンパク質の固定化全行った。次に、アンモ
ニア性硝陵銀浴液（α０２ＮＮａＯｆｉ１６０−に２５
％アンモニア水６−と２０チ硝＠銀１１１ｄｉ加え、水
で２００−にするＪＩＣｌ ０分間（２５℃）浸漬し、
水洗後、ａ００５％クエン酸２００１ｄに５７チホルマ
リンＣＬ １ ｄｉ加えた尋液に、銀像スポットが現れ
るまで約１０分間浸漬し、水洗して銀染色したゲル倉得
た。
厚さ１ｍ全作成して、電気泳動分離全行つ７’Ｃ後、エ
レクトロフォレシス（ｇｌｅｃｔｒｏｐｈｏ−ｒｅθ１
８）第２巻第１４１頁（１９８１）の方法に従って、銀
染色法により染色を行った。すなわち、ゲルｉ５０％メ
タノール７１０％酢酸水浴液２００−に５０分間浸漬し
、次に１５％メタノール水浴液２００−に１０分ずつ３
回浸漬後、６チグルタルアルデヒド２０Ｇ−に５０分間
浸漬、１５％メタノール水＃！液浸漬、更に水洗して、
メルカフ′トエタノール、ラウリル硫酸ナトリウムなど
の除去及びタンパク質の固定化全行った。次に、アンモ
ニア性硝陵銀浴液（α０２ＮＮａＯｆｉ１６０−に２５
％アンモニア水６−と２０チ硝＠銀１１１ｄｉ加え、水
で２００−にするＪＩＣｌ ０分間（２５℃）浸漬し、
水洗後、ａ００５％クエン酸２００１ｄに５７チホルマ
リンＣＬ １ ｄｉ加えた尋液に、銀像スポットが現れ
るまで約１０分間浸漬し、水洗して銀染色したゲル倉得
た。
次に、この銀染色したゲル音用いて、色素形成によ６烏
感度染色を行った。
感度染色を行った。
まず、下記の組成の液（１）に、グル紮、２分間（室温
）浸演し、色素前駆体を含浸させた。
）浸演し、色素前駆体を含浸させた。
液組成（１）（使用直前ｖｃ調製した）次にゲルを室温
で１分間水洗し、下記の組成のｇ（２）に浸漬した。
で１分間水洗し、下記の組成のｇ（２）に浸漬した。
液組成（２）
浸漬後、すぐに発色し始め、数分で終了した。
タンパク質としてオポアルプミｙ （ｏｖａｌｂｕｍｉ
ｎ）を使用し、段階希釈して濃縮ゲルの溝に、それぞれ
１０ｎｆ、５ｎｆ、１ｎｌＦ、（Ｌ５ｎｆ、（Ｌｌｎｌ
Ｆ を加え、５Ｄ８−電気泳動後、銀染色処理をした。
ｎ）を使用し、段階希釈して濃縮ゲルの溝に、それぞれ
１０ｎｆ、５ｎｆ、１ｎｌＦ、（Ｌ５ｎｆ、（Ｌｌｎｌ
Ｆ を加え、５Ｄ８−電気泳動後、銀染色処理をした。
その結果、１ ｎｆのオボアルプミンは検出できたが、
ａ５ｎｆのものは検出できなかった。
ａ５ｎｆのものは検出できなかった。
次に、銀染色ゲルで本発明による処理を行ったところ、
ａｌｎｆのオボアルプミンを検出することができた。
ａｌｎｆのオボアルプミンを検出することができた。
同様に、ホスホリラーゼＢ （ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａ
ｓｅＢ）を用いて検出を行ったところ、目視によシ銀染
色法では、５ｎｆのホスホリラーゼＢしか検出できなか
ったが、本発明による処理を加えることによＪ、０．５
ｎｆのホスホリラーゼＢを検出することができた。
ｓｅＢ）を用いて検出を行ったところ、目視によシ銀染
色法では、５ｎｆのホスホリラーゼＢしか検出できなか
ったが、本発明による処理を加えることによＪ、０．５
ｎｆのホスホリラーゼＢを検出することができた。
また、液（１）と液（２）を等量混合した液を用いて、
銀染色後のゲルを処理したところ、同様の結果が得られ
、１回の処理によっても、高感度な検出を行うことがで
きた。
銀染色後のゲルを処理したところ、同様の結果が得られ
、１回の処理によっても、高感度な検出を行うことがで
きた。
このようにして本発明によシ、従来の銀染色後に、簡単
な処理操作を付加することにょシ、タンパク質を高感度
検出することができた。
な処理操作を付加することにょシ、タンパク質を高感度
検出することができた。
実施例２
血漿タンパク質を、一次元目を等電点電気泳動（４５％
ポリアクリルアミドゲル、ｐＨグラジェント五５〜９．
５）分離し、二次太目を、＋３Ｄｓ電気泳動（１０％ポ
リアクリルアミドゲル、ゲル厚１■）分離した。このゲ
ルを実施例１で用いた銀染色法に従って、染色を行った
。
ポリアクリルアミドゲル、ｐＨグラジェント五５〜９．
５）分離し、二次太目を、＋３Ｄｓ電気泳動（１０％ポ
リアクリルアミドゲル、ゲル厚１■）分離した。このゲ
ルを実施例１で用いた銀染色法に従って、染色を行った
。
こうして得られた銀染色ゲルを、下記の組成の液Ｃ５）
Ｋ室温で２分間浸漬した。
Ｋ室温で２分間浸漬した。
液組成（３）（使用直前に調製した。）次にゲルを室温
で１分間水洗し、下記の組成の液（りに浸漬した。
で１分間水洗し、下記の組成の液（りに浸漬した。
液組成（４）
浸漬後、すぐに発色し始め、数分で終了した。
このように、二次元電気泳動においても、高感度染色を
行うことができた。
行うことができた。
実施例３
８チポリアクリルアミドゲル（厚さα７露）を作成し、
バクテリオファージλ（ＣＩ８５７ Ｓａｍ７）のＤＮ
ＡをＢ。ｏＲ工制限酵素で処理したＤＮＡ断片を、量を
変えて電気泳動法によシ展開し、実施例１で示した銀染
色法によシ染色を行った。
バクテリオファージλ（ＣＩ８５７ Ｓａｍ７）のＤＮ
ＡをＢ。ｏＲ工制限酵素で処理したＤＮＡ断片を、量を
変えて電気泳動法によシ展開し、実施例１で示した銀染
色法によシ染色を行った。
次に、下記の組成の液（５）に室温で２分間汐洟した。
液組成（５）（使用直前に自製した。］次に、ゲル會室
温で１分間水洗し、実施例１で用いた過酸化水素液（２
）に浸漬した。浸由俊、すぐに発色し始め、数分で終了
した。
温で１分間水洗し、実施例１で用いた過酸化水素液（２
）に浸漬した。浸由俊、すぐに発色し始め、数分で終了
した。
ＤＮＡ断片の１００ ｎｆ、５０ ｎｆ、１０ ｎｆ、
５ｎｆ。
５ｎｆ。
１ ｎｆ會電気原動により展間し７’Ｃ後、目視で銀染
色後では、１０ｎｆのＤＮＡ断片しか検出できなかった
が、本発明による処理を加えると、５ｎｆのＤＮＡ断片
を検出することができた。
色後では、１０ｎｆのＤＮＡ断片しか検出できなかった
が、本発明による処理を加えると、５ｎｆのＤＮＡ断片
を検出することができた。
以上説明したように、本発明の方法によれば、従来の銀
染色法に色票形成の簡単な操作を付加することによって
、電気泳動分離され几タンノ（り質及び核酸の染色濃度
が増強されて、高感就の染色を行うことができｋｌ、ま
た、銀染色法でに可視化できない微量の上記成分の検出
が可能となり九。
染色法に色票形成の簡単な操作を付加することによって
、電気泳動分離され几タンノ（り質及び核酸の染色濃度
が増強されて、高感就の染色を行うことができｋｌ、ま
た、銀染色法でに可視化できない微量の上記成分の検出
が可能となり九。
Claims (1)
- １、電気泳動により分離された支持体中のタンパク質又
は核酸を銀染色法により染色する工程、及び得られた金
属銀核に、酸化反応により色変化を呈する物質の存在下
、パーオキシ化合物を作用させて、該銀核上で検知可能
な化合物を形成させる工程の各工程を包含することを特
徴とする分離タンパク質又は核酸の高感度検出方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59149574A JPS6129764A (ja) | 1984-07-20 | 1984-07-20 | タンパク質又は核酸の高感度検出方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59149574A JPS6129764A (ja) | 1984-07-20 | 1984-07-20 | タンパク質又は核酸の高感度検出方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6129764A true JPS6129764A (ja) | 1986-02-10 |
Family
ID=15478164
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59149574A Pending JPS6129764A (ja) | 1984-07-20 | 1984-07-20 | タンパク質又は核酸の高感度検出方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6129764A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02500001U (ja) * | 1986-11-04 | 1990-03-01 | ||
| US5895574A (en) * | 1996-04-26 | 1999-04-20 | Donaldson Company, Inc. | Rolled liquid filter using fluted media |
| JP2001255331A (ja) * | 2000-03-13 | 2001-09-21 | Iatron Lab Inc | アスコルビン酸の分析方法及び分析用試薬 |
| US9844743B2 (en) | 2011-11-07 | 2017-12-19 | Toyota Boshoku Kabushiki Kaisha | Oil deterioration prevention device |
| US10369498B2 (en) | 2012-05-07 | 2019-08-06 | Toyota Boshoku Kabushiki Kaisha | Oil deterioration suppressing apparatus |
-
1984
- 1984-07-20 JP JP59149574A patent/JPS6129764A/ja active Pending
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02500001U (ja) * | 1986-11-04 | 1990-03-01 | ||
| US5895574A (en) * | 1996-04-26 | 1999-04-20 | Donaldson Company, Inc. | Rolled liquid filter using fluted media |
| JP2001255331A (ja) * | 2000-03-13 | 2001-09-21 | Iatron Lab Inc | アスコルビン酸の分析方法及び分析用試薬 |
| JP4647742B2 (ja) * | 2000-03-13 | 2011-03-09 | 三菱化学メディエンス株式会社 | アスコルビン酸の分析方法及び分析用試薬 |
| US9844743B2 (en) | 2011-11-07 | 2017-12-19 | Toyota Boshoku Kabushiki Kaisha | Oil deterioration prevention device |
| US10369498B2 (en) | 2012-05-07 | 2019-08-06 | Toyota Boshoku Kabushiki Kaisha | Oil deterioration suppressing apparatus |
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