JPS61286756A - エイズウイルスのエンベロ−プ糖タンパクに関連する抗原、その製法及び用途 - Google Patents

エイズウイルスのエンベロ−プ糖タンパクに関連する抗原、その製法及び用途

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JPS61286756A
JPS61286756A JP61086932A JP8693286A JPS61286756A JP S61286756 A JPS61286756 A JP S61286756A JP 61086932 A JP61086932 A JP 61086932A JP 8693286 A JP8693286 A JP 8693286A JP S61286756 A JPS61286756 A JP S61286756A
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serum
virus
lav
infected
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JP61086932A
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リユツク・モンテニエ
フランソワーズ・レイ
ベルナール・クリユスト
フランソワ・クラヴエル
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Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Institut Pasteur de Lille
Original Assignee
Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Institut Pasteur de Lille
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はｌＩＤ５（エイズ）ウィルスのエンベロープ糖
タンパクに関連する抗原、特にこの糖タンパクの前駆体
及びこれら抗原から誘導されるフラグメント（断片）に
係る。本発明は更にこれらの抗原、前駆体及びフラグメ
ントの製法に係る他、免疫原性組成物の製造、又はＡＩ
ＤＳもしくはこれと同種の疾患、例えばリンパ部障害（
ＬＡＳ）の診断、或いはより一般的にヒト血清の如き生
物学的媒質中にＬＡＶウィルスもしくは同種のウィルス
を選択的に認識し得る抗体が存在するか否かの診断に有
用な組成物における前記抗原、前駆体及びフラグメント
の使用にも係る０本出願は１９８４年１０月１８日付出
願のフランス国特；１出願ｗ４８４１６０１３号にＩＩ
達する出願であり、前記特許出願の序文には前述の如き
ウィルスに圓する幾つかの科学論文の文献目録が挙げら
れている。
前記特許出願では約１１０，０００ダルトンの分子量、
より特定的には１１０．０００〜１２０，０００の見掛
は分子量を有するエンベロープ糖タンパクを既に開示し
た。この糖タンパクは以俊略号ｒａｐ　１１０Ｊで表わ
す、その存在は、感染したリンパ球から得られ且つ３５
８−システィンで標識されたＬＡＶウィルスの溶解物（
ライセード）中に検出し得る。この糖タンパクはＬＡＳ
又はＡＩＤＳに感染した被検者からの血清により選択的
に認識される。
本発明はｇｐ　１ｉｏの前駆体であれ、フラグメントで
あれ、とにか（ｉ；１１）１１０に関連する種々の抗原
と、ｇｐ　１１０を含めてこれら全ての抗原の取得を可
醍にする駈用手段（１１！１株及び方法）とに係る。
より特定的には本発明は、１５０．０００と１３５．０
００ダルトンのオーダーの分子量を有する糖タンパクに
係る（これらの分子量は、詰タンパクの移動距離を測定
し、既知分子量の基準タンパク質、例えば前出の特許出
願で同定されたタンパク質の移動距離と比較することに
よって評価する）、これらの新規糖タンパクもｇｐ　１
１０の下記の如き特性を有する。
３５Ｓ−システインで標識できる。
−コンカナバリンＡと共に複合体を形成し得る。
これらの複合体は次いでＯ−メチル−アルファー［）−
ンンノビラノシドの存在下で解離し得る。
一別のレクチン、例えば「レンヂルーレクチン（ＬＥＮ
ＴＹＬ−ＬＥＣＴＩＮＥＳ）　Ｊの名称で知られている
レクチンと共に複合体を形成し得る。
−エンドグリコシダーゼ、特にエンド−ベータ−メチル
グリコサミニダーゼ−Ｈ（略号エンド−Ｈ）の作用に敏
感である。
−［”Ｃ］−グルコサミンで標識できる。
−ＡＩＤＳ又はｉ　Ａ　Ｓに感染したヒトの血清により
特異的にｇ識できる。
以下の説明では分子ｆｆｉ　１５０，０００ダルトンの
糖タンパク及び分子ｆｉ　１３５，０００ダルトンの糖
タンパクを夫々略号ｒｏｃ１５０Ｊ及びｒｇｐ１３５Ｊ
で表わす。
ｇｐ　ｉｓｏのポリペプチド骨格構造は遺伝子「ｅｎｖ
Ｊの総合コード能力の結果得られる構造と相関関゛係に
あるに違いないと考えられる。Ｆｌ記ｅｎｖ　遺伝子の
ヌクレオチド構造はウエインーホプソン・ニス（賀＾ｌ
Ｎ−Ｈ０ＢＳＯＮ、　Ｓ、）他、セル（Ｃｅ　Ｉ　Ｉ　
）第４０巻、９〜１７ページ、１９８５年の論文から推
定し得る。前記ポリペプチド骨格（見掛は分子量約９０
．０００）は、ウェインーホブソンの論文の第１図のヌ
クレオチド構造から夫々結論されるように、位置５７６
７と位に８３５０との間に伸びるヌクレオチド配列によ
ってコードされたポリペプチド配列に対応すると思われ
る。
Ｑｐ１３５には、Ωｐ　１５０のペプチド骨格のＣ末端
部分に相当すると思われる分子量約１５，０００の末端
ペプチド配列をタンパク分解で開裂した結果前記骨格か
ら読導される、より短いポリペプチド骨格が対応するに
違いないと考えられる。
本発明は更に、これらの前駆体を大蚤に製造するための
手段、特に正常Ｔ４リンパ球とＪ、　Ｍａｔｌ。
Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎ５ｔ、４９．８９１（１９７２年）
に記載のミノワダ・ジェー（ＨＩＭＯＷＡＤ＾、ｊ、）
他のＨＯＬＴ−４系の細胞又は類似物との間で形成され
るハイブリッド１１１１１１にも係る。前記ハイブリッ
ド細胞は表面に１４分子を発現せしめ得るという特徴と
、ＬＡＶウィルス又は同種ウィルスによる感染に敏感で
あるという特徴とを１１６゜ 尚、ＨＯＬＴ−４系の細胞は白血病にかかった患者から
分離したリンパ球様１１［ｌ胞に由来する。
問題のｆ！類のハイブリッドはＬＡＶウィルスによる感
染の結果、ウィルスゲノムにコードされたタンパク質を
主として産生じ得るようになり、そのため前記タンパク
質を大量に得ることが可能になると共に、ウィルスサイ
クルにおけるこれらタンパク質各々の相対的割合の変化
を調べることが可能になる。これについてはこの種の検
査を行なうための条件に関する後の説明で明らかにされ
よう。
これらのハイブリッドは特に下記の如く製造し得る。
ＮａｔｌＪｒｅ誌（ロンドン）、旦２．７８７　（１９
８４年）に記載のクラララマン・ディー（ＫＬ＾ＴＺＨ
ＡＮＭ、　Ｄ、）他の方法に従い、血液ドナーのＴ４リ
ンパ球を分離する１次いで従来のハイブリドーマ形成方
法によりポリエチレングリコールの存在下でこれらのリ
ンパ球をＭＯＬＴ−４／Ｔに一系の細胞と融合させる。
形成したハイブリッドをマイクロタイタープレートのウ
ェルの中のＨＡＴ媒質（培地）中で選別し、表面に１４
分子を発現するクローンを回収する。
これらのクローンはオルト（ＯＲＴＨＯ）社から商品名
θに■４として市販されているモノクローナル抗体にＴ
Ｋ−ｍｉｌｌｉ系（セルライン）は、パリのパスツール
研の国立微生物培養コレクションｌａ　Ｃｏ１１ｅｃｔ
ｉｏｎＮａｔｉＯｎａｌｅ　ｄｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｄ
ｅ　Ｈｉｃｒｏ−Ｏｒｇａｎｉｓｍｅｓ−Ｃ。
Ｎ、Ｃ，Ｈ，）に１９８５年４月１５日付で第１−４３
４号として委託された。
勿論ＨＯＬＴ−４／　Ｔに一系に代えて、細胞融合中に
Ｔ４リンパ球により相補され得る運転学的欠損を有する
他の任意のＨＯＬＴ−４変異種を使用することもできる
。この場合前記相補は所望ハイブリッドの選別の適切な
基準となる。
本発明のハイブリッドの代表的ハイブリッドも１９８５
年４月１５日に第１−４３５号としてＣ，Ｎ、Ｃ，Ｈ，
に寄託された。この種のハイブリッドは前述のミノワタ
他による培地中で培養し得る。
選別した細胞ハイブリッド、特に前述の如きハイブリッ
ドは遠心分離による濃縮模、前出の特許出願に記載の方
法、特にＳｃ　１ｅｎｃｅ、　２２０．８６８（１９８
３年）のエフ・バールーシヌツシ（Ｆ−ＢＡＲＲＥ−３
ｒＮＯＵＳＳＩ）他の論文、又は１９８３年９月１５日
出願の英国特許出願第８３２４８００号の優先権を主張
して１９８４年９月１４日に出願された欧州特許出願用
８４４０１８３４号に記載の条件下でＬＡＳ又はＡＩＤ
Ｓにかかった患者から得たＬＡＶ分離物により予め感染
させた正常リンパ球によって産生される伝染性ウィルス
上清に前記ｍ胞ハイブリッドを再懸濁させる方法に従っ
て、ＬＡＶウィルス又は類似物により感染させることが
できる。
前記欧州特許出願でＬＡＶ　１と称されているようなＬ
ＡＶウィルスによって感染させると、前記ハイブリッド
ｉｕｉは感染したハイブリッドｌｌｌ１１相７ｉ間又は
未感染ハイブリッドＩＡ胞と感染ハイブリッド細胞との
間の融合の結果として、多核［１１１１４（ｐｏｌｙｃ
ａｒｉｏｎｓ）又は巨大シンシチウム（ｓｙｎｃ　＋　
ｔ　ｉ　ａｓｇｅａｎｔｓ）を産生せしめる。これら巨
大シンシチウムは、特にアセトンによる固定後に、問接
免疫蛍光法の実験において抗−ＬＡＶ抗体保持者のＩｔ
ｈ消との閂で強い免疫蛍光反応を生起する。これらのシ
ンシチウムは、特に培地中又はこれらシンシチウムを懸
濁し得るＢ質中で重力の作用による簡単なデカンテーシ
ョンによって容易に１ｆ１１！！できる。
前ｉホの方法は後述の条灯下で、前記前駆体が出現する
ウィルスサイクル時点の確認を可能にした。
これらの前駆体は後で第１図に関する説明の中で述べる
条件の下に甲題し得る。
特に、ｇｐ　１５０はウィルス＠染の初期、例えば最初
の３時間が経過した後に甲−のバンドとして出現し、ｇ
ｐ　１３５はそれより遅く、特に１２時間後に出現する
。
Ｑｐ　１１０自体が出現する際の条件、及び単離し得る
他の抗原との関係については後で特に第２図を参照しな
がら説明する。第２図の説明も後で行なう。
そこで次に、ｆｌ述の条件でｉｓしたシンシチウムから
ｇｐ　ｉｓｏ及びｇｐ　１３５を検出した際の条件を説
明する。
３時間又は１２時特種識した後前記シンシチウムを洗浄
剤溶液に溶解し、この清澄溶解物をＬＡＶに陽性のｇｌ
で免疫０：晴処理し、変性させ、次いでドデシル！ｉＱ
Ｍブトリウム（ＳＤＳ）ゲルを用いるｔ気泳動により分
析した。３時間の標：Ａ後には分子ｆｆｉ　１５０．０
００（１５０Ｋ）のバンドが検出された。より艮＜（１
２時間）標識すれば別の１３５にのバンドが検出される
ことになる。この１３５にのバンドは前駆体１５０にの
誘導体と見なし得る。＋１０に〜１２０にのバンドは全
く検出されなかった。この事実はΩｐ１１０が遊離ウィ
ルス粒子に＋１１達するのであって、形成中のウィルス
にｌ１ｌＱ′１１するのではないことを示す。
エンド−Ｈで処理すると、１５０にバンド及び１３５に
バンドは分子愚が夫々９５．０００（９５Ｋ）及び８０
．０００（８０Ｋ）の２つのバンドに縮小された（第１
図）。
そこで更に検査を行なえば、次の仮定が成立しｑる。前
駆体ｇｐ　１５０はＩｖｉ述の如きウィルスゲノム配列
から推定されるように二遺伝子のコード配列全体に対応
する。ｆ！ｌち炭水化物残基を考慮しなければ９５にの
ポリペプチド鎖に対応する。
［ｌ胞質内又は細胞膜の近傍で生起する暮と思われる最
初のタンパク分解開裂の侵でりｐ１５０は糖タンパクｇ
ｐ　１３りに変換する（炭水化物残基の分離模、８０に
のポリペプチド骨格が前記糖タンパクｇ＋１１３５に対
応する）、ウィルスの形態形成の間に、（１１）１３５
が今度はｇｐ　１１０〜１２０に変化する。これはタン
パク分解開裂が生起しない時は、炭水化物残基が酵素に
より部分的に除去されるからである。
！；１１１１５０及び（Ｊｐ　１３５は前２特許出願で
（ｌｐ　１１０に関して記述されている方法と同じ方法
で、対応シンシチウム溶解物から取得し精製することも
できる。
同様にして、ｇｐ　ｉｉｏの単離に濁して前記特許出願
に記載されている抗体産生技術、より特定的にはモノク
ローナル抗体産生技術も、ｇｐ　１５０及びｇｐ１３５
に対ツる抗体、より特定的には特異的モノクローナル抗
体の産生に全く同様の条件下で使用し得る。これらのモ
ノクローナル抗体自体は、特に適切な支持体に固定され
た後で且つ（ＩｃＩ　１１０に関して前記特許出願に記
載の条件で、ｇｐ１５０及びｇｐ１３５のより高度な精
製に使用し得る。゛前記［１出願でＯｐ　１１０につい
て説明されているのと同様に、Ｑｐ１５０及び＋ｌｌ）
　１３５も同様の条件下でヒクルと共に含み、生体宿主
、特にヒトへの投与が可能であるような免疫原性組成物
に係る。この種の組成物は例えば、１０〜５００、特に
５０〜１００　＃／υの単位用けを投与し得るように抗
原が調合されていることを特徴とする。
ｇｐ　１５０及びｇｐ　１３５はやはり前記特許出願の
ｇｐｌｌｏに１１０する条件と同一の条件下で、Ｌ△■
ウィルス又は類似物に起因する病気にかかった患者、又
はこれらのウィルスに対して免疫された人の遇当なり一
物学的ｔＩＭ頚、特に自消又は脳を柱液中に抗−ＬＡＶ
抗体を検出するための診断法及び診断キットで使用する
こともできる。ｇｐ　１５０又は００１３５の診断テス
ト又は診断キットへの使用は、これらをΩｐ１１０より
優先して認識し得る血清の診断には特に有利でありＩＳ
る。これらの診断法及び診断キットを使用するための条
件については前記特許出願の記述と、本出願の特許請求
の範囲の一部分を参照されたい。これらの記述は本発明
の診断法及び診断キットの好ましい形態を規定しており
篭、本明細四の一部分をなすと見なされる。
表面にｇｐ　１５０を発現するか、又はｇｐ　１５０と
ＱＤ１３５とを同時に発現する細胞ハイブリッドも本発
明の一部分ななす。これらの１１１１ハイブリツドは、
特に固定状態にある時には、診断キットの一部分をなし
得る。その場合の診断法は、ｒｔＩ記糖タンパク又は糖
タンパク断片を担持し且つ例えばアセトン又は任意の適
切な固定溶液によって予めムソ定されたこれらＩＥ！胞
ハイブリッドを前述の如き黒石又はヒトの血清と接触さ
せ、次いで従来の方法により、特に標識されたマウス抗
−ヒト免疫グロブリン抗体（放割性標識、酵素標識、蛍
光標識、等々〉を用いて、ｉ柊的に固定されたハイブリ
ッドの検出を行なうことからなってよい。
以下Ｑｐ１１０の性質と、ＬＡＶウィルス（この場合は
ＬＡＶ　　１）に感染したリンパ球もしくはＣＥＭａｌ
胞の培養株から単離し得る他の抗原に対するｇｌ）　１
１０の関係とについての補足データを説明する。
使用したＣＥＭＩＩ胞は＾ＴＣＣＣＣＬ　１９系から表
面に１４分子を有することが判明した株の系統（１９８
５年１月２９日番号ｌ−４１６及び！−４１７でＣ，Ｎ
、Ｃ，Ｈ，に寄託）を選択することによってｑだ。
これらのデ＝りは特定的には次の方法で得た。
正常ドナーのＴリンパ球とＣＥＭｌｖｌとをしＡｖ１ウ
ィルスで感染させ、次いで非標識システィンを含有しな
い媒質中で３５８−システィンにより標識した。次に、
これら細胞の培養の清澄上澄みを前記特許出願に記載の
如く遠心分離によって処理した。この上澄みをＲ）ＰＡ
ｉｌ衝液中に溶解し、次いでＬＡＶに感染した人、又は
感染してない人から得たヒト血清と共にインキュベート
した。
前記ウィルス溶解物を第２図の説明で述べるように分析
するとその都度、ＡＩＤＳにかかった患者からの血清に
よって検出され、且つ、ｇｐｌｌｏのみならず前記溶解
物のゲル電気泳動で夫々分子量７０に、　４０Ｋ及び３
４Ｋに相当する細いバンドを示す゛タンパク質もＨ’ｔ
Ｋされる。これらのタンパク質はいずれも前記患者の血
清により特異的に免疫沈降する。これらの血清がｇａｇ
タンパク質を全り認識しないならば、これらのタンパク
質が抗原的にｇｐｌｌｏと同種であり、ｏｐ　ｉｉｏの
開裂生成物であると推論し得る。「イムノブロッチン（
ｉｓｓｕｎｏｂｌｏ℃ｔａｎｅ）Ｊと称するＰ紙上に移
行させる技術を用いると、前記バンドは更に明白になる
。このＰ紙は第２図の説明でも言及されている。
感染したＴリンパ球の培養株を［”Ｃ］−グルコサミン
で代謝的に標識した場合にも同種の結果が得られる。予
め遠心処理しておいたウィルス溶解物でも、ＳＤＳ含有
ポリアクリルアミドゲル（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）を用いる
テストにおいてＬＡＶに陽性の血清により複数の免疫沈
降バンドが得られた。
ｇｐｌｉｏのレベルで前記血清により特異的に認識され
るバンド以外に、バンド７０Ｋ及び４２にのレベルでも
特異的免疫沈降が観察された。
これらの７０Ｋ及び４０にのタンパク質が殆んど確実に
タンパク質ｇｐ　ｉｌｏの開裂（減成）生成物を構成す
るという事実は、ｅｎｖ遺伝子の２７３のレベルで可能
なタンパク分解部位を出現せしめるウイルスゲツムのヌ
クレオチド配列の検査によっても確認される。４０にタ
ンパク質は恐らくエンベロープ糖タンパクの躾透過部分
に相当する。
ウェインーホブソンの論文のヌクレオチド配列を参照す
ると、７０Ｋ及び４０にタンパク質は、−７０にタンパ
ク質の場合には位［５７６７とほぼ７２９７〜７３２７
の位ｉとの間に延び、−４０にタンパク質の場合にはほ
ぼ７２９７〜７３２７の位四と位！！　８３５０との間
に延びるヌクレオチド配列によって夫々コードされるポ
リペプチドと共通のポリペプチド配列を共有すると思わ
れる。
従って７０Ｋ及び４０にタンパク買自体も本発明の一部
分をなす、これらのタンパク質は糖タンパク０１）　１
１０．　ｇｐ　１３５及び−ｇｐ　１５０と全く同様に
これら糖タンパクに関して説明した診断法及び診断用キ
ットに使用し得る。
勿論本ｎ明は、本特許出願明細古でより特定的に説明し
てきたものと等価のポリペプチド（炭水化掬残蟇を有し
ても有さなくても）、特に類似のアミノ酸配列を有しｎ
つ遺伝子工学技術により産生されるようなポリペプチド
にも係る。またアミノ酸配列の一部分がｒ＋題のポリペ
プチドの免疫学的性質を余り変化させることなく変更さ
れるようなポリペプチドも勿論本出願の特許請求の範囲
に含まれる。従って本発明は、本特許出願明細みでより
特定的に説明したものと異なる種のＬＡＶウィルスに由
来する同等のポリペプチドにも係る。
第１図の説明：　ＬＡＶのエンベロープ糖タンパク及び
そのｌＩ胞内前駆体に対するエンド−Ｈの作用 ３５Ｓ−システインで１２時間標識したＬＡＶ感染ＭＯ
ＬＴ−４／Ｔ４　Ａイブリド−ｖ（ａ−６列）と、３５
Ｓ−システインでＩＨし且つ遠心分間したＬＡＶピリオ
ン（ｅ−１列〉とのシンシチウム溶解物を、継続性リン
パｉ５１Ｈ（ｌｙｉｐｈａｄｅｎｏｐａｔｈｉｅ　ｐｅ
ｒｓｉｓｔａＭｅ）にかかった患者の１Ｉｉｌ清を用い
て免疫沈降させた（８ＲＵ＋　、これらの免疫複合体を
、商標せ）？ローズ（ＳＥＰＩＩ八ＲＯＳへ　３で市販
されているアガロースのビーズにプロティン八を結合し
たものに結合させ、次いで数回繰返し洗浄した後、ｓｏ
ｓ　ｏ、ｉｘと７７　ｏ　ｆ−ニン（ＺＹＨＯＦＲＥＭ
、　５ＰＥＣＩＡ）５にとを含むｐ）ｌ　５．５のクエ
ンｌ！！塩緩！ｉ液中で２分間９５℃に加熱することに
より溶離した。可溶化した抗原を次いで、最終″＠ｍが
２２μｌになるような瓜で０．５ｎのエンド−Ｈにより
種々の時間に百り３１℃で処理し、そのｌ５ＤＳ−−ポ
リアクリルアミドゲル（アクリルアミド７、　Ｓ！、ビ
スアクリルアミド０．１７％）での電気泳動により分析
した。
種々の列のゲルに関しては下記のことに留意されたい。
−　ａ及び８列：未処理 −ｂ及びｒ列：　１時間の処理 −Ｃ及ＵＱ列：　　２１￥Ｉｉ！Ｉの処理−ｄ及び１列
：３！Ｒ間の処理 ■−既知分子量のマーカー ２１７１ｔＧ！：ｒウェスタンプロット（Ｗｅｓｔｅｒ
ｎｂｌＯｌ）」法による分析 ＬＡＶに感染したＩｔ胞の上澄みと、ＨＴＬＶ−３に感
染した１１［ｌ胞の上澄みとを超遠心分離によって濃縮
した。ウィルス標本から得られた遠心分離沈漬と、コン
トロール標本から得られた遠心分離沈渣（これらの沈渣
は合計タンパク質濃度が５〜１０ｇであった）とをＳＯ
８含有１２％ポリアクリルアミドゲルにより分画し次い
で電気泳動によりニトロセルロース紙上に移し、その後
ウィルス学Ｑ　（ＶｉｒｏｌｏｑＹ）、　１０７　、５
２０（１９８０年）　１．：バレクー　ヒ−（ＰＡＲＩ
ＪＨＢ、）他によって記載されているような免疫移行（
ｉｗｌｕｎｕｔｒａｎｓｆｅｒｔ（ｉａｍｕｎｏｂｌｏ
［）＞により移した。
次に諸バンドを含むＰ紙をＬＡＳ患者の血清（１／２０
０°で箱釈）と共にインキュベートし、洗浄し、ペルオ
キシダーゼと結合したヤギの抗ヒト１ｒＧＧと共にイン
キュベートし、次いで再び洗浄した。ペルオキシダーゼ
反応の基質としてのジアミノ−ベンジジンを基質として
用いて抗体の検出を行なった。ＬＡＶ又はＨＴＬＶ−ｍ
ウィルスに感染したＨ３Ｎ２胞から得たウィルス溶解物
で同様の１１１京がなされた。
第２図には下記のものが示されている。
−列１：ＬＡＶ″Ｃ′感染した８９ｍ１１胞に由来する
ウィルス沈渣 一列２：ＨＴＬＶ−ｍに感染したＨ９細胞から得られた
ウィルス沈渣 一列３　：　ＬＡＶ産生ＣＥＭ細胞から得られたウィル
ス沈渣 一矢印は糖タンパク即ち（ｌｐｌｌｏ、　ｐ７ｏ、　ｐ
４０．　ｐ、ｉｌｌ。
ｐ２５及びｐ１８に対応するバンドを上から順に示して
いる。
【図面の簡単な説明】
第１図はＬＡＶのエンベ０−ブ糖タンパクとその１ｉｖ
ｉ内前駆体とに対するエンド＝Ｈの作用を示す図、第２
図はウェスタンプロット法による分析図である。 図面の浄書（内容に変 ＦＩＧ、１ ｂｃｄａｆ −〒冑岬　戦呵４ 、コ、ｔ ・４ ＝ ３４−一〜−り。 ２５−　ｗａｙ工 １８　　　％＋＋ 見なし） ｈｍ 、　　　−９３ 〉

Claims (22)

    【特許請求の範囲】
  1. （１）約１５０，０００の分子量を有し、 ＬＡＶウィルスのエンベロープ糖タンパクと共通のポリ
    ペプチド配列からなるポリペプチド骨格、を有し、 ＡＩＤＳ若しくはＬＡＶウィルスに起因するＬＡＳにか
    かった患者の血清又はＬＡＶウィルスの無症候性保有者
    の血清によって認識され、 ＾３＾５Ｓ−システインによつて標識することができ、
    コンカナバリンＡと複合体を形成し得（これら複合体は
    後にＯ−メチル−アルファ−Ｄ−マンノピラノシドの存
    在下で解離することができる）、「レンチル−レクチン
    （ＬＥＮＴＹＬ−ＬＥＣＴＩＮＥＳ）」の名称で知られ
    ているような他のレクチンと複合体を形成し得、 エンドグリコシダーゼ、特にエンド−ベータ−Ｎ−メチ
    ルグリコサミニダーゼ−Ｈの作用を受け得（この作用は
    分子量約９５，０００のタンパク質の形成を伴う）、 ［＾１＾４Ｃ］−グルコサミンによって標識することが
    できる、 という特性を有する抗原。
  2. （２）ＬＡＶウィルスの￥ｅｎｖ￥遺伝子全体によって
    コードされているペプチド骨格に相当するペプチド骨格
    を有することを特徴とする特許請求の範囲第１項に記載
    の抗原。
  3. （３）約１３５，０００の分子量を有し、 ＬＡＶウィルスのエンベロープ糖タンパクと共通のポリ
    ペプチド配列からなるポリペプチド骨格を有し、 ＡＩＤＳ若しくはＬＡＶウィルスに起因するＬＡＳにか
    かった患者の血清又はＬＡＶウィルスの無症候性保有者
    の血清によって認識され、 ＾３＾５Ｓ−システインによつて標識することができ、
    コンカナバリンＡと複合体を形成し得（これら複合体は
    後にＯ−メチル−アルファ−Ｄ−マンノピラノシドの存
    在下で解離することができる）、「レンチル−レクチン
    （ＬＥＮＴＹＬ−ＬＥＣＴＩＮＥＳ）」の名称で知られ
    ているような他のレクチンと複合体を形成し得、 エンドグリコシダーゼ、特にエンド−ベータ−Ｎ−メチ
    ルグリコサミニダーゼ−Ｈの作用を受け得（この作用は
    分子量約８０，０００のタンパク質の形成を伴う）、 ［＾１＾４Ｃ］−グルコサミンによって標識することが
    できる、 という特性を有する抗原。
  4. （４）そのペプチド骨格がＬＡＶウィルスの￥ｅｎｖ￥
    遺伝子全体によってコードされているペプチド骨格全体
    から誘導されているが前記骨格全体のＣ末端部分に対応
    する分子量約１５，０００のペプチド配列はもっていな
    いことを特徴とする特許請求の範囲第３項に記載の抗原
    。
  5. （５）特許請求の範囲第１項から第４項のいずれかに記
    載の抗原の製法であって、 ヒトＴ４リンパ球と特にＭＯＬＴ−４タイプの腫瘍リン
    パ様細胞との融合によって予め形成され、表面にＴ４分
    子を発現し且つＬＡＶウィルスに感染し得るハイブリド
    細胞系を感染させ、前記ハイブリッド系の感染細胞を培
    養し、感染したハイブリッド細胞を回収して溶解し、産
    生された抗原を分離し、場合に応じて約１５０，０００
    の分子量をもつ糖タンパク若しくは約１３５，０００の
    分子量をもつ糖タンパク又はこれら糖タンパクの双方を
    回収することからなる方法。
  6. （６）感染ハイブリッド細胞の溶解を、新たな遊離ウィ
    ルス粒子の産生によって終了する感染プロセスの終了前
    に行なうことを特徴とする特許請求の範囲第５項に記載
    の方法。
  7. （７）前記溶解を感染後３時間で行ない、分子量が約１
    ５０，０００の糖タンパクを回収することを特徴とする
    特許請求の範囲第６項に記載の方法。
  8. （８）前記溶解を感染後１２時間で行ない、分子量が約
    １３５，０００の糖タンパクを回収することを特徴とす
    る特許請求の範囲第６項に記載の方法。
  9. （９）前記抗原の分離が、前記抗原を含む媒質を好まし
    くは固体支持体に固定した精製レクチン、例えばコンカ
    ナバリンＡ又はレンチル−レクチンと接触させ、次いで
    前記抗原を特にＯ−メチル−アルファ−Ｄ−マンノピラ
    ノシド溶液を用いて溶離することで実施されることを特
    徴とする特許請求の範囲第５項から第８項のいずれかに
    記載の方法。
  10. （１０）前記精製が、前記抗原に対する活性をもつ抗体
    を保有することがわかつている患者の血清、又は予め形
    成されてモノクローナル抗体を分泌するハイブリッドー
    マによつて産生されるモノクローナル抗体を用いる免疫
    沈降によつて行なわれ、前記モノクローナル抗体がより
    特定的には、場合に応じて、約１５０，０００の分子量
    を有する抗原又は約１３５，０００の分子量を有する抗
    原のいずれかを認識することを特徴とする特許請求の範
    囲第９項に記載の方法。
  11. （１１）特許請求の範囲第１項に記載の抗原又は場合に
    よって特許請求の範囲第３項に記載の抗原を特異的に認
    識し得ることを特徴とするモノクローナル抗体。
  12. （１２）特許請求の範囲第１１項に記載のモノクローナ
    ル抗体を分泌するハイブリドーマ。
  13. （１３）Ｔ４リンパ球とＭＯＬＴ−４系細胞タイプの細
    胞との間で形成されるハイブリッド細胞系であり、前記
    系のハイブリッド細胞がＴ４分子を表面に発現し得且つ
    ＬＡＶウィルス又は関連ウィルスに感染し得ることを特
    徴とするハイブリッド細胞系。
  14. （１４）１９８５年４月１５日に番号 I −４３５でＣ
    ．Ｎ．Ｃ．Ｍ．に寄託された系と同一であるか、又はこ
    の系から誘導されたものであることを特徴とする特許請
    求の範囲第１２項に記載のハイブリッド細胞系。
  15. （１５）特許請求の範囲第１項から第４項のいずれかに
    記載の抗原を表面に有し、且つその系の細胞が固定され
    たものであることを特徴とする特許請求の範囲第１３項
    又は第１４項に記載のハイブリッド細胞系。
  16. （１６）血清又は脳脊柱液の如きヒト生物学的流体中の
    抗−ＬＡＶ抗体の存在のｉｎ　ｖｉｔｒｏ検出法であっ
    て、前記生物学的液体を特許請求の範囲第１項から第４
    項のいずれかに記載の抗原と接触させ、形成された抗原
    −抗体複合体を検出することからなる方法。
  17. （１７）抗原が固定感染細胞の表面に露出されることを
    特徴とする特許請求の範囲第１６項に記載の方法。
  18. （１８）抗原が固体支持体の表面に固定されることを特
    徴とする特許請求の範囲第１６項に記載の方法。
  19. （１９）血清又は同等の生物学的媒質中の抗−ＬＡＶウ
    ィルス抗体の存在を診断する方法であって、−特許請求
    の範囲第１項から第４項のいずれかに記載の抗原をマイ
    クロタイタープレートのウェルの中に所定量配置し、 −診断すべき血清をその希釈度を増大させながら前記ウ
    ェル内に導入し、 −前記マイクロプレートをインキュベートし、−このマ
    イクロプレートを入念に洗浄し、 −基質の放射線吸収が少なくとも所定波長帯域で変化す
    るようにこの基質を加水分解し得る酵素の中から選択し
    た酵素によって標識された血液イムノグロブリン特異抗
    体を前記マイクロプレートの穴に導入し、 −好ましくはコントロールと対比しながら、前記基質の
    加水分解の程度を当該病気の潜在的危険性又は実際的存
    在の尺度として検出することからなる方法。
  20. （２０）適当な生物学的試料、特にヒト血清中の抗−Ｌ
    ＡＶウィルス抗体の存在を診断するための用具一式即ち
    キットであって、特にエリザ（ＥＬＩＳＡ）法による分
    析で通常使用される試薬と、特許請求の範囲第１項から
    第４項のいずれかに記載の抗原とからなり、この抗原が
    支持体の表面に保持されているか又は固定感染ハイブリ
    ッド細胞の表面に露出されていることを特徴とするキッ
    ト。
  21. （２１）特許請求の範囲第１項から第４項のいずれかに
    記載の抗原を生体宿主、特にヒトへの投与を可能にする
    生理学的に許容し得る賦形剤と共に含むことを特徴とす
    る免疫原性組成物。
  22. （２２）１０〜５００、特に５０〜１００μｇ／Ｋｇの
    用量を投与し得るように抗原が調合されることを特徴と
    する特許請求の範囲第２１項に記載の免疫原性組成物。
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