JPS62500592A - リンパ節症及び後天性免疫不全症候群のウイルスの抗原，特にエンベロ−プ抗原，及びウイルス，ウイルスエンベロ−プ抗原の産生方法，免疫原組成物の調製用叉は該ウイルスに対する抗体の存在の診断用としての該抗原の - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 エンベ　症　び″　１　・全庁　のウィルスのｒ　にエンベロープ　原　びウィ ルス　ウィルスエンベロープｒの産ｌ　゛　原　の１・用スは眩ウィルスに・　 る木ユ見血辺Ｌ■　としての′−ｆｒ原の本発明は、リンパ節症（リンパ節障害 、以下略称ＬＡＳと称する）及び後天性免疫不全症候群（以下略称ＡＩＤＳと称 する）のウィルスの特に精製形態の抗原、これらの抗原の産生方法、特にこれら のウィルスのエンベロープの抗原の産生方法に係る。本発明は更に、前記ＤＮＡ 配列によりコードされ、グリコジル化されているか又はいないポリペプチドに係 る。

１、＾Ｓ又はＡＩＤＳの作用因子であるレトロウィルスは、Ｆ、　ＢＡＲＲＥ− ＳＩＮＯＵＳＳＩ他、　５ｃｉｅｎｃｅ、　２２０．８６８（１９８３）により 同定されている。

その特徴は以下の通りである。このレトロウィルスはＴ−リンパ向性であり、そ の好適な標的はＬｅｕ３［胞（又はＴ４リンパ球）により構成されており、Ｍ８ ゛の存在を必要とする逆転写酵素活性を有しており、ポリ（アデニル酸−オリゴ デオキシ−チミジル酸）（ポリ（Ａ）−オリゴ（ｄＴ）　１２−１８）に対して 強い親和性を示す。ショ糖勾配中の密度は１．１６〜１．１７、平均直径が１３ ９ナノメー１〜ル、核の平均直径は４１ナノメートルである。該ウィルスの抗原 、特にタンパク質Ｐ２５はＬＡＳ又はＡＩＤＳ患者から採取した血清中に含まれ る抗体により免疫学的に認識される。コアタンパク質であるタンパク質Ｐ２５は ＩＩＴＬＶＩ型及びＩＩ型ウィルスのタンパク質ｐ２４により免疫学的に認識さ れない。このウィルスは更に、１１ＴＬＶＩ及びＩＩＴＬＶＩＩのタンパク質ｐ １９に対して免疫的に交差反応性のタンパク質ｐ１９を含んでいない。

この型のレトロウィルス（場合によっては一般路称ＬＡＶと称される）はパリ、 パスツール研究所のＮａｔｉｏｎａｌ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ　ｏｒＭｉｃｒｏ −ｏｒｇａｎｉｓｍ　Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＣＮＣＭ）に寄託番号１−２３２　、 ［２４０及び■−２４１で寄託されている。形態学的及び免疫学的な全観点から 見てＬ＾■に類似のウィルス株は他の研究室で単離されている８例えば夫々Ｒ， Ｃ，ＧＡＬＬＯ他、　５ｃｉｅｎｃｅ　２２４，５００（１９８４）及び１４． Ｇ、ＳＡＩ’ＩＮ−ＣＡ　Ｄ　ＩＩ＾ＲＡＮ他、　５ｃｉｅｎｃｅ　２２４，５ ０６（１９８４）により単離されＨＴＬＶ−ＩＩＩと命名されたレトロウィルス 株、更にＭ、ＪＡＹ　ＬＥＶＹ他、　５ｃｉｅｎｃｅ。

２２５．８４０−８４２（１９８４）４：より単離されΔＲｖト称サレすレトロ ウイルスが挙げられる。呼称を簡略にするために、これらのウィルス及び同等の 形態学的及び免疫学的特性を有する他のウィルスを以下、一般呼称”Ｌへ■“と 称する。ＬＡＶレトロウィルス等及びこれらのウィルスの抽出物の使用に関する より詳細な記載については、１９８３年９月１５日付英国特許出願第８３２４８ ００号を優先権出願とする１９８４年９月１４日付ヨーロッパ特許出願を参照さ れたい。

まずコア抗原は、この時使用した試験系においてＡＩＤＳ又は１、＾Ｓ感染患者 の血清により認識されたウィルス溶解物又は抽出物の主要抗原であった。エンベ ロー１タンパク質から構成されると見なされるタンパク質ｐ４２も検出した。同 様にしてＧＡＬＬＯ他は、同じくウィルスエンベロープの予想し得る成分と見な されるタンパク質ｐ４１を検出しな。

ＬＡＶウィルスの産生方法も記載されている。特に前出のＢＡＲＲＥ−ＳＩＮＯ ＵＳＳ！池の論文には、健康な成人供与者の血液又は請帯又は骨髄細胞から得ら れｌたＴリンパ球培養株中でウィルスを産生ずる方法が記載されている。この方 法は特に以下の主要な段階、即ち。

−レクチンマイトジエンによる活性化後、（初めにＡＩＤＳ又はＬＡＳ感染患者 から得られた）ウィルス産生リンパ球の生の上清液から得たウィルス懸濁液によ り、供与者のＴリンパ球にウィルスを感染させる段階と。

一抗αインターフェロンヒツジ血清の存在下にＴＣＧＦ感染細胞を培養する段階 と、 一産止されたウィルスを精製（産生は一般に感染後９日〜１５日の間に開始し、 １０〜１５日間持続する）する段階とから成り、前記精製段階は、第１の濃度の ウィルスを産生ずるべくポリエチレングリコール中にウィルスを沈降させ、得ら れた試料を次に２０〜６０％のショ糖勾配又は（オスロＮＹＥＧＡＡＲＤ社から 商標名ＮＹＣＯＤＥＮＺで市販されている）メトリザナイド（ｍｅｔｒｉｚａｎ ｉｄｅ）の等張勾配中で遠心分離し、密度がショ糖勾配中で１．１６〜１．１７ 又はＮＹＣＯＤＥＮＺ勾配中で１．１０〜１．１１のバンドによってウィルスを 回収することから成る。

ＣＥＭ系のようなＴ型の永久細胞系から、又は例えば１９８４年５月９０付仏国 特許出願第８４０７１５１号に開示されているようにエプスタイン−バールウィ ルスで健康な供与者から得たリンパ球を形質転換（トランスフォーメーション） して得られるようなりリンパ芽球様細胞系からＬＡＶウィルスを産生ずることも できる。得られた永久細胞系は、ＬＡＶウィルスの本質的抗原及び形態学的特徴 を有するウィルス（Ｂリンパ芽球様細胞系の場合ＬＡＶ−Ｂで示される）を連続 的に産生ずる（但し前記の場合よりやや高いショ糖中の密度のバンド（特に１． １８）で収集される）、ウィルスの最終的精製はＮＹＣＯＤＥＮＺ勾配中で実施 してもよい。

ＬＡＳのゲノムＲＮ＾とハイブリダイズ可能なりＮ＾配列をクローニングする方 法は、１９８４年９月１９日付英国特許出願第８４２３６５９号中に既に開示さ れている。以下、本文中に開示される本発明の新たな改良点と共通の内容につい てはこの英国出願を参考にする。

本発明の目的は、精製された未変容（ｕｎａｌｔｅｒｅｄ）ウィルス形態（又は 使用される精製処理により多少変容したウィルス）及び該未変容精製ウィルスの 取得方法を提供することにある。

本発明の別の目的は、Ｌ＾■又は関連するウィルス（以下より一般的にｒ　ＬＡ Ｖウィルス群」と称する）の検出にも有用であるばかりでなく融通性のより大き い、特に免疫学的方法により必ずしも直接検出し得ない生成物を発現する該ウィ ルス群のゲノムＤＮ＾の特異部分の検出に有効な付加的新規手段を提供すること にある。本発明の更に別の目的は、天然に存在するＬＡＶゲノムによりコードさ れかつ発現されるタンパク質中に含まれる抗原決定基を陰むポリペプチドと共通 の配列を含有するポリペプチドを提供することにある０本発明の更に別の目的は 、ＬＡＶウィルスに関連するタンパク質を検出するための手段、特にＡＩＤＳ又 はＡＩＤＳ前症（ｐｒｅ−ＡＩＤＳ）の診断用の手段、又は逆に特にＡＩＤＳ又 はＡＩＤＳ前症感染患者あるいはより一最的には無症候性保菌者又は血液関連生 成物中でＬＡＶウィルス又はこれに関連するタンパク質に対する抗体を検出する ための手段を提供することにある。

＆後に本発明の別の目的は、免疫原性ポリペプチド、より特定的にはＡＩＤＳ又 は関連症候群に対するワクチン組成物の調製に使用される感染防御用ポリペプチ ドを提供することにある。

本発明は、以下に記載するようなＬＡＶのゲノムＲＮ＾及び１４＾Ｖウィルス群 のゲノム全体に対応する付加的ｃＤＮＤＮＡとハイブリダイズ可能な付加的ＤＮ Ａフラグメンｌ−（断片）に関する。更に本発明は、該ＤＮＡ又はｃＤＮ＾ＤＮ Ａメントを含む組換ＤＮＡに関する。

未変容精製しΔＶＬ、ｌ−ロウイルスは、ウィルスが非標識システィンを含まな い培地１−当たり２００マイクロキユリーの割合の３９Ｓ−システィンにより擦 詣された場合に視覚化されるに十分な量の１個又は数個のエンベロープ抗原を含 んでいるという点において従来のレトロウィルスと区別される。これらの抗原、 特にグリコプロティン（わ３タンパク質）は、ＡＩＤＳ又はＬＡＳ怒染患者の血 清又はウィルスの無症候性保菌者の血清により生体外で選択的に認識される。

このウィルスの溶解物から（又はウィルスのエンベロープの軽い洗浄により）得 られる前記特定に従う好適な抗原は、既知の分子量を有する標準タンパク質の同 一の泳動（ｍｉｇｒａｔｉｏｎ）系における泳動距離と比較した泳動距離により 決定される１１００００ドルトン程度の分子量を有するグリコプロティンである 。特に比軸用の測定は、以下の標準タンパク質（八Ｍ　Ｅ　ＲＳ　１１　Ａ　Ｍ により市販）ニーリゾチーム−（１４Ｃ）−メチル（ＭＷ：　１４３００）、− 二酸化炭素−（”Ｃ）−メチル（ＭＷ：　３００００）、−オブアルブミン−（ １１（：）−メチル１貝：　４６０００）、−ウシ直情アルブミン（＋４（：） −メチル（ＭＷ：　６９０００）、−ホスホリラーゼｂ−（＋４（：）−メチル （Ｍ阿：　９２５００）、−ミオシン−（１４ｃ）−メチル（ＭＷ：　２０００ ００）を使用し、１８Ｖの電圧下で１８時間１２．５％ポリアクリルアミドゲル 上で実施した。

本発明は更に、ＡＩＤＳもしくはＬＡＳ感染患者の血清又はＬＡＶウィル群もし く又はその類似物にさらされたヒトの血清により認識される能力を有する抗原自 体、特に分子量が約ｔｉｏｏｏｏ〜１２００００の抗原に関する。これらの抗原 は更に、コンカナバリンＡとの複り体と形成するという特徴と有しており、該複 合体は０−メチル−α−〇−マンノピラノシドの存在下で解離可能である０本発 明の抗原は更に例えば「レンチル−レクチン」として知られている他のレクチン とも結合できる。分子［１１００００の本発明の好適な抗原は更にエンドグリコ シダーゼの作用に対しても感受性である。この作用によって、分子量１１０００ ０の抗原から分子量約９００００のタンパク質が産生されることになり、該タン パク質は例えば免疫沈降法により又は分子量の差（ゲル上における泳動差）を使 用する分離法により分離可能である。

本発明の好適な抗原はグリコプロティンから構成される。

本発明は更に、本発明のウィルスの産生方法に係る。この方法は、最終精製工程 において上記の従来方法と本質的に異なる。

特に本発明方法の精製工程は勾配中で実施せずに、産生細胞の培地の上濯に対し て直接分画遠心を行う。この遠心分離工程は、特に非ウィルス成分、より特定的 には細胞成分を除去するべく特に１１００００ｒｐの遠心分離角速度で実施する 第１の遠心分離段階と、ウィルス自体を沈降させるべく特に４５０００ｒｐｍの より高い角速度で実施する第２の遠心分離段階とを含んでいる。好適具体例にお いて、１１００００ｒｐの第１の遠心分離段階は１０分間持続し、４５０００ｒ ｐｍの第２の遠心分離段階は２０分間持続する。当然のことながらこれらの値は 単なる例示であって、細胞成分とウィルス成分とを分離するために遠心分離条件 を変更することは当業者の能力の範囲内であると理解されるべきである。

精製工程をこのように変更すると、従来の方法により精製されるウィルス製剤に 比較して前記抗原を容易に単離できるようなウィルス製剤が製造される。いずれ にせよ本発明方法により最終的に得られるウィルスは、患者又はＬＡＹウィルス もしくは邪悪学的又は抗原的に同様の株にさらされたヒトの血清により容易に認 識される。

本発明の抗原は任意の好適なデタージェントの存在下で上記ウィルスを溶解（又 は他の好適な処理）し、遊離した抗原を回収及び分離することにより上記ウィル スがら得られる。ウィルスの溶解はアプロチニン又はプロテアーゼの作用を抑制 するために好適な任意の他の剤の存在下に実施することが有利である。

こうしてそれ゛自体既知の任意の方法により本発明の抗原を分離することができ 、例えば所定のゲル中で夫々異なる泳動を使用することによりタンパク質を分離 することが可能であり、こうして所望のタンパク質は、分子量に関して十分に設 定された条件下の電気泳動工程でこのタンパク質が通常見出だされるゲルの領域 から単離される。一方、レクチン、特にコンカナバリン＾又はレンチル−レクチ ンに対する親和性を利用して前記ウィルスの溶解物（ライセード）から本発明の 抗原を分離することもできる。使用されるレクチンは好ましくは、例えばアガロ ースに由来し商標名５ＥＰＨＡＲＯＳＥで市販されている架橋ポリマーのような 固体担体に固定化される。固定された抗原を好適なＭｌｕ液で洗浄後、特にＯ− メチル−α−Ｄ−マンノピラノシド溶液により任意の好適な方法で抗原を溶離さ せることができる。

これらの抗原のより充分な精製方法として、前記タンパク質に対して有効な抗体 を有することがわかっている患者の血清、濃縮抗体製剤（ポリクローナル抗体） 又はより特定的には以下略称ｇｐＨｏと称する分子１１１００００の本発明の抗 原に対するモノクローナル抗体を使用して免疫沈降法を実施してもよい。

本発明のその他の特徴は、添付図面を参考に本発明のウィルス及び抗原、特に該 ウィルスのエンベロープ抗原の単離に関する以下の記載中で明らかとなる。尚、 第１図は夫々ＬＡＶ懸濁液により感染された１９２８球及び感染されない（対照 ）１９２８球の溶解抽出物の電気泳動を実施するために使用したゲルストリップ の写真複製から得られた図、第２図は完全ＬＡＶゲノム（クローンλＪ１９）の 制御限！（！！図、第３ａ〜３ｅ図はＬＡＶウィルスゲノムの完全配列図、第４ 図及び第５図はＬＡＶゲノムＲＮ＾の３個の可能な読み取り相の一部及び該読み 取り相の各々に現れる読み取り枠（ＯＲＦ）を示す概略説明図、第６図はＬＡＶ の末端炎反復配列（１，７Ｒ）の概略説明図である。

Ｉ−ウィルス　び、の産生 健康な供与者から得、Ｆ、　ＢΔＲＲＥ−ＳＩＮＯＵＳＳＩ他に記載の条件下で ＬＡＶｌ念感染させた１９２８球、又は白血病患者から得、同様に生体外で１． ＡＶ＋を感染さぜたＣＥＭ細胞を、２００マイクロキユリーのｈ５Ｓ−システィ ンと含んでおり且つ非標識システィンを含まない培地中で培養維持した。所望の 抗原が分解しないように、感染リンパ球は非変性培地中で培養した。その後、非 ウィルス成分を除去するべく培地の上清液に対してｉｏｏｏＯｒｐｍの第１の遠 心分離を１０分間実施し、次にウィルスを沈降さぜるべく　４５０００ｒｐｍの 第２の遠心分離を２０分間実施した。次に、特にＦ、　＆ＡＲＲＥ−５ＩＮＯＩ ＩＳＳＩ（（！！の論文中に記載の条件下でアプロチニン（５％）の存在下にウ イルスペレッｉ・をデタージェントにより溶解し、た。

対照として、健康な供与者から採取したリンパ球で同一の処理を行った。

次にＡＩＤＳ又はＬＡＳの感染患者の血清により各溶解物を免疫沈降させた。健 康な供与者又は他の疾患の感染患者からの血清についても同様の免疫沈降を実施 した。次に５ＯＳ−ポリアクリルアミドゲル中で培地を電気泳動させた。

結果を第１図に示す、１〜６の番号のゲルストリップは、：１ＳＳ−システィン で標識した試料から得たものである。７〜１０の番号のストリップは、ｆｆ５３ −メスチオコンで標識した感染又は非感染リンパ球試料で観察された結果を示す 、更にストリップＨは上記標準タンパク質の泳動距離に対応し、この標準タンパ ク質の分子盪は図面の右側の部分に示しである。

標識したウィルスタンパク質については図面の左側に示しである。

７〜１０列は、１ｓＳ−メヂオニンで標識されたＬＡＶの特異的タンパクｉ　ｐ ２５を示している。このタンパク質は、健常リンパ球からの試料で得られた結果 に対応するストリップ８〜】０には現れていない。

３列及び５列は、３５Ｓ−システィンで標識された感染リンパ球から得られた試 料でｒｆＡ察された結果に対応する。ＬＡＶの特徴的コアタンパク質であるタン パク質ｐ２５及びｐ１８並びに同様にＬＡＶに特異的なグリコプロティンｇｐＨ ｏも現れている。余り顕著でないが、タンパク＠ｐ４１（分子及が約４１．００ ０）に対応する像も各試料中に現れている。

本発明のウィルス及び本発明の抗原は、レクチン特にコンカナバリンＡにより沈 降させるが又はセファロース−コンカナバリン八カラムに固定させることができ る。特にエンベロープグリコプロティンの精製は次のように実施することができ る。この固定は、特に好適な緩衝液に溶解したＬＡＶウィルスの溶解物をセファ ロースに結合されたコンカナバリン＾と接触させることにより実施することがで きる。好適な緩衝液の組成を以下に示す。

Ｔｒｉｓ　１０ｍＭ ＮａＣｌ　Ｏ，］、５Ｍ ＣａＣｌ２１．ｍＭ ＭｇＣｌ　２　１１６Ｍ 商標名ＴＲＩＴＯＮで市販されているデタージエント１％ｐＨ７，４ 固定が得られたら、同一の組成を有する綾＠液でセファロース−コンカナバリン Ａを洗浄する。但しＴＲｒＴＯＮ濃度は０．１％に低下させる９次に洗浄用緩衝 液に溶解した０、２Ｍの０−メチル−α−Ｄ−マンノビラノシド溶３庚によりｉ ’ｌｉＭさせる。

ＡＩＤＳ惑染患感染血清中にかまれている抗体又は本発明の「未変容」ウィルス もしくは上記グリコプロティンを予め感作された動物由来の血清がら得られるポ リクローナル抗体を使用して免疫沈降を実施することによりタンパク質を更に濃 縮してもよい６次に十分なイオン性塩含有呈を有する溶液により複合体３解離さ せ、タンパク質を回収することができる。好ましくは、例えばセファロースＢ型 の不溶性担体にそれ自体既知の方法で抗体製剤を固定１ヒする６ 予め、ｐ　１．１０に対して用意されたハイブリドーマにより産生されるモノク ローナル抗体を使用することもできる。これらのモノクローナル抗体及び該モノ クローナル抗体を産生するハイブリドーマも本発明の一部を構成するものである 。

以下、ｇｐｌ、１０グリコプロテインに対するモノクローナル抗体の産生及び選 択方法について記載する。

二１ム立免ヌ３工 ６〜８週齢のＢａ１ｂ／ｃマウス群を使用した。ある群には上記グリコプロティ ンを含むウィルスを感作し、別の群には精製したグリコプロティン１ｉｐＨＯを 感作した。感作手順は全マウスに共通とし、Ｏ日日にはフロイント完全アジュバ ントの存在下、１４日目にはフロイント不完全アジュバントの存在下、２８日及 び４２日目にはアジュバントの不在下でＩＯ町の抗原製剤を注射した。初めの３ 回の注射は腹膜組織内、４回目は静脈内とした。

融合支びハイブリッドの培養 それ自体ＭＯＰＣ−２１細胞系に由来するアザグアニン耐性の非分泌性ミエロー マ変異細胞５．５３　Ｐ３ｘ６３　Ａｇ８を使用する。４５日目にＦＡＺＥＫＡ Ｓ　ｄｅ　５ｔ−ＧＲＯＴＩＩ及び５ＣＩＩＥＩＤＥＧＧＥＲの方法を用い、ポ リエチレン−グリコール４０００の存在中で免疫マウス牌細胞と融合させる。同 じ培養方法を用い２４カツプのプレート（ＣＯＳＴＡＲなる指称で公知）に入れ たＲＰＭＩ　１６−４ｆｌｒＨＡＴＪ培地中でハイブリッドを選択する。

同質遺伝子型胸腺細胞の「支持細胞」層の存在中で９６カツプのプレート中で適 当な特異性をもつ抗体産生ハイブリドーマをクローニングする。このようにして 産生クローンを選択し、次に同じく胸腺細胞の存在中で２４カツプのプレートで 彫張させる。

カップの１つでコンフルエンス（集密状態）が出現すると１．８日向にＰＲＩＳ ＴＡＮＥを注射しておいたｂａｌｂ／ｃマウスの腹膜組織内に注射するか及び／ 又は液体培地中に推持する。

抗ＬＡＹ抗体の証明 ５種類の異なる方法の使用によって適当な特異性をもつ抗体産生クローンの特性 決定ができる。第１段階では、抗体産生ハイブリッドをＥＬＩＳＡテストで測定 し上清中のマウス免疫グロブリンの存在を証明する。この第１選択からウィルス 成分に対する抗体をらつ上清を抗ＬＡＹ抗体の存在を証明するＥＬＩＳＡテスト を用いるか又はウィルス産生ヒト細胞に対する免疫蛍光法によって探す。最後に 、システィンでラベルしたウィルスのラジオイムノ沈澱及びウィルス調製物に対 するＷｅｓｔｅｒｎ−Ｂｌｏｔ法によって上清を分析する。これらの方法によっ て抗ＬＡＹ抗体の特異性を決定し得る。

■ 種々の融合から得られた細胞を６４８カツプで培養する。これらの顕微鏡観察に よればこれらのカップの大部分がｒ　ＨＡ　Ｔ　Ｊ選択培地中で増殖し得る単個 ハイブリッドクローンを含む。これらの５０％以上がＥＬＩＳ＾抗ウィルス検査 で陽性反応を生じる抗体を産生ずる。最も代表的な融合物をＷｅｓｔｅｒｎ−Ｂ ｌｏｔ法でテストし抗ウィルスＥＬＩＳＡでの夫々の特異反応性と培養条件下で の夫々の挙動とを考慮にいれながら幾つかの融合物をサブクローニングする。特 に選択されたハイブリッドは、分子量約１１０ＫＤを、もつウィルス性グリコプ ロティンｇｌ）１１０を選択的に認識する抗体を産生ずる。サブクローニングし た融合物全部が抗体産生クローンを生じる。発現後にこのクローンを同質遺伝子 型マウスに注０．１　する。異なる腹腔液中に存在する抗体の特異性の分析によ ってｇ＋’１１１．０に対ずろ前記腹水の抗体の特異性が確認される。

得られたモノクローナル抗体は、同じ＜ｇり１１０に含まれる抗原部位を含むタ ンパク質を精製すべく使用され得る。従って本発明はまた、このような精製方法 に係る。この方法は、溶解以＋ｊ７ｉのウィルスの精製処理中にコントロールで さないｇｐｉｉｏの分離か生じないように配慮すれば、ウィルス溶解物又はＴリ ンパ球溶解物又はその他の１．、Ａ　Ｖ産生細胞等にも有利に使用される。

言うよでもなくこの）方法はまた、ｇｐＨＯ又は通常エンヘローブタンパク質に 含まれておりモノクローナル抗体によって認識されろ抗原部位を含むタンパク質 もしくはポリペプチドもしくはグリコプロティンを含む任きの溶液に使用できる 。この方法を実施４−ろには、モノクローナル抗体を好ましくはアフィニティク ロマトグラフ、イー処理に適応させた固体担体に固定するのがｆ」初である。例 えｉｆ、これらモノクローナル抗体を、スエーデンノ会社ＰＩＩＡＲＭＡＣＩＡ 　Ａ、Ｇ、　＋、：　ヨリ商品名５ＥＰＨＡＲＯＳＥテ市販されている三次元網 目状のアガロース格子に例えば臭化／アン法で固定する。

従って本発明は更に、該当抗原の分離方法に係る。該方法では、該当抗原を含む 抗原混合物（例えばウィルス溶解物又は抽出物）と前記モノクローナル抗体を担 持するアフィニティカラムとを接触させ、前記モノクローナル抗体によって選択 的に認識されたポリペブチしタンパク質又はグリコプロティンを選択的に固定し 、適当なバッファ特に適当なイオン強度の溶液例えば塩溶液好ましくは酢酸アン モニウム溶液（これはｐＨ２〜４もし・くは同じｌ）＋１でグリシンバッファに 酸性化した調製物又は溶液の凍結乾燥のときに残渣を生じない）を用いて抗原抗 体複合体を解離してモノクローナル抗体を回収し、溶出したポリペプチド、タン パク質又はグリコプロティンを回収する。

本発明が更に、より低い分子量をもち同じモノクローナル抗体によって認識され 得る抗原部位を含むポリペプチド断片（フラグメント）に係ることも自明であろ う。ｇｐＨＯグリプロティンを認識するモノクローナル抗体が入手できると、共 通の抗原部位又はエピトープを含むより小さいペプチド配列又は断片にも本発明 方法を適用できることも当業者には明らかである。より小さいサイズの断片を得 るためには公知の方法を利用するとよい。例えばかかる方法では、より大きいポ リペプチドを特異的部位で開裂し得る酵素によって原ポリペプチドを開裂する。

このようなタンパク質として例えば、黄色ブドウ球菌５ｔａｐｈｙｌｏ−ｃｏｃ ｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　Ｖ８の酵素、α−キモトリプシン、ＢＯＥＨＲＩ　ＮＧ ＥＲ社によって市販されている「マウス顎下腺プロテアーゼ」、ビブリオ菌旦旦 致ａ１ｇｉｎｏｌｙｔｉｃｕｓ　ａｈμ碧シ■−Ｕ」丸狸四互コラゲナーゼ等が あり、これは前記ペプチドｃｌｙ−ｐｒｏ及びＧｌｙ−Ａｌａ等を特異的に認識 する。

また、ＬＡＶ変異種のゲノムから構成されたｃＤＮＡ力）ら切除された断片をク ローニングすることによって、ライｌレスのエンベロープ抗原のポリペプチド又 は断片を得ることも可能である。

第２図及び第３図は、全部で９．１〜９．２ｋｂ力為らなる力１力＼るｃＤＮＡ の制限マツプである。ｃＤＮＡ断片でコードされるボ１ノペプチド（よ第２図の 制限マー／プのＫｐｎ　１部位（６１００位置）力＼らＢｇｌＩＩ部位（９１５ ０１５０位置の領域に存在していた。（対応断片又は前記断片を含むベクターで 予め形質転換された適当な宿主細胞中で）発現された任意のポリペプチド中のＬ ＾■ウィルス等のエンベロープ抗原の特徴的部位の存在は任意の適当な免疫化学 的手段１こよって検出され得る。

本発明はより特定的には、後述するｃＤＮＡ断片によってコードされるポリペプ チドに係る。本発明は更に、全ＬＡＹレトロウィルスゲノムに対応するｃＤＮ人 変異変異体み、（５′端から３°端まで）後述する順序で一連の制限部位を含む ことによって特徴付（すられる核酸断片自体に係る。

また、全ＬＡＹゲノムの連続部位（第１図のλＪ１９の制限マツプ参照）を、Ｒ 領域の旧ｎｄＩ１１部位（座標ｌとして選択）に対する座標として以下に示す。

座標は±２００ｂｐの正確度で推定されて１１１る。

旧ｎｄＩＩ［０ ３ａｃ　Ｉ　５０ １１ｉｎｄｌＩＩ　５２０ Ｐｓｔ　Ｉ　８００ １１ｉｎｄＩＩＩ　ｌ　１００ Ｂ１００Ｂ　ｌ　５００ ＫｐｎＩ　３　５００ Ｋｐｎｌ　３　９００ Ｅｃｏ　Ｒ１４１００ Ｅｃｏ　ＲＩ　５　３００ ＳａｌＩ　５５００ Ｋｐｎｒ　６　ｔｏ。

ＢｇｌＩＩ　６　５００ Ｂｇ１１１．　７　６００ ＨｉｎｄＩＩＩ　７８５０ Ｂａｍ　Ｈｆ　８　１５０ Ｘｈｏｒ　８　６００ Ｋｐｎｌ　８　７００ Ｂｇｌｎ　８　７５０ ＢｇｌｌＩ　９　１５０ ＳａｃＩ　９　２００ Ｈｉｎｄｕ　９２５０ 本発明による別のＤＮＡ変異体は任意に、座標はぼ５５５０に付加的旧ｎｄｎＩ を含む。

第１図は前記完全ＤＮＡ（λｊ１９）のより詳細な制限マツプを示す。

第４ａ図〜第４ｅ図は本発明の好ましいＤＮＡのより詳細なヌクレオヂド配列を 示す。

本発明は更に、後述する如き別の好ましいＤＮＡ断片及びポリペプチド配列（グ リコジル化したもの又はグリコジル化しないもの）に係る。

ＬＡＶの配列決定 配列決定と特に重要な部位の決定を面出英国特許第８４２３６５９号に開示され たλＪ１９に対応するファージ組換体に対して実施した。この組換体の調製方法 は該出願に開示されている。

（前記出願で開示されている）クローンλＪ１９の全組換体ファージＤＮＡをＤ ＥＩＮＩＮＧＥＲ（１９８：（）、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　ＢｉｏｃｈｅＩｌｌ 、１２９．２１６のプロトコルで超音波処理した。Ｋｌｅｎｏｗ反応を１６℃で １２時間維持してＤＮＡを修復した。ＤＮＡを０．８％アガロースゲルで電気泳 動にかけ、３００〜６００ｂｐのサイズのＤＮＡを切除し電気溶出して沈澱させ た。（１０ｍＭ　Ｔｒｉｓ、　ｐＨ８，０，１ｄ　ＥＤＴＡ中に）ＤＮＡを再懸 濁させ、Ｔ４ＤＮＡ−及びｌ？ＮＡ−リガーゼ（Ｍａｎｉａｔｉｓ　Ｔ等（１９ Ｂ２）、分子クローニング（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ）、Ｃｏ１ｄ 　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）を用い、（制限酵素Ｓ ｍａ　Ｉで切断しアルカリ性燐酸塩化（ホスファターゼ処理）した）Ｍ１３ｍｐ ８　ＲＦ　ＤＮＡに結合した。大腸菌ＴＧＩ株を用いて更に研究した。この菌株 は以下の遺伝子型をもつ。

ΔＩａｃ　ｐｒｏ、　５ｕｐＥ、　ｔｈｉ、Ｆ’ｔｒａＤ３６、ｐｒｏＡＢ、　 １ａｃｌｑＳＺΔＭＩ５、ｒ−この大腸菌ＴＧＩ株は組換体の認識を容易にする という特性を有する。ＬＡＶ　ＤＮＡの断片と組換えられていないプラスミドで トランスフェクトされた細胞の青色は変化しない。これに反して、ＬＡＶ　ＤＮ Ａ断片を含む組換体プラスミドでトランスフェクトされた・細胞は白色コロニー を形成する。使用した方法はＧｅｎｅ（１９８３）、２６．１０１に開示されて いる。

この菌株をｌ１ａｎａｈａｎ法（Ｈａｎａｈａｎ　Ｄ（１９８３）、Ｊ、Ｍｏ１ ．Ｂｉｏｌ、１６６．５５７）を用い結合ミックスで形質転換した。細胞をソフ トアガロース中にｌ　ＰＴＧとＸ−ｇａ＋とを含むトリプトン−アガロースプレ ートにプレートアウトした。白色プラークを採取してスクリーニングするか又は ニトロセルロースフィルターを使用しその場で（ｉｎ　５ｉｔｕ）直接スクリー ニングした。これらＤＩＩＡは、λＪ１９のｐＵｃ１８１１ｉｎｄＩ［［サブク ローンのニックトランスレートしたＤＮＡインサートとハイブリダイズした。こ れにより、以下の表で同定されるλのプラスミド又はサブクローンが単離できた 。この表でまた注目すべきは、各プラスミドの名称に添えて、パスツール研究所 、パリ、フランスのｒｃｏｌｌｅｃｔｊｏｎ　Ｎａｔｉｏｎａｌｅ　ｄｅｓ　Ｃ ｕ１ｔｕｒｅｓ　ｄｅＭｉｃｒｏ−ｏｒｇａｎｉｓｍｅｓ（Ｃ，Ｎ、Ｃ，Ｍ、） 　Ｊに寄託した対応するプラスミドを含む大腸菌ＴＧＩ株の細胞培養物の受託番 号が付けられていることである。形質転換しなかったＴＧＩ細胞系ら受託番号１ −３６４でＣ，Ｎ、ＣＪ、に寄託された。これら全部の寄託臼は１９８４年１１ 月１５日である。ＬＡＹゲノムに由来の対応するインサートのサイズも示組換体 プラスミドの本質的特徴 −ｐＪ１９−１プラスミド　（＋−３６５）　０．５ｋｂ１１ｉｎｄｌＩ［−Ｓ ａｃ　！　−１１ｉｎｄＩＩＩ−ｐＪ１９−１７プラスミド　（１−３６７）　 ０．６ｋｂＨｉｎｄＩＩＩ　−Ｐｓｔ　Ｉ　−ＨｉｎｄｌＩ［−ｐＪ１９−　６ ブラスミド　（＋−３６６）　１．５ｋｂＨｉｎｄｎｌ（５°） ａｍＨｒ ｈｏ　Ｉ ｐｎ　Ｉ ｇｌｌｌ Ｓａｃ　Ｉ　（３’　） Ｈ４ｎｄ［Ｉ［ −ｐＪ１９−１３プラスミド　（１−３６８）　６．７ｋｂＨｉｎｄＩ［Ｉ　（ ５°） ｇｌｌｌ ｐｎ　Ｉ ｐｎ　Ｉ ａｌ　Ｉ ｐｎ　Ｉ ｇｌｌｌ ８ｇ１ｍ １１ｉｎｄｌｌＩ（３°） 陽性のハイブリダイズＭ１３ファージプレートを５時間増殖させ単鎖ＤＮＡを抽 出した。

ジデオキシ法及びＳａｎｇｅｒ等（Ｓａｎｇｅｒ等（１９７７）、Ｐｒｏｃ、Ｎ ａｔｌ、Ａｃａｄ。

Ｓｃｉ、、ＵＳＡ、　７４８．５４６３及びＭ１３クローニング及び配列決定ハ ンドブ・ツク、＾ＭＥＲＳＨＡＭ（１９１１３））の方法でλＪ１９ＤＮＡのＭ １３ｍｐ８サブクローンを配列決定した。１７−ｍａｒオリゴヌクレオチドプラ イマーα−３ＳＳｄＡＴＰ（４００Ｃｉ／ｍｍｏｌ、＾ＭＥＲＳＦＩＡＭ）と０ ．５Ｘ−５Ｘバツフア勾配ゲル（Ｂｉｇｇｅｎ　Ｍ、Ｄ、等（１９８３）、Ｐｒ ｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、、ＵＳＡ、　５０．３９６３）とを使用し た。５ｔａｄｅｎのプログラム（Ｓｔａｄｅｎ　Ｒ，（１９８２）、Ｎｕｃｌ。

Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ、ｌＧ、４７３１）下でゲルを読み取ってコンピュータに入 れた。適当な参考文献及び方法は全てＡＭＥＲ３）ＩＡＭのＭ１３クローニング 及び配列決定ハンドブックに記載されている。

（ＬＡＹ−１ａとも指称される）λＪ１９の完全ＤＮＡ配列は第４図〜第４ｅ図 に示されている。

配列はファージλＪ１９インサートの配列から再構成された。

番号付けは（後述のごとく）、実験的に位置決定した頭部（ｃａｐｓｉｔｅ）か ら始まる。重要な遺伝要素、主要な読取枠及びその予想産生物が旧ｎｄＩ［［ク ローニング部位と共に示されている。ｅｎｖ遺伝子中の潜在グリコジル化部位は 上部に線を引いて示されている。タンパク質のマイクロ配列決定によって決定さ れるｐ２５ｇａｇのＮＨ，−末端配列は枠で囲まれている。

各ヌクレオチドを平均５．３回配列決定した。８５％の配列について双方の鎖（ ストランド）を決定し残りに関しては独立のクローンから少なくとら２回配列決 定した。塩基組成は７２２．２％、０１７８％、Ａ３５．８％、Ｇ２４４．２％ 、及びＧ＋Ｃ４２％である。ジヌクレオチドＧＣは真核細胞配列（Ｂｉｒｄ、１ ９８０）での通例として極めて不十分にしか示されなかった（０．９％）。

第５図及び第６図は（第５図の左側の番号１，２．３で示す）連続読取りフェー ズ（相）に対応する連続読取枠の長さを示す概略図である。ＬＡＹゲノムのヌク レオチド構造に対するこれら読取枠（ＯＲＦ）の相対位置は、ＤＮＡ配列中の対 応するヌクレオチドの各々の位置を示す番号によって示される。縦の線は対応す る読み終わりコドンの位置に対応する。

以下の遺伝子及びＤＮＡ断片は、図示の種々の読取枠中で識別できる。・次に前 記遺伝子及び断片によってコードされるタンパク質又はグリコプロティンについ て説明する。

１　）　ｒ　ｇ　ａ−ｇ　ｉｉｉ伝子（又はＯＲＦ　−ｇａｇ）ｒｇａｇ遺伝子 」はコアタンパク質をコードする。

ｇａｇ：ｇａｇ　ａｒｔの５°末端の近傍には、ｇａｇｏｒｆ中及び頭部（ｃａ ｐｓｉｔｅ）から最初の「典型的」開始コドン（Ｋｏｚａｋ、　１９８４Ｘ３３ ６位置）がある。萌駆物質となるタンパク質は５００個のアミノ酸から成る。計 算分子ｆｆ１５５８４１は５５ｋｄのｇａｇ前駆物質たるポリペプチドと一致す る。主要コアタンパク質ｐ２５のＮ−末端アミノ酸配列は７３２位置から始まる ヌクレオチド配列によってコードされる（第５ａ図参照）。これは明らかに、ク ローニングされたＬＡＹゲノムと免疫的に特性決定されたＬＡＹ　ｐ２５タンパ ク質との間にリンクを形成する。ｐ２５をコードする配列の５°でコードされた タンパク質はむしろ親水性である。その計算分子量１４８６６はｇａｇタンパク 質ｐ１８の分子量と一致する。ｇａｇ領域の３°部は恐らくレトロウィルス核酸 結合タンパク質（ＮＢＰ）をコードする。実際、ｔｌＴＬｖ−１（Ｓｅｉｋｉ等 、＋９８３）及びＲ８Ｖ（Ｓｃｈｗａｒｔｚ等、１９８３）と同様に、全部のＮ ＢＰ（Ｏｒｏｚｌａｎ等、１９８４）に共通の基本単位Ｃｙｓ−Ｘｓ−Ｃｙｓ− Ｘｓ−ｓ−Ｃｙｓの重複が観察される（ＬＡＹ配列のヌクレオチド１５０９及び １５７２）。その特にｐ２５、Ｉ）　１．８及び＋１１３を含むコア抗原をコー ドすると思われるゲノム断片（ＯＲＦ−ｇａｇ）は、ヌクレオチド位置３１２（ ５’　ＣＴＡ　ＧＣＧＧＡＧ　３°から始まる）とヌクレオチド位置１８３５（ ＣＴＣＧ　ＴＣＡ　ＣＡ＾３′で終わる）との間に位置すると思われる。前記Ｏ ＲＦの部分でコードされるペプチド又はタンパク質の構造はフェーズ２に対応す る構造であると考えられる。

３３６−３３８位置のＡＴＧによってコードされるメチオニンアミノ酸ｒＭＪは 、ｇａｇタンパク質前駆物質の開始メチオニンである可能性が大きい。ＯＲＦ− ｇａｇの終端従ってｇａｇタンパク質の終端は１８３５８３５位置すると思われ る。

アミノ酸配列Ｐｒｏ−ｌ　１ｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−八５ｎ−１１ｅ−Ｇｌｎ−Ｇ ｌｙ−Ｇｌｎ−ｋｌｅｔ−Ｖａｌ−１１ｉｓ−から始まると考えられるｐ２５タ ンパク質の初端は、７３２位置に始まるヌクレオチド配列ＣＣＴＡＴＡ−・・、 によってコードされると思われる。

従って本発明はより特定的には以下のＤＮＡ配列に係る。

−ＬＡＹウィルスのコアタンパク質ｐ１８及びｐ２５のアミノ酸配列に対応する アミノ酸配列を含むと考えられるタンパク質ｐ５５をコードすると思われるヌク レオチド３３６からヌクレオチド約１６５０までのＤＮＡ配列 一タンパク質ｐ２５をコードすると思われるヌクレオチド７３２からヌクレオチ ド約１３００までのＤＮＡ配列−タンパク質ｐ１３をコードすると思われるヌク レオチド約１３７１からヌクレオチド約１６５０までのＤＮＡ配列−タンパク質 ｐ１８をコードすると思われるヌクレオチド３３６からヌクレオチド約６１１ま でのＤＮＡ配列。

本発明は更に、前記に特定的に定義したＤＮＡ配列又は断片の直接翻訳によって 得られた構造に対応する構造をもつ前記断片枠にタンパク質１）１３、ｐ１８、 Ｉ）２５及びｐ５５又はポリペプチドによってコードされるアミノ酸構造をもつ 精製ポリペプチドに係る。

これらペプチド配列は第４ａ図から明らかである。より特定的には本発明は、以 下のヌクレオチド位置から伸びるＤＮＡ配列によってコードされるものと等しい ペプチド配列又は等価のペプチド配列をもつ精製ポリペプチドに係る。

−１３７１−１６５０（ｐ１３） −７３２１３００（ｐ２５） ｐ１３、ｐ１８及びｐ２５はいずれも同じ前駆物質即ちｐ５５に由来すると考え られることを指摘しておく。

本発明は更に、ｇａｇ読取枠の対応するＤＮＡ断片によってコードされるポリペ プチド断片に係る。ｇａｇ読取枠中の特に親水性のペプチドは後述するごとく同 定される。該ペプチドはｔ、ＡＶＤＮＡ配列中の３３６−３３８から始まるＡＴ Ｇによってコードされたアミノ酸１＝Ｍｅｔを始めとするように定義されｇａｇ 配列中の順序にしたがって番号付けされている（第３ａ図）。各ペプチドに関す る一番目及び二番目の数字は夫々Ｎ−末端及びＣ−末端のアミノ酸を示す。

これら親水性ペプチドは以下のアミノ酸を含む。

アミノ酸１．２−３２即ちＧｌｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Δｒｇ−Ｔｒｐ−Ｇｌｕ− Ｌｙｓ−１１ｅ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ　−Ａｒｇ　−Ｐｒｏ　−Ｇ　Ｉｙ　−Ｇ　ｌ ｙ　−Ｌｙｓ　−Ｌｙｓ　−Ｌｙｓ　−Ｔｙ　ｒ　−Ｌｙｓ　−Ｌｅｕ　−Ｌｙ ｓアミノ酸３７−４６即ちＡｌａ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌ、ｕ −Ａｒｇ−Ｐｈｅ−＾１ａ−ａｌ　− アミノ酸４９−７９即ちＧｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−３ｅｒにｌ ｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−１１ｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌ　ｎ　− Ｌｅａ　−Ｇ　Ｉ　ｎ−Ｐｒｏ−８ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ　− ３ｅｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−アミノ酸 ８８−１５３即ちＶａｌ−１１ｉｓ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−１１ｅ−Ｇｌｕ−１１ｅ −Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ　−Ｇ　ｌ　ｕ　−Ａ　ｌａ　−Ｌｅｕ−Ａ ｓｐ−Ｌｙｓ−１１ｅ−Ｇｌ　ｕ　−Ｇ　１ｕ−Ｇｌｕ−Ｇｉｎ−Ａｓｎ　−Ｌ 凾刀@− ３ｅｒ　−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ　−Ｌｙｓ　−Ａ　１ａ−Ｇｌｎ−Ｇｉｎ　−Ａ　ｌ ａ　−Ａ　１ａ−Ａ　１ａ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ　−Ｈ奄刀@− ８ｅｒ　−３ｅｒ　−Ｇ　Ｉｎ−Ｖａｔ　−３ｅｒ　−Ｇ　Ｉｎ−Ａｓｎ−Ｔｙ ｒ　−Ｐｒｏ−１１ｅ−Ｖａｌ−Ｇｉｎ−Ａｓｎ−１１ｅ　| Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｇｉｎ　−Ｍｅｔ　−Ｖａｌ　−Ｈｌｓ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−１ １ｅ−３ｅｔ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ　−Ｔｈｒ−１、ｅｕ−Ａｓｎ− アミノ酸１５Ｌ−１６５即ちＶａｊ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｌａ −Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−アミノ酸１７８−１８８即ちＧｌｙ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ｐｒ ｏ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｍｅｔ−Ｌｃｕ− アミノ酸２０［１−２２０即ぢｈｌｅｔ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−１ １ｅ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−へｌａ−へｌａ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ａｓｐ−Ａ ｒｇ−Ｍａｌ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｍａｌ−Ｈｉｓ−Ａｌａ−アミノ酸２２６−２ ３４即ちＧｌｙ−Ｇｌｎ−Ｍｅｔ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ− ３ｅｒ−アミノ酸２３９−２６４即ちＴｈｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ −Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−１１ｅ−Ｇｌｙ　−Ｔｒｐ　−Ｍｅｔ　−Ｔｈｒ− Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−１１ｅ−Ｐｒｏ−Ｖａ　ｌ　−Ｇ　１ｙ−Ｇ ｌｕ−１１ｅ　−丁ｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ− アミノ酸２８８−３３１即ちＧｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ −＾ｒｇ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ　−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ｌｙ ｓ−Ｔｈｒ　−Ｌｅｕ−Ａｒｇ　−Ａ　ｌａ　−Ｇ　１ｕ−Ｇｉｎ−屓ａ　−３ ｅｒ　−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−八ｓｎ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ｔｈｒ− Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ａｌａ−Ａｓｎ− Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−アミノ酸３５２−３６１即ちＧｌｙ−Ｖａｌ −Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−旧５−Ｌｙｓ−Ａｌａ−ｒｇ− アミノ酸３７７−３９０即ちＭｅｔ−Ｍｅｔ−Ｇｉｎ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−＾ｓｎ −Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−＾ｒｇ−Ｌｙｓ−１１ｅ−Ｖａｌアミノ酸 ３９９−４３２即ちＧｌｙ−Ｈｉｓ−１１ｅ−Ａｌａ−Ａｒｇ−＾ｓｌ−Ｃｙｓ −Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ　−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ　−Ｃｙｓ−Ｔ ｒｐ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ　−Ｌｙｓ　−Ｇ　１ｕ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ　−Ｇ 　ｉｎ　−ＩＪｅｔ　−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ　−Ｔｈｒ　−Ｇ　ｌｕ−へｒ ｇ−ＧＬｎ−Ａｌａ−Ａｓｎ−アミノ酸４３７−４８４即ちＩｌｅ−Ｔｒｐ−Ｐ ｒｏ−３ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ　− Ｐｈｅ　−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ　−３ｅｒ　−Ａ　ｒｇ　−Ｐｒｏ　−Ｇ　ｌｕ　− Ｐｒｏ−Ｔｈｒ　−Ａ　ｌａ　−Ｐｒｏ|Ｐｒｏ− Ｇｌｕ−Ｇｌｕ　−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ　−３ｅｒ　−Ｇ　ｌｙ　−Ｖａｌ 　−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ　−５ｅｒ　| Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−１１ｅ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ− Ｌｅｕ−Ｔｙｒ　−アミノ酸４９２−４９８即ちＬｅｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｓ ｎ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ一本発明は更にこれらペプチドの任意の組み合わせ に係る。

（凧下牟泊ン ２）　［ｐｏｔ遺伝子Ｉ　（すなわち０ＲＦ−ｐｏｔ）匪：この逆転写酵素遺伝 子は１　、００３個までのアミノ酸を有するタンパク質をコードし得る（算出Ｍ 　Ｗ　−１１３６２９）。第１メチオニンコドンは読取り枠のオリジン（開始点 ）から９２個目のトリブレットであるため、このタンパク質はスプライスされた メツセンジャーＲＮＡから翻訳される可能性があり、従ってｇａｇ−ｐｏ　ｌポ リタンパク質前駆体が形成される可能性がある。

ｐｏｔ　コーディング領域は他のレトロウィルスタンパク質配列現在３つのホモ ロジー領域（ドメイン）が明らかにされており、その第１は１７個のアミノ酸を 含む極めて短い領域からなる（　１８５６から開始）。ホモロジー領域はｐ１５ ａａａ”プロテアーゼ内に位置しく　Ｄ　ｉｔｔｍａｒ及びＭｏｅｌｌｉｎｇ　 １９７８年）、読取り枠によってコードされたポリペプチドはＨＴＬＶ−１のｇ ａｇとｐｏｌ　との間に位ｅｉする＜第５図）　（Ｓ　ｃｈｗａｒｔｚ他、１９ ８３年、　３ｅｉｋｉ他、１９８３年〉。従ってこの第１領域はウィルスのプロ テアーゼ内の保存配列に対応し得る。３つのゲノム内における該領域の別の位置 は重要ではないと思われる。何故ならレトロウィルスはスプライシング又は他の メカニズムによってｇａｇ−ｐｏｔポリタンパク質前駆体を発現するからである （　３　ｃｈｗａｒｔｚ他、１９８３年。

３　ｅｉｋｉ（１ｊｌ、１９８３年）。第２の、そして最長のホモロジー領域（ ２０４８から開始）は恐らく逆転酵素のコア配列を表わす。アミノ酸２５０個分 の領域では、最小限の挿入又は欠失のみを伴って、Ｌ　Ａ　Ｖ　ｆ）　７　ミ／ 　Ｆｌｌ　同一性はＲ８ｖに対シテ３８％、ＨＴＬＶ−Ｔに対しテ２５％、ＭＯ Ｍｔｌ　ＬＶｌ、：対しテ２１％を示しく　Ｓ　ｃｈｉｎｎｉｃｋ他、１９８１ 年）　、ＨＴＬＶ−１及びＲ３Ｖは同一領域内で３８％の同一性を示す。第３の ホモロジー領域はｐｏｔ読取り枠の３′端に位置し、エキソヌクレアーゼ活性を 持っＲ８Ｖのｐｐ３２’ペプチドの一部分に対応する（Ｍｉｓｒａ他、１９８２ 年）。この場合もＨＴＬＶ−１に対するより対応Ｒ３Ｖ配列に対するホモロジー の方が大きい。

第４ａ図から第４Ｃ図は、ｐｏｌ遺伝子に対応すると考えられるヌクレオチド位 １１１６３１（５’　ＴＴＴ　ＴＴＴ・・・・・・３′から出発）からヌクレオ チド位［５１６２に亘って延びるＤＮＡフラグメントも示している。対応ポリペ プチドのポリペプチド構造は相（ＤｈａＳｅ）１に対応する構造であると見なさ れる。これは位置４６３９で停止する（５’Ｇ　ＧＡＴ　ＧＡＧ　ＧＡＴ３’で 終止。） これらの遺伝子はウィルスポリメラーゼ即ち逆転写Ｖｆ素をコードすると考えら れる。

ブレラ１へ）に可能なイニシエーターメチオニンコドンを有するｆｉ−ｈ−１ｙ ＝。もしそうであれば、ｅｎＶ　＠躯体と考えられるタンパクＩ　（８６１個の アミノ酸、終用Ｍ　Ｗ　＝　９７３７６）の分子量はしＡＶグリコプロティンの 大きさと一致する（グリコシダーゼ処理後１１０Ｋｄ及び９０Ｋｄ）　、潜在的 Ｎ−グリコジル化部位（Ａ　Ｓｎ　−Ｘ−３ｅｒ／　Ｔｈｒ＞は３２箇所あり、 これらは第４ｄ図及び第４ｅ図にオーバーラインで示されている。ｅｎｖの興味 をひく特徴の１つはタンパク質の両端に存在するＴｒｐ残基の数が穫めて多いこ とにある。

エンベロープタンパク質をコードすると考えられるＤＮＡ配列は、ヌクレオチド 位Ｉ！ｊ！５７４Ｇ（５’　ＡＡＡ　ＧＡＧ　ＧＡＧＡ　・・・・・・３′から 開始）からヌクレオチド位Ｖ！１８９０８（・・・ＡＡＣＴ　ＡＡＡ　ＧＡＡ　 ３’で終了）まで延在すると考えられる。エンベロープタンパク質の配列のポリ ペプチド構造は「相３」読取り相に従って読取られる構造に相当する。

ｅｎｖ転写は位置５７６７−５７６９のＡＴＧコドンのレベルで開始されると考 えられる。

シグナルペプチド（ヌクレオチド５８１５−５８５０ｂｌ）によってコード）と 、第２領域（７３１５−７３５０ｂｌ）　）と、トランスメンブランセグメント （７８３１−７８９０ｂＤ　）とに対応してレトロウィルスエンベロープタンパ ク質に特有の疎水領域が３つ存在する（　３　ｅｉｋｉ他、１９８３年）。第２ 疎水領域（７３１５−７３５０ｂＤ）の前には八ｒｌｌ＋　ＬＶＳに富んだ区間 が存在する。これはタンパク質加水分解切断の部位を表わしている可能性があり 、これにより、他のレトロウィルスタンパク質との類似性から類推して、外側エ ンベローブポリペプチドとメンブラン結合タンパク質とを形成すると思われる（ 　Ｓ　ｅｉｋｉ他、１９８３年、　Ｋｉｙｏｋａｗａ他、１９８４年）、ＬＡＶ エンベロープタンパク質配列配列目すべき特徴は、トランスメンブランタンパク 質をコードするセグメントが異常な長さく１５０残基）を有することにある。こ のｅｎｖタンパク質はタンパク質データバンクのどの配列に対してもホモロジー を示さない。あらゆる白血病誘発性レトロウィルスのトランスメンブランタンパ ク質に共通の小アミ／ＩＩパターン（Ｃ１ａｎｃｉｏｌｏ他、１９８４年）はＬ ＡＶ　ｅｎｖには存在しない。

本発明はより特定的には、ヌクレオチド約　の辺りで始まるａｐｌｌｏ　（約＋ ｉｏ、　ｏｏｏダル１ヘンの分子量を持つＬＡＶウィルスのエンベロープグリコ タンパク質）をコードすると見なされるヌクレオチド５７６７からヌクレオチド ７３１４まで伸びるＤＮＡ配列と、最初は約９０．００（ｌダルトンと信じられ 、後に５５，０００であることが判った概略分子量を有するグリコタンパク質配 列に相当するグリコタンパク質配列のポリペプチド骨格（バックボーン）とに係 る。ｇｐｌｌｏの糖残基を完全に除去した結果のポリペプチドは、前記ｇｐＨ０ の適当なグリコシダーゼ処理によって得られる。メーー知−ぺ枚４４−１邊イ　 °　゛　−ば４−一一μｍヨ本発明は更に、前記により明確に特定したＤＮＡ配 列及びフラグメント（第４ｄ図及び第４ｅ図）の直１１１ｋに対応し、夫々（ｌ ｐｌｌｏ及びｇｐ９０のアミノ酸構造（又はポリペプチドバックボーン）を有す る精製ポリペプチドにも係わる。

本発明は中和エピトープを含むポリペプチドにも係わる。

中和エビ１−一ブの位置は第４ｄ図で更に明らかである。より特定的にはエンベ ロープタンパク質のアミノ酸配列（読取り相３）に含まれるオーバーラインで示 した３文字グループを参照されたい。これらは一般的には式Ａ　ｓｎ−Ｘ　−Ｓ 　ｅｒ又はＡｓｎ−Ｘ−Ｔｈｒで示される。Ｘは他の任意のアミノ酸である。従 って前記ｅｎｖグリコプロティンの最初のタンパク産物又はポリペプチドバック ボーンの分子量は９１　、０００を越える。これらのグループは通常グリコジル 化された残基を担持すると思われる。これら付加されたグリコジル化残塁をもつ Ａ　ｓｎ　−Ｘ　−Ｓ　（！ｒ及びＡｓｎ−Ｘ−Ｔｈｒ残基は前記タンパク質の 親水領域を描成し、且つ該タンパク質の正常のコンホーメーション（Ｌ体装置） の周辺部に位置してこのコンホーメーションに対し外側に露出されていると思わ れる。従ってこれらはワクチン組成物において効果的に使用し得るエピトープで あると考えられる。

このように本発明はより特定的には、ｅｎｖタンパク質に含まれ、このタンパク 質から切り出され得る（又は同一のアミノ酸構造を有する）ペプチド配列に係る 。これらペプチド配列は２００個のアミノ酸を越えないような大きさを有する。

本発明の好ましいペプチド（以後ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆと称する）は、夫々下 記の位置にまたがるヌクレオチド配列によってコードされるペプチドに相当する と見なされる。

ａ）　はぼ６１７１〜はぼ６２７６までｂ）　はぼ６３３６〜はぼ６３８６まで Ｃ）　はぼ６４６６〜はぼ６５１６までｄ）　はぼ６５６１〜はぼ６６９Ｇまで ｅ）　はぼ６９３６〜はぼ７００Ｇまでｆ〉　はぼ７６１１〜はぼ７７４Ｇまで ｅｎｖ読取り枠内の他の親水性ペプチドとしては後記のものが挙げられる。これ らのペプチドはＬＡＶ　ＤＮＡ配列（第４ｄ図及び第４ｅ図〉中の位置５７４６ −５７４８でＡＡＡによりコードされるアミノ酸１−リシンから始まると定義さ れ、以慢末喘配列に対する順序に従って番号付けされる。各ペプチドに関する第 １及び第２の数字は、そのペプチドのＮ末端アミノ酸及びＣ末端アミノ酸を示す 。

これらの親水性ペプチドとしては下記のものが挙げられる。

アミノ酸８〜２３、即ちＨｅｔ−＾ｒｇ−Ｖａｔ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−１ ｙｒ−Ｇｌｎ−旧＄−Ｌｅｌｌ−ＴｒＤ−ＡｒＱ−Ｔｒｌ）−Ｇｌｌ−ＴｒＤ− Ｌｙｓ−アミノ１ｌｌｊ　６３−７８、即ち５ｅｒ−＾ｓｐ−八１ａへＬｙｓ− Ａｌａ−Ｔｙｒ−＾３ｐ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｈｉｓ−Ａｓｎ−Ｖａｌ− Ｔｒｐ−Ａｌａ−丁ｈｒ−アミノｇ　８２−９０、即ちＶａｌ−Ｐｒｏ−丁ｈｒ −Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−アミ／　Ｍ　９７−１２ ３、即ちＴｈｒ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ｈｅｔ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ− 八５ｎ−Ａｓｐ−Ｈｃｔ−Ｖａ　ｌ　−Ｇ　１ｕ−Ｇ　Ｉｎ−Ｈａｔ−Ｉｔ　ｉ 　ｓ−Ｇ　１ｕ−Ａｓｐ−［ｌ　ｅ−１ｌ　ｅ−３ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ａｓ ｐ−Ｇｌｎ−３ｃｒ−Ｌｅｕ−アミノ１ｉ２７−１８３　、即ちＶａ　１−Ｌｙ ｓ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ−Ｖａｌ−３ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｌｙ ｓ−Ｃｙｓ−丁ｈｒ−＾５ｐ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ａｓ ｎ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−３ｅｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−＾５ｎ−３ｅｒ−３ｅ ｒ−３ｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｈｅｔ−Ｈｅ　ｔ−Ｎｅｔ　−Ｇ　Ｉｕ−Ｌｙｓ −Ｇ　ｌ　ｙ−Ｇ　ｌ　ｕ−Ｉ　ｌ　ｅ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ−３ｅ　ｒ− Ｐｈｅ−Ａｓｎ−１ｌ　ｅ−３ｅｒ−Ｔｈｒ−３ｅｒ−［ｌ　ｅ−Ａ　ｒｇ　− Ｇ　ｌ　ｙ−Ｌｙｓ−Ｖａ　ｌ　＝Ｇ　ｌ　ｎ−Ｌｙｓ− アミノ！２１９７−２０１、即ち１．ｅｕ−Ａｓｐ−１１ｅ−１１ｅ−Ｐｒｏ− Ｔｌｅ−＾５ｐ−ＡＳｎ−＾５ｐ−Ｔｈｒ−丁ｈｒ− アミノ酸２３９−２９４、即らＬｙｓ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−＾５ｎ−Ｌｌ／５−Ｔ ｈｒ−Ｐｈ（！−ＡＳｎ−Ｇ　Ｉｙ−Ｔｈｒ−Ｇ　ｌ　ｙ−Ｐ　ｒｏ−Ｃｙｓ− Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｖａ　ｌ　−３ｅｒ−Ｔｈｒ−Ｖａ　ｌ　−Ｇ　ｌ　ｎ−ｃｙ ｓ−丁ｈｒ−旧５−Ｇｌｙ−ｆｌｅ−＾ｒｇ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−３ｅｒ −丁ｈｒ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−３ｅｒ−Ｌｅｕ −＾１ａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−４１ｅ−Ａｒｇ−３ｅｒ −Ａｌａ−八５ｎ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−＾５ｐ−Ａｓｎ−へ＋ａ−ｔｙｓ−アミノ Ｍ　３００−３２７、即ちＬｅｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−３ｅｒ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ− １１ｅ−Ａｓｎ−ＣｙＳ−Ｔｈｒ−Ａｒ（１−ＰｒＯ−八ｓｎ−Ａｓｎ−Ａｓｎ −Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−３ｅｒ−１１ｅ−八ｒｇ−Ｉｌｅ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ −Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ａｒａ−７ミ／Ｉ！　３３４−３８１を、即ちＩ− ｙｓ−１１ｅ−Ｇｌｙ−＾ｓｎ−Ｈｅｔ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−ｔｌｉｓ− Ｃｙｓ−Ａｓｎ−［１ｅ−３ｅｒ−＾ｒｇ−＾１ａ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ− Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇ　ｌ　ｎ−１１ｅ−Ａ　Ｉ　ａ−３ｅｒ− Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇ　ｌ　ｕ−Ｇ　Ｉ　ｎ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ− 八５ｎ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−１１ｅ−１１ｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−３ｅｒ− ３ｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ− アミ／ｉ’ｉ！ｌ　３９７−４２４、即ちＣｙｓ−Ａｓｎ−３ｃｒ−Ｔｈｒ−Ｇ ｌｎ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−３ｅ　ｒ−Ｔｈ　ｒ−Ｔ　ｒｐ−Ｐｈｅ−Ａｓ ｎ−３ｅ　ｒ−Ｔｈ　ｒ−Ｔ　ｒｐ−Ｓｅ　ｒ−Ｔｈ　ｒ−Ｇ　Ｉ　ｕ−Ｇ　ｌ 　ｙ−３ｅｒ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−ＧＩｙ−３ｅｒ−Ａｓｐ−ア ミノ＠　４６６−５００．即ちＬｅｕ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｇ　Ｉｙ−Ｇ 　１ｙ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−３ｅｒ−Ｇｌｕ−１１ｅ− Ｐｈｅ−＾ｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｈｅ　ｔ−Ａ　ｒ ｇ−Ａｓｐ−Ａｓｎ−Ｔ　ｒｐ−Ａ　ｒｇ−３ｅ　ｒ−Ｇ　ｌ　ｕ　−Ｌｅｕ− Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ− ７ミ／　ｗｉ５１０−５２３、即らＰｒｏ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ａ　ｌａ−Ｌｙｓ −Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｖａ　ｌ　−Ｖａ　ｌ　−Ｇ　ｌ　ｎ−＾ｒｇ−Ｇｌｕ−Ｌ ｙｓ−Ａｒｇ−アミ／Ｐａ５５１−５７７、即ちＶａｌ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−＾ｒ （］−］Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−ＬｅＬＩ−３ｅｒＧ　Ｉ　ｙ−［１ｅ−Ｖａ　ｌ　− Ｇ　ｌ　ｎ−Ｇ　ｌ　ｎ−Ｇｉｎ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ− Ａ　Ｉａ−１１ｅ−ＧＩｕ・−＾１ａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−アミ ／Ｍ　５９４−６０３、即ち＾１ａ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−八ｒｆＪ−Ｔｌ／ｒ−Ｌ ｅＬＩ−Ｌｌ／５−ＡＳｔｌ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ− アミノＭ　６２１−６３０、即ちＰｒｏ−ＴｒＤ−＾５ｎ−Ａｌａ−３ｅｒ−Ｔ ｒｐ−３ｅｒ−Ａｓｎ−しｙＳ−３ｅｒ− アミノｉｌｌ　６５７−６７９、即ちＬｅｕ−１１ｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−３ｅｒ −Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｇ　Ｉ　ｎ−Ｇ　ｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇ　Ｉｕ −Ｇ　ｌ　ｎ−Ｇ　Ｉｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇ　１ｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ −ＴｒＤ−Ａｌａ− アミノ＠　７１９−７５８、即ちＡｒｏ−Ｖａｌ−Ａｒａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔ ｙｒ−５ｅｒ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ｐｈｅ−Ｇ　ｌ　ｎ−Ｔｈ　ｒ−Ｈｉ 　ｓ−Ｌｅｕ−Ｐ　ｒｏ−Ｔｈｒ−Ｐ　ｒｏ−Ａ　ｒｇ−Ｇ　Ｉ　ｙ−Ｐｒｏ− Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇ　１ｕ−Ｇ　Ｉｙ−ｌ１ｅ−Ｇ　Ｉｕ−Ｇ　Ｉｕ− Ｇ　Ｉｕ−Ｇ　１ｙ−Ｇ　！ｙ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ａ ｒｇ−３ｅｒ−１１ｅ−アミン９７８０−８０３、即ちＴｙｒ−１１ｉｓ−＾ｒ ｇ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−１１ｅ−Ｖａ　Ｉ−Ｔ ｈｒ−Ａｒｇ　−１１ｅ−Ｖａ　Ｉ　−Ｇ　ｌ　ｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇ　Ｉｙ −Ａｒｇ−＾ｒ（１−ＧＩＶ−ＴｒＤ−ＧＩＬＩ一本発明はこれらのベブヂドを 任意に組合わせたものにも係る。

扛ｉ立立旦上 本発明は更に、０ＲＦ−Ｑ、０ＲＦ−Ｒ及び１，２，３，４．５として規定され ている読取り枠を与えるＤＮＡ配列にも係る。これらの枠の相対位置は特に第２ 図及び第３図に示されている。

これらのＯＲＦは下記の位置を有する。

０ＲＦ−Ｑ　相　１　開始４５５４　終了５１６２０ＲＦ−Ｒｎ　２　ｒｔ　８ ３２５　＃　８９７２０ＲＦ−１＃　１　〃５１０５　〃５３９２ＯＲＦ−２！ ｌ　２　、、　５３４９　、／　５５９１０ＲＦ−３１１１１１５４５９１〕５ ６９２０ＲＦ−４！！　２　〃　５５９５　、、　５８４９０ＲＦ−５＃　１　 ｎ　８０４２　ｎ　８３５５０ＲＦ　Ｑ及びＦ Ｌ　Ａ　Ｖゲノムの・フィルス（＋）ストランド（ｍ）は、コア構造タンパク質 （ａａＯ）、逆転写酵素（ｐｏｔ）及びエンベロープタンパク質（ｅｎｖ）をコ ードする法定レトロウィルス遺伝子と、更に別の２つの読取り枠（ｏｒｆ）とを 含むことが判明したく表１）。

この２つの枠を以ＩＱ及びＦと称する。ＬＡＶの遺伝子構造５’　ＬＴＲ−ｇａ ａ　−ＤＯＩ　−Ｑ−ｅｎｖ　−Ｆ−３”ＬＴＲは他に類を見ない。全ての複製 能のあるレトロウィルスでｐａｌ及びｅｎｖつの小さい（＜１００１−リブレッ １〜）　ｏｒｆの前のｏｒｆ　Ｑ　（１９２個のアミノ酸）によって分離される 。ａｒ［Ｆ　（２０６個のアミノ酸）はｅｎｖの３′端に少しだけ重なり、且つ ＬＴＲのＵ３領域によって半分コードされるという特徴を有する。

このような構造によりＬＡＶは、先に配列決定されたレトロウィルスとは明確に 区別される（第２図）。（−）ストランドは明らかに非コード鎖である。ＬＡＶ クローンλＪ８１の（λＪ１９に対して）余分の）−１ｉｎｄｍ部位はＱ及びｅ ｎｖ間の明らかに非コーディング領域（位［５１６６−５７４５）にある。単一 の塩基（アンダーラインを付しである）によってｌ−１ｉｎｄｌ［［ＨＩ配列と は異なる配列（△ＡＧＣＣＴ）が位置５５０１から始まっている。種々の単離体 の間の制限部位冬型現象の多くがこの領域にマツプされることが予想される。ク ローンλＪ８１は１９８４年９月１５日出願の英国特許出願筒８４２３６５９号 にも記載されている。

λｌｌ上 表１にこれらの枠の末端におけるヌクレオチド位置を示した。

ｏｒｆ　Ｑの位置はレトロウィルス構造においては先例のないものであり、ｏｒ ｆ　ｌ”はＬＴＲのＵ３エレメント（要素）によってその半分がコードされると いう点で独特である。どちらのｏｒｆも「強い」イニシエーターコドン（Ｋ　ｏ ｚａｋ　１９８４年）をその５′端近傍に有し、夫々　１９２個のアミノ酸から なるタンパク質（算出Ｍ　Ｗ　＝　２２４８７）及び２０６個のアミノ酸からな るタンパク質（算出Ｍ　Ｗ　＝　２３３１６１をコードし得る。これらの推定タ ンパク質は双方共親水性であり（１）０４９％極性、１５．１％Ａ　ｒＱ十Ｌ　 ｙｓ；ｐｔ”４６％極性、１１％Ａ　ｒａ＋　Ｌ　ｙｓ）　、従って膜に直接結 合することはないと思われる。これら推定タンパク質ｐＱ及びｐＦの機能は、タ ンパク質配列データバンクをスクリーニングしてもホモロジーが全く発見されな いため予知し得ない。ｏｒｆ　ＦとＨＴＬＶ−１のｐＸタンパク質との間には検 出し得るホモロジーはない。

加えて、これら両者の疎水性／親水性プロフィルは完全に異なっている。レトロ ウィルスが細胞遺伝子、特に始原腫瘍遺伝子（ｐｒｏｔｏ−ｏｎｃｏｇｅｎｅ） を導入し得ることは既に知られている（Ｗｅｉｎｂｅｒｇ　１９８２年）。我々 はｏｒｆ　Ｑ及びＦが外回性遺伝子物質を表わすのであって、ＩＢＩ］ａＤＮＡ の何らかの痕跡を表わすのではないと考える。何故なら（Ｉ）ＬＡＶ　ＤＮＡは ストリンジェントなく緊縮）条件ではヒトゲノムとハイブリダイズしないしくＡ １１ＺＯｎ他、１９８４年）、（ＩＩ）ＯｒｆＱ及びＦのコドン使用頻度はｇａ ｇ　、　ｐｏｌ及びｅｎｖ遺伝子に比肩する（データ示さず）からである。

第６図に再構築ＬＴＲの構造とウィルスのフランキングエレメントとを概略的に 示した。このＬＴＲは６３８ｂｐの長さを有し、通常の特徴を示す（Ｃｈｅｎ及 びＢａｒｋｅｒ　、１９８４年）：　（Ｉ）保存ＴＧジヌクレオヂドを含む逆方 向反復（５’　ＡＣＴＧ）によッテその境界が限定される（　ＴＢｉｎ、　１９ ８１年）：（ＩＦ）５’ＬＴＲに隣接してｔ　ＲＮ　Ａ　ｊｙＳと相補的なｔＲ ＮＡプライマー結合部位（ＰＢＳ）がある（　Ｒａｂａ他、１９７９年）：（Ｉ ［［）３’ＬＴＲに隣接して完全な１５ｂｐポリプリントラクトがある。ヌクレ オチド８２００−８８００の間に見られる他の３つのポリプリントラクトの後に は前記ＰＢＳの直前の配列と相補的な配列は続かない。Ｕ５．Ｒ及びＵ３エレメ ントの境界は次のように決定された。Ｕ５はＰＢＳと、オリゴ（ｄｔ）でプライ ムしたＬＡＶｃＤＮＡの３′端の配列から確立されたポリアデニル化部位との間 に位置する（Ａｌｉｚｏｎ他、１９８４年）。従ってＵ５の長さは８４ｂｐであ る。Ｒ，＋　Ｕ　５の長さはｔＲＮＡでプライムしたＬＡＶＣＤＮＡを合成する ことによって決定した。プライマーのアルカリ性加水分解の°後ではＲ＋Ｕ５の 長さは１８１±１ｂｐであった。

従ってＲの長さは９７ｂＤであり、その５′端でのキャッピング部位の位置が決 定され得る。またＵ３は４５６ｂＤの長さを有する。

ＬＡＶ　ＬＴＲは特徴的な調節エレメント、即ちＲ−Ｕ５接合部から１９ｂｐの ポリアデニル化シグナル配列ＡＡＴＡＡＡと、キャップ部位の５′の２２ｂＯの ＴＡＴＡボックスと思われるＡＴＡＴＡＡＧ配列とをも含む。ＬＴＲ内にはこれ 以外の直接反復は存在しない。興味深いことに、このＬＡＶ　ＬＴＲはマウス乳 腺腫瘍ウィルス（ＭＭＴＶ）のＬＴＲと類似した点を幾つか有する（　Ｄ　ｏｎ ｅｈｏｗｅｒ他、１９８１年）。例えばこれら両者のＬＴＲはいずれも〈−）ス トランド合成のプライマーとしての総ての外因竹浦乳勅物レトロウィルスはｔ　 ＲＮ　Ａ　ｐｒｏを使用する（　（：、　ｈｅｎ及びＢａｒｋｅｒ　、　１９８ ４年）。また、これらのＬＴＲは極めて類似したポリプリントラクトを有する（ ＬＡＶの場合ＡＡＡＡＧＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧ、ＭＭＴＶ（７）場合ＡＡＡＡＡ ＡＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧ）。ウィルス（＋）ストランド合成は断続的である可 能性がある。何故なら３’　ＬＴＲのＵ３エレメントの両側のポリプリントラク トはｏｒｒ　ｐｏｔの３′端において４３３１−４３３６で正確に重複するから である。更に、ＭＭＴＶ及びＬＡＶはＵ３エレメントがｏｒｆをコードし得ると いう点で他とは異なる。ＭＭＴＶの場合はＵ３がｏｒ４全体を含むが、ＬＡＶの 場合はＵ３はｏｒｒ　Ｆの３′側半分のコドン１１０個を含む。

し△■の末端の長い繰返し配列（ＬＴＲ）を第６図に示した。

前述の如くこのＬＴＲは）−１ｉｎｄｌ［Ｉクローニング部位に隣接する配列を 併置することによってλＪ１９の配列から再構築したものである。

オリゴ（ｄＴ）でプライムしたＬＡＶ　ＤＮＡクローンＩ）ＬＡＶ７５　（Ａｌ ｉｚｏｎ他、１９８４年）の配列決定によるとＬＡＶのＲ領域におけるｌ−１ｉ ｎｄＩ［［部位のクラスターの可能性は除外される。ＬＴＲは逆方向反復配列（ ＴＲ）によってその境界が限定される。ＬＴＲの両側のウィルスエレメントは双 方とも５’　ＬＴＲのｔＲＮＡプライマー結合部位（ＰＢＳ）及び３’　ＬＴＲ のポリプリントラック（ＰＵ）として表わされてきた。推定される＃ＴＡＴＡボ ックス、キャップ部位、ポリデニル化シグナル（ＡＡＴＡＡＡ＞及びポリアデニ ル化部位（ＣＡＡ）も示されている。読取り枠Ｆ　（６４１３個のヌクレオチド ）の位置はＬＴＲ説明図の上方に示されている。

ＬＴＲ（末端の長い反＠配列）は位置８５６０と位＠１６０との間に延在するも のとして規定することもできる（先端は位置９０９７／１にわたって延びる）。

実際、ゲノムの終端は９０９７に位置し、レトロウィルスのＬＴＲ構造に起因し て下記の配列の冒頭につＣＴＣＡＡＴ△△ＡＧＣＴＴＧＣＣＴＴＧ／へ ウィルス読取り枠の位冒及び大ぎさを表１にまとめた。ヌクレオチドの座標（よ 第１１〜リブレツ１へと第１メチオニン闇胎コドン（Ｍｅｔ）と、終１トコトン （ストップ）との第１塩基を指示する。アミノ酸の数及び算出分子ｆｆｉ　（Ｍ Ｗ）はｐｏｌを除いて第１メヂオニンから終端までの非修飾前駆体生成物に関し て計算しＩこしのである。ｐａｌの大ぎさ及びＭＷはｏｒｆ全体の大きさ及び第 １　トリ　アミノ酸 Ｏｒｆフレッ　ト　Ｍｅｔ　ストップ　の数　算出分子量ａａｏ　３１２　３３ ６　１８３６　５００　５５８４１ｐｏｌ　１６３１　４９３４　４６４０　（ １００３＞　（１１３６２９）ｏｒｆＱ　４５５４　４５８７　５１６３　１９ ２　２２４８７［＋Ｖ　５７４６　５７６７　８３５０　８６１　９７３７６ｏ ｒｆＦ　８３２４　８３５４　Ｂ９７２　２０６　２３３１６本発明はより特定 的には、読取り枠に対応する前述の総ての特定ＤＮＡフラグメントに係わる。当 業者はこれら全てのＤＮＡフラグメントを１９るのに、例えばＬＡＶ種の完全ゲ ノムに対応する全ＤＮＡを適切な制限酵素による部分的又は全体的、消化によっ て切断するなどし、次いで所望のフラグメントを回収することができると理解さ れたい。前述の種々のＤＮＡはまた、適切なフラグメントの源として使用するこ ともできる。前述のプラスミドに含ませ且つＤＮＡ配列決定に使用されたフラグ メントを分離するための下記の如き技術が使用可能である。

勿論他の方法を使用してもよい。その−例は１９８４年９月１９日出願の英国特 許出願第８４２３６５９号に記載されている。下に使用し得る方法を数例挙げる 。

ａ）　ＤＮＡを、リン酸カルシウム沈澱、ポリエチレングリコール、プロトプラ スト融合２笠々種々の方法により適切な選択マーカと共に吐乳動物細胞内にトラ ンフェクトする。

ｂ）遺伝子に対応するＤＮＡフラグメントを、大腸菌、イースト（Ｍ母）又は哺 乳動物１ｉＩ胞用の発現ベクター中にクローニングし、得られたタンパク質を精 製する。

Ｃ）融合ポリペプチドを生成させるべくプロウィルスＤＮＡを「ショット−ガン 処理」　（断片化）して原核生物発現ベクター中に導入する。抗原として作用し 得る融合タンパク質を産生する組換体はＬ　Ａ　Ｖ抗原に対する抗体を用いてこ れら組換体をスクリーニングするだけで同定できる。

本発明（ま更に、前記ＤＮＡ配列のいずれかを含み且つ対応微生物又は細胞、特 にイースト、例えばサツカロミセスセレビシアエ（ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ 　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）の如ぎ真核細胞、又はより高等な真核細胞、特に吐乳 動物細胞を軽質転換させ且つ前記ＤＮＡ配列を対応微生物又は細胞中で発現させ るのに適するようにしたＤＮΔ組換体、特に修飾ベクターにも係わる。この種の 一般的方法は１９８４年１１月１６日出願の前出の英国特許出願８４２９０９９ 号に記述されている。

本発明はより特定的には前述のＤＮＡ配列によって修飾され且つより高等な真核 細胞特に哺乳動物細胞を軽質転換させ得るような被修飾ＤＮＡ組換体ベクターに 係わる。前記配列はいずれも、前ζベクターに含まれ且つ前記細胞のポリメラー ゼによって認識されるプロモーターの直接制御下で、第１発現ヌクレオチドコド ンが前述の如く規定されたＤＮＡ配列の第１トリブレツ１〜に対応するように配 置されるのが好ましい。従って本発明は更に、任登の適切な方法によってＬＡＶ ゲノム又は対応ＣＤＮＡから（７ることができるような対応ＤＮＡフラグメント にも係わる。そのための方法としては、例えば、制限酵素を用いて好ましくは前 記フラグメントを包囲し且つこれらフラグメントの対向末端に夫々近い制限部位 のレベルで前記ＬＡＶゲノム又はＣＤＮＡを切断し、大きさに応じて所望のフラ グメントの回収及び同定を行ない、必要であればこれらフラグメントの制限マツ プ又はヌクレオチド配列をチェックしく又は前記ＤＮＡフラグメントによりコー ドされたポリペプチドに担持されるエピトープに対して特異的に作用するモノク ローナル抗体との反応を用いる）、更に必要であれば、前記ＤＮＡフラグメント の末端の所望のヌクレオチド配列を制御する目的で、又は逆に前記末端をＫ　Ｉ ｅｎｏｗ酵素によって修復し場合によっては前記フラグメントを前記フラグメン トのヌクレオチド末端を再構築すべく設計された合成ポリヌクレオチドフラグメ ントに結合する目的で、たとえば３ａρ　３１のようなエキソヌクレアーゼによ ってフラグメントの末端を処理する方法がある。これらのフラグメントは次いで 前記のいずれかのベクターに挿入し得、このベクターで形質転換された細胞によ り対応ポリペプチドを発現させ得る。対応ポリペプチドは次いで必要であれば細 胞の溶解後に形質転換細胞から回収でき、電気泳動の如き方法によって精製し得 る。これらの操作を行なうには勿論、任意の従来技術を使用し得る。

本発明は更に、本発明の任意のＤＮＡフラグメントを出発材料とし得るクローニ ングされたブロー７にも係り、従ってこの種のフラグメントを含む組換体ＤＮＡ 特に原核１［ｌ１１１又は真核細胞中で増幅し得且つ前記フラグメントを担持す る任意のプラスミドにも係わる。

クローン化ＤＮＡフラグメントを一放射性ヌクレＡチド又は螢光試薬によって標 識することにより一分子ハイブリダイゼーションプローブとして使用すれば、血 液中、体液中、血液製剤（例えば第■囚子濃縮物の如ぎ抗血友病因子）中及びワ クチン、即らＢ型肝炎ワクチン中でＬＡＶヴイリオンＲＮＡが直接検出され得る 。ＬＡＶ産生細胞の培養上澄み中に全ウィルスが検出され得ることは既に判明し ている。この検出を行なうための適切な方法の１つは、ウィルスをサポート（担 体）、例えばニトロセルロースフィルタ等の上に固定化し、ヴイリオンを破砕し て（放射性標識又は「コールド」な螢光標識、又は酵素標識により）標識された プローブとハイブリダイズさせることからなる。この種の方法は末梢血液中のＢ 型肝炎ウィルスに関して既に開発されている（ＳＣＯＴＴＯＪ、他著Ｈｅｐａｔ ｏｌｏｇｙ　（１９８３年）、３　、　３７９−３８４参照）。

本発明のプローブｔま更に、プロウィルスＤＮＡ又はＲＮＡが宿主の組織及び他 の組織中に存在するか否かを検出すべく、ＬＡＶに係わる症状を示す思考の組織 から誘導したゲノムＤＮＡの高速スクリーニングを行なうためにも使用し得る。

このようなスクリーニングに使用できる方法の１つは下記のステップからなる。

ＤＮＡを組織から抽出し、このＤＮＡを制限酵素によって切断し、フラグメント を電気泳動にかけ、組織からのゲノムＤＮＡのサザンブロツティング（Ｓ　ｏｕ ｔｈｅｒｎｂｌｏｔｔｉＨ）を行ない、次いで標識されたクローン化ＬＡＶプロ ウィルスＤＮＡとハイブリダイズさせる。その場でハイブリダイズさせる方法を とってもよい。

他の進化的に関連するレトロウィルスの存在を調べるべく、ヒト、Ｂ長目及び他 の哺乳動物種のリンパ液及びリンパ組織ならびに非リンパ組織をスクリーニング 処理することもできる。

この場合も前述の方法を使用し得る。但し、ハイブリダイゼーション及び洗浄は 非ストリンジェントな条件で実ａする。

本発明のＤＮＡ又はＤＮＡフラグメントは、診断の目的でＬＡＶウィルス抗原を 発現させるためにも使用できる。

本発明は一般的には、化学合成されたもの、ウィルス試料から分列されたもの、 又は本発明の種々のＤＮＡによって発現されたもの、特に対応ＤＮＡにより予め 修飾された適切なベクターによって形質転換した後でこれらＤＮＡのＯＲＦもし くはそのフラグメントにより適当な宿主、特に原核或いは真核宿主中に発現され たものの総てを含めたポリベブヂド自体に係わる。

概して本発明は、ＬＡＶタンパク質あるいは糖タンパク質に特有なエピトープを 有するあらゆるポリペプチドフラグメント〈あるいは分子、特に上述のポリペプ チドと同じポリペプチドバックボーンを有する糖タンパク質）にも係わり、前記 ポリペプチドあるいは分子のＮ末端及びＣ末端はそれぞれ遊離しているか、ある いはまた互いに独立に、通常ＬＡＶウィルスのより大きいポリペプチドあるいは 糖タンパク質のＮ末端やＣ末端に結合しているアミノ酸以外のアミノ酸と共有結 合している。これらアミノ酸はそれ自体遊離しているかまたはり１のポリペプチ ド配列に属する。本発明は特に、先に特定したエピトープ保有ポリペプチドであ って、通常ＬＡＶタンパク質にとって異質である他のポリペプチドフラグメント と再結合した（組み換えられた）もののいずれかを含有するハイブリッドポリペ プチドに係わり、上記異質なポリペプチドフラグメントはエピトープ保有ポリペ プチドの免疫原性を増大するに充分な大きさを有するが、該フラグメント自体は 免疫原性的に不活性であるか、あるいはエピトープ保有ポリペプチドの免疫原性 を妨げないものである。

１５０個まで、場合によっては２５０個までのアミノ酸を含み得る上記のような ハイブリッドポリペプチドは普通、適当な宿主中で適当なプロモーターあるいは レプリコンの制御下に発現され得る核酸配列を初めから含有しているベクターの 発現生成物から成るが、前記核酸配列は、エピトープ保有ポリペプチドをコード するＤＮＡ配列を該核酸配列に挿入することによって予め変更されている。

特にＮ末端及びＣ末端アミノ酸がｉｍｔ、ている上記エピトープ保有ポリペプチ ドは、タンパク化学の分野で公知の技術による化学的合成も可能である。

均質な溶液中での、また固相におけるペプチド合成が公知である。

この点、Ｅ、ＷＵＮＳＣ＋−１編集の”　ｔｖｌ　ＱｔｈＯｄｅｎ　ｄｅｒｏｒ ｇａｎｉｓｃｈｃｎ　Ｃｈｅｍｉｅ　（有機化学の手法）　”　、　ｖｏｌ、１ ５−　Ｉ　＆　ＩＩ　。

Ｔ　ＨＩ　Ｅ　Ｍ　Ｅ　、　Ｓ　ｔｔｌｔｔｇａｒｔ、　１９７４でＨｏｕｂｅ ｎｗｅｙ　Ｉ　カＪ　Ａ：　テイル均質な溶液中での合成方法が使用できる。

この合成方法は、２個ずつ連続するアミノ酸を適当な順序で連続的に縮合させる か、または既に複数個のアミノアシル残基を含む予め入手あるいは形成した連続 ペプチドフラグメン１へを適当な順序で連続的に縮合させることから成る。上記 アミノアシル残基もしくはフラグメントの有する反応基のうち、ペプチド結合の 形成に関与するカルボキシル基おＪ：びアミノ基以外のものは総て予め保護しな ければならない。しかしカルボキシル基は、ペプチド結合の形成に先立って、ペ プチド合成の分野で良く知られた方法で活性化すると有利である。あるいは他の 場合には、例えば１−エチル−３−（３−ジメチル−アミノプロピル）−カルボ ジイミドのようなカルボジイミド型の通常のカップリング試薬を用いてカップリ ング反応を生起させてもよい。

使用するアミノ酸残基が付加的なアミン基（例えばリジン）または酸官能基（例 えばグルタミンＭ）を有する場合、それらの官１１基は、アミン基であればカル ボベンゾキシ基あるいは１−ブチルオキシカルボニル −ブチルエステル基で保護し得る。他の反応基の保護についても、同様の手続が 有効である。例えば、（システィン等の）ＳＨ基は、アセ−ドアミドメチル基あ るいはバラメトキシベンジル基で保護できる。

アミノ酸を１個ずつ結合してゆく逐次合成の場合、合成はまずＣ末端アミノ酸を 所望配列中の隣接アミノアシル基に対応するアミノ酸と縮合させ、その後前記の ようにしてＮ末端アミノ酸まで逐次縮合させることによって実現することが好ま しい。使用できる別の好ましい技術がＲ．　Ｄ．Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄによッテ 、”ｓｏｌｉｄ　ｐｈａｓｅ　ｐｅｐＮｄｅ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”　Ｌｌ．Ａ ＬＣｈｅｍ．　Ｓｏｃ．、　４５．　２１４９−２１５４）に述べられている。

Ｍ　ｅｒｒＮ’ｉｅｌｄ法では、鎖の第一のＣ末端アミノ酸をそのカルボキシル 基によって適当な多孔ポリマー樹脂に固定し、その際上記アミノ酸のアミノ基は 例えばｔ−ブチルオキシカルボニル基Ｃ保護する。

第一・のＣ末端アミノ酸を上記のようにして樹脂に固定したらアミン基の保ｙｔ ｌを、アミン基の保護基がｔ−ブチルオキカルボニル基であれば樹脂を酸、即ち １〜リフルオロ酢酸で洗浄することによって除去する。

次に、所望のペプチド配列の第二のアミノアシル基をもたらすべき第二のアミノ 酸のカルボキシル基を、樹脂に固定したＣ末端アミノ酸の保Ｉ％を除去されたア ミン基と結合させる。好ましくは、上記第二のアミノ酸のカルボキシル基は例え ばジシクロへキシルカルボジイミドで活性化しておぎ、又該アミノ酸のアミン基 は例えばｔ−ブチルオキカルボニル基で保護してＪ′３り。こうして所望のペプ チド鎖の、最初の２個のアミノ酸を含む第一の部分が得ら机る。先の場合と同様 アミン基の保護基を除去する。このように７ミノアシル基を順次固定してゆくこ とによって所望のペプチドを得ることができる。

上述のようにして形成したペプチド鎖が様々な側鎖基を有する場合、該側鎖基の 保護基を次に除去し１りる。こうして得られた所望のペプチドは、例えばフッ化 水素酸で樹脂から分離し得、最侵に通常の手続によって酸溶液から純粋な形態で 回収し得る。

エビトーフもしくは抗原決定基（　ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃ　ｄｅｔｅｒｍｉｎ ａｎｔ）を有する最小のペプチド配列で、特に化学的に合成し易いものに関し、 そのインビボでの免疫原性を増大するには該ペプチド配り１１を生理学的に許容 され（９る無毒性のキャリヤー分子と共有結合によってカップリングまたは「共 役」させることが必要となり得る。

本発明による共役体（　ＣＯｎｊＵＱａｔｅ）の実現に使用し得るキリリヤー分 子もしくは高分子担体の一例として、破傷風トキソイド。

オボアルブミン．血清アルブミン、ヘモシアニン等のような天然タンパク質が挙 げられる。例えばポリリシンあるいはポリ（Ｄ−Ｌ−アラニン）−ポリ（Ｌ〜リ ジン）といった合成高分子キャリヤーも使用可能である。

通常２０，　０００を上回る分子量を有する他の種類の使用可能高分子キャリヤ ーが文献から公知である。

共役体は、”　Ｉ　ｎｆｅｃｔ．　ａｎｄ　ＩＩＩ＋ｗ＋ｕｎｉｔｙ”、３３， 　１９３−１９８（１９８７）にＦ　ｒａｎｔｚ及びＲ　ｏｂｅｒｔｓｏｎによ って述べられているような、あるいはまたＡ　Ｉ）Ｄｌｉｅｄ　ａｎｄ　Ｅ　ｎ Ｖｉｒｏｎｌｌｌ［１ｔａｌ　Ｍ　ｉＣｒＯ−ｂｉｏｌｏＯｙ．　Ｏｃｔｏｂｅ ｒ　１９８１，　Ｖｏｌ．　４２，　ｎ＠４，　６１１−６１４にＰ。

Ｅ　、　Ｋ　ａｕＨｍａｎによって述べられているような公知方法で合成するこ とができる。

一例として、次のカップリング剤が使用可能である。ニゲルタルアルデヒド、エ チルクロロホルメート、水溶性カルボジイミド［Ｎ−エチル−Ｎ′　（３−ジメ チルアミノプロピル）カルボジイミド、ＨＣρ］，ジイソシアネートビス−ジア ゾベンジジン、ジクロロ及びトリクロロ−ｓ−　トリアジン、臭化シアン、ベン ゾキノン、並びに’　３ｃａｎｄ、　Ｊ　、１　ａｓｕｎｏｌ、　”　、　１９ ７Ｂ。

Ｖｏｌ、　８．ｐ、　７−２３　（Ａｖｒａｍｅａｓ、Ｔｅｒｒｒｙｎｃｋ、Ｇ ｕｅｓｄｏｎ）に記載された諸カップリング剤。

ペプチドの１個以上の反応基とキャリヤーのｉｉ以上の反応基とを結合させるの に、如何なるカップリング方法も用いることができる。また、結合を、タンパク 質合成に用いられる種類のカップリング剤、即ち１−エチル−３−（３−ジメチ ルアミノプロピル）−カルボジイミド、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール等の 存在下にペプチドのカルボキシル基とキャリヤーのアミン基との間でかまたはそ の逆において実現すると有利である。キャリヤーがヘモシアニンである場合は、 例えばＢＯＱＵＥＴ、Ｐ、ｅｔａｌ、がＭｏ１ｅｃ、　Ｔｕｕｎｏｌ、、　１９ ．１４４１−１５４９（１９８２）に述べている方法によって、ペプチド及びキ ャリヤーそれぞれのアミン基同士をグルタルアルデヒドで結合させることもでき る。

エピトープ保有ペプチドの免疫原性は、該ペプチドを例えばグルタルアルデヒド その他のあるゆる適当な結合剤（カップリング剤）の存在下にオリゴマー化する ことによっても強化し得る。特に本発明は、上記のようにして得られる水溶性の 免疫原性オリゴマーであって、特に２〜１０１１１ｊのモノマーユニットを含む ものに係わる。

本発明の糖タンパク質９タンパク質及びポリペプチド（以後総じて°゛抗抗原上 呼称する）は、ＬＡＶウィルス試料から精製状態で得ても、あるいはまた−特に ペプチドに圓し一化学的合成によって得ても、特にＬＡＳあるいはＡＩＤＳを診 断し得るという観点から生物学的ｔｓ質、特にヒトあるいは動物の血清のような 生物学的流体における抗ＬＡＶ抗体の存在を検出する方法において有用である。

本発明は特に、抗ＬＡＶ抗体を有するヒトの血清中に前記抗体を検出するのにエ ンベロープ糖タンパク質（あるいは該糖タンパク質のエピトープを有するポリペ プチド）を用いるインごトロ診断法に係わる。上記以外のポリペプチド−特にコ アタンパク質エピトープを有するもの−も使用可能である。

本発明方法の好ましい具体例は、 一上記抗原の１種以上を所定量だけ滴定マイクロプレートのカップ内に入れるこ と、 一前記カツブ内へ、診断されるべき生物学的流体即ち血清を希釈したものを希釈 度を上げながら導入すること、−マイクロプレートをインキュベートすること、 −マイクロプレー１〜を適当な緩衝液で注意深く洗浄すること、−特異的に標識 した、血液免疫グロブリンに対する抗体をカップ内に添加すること、及び 一生物学的流体中にしＡＶ抗体が存在することを指示する形成された抗原抗体複 合体を検出することを含む。

抗免疫グロブリン抗体の標識は、基質を加水分解し得る諸酵素中から選択した酵 素によって実施するのが有利であり、前記基質はその放射線吸収に、少なくとも 所定の波長帯内で変化を蒙る。基質を好ましくは対照との比較において検出する ことによって、疾病の潜在的危険あるいは実在が測定できる。

このように好ましい方法は、特にＥＬＩＳＡ技術による酵素免疫測定法式あるい は螢光抗体法式検出である。滴定は、螢光抗体法による測定か、あるいは直接的 または間接的酵素免疫測定であり得る。こうして、調査血清中の抗体を定量的に 滴定し得る。

本発明はまた、ＬＡＶウィルスに対する抗体のインビトロ検出のための診断キッ ト自体にも係わり、このキットは本明細書中に規定したポリペプチドのいずれか と、診断アッセイの実施に必要な総ての生物学的及び化学的試薬並びに備品とか らなる。

好ましいキットは、ＥＬＩＳＡアッセイを実施するのに必要な全試薬を含む。即 ち好ましいキットは、先に述べたポリペプチドのいずれかに加えて適当な緩衝液 及び抗ヒト免疫グロブリンを含み、前記抗ヒト免疫グロブリンは免疫螢光分子か あるいは酵素によって標識される。この最後の場合の好ましいキットはまた、酵 素によって加水分解され得る基質をも含み、この基質は少なくとも所定波長にお いて信号、特に変化した放射線吸収を示し、この信号が、キットで調べた生物学 的流体中に抗体が存在することを指示する。

本発明は、薬学的あるいは生理学的に受容され得る適当なキャリヤーと共に、い ずれかの抗原、即ち先に開示したポリペプチド、全抗原、特にその精製された＋ １１）　１１０フラグメント即ら免疫原性フラグメント、融合ポリペプチド、あ るいはオリゴペプチドから成る活性成分を有するワクチン組成物にも係わる。

好ましい活性成分の第一の種類はＣ１０１１０免疫原である。

当該分野で考慮されるべき他の好ましい活性成分は、ＬＡＶの完全なゲノムにつ いて推論され得るように２５０個に満たない、好ましくは１５０個に満たないア ミノ酸ユニットしか含有しないペプチドから成り、更に好ましくは先に規定した Ａ　ｓｎ　−Ｘ　−８ｅｒ及び△５ｎ−Ｘ−８ｅｒから選択された１個以上の残 塁を含有するペプチドから成る。ワクヂン成分の製造に好ましく用い得るペプチ ドは、先に規定したペプチド（ａ）〜（ｆ）である。非限定的な一例として、ワ クチン組成物の投与量はインビボで、叩ら宿主、特にヒト宿主において抗体を産 生させるのに有効な稈の吊が適当であり得る。適当な投与ｍ範囲は、ポリペプチ ド。

タンパク質あるいは糖タンパク質１０〜５００マイクログラム／　Ｋｇ。

例えば５０〜１００マイクログラム／Ｋｇである。

本発明による様々なペプチドはそれ自体を抗体の、好ましくは様々なペプチドそ れぞれに特異的なモノクローナル抗体の製造に用いることもできる。上記モノク ローナル抗体を分泌するハイブリドーマの製造には、通常の製造及びスクリーニ ング方法を用いる。それ自体本発明の一部である上記モノクローナル抗体は、Ｌ 　Ａ　Ｖあるいは関連ウィルスを含有する生物学的標本、持にヒ１〜から得られ た標本における様々なポリペプチドあるいはタンパク質の相対比率を確認し、更 には決定するのに非常に有用である。

特表昭６２−５００５９２　（１ｇ） 本発明は更に、先に述べた組換え体によって形質転換される、上記ＤＮＡフラグ メントを発現し得る宿主（原核あるいは真核細１泡）に係わる。

最後に、本発明は、ヒト起源の真核ｌＩ胞、特にそのポリメラーゼがＬＡＶのＬ ＴＲを識別しくｎるリンパ球の形質転換のためのベクターにも係わる。このベク ターは特に該ベクター中にしＡＶのＬＴＲが存在することを特徴とし、前記ＬＴ Ｒは、所定タンパク質を自身の制御下に配置してコードするＤＮＡ挿入断片の適 当な宿主における有効な転写及び翻訳を可能にするプロモータとして活性である 。

当然ながら本発明はＬＡＶの等価物と見做され得るレトロウィルスに属するゲノ ムのあるゆる変異体並びに実質的に等価の特性を有する対応ＤＮＡフラグメント （ＯＲＦ）にも適用される。

後記請求の範囲各項は生成物（糖タンパク質、ポリペプチド。

ＤＮＡ等）のあらゆる等価物を包含するものと凪解されるべきであり、その際等 価物とは、上記請求の範囲各項の何れかにおいて定義された所定ポリペプチドか ら例えば、１個以上のアミノ酸の点で区別されるが、前記所定ポリペプチドと実 質的に同じ免疫学的もしくは免疫原的特性を有する生成物即ちポリペプチドであ る。ＤＮＡにも同様の等価の法則が当て嵌まり、該法則は前記ＤＮＡがコードす るポリペプチドに係わる等価の法則と関ｊπ付けられると叩解される。

また、本明細書て・言及する全文献、並びに本明細書中で特定してないが本明細 書中に特に示した特許出願及び特許と深い関連を有する特許出願及び特許の総て は本明ｌｌｌ書に参考として含まれると見做されるべきであると叩解される。

（以下余白） 参考文献 Ａ１１ｚｏｎ、　Ｈ，、Ｓｏｎｉｇｏ、　Ｐ、、　Ｂａｒｒｅ−３ｉｎｏｕｓｓ ｉ、　Ｆ、、　Ｃｈｅｒｍａｎｎ。

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５ｃｉｅｎｃｅ　２２０，８６８−８７０゜配列決定の補助手段としての緩衝液 勾配ゲルと３５８標識（Ｂｕｙｅｒ　ｇｒａｄｉｅｎｔ　ｇｅｔｓ　ａｎｄ　３ ５Ｓ　１ａｂｅｌ　ａｓ　ａｎ　ａｉｄ　ｔｏ　ｒａｐｉｄＤＮＡ　５ｅｑｕｅ ｎｃｅ　ｄｅｔｅｒｌＯｉｎａｔｉｏｎ）、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓ ｃｉ、ＵＳＡ８０．３９６３−３９６５　。

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Ｎｕｃｔ、Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ、８．１４９９−１５０４゜Ｂｒｕｎ−Ｖ６ｚｉ ｎｅｔ、Ｆ、、Ｒｏｕｚｉｏｕｘ、Ｃ，、Ｂａｒｒ５−３ｉｎｏｕｓｓｉ、Ｆ、 。

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ｓｔｏｗｒｔｎｏ、　ｌ−’＋　ｖｃｎｔｕｒａ、　ｐ、、　Ｈａａｓｅ、　Ａ 、Ｔ、、　ＰＣ！ＩＬＩｓＯ，Ｒ。

（１９８１Ｌ　ビスナウィルスＯＮ＾：新しいギャップ構造の発見（Ｖｉｓｎａ ＶｉｒｌＪＳ　ＤＮＡ　：　ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ　ｏｆ　ａ　ｎｏｖｅｌ　２ａ ｐｐｅｄ　５ｔｒｕｃｔｕｒｅ）ｖｉｒｏｌｏａｙ　１１３．５７３−５８３゜ にｉｙｏｋａｗａ、Ｔ、、　Ｙｏｓｈｉｋｕｒａ、　Ｉｔ、、１ｌａｔｔｏｒｉ 、　Ｓ、、　５ｅｃｋｉ、　Ｈ，。

Ｙｏｓｈｉｄａ、　Ｈ，（＋９８４）、ヒトＴＩ胞白血病ウィルスのエンベロー プタンパク質：大腸菌での発現とｅｎｖ　ｌ伝子の機能に関する研究への応用（ Ｅｎｖｅｌｏｐｅ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　Ｔ−ｃｅｌｌ　ｌｅ ｕｋｅｍｉａｖｉｒｕｓ　：　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　Ｅｓｃｈｃｒｉｓ ｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ａｐｐｌｉｃａ−ｔｉｏｎ　ｔｏ　５ｔ ｕｄｉｅｓ　ｏｒ　ｅｎｖ　ｇｅｎｅ　ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ）、Ｐｒｏｃ　Ｎａ ｔｌ、　Ａｃａｄ。

Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　８１．６２０２−６２０６゜ＫｌａｔＺｍａｎｎ、Ｄ、、Ｂ ａｒｒ６−３ｉｎｏｕｓｓｉ、Ｆ、、Ｎｕｇｅｙｒｅ、Ｈ，■、。

Ｄａｕｇｕｅｔ、　Ｃ，、Ｖｉｌｍｅｒ、　Ｅ、、　Ｇｒｉｓｃｅｌｌｉ、　Ｃ ，、Ｂｒｕｎ−ＶＪｚｉｎｅｔ。

Ｉ’、、　Ｒｏｕｚｉｏｕｙ、　Ｃ，、Ｇｌｕｃｋｍａｎ、　Ｊ、Ｃ，、Ｃｈｅ ｒｍａｎｎ、　Ｊ、Ｃ，。

ＨＯｎｔａｇｎｉｅｒ、　Ｌ、　（１９８４）、リンパ節障害関連ウィルス（Ｌ ＡＶ）のヘルパー・インデューサー下リンパ球に対する選択的指向性（Ｓｅｌｅ ｃｔｉｖｅ　ｔｒｏｐｉｓｍ　ｏｆ　ｌｙｍｐｈａｄｅｎｏｐａｔｈｙ　ａｓｓ ｏｃｉａｔｅｄ　ｖｉｒｕｓ（［八Ｖ）　ｆｏｒ　ｈｅｌｐｅｒ−ｉｎｄｕｃｅ ｒ　Ｔ−ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ）、５ｃｉｅｎｃｅｓ　２２５゜５９−６３゜ Ｋｏｚａｋ、　）１．　（１９８４）、真核生物ｍＲ）４Ａの転写開始部位より 上流の配列の編集と解析（Ｃｏｍｐｉｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｎａｌｙｓｉｓ 　ｏｒ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓｕｐｓｔｒｅａｍ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｔｒａｎｓ ｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ　５ｔａｒｔ　５ｉｔｅ　１ｎｅｕｃａｒｙｏｔｉ：ｃ　 ｍＲＮ八ｓへ、Ｎｕｃｌ、八ａｉｄｓ　／　Ｒｅｓ、１２．　８５７−８７２゜ Ｌｅｖｙ、　Ｊ、＾、、　Ｈｏｆｆｍａｎ、＾、０．．　ｘｒａｍｅｒ、　ｓ、 Ｈ，、Ｌａｎｏｉｓ、　Ｊ、Ａ、。

Ｓｈｉｍａｂｕｋｕｒｏ、　Ｊ、Ｈ，、０ｓｋｉｒｏ、　Ｌ、Ｓ、　（１９８４ ）、サンフランシスコのＡＩＤＳ患者からのリンパ細胞変性レトロウィルスの単 離（Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＩＩ／ｍｐｈＯｃｙｔｏｐａｔｈｉｃ　ｒｅｔ ｒＯＶｉｒＬＩｓｃｉｓ　ｆｒｏｍ　５ａｎＦｒａｎｃｉｓｃｏ　ｐａｔｉｅｎ ｔｓ　ｗｉｔｈ　八ＩＤ５）、５ｃｉｅｎｃｅ　２２５．　８４０−８４２゜Ｈ ａｓｕｒ、　Ｉｔ、、　）ｌｉｃｈｅｌｉｓ、　Ｈ，＾、、　Ｇｒｅｅｎｅ、　 Ｊ、Ｂ、、　０ｎＯＶａｔＯ，１，。

Ｖａｎ　ｄｅ　Ｓｔｏｗｅ、　Ｒ，Ａ、、　ｌｌｏＩｚｍａｎ、　Ｒ，Ｓ、、　 Ｗｏｒｍｓｅｒ、　Ｇ、、　Ｂｒｃ＋ｔｔｍａｎ。

し　、１、ａｎｇｅ、　Ｈ，、Ｈｕｒｒａｙ、　１１．Ｗ、、　Ｃｕｎｎｉｎｇ ｈａｍ−Ｒｕｎｄｌｅｓ、　Ｓ。

（１９８１）、地域集団後天性ニューモジステイス・カリニ肺炎の発生：細胞性 免疫橢能不全の初期発現（Ａｎ　ｏｕｔｂｒｅａｋ　ｏｆｃｏｍ＋ｎｕｎ；ｔｙ −ａｃｑｕ：ｒｅｄｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔ＋ｓ　ｃａｒｉｎｉｉ　ｐｎｅｕｍｏ ｎｉａ　：Ｉ旧ｔｉａｌ　ｍａｎｉｆｅｓｔａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｅｌｌｕｌａ ｒ　ｉｌ′ｆｉｍｕｎｅ　ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ）、　Ｎ。

Ｅｎｇｌ、Ｊ、Ｈａｄ、３０５．　１４３１−４４３８゜）１ｉｓｒａ、　Ｔ、 に、、　Ｇｒａｎｄｑｅｎｅｔｔ、　Ｄ、Ｐ、Ｐａｒｓｏｎｓ、　Ｊ、Ｔ、　（ １９８２Ｌ　トリレトロウィルスのｐｐ３２　ＤＮＡ−結合性タンパク質、■、 し１〜ロウイルス［）Ｎへ末端反復配列上の特異配列の認識（Ａｖｔａｎｒｅｔ ｒＯＶｉｒｌＪＳ　ｐ１１３２　ＤＮＡ−ｂｉｎｄｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ、１ ．　Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ　ｏｒｓｐｅｃｉｆｉｃ　５ｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏ ｎ　ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ　ＤＮＡ　ｔｅｒｒａｉｎａｌ　ｒｅｐｅａｔｓ）。

Ｊ、　Ｖｉ「０１　４４．３３０−３４３ＨＯｎｔａｇｎｉｅｒ、　Ｌ、、　ａ ｔ　ａｌ、、　（１９８４）、　ｉｙｉシイヒトＴリンパ向性レトロウィルス： 特性決定及びリンパ節障害と後天性免疫不全症候群における可能な役割。ヒトＴ Ｉ［１胞白血病／リンパ腫ウイルス（＾ｎｅｗ　ｈｕｍａｎ　Ｔ−１ｙｍｐｈｏ ｔｒｏｐｉｃ　ｒｃｔｒｏｖｉｒｕｓ　：　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａ−ｔｉｏ ｎ　ａｎｄ　ｐｏｓｓｉｂｌｅ　ｒｏｌｅ　ｉｎ　ｌｙｍｐｈａｄｅｎｏｐａｔ ｈｙ　ａｎｄ　ａｃＱｕｉｒｅｄｉｍｍｕｎｅ　ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｓｙｎ ｄｒｏｍｅｓ、　Ｉｎ　ｈｕｍａｎ　丁−ｃｅｌｌ　ｌｅｕｋｅｍｉａ／ｌｙｍ ｐｈｏｍａ　ｖｉｒｕｓｅｓｌ、　Ｒ，Ｃ，Ｇａ１ｌｏ、Ｈ，Ｅｓ５ｅｘ、　Ｌ 、Ｇｒｏｓｓ　編（Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、二］−− Ｆ−り）　、　Ｉ）ＩＩ　３６３−３７０゜ｏｒｏｓｚｉａｎ、ｓ、、ｃｏｐｅ ｌａｎｄ、Ｔ、Ｄ、、にａｌｙａｎａｒａｍａｎ、Ｖ、Ｓ、。

Ｓａｒｎｇａｄｈａｒａｎ、　Ｈ，Ｇ、、　５ｃｈｕｌｔｚ、　Ａ、Ｈ，、Ｇａ １ｌｏ、　Ｒ，Ｃ，（１９８４）。

ヒトＴＩ胞白血病つィルス構造タンパク質の化学解析、　ＩＩＴＬＶ（Ｃｈｅｍ ｉｃａｌ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　Ｔ−ｃｅｌｌ　ｌｅｕｋｅｍ ｉａ　ｖｉｒｕｓｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ、　Ｉｎ　ＩＩＴＬ Ｖｓ）　（Ｒ，Ｃ，Ｇａ１ｌｏ、　Ｈ，Ｅ、　Ｅｓ５ｅｘ。

し、Ｇｒｏｓｓ編）　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｎｅｗ 　Ｙｏｒｋ、ｐｐ　１０１−１１０゜Ｐｉｎｔ、　Ｐ、、　Ｑｕｉｎｎ、　Ｔ、 Ｃ，、Ｔａｆｆ１ｌｌａｎｎ、　Ｈ，、Ｆｅ１ｎｓｏｄ、　Ｆ、Ｈ，ら（１９８ ４）、ザイールにおける異性愛者集団の後天性免疫不全症候群（八ｃｑｕｉｒｅ ｄ　ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ　ｉｎ　ａ　ｈｅｔ ｃｒｏｓｅｘｕａｌｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　ｉｎ　Ｚａｉｒｃ）、Ｌａｎｃｅｔ 　ＩＩ、６５−６９゜Ｐｏｐｏｖｉｃ、Ｈ，、Ｓａｒｎｇａｄｈａｒａｎ、Ｈ， Ｇ、、Ｒｅａｄ、Ｅ、、Ｇａ１ｌｏ、Ｒ，Ｃ。

（１９８４）、ＡＩＤＳ患者と前ＡＩＤＳ患者からの細胞変性レトロウィルス（ ＩＩＴＬＶ−Ｉ［［）の検出、単離、連続生産（Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ、　ｌ５ｏ ｌａｔｉｏｎ。

ａｎｄ　ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ　Ｄｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｙｔｏｐａｔ ｈｉｃ　ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ（ＨＴＬＶ−１１［）　ｆｒｏｍ　ｐａｔｉ ｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ＡＩＤＳ　ａｎｄ　ｐｒｅ−＾１０３）、　５ｃｉｅｎｃ ｅ２２４、４９７−５００ Ｑｕｅｒａｔ、　Ｇ、、　Ｂａｒｂａｎ、　Ｈ，，５ａｕｚｅＳＩｉｐｐｉ、　 Ｐ、、　Ｖｉｇｎｅ、　Ｒ，。

Ｒｕ５ｓｏ、　Ｐ、、　Ｖｉｔｕ、　Ｃ，（１９８４）、進行性肺炎に罹ったヒ ツジに天然に存在する高溶解性レンズウィルスと持続性レンズウィルスとは遺伝 的に異なル（ｌｌｉｇｈｌｙ　Ｉｙｔｉｃ　ａｎｄ　ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔｌｅ ｎｔｉｖｉｒｕｓｅｓ　ｎａｔｕｒａｌｌｙ　ｐｒｅｓｅｎｔ　ｉｎ　５ｈｅｅ ｐ　ｗｉｔｈ　ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅＤｎ（！ｕｆｆｉｏｎｉａ　ａｒｅ　ｇ ｅｎｅｔ＋ｃａｌｌｙ　ｄｉｓｔｉｎｃｔ）、　Ｊ、　Ｖｉｒｏｌ、　５２．６ ７２−６７９゜ Ｒａｂａ、　Ｈ，、Ｌｉｍｂｕｒｇ、に、、　Ｂｕｒｇｈａｇｅｎ、　Ｈ，、に ａｔＺ８．　Ｊ、Ｒ，。

５１ｍ５ｅｋ、　Ｈ，、Ｈｅｃｋｍａｎ、　Ｊ、Ｅ、、　Ｒａｊｂｈａｎｄａｒ ｙ、　Ｕ、Ｌ、、　Ｇｒｏｓｓ、　Ｈ，Ｊ。

（１９７９）、ウサギ肝とＳＶ４０でトランスフオームしたマウスａｍ丼細胞と に由来する３種のイソアクセプト性リシンｔＲＮＡのヌクレオチド配列（Ｎｔｌ Ｃ＋（３０ｔｌｄｅ　５ＯＱｕｅｎＣｅ千Ｑ　ｔｈｒｅｅ　ｉｓｏａｃｃｅｐｔ ｉｎｇｌｙｓｉｎｅ　ｔＲＮＡｓ　ｆｒｏｍ　ｒａｂｂｉｔ　１ｉｖｅｒ　ａｎ ｄ　ＳＶ４０−ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｍｏｕｓｅ　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ） 、Ｅｕｒ、Ｊ、Ｂｉｏｃｈｅｓ、９７．　３０５−３１８゜Ｒ，、Ｂｕｒｎｙ、 　Ａ、、　Ｇ１１ｄｅｎ、　Ｒ，Ｖ、　（１９８４）、ウシ白血病ウィルスのｅ ｎｖ遺伝子とｐｏｓｔ−ｅｎｖ領域のヌクレオチド配列（ＴｈｅｎＬＩｃｌｅｏ ｔｉｄｅ　５ｅＱｕｅｎＣｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｎｖ　Ｑｅｎｅ　ａｎｄ　ｐｏ ｓｔ−ｅｎｖ　ｒｅｇｉｏｎｏｆ　ｂｏｖｉｎｅ　ｌｅｕｋｅｍｉａ　ｖｉｒｕ ｓ）、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ　１３＆、８２−９３゜ｓａｇａ＋＋ａ、Ｎ、、ＹａＳ ｕｎａ（ｌａ、Ｔ、、０ＱａＷａ、Ｙ、、ＴＳｔｌＺＩＪｋｔｌ−ＫａＷａｌｌ ｌＬｌｒａ。

Ｊ、、　Ｉｋａｗａ、　Ｙ、　（１９８４）、ウシ白血病ウィルス：その末端玉 反復配列の独特な構造の特徴およびヒトＴＩ胞白血病ウィルスとの進化上の関連 （Ｂｏｖｉｎｅ　ｌｅｕｋｅｍｉａ　ｖｉｒｕｓ　：　Ｕｎｉｑｕｅ　５ｔｒｕ ｃｔｕｒａ＋ｆｅａｔｕｒｅｓ　ｏｒ　ｉｔｓ　ｌｏｎｇ　ｔｅｒｍｉｎａｌ　 ｒｅｐｅａｔｓ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ−ａｒｙ　ｒｅｌａｔｉ ｏｎｓｈｉｐ　ｔｏ　ｈｃｖａｎ　Ｔ−ｃｅｌｌ　ｌｅｕｋｅｍｉａ　ｖｉｒｕ ｓ）、　Ｐｒｏｃ。

Ｍａｔ　Ｉ　、Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　８１．４７４１−４７４５゜Ｓ ａｎｇｅｒ、　Ｆ、、　Ｎ１ｃｋｌｅｎ、　Ｓ、、　Ｃｏｕｌｓｅｎ、　Ａ、Ｒ ，（１９７７）、連鎖停止性阻害剤によるＯＮ＾配列決定（ＤＮＡ　ｓｅｑｕｅ ｎｃｉｎｇ　ｗｉｔｈ　ｃｈａｉｎｔｅｒｍｉｎａｔｉｎｇ　１ｎｈｉｂｉｔｏ ｒｓ）、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　７４゜５ ４６３−５４６７゜ Ｓｃｈｗａｒｔｚ、　Ｄ、Ｅ、、　Ｔｉｚａｒｄ、　Ｒ，、Ｇ１１ｂｅｒｔ、Ｌ 　（１９８３）、ラウス内桟ウィルスのヌクレオチド配列（Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄ ｅ　５ｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｒＲｏｕｓ　ｓａｒｃｏｍａ　ｖｉｒｕｓ）、　Ｃｅ １ｌ　３２．８５３−８６９゜５ｃｈｕｐｂａｃｈ、Ｊ、、Ｐｏｐｏｖｉｃ、Ｈ ，、Ｇ１１ｄｃｎ、Ｒ，Ｖ、、Ｇｏｎｄａ、ｔ４．Ａ、。

Ｓａｒｎｇａｄｈａｒａｎ、　Ｈ，Ｇ、、　Ｇａ１ｌｏ、　Ｒ，Ｃ，（１９８４ ）、　ＡＩＤＳに関連するヒトＴリンパ向性レトロウィルス（ＨＴＬＶ−ＩＩＩ 　）のサブグループの血清学的解析（Ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｎａｌｙｓｉ ｓ　ｏｒ　ａ　ｓｕｂｇｒｏｕｐ　ｏｆ　ｈｕｍａｎＴ−１ｙ＋＋＋ｐｈｏｔｒ ｏｐｉｃ　ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ　（ＨＴＬＶ−ＩＩＩ　）　ａｓｓｏｃｉ ａｔｅｄ　ｗｉｔｈＡＩＤＳ）、　５ｃｉｅｎｃｅ　２２４．５０３−５０５゜ ５ｅｉｋｉ、　Ｈ，、Ｈａｔｔｏｒｉ、　Ｓ、、　Ｈｉｒａｙａｍａ、　Ｙ、、 　Ｙｏｓｈｉｄａ、　Ｈ，（１９８３）。

ヒト成人Ｔ１１ｆｌｌｌｌ白血病ウイルス：白血病１１１１胞１）Ｎ＾に組み込 まれＩＣプロウィルスゲノムの完全なヌクレオチド配列（Ｈｕｍａｎａｄｕｌｔ 　Ｔ−ｃｅｌｌ　ｌｅｕｋｅｍｉａ　ｖｉｒｕｓ　：　ｃｏｍｐｔｅｔｅ　ｎｕ ｃｌｔ３Ｑｔｉｄｅｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｒｏｖｉｒｕｓ　ｇｅ ｎｏｍｅ　ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ　ｉｎ　ｌｅｕｋｅｍｉａｃｅｌｌ　ＤＮＡ） 、Ｐｒｏｃ、Ｈｏ口、　八ｃａｄ、Ｓｅｔ、ＵＳＡ　８０．　３６１８−３６２ ２゜Ｓｈａｗ、Ｇ、Ｈ，、１ｌａｈｎ、Ｂ、Ｈ，、八ｒｙａ、ｓ、に、、Ｇｒｏ ｏｐｍａｎ、Ｊ、Ｅ、。

Ｇａ１ｌｏ、　Ｒ，Ｃ，、Ｗｏｎｇ−３ｔａａｌ、　Ｆ、　（１９８４）、後天 性免疫不全症候群自五 におけるヒトＴｌ１１１此に病くリンパ向性）ウィルス■型の分子特性決定（Ｍ ｏｌｅｃｕｌａｒ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　Ｏｆ　ｈｕｍａｎ　Ｔ −ｃｅｌｌｌｅｕｋｅｍｉａ　（ｌｙｍｐｈｏｔｒｏｐｉｃ）　ｖｉｒｕｓ　ｔ ｙｏｅ　ｍ　ｉｎ　ｔｈｅ　ＡｃｑｕｉｒｅｄＩｎｕａｕｎｅ　Ｄｅｆｉｃｉｅ ｎｃｙ　Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、５ｃｉｅｎｃｅ　２２６．　１１６５−１１７１ ゜Ｓｈｉｍｏｔｏｈｎｏ、　Ｋ、、　Ｔｅｍ１ｎ、　Ｈ，Ｈ，（１９８２）、　 トリレトロウィルスの末端長反復配列のｕ３領域内の自然の変化と合成（Ｓｐｏ ｎｔａｎｅｏｕｓ　ｖａｒｉａｔｉｏｎ　ａｎｄ　５ｙｔｈｅｓｉｓ　ｉｎ　ｔ ｈｅ　０３　ｒｏｇｉｏｎ　ｏｒｊＭ　ｌｏｎｇ　ｊｅｒｌｌｌｌｎａｌ　ｒｅ ｐｅａｔ　ｏｆ　ａｖｉｏｎ　ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ）、　Ｊ。

ＶｉｒＯｌ、　４１．１６３６１７１゜Ｓｈｉｇ＋ｏｔｏｈｎｏ、　Ｋ、、　Ｇ ｏｌｄｅ、　Ｄ、Ｈ，、Ｍｉｗａ、　Ｈ，、Ｓｕｇｉｍｕｒａ、　Ｔ、。

Ｃｈｅｎ、　１．Ｓ、Ｙ、　（１９８４）、ヒトＴ細胞白血病つィルス■型の末 端長反復配列ノヌクレオチド配列解析（Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　５ｅｑｕｅｎｃ ｅａｒｌａｌ／ＳｉＳ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｌｏｎｇ　ｔｅｒｌｌｌｉｒｌａｌ　ｒ Ｑｌ）ｅａｔ　ｏｆ　ｈｕｎｌａｎ　Ｔ−ｃｅｌｌｌｅｕｋｅｍｉａ　ｖｉｒｕ ｓ　ｔｙｐｅ　ｌ［）、　ｐｒＯｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｕ ＳＡ　８１゜１０７９−１０８３゜ ５ｈｉｎｎｉｃｋ、　Ｔ、Ｈ，、Ｌｃｉｒｎｅｒ、　Ｒ，Ａ、、　５ｕｔｃｌｉ ｆｆｅ、　Ｊ、Ｇ、（１９８１）、　モロニーネズミ白血病ウィルスのヌクレオ チド配列（Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　Ｈｏ１ｏｎｅｙ　ｍ ｕｒｉｎｅ　ｌ’ｅｕｋｅｍｉａ　ｖｉｒｕｓｅ）、　Ｎａｔｕｒｅ　２９３゜ ５４３−５４８゜ ５ｒｉｎｉｖａｓａｎ、八、、Ｒｅｄｄｙ、Ｅ、Ｐ、、　Ｄｕｎｎ、Ｃ，Ｙ、、 八ａｒｏｎｓｏｎ、ｓ、八。

（１９８４）、し１〜ロウイルスの末端長反復配列をもつ転写Ｉｌｌ　！Ｉｌｌ 要素の分子解ｆｉｌｌ　（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｄｉｓｓｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　 ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｃｏｎｔｒｏｌ　ｅｌｅｍｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ 　ｔｈｅ　ｌｏｎｇ　ｔｅｒｍｉｎａｌ　ｒｅｐｅａｔ　ｏｆｒｅｔｒＯＶｉｒ ｔ＋ｓ）、　５ｃｉｅｎｃｅ　２２３．２８６−２８９゜５ｔａｄ１３ｎ、　Ｒ １（１９８２）、　ＯＮ＾配列決定のショットガン法によって得られたゲル読み 取りデータのコンピュータによる取り扱いの自動化（八ｕｔｏｍａｔｉｏｎ　ｏ ｒ　ｔｈｅ　ｃｏｍｐｕｔｅｒ　ｈａｎｄｌｉｎｇ　ｏｆ　ｇｅｌ　ｒｅａｄｉ ｎｇｄａｔａ　ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｓｈｏｔｇｕｎ　ｍｅｔｈｏ ｄ　ｏｆ　ＤＮＡ　５ｅｑｕｃ！ｎＣ１ｎ（１）。

Ｎｕｃｌ、　Ａｃ１ｄｓ、　Ｒｅｓ、　ｉｏ、　４７３１−４７５１丁ｅｍｉｎ 、　１１．（１９８１）、レトロウィルスの末端長反復配列の構造。

変化１合成（ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、　Ｖａｒｉａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｓｙｒ＋ｔ ｈｅｓｔｓ　ｏｒ　ｒｅｔｒｏ−ｖｉｒｕｓ　１ｏｎｏ　ｔｅｒｍｉｎａｌ　ｒ ｅｐｅａｔ）、　Ｃｅ１ｌ　２７．１−３゜ａｎｄ　ｒｅｗｅｒ　ｏｎｃｏｇｅ ｎｃｓ）、　Ｃｅ１ｌ　３０．３−９゜国際調査報告 Ｗａ、、ａ＋１ａｎａｌ　ｊｖｌ１ｃｍｓ＋　Ｎ。ＰＣＴ／ＥＰ　８５１００５ ４８ｌｓｎｍｈｌ□。１．、＾Ｉ繭、、１工、。ＰＣＴ／Ｅｚ’　８５１００５ ４８１ＩＩＩａｎ＋ａｌ１６ｎｊｌ＾Ｈ１ｌ＋ｌ１ｌｌｆｉ　ＩＩ。ｐｃτ／Ｅ Ｐ　８５／○０５４８１ｆｉｌｌｌＮｍＯＭＩＩＡ６ａｌｔ７ｍｌ□６ｎＩＩＬ ＰＣＴ／ＥＰ８５１００５４８Ｉ（トＢＩＥＸ”、０′ｔＨＦ＋ｆＮＴＥＲＮＡ ＴＩＯＮ、ＡＬＳＥＡＲＣＨＲＥＰ○ＲＴＯＮ

Claims (15)

【特許請求の範囲】
1. １．約１１０，０００の分子量を有する糖タンパク質またはこれから誘導された より低分子量の抗原のポリペプチド骨格を有し、ＬＡＶウィルスに対する抗体を 含むヒト由来の血清で認識できる精製された生成物。
2. ２．精製された糖タンパク質である請求の範囲１の精製生成物。
3. ３．コンカナバリンＡと複合体を形成し、この複合体がＯ−メチル−α−Ｄ−マ ンノピラノシドの存在下で解離できる、請求の範囲２の糖タンパク質。
4. ４．レクチンに結合する請求の範囲３または請求の範囲４の糖タンパク質。
5. ５．エンドグリコシダーゼの作用に対しても感受性である請求の範囲のいずれか １つの糖タンパク質。
6. ６．第１図のヌクレオチド番号６４２１とヌクレオチド番号＜＞の間に伸びる核 酸断片によってコードされているポリペプチドのポリペプチド骨格を有する請求 の範囲１〜５のいずれか１つの精製生成物。
7. ７．第４ａ図〜第４ｅ図に示したＬＡＶ　ＤＮＡから推定できるヌクレオチド配 列で次の位置、すなわちａ）ほぼ６１７１〜ほぼ６２７６まで ｂ）ほぼ６３３６〜ほぼ６３８６まで ｃ）ほぼ６４６６〜ほぼ６５１６まで ｄ）ほぼ６５６１〜ほぼ６６９６まで ｅ）ほぼ６９３６〜ほぼ７００６まで ｆ）ほぼ７６１１〜ほぼ７６４６まで それぞれ伸びるヌクレオチド配列によってコードされているポリペプチドのいず れかに相当するポリペプチドである請求の範囲１の精製生成物。
8. ８．ＬＡＶ　ＤＮＡによってコードされているタンパク質から推定できるアミノ 酸の配列を含有し、以下に定義されるポリペプチドのグループから選択されたペ プチドであって、各ペプチドに関してつけた番号は第４ａ〜４ｅ図に示したＬＡ ＶＤＮＡの位置５７３４〜５７４８にあるＡＡＡによってコードされているリシ ン（アミノ１）から出発して数えた各々のＮ−末端とＣ−末端のアミノ酸の位置 に対応している請求の範囲１の精製生成物： アミノ酸８−２３、すなわち【配列があります】【配列があります】 アミノ酸６３−７８、すなわち【配列があります】アミノ酸８２−９０、すなわ ち【配列があります】アミノ酸９７−１２３、すなわち【配列があります】アミ ノ酸１２７−１８３、すなわち【配列があります】アミノ酸１９７−２０１、す なわち【配列があります】アミノ酸２３９−２９４、すなわち【配列があります 】アミノ酸３００−３２７、すなわち【配列があります】アミノ酸３３４−３８ １、すなわち【配列があります】アミノ酸３９７−４２４、すなわち【配列があ ります】アミノ酸４６６−５００、すなわち【配列があります】アミノ酸５１０ −５２３、すなわち【配列があります】アミノ酸５１０−５７７、すなわち【配 列があります】アミノ酸５９４−６０３、すなわち【配列があります】アミノ酸 ６２１−６３０、すなわち【配列があります】アミノ酸６５７−６７９、すなわ ち【配列があります】アミノ酸７１９−７５８、すなわち【配列があります】ア ミノ酸７８０−８０３、すなわち【配列があります】またはこれらのペプチドの 任意 の組合せ。
9. ９．ＬＡＶ　ＤＮＡによってコードされているタンパク質から推定できるアミノ 酸配列に対応し、以下に定義されるポリペプチドのグループから選択されたペプ チドであって、各ペプチドに関してつけた番号は第４ａ〜４ｅ図に示したＬＡＶ 　ＤＮＡのヌクレオチドの位置３３６〜３３８にあるＡＴＧ配列によってコード されているメチオニン（アミノ酸１）から出発して数えた各々のＮ−末端とＣ− 末端のアミノ酸の相対位置に対応しているペプチド： アミノ酸１２−３２、すなわち【配列があります】アミノ酸３７−４６、すなわ ち【配列があります】アミノ酸４９−７９、すなわち【配列があります】アミノ 酸８８−１５３、すなわち、【配列があります】【配列があります】 アミノ酸１５８−１６５、すなわち【配列があります】アミノ酸１７８−１８８ 、すなわち【配列があります】アミノ酸２００−２２０、すなわち【配列があり ます】アミノ酸２２６−２３４、すなわち【配列があります】アミノ酸２３９− ２６４、すなわち【配列があります】アミノ酸２８８−３３１、すなわち【配列 があります】アミノ酸３５２−３６１、すなわち【配列があります】アミノ酸３ ７７−３９０、すなわち【配列があります】アミノ酸３９９−４３２、すなわち 【配列があります】アミノ酸４３７−４８４、すなわち【配列があります】アミ ノ酸４９２−４９８、すなわち【配列があります】および上記ペプチドの組合せ 。
10. １０．ＬＡＶウィルスに感染した細胞の培養上清から得、エンペロープ抗原を実 質的な割合で保持しているような条件下で精製したＬＡＶウィルスを出発材料と して用い、このウィルスを溶解し、上清中に遊離された抗原を回収し、溶解ウィ ルスの他の成分から精製生成物を分離することからなる、請求の範囲１〜６のい ずれか１つの精製生成物を得るための方法。
11. １１．出発材料のウィルスが遠心操作によって精製されたものであり、特にこの 遠心操作が、非ウィルス性成分、より特定的には細胞成分の除去を可能にする遠 心角速度、特に１０，０００ｒｐｍでの第一の遠心と、次にウィルス自体の沈澱 物を取得するための前より速い角速度、特に４５，０００ｒｐｍでの第２の遠心 とからなることを特徴とする請求の範囲１０の方法。
12. １２．請求の範囲１〜９のいずれかの精製生成物の製造方法であって、対応して いるポリペプチドをコードしているＬＡＶＤＮＡ配列を発現させることのできる 培養細胞をこのＬＡＶＤＮＡ配列で改変されたベクターによって形質転換し、こ の培養細胞の請求の範囲１〜９の生成物を含む発現産物を回収し、請求の範囲１ 〜９の生成物を他の発現産物から分離することからなる方法。
13. １３．精製生成物の分離が、請求の範囲１〜８のいずれか１つのタンパク質，ポ リペプチドまたは糖タンパク質を特異的に認識するモノクローナル抗体と接触さ せることで行なわれる請求の範囲１０，１１または請求の範囲１２のいずれかの 方法。
14. １４．生物学的流体、特にヒト血清中の抗ＬＡＶウィルス抗体の診断方法であっ て、請求の範囲１〜９のいずれかの生成物と前記抗体との複合体が形成されるの に適した条件下で前記生物学的流体を前記生成物に接触させ、前記生物学的流体 中の前記抗体の存在の指標として前記複合体を検出することからなる方法。
15. １５．ワクチンの製造に適した薬剤ベヒクルと共に請求の範囲１〜９のいずれか の精製生成物を含有する免疫原性組成物であって、前記精製生成物がこの生成物 に対して抗する抗体の還元を誘発するのに有効な量である組成物。