JPS61282071A - 微生物の培養法 - Google Patents
微生物の培養法Info
- Publication number
- JPS61282071A JPS61282071A JP61022721A JP2272186A JPS61282071A JP S61282071 A JPS61282071 A JP S61282071A JP 61022721 A JP61022721 A JP 61022721A JP 2272186 A JP2272186 A JP 2272186A JP S61282071 A JPS61282071 A JP S61282071A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cysteine
- medium
- culture
- mold
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- Granted
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- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Bakery Products And Manufacturing Methods Therefor (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は微生物とくにラクトバチルス・サンフランシス
コの培養法および凍結乾燥菌体の保存法に関する。
コの培養法および凍結乾燥菌体の保存法に関する。
ラクトバチルス・サンフランシスコ
（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ５ａｎｆｒａｎｃｉｓ
ｃｏ） はサワードウ（Ｓｏｕｒ ｄｏｕｇｈ）菌種
として知られている。サワードウ菌種はサワードウフラ
ンスパンの製造に使用される有用な微生物であ°す、そ
の培養技術、凍結乾燥保存技術についてはアメリカ特許
第３７３４７４３号、同第３８９１７７３ 、同第４０
２１５８１号各公報に開示されている。
ｃｏ） はサワードウ（Ｓｏｕｒ ｄｏｕｇｈ）菌種
として知られている。サワードウ菌種はサワードウフラ
ンスパンの製造に使用される有用な微生物であ°す、そ
の培養技術、凍結乾燥保存技術についてはアメリカ特許
第３７３４７４３号、同第３８９１７７３ 、同第４０
２１５８１号各公報に開示されている。
従来法によれば、サワードウ菌の培養に際しては培地に
新鮮な酵母エキス、すなわち新鮮な酵母菌体の熱水抽出
液を添加することが必須であり、これは市販の酵母エキ
スなどで代替しえない。
新鮮な酵母エキス、すなわち新鮮な酵母菌体の熱水抽出
液を添加することが必須であり、これは市販の酵母エキ
スなどで代替しえない。
サワードウ菌の培養液１０βすなわち乾燥菌体として３
０〜５０ｇを得る場合には新鮮な酵母菌体（パック重量
）２ｋｇが必要である。新鮮酵母エキスの供給を常時行
うことは困難であるため新鮮酵母エキスに代替でき常時
供給することができる物質があれば工業的に有利である
。
０〜５０ｇを得る場合には新鮮な酵母菌体（パック重量
）２ｋｇが必要である。新鮮酵母エキスの供給を常時行
うことは困難であるため新鮮酵母エキスに代替でき常時
供給することができる物質があれば工業的に有利である
。
本発明者らは、Ｌ−システインが新鮮酵母エキスに代替
できることを見出した。Ｌ−システインは工業的に安価
に供給できるアミノ酸である。
できることを見出した。Ｌ−システインは工業的に安価
に供給できるアミノ酸である。
またサワードウ菌は常時供給するためには凍結乾燥保存
法を利用することが便利である。
法を利用することが便利である。
従来微生物菌体の凍結乾燥には保護物質として脱脂乳や
血清などの高分子物質やグルタミン酸などのアミノ酸、
グルコース、シュークロースなどの糖類を用いることは
知られている。サワードウ菌についてはアメリカ特許４
０２１５８１号公報にグリセロール、脱脂乳、シューク
ロース、不飽和脂肪酸、グルタミン酸モノナトリウムな
どを用いる凍結方法が開示されている。
血清などの高分子物質やグルタミン酸などのアミノ酸、
グルコース、シュークロースなどの糖類を用いることは
知られている。サワードウ菌についてはアメリカ特許４
０２１５８１号公報にグリセロール、脱脂乳、シューク
ロース、不飽和脂肪酸、グルタミン酸モノナトリウムな
どを用いる凍結方法が開示されている。
本発明者らはサワードウ菌の凍結乾燥保存に際する保存
性をさらに高めるために種々研究を行った結果、従来の
脱脂乳とグルタミン酸モノナトリウムの他にマルトーズ
を加えて用いれば保存性が顕著に高められることを見出
した。
性をさらに高めるために種々研究を行った結果、従来の
脱脂乳とグルタミン酸モノナトリウムの他にマルトーズ
を加えて用いれば保存性が顕著に高められることを見出
した。
以下本発明の詳細な説明する。
本発明における微生物の培養はラクトバチルス・サンフ
ランシスコに属する菌株を炭素源、窒素源、無機栄養素
その他の栄養素にさらにＬ−システインあるいはＬ−シ
ステイン含有物を存在させて培養することによって行わ
れる。
ランシスコに属する菌株を炭素源、窒素源、無機栄養素
その他の栄養素にさらにＬ−システインあるいはＬ−シ
ステイン含有物を存在させて培養することによって行わ
れる。
使用する菌株はラクトバチルス・サンフランシスコに属
する菌株であればいかなる菌株をも用いることができる
。具体的にはラクトバチルス・サンフランシスコＫＹ３
６８９１工ｍ菌寄第４４６６号）があげられる。ラクト
バチルス・サンフランシスコの菌学的性質については
ＡｐｐｌｉｅｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ、
２１、Ｎｏ、３． ｐ、４５９−４６５．１９７１に記
載がある。
する菌株であればいかなる菌株をも用いることができる
。具体的にはラクトバチルス・サンフランシスコＫＹ３
６８９１工ｍ菌寄第４４６６号）があげられる。ラクト
バチルス・サンフランシスコの菌学的性質については
ＡｐｐｌｉｅｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ、
２１、Ｎｏ、３． ｐ、４５９−４６５．１９７１に記
載がある。
培地の炭素源としてはマルトーズなどが、窒素源として
は、ペプトン、酵母エキス、コーンスチープリカー、カ
ゼイン加水分解などの有機窒素源が、無機栄養素として
は硫酸マグネシウム、硫酸マンガン、第一リン酸ナトリ
ウム、第ニリン酸ナトリウム、硫酸第一鉄などが用いら
れる。ラクトバチルス・サンフランシスコは生育に不飽
和脂肪酸を要求するので培地にはオレイン酸、リノール
酸、リルン酸、リシノール酸またはそれらのナトリウム
塩あるいはカルシウム塩またはオリーブ油、綿実油、ア
マニ油、大豆油、ベニバナ油、とうもろこし油などを加
える。その他不飽和脂肪酸と糖または多価アルコールの
部分エステルたとえばショ糖モノオレエート、シヨ糖ジ
オレエート、グリセリンモノオレエート、エチレンクリ
コールモノオレエート、ペンタエリトリフトモノリルエ
ート、マンニットモノオレエート、ソルビタンモノオレ
エート、ソルビタンポリオキシエチレンモノオレエート
、ポリオキシエチレンモノオレエートなどが使用できる
。
は、ペプトン、酵母エキス、コーンスチープリカー、カ
ゼイン加水分解などの有機窒素源が、無機栄養素として
は硫酸マグネシウム、硫酸マンガン、第一リン酸ナトリ
ウム、第ニリン酸ナトリウム、硫酸第一鉄などが用いら
れる。ラクトバチルス・サンフランシスコは生育に不飽
和脂肪酸を要求するので培地にはオレイン酸、リノール
酸、リルン酸、リシノール酸またはそれらのナトリウム
塩あるいはカルシウム塩またはオリーブ油、綿実油、ア
マニ油、大豆油、ベニバナ油、とうもろこし油などを加
える。その他不飽和脂肪酸と糖または多価アルコールの
部分エステルたとえばショ糖モノオレエート、シヨ糖ジ
オレエート、グリセリンモノオレエート、エチレンクリ
コールモノオレエート、ペンタエリトリフトモノリルエ
ート、マンニットモノオレエート、ソルビタンモノオレ
エート、ソルビタンポリオキシエチレンモノオレエート
、ポリオキシエチレンモノオレエートなどが使用できる
。
培地中のし一システィンあるいはＬ−システイン含有物
の含量はＬ−システインとして１００〜５００ｍｇ／ｊ
！で良い培養結果が得られる。し−システイン含有物と
してはカザミノ酸などがあげられる。
の含量はＬ−システインとして１００〜５００ｍｇ／ｊ
！で良い培養結果が得られる。し−システイン含有物と
してはカザミノ酸などがあげられる。
培養は水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、アンモニア
水などによって培地の”ｐＨを５．０以上に調整しつつ
２５〜３５℃、好ましくは約２８〜３２℃で定常期の初
期まで行う。
水などによって培地の”ｐＨを５．０以上に調整しつつ
２５〜３５℃、好ましくは約２８〜３２℃で定常期の初
期まで行う。
培養後培養物を遠心分離処理して菌体を集め、次の凍結
乾燥処理に供する。
乾燥処理に供する。
本発明における凍結乾燥処理は次のごとく行う。
上記のごとく集めた菌体を生理食塩水にて洗浄するかせ
ずして脱脂乳１０〜３０％、グルタミン酸モノナトリウ
ム１〜３％、マルトーズ０．５〜９％からなる分散媒に
１０’〜１０”細胞／ｍｌの濃度で懸濁させる。懸濁液
を一２５℃〜−７０℃で凍結後、室温にて乾燥を行い、
品温２５〜３０℃に仕上げる。
ずして脱脂乳１０〜３０％、グルタミン酸モノナトリウ
ム１〜３％、マルトーズ０．５〜９％からなる分散媒に
１０’〜１０”細胞／ｍｌの濃度で懸濁させる。懸濁液
を一２５℃〜−７０℃で凍結後、室温にて乾燥を行い、
品温２５〜３０℃に仕上げる。
かくして得られる乾燥菌体はビニール袋の袋などに入れ
、真空包装機で溶封して０〜１０℃で保存を行うとよい
。
、真空包装機で溶封して０〜１０℃で保存を行うとよい
。
本発明方法で得られた凍結乾燥菌体の凍結乾燥時の生残
率は７０％以上、５℃に６ケ月保存を行った後の生残率
は貯蔵開始時の６０％以上であった。マルトーズを用い
ない場合の数値はそれぞれ２０、％、２５％であった。
率は７０％以上、５℃に６ケ月保存を行った後の生残率
は貯蔵開始時の６０％以上であった。マルトーズを用い
ない場合の数値はそれぞれ２０、％、２５％であった。
本発明によりラクトバチルス・サンフランシスコの生産
コストは著しく軽減され、また保存も容易になったので
サワードウパン製造が工業的に非常に有利になった。
コストは著しく軽減され、また保存も容易になったので
サワードウパン製造が工業的に非常に有利になった。
実施例１
ラクトバチルス・サンフランシスコＫＹ３６８９ ヲマ
ルトーズ４０ｇ＃、ペプトン１０ ｇ／ｌ、酵母エキス
１５ｇ／ｌ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２０２００ｔｎｇ／ｌ、
ＭｎＳＯ４・４Ｈ２０４Ｑｍｇ／Ｃツイーン８０（界面
活性剤ソルビタンモノオレートの商品名、関東化学社製
）３００ｍｇ／Ａ、Ｌ−システイン３００ｍｇ／Ｉ２、
寒天２０ｇ／Ｉｔからなる斜面培地（殺菌前ｐ Ｈ５，
６）に３０℃で２４時間培養する。この菌体−白金耳を
、上記培地から寒天を除いた液体培地（種培地） １５
Ｑｍｌを含む３０ Ｑｍｌ容エルレンマイヤーフラス
コに植菌し、３０℃、７０ｒｐｍで１５時間往復振盪培
養を行った。この種培養液を種培地と同じ組成の培地３
１を含む５１ジャーファーメンタ−に移し培養を行った
。培養は３００ｒｐｍで攪拌し、３Ｎ ＫＯＨでｐＨ
を５付近に調整しながら３０℃で１５時間行った。培養
終了時の菌体濃度は乾燥菌体として３、８ ｇ ／ ｌ
であった。
ルトーズ４０ｇ＃、ペプトン１０ ｇ／ｌ、酵母エキス
１５ｇ／ｌ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２０２００ｔｎｇ／ｌ、
ＭｎＳＯ４・４Ｈ２０４Ｑｍｇ／Ｃツイーン８０（界面
活性剤ソルビタンモノオレートの商品名、関東化学社製
）３００ｍｇ／Ａ、Ｌ−システイン３００ｍｇ／Ｉ２、
寒天２０ｇ／Ｉｔからなる斜面培地（殺菌前ｐ Ｈ５，
６）に３０℃で２４時間培養する。この菌体−白金耳を
、上記培地から寒天を除いた液体培地（種培地） １５
Ｑｍｌを含む３０ Ｑｍｌ容エルレンマイヤーフラス
コに植菌し、３０℃、７０ｒｐｍで１５時間往復振盪培
養を行った。この種培養液を種培地と同じ組成の培地３
１を含む５１ジャーファーメンタ−に移し培養を行った
。培養は３００ｒｐｍで攪拌し、３Ｎ ＫＯＨでｐＨ
を５付近に調整しながら３０℃で１５時間行った。培養
終了時の菌体濃度は乾燥菌体として３、８ ｇ ／ ｌ
であった。
この培養液１１を５．００ Ｏｒｐｍで、２０分間遠心
分離処理して得られる菌体を脱脂乳１．０ｇ／ｄＩｌ、
グルタミン酸モノナトリウム１ｇ／ｄ１、マルトーズ１
ｇ／ｄ１を含む分散媒３０ Ｑｍｌに懸濁し、−３０℃
で凍結後、１６時間乾燥し、最終品温３０℃で仕上げ凍
結乾燥菌体３６ｇを得た。生残率は凍結乾燥前の生菌数
に対し７２％であった。
分離処理して得られる菌体を脱脂乳１．０ｇ／ｄＩｌ、
グルタミン酸モノナトリウム１ｇ／ｄ１、マルトーズ１
ｇ／ｄ１を含む分散媒３０ Ｑｍｌに懸濁し、−３０℃
で凍結後、１６時間乾燥し、最終品温３０℃で仕上げ凍
結乾燥菌体３６ｇを得た。生残率は凍結乾燥前の生菌数
に対し７２％であった。
この凍結乾燥菌体をビニール袋に公人し、真空包装機で
溶封後５℃で保存した。保存６ケ月後の生残率は凍結乾
燥開始時に比べて８０％であった。
溶封後５℃で保存した。保存６ケ月後の生残率は凍結乾
燥開始時に比べて８０％であった。
実施例２
実施例１において、培地中のし一ンステインの量を０〜
８００ｍｇ／βにするか、またはＬ−システインに代え
て新鮮酵母エキスを添加して培養する以外は実施例１と
同様に行い第１表の結果を得た。なお新鮮酵母エキスは
、パン酵母を常法で培養して得られる新鮮パン酵母を２
００ｇ＃の濃度で水に懸濁し、１２０℃で３０分間オー
トクレーブにかけ、５℃に１２時間放置後５．００ Ｏ
ｒｐｍで２０分間遠心分離を行い、その上清液を用いて
培地成分を溶解した。
８００ｍｇ／βにするか、またはＬ−システインに代え
て新鮮酵母エキスを添加して培養する以外は実施例１と
同様に行い第１表の結果を得た。なお新鮮酵母エキスは
、パン酵母を常法で培養して得られる新鮮パン酵母を２
００ｇ＃の濃度で水に懸濁し、１２０℃で３０分間オー
トクレーブにかけ、５℃に１２時間放置後５．００ Ｏ
ｒｐｍで２０分間遠心分離を行い、その上清液を用いて
培地成分を溶解した。
第 １ 表
実施例３
実施例１にふいて、凍結乾燥時のマルトーズを下記第２
表の糖に代えて行い、凍結乾燥品の保存を真空デシケー
タ−中５℃で行う以外は実施例１と同様に行い、１ケ月
、３ケ月、６ケ月後にサンプリングして、生残率を調べ
た。結果を第２表に示す。
表の糖に代えて行い、凍結乾燥品の保存を真空デシケー
タ−中５℃で行う以外は実施例１と同様に行い、１ケ月
、３ケ月、６ケ月後にサンプリングして、生残率を調べ
た。結果を第２表に示す。
第 ２ 表
手続補正書（方式）
昭和６１年６月２５日 フ
Claims (1)
- ラクトバチルス・サンフランシスコを培地に培養し、培
養物から菌体を回収するに際し、培地にＬ−システイン
またはＬ−システイン含有物を、Ｌ−システインとして
培地容量当り１００〜５００ｍｇ／ｌ存在させることを
特徴とする微生物の培養法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61022721A JPS61282071A (ja) | 1986-02-03 | 1986-02-03 | 微生物の培養法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61022721A JPS61282071A (ja) | 1986-02-03 | 1986-02-03 | 微生物の培養法 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4988978A Division JPS54143585A (en) | 1978-04-28 | 1978-04-28 | Culturing of microbials and storing of freeze-dried microbial cells |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61282071A true JPS61282071A (ja) | 1986-12-12 |
| JPS6231907B2 JPS6231907B2 (ja) | 1987-07-10 |
Family
ID=12090645
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61022721A Granted JPS61282071A (ja) | 1986-02-03 | 1986-02-03 | 微生物の培養法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61282071A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2018076715A (ja) * | 2016-11-10 | 2018-05-17 | 大阪瓦斯株式会社 | 石油増進回収方法 |
-
1986
- 1986-02-03 JP JP61022721A patent/JPS61282071A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2018076715A (ja) * | 2016-11-10 | 2018-05-17 | 大阪瓦斯株式会社 | 石油増進回収方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6231907B2 (ja) | 1987-07-10 |
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