JPS6127923A - ヒト腫瘍壊死因子の製造法 - Google Patents
ヒト腫瘍壊死因子の製造法Info
- Publication number
- JPS6127923A JPS6127923A JP14672384A JP14672384A JPS6127923A JP S6127923 A JPS6127923 A JP S6127923A JP 14672384 A JP14672384 A JP 14672384A JP 14672384 A JP14672384 A JP 14672384A JP S6127923 A JPS6127923 A JP S6127923A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- human
- malignant
- cell
- differentiation
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- Pending
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
この発明は、ヒト腫瘍壊死因子（以下ｈ −ＴＮＦと記
す）の製造法に関する。このｈ−ＴＮＦはヒト正常細胞
には壊死作用を示す事なくヒト腫瘍細胞のみを壊死せし
める。従ってこのようなｈ −ＴＮＦは抗腫瘍剤とじ１
使用できる可能性がおる。
す）の製造法に関する。このｈ−ＴＮＦはヒト正常細胞
には壊死作用を示す事なくヒト腫瘍細胞のみを壊死せし
める。従ってこのようなｈ −ＴＮＦは抗腫瘍剤とじ１
使用できる可能性がおる。
従来の技術
悪−一球性白血病を用いて、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）を
産生させる事は、マウス由来のＪ７７４．１細胞を用い
て試みられ、各種蛋白性レクチン、リポポリサッカライ
ド等を刺激剤として用いて、マウスＴＮＦを産生させる
ことが報告されている（ Ｊ、ＩＭＭＮＯＬ。
産生させる事は、マウス由来のＪ７７４．１細胞を用い
て試みられ、各種蛋白性レクチン、リポポリサッカライ
ド等を刺激剤として用いて、マウスＴＮＦを産生させる
ことが報告されている（ Ｊ、ＩＭＭＮＯＬ。
Ｖｏｌ、１２２． Ａ５ 、１７８５（Ｍａｙ、 １９
７９） ） 、 しかしながらヒト細胞由来のｈ−ＴＮ
Ｆｉ培養細胞を用いて産生させる試みは未だなされてい
ない。しかしながら、マウス細胞により製造されたＴＮ
Ｆは人に投与した場合重篤な副作用を生ぜしめる可能性
がある。
７９） ） 、 しかしながらヒト細胞由来のｈ−ＴＮ
Ｆｉ培養細胞を用いて産生させる試みは未だなされてい
ない。しかしながら、マウス細胞により製造されたＴＮ
Ｆは人に投与した場合重篤な副作用を生ぜしめる可能性
がある。
発明が解決しようとする問題点
従ってこの発明は、ヒト細胞によｊｉ） ＴＮＦ ’ｉ
製造する方法を開発することにちる。
製造する方法を開発することにちる。
問題点を解決するための手段
本発明者らは、叙上の問題点を解決するため、ヒト細胞
について種々ＴＮＦの製造法を検討し、ついにヒト悪性
化単球性細胞が分化誘導物質の存在下に、または分化誘
導物質により分化されたヒト悪性化単球性細胞を生体外
刺激物質の存在下に培養することによｐ ｈ−ＴＮＦ
ｉ生成せしめ得る事を見出した。
について種々ＴＮＦの製造法を検討し、ついにヒト悪性
化単球性細胞が分化誘導物質の存在下に、または分化誘
導物質により分化されたヒト悪性化単球性細胞を生体外
刺激物質の存在下に培養することによｐ ｈ−ＴＮＦ
ｉ生成せしめ得る事を見出した。
ｈ−ＴＮＦは、ヒト細胞によって生成される蛋白性もの
である。
である。
単球性細胞としてはマクロファージが代表的なものであ
シ、本発明の悪性化単球細胞としては、このような単球
性細胞が自然にまたは人為的に悪性化されたもの及び未
分化の単球性細胞が含まれる。よ）具体的には白血病細
胞及び骨髄細胞を人為的に悪性化したもの等がある。よ
シ具体的に例示すれば以下のものがある。ヒト前骨髄性
白血病細胞（ＨＬ−６０ＡＴＣＣＣＣＬ２４Ｑ、Ｎａｔ
ｕｒｅ ２７０：３４７（１９７７））。
シ、本発明の悪性化単球細胞としては、このような単球
性細胞が自然にまたは人為的に悪性化されたもの及び未
分化の単球性細胞が含まれる。よ）具体的には白血病細
胞及び骨髄細胞を人為的に悪性化したもの等がある。よ
シ具体的に例示すれば以下のものがある。ヒト前骨髄性
白血病細胞（ＨＬ−６０ＡＴＣＣＣＣＬ２４Ｑ、Ｎａｔ
ｕｒｅ ２７０：３４７（１９７７））。
ヒト慢性骨髄性白血病細胞（Ｘ５６２・Ｂｌｏｏｄ ４
５：３２１（１９７５） 、 Ｕ−９３７ＡＴＣＣＣ’
ＢＬ １５９３． Ｉｎｔ、 Ｊ、Ｃａｎｃｅｒ１７：
５６５（１９７６）、ヒト急性骨髄性白血病細胞（ＫＧ
Ｉ。
５：３２１（１９７５） 、 Ｕ−９３７ＡＴＣＣＣ’
ＢＬ １５９３． Ｉｎｔ、 Ｊ、Ｃａｎｃｅｒ１７：
５６５（１９７６）、ヒト急性骨髄性白血病細胞（ＫＧ
Ｉ。
５ｃｉｅｎｃｅ ２００：１１５３（Ｘ９７８）、 Ｍ
Ｌ−１，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ・４２二５１５２（１９
８３）、 ＣＣＲＦ−ＣＥＭ（ＡＴＣＣ，ＣＣＬ
１１９．Ｃａｎｃｅｒ１８：５５２−５２９．（１９６
５） ） 、 ）ＬＰＢ−ＭＬＴ（Ｉｎｔ、Ｊ、 Ｃａ
ｎｃｅｒ２１１６６（１９７８）） 、 ＨＰＢ−ＡＬ
Ｌ（Ｉｎｔ、Ｊ、Ｃａｎｃｅｒ ２１１６６（１９７７
）） 、 ＴＡＬＬ（Ｎａｔｕｒｅ ２６７．８４３．
（１９７７））、 ＲＰＭＩ−８４０２（Ｊ、Ｎａｔｌ
、 Ｃａｎ、ｃｅｒ Ｉｎ５ｔ、 ５５．１１（１９７
５） ）及びＴＨＰ−１（Ｉｎｔ、 Ｊ Ｃａｎｃｅ
ｒ ２６．１７１−１７６（１９８０））。
Ｌ−１，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ・４２二５１５２（１９
８３）、 ＣＣＲＦ−ＣＥＭ（ＡＴＣＣ，ＣＣＬ
１１９．Ｃａｎｃｅｒ１８：５５２−５２９．（１９６
５） ） 、 ）ＬＰＢ−ＭＬＴ（Ｉｎｔ、Ｊ、 Ｃａ
ｎｃｅｒ２１１６６（１９７８）） 、 ＨＰＢ−ＡＬ
Ｌ（Ｉｎｔ、Ｊ、Ｃａｎｃｅｒ ２１１６６（１９７７
）） 、 ＴＡＬＬ（Ｎａｔｕｒｅ ２６７．８４３．
（１９７７））、 ＲＰＭＩ−８４０２（Ｊ、Ｎａｔｌ
、 Ｃａｎ、ｃｅｒ Ｉｎ５ｔ、 ５５．１１（１９７
５） ）及びＴＨＰ−１（Ｉｎｔ、 Ｊ Ｃａｎｃｅ
ｒ ２６．１７１−１７６（１９８０））。
人為的に悪性化され九骨髄細胞を得るには未成熟又は成
熟細胞を得る方法もまた通常の方法でよい。（Ａｕｓｔ
、Ｊ、Ｅｘｐ、 Ｂｌｏｌ、Ｍｅｄ、５ｃｉ−，４１：
２８７（１９６６） ）人為的に骨髄細胞を悪性化させ
る方法には、骨髄細胞をＮ−メチル−墾ニトローＮ−二
トロ／／’７＝シン等の変異原物質に曝す方法、あるい
はＸ線、紫外線、γ線等を骨髄細胞に照射する方法、更
にはレトロウィルス等によって骨髄細胞を形質転換する
方法等がある。
熟細胞を得る方法もまた通常の方法でよい。（Ａｕｓｔ
、Ｊ、Ｅｘｐ、 Ｂｌｏｌ、Ｍｅｄ、５ｃｉ−，４１：
２８７（１９６６） ）人為的に骨髄細胞を悪性化させ
る方法には、骨髄細胞をＮ−メチル−墾ニトローＮ−二
トロ／／’７＝シン等の変異原物質に曝す方法、あるい
はＸ線、紫外線、γ線等を骨髄細胞に照射する方法、更
にはレトロウィルス等によって骨髄細胞を形質転換する
方法等がある。
分化誘導物質は、悪性化単球性細胞と接触した時、この
悪性化単球性細胞をマクロファージ、顆粒球の単球細胞
に分化誘導せしめる作用を有する物質でｉｂ、具体的に
はヘミン、アクチノマイシンＤ、ヘキサメテレンアクラ
シノマイシンＡ、テレオシジン、マイトマイシンＣ，プ
レオマイシン。
悪性化単球性細胞をマクロファージ、顆粒球の単球細胞
に分化誘導せしめる作用を有する物質でｉｂ、具体的に
はヘミン、アクチノマイシンＤ、ヘキサメテレンアクラ
シノマイシンＡ、テレオシジン、マイトマイシンＣ，プ
レオマイシン。
ゾロピオン酸、酢酸ナトリウム、カダベリン、ツニカマ
イシン、１２−ｏ−テトラデカノイルフォルポー／Ｉ／
１３アセテ−） （ＴＰＡ）、γ−インターフェロン等
のリンフ才力イン、Ｄ−因子、アルギナーゼ、ヒストン
ＨＩ、リボポリサッカライド、脂質Ａ、グルココルチコ
イド、１α、２５−デバイドロオキシビタミンＤ３、ポ
リＣＩ）、ポリＣＡＤＰ−リボース）、ＢＣＧ 、クロ
ロキン等がらげられる。
イシン、１２−ｏ−テトラデカノイルフォルポー／Ｉ／
１３アセテ−） （ＴＰＡ）、γ−インターフェロン等
のリンフ才力イン、Ｄ−因子、アルギナーゼ、ヒストン
ＨＩ、リボポリサッカライド、脂質Ａ、グルココルチコ
イド、１α、２５−デバイドロオキシビタミンＤ３、ポ
リＣＩ）、ポリＣＡＤＰ−リボース）、ＢＣＧ 、クロ
ロキン等がらげられる。
分化誘導物質によシ分化されたヒト悪性化単球性細胞と
は、上記のヒト悪性化単球性細胞が上記分化誘導物質と
接触せしめられて生じた細胞であり、部分的単球性細胞
に分化したもの、実質的単球性細胞に分化したものが含
まれる。
は、上記のヒト悪性化単球性細胞が上記分化誘導物質と
接触せしめられて生じた細胞であり、部分的単球性細胞
に分化したもの、実質的単球性細胞に分化したものが含
まれる。
本発明の生体外刺激物質とは、ヒト細胞の細胞膜または
ライソゾームに変化を与え生体内高分子を細胞外に放出
または漏出し易くさせる作用會有するものでおる。具体
的にはりポポリサッカロイド（ＬＰＳ） 、各種レクチ
ン、ビタミンＡ等がある。
ライソゾームに変化を与え生体内高分子を細胞外に放出
または漏出し易くさせる作用會有するものでおる。具体
的にはりポポリサッカロイド（ＬＰＳ） 、各種レクチ
ン、ビタミンＡ等がある。
ｈ−ＴＮＦ ｉ生成せしめる第一の方法は悪性化単球性
細胞を少くとも分化誘導物質が存在する条件下で培養す
る方法であシ、第二の方法は分化誘導物質によシ分化さ
れたヒト悪性化単球性細胞を少くとも生体外刺激物質が
存在する条件で培養する方法である。
細胞を少くとも分化誘導物質が存在する条件下で培養す
る方法であシ、第二の方法は分化誘導物質によシ分化さ
れたヒト悪性化単球性細胞を少くとも生体外刺激物質が
存在する条件で培養する方法である。
第−及び第二のいずれの方法においても、ヒト悪性化単
球性細胞を培養するための培地及び培養方法は、上に述
べた点板外には同じものである。
球性細胞を培養するための培地及び培養方法は、上に述
べた点板外には同じものである。
このような悪性化単球性細胞を培養する培地は、動物細
胞を培養する通常の培地のいずれもが用いられる。具体
的には、ローズウェル・ノ臂−り・メモリアル・インス
ティテニー） １６４０培地（ＲｏｉｅｗｅｌｌＰａｒ
ｋ Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ １６４０
＊以下略してＲＰＭＩ−１６４０）が好適であるが、
他にダルベツコ変法イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ／
ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ Ｍｅｄｉｕｍ）、
イーグル基礎培地（Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｉｎｉｍｕｍ
ＥｓｓｅｎｔｉａｌＭｅ ｄ ｕ％ｍ）、クリック培地
（Ｃ１１ｃｋ Ｍｅｄｉｕｍ）なども用いられる。これ
らの培地には、胎児ウシ血清（以下ＦＢ８と略す。）や
新生児ウシ血清、クマ血清を添加して用いるのが望まし
い。
胞を培養する通常の培地のいずれもが用いられる。具体
的には、ローズウェル・ノ臂−り・メモリアル・インス
ティテニー） １６４０培地（ＲｏｉｅｗｅｌｌＰａｒ
ｋ Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ １６４０
＊以下略してＲＰＭＩ−１６４０）が好適であるが、
他にダルベツコ変法イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ／
ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ Ｍｅｄｉｕｍ）、
イーグル基礎培地（Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｉｎｉｍｕｍ
ＥｓｓｅｎｔｉａｌＭｅ ｄ ｕ％ｍ）、クリック培地
（Ｃ１１ｃｋ Ｍｅｄｉｕｍ）なども用いられる。これ
らの培地には、胎児ウシ血清（以下ＦＢ８と略す。）や
新生児ウシ血清、クマ血清を添加して用いるのが望まし
い。
悪性化単球性細胞の培養は、通常１〜５×１０個／ｄの
細胞密度で３５〜３８℃にて４〜６％炭酸ガス気流中で
行なう。
細胞密度で３５〜３８℃にて４〜６％炭酸ガス気流中で
行なう。
分化誘導物質は、通常培養当初よ）培地に含有せしめら
れる。また生体外刺激物質は分化された悪性化単球性細
胞の培養当初よシ培地に含有せしめてもよいが、同細胞
の増殖がある程度進んでから、培地に含有せしめてもよ
い。
れる。また生体外刺激物質は分化された悪性化単球性細
胞の培養当初よシ培地に含有せしめてもよいが、同細胞
の増殖がある程度進んでから、培地に含有せしめてもよ
い。
ＴＮＦは以下のように定性及び定量分析できる。
即ち、標的細胞であるＬ−９２９細胞（Ｐｒｏｃ、 Ｎ
ａｔｌ。
ａｔｌ。
Ａｅａｄ、 Ｓｃｉ、 Ｕ、Ｓ、Ａ、 ７２ 、３６６
６−３６７０）をイーグルミニマムエッセンシャル培地
Ｃ以下ＭＥＭ ト記ｆ ）に５％仔牛脂児血清を加え育
成し、８×ｌＯ細胞が１００μｔの同上培地に含まれる
様にし、９６大の平底プレートに育種する。育種条件は
３７℃、２時間５ ％ Ｃｏ２１００％Ｈ２０で通常細
胞培養に用いられる方法でよい。その後アクチノマイシ
ンＤを培地中に終濃度１μｆｉ／ｙｄとなる様に加え、
培養液の液量を１５０μｔとする。即座にｈ−ＴＮＦ
ｋ含むと考えられる検体を適当にｄＭ培地で稀釈したも
のを５０μを加える。この際稀釈率を適宜調製し、ＥＤ
５０を求める事ができる。更に最終液量２ｏｏｌＪｔと
なったＬ９２９細胞を上記条件で１８ ｈｒ暗培養継続
する。細胞壊死活性は、まず全培地を除去し、ルアルコ
ール溶液を加え固定染色する。クリスタルバイオレット
は全有核細胞を染色するので、ｈ−ＴＮＦによシ特異的
に細胞壊死を生じた結果フラスコ底面よシ遊離した細胞
は染色されないのでｈ−ＴＮＦ活性を直接に測定できる
。この染色度ｔ−ＯＤ５９０ｎｍの吸収で測定し、対照
群に対する染色度と比較する事でｈ−ＴＮＦ ’ｉ測測
定る。活性の定義は次の様に行う。Ｌ９２９細胞が５ｏ
ｅｓ生存できる検体原液の稀釈率ｆｘとした時、その稀
釈率の逆数に１０ ｔ−乗じた値ｔ−原液のｌｉｄあ
た夛の活性とする。
６−３６７０）をイーグルミニマムエッセンシャル培地
Ｃ以下ＭＥＭ ト記ｆ ）に５％仔牛脂児血清を加え育
成し、８×ｌＯ細胞が１００μｔの同上培地に含まれる
様にし、９６大の平底プレートに育種する。育種条件は
３７℃、２時間５ ％ Ｃｏ２１００％Ｈ２０で通常細
胞培養に用いられる方法でよい。その後アクチノマイシ
ンＤを培地中に終濃度１μｆｉ／ｙｄとなる様に加え、
培養液の液量を１５０μｔとする。即座にｈ−ＴＮＦ
ｋ含むと考えられる検体を適当にｄＭ培地で稀釈したも
のを５０μを加える。この際稀釈率を適宜調製し、ＥＤ
５０を求める事ができる。更に最終液量２ｏｏｌＪｔと
なったＬ９２９細胞を上記条件で１８ ｈｒ暗培養継続
する。細胞壊死活性は、まず全培地を除去し、ルアルコ
ール溶液を加え固定染色する。クリスタルバイオレット
は全有核細胞を染色するので、ｈ−ＴＮＦによシ特異的
に細胞壊死を生じた結果フラスコ底面よシ遊離した細胞
は染色されないのでｈ−ＴＮＦ活性を直接に測定できる
。この染色度ｔ−ＯＤ５９０ｎｍの吸収で測定し、対照
群に対する染色度と比較する事でｈ−ＴＮＦ ’ｉ測測
定る。活性の定義は次の様に行う。Ｌ９２９細胞が５ｏ
ｅｓ生存できる検体原液の稀釈率ｆｘとした時、その稀
釈率の逆数に１０ ｔ−乗じた値ｔ−原液のｌｉｄあ
た夛の活性とする。
即ち原液の１０００分の１稀釈でＥＤ ５０ を与える
検体の活性は１単位／ゴである。通常の方法によシウサ
ギ生体内でＴＮＦ ｉ産生せしめた場合の活性は上述の
定義によると４０単位／ゴとなる。またマウス単球性白
血病細胞Ｊ７７４．１ ｉ種々の方法にょシＴＮＦ産生
せしめた場合ＥＤ５０で上限４〜５単位／ｄの活性を培
養上清中に示す。
検体の活性は１単位／ゴである。通常の方法によシウサ
ギ生体内でＴＮＦ ｉ産生せしめた場合の活性は上述の
定義によると４０単位／ゴとなる。またマウス単球性白
血病細胞Ｊ７７４．１ ｉ種々の方法にょシＴＮＦ産生
せしめた場合ＥＤ５０で上限４〜５単位／ｄの活性を培
養上清中に示す。
作用
本発明の方法により製造されたＴＮＦは、ヒトに投与さ
れたときに副作用を生ぜせしめないと考えられ、従って
医薬として使用するのに適している。
れたときに副作用を生ぜせしめないと考えられ、従って
医薬として使用するのに適している。
１０ 個／ｄの細、胞濃度で５％牛脂児血清を有する
ＲＰＭＩ−１６４０培地に懸濁し、ファルコン社製平底
２４穴マイクロタイタープレートに入れ、３７℃で培養
した。この際培養開始時よ’） ＴＰＡ １００ｎｇ１
００ｎ １２−ｏ−テトラデカノイルフォルボール１３
アセテート）を共存させた。そして、培養開始後よ＃）
２時間、４時間、８時間、１２時間、２４時間後に培養
上清ごと細胞を採集し、１２００ ｇ５分間遠心分離の
後、細胞上清を得た。一方２４時間ＴＰＡと共存させた
細胞の培養上清のみをとシさル、生体外刺激物質として
１０ ｆｉｌｌ／ＬＩ ＬＰＳ ′ｆｔ含むＲＰＭ［−
１６４０培地を同量加え、３７℃で培養を継続し、上記
と同様な方法で２時間、４時間、８時間、１２時間、２
４時間培養し、培養上清を得た。また対照として、ＴＰ
Ａ’ｉｉ−全く含まずに同量の細胞を培養し、２４時間
後に培養上清を得た。またＬＰＳ添加のみの対照として
、２４時間培養後の培養上清のみをとシ去シ、ＬＰ８１
０μｍ１／ゴを含むＲＰＭＩ−１６４０の同量と置換し
て、先と同じ方法、同じ時間での培養上清を得た。
ＲＰＭＩ−１６４０培地に懸濁し、ファルコン社製平底
２４穴マイクロタイタープレートに入れ、３７℃で培養
した。この際培養開始時よ’） ＴＰＡ １００ｎｇ１
００ｎ １２−ｏ−テトラデカノイルフォルボール１３
アセテート）を共存させた。そして、培養開始後よ＃）
２時間、４時間、８時間、１２時間、２４時間後に培養
上清ごと細胞を採集し、１２００ ｇ５分間遠心分離の
後、細胞上清を得た。一方２４時間ＴＰＡと共存させた
細胞の培養上清のみをとシさル、生体外刺激物質として
１０ ｆｉｌｌ／ＬＩ ＬＰＳ ′ｆｔ含むＲＰＭ［−
１６４０培地を同量加え、３７℃で培養を継続し、上記
と同様な方法で２時間、４時間、８時間、１２時間、２
４時間培養し、培養上清を得た。また対照として、ＴＰ
Ａ’ｉｉ−全く含まずに同量の細胞を培養し、２４時間
後に培養上清を得た。またＬＰＳ添加のみの対照として
、２４時間培養後の培養上清のみをとシ去シ、ＬＰ８１
０μｍ１／ゴを含むＲＰＭＩ−１６４０の同量と置換し
て、先と同じ方法、同じ時間での培養上清を得た。
これらの各検体につき、先にのべた分析法による活性を
測定した。
測定した。
（２） ｈ−ＴＮＦの活性測定
検体の稀釈は×４、Ｘ４０．Ｘ４００となる様にし、そ
れぞれ５％ＦＣ８を含むＭＥＭ培地でそれぞれの稀釈率
に見合う様に調製した。Ｌ９２９細胞はテルモ社製９６
穴マイクロタイタープレートに８×ｌＯ個／ウェルｔ−
５％ ＦＣ８添加廊Ｍ培地１００μｔに懸濁後ウェルに
吸光度から算出された細胞壊死率を第１表に示す。
れぞれ５％ＦＣ８を含むＭＥＭ培地でそれぞれの稀釈率
に見合う様に調製した。Ｌ９２９細胞はテルモ社製９６
穴マイクロタイタープレートに８×ｌＯ個／ウェルｔ−
５％ ＦＣ８添加廊Ｍ培地１００μｔに懸濁後ウェルに
吸光度から算出された細胞壊死率を第１表に示す。
細胞壊死率よシ求めたｈ−ＴＮＦの活性を第２表に示す
。
。
第 １ 表
第 ２ 表
本発明に使用したＴＨＰ−１はＩｎｔ 、Ｊ、Ｃａｎｃ
ｅｒ 、 ２６゜１７１−１７６、（１９８０）に記載
されているものであシ、この報文の著者より分与された
ものである。
ｅｒ 、 ２６゜１７１−１７６、（１９８０）に記載
されているものであシ、この報文の著者より分与された
ものである。
ＴＨＰ−１は他にもＰｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓ
ｅｉ、Ｕ＊Ｓ、Ａ、８０゜ＰＰ５３９７−５４０１（１
９８３）にも記載されていて、これらの研究機関にも分
与されている。また更に本発明者らは権利を有するいず
れのものに対してもＴＨＰ−１を分与する用意がある。
ｅｉ、Ｕ＊Ｓ、Ａ、８０゜ＰＰ５３９７−５４０１（１
９８３）にも記載されていて、これらの研究機関にも分
与されている。また更に本発明者らは権利を有するいず
れのものに対してもＴＨＰ−１を分与する用意がある。
Claims (1)
- ヒト悪性化単球性細胞を分化誘導物質の存在下に、また
は分化誘導物質により分化されたヒト悪性化単球性細胞
を生体外刺激物質の存在下に培養しヒト腫瘍壊死因子を
生成せしめる事を特徴とするヒト腫瘍壊死因子の製造法
。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14672384A JPS6127923A (ja) | 1984-07-17 | 1984-07-17 | ヒト腫瘍壊死因子の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14672384A JPS6127923A (ja) | 1984-07-17 | 1984-07-17 | ヒト腫瘍壊死因子の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6127923A true JPS6127923A (ja) | 1986-02-07 |
Family
ID=15414100
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14672384A Pending JPS6127923A (ja) | 1984-07-17 | 1984-07-17 | ヒト腫瘍壊死因子の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6127923A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01129615A (ja) * | 1987-11-16 | 1989-05-22 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | 周波数シンセサイザ装置 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS58138383A (ja) * | 1982-02-13 | 1983-08-17 | Nippon Shinyaku Co Ltd | 生理活性物質の製法 |
| JPS6030688A (ja) * | 1983-07-28 | 1985-02-16 | Dainippon Pharmaceut Co Ltd | ヒト癌壊死因子の製造法 |
-
1984
- 1984-07-17 JP JP14672384A patent/JPS6127923A/ja active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS58138383A (ja) * | 1982-02-13 | 1983-08-17 | Nippon Shinyaku Co Ltd | 生理活性物質の製法 |
| JPS6030688A (ja) * | 1983-07-28 | 1985-02-16 | Dainippon Pharmaceut Co Ltd | ヒト癌壊死因子の製造法 |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01129615A (ja) * | 1987-11-16 | 1989-05-22 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | 周波数シンセサイザ装置 |
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