JPS61196166A - 免疫学的測定試薬及びその製法 - Google Patents
免疫学的測定試薬及びその製法Info
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- JPS61196166A JPS61196166A JP3664185A JP3664185A JPS61196166A JP S61196166 A JPS61196166 A JP S61196166A JP 3664185 A JP3664185 A JP 3664185A JP 3664185 A JP3664185 A JP 3664185A JP S61196166 A JPS61196166 A JP S61196166A
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- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明は、体液等、液体中の抗原又は抗体を検出、定量
するための試薬に関するものである。
するための試薬に関するものである。
【従来技術］
血液、尿等、体液中に存在する物質の免疫学的な測定は
、免疫化学の発展にともない数々の方法が報告されてい
る。
、免疫化学の発展にともない数々の方法が報告されてい
る。
中でも、抗原と抗体の反応を不溶性担体の凝集状態をパ
ラメーターとして検出する試みは、操作が簡便で、かつ
検出感度と特異性に優れていることから、ＪＩｌ用され
るようになった。
ラメーターとして検出する試みは、操作が簡便で、かつ
検出感度と特異性に優れていることから、ＪＩｌ用され
るようになった。
上記不溶性担体としては、ベントナイト、カオリン、赤
血球、炭素粒子、コレステロール結晶等が利用されてい
た。
血球、炭素粒子、コレステロール結晶等が利用されてい
た。
又、最近ではマイクロカプセルや、ポリスチレン等のい
わゆる合成ラテックス粒子が、目的に応じた粒径、比重
に調製できること、天然物質ではないため非特異反応を
起しにくい等の理由から。
わゆる合成ラテックス粒子が、目的に応じた粒径、比重
に調製できること、天然物質ではないため非特異反応を
起しにくい等の理由から。
好んで利用されるようになってきた。
これら不溶性担体と、抗原又は抗体との結合についても
、様々な方法が試みられている。該方法は、物理的吸着
と化学的結合に大別される。
、様々な方法が試みられている。該方法は、物理的吸着
と化学的結合に大別される。
前者の代表的な例としては、シンガーとプロッツ（Ｓｉ
ｎｇｅｒ ａｎｄ Ｐｌｏｔｚ、 Ａｍ、Ｊ、Ｍｅｄ、
、２１，１９５８ ）の方法、後者の例としては米国特
許第４０４５３８４号、及び同第４０４６７２３号等が
挙げられる。
ｎｇｅｒ ａｎｄ Ｐｌｏｔｚ、 Ａｍ、Ｊ、Ｍｅｄ、
、２１，１９５８ ）の方法、後者の例としては米国特
許第４０４５３８４号、及び同第４０４６７２３号等が
挙げられる。
しかし、これらの方法によって特異性の高い免疫学的測
定試薬を得るためには、高度に精製された抗原、又は抗
体を用いる必要がある。
定試薬を得るためには、高度に精製された抗原、又は抗
体を用いる必要がある。
ところが、該精製操作には一般に多大な労力を要し、試
薬の製造コストを押し上げる原因となる。特にある種の
抗原では、純度を高くするのにともなって収率が悪くな
り、最終的には経済的理由から免疫学的測定試薬の製造
には用いることができなくなる。
薬の製造コストを押し上げる原因となる。特にある種の
抗原では、純度を高くするのにともなって収率が悪くな
り、最終的には経済的理由から免疫学的測定試薬の製造
には用いることができなくなる。
このような抗原については、やむをえず不満足な精製度
の抗原を材料として用いている。こうして製造された試
薬を使用する場合には、非特異反応因子を吸収した被検
試料を調製する必要があるので操作が繁雑なものになり
、又充分な吸収を行うことは大変困難で、しばしば不充
分な吸収に起因する非特異反応が観察される。
の抗原を材料として用いている。こうして製造された試
薬を使用する場合には、非特異反応因子を吸収した被検
試料を調製する必要があるので操作が繁雑なものになり
、又充分な吸収を行うことは大変困難で、しばしば不充
分な吸収に起因する非特異反応が観察される。
［発明の目的１
本発明は、粗精製の抗原、又は抗体を用いて、従来のも
のに匹敵する、あるいはこれを上回る感度と特異性を有
する免疫学的測定試薬を提供することを目的としている
。
のに匹敵する、あるいはこれを上回る感度と特異性を有
する免疫学的測定試薬を提供することを目的としている
。
［発明の構成］
本発明は、不溶性担体に、抗原、又は抗体が。
前記抗原又は抗体の断片をリガンドとするモノクローナ
ル抗体を介して結合されていることを特徴とする免疫学
的測定試薬、及び不溶性担体に抗原又は抗体を結合させ
る際に、まず所望の抗原又は抗体の断片をリガンドとす
るモノクローナル抗体を不溶性担体に結合させ、次いで
このモノクローナル抗体結合不溶性担体と所望の抗原又
は抗体を含む粗精製物を混合して抗原抗体反応を行わせ
、所望の抗原又は抗体を不溶性担体に結合させることを
特徴とする免疫学的測定試薬の製法である。
ル抗体を介して結合されていることを特徴とする免疫学
的測定試薬、及び不溶性担体に抗原又は抗体を結合させ
る際に、まず所望の抗原又は抗体の断片をリガンドとす
るモノクローナル抗体を不溶性担体に結合させ、次いで
このモノクローナル抗体結合不溶性担体と所望の抗原又
は抗体を含む粗精製物を混合して抗原抗体反応を行わせ
、所望の抗原又は抗体を不溶性担体に結合させることを
特徴とする免疫学的測定試薬の製法である。
本発明における不溶性担体には、前述の種々の相体を使
用することができるが、特に好ましくはポリスチレン等
のポリマーからなるラテックス粒子である。
用することができるが、特に好ましくはポリスチレン等
のポリマーからなるラテックス粒子である。
本発明におけるモノクローナル抗体は、ケー５−とミル
スタイ７ （Ｋｔｌｈｌａｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｊ
ｎ、Ｎａｔｕｒａ、、２５１１１．１１７５）の方法に
準じて調製したものを用いる。
スタイ７ （Ｋｔｌｈｌａｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｊ
ｎ、Ｎａｔｕｒａ、、２５１１１．１１７５）の方法に
準じて調製したものを用いる。
すなわち、所望の抗原、又は抗体の断片で免疫した動物
の抗体産生細胞と、骨髄腫細胞のように人工培養基で増
殖の良い細胞との融合細胞を作成する。得られた融合細
胞のうち、目的とする抗体を産生ずるものをクローニン
グし、培養液あるいは動物の腹腔内に接種して増殖させ
た後、培養上清、もしくは腹水を回収して、これに含ま
れるモノクローナル抗体を硫安塩析法、アフィニティク
ロマトグラフ法等の操作により濃縮、精製する。
の抗体産生細胞と、骨髄腫細胞のように人工培養基で増
殖の良い細胞との融合細胞を作成する。得られた融合細
胞のうち、目的とする抗体を産生ずるものをクローニン
グし、培養液あるいは動物の腹腔内に接種して増殖させ
た後、培養上清、もしくは腹水を回収して、これに含ま
れるモノクローナル抗体を硫安塩析法、アフィニティク
ロマトグラフ法等の操作により濃縮、精製する。
動物を免疫する際に使用する抗原は、所望の抗原を認識
し得る抗体を誘導するものであれば特に限定されるもの
ではない。
し得る抗体を誘導するものであれば特に限定されるもの
ではない。
一方抗体断片は、ＩｇＧのＦｃ、及び／又はＦｄ断片を
使用した方が、より高感度な試薬とすることができる。
使用した方が、より高感度な試薬とすることができる。
該抗体断片は、プラスミンやトリプシン等、蛋白分解酵
素を利用した限定分画により得ることができる。
素を利用した限定分画により得ることができる。
抗体分子をそのまま用いてもよいが、最終的には抗体断
片を使用して得られるモノクローナル抗体と同様のもの
を産生ずる融合細胞を選択することになるので、やはり
抗体断片を利用したほうが効率が良い。
片を使用して得られるモノクローナル抗体と同様のもの
を産生ずる融合細胞を選択することになるので、やはり
抗体断片を利用したほうが効率が良い。
上記の方法により得られたモノクローナル抗体を、不溶
性担体に結合させるためには、上述の物理的吸着法、又
は化学的結合法を利用する。特に化学的結合法を利用す
ると、モノクローナル抗体が不溶性担体から溶離しにく
くなるので、より安定な試薬とすることができる。
性担体に結合させるためには、上述の物理的吸着法、又
は化学的結合法を利用する。特に化学的結合法を利用す
ると、モノクローナル抗体が不溶性担体から溶離しにく
くなるので、より安定な試薬とすることができる。
本発明における抗原又は抗体は、梅毒抗原、Ｂ型肝炎ウ
ィルス抗原、トキソプラズマ抗原、ストレプトリジン−
〇（以下ＳＬＯと略記する）、ヒト絨毛性ゴナドトロピ
ン（以下ｈＣＧと略記する）等のホルモン、及びこれら
の抗原に対する抗体等、一般に免疫学的測定試薬に用い
られているものならば、任意のものを用いることができ
る。
ィルス抗原、トキソプラズマ抗原、ストレプトリジン−
〇（以下ＳＬＯと略記する）、ヒト絨毛性ゴナドトロピ
ン（以下ｈＣＧと略記する）等のホルモン、及びこれら
の抗原に対する抗体等、一般に免疫学的測定試薬に用い
られているものならば、任意のものを用いることができ
る。
該抗原、又は抗体の粗精製物を不溶性担体に結合させる
には、上記不溶性担体に結合したモノクローナル抗体と
粗精製物との抗原抗体反応を利用すればよい、このとき
、使用した抗原又は抗体によっては、抗原抗体反応終了
後、ホルムアルデヒドやゲルタールアルデヒド等で化学
処理を行い。
には、上記不溶性担体に結合したモノクローナル抗体と
粗精製物との抗原抗体反応を利用すればよい、このとき
、使用した抗原又は抗体によっては、抗原抗体反応終了
後、ホルムアルデヒドやゲルタールアルデヒド等で化学
処理を行い。
モノクローナル抗体からの抗原、又は抗体の遊離を防ぐ
こともできる。
こともできる。
［発明の作用］
本発明におけるモノクローナル抗体は、抗原。
又は抗体の粗精製物より所望の抗原、又は抗体を選択的
に不溶性担体に結合させる作用と、モノクローナル抗体
結合不溶性担体と抗原、又は抗体とを抗原抗体反応によ
って結合させる際に、不溶性担体間における凝集を抑制
する作用を有する。特に後者の作用は、ポリクローナル
ないわゆる普通の抗体では期待できないものである。
に不溶性担体に結合させる作用と、モノクローナル抗体
結合不溶性担体と抗原、又は抗体とを抗原抗体反応によ
って結合させる際に、不溶性担体間における凝集を抑制
する作用を有する。特に後者の作用は、ポリクローナル
ないわゆる普通の抗体では期待できないものである。
したがって、本発明によれば、不溶性担体に抗原、又は
抗体を結合させる際に、特に高純度の抗原、又は抗体を
用いなくとも、充分な感度と特異性を有する試薬を得る
ことができる。
抗体を結合させる際に、特に高純度の抗原、又は抗体を
用いなくとも、充分な感度と特異性を有する試薬を得る
ことができる。
このことは、精製操作が繁雑な抗原を利用したい場合に
は、特に有利である。
は、特に有利である。
更に１本発明による免疫学的測定試薬は、従来の不溶性
担体に抗原や抗体を直接結合させたものに比べ、高感度
であることが確認された。
担体に抗原や抗体を直接結合させたものに比べ、高感度
であることが確認された。
これは、不溶性担体表面からより遠い部分で抗原抗体反
応が起こるため、不溶性担体の影響を受にくくなったた
めではないかと考えられる。
応が起こるため、不溶性担体の影響を受にくくなったた
めではないかと考えられる。
以下、実施例、並びに使用例に基き本発明を更に詳細に
説明する。
説明する。
実施例１゜
ＳＬＯ結合ヒツジ赤血球浮遊液の調製
ｌ。抗ＳＬＯモノクローナル抗体結合ヒツジ赤血球浮遊
液の調製 マウス腹水由来の抗ＳＬＯモノクローナル抗体溶液１０
ｍｇ／ｍｌ １容、５ｚ（マｌマ）洗浄ヒツジ赤血球生
理食塩水浮遊液ｌ容、及び１．２５１ゲルタールアルデ
ヒド溶液０，５容を混和し、室温で１時間攪拌して反応
させた。
液の調製 マウス腹水由来の抗ＳＬＯモノクローナル抗体溶液１０
ｍｇ／ｍｌ １容、５ｚ（マｌマ）洗浄ヒツジ赤血球生
理食塩水浮遊液ｌ容、及び１．２５１ゲルタールアルデ
ヒド溶液０，５容を混和し、室温で１時間攪拌して反応
させた。
反応後、３０００ｒｐｍ、５分間、遠心分離し、上清を
除去し、更にｐＨ７，４のリン酸緩衝液（以下ＰＢＳと
略記する）を用い、同一条件下で３回遠心分離を行って
洗浄した後、これを ｐＨ７，４のＰＢＳで５％（マハ
）血球濃度となるように懸濁させ、抗Ｓｌ。
除去し、更にｐＨ７，４のリン酸緩衝液（以下ＰＢＳと
略記する）を用い、同一条件下で３回遠心分離を行って
洗浄した後、これを ｐＨ７，４のＰＢＳで５％（マハ
）血球濃度となるように懸濁させ、抗Ｓｌ。
０モノクロ一ナル抗体結合ヒツジ赤血球浮遊液とした。
２、ＳＬＯ結合ヒツジ赤血球浮遊液の調製溶血性連鎖球
菌（以下、溶連菌と略記する）の培養液中に含まれるＳ
ＬＯを硫安分画法により粗精製し、得られた粗精製ＳＬ
Ｏ溶液ｌ容に抗ＳＬＯモノクローナル抗体結合ヒツジ赤
血球５１（マｌマ）浮遊液ｌ容を懸濁させ、４℃で１８
時間攪拌して抗原抗体反応を行わせた。
菌（以下、溶連菌と略記する）の培養液中に含まれるＳ
ＬＯを硫安分画法により粗精製し、得られた粗精製ＳＬ
Ｏ溶液ｌ容に抗ＳＬＯモノクローナル抗体結合ヒツジ赤
血球５１（マｌマ）浮遊液ｌ容を懸濁させ、４℃で１８
時間攪拌して抗原抗体反応を行わせた。
反応後、 ３０００ｒｐｍ、５分間、遠心分離し、上清
を除去し、更にｐＨ７，４のＰＢＳを用い、同一条件下
で３回遠心分離を行って洗浄した後、これを １ｚ正常
ウサギ血清（ヒツジ赤血球、及びＳＬＯに対する抗体を
含まないウサギ血清）加ＰＢＳに１ｚ（マ／マ）血球濃
度となるように懸濁させ、ＳＬＯ結合ヒツジ赤血球浮遊
液とした。
を除去し、更にｐＨ７，４のＰＢＳを用い、同一条件下
で３回遠心分離を行って洗浄した後、これを １ｚ正常
ウサギ血清（ヒツジ赤血球、及びＳＬＯに対する抗体を
含まないウサギ血清）加ＰＢＳに１ｚ（マ／マ）血球濃
度となるように懸濁させ、ＳＬＯ結合ヒツジ赤血球浮遊
液とした。
実施例２゜
ＳＬＯ結合ラテックス浮遊液の調製
１、抗ＳＬＯモノクローナル抗体結合ラテックスの調製
マウス腹水由来の抗ＳＬＯモノクローナル抗体溶液１０
ｍｇ／層１１容を、５ｚ市販ラテツクス液（粒径０．８
Ｊｌ、ポリスチレンラテックス、ダウケミカル社製）ｌ
容と混和し、５０℃で１時間反応させた。
ｍｇ／層１１容を、５ｚ市販ラテツクス液（粒径０．８
Ｊｌ、ポリスチレンラテックス、ダウケミカル社製）ｌ
容と混和し、５０℃で１時間反応させた。
反応後、１３０００ｒｐ薦、１５分間、４℃で遠心分離
し、上清を除去し、更にｐＨ８，２の０．１）Ｉグリシ
ン緩衝液（以下ＣＢＳと略記する）を用い、同一条件下
で遠心分離を行ってこれを洗浄し、抗ＳＬＯモノクロー
ナル抗体結合ラテックスを得た。
し、上清を除去し、更にｐＨ８，２の０．１）Ｉグリシ
ン緩衝液（以下ＣＢＳと略記する）を用い、同一条件下
で遠心分離を行ってこれを洗浄し、抗ＳＬＯモノクロー
ナル抗体結合ラテックスを得た。
２、ＳＬＯ結合ラテックス浮遊液の調製実施例１−２で
使用したものと同じ粗゛精製ＳＬＯ溶液ｌ容に、抗ＳＬ
Ｏモノクローナル抗体結合ラテックスを懸濁させ、４℃
で１８時間攪拌して抗原抗体反応を行わせた。
使用したものと同じ粗゛精製ＳＬＯ溶液ｌ容に、抗ＳＬ
Ｏモノクローナル抗体結合ラテックスを懸濁させ、４℃
で１８時間攪拌して抗原抗体反応を行わせた。
反応後、 ９０００ｒｐ■、１５分間、４℃で遠心分離
し、上清を除去し、更にＰＨ８，２の０．１ＮＧＢＳを
用い、同一条件下で３回遠心分離を行って洗浄しタッチ
、０．０１２ ＴＲＩＴＯＮ Ｘ−１００（登録商標、
ロームアンドハース社製）加ＣＢＳに０．１ｚラテック
ス濃度になるように浮遊させ、ＳＬＯ結合ラテックス浮
遊液とした。
し、上清を除去し、更にＰＨ８，２の０．１ＮＧＢＳを
用い、同一条件下で３回遠心分離を行って洗浄しタッチ
、０．０１２ ＴＲＩＴＯＮ Ｘ−１００（登録商標、
ロームアンドハース社製）加ＣＢＳに０．１ｚラテック
ス濃度になるように浮遊させ、ＳＬＯ結合ラテックス浮
遊液とした。
実施例３゜
ウサギ抗ｈＣＧ抗体結合ラテックス浮遊液の調製１、抗
つサギＩｇＧ−Ｆｃ断片モノクローナル抗体結合ラテッ
クスの調製 マウス腹水由来の抗つサギＩｇＧ−Ｆｃ断片モノクロー
ナル抗体溶液１０層ｇ／ｍｌ １容と、５ｚ市販ラテ
ツクス液（粒径０．２ｐ、ポリスチレンラテックス、ダ
ウケミカル社製）を混和し、５０℃で１時間反応させた
。
つサギＩｇＧ−Ｆｃ断片モノクローナル抗体結合ラテッ
クスの調製 マウス腹水由来の抗つサギＩｇＧ−Ｆｃ断片モノクロー
ナル抗体溶液１０層ｇ／ｍｌ １容と、５ｚ市販ラテ
ツクス液（粒径０．２ｐ、ポリスチレンラテックス、ダ
ウケミカル社製）を混和し、５０℃で１時間反応させた
。
反応後、これを １５００Ｏｒｐｍ、 ３０分間、 ４
℃で遠心分離し、上清を除去し、更にｐＨ８，２の０．
１Ｎ ＧＢＳを用い、同一条件下で遠心分離を行って洗
浄し、マウス抗つサギＩｇＧ−Ｆｃ断片モノクローナル
抗体結合ラテックスを得た。
℃で遠心分離し、上清を除去し、更にｐＨ８，２の０．
１Ｎ ＧＢＳを用い、同一条件下で遠心分離を行って洗
浄し、マウス抗つサギＩｇＧ−Ｆｃ断片モノクローナル
抗体結合ラテックスを得た。
２、ウサギ抗ｈＣＧ抗体結合ラテックス浮遊液の調製
ｈＣＧで免疫したウサギの血清から硫安分画法により調
製されたウサギ抗ｈＣＧ抗体粗精製溶液１０層ｇ／ｍｌ
１容に、マウス抗つサギＩｇＧ−Ｆｃ断片モノクロ
ーナル抗体結合ラテックスを懸濁させ、３７℃で１時間
、抗原抗体反応を行わせた後、更に４℃で１８時間反応
させた。
製されたウサギ抗ｈＣＧ抗体粗精製溶液１０層ｇ／ｍｌ
１容に、マウス抗つサギＩｇＧ−Ｆｃ断片モノクロ
ーナル抗体結合ラテックスを懸濁させ、３７℃で１時間
、抗原抗体反応を行わせた後、更に４℃で１８時間反応
させた。
反応後、１５０００ｒｐｍ、３０分間、４℃で遠心分離
し、上清を除去し、更にｐＨ８，２の０．１ＮＧＢＳを
用い、同一条件下で３回遠心分離を行って洗浄した後、
０．０１＄ ＴＲＩＴＯＮ Ｘ−１００加ＣＢＳに １
％ラテックス濃度となるように懸濁させ、ウサギ抗ｈＣ
Ｇ抗体結合ラテックス浮遊液とした。
し、上清を除去し、更にｐＨ８，２の０．１ＮＧＢＳを
用い、同一条件下で３回遠心分離を行って洗浄した後、
０．０１＄ ＴＲＩＴＯＮ Ｘ−１００加ＣＢＳに １
％ラテックス濃度となるように懸濁させ、ウサギ抗ｈＣ
Ｇ抗体結合ラテックス浮遊液とした。
実施例４゜
ウサギ抗ｈＣＧ抗体結合ラテックスの調製１、抗つサギ
ＩｇＧ−Ｆｄ断片モノクローナル抗体結合ラテックスの
調製 マウス腹水由来の抗つサギＩｇＧ−Ｆｄ断片モアクロー
ナル抗体溶液１０ｍｇ／＋ｓｌ １容と、 ５％市販
ラテックス液（粒径０’、’２ｐ、カルボキシル化スチ
レンラテックス、ダウケミカル社製）０．５容、及び１
ｚエーテルカルボジイミド ン４酢酸加０．１）ＩＰＢＳ溶液（ｐＨ７．５ ） ０
、 ５容を混和し、室温で１時間反応させた。
ＩｇＧ−Ｆｄ断片モノクローナル抗体結合ラテックスの
調製 マウス腹水由来の抗つサギＩｇＧ−Ｆｄ断片モアクロー
ナル抗体溶液１０ｍｇ／＋ｓｌ １容と、 ５％市販
ラテックス液（粒径０’、’２ｐ、カルボキシル化スチ
レンラテックス、ダウケミカル社製）０．５容、及び１
ｚエーテルカルボジイミド ン４酢酸加０．１）ＩＰＢＳ溶液（ｐＨ７．５ ） ０
、 ５容を混和し、室温で１時間反応させた。
反応後、１５０００ｒｐｍ、３０分間，４℃で遠心分離
し，上清を除去し、更にｐＨ７．５のＰＢＳを用い。
し，上清を除去し、更にｐＨ７．５のＰＢＳを用い。
同一条件下で３回遠心分離を行って洗浄し，抗つサギＩ
ｇＧーＦｄ断片モノクローナル抗体結合ラテックスを得
た。
ｇＧーＦｄ断片モノクローナル抗体結合ラテックスを得
た。
２、ウサギ抗ｈＣＧ抗体結合ラテックス浮遊液の調製
ｈＣＧで免疫したウサギの血清ＩｇＧ分画を、イムノア
フィニティクロマトグラフ法により精製して得られた精
製ウサギ抗ｈＣＧ抗体溶液１ｍｇ／■１０、５容に，抗
つサギＩｇＧーＦｄ断片モノクローナル抗体結合ラテッ
クスを懸濁させ、３７℃で１時間，抗原抗体反応を行わ
せた後、更に４℃で１８時間反応させた。
フィニティクロマトグラフ法により精製して得られた精
製ウサギ抗ｈＣＧ抗体溶液１ｍｇ／■１０、５容に，抗
つサギＩｇＧーＦｄ断片モノクローナル抗体結合ラテッ
クスを懸濁させ、３７℃で１時間，抗原抗体反応を行わ
せた後、更に４℃で１８時間反応させた。
反応後、１５０００ｒｐｍ， ３ ０分間， ４℃で遠
心分離し、上清を除去し、更にｐＨ８．２の０．１ＮＧ
ＢＳを用いて同一条件下で３回遠心分離を行って洗浄し
た後． ０．２５Ｘゲルタールアルデヒド溶液１容を加
えて室温で１時間反応させた。
心分離し、上清を除去し、更にｐＨ８．２の０．１ＮＧ
ＢＳを用いて同一条件下で３回遠心分離を行って洗浄し
た後． ０．２５Ｘゲルタールアルデヒド溶液１容を加
えて室温で１時間反応させた。
反応後、同一条件下で遠心分離し，上清を除去し、更に
ｐＨ８．２の０．１１１１ＧＢＳを用い、やはり同一条
件下で３回遠心分離を行って洗浄した後、１ｚラテ−／
クス濃度トｌｘ ルヨウニ０．０１％ ＴＲＩＴＯＭ
Ｘ−１００加０．１Ｎ Ｇ Ｂ Ｓ （ｐＨ８．２
）に懸濁させ、ウサギ抗ｈＣＧ抗体結合ラテックス浮遊
液とした。
ｐＨ８．２の０．１１１１ＧＢＳを用い、やはり同一条
件下で３回遠心分離を行って洗浄した後、１ｚラテ−／
クス濃度トｌｘ ルヨウニ０．０１％ ＴＲＩＴＯＭ
Ｘ−１００加０．１Ｎ Ｇ Ｂ Ｓ （ｐＨ８．２
）に懸濁させ、ウサギ抗ｈＣＧ抗体結合ラテックス浮遊
液とした。
使用例１
実施例１，及び２で得られたＳＬＯ結合ヒツジ赤血球、
及び同ラテックス浮遊液を使用して、実際に種々の血清
中の抗ストレプトリジン価をマイクロタイター法により
測定し、その結果を市販の試薬（ Ｒａｎｔｚ−Ｒａｎ
ｄａｌｌ法）、及び従来法によりＳＬＯを不溶性担体に
結合させた試薬（マイクロタイター法）を用いた場合と
比較した．結果は第１表に示すとおりである。
及び同ラテックス浮遊液を使用して、実際に種々の血清
中の抗ストレプトリジン価をマイクロタイター法により
測定し、その結果を市販の試薬（ Ｒａｎｔｚ−Ｒａｎ
ｄａｌｌ法）、及び従来法によりＳＬＯを不溶性担体に
結合させた試薬（マイクロタイター法）を用いた場合と
比較した．結果は第１表に示すとおりである。
被検血清は溶連菌感染患者のもの４例、健康人のもの３
例を使用し、結果は、市販の試薬についてはＴｏｄｄ単
位で、その他のものは沈降が認められた最高希釈倍数で
表示した。
例を使用し、結果は、市販の試薬についてはＴｏｄｄ単
位で、その他のものは沈降が認められた最高希釈倍数で
表示した。
使用例２
実施例３、及び４で得られたウサギ抗ｈＣＧ抗体結合ラ
テックス浮遊液を使用して、ｈＣＧ標品の希釈液をスラ
イド凝集法により測定し、その結果を、従来法によって
調製された市販のｈＣＧ検出用試薬を用いた場合と比較
した。結果は第２表に示すとおりである。
テックス浮遊液を使用して、ｈＣＧ標品の希釈液をスラ
イド凝集法により測定し、その結果を、従来法によって
調製された市販のｈＣＧ検出用試薬を用いた場合と比較
した。結果は第２表に示すとおりである。
尚１表中、＋は強い凝集が認められたもの１士は弱い凝
集が認められたもの、−は凝集が認められなかったもの
を示す。
集が認められたもの、−は凝集が認められなかったもの
を示す。
第 ２ 表
［発明の効果］
使用例１から明らかなように１本発明によれば、粗精製
抗原を使用しても、従来法により調製された試薬よりも
はるかに高感度で、かつ特異性の高い試薬を得られる。
抗原を使用しても、従来法により調製された試薬よりも
はるかに高感度で、かつ特異性の高い試薬を得られる。
又、使用例２から明らかなように、本発明によれば、粗
精製抗体を用いても、精製抗体を用いて調製した試薬（
実施例４の試薬）とほぼ同等の感度を有し、しかも従来
法によって調製された市販の試薬よりも高感度な試薬を
得ることができる。
精製抗体を用いても、精製抗体を用いて調製した試薬（
実施例４の試薬）とほぼ同等の感度を有し、しかも従来
法によって調製された市販の試薬よりも高感度な試薬を
得ることができる。
以上のことから、本発明によれば、高感度で特異性の高
い免疫学的測定試薬を安価に得られることが明らかであ
る。
い免疫学的測定試薬を安価に得られることが明らかであ
る。
特 許 出 願 人
栄研化学株式会社
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）不溶性担体に、抗原、又は抗体が、前記抗原又は抗
体の断片をリガンドとするモノクローナル抗体を介して
結合されていることを特徴とする免疫学的測定試薬。 ２）不溶性担体に抗原又は抗体を結合させる際に、まず
所望の抗原又は抗体の断片をリガンドとするモノクロー
ナル抗体を不溶性担体に結合させ、次いでこのモノクロ
ーナル抗体結合不溶性担体と所望の抗原又は抗体を含む
粗精製物を混合して抗原抗体反応を行わせ、所望の抗原
又は抗体を不溶性担体に結合させることを特徴とする免
疫学的測定試薬の製法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3664185A JPS61196166A (ja) | 1985-02-27 | 1985-02-27 | 免疫学的測定試薬及びその製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3664185A JPS61196166A (ja) | 1985-02-27 | 1985-02-27 | 免疫学的測定試薬及びその製法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61196166A true JPS61196166A (ja) | 1986-08-30 |
Family
ID=12475469
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3664185A Pending JPS61196166A (ja) | 1985-02-27 | 1985-02-27 | 免疫学的測定試薬及びその製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61196166A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006518042A (ja) * | 2003-02-14 | 2006-08-03 | バイエル・ヘルスケア・エルエルシー | ラテックス凝集アッセイについての包括的な方法 |
| CN104745536A (zh) * | 2015-03-02 | 2015-07-01 | 南方医科大学 | 一种弓形虫蛋白TgVP1单克隆抗体杂交瘤3A6及单克隆抗体 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS55156865A (en) * | 1978-10-06 | 1980-12-06 | Toyo Jozo Co Ltd | Organism component measuring compound and its manufacture plus organism component measuring composition, organism component measuring method and organism component measuring kit |
| JPS57136165A (en) * | 1981-02-18 | 1982-08-23 | Mochida Pharmaceut Co Ltd | Immunological measuring reagent |
| JPS5923251A (ja) * | 1982-07-05 | 1984-02-06 | ベ−リンガ−・マンハイム・ゲゼルシヤフト・ミツト・ベシユレンクテル・ハフツング | 多価抗原の測定法及び測定試薬 |
-
1985
- 1985-02-27 JP JP3664185A patent/JPS61196166A/ja active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS55156865A (en) * | 1978-10-06 | 1980-12-06 | Toyo Jozo Co Ltd | Organism component measuring compound and its manufacture plus organism component measuring composition, organism component measuring method and organism component measuring kit |
| JPS57136165A (en) * | 1981-02-18 | 1982-08-23 | Mochida Pharmaceut Co Ltd | Immunological measuring reagent |
| JPS5923251A (ja) * | 1982-07-05 | 1984-02-06 | ベ−リンガ−・マンハイム・ゲゼルシヤフト・ミツト・ベシユレンクテル・ハフツング | 多価抗原の測定法及び測定試薬 |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006518042A (ja) * | 2003-02-14 | 2006-08-03 | バイエル・ヘルスケア・エルエルシー | ラテックス凝集アッセイについての包括的な方法 |
| CN104745536A (zh) * | 2015-03-02 | 2015-07-01 | 南方医科大学 | 一种弓形虫蛋白TgVP1单克隆抗体杂交瘤3A6及单克隆抗体 |
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