JPS61140523A - 磁気微小球、それらを製造する方法、それらの使用および生物学的粒子の単離 - Google Patents
磁気微小球、それらを製造する方法、それらの使用および生物学的粒子の単離Info
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- JPS61140523A JPS61140523A JP60273527A JP27352785A JPS61140523A JP S61140523 A JPS61140523 A JP S61140523A JP 60273527 A JP60273527 A JP 60273527A JP 27352785 A JP27352785 A JP 27352785A JP S61140523 A JPS61140523 A JP S61140523A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、磁気微小球（ｍａｇｎｅｔｉｃｍｉｃｒｏｓ
ｐｈｅｒｅｓ）（ＭＩＭＳ）、それらを製造する方法、
生物学的粒子、とくに天然細胞または人工細胞の分離お
よび単離のためのそれらの使用および生物学的粒子の単
離に関する。
ｐｈｅｒｅｓ）（ＭＩＭＳ）、それらを製造する方法、
生物学的粒子、とくに天然細胞または人工細胞の分離お
よび単離のためのそれらの使用および生物学的粒子の単
離に関する。
細胞生物学的研究および生化学的研究の木質的目的は、
生物学的粒子の単離である。これらは、一方において、
不均質混合物からある種の細胞の均質な下位集団であり
、そしてまた種々な性質をもつ細胞断片である０重要な
要件は、高い収率、調製プロセスの間の細胞の最大の可
能な保存、このプロセスの簡単なかつ迅速な過程および
低いコストである。現在利用可能な方法は、これらの要
件に関して、ことに高い粒子計数１例えば、１０６〜１
０１２細胞をもつ混合物の場合において不満足のままで
ある。
生物学的粒子の単離である。これらは、一方において、
不均質混合物からある種の細胞の均質な下位集団であり
、そしてまた種々な性質をもつ細胞断片である０重要な
要件は、高い収率、調製プロセスの間の細胞の最大の可
能な保存、このプロセスの簡単なかつ迅速な過程および
低いコストである。現在利用可能な方法は、これらの要
件に関して、ことに高い粒子計数１例えば、１０６〜１
０１２細胞をもつ混合物の場合において不満足のままで
ある。
遠心分離法［フッチンス（Ｈｕｔｃｈｉｎｓ）、Ｄ、お
よびＣ，Ｍ、スチール（Ｓｔｅｅｌ）著：ペーターズ（
ｐ６ｔｅｒＳ）、Ｈ，編：細胞および下位細胞要素の分
離（Ｓｅｐａｒａｔｆａｎ ｏｆ ｃｅｌｌｓ
ａｎｄ ５ｕｂｃｅ１１ｕｌａｒ ｅｌｌｅｍｅｎ
ｔｓ）、１９７９参照］は、密度または体積の物理学的
パラメーターに基づいて分離を実施し、それゆえ特異性
に欠ける。
よびＣ，Ｍ、スチール（Ｓｔｅｅｌ）著：ペーターズ（
ｐ６ｔｅｒＳ）、Ｈ，編：細胞および下位細胞要素の分
離（Ｓｅｐａｒａｔｆａｎ ｏｆ ｃｅｌｌｓ
ａｎｄ ５ｕｂｃｅ１１ｕｌａｒ ｅｌｌｅｍｅｎ
ｔｓ）、１９７９参照］は、密度または体積の物理学的
パラメーターに基づいて分離を実施し、それゆえ特異性
に欠ける。
これに関して、血清学的反応に基づいて固相親和性技術
の発展により進歩が達成された。抗体をプラスチック［
例えば、パンニング法（Ｐａｎｎｉｎｇｖｅｒｆａｈｒ
ｅｎ）：ワイソクキ（Ｗｙｓｏｃｋｉ）、Ｌ、Ｊ 、お
よびＶ、Ｌ、サトー（Ｓａｔｏ）、１９７８、プロシー
ディンゲス・オブ・ナショナル拳アカデミ−・オブ・サ
イエンシズ（Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ
、）７５ ： ２８４４；およびバシ、（Ｂａｓｃｈ）
、Ｒ，Ｓ、ら、１９８３．ジャーナル・オブ・イムノロ
ジカル・メソッズ（Ｊ、Ｉｍｍｕｎ。
の発展により進歩が達成された。抗体をプラスチック［
例えば、パンニング法（Ｐａｎｎｉｎｇｖｅｒｆａｈｒ
ｅｎ）：ワイソクキ（Ｗｙｓｏｃｋｉ）、Ｌ、Ｊ 、お
よびＶ、Ｌ、サトー（Ｓａｔｏ）、１９７８、プロシー
ディンゲス・オブ・ナショナル拳アカデミ−・オブ・サ
イエンシズ（Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ
、）７５ ： ２８４４；およびバシ、（Ｂａｓｃｈ）
、Ｒ，Ｓ、ら、１９８３．ジャーナル・オブ・イムノロ
ジカル・メソッズ（Ｊ、Ｉｍｍｕｎ。
１、Ｍｅｔｈｏｄｓ）５６：２６９参照］、ガラズまた
はゲル物質［Ｓ、バラシュ（Ｂ ａ ｓ ｃ ｈ）ら、
上記引用文中］の表面に固定する（これらは充填してカ
ラムを形成することができる）ことによって、これらの
方法は細胞または細胞物質を特定の方法で分子表面構造
体、例えば、抗原の弁別により分離可能とする。これら
の方法の欠点は、物質の表面との非特異的結合反応、粒
子または細胞の凝集によるカラムの詰まり、剪断力によ
る感受性細胞の損傷、長いプロセス時間および、非常に
とくに、大量を取扱うための容量の欠如である。
はゲル物質［Ｓ、バラシュ（Ｂ ａ ｓ ｃ ｈ）ら、
上記引用文中］の表面に固定する（これらは充填してカ
ラムを形成することができる）ことによって、これらの
方法は細胞または細胞物質を特定の方法で分子表面構造
体、例えば、抗原の弁別により分離可能とする。これら
の方法の欠点は、物質の表面との非特異的結合反応、粒
子または細胞の凝集によるカラムの詰まり、剪断力によ
る感受性細胞の損傷、長いプロセス時間および、非常に
とくに、大量を取扱うための容量の欠如である。
非特異的接着、細胞の不適切な保存および剪断力は、実
際の分離操作を希薄懸濁液から実施する液相法において
ほとんど完全に排除することができる。ここで述べるこ
とのできる方法は、次の通りである：細胞免疫電気泳動
法［Ｈ，Ｈ，Ｐ。
際の分離操作を希薄懸濁液から実施する液相法において
ほとんど完全に排除することができる。ここで述べるこ
とのできる方法は、次の通りである：細胞免疫電気泳動
法［Ｈ，Ｈ，Ｐ。
コーリー（Ｃｏ ｈ ｌ ｙ）ら、１９８４、インター
ナチナル拳ミーティングφセル・エレクトロフォレシス
（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ
Ｃｅ１ｌ Ｅｌｅｔｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）、ｏ
ストック（Ｒｏｓｔｏｃｋ）、ＧＤＲｌ 、ＦＡＣ５［
ローケン（Ｌｏｌｃｅｎ）Ｍ。
ナチナル拳ミーティングφセル・エレクトロフォレシス
（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ
Ｃｅ１ｌ Ｅｌｅｔｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）、ｏ
ストック（Ｒｏｓｔｏｃｋ）、ＧＤＲｌ 、ＦＡＣ５［
ローケン（Ｌｏｌｃｅｎ）Ｍ。
Ｒ９およびＡ、Ｍ、スタール（Ｓｔａｌｌ）、１９８２
、ジャーナル・オブ・イムノロジカル・メソッズ（Ｊ、
Ｉｍｍｕｎｏｌ、Ｍｅｔｈｏｄｓ）５０：Ｒ８５］およ
び抗体と接合した磁気微小球に基づく磁気細胞分離技術
、すべてのこれらの技術は抗体の血清学的特異性と制御
可能な物理的カニ電場、光学的認識または磁場との組み
合わせの共通の因子を有する。
、ジャーナル・オブ・イムノロジカル・メソッズ（Ｊ、
Ｉｍｍｕｎｏｌ、Ｍｅｔｈｏｄｓ）５０：Ｒ８５］およ
び抗体と接合した磁気微小球に基づく磁気細胞分離技術
、すべてのこれらの技術は抗体の血清学的特異性と制御
可能な物理的カニ電場、光学的認識または磁場との組み
合わせの共通の因子を有する。
例えば、ＦＡＣＳは現在分析分野における技術状態を表
わすが、−とくにポリジーンの特性のため−５重大な欠
点が最初に述べた２つの技術について残っている。調製
的使用のため、適当な期間において大量の細胞を取扱う
容量が非常に制限される。
わすが、−とくにポリジーンの特性のため−５重大な欠
点が最初に述べた２つの技術について残っている。調製
的使用のため、適当な期間において大量の細胞を取扱う
容量が非常に制限される。
対照的に、磁気微小球の使用は顕著な利点を提供する。
なぜなら、微小球を使用する磁気分離法はプロセスの過
程において安価でありかつ簡単であり、そして大量の細
胞（１０６〜１０１２ｍ胞）の取扱いについてばかりで
なく、かつまた他の細胞粒子を急速に単離するために、
ことに調製分野において、経済的に適当に適用すること
ができるからである。
程において安価でありかつ簡単であり、そして大量の細
胞（１０６〜１０１２ｍ胞）の取扱いについてばかりで
なく、かつまた他の細胞粒子を急速に単離するために、
ことに調製分野において、経済的に適当に適用すること
ができるからである。
過去数年間、多数の種々のポリマー粒子がこれらの反応
のために開発されてきた［メタアクリレート、モルディ
（ＭｏｌｄａＶ）ら、１９７７、ネイチャー （Ｎａｔ
ｕｒｅ）、２６８ ： ４３７；アクリレート、レン
バウム（Ｒｅｍｂａｕｍ）ら、１９７８、ケム壷チク壷
マーチ（９上至ｍ、Ｔｅｃ Ｍａｒｃｈ）： １８２
；ポリグルタルアルデヒド、レンバウム（Ｒｅｍｂａｕ
ｍ）ら、１９７８．ジャーナル・オブΦイムノロジカル
・メソッズ（Ｊ 、Ｉｍｍｕｎｏ ｌ 、Ｍｅｔ ｈ。
のために開発されてきた［メタアクリレート、モルディ
（ＭｏｌｄａＶ）ら、１９７７、ネイチャー （Ｎａｔ
ｕｒｅ）、２６８ ： ４３７；アクリレート、レン
バウム（Ｒｅｍｂａｕｍ）ら、１９７８、ケム壷チク壷
マーチ（９上至ｍ、Ｔｅｃ Ｍａｒｃｈ）： １８２
；ポリグルタルアルデヒド、レンバウム（Ｒｅｍｂａｕ
ｍ）ら、１９７８．ジャーナル・オブΦイムノロジカル
・メソッズ（Ｊ 、Ｉｍｍｕｎｏ ｌ 、Ｍｅｔ ｈ。
ｄｓ）、２４：２３９；アクロレイン、マーゲル（Ｍａ
ｒｇｅｌ）ら、１９８２、ジャーナル・オフ−セル・サ
イエンシズ（Ｊ、Ｃｅ１１．Ｓｃｉ、）、５６．１５７
；およびデキストラン、モルディ（Ｍｏｌｄａｙ）およ
びマクケンジエ（ＭｃＫｅｎｚｉｅ）、１９８２、ジャ
ーナＡｙ−オブ・イムノロジカル・メソッズ（Ｊ、Ｉｍ
ｍｕｎ。
ｒｇｅｌ）ら、１９８２、ジャーナル・オフ−セル・サ
イエンシズ（Ｊ、Ｃｅ１１．Ｓｃｉ、）、５６．１５７
；およびデキストラン、モルディ（Ｍｏｌｄａｙ）およ
びマクケンジエ（ＭｃＫｅｎｚｉｅ）、１９８２、ジャ
ーナＡｙ−オブ・イムノロジカル・メソッズ（Ｊ、Ｉｍ
ｍｕｎ。
１、Ｍｅｔｈｏｄｓ）５２：３５３］。
ゾレ（Ｚｏｌｌｅ）ら［１９７０、インターナショナル
−ジャーナル・オブーアプライド・ラジエイシ菖ン・ア
ンドφアイソトープス（Ｉｎｔ。
−ジャーナル・オブーアプライド・ラジエイシ菖ン・ア
ンドφアイソトープス（Ｉｎｔ。
Ｊ、Ａｐｐｌ、Ｒａｄｉａｔ、）２１：１５５］は、微
小球をアルブミンから榮固法により最初に調製した。セ
ンエイ（Ｓｅｎｙｅｉ）ら［１９７８、ジャーナノ１番
オブ・アプライド・フィジックス（Ｊ、Ａｐｐｌ、Ｐｈ
ｙｓ、）４９：３５７８］は、磁性酸化鉄を粒子中に混
入することにより磁気アルブミン微小球を開発し、そし
てこれらを薬品の輸送（ｒ薬物担体」）に使用した。同
一の研究グループはアルブミンから磁気微小球の調製を
記載し、ここで、蛋白質Ａを抗体のための配位子として
マトリックスに凝固した［ライラダー（Ｗｉｄｄｅｒ）
ら、１９７９、クリニカルΦイムノロジー・アンド・イ
ムツバソロジー（Ｃ１ｉｎ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、Ｉｍｍｕ
ｎｏｐａｔｈ、）、１４：３９５］、前述の方法と比較
したこれらの微小球の利点は、調製が簡単かつ安価であ
り、配位子の結合が簡単であり、蛋白質溶液中でさえ、
懸濁性にすぐれ、そして非特異的結合がほんのわずかで
あるということである。
小球をアルブミンから榮固法により最初に調製した。セ
ンエイ（Ｓｅｎｙｅｉ）ら［１９７８、ジャーナノ１番
オブ・アプライド・フィジックス（Ｊ、Ａｐｐｌ、Ｐｈ
ｙｓ、）４９：３５７８］は、磁性酸化鉄を粒子中に混
入することにより磁気アルブミン微小球を開発し、そし
てこれらを薬品の輸送（ｒ薬物担体」）に使用した。同
一の研究グループはアルブミンから磁気微小球の調製を
記載し、ここで、蛋白質Ａを抗体のための配位子として
マトリックスに凝固した［ライラダー（Ｗｉｄｄｅｒ）
ら、１９７９、クリニカルΦイムノロジー・アンド・イ
ムツバソロジー（Ｃ１ｉｎ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、Ｉｍｍｕ
ｎｏｐａｔｈ、）、１４：３９５］、前述の方法と比較
したこれらの微小球の利点は、調製が簡単かつ安価であ
り、配位子の結合が簡単であり、蛋白質溶液中でさえ、
懸濁性にすぐれ、そして非特異的結合がほんのわずかで
あるということである。
しかしながら、われわれの研究によると、蛋白質Ａの損
失の可能性が明らかにされ、ここで蛋白質Ａは、マトリ
ックスの膨潤のため、マトリックスに凝固するだけであ
り、共有結合しなかった。
失の可能性が明らかにされ、ここで蛋白質Ａは、マトリ
ックスの膨潤のため、マトリックスに凝固するだけであ
り、共有結合しなかった。
さらに、この１つの配位子のみを使用することにより、
分離に適する他の分子とも結合する可能性が制限された
［カントシア（Ｋａｎｄｚｉａ）ら、１９８４．ジャー
ナル拳オブ・イムノロジカル・メソッズ（Ｊ 、Ｉｍｍ
ｕｎｏ ｌ 、Ｍ−ｅｔ ｈ。
分離に適する他の分子とも結合する可能性が制限された
［カントシア（Ｋａｎｄｚｉａ）ら、１９８４．ジャー
ナル拳オブ・イムノロジカル・メソッズ（Ｊ 、Ｉｍｍ
ｕｎｏ ｌ 、Ｍ−ｅｔ ｈ。
ｄｓ）、プリントのために調製された］、シたがって、
マトリックスの安定化を最大としかつ微小球表面への分
子の共有結合を可能とするように、アルブミンまたは他
の適当なマトリックス蛋白質からマトリックス蛋白質を
簡単に調製する方法を開発する道筋が探究された。
マトリックスの安定化を最大としかつ微小球表面への分
子の共有結合を可能とするように、アルブミンまたは他
の適当なマトリックス蛋白質からマトリックス蛋白質を
簡単に調製する方法を開発する道筋が探究された。
本発明は、凝固したマトリ−２クス蛋白質中に混入され
た磁気成分から成り、前記マトリックス蛋白質の表面が
官能基により生物学的粒子の結合のために活性化されて
いる磁気微小球、以後ＭＩＭＳとも呼ぶ、に関する。
た磁気成分から成り、前記マトリックス蛋白質の表面が
官能基により生物学的粒子の結合のために活性化されて
いる磁気微小球、以後ＭＩＭＳとも呼ぶ、に関する。
本発明による磁気微小球は、適当な安定化されたマトリ
ックス蛋白質１例えば、アルブミン、オヴァルブミン、
カゼインおよびび一般に天然に産出する球状の他の蛋白
質、およびまた合成ポリペプチド、例えば、なかでも、
ポリーＬ−リジン類から成り、前記マトリックス中に、
強磁性をもつ元素または化合物、例えば、Ｆｅ、Ｎｉ、
Ｃｏまたは同一の性質をもつこれらの元素の化合物また
は合金、または非常に一般的にこの型の磁化可能な成分
、とくに「フェロ流体（ｆｅｒｒｏｆｌｕｉｄ）」が含
められており、そして前記マトリックス蛋白質の表面は
官能基、とくにアルデヒド基により活性化されている。
ックス蛋白質１例えば、アルブミン、オヴァルブミン、
カゼインおよびび一般に天然に産出する球状の他の蛋白
質、およびまた合成ポリペプチド、例えば、なかでも、
ポリーＬ−リジン類から成り、前記マトリックス中に、
強磁性をもつ元素または化合物、例えば、Ｆｅ、Ｎｉ、
Ｃｏまたは同一の性質をもつこれらの元素の化合物また
は合金、または非常に一般的にこの型の磁化可能な成分
、とくに「フェロ流体（ｆｅｒｒｏｆｌｕｉｄ）」が含
められており、そして前記マトリックス蛋白質の表面は
官能基、とくにアルデヒド基により活性化されている。
適当な条件下に、すべての型の蛋白質、とくに生物学的
に直接活性の分子またはアミノ基を含有しかつ配位子と
して使用できる他の分子、例えば、ジアミノヘプタン、
ジアミノエチル、ジアミノプロピルなど、酵素、蛋白質
Ａ、アビジン、アミノ−糖類およびアミノ−油脂類をこ
れらの基に共有結合させることができる。
に直接活性の分子またはアミノ基を含有しかつ配位子と
して使用できる他の分子、例えば、ジアミノヘプタン、
ジアミノエチル、ジアミノプロピルなど、酵素、蛋白質
Ａ、アビジン、アミノ−糖類およびアミノ−油脂類をこ
れらの基に共有結合させることができる。
磁気微小球のマトリックス蛋白質は、適当な二官能性ま
たは多官能性の架橋剤により架橋され。
たは多官能性の架橋剤により架橋され。
架橋剤の遊離官能基はマトリックス蛋白質の表面上に存
在する。
在する。
適当な架橋剤は、アルデヒド類、とくにグルグルアルデ
ヒド、およびジメチルアジピミデート−２ＨＣｌ、ジメ
チルビメリミデート・２ＨＣｌ、ジメチルスベリミデー
ト・２ＨＣｌ、ジメチル３．３°−ジチオビスプロピオ
ンイミデート・２ＨＣｌ、２−イミノチオラン・ＨＣｌ
、ジスクシニミジルスベレート、ビス［２−（スクシン
イミドオキシカルボニルオキシ）エチル］スルホン、ジ
スクシニミジルタートレート、ジチオビス（スクシニミ
ジルプロピオネート）、エチルグリコールビス（スクシ
ニミジルスフシネ−）） 、 Ｎ−５−アジド−２−ニ
トロベンゾイルオキシスクシンイミド、Ｐ−アジドフェ
ナシルプロミド、ｐ−アジドフェニルグリオキサール、
４−フルオロ−３−ニトロフェニルアジド、Ｎ−ヒドロ
キシスクシミジル４−アジドベンゾエート、Ｎ−ヒドロ
キシスクシニミジル−４−アジドサリチル酸１ｍ−マレ
イミドベンゾイルＮ−ヒト自キシスクシンイミドエステ
ル、メチル４−アジドベンゾイミデート、ｐ−ニトロフ
ェニル２−ジアゾ−３，３，３−トリフルオロプロピオ
ネート、Ｎ−スクシニミジル−６−（４°−アジド−２
”−二トロフェニルアミノ）ヘキサノエート、スクシニ
ミジル４−（Ｎ−マレイミド−メチル）シクロヘキサン
−１−カルボキシレート、スクシニミジル４−（ｐ−マ
レイミドフェニル）ブチレート、Ｎ−（４−アジドフェ
ニルチオ）フタルイミド、エチル−４−アジドフェニル
１．４−ジチオブチルイミデート・ＨＣｌ、Ｎ−スクシ
ニミジル（４−アジドフェニル−ジチオ）プロピオネー
ト、１．５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン、
Ｎ−スクシニミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロ
ピオネート、４，４゛−ジチオビスフェニルアジドおよ
びエリスリトールビスカーボネートから成る群より選択
される化合物である。
ヒド、およびジメチルアジピミデート−２ＨＣｌ、ジメ
チルビメリミデート・２ＨＣｌ、ジメチルスベリミデー
ト・２ＨＣｌ、ジメチル３．３°−ジチオビスプロピオ
ンイミデート・２ＨＣｌ、２−イミノチオラン・ＨＣｌ
、ジスクシニミジルスベレート、ビス［２−（スクシン
イミドオキシカルボニルオキシ）エチル］スルホン、ジ
スクシニミジルタートレート、ジチオビス（スクシニミ
ジルプロピオネート）、エチルグリコールビス（スクシ
ニミジルスフシネ−）） 、 Ｎ−５−アジド−２−ニ
トロベンゾイルオキシスクシンイミド、Ｐ−アジドフェ
ナシルプロミド、ｐ−アジドフェニルグリオキサール、
４−フルオロ−３−ニトロフェニルアジド、Ｎ−ヒドロ
キシスクシミジル４−アジドベンゾエート、Ｎ−ヒドロ
キシスクシニミジル−４−アジドサリチル酸１ｍ−マレ
イミドベンゾイルＮ−ヒト自キシスクシンイミドエステ
ル、メチル４−アジドベンゾイミデート、ｐ−ニトロフ
ェニル２−ジアゾ−３，３，３−トリフルオロプロピオ
ネート、Ｎ−スクシニミジル−６−（４°−アジド−２
”−二トロフェニルアミノ）ヘキサノエート、スクシニ
ミジル４−（Ｎ−マレイミド−メチル）シクロヘキサン
−１−カルボキシレート、スクシニミジル４−（ｐ−マ
レイミドフェニル）ブチレート、Ｎ−（４−アジドフェ
ニルチオ）フタルイミド、エチル−４−アジドフェニル
１．４−ジチオブチルイミデート・ＨＣｌ、Ｎ−スクシ
ニミジル（４−アジドフェニル−ジチオ）プロピオネー
ト、１．５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン、
Ｎ−スクシニミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロ
ピオネート、４，４゛−ジチオビスフェニルアジドおよ
びエリスリトールビスカーボネートから成る群より選択
される化合物である。
本発明は、好ましくは、活性化されたＭＩＭＳに関し、
ここでアルデヒド官能は適当な条件下に結合分子または
他の結合分子のための結合の仲介物質、例えば、ＣＮＢ
Ｒ、ジアゾ化合物、チオール化合物またはスペーサー（
ｓｐａｃｅｒ）分子として単にはたらき、前記結合分子
または仲介物質は他の活性化基１例えば、カーポジイミ
ドをＭＩＭＳの表面上にもっていくことができる。
ここでアルデヒド官能は適当な条件下に結合分子または
他の結合分子のための結合の仲介物質、例えば、ＣＮＢ
Ｒ、ジアゾ化合物、チオール化合物またはスペーサー（
ｓｐａｃｅｒ）分子として単にはたらき、前記結合分子
または仲介物質は他の活性化基１例えば、カーポジイミ
ドをＭＩＭＳの表面上にもっていくことができる。
化学構造が特定のマトリックス蛋白質、使用する架橋剤
、含める磁気成分および表面上の官能基により決定され
るＭＩＭＳはさらに好ましい。
、含める磁気成分および表面上の官能基により決定され
るＭＩＭＳはさらに好ましい。
水、水性緩衝液、例えば、０．１モルのトリス（ｔ ｒ
ｉ ｓ） 、 ０ 、１％ル（７）グリシ７．０．１
％ルの酢酸塩、０．１モルのクエン融塩および０゜１モ
ルのリン酸塩中で、およびとくにまた６モルのグアニジ
ン−ＭＣＩ、４モルの尿素および３モルのチオシアネー
ト中で、ならびにアルコール性溶媒、アセトン中である
いはトリトン（ＴｒｉｔＯｎ■）またはツイーン（Ｔｗ
ｅｅｎ■）の存在下に安定であるＭＩＭＳは、また、好
ましい、対照的に、それらはプロテアーゼの存在下に安
定ではない。
ｉ ｓ） 、 ０ 、１％ル（７）グリシ７．０．１
％ルの酢酸塩、０．１モルのクエン融塩および０゜１モ
ルのリン酸塩中で、およびとくにまた６モルのグアニジ
ン−ＭＣＩ、４モルの尿素および３モルのチオシアネー
ト中で、ならびにアルコール性溶媒、アセトン中である
いはトリトン（ＴｒｉｔＯｎ■）またはツイーン（Ｔｗ
ｅｅｎ■）の存在下に安定であるＭＩＭＳは、また、好
ましい、対照的に、それらはプロテアーゼの存在下に安
定ではない。
本発明は、また、前述の緩衝液中で２．５〜９のｐＨ範
囲にわたり安定でありかつ前述の緩衝液中で膨潤しない
磁気微小球に関する。
囲にわたり安定でありかつ前述の緩衝液中で膨潤しない
磁気微小球に関する。
アミノ基を支持する分子、例えば、とくに蛋白質Ａ、ア
ビジン、レクチン類、免疫グロブリン類、例えば、抗グ
ロブリン類、および酵素類（プロテアーゼを除外する）
をその上に共有結合して有する官能アルデヒド基含有Ｍ
ＩＭＳはさらに好ましい０本発明は、０．１モルのＮａ
ＨＣＯ３（＋０．５％ルのＮａｃｌ、ｐＨ８〜９）ｆ）
存在下の共有結合の反応後、アルデヒドと結合した分子
のアミノ基との間で形成したシック塩基を１例えば、ホ
ウ水素化ナトリウムで還元して第二アミンを生成し、そ
して残る遊離アルデヒド基をＯＨ基に還元する。
ビジン、レクチン類、免疫グロブリン類、例えば、抗グ
ロブリン類、および酵素類（プロテアーゼを除外する）
をその上に共有結合して有する官能アルデヒド基含有Ｍ
ＩＭＳはさらに好ましい０本発明は、０．１モルのＮａ
ＨＣＯ３（＋０．５％ルのＮａｃｌ、ｐＨ８〜９）ｆ）
存在下の共有結合の反応後、アルデヒドと結合した分子
のアミノ基との間で形成したシック塩基を１例えば、ホ
ウ水素化ナトリウムで還元して第二アミンを生成し、そ
して残る遊離アルデヒド基をＯＨ基に還元する。
このようにしてＭＩＭＳは親水性を獲得し、そして、と
くに水性溶媒中に、古島に懸濁することができる。
くに水性溶媒中に、古島に懸濁することができる。
本発明によるＭＩＭＳは、室温において活性状態で乾燥
かつ無水で貯蔵することができる。蛋白質分子を結合し
た後、凍結乾燥した状態または０．０２〜０．１％のＮ
ａＮ３の存在下の緩衝液中の３〜６℃における貯蔵は推
奨できる。
かつ無水で貯蔵することができる。蛋白質分子を結合し
た後、凍結乾燥した状態または０．０２〜０．１％のＮ
ａＮ３の存在下の緩衝液中の３〜６℃における貯蔵は推
奨できる。
本発明によるＭＩＭＳは生物学的に完全に分解可能であ
り、そして生きている細胞に対して毒性ではない。
り、そして生きている細胞に対して毒性ではない。
したがって、本発明は、さらに、ａ）磁気成分をマトリ
ックス蛋白質と混合し、そしてコアセルベートを前記混
合物から形成し、ｂ）前記コアセルベートを凝固し、そ
してｃ）適当な二官能性または多官能性の架橋剤で架橋
することを特徴とする、凝固したマトリックス蛋白質中
に混入された磁気成分から成り、前記マトリックス蛋白
質の表面が官能基により生物学的粒子の結合のために活
性化されている磁気微小球（ＭＩＭＳ）を製造する方法
に関する。
ックス蛋白質と混合し、そしてコアセルベートを前記混
合物から形成し、ｂ）前記コアセルベートを凝固し、そ
してｃ）適当な二官能性または多官能性の架橋剤で架橋
することを特徴とする、凝固したマトリックス蛋白質中
に混入された磁気成分から成り、前記マトリックス蛋白
質の表面が官能基により生物学的粒子の結合のために活
性化されている磁気微小球（ＭＩＭＳ）を製造する方法
に関する。
ＭＩＭＳは、好ましくは、簡単な方法の工程で特定の所
望の大きさく０．１”ＩＯｐｍの範囲）で非常に均質な
（７０〜８０％の均質度の）モノ分散した形＠（ｍｏｎ
ｏｄｉｓｐｅｒｓｅ ｆ。
望の大きさく０．１”ＩＯｐｍの範囲）で非常に均質な
（７０〜８０％の均質度の）モノ分散した形＠（ｍｏｎ
ｏｄｉｓｐｅｒｓｅ ｆ。
ｒｍ）で調製される。この方法によると、物理的方法の
工程と化学的方法の工程との決定的な直接的組み合わせ
により、ＭＩＭＳの安定化および活性化を同時に達成す
ることができる。
工程と化学的方法の工程との決定的な直接的組み合わせ
により、ＭＩＭＳの安定化および活性化を同時に達成す
ることができる。
本発明は、好ましくは、また、植物油の代わりに（下に
示すように）、他の適当な水混和性溶媒を使用するアル
デヒド活性化ＭＩＭＳの製造に関する。
示すように）、他の適当な水混和性溶媒を使用するアル
デヒド活性化ＭＩＭＳの製造に関する。
アルデヒド活性化ＭＩＭＳは、超音波またはホモジナイ
ザーを使用する乳化により、あるいは適当なジェットに
よる圧縮空気を使用するスプレー（ｓｐｒａｙ）技術に
より調製することができる。
ザーを使用する乳化により、あるいは適当なジェットに
よる圧縮空気を使用するスプレー（ｓｐｒａｙ）技術に
より調製することができる。
乳化生成物が熱油中に流れで供給されないアルデヒド活
性化ＭＩＭＳを調製するために、熱油の上または中に適
当なジェットを経て圧縮空気または加圧Ｎ２を使用する
噴霧（ａｔ ｏｍｉ ｚ ｉ ｎｇ）技術を用いること
も可能である。
性化ＭＩＭＳを調製するために、熱油の上または中に適
当なジェットを経て圧縮空気または加圧Ｎ２を使用する
噴霧（ａｔ ｏｍｉ ｚ ｉ ｎｇ）技術を用いること
も可能である。
適当な室内で、前述のように、乳化物が噴霧され、前記
室内でＭＩＭＳが熱空気中で凝縮および凝固するアルデ
ヒド活性化ＭＩＭＳの調製も可能である。
室内でＭＩＭＳが熱空気中で凝縮および凝固するアルデ
ヒド活性化ＭＩＭＳの調製も可能である。
マトリックス蛋白質は５０℃〜１８０℃、好ましくは１
００℃〜１５０℃において凝固される。
００℃〜１５０℃において凝固される。
ＭＩＭＳを油から清浄するためにアセトンを使用するこ
とができる。
とができる。
アルデヒド活性化ＭＩＭＳの調製において、無水エタノ
ールの代わりに、他の適当な水混和性溶媒、例えば、ア
セトンをアルデヒド活性化に有利に使用することもでき
る。
ールの代わりに、他の適当な水混和性溶媒、例えば、ア
セトンをアルデヒド活性化に有利に使用することもでき
る。
本発明による磁気微小球（ＭＩＭＳ）の調製についての
−論 この実施例は、目的物がアルデヒド活性化ＭＩＭＳであ
る「乳化物／凝固／架橋」によるＭＩＭＳの調製のため
の一般的概論に関する。マトリックス蛋白質および磁化
可能な成分を、１００％の合計乾燥重量に基づいて、１
０：１〜１：１０、通常５：１−１：５、好ましくは３
：ｌ〜１：３の重量比で、非常に少量の２回蒸留した水
（１〜２．０００終ｌ、通常ｉｏｏ〜５００ルｌ）の中
に溶解または懸濁させ、そしてこの混合物を定められた
過剰容量の水不混和性液体（植物油の使用はここで有利
であることが明らかにされた）中でかつとくに１０〜４
０℃、とくに２０〜２５℃において１〜３０分間、通常
１０分間高速攪拌により均質化する。油の過剰容量はｌ
Ｏ：ｌ−１０００： １ （ｙ／ｖ）の範囲である。適
当な乳化剤、例えば、スパン ８０（Ｓｐａｎ ８０
■） （ＨＬＢ４．３＜５）、は一般に有利であると
見なされる。このホモジネートを乳化物に仕上げる。乳
化法１例えば、定められた強度１０〜５００Ｗ、通常１
００〜１５０Ｗにおいて、パルス化されたまたは連続の
定められた期間１〜１０分の超音波処理はとくに有利で
あることが明らかにされた。
−論 この実施例は、目的物がアルデヒド活性化ＭＩＭＳであ
る「乳化物／凝固／架橋」によるＭＩＭＳの調製のため
の一般的概論に関する。マトリックス蛋白質および磁化
可能な成分を、１００％の合計乾燥重量に基づいて、１
０：１〜１：１０、通常５：１−１：５、好ましくは３
：ｌ〜１：３の重量比で、非常に少量の２回蒸留した水
（１〜２．０００終ｌ、通常ｉｏｏ〜５００ルｌ）の中
に溶解または懸濁させ、そしてこの混合物を定められた
過剰容量の水不混和性液体（植物油の使用はここで有利
であることが明らかにされた）中でかつとくに１０〜４
０℃、とくに２０〜２５℃において１〜３０分間、通常
１０分間高速攪拌により均質化する。油の過剰容量はｌ
Ｏ：ｌ−１０００： １ （ｙ／ｖ）の範囲である。適
当な乳化剤、例えば、スパン ８０（Ｓｐａｎ ８０
■） （ＨＬＢ４．３＜５）、は一般に有利であると
見なされる。このホモジネートを乳化物に仕上げる。乳
化法１例えば、定められた強度１０〜５００Ｗ、通常１
００〜１５０Ｗにおいて、パルス化されたまたは連続の
定められた期間１〜１０分の超音波処理はとくに有利で
あることが明らかにされた。
これにより乳化物の状態はそれ自体調節されて、マトリ
ックス物質および磁化可能な成分を前述の比で含有する
、はぼ同一大きさの非常に小さい水性コアセルベートが
形成される。乳化物のデミキシング（ｄｅｍｉｘｉｎｇ
）を防止するために、それゆえそれを安定化するために
、乳化生成物を有利には０〜１０℃、とくに有利には０
〜４℃に冷却する。この乳化生成物の流れを特別の注入
系１００〜３００ｍ１の強く加熱された（１００〜１５
０℃）の油、例えば、植物油の中に供給する。これによ
りマトリックス蛋白質はコアセルベートが凝固して出現
しく溶媒の水の蒸発）、このコアセルベートは磁化可能
な成分を含み、ここで対応する微小球が形成され、そし
である期間、通常５〜１５分、有利には１０分間の加熱
の影響下に予備安定化する。これらのＭＩＭＳを油から
数回の洗浄により清浄し、ここで無水ジエチルエーテル
は有利であることが明らかにされた、そして濃縮乾固し
く室温においてすべてのエーテルを蒸発させることによ
り）そして秤量する。これらのＭＩＭＳをある比、すな
わち、１０〜５０ｍｇ７２０ｍ１ｃ７）無水エタノール
（ｗ／ｖ）中に、適当な可溶化剤１例えば、ツイーン
８０（Ｔｗｅｅｎ ８０■）（ＨＬＢ １５〜１０
）（７）存在下に懸濁させる。ある量、すなわち、１〜
２５％（Ｖ／Ｖ）のジアルデヒド、とくにグルタルアル
デヒドをこのような懸濁液に添加し、そしてＭＩＭＳと
アルデヒドとの間の反応を１２〜２４時間おだやかに攪
拌することによって実施する。
ックス物質および磁化可能な成分を前述の比で含有する
、はぼ同一大きさの非常に小さい水性コアセルベートが
形成される。乳化物のデミキシング（ｄｅｍｉｘｉｎｇ
）を防止するために、それゆえそれを安定化するために
、乳化生成物を有利には０〜１０℃、とくに有利には０
〜４℃に冷却する。この乳化生成物の流れを特別の注入
系１００〜３００ｍ１の強く加熱された（１００〜１５
０℃）の油、例えば、植物油の中に供給する。これによ
りマトリックス蛋白質はコアセルベートが凝固して出現
しく溶媒の水の蒸発）、このコアセルベートは磁化可能
な成分を含み、ここで対応する微小球が形成され、そし
である期間、通常５〜１５分、有利には１０分間の加熱
の影響下に予備安定化する。これらのＭＩＭＳを油から
数回の洗浄により清浄し、ここで無水ジエチルエーテル
は有利であることが明らかにされた、そして濃縮乾固し
く室温においてすべてのエーテルを蒸発させることによ
り）そして秤量する。これらのＭＩＭＳをある比、すな
わち、１０〜５０ｍｇ７２０ｍ１ｃ７）無水エタノール
（ｗ／ｖ）中に、適当な可溶化剤１例えば、ツイーン
８０（Ｔｗｅｅｎ ８０■）（ＨＬＢ １５〜１０
）（７）存在下に懸濁させる。ある量、すなわち、１〜
２５％（Ｖ／Ｖ）のジアルデヒド、とくにグルタルアル
デヒドをこのような懸濁液に添加し、そしてＭＩＭＳと
アルデヒドとの間の反応を１２〜２４時間おだやかに攪
拌することによって実施する。
この反応において、驚くべきことには、凝固したマトリ
ックス蛋白質の架橋によるＭＩＭＳのマトリックスの最
後の物理的安定化、および架橋剤のジアルデヒドの特性
によるＭＩＭＳ表面における官能性アルデヒド基の暴露
の両者が実施される。この反応はＭＩＭＳを無水エタノ
ールでおよび２回蒸留した水でアルコールの比率を下降
させて磁石について洗浄することにより完結させる。
ックス蛋白質の架橋によるＭＩＭＳのマトリックスの最
後の物理的安定化、および架橋剤のジアルデヒドの特性
によるＭＩＭＳ表面における官能性アルデヒド基の暴露
の両者が実施される。この反応はＭＩＭＳを無水エタノ
ールでおよび２回蒸留した水でアルコールの比率を下降
させて磁石について洗浄することにより完結させる。
本発明による磁気微小球（ＭＩＭＳ）の調製のマトリッ
クス蛋白質として７．６ｍｇの牛血清アルブミンを２５
０ＪＬｌの上流水中に溶解し、この溶液を１８％の鉄酸
化物を含有する１００ｍｇ＋７） ７ ｘ口流体（Ｆｅ
ｒｒｏｆｌｕｉｄ）反応溶液［フェロフルイッディクス
・コーポレーション（Ｆｅｒｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ
Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、ニュー・ハンプシャイア−
］に添加する。この混合物を２５ｍ１の植物油に添加し
、その間高速度で攪拌する（１２００ｒｐｍ、２分間）
０次いで、形成した乳化物を２００Ｏｒｐｍで５分間さ
らに攪拌することによって均質化する。このホモジネー
トを４℃に冷却し、ロゼツト容器（ｒｏｓｅｔｔｅ
ｖｅｓｓｅｌ）（容量＝２０〜４０ｍ１）に添加し、こ
れを水浴中で冷却し、そして超音波［２×２分、１×１
分、２２ミクａン（Ｓｏｎｉｐｒｅｐ １５０．３／
８インチのチタン管）］で処理することにより微細な乳
化物にする。この乳化物を２５ｍ１の注射器で取り、そ
してカニユーレ（０，９Ｘ４０ｍｍ）を通して強く加熱
され攪拌された油（１２０℃、１５０ｍ１）の中に３０
〜６０秒にわたって均一な圧力の下に注入する０次いで
、この混合物をさらに１０分間攪拌し、ここで微小球は
熱の下に予備安定化される。遠心管（体積：５０ｍ１）
にこのようにして形成された混合物を半分溝たし、４℃
に冷却する０次いで、同一体積の無水ジエチルエーテル
をこの組成物に添加し、それと混合し、そして遠心（２
０分、２０００Ｘｇ）により分離する０次いで、上澄み
液をデカンテーションし、そして微小球（ベレット）を
ガラス容器内で一緒にする０次いで、植物油を除去する
ために、微小球をジエチルエーテルでさらに５回洗浄し
、空気乾燥し、秤量する。（次いで、ＭＩＭＳを貯蔵す
ることができる）。
クス蛋白質として７．６ｍｇの牛血清アルブミンを２５
０ＪＬｌの上流水中に溶解し、この溶液を１８％の鉄酸
化物を含有する１００ｍｇ＋７） ７ ｘ口流体（Ｆｅ
ｒｒｏｆｌｕｉｄ）反応溶液［フェロフルイッディクス
・コーポレーション（Ｆｅｒｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ
Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、ニュー・ハンプシャイア−
］に添加する。この混合物を２５ｍ１の植物油に添加し
、その間高速度で攪拌する（１２００ｒｐｍ、２分間）
０次いで、形成した乳化物を２００Ｏｒｐｍで５分間さ
らに攪拌することによって均質化する。このホモジネー
トを４℃に冷却し、ロゼツト容器（ｒｏｓｅｔｔｅ
ｖｅｓｓｅｌ）（容量＝２０〜４０ｍ１）に添加し、こ
れを水浴中で冷却し、そして超音波［２×２分、１×１
分、２２ミクａン（Ｓｏｎｉｐｒｅｐ １５０．３／
８インチのチタン管）］で処理することにより微細な乳
化物にする。この乳化物を２５ｍ１の注射器で取り、そ
してカニユーレ（０，９Ｘ４０ｍｍ）を通して強く加熱
され攪拌された油（１２０℃、１５０ｍ１）の中に３０
〜６０秒にわたって均一な圧力の下に注入する０次いで
、この混合物をさらに１０分間攪拌し、ここで微小球は
熱の下に予備安定化される。遠心管（体積：５０ｍ１）
にこのようにして形成された混合物を半分溝たし、４℃
に冷却する０次いで、同一体積の無水ジエチルエーテル
をこの組成物に添加し、それと混合し、そして遠心（２
０分、２０００Ｘｇ）により分離する０次いで、上澄み
液をデカンテーションし、そして微小球（ベレット）を
ガラス容器内で一緒にする０次いで、植物油を除去する
ために、微小球をジエチルエーテルでさらに５回洗浄し
、空気乾燥し、秤量する。（次いで、ＭＩＭＳを貯蔵す
ることができる）。
安定化および活性化：１０ｍｇのＭＩＭＳを１０ ｍ
ｌのアセトン（変法ａ）または１０ｍ１のエタノール（
変法ｂ）の中に取り、そして１０〜３０秒間１５ミクロ
ンで超音波処理してＭＩＭＳを溶媒中に懸濁させる０次
いで、８ｍｌの問題の溶媒および２ｍｌのグルタルアル
デヒド溶液を添加して１反応混合物中のグルタルアルデ
ヒドの最終濃度を２５％とする。
ｌのアセトン（変法ａ）または１０ｍ１のエタノール（
変法ｂ）の中に取り、そして１０〜３０秒間１５ミクロ
ンで超音波処理してＭＩＭＳを溶媒中に懸濁させる０次
いで、８ｍｌの問題の溶媒および２ｍｌのグルタルアル
デヒド溶液を添加して１反応混合物中のグルタルアルデ
ヒドの最終濃度を２５％とする。
この反応を室温においてアセトン中で３０分間またはエ
タノール中で一夜（１８時間）水平の揺動運動の下に実
施する０次いで、微小球を５ｍｌの次の溶液の各々を用
いて次の清浄手順にかける： ３Ｘア七トン ２×アセトン：蒸留水中の０．１％のツイーン８０＝４
：１ ２Ｘアセトン：蒸留水中の０．１％のライ−７８０＝ｌ
：１ ２×アセトン：蒸留水中の０．１％のツイーン８０＝１
：２ ・ ２×蒸留水中の０．１％のツイーン３×リン酸塩
緩衝塩溶液（ｓａｌｉｎｅ ｓ。
タノール中で一夜（１８時間）水平の揺動運動の下に実
施する０次いで、微小球を５ｍｌの次の溶液の各々を用
いて次の清浄手順にかける： ３Ｘア七トン ２×アセトン：蒸留水中の０．１％のツイーン８０＝４
：１ ２Ｘアセトン：蒸留水中の０．１％のライ−７８０＝ｌ
：１ ２×アセトン：蒸留水中の０．１％のツイーン８０＝１
：２ ・ ２×蒸留水中の０．１％のツイーン３×リン酸塩
緩衝塩溶液（ｓａｌｉｎｅ ｓ。
１ｕｔｉｏｎ）。
このＭＩＭＳをこの洗浄過程の間に磁石に対して固定す
る。アセトンの代わりに、エタノールを活性化の変法す
の場合において使用する０次いで、微小球はリン酸塩緩
衝塩溶液（ｓａｌｉｎｅｓｏｌｕｔｉｏｎ）（ｐＨ７，
２）中の０．１％の７ジン中であるいは凍結乾燥した状
態で、安定性を損失しないで、貯蔵されるであろう。
る。アセトンの代わりに、エタノールを活性化の変法す
の場合において使用する０次いで、微小球はリン酸塩緩
衝塩溶液（ｓａｌｉｎｅｓｏｌｕｔｉｏｎ）（ｐＨ７，
２）中の０．１％の７ジン中であるいは凍結乾燥した状
態で、安定性を損失しないで、貯蔵されるであろう。
磁気機ハ球の使用例
本発明によるＭＩＭＳを１種々の分離実験における磁気
細胞の分離のための分離試薬としての適当性について試
験した。
細胞の分離のための分離試薬としての適当性について試
験した。
蛋白質Ａを配位子としてグルタルアルデヒド活性化ＭＩ
ＭＳに最初の共有結合し、次いでモノクローナル抗−Ｈ
ＬＡ−ＢＷ６−抗体をＭＩＭＳにこの配位子を介して結
合させた。これらのＭＩＭＳを使用してモデルの細胞混
合物を分離した。これらの細胞混合物は健康な血液共与
者からの分別末梢血液リンパ球から得られ、とくに生理
学的に均質であり、ＨＬＡ組織の型ＢＷ４およびＢＷ６
で異るだけである。
ＭＳに最初の共有結合し、次いでモノクローナル抗−Ｈ
ＬＡ−ＢＷ６−抗体をＭＩＭＳにこの配位子を介して結
合させた。これらのＭＩＭＳを使用してモデルの細胞混
合物を分離した。これらの細胞混合物は健康な血液共与
者からの分別末梢血液リンパ球から得られ、とくに生理
学的に均質であり、ＨＬＡ組織の型ＢＷ４およびＢＷ６
で異るだけである。
ａ）細胞の調製
５〜１０ｍ１の血液を抜出し、そして１〜３滴のりクエ
ミン（Ｌｉｑｕｅｍｉｎ）などを供給したガラス管に導
入した後、試料をＰＢＳ、ｐＨ７，２（商業的に入手可
能な組成物）でｌ：ｌに希釈する。各場合において、４
ｍｌのこの血液／緩衝液混合物を３ ｍ ｌのリンパ球
分離媒質（密度１．０７７ｇ／ｌ）の上に層状に導入し
、そしてこの混合物を室温で４０分間６００ｇで遠心す
る０次いで、分離層に隣接する細胞を取り出し、集め、
ＰＢＳ （８，０００ｍｇ／ｌのＮａＣ１，６００ｍｇ
／ｌのＫＣＩ、１，４４０ｍｇ／ｌのＮａ２ ＨＰＯ４
ｅＨ２０および２００ｍｇ／１（７）ＫＨ２ＰＯ４、ｐ
Ｈ７，２〜７．３）で３回洗浄し、そして６％のＢＳＡ
（グロブリンおよび脂肪酸を含有しない）を含有する
ＲＰＭＩ１６４０媒質（組成について表１を参照）中に
取る。細胞を計数し［ネウバウエル室（Ｎｅｕｂａｕｅ
ｒ Ｃｈａｍｂｅｒ）そして生存能力を決定した（ト
リパン青試験）後、各場合において、種々の血液共与者
からの１Ｘ１０６のＢＷＡ＋リンパ球およびＢＷＳ十リ
ンパ球を混合物し、そして１ｍｇのＭＩＭＳとともに室
温（２２℃）において３０分間一定に振盪しながらイン
キュベーションする０次いで、ＭＩＭＳと結合した細胞
の百分率を決定する。
ミン（Ｌｉｑｕｅｍｉｎ）などを供給したガラス管に導
入した後、試料をＰＢＳ、ｐＨ７，２（商業的に入手可
能な組成物）でｌ：ｌに希釈する。各場合において、４
ｍｌのこの血液／緩衝液混合物を３ ｍ ｌのリンパ球
分離媒質（密度１．０７７ｇ／ｌ）の上に層状に導入し
、そしてこの混合物を室温で４０分間６００ｇで遠心す
る０次いで、分離層に隣接する細胞を取り出し、集め、
ＰＢＳ （８，０００ｍｇ／ｌのＮａＣ１，６００ｍｇ
／ｌのＫＣＩ、１，４４０ｍｇ／ｌのＮａ２ ＨＰＯ４
ｅＨ２０および２００ｍｇ／１（７）ＫＨ２ＰＯ４、ｐ
Ｈ７，２〜７．３）で３回洗浄し、そして６％のＢＳＡ
（グロブリンおよび脂肪酸を含有しない）を含有する
ＲＰＭＩ１６４０媒質（組成について表１を参照）中に
取る。細胞を計数し［ネウバウエル室（Ｎｅｕｂａｕｅ
ｒ Ｃｈａｍｂｅｒ）そして生存能力を決定した（ト
リパン青試験）後、各場合において、種々の血液共与者
からの１Ｘ１０６のＢＷＡ＋リンパ球およびＢＷＳ十リ
ンパ球を混合物し、そして１ｍｇのＭＩＭＳとともに室
温（２２℃）において３０分間一定に振盪しながらイン
キュベーションする０次いで、ＭＩＭＳと結合した細胞
の百分率を決定する。
全体の細胞懸濁液を分離装置に試料ループを経て導入す
る。直列の３つの分離磁石をスイッチオンした後、細胞
懸濁液をぜん動ポンプにより連続の「流れを含まない」
系で０ 、４ ｍ １７分の流速で磁石の上を通過させ
る。
る。直列の３つの分離磁石をスイッチオンした後、細胞
懸濁液をぜん動ポンプにより連続の「流れを含まない」
系で０ 、４ ｍ １７分の流速で磁石の上を通過させ
る。
分離を室温において実施する０分離時間は１０〜２０分
である。２倍液体容量の分離単位を溶離分画として集め
る０次いで、磁石をスイッチオフし、そして磁気分画を
系から前記ポンプによるパルス化洗節により系から単離
する。
である。２倍液体容量の分離単位を溶離分画として集め
る０次いで、磁石をスイッチオフし、そして磁気分画を
系から前記ポンプによるパルス化洗節により系から単離
する。
Ｃ）このようなランダム試料研究の代表的結果ｃ）１）
細胞の調製後の生存能力の研究：生存能力通常９５〜１
００％。
細胞の調製後の生存能力の研究：生存能力通常９５〜１
００％。
ｃ）２）ＭＩＭＳのリンパ球への結合：ＢＷＡ＋リンパ
球およびＢＷＳ＋リンパ球に関してｌ：ｌ混合物におい
て、３０分のインキュベーション後、４５〜５２％の細
胞がＭＩＭＳに結合し、そして４８〜５５％の細胞が結
合しないことがわかった。
球およびＢＷＳ＋リンパ球に関してｌ：ｌ混合物におい
て、３０分のインキュベーション後、４５〜５２％の細
胞がＭＩＭＳに結合し、そして４８〜５５％の細胞が結
合しないことがわかった。
ｃ）３）磁場中に分離後の分画の研究：ただ１回の通過
後の溶離液の純度： 溶離液中の細胞のうちで、細胞の０〜４％はＭＩＭＳに
結合することが通常発見された。
後の溶離液の純度： 溶離液中の細胞のうちで、細胞の０〜４％はＭＩＭＳに
結合することが通常発見された。
Ｃ）４）ただ１回の通過後の磁気分画の純度：磁気分画
中の細胞のうちで、細胞の５〜１５％はＭＩＭＳに結合
することが通常発見された。
中の細胞のうちで、細胞の５〜１５％はＭＩＭＳに結合
することが通常発見された。
ｃ）５）系からの細胞の回収：
使用５ｉｔａ細胞（２Ｘ１０Ｇ細胞）のうちで、９５〜
１００％が通常回収された。
１００％が通常回収された。
全体の系の分離容量は、抗体分子の生物特異性および磁
場の物理的効果により主として決定され、こうして細胞
混合物の磁場の単一通過で、溶離液分画の領域において
９６〜１００％でありかつ磁場の領域において８５〜９
５％である。第２の通過は可能であり、そしである目的
には原理的には望ましい、細胞の生存能力はめったに損
傷を受けないので、これは分離後なお９２〜９９％であ
り、これは非常におだやかな分離方法であることを示す
、この方法は分析的におよび調製的に両者の目的で使用
できることが明らかである。
場の物理的効果により主として決定され、こうして細胞
混合物の磁場の単一通過で、溶離液分画の領域において
９６〜１００％でありかつ磁場の領域において８５〜９
５％である。第２の通過は可能であり、そしである目的
には原理的には望ましい、細胞の生存能力はめったに損
傷を受けないので、これは分離後なお９２〜９９％であ
り、これは非常におだやかな分離方法であることを示す
、この方法は分析的におよび調製的に両者の目的で使用
できることが明らかである。
磁 小球の
本発明によるＭＩＭＳは、粒子を特異的表面構造体を介
して、例えば、抗体の助けを借りて血清学的に、あるい
はレクチン類、酵素類またはそしての適当な分子の助け
を借りて生物学的に分化（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ １ａｔ
ｅ）される場合、生物学的粒子、とくに細胞、を不均質
混合物、とくに天然に産出するおよび／または人工混合
物（例えば、動物細胞または植物細胞、形質転換および
非形質転換の菌・カビ（ｆｕｎｇｕｓ）細胞およびバク
テリア細胞の混合物からの混合物）から分離するために
使用することができる。
して、例えば、抗体の助けを借りて血清学的に、あるい
はレクチン類、酵素類またはそしての適当な分子の助け
を借りて生物学的に分化（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ １ａｔ
ｅ）される場合、生物学的粒子、とくに細胞、を不均質
混合物、とくに天然に産出するおよび／または人工混合
物（例えば、動物細胞または植物細胞、形質転換および
非形質転換の菌・カビ（ｆｕｎｇｕｓ）細胞およびバク
テリア細胞の混合物からの混合物）から分離するために
使用することができる。
本発明によるＭＩＭＳを、さらに、細胞断片。
とくに受容体支持膜構成成分を、細胞ホモジネートから
抗体類、レクチン類または細胞成分に向けられた他の分
子の助けを借りて単離するために使用することができる
。
抗体類、レクチン類または細胞成分に向けられた他の分
子の助けを借りて単離するために使用することができる
。
本発明は、また、特定の分子を生産する培養細胞の急速
かつ経済的濃縮、および培養液体からのこれらの分子の
単離のためにＭＩＭＳを使用することに関する。
かつ経済的濃縮、および培養液体からのこれらの分子の
単離のためにＭＩＭＳを使用することに関する。
最後に１本発明は、また、蛋白質の結合後、蛋白質類、
ペプチド類および小さい分子（ハプテン類）を免疫化に
担体（アジュバント）として使用することができるＭＩ
ＭＳに関する。
ペプチド類および小さい分子（ハプテン類）を免疫化に
担体（アジュバント）として使用することができるＭＩ
ＭＳに関する。
１： ＲＭＰＩ １６４０培 の組アミノ酸類
ｍｇ／ｌ ビタミン類し−フルギニ
ン ２００．ＯＤ−ビオチンＬ−アスパラギ
ン−Ｈ２０５６，８２Ｃａ Ｄ（＋）−パントチネー
ト Ｌ−アスパラギン酸 ２０．０ 塩化コリン
Ｌ−システィン−２ＨＣ１６５，１７葉酸Ｌ−グルタミ
ン ３００．０ メソーイノシトールＬ
−グルタミン酸 ２０．０ ニコチンアミ
ドグリシン ｉｏ、ｏ ｐ−７
ミノ安息香酸Ｌ−ヒスジジン １５．０
ピリドキシン−ＨＣＩＬ−ヒドロキシプロリン
２０．０ リボフラビンＬ−インロイシン
５０．０ チアミン・ＨＣＩＬ−ロイシン
５０．０ ビタミン Ｂ１２Ｌ−リジン・
ＨＣＩ ４０．０Ｌ−メチオニン
１５．０他の物質 ０．２ ０（＋）−フコース・ ２２００．Ｏ０
，２５グルタチオン １．０３．０
フェノール レッド、 ５．３ａ １．０ ３５．０ 無機塩類 １．０ １、ＯＣａ（ＮＯ３）２ ・ １００．０Ｈ２Ｏ １、ＯＫＣＩ ４００．００．
２ Ｍｇ５Ｏ，・７Ｈ２０１００，０１、ＯＮａ
Ｃ１６０００，０ ０，００５Ｎａ２ＨＰＯ＜ ・ １００３．６Ｈ
２Ｏ ＮａＨＣＯ３２０００，０ ＬＬ（統：４”）： ＲＭＰＩ １８４０ 。
ｍｇ／ｌ ビタミン類し−フルギニ
ン ２００．ＯＤ−ビオチンＬ−アスパラギ
ン−Ｈ２０５６，８２Ｃａ Ｄ（＋）−パントチネー
ト Ｌ−アスパラギン酸 ２０．０ 塩化コリン
Ｌ−システィン−２ＨＣ１６５，１７葉酸Ｌ−グルタミ
ン ３００．０ メソーイノシトールＬ
−グルタミン酸 ２０．０ ニコチンアミ
ドグリシン ｉｏ、ｏ ｐ−７
ミノ安息香酸Ｌ−ヒスジジン １５．０
ピリドキシン−ＨＣＩＬ−ヒドロキシプロリン
２０．０ リボフラビンＬ−インロイシン
５０．０ チアミン・ＨＣＩＬ−ロイシン
５０．０ ビタミン Ｂ１２Ｌ−リジン・
ＨＣＩ ４０．０Ｌ−メチオニン
１５．０他の物質 ０．２ ０（＋）−フコース・ ２２００．Ｏ０
，２５グルタチオン １．０３．０
フェノール レッド、 ５．３ａ １．０ ３５．０ 無機塩類 １．０ １、ＯＣａ（ＮＯ３）２ ・ １００．０Ｈ２Ｏ １、ＯＫＣＩ ４００．００．
２ Ｍｇ５Ｏ，・７Ｈ２０１００，０１、ＯＮａ
Ｃ１６０００，０ ０，００５Ｎａ２ＨＰＯ＜ ・ １００３．６Ｈ
２Ｏ ＮａＨＣＯ３２０００，０ ＬＬ（統：４”）： ＲＭＰＩ １８４０ 。
Ｌ−フェニルアラニン １５．０Ｌ−プロリン
２０．０Ｌ−セリン
３０．０ Ｌ−スレオニン ２０．０Ｌ−トリプトフ
ァン ５・ＯＬ−チロシン
２Ｑ、ＯＬ−バリン ２０．０ ヤ７ト 」 ｐＨ７、２ 七
２０．０Ｌ−セリン
３０．０ Ｌ−スレオニン ２０．０Ｌ−トリプトフ
ァン ５・ＯＬ−チロシン
２Ｑ、ＯＬ−バリン ２０．０ ヤ７ト 」 ｐＨ７、２ 七
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、凝固したマトリックス蛋白質の表面が官能基により
生物学的粒子の結合のために活性化されていることを特
徴とする、凝固したマトリックス蛋白質中に混入された
、磁気成分から成る磁気微小球（ＭＩＭＳ）。 ２、マトリックス蛋白質が１種または２種以上の二官能
性または多官能性の架橋剤で架橋されていることを特徴
とする特許請求の範囲第１項記載の磁気微小球。 ３、マトリックス蛋白質の表面がアルデヒド基により活
性化されていることを特徴とする特許請求の範囲第１ま
たは２項記載の磁気微小球。 ４、アルデヒド官能または結合分子以外の結合基がマト
リックス蛋白質の表面にアルデヒド官能により結合され
ていることを特徴とする特許請求の範囲第３項記載の磁
気微小球。 ５、マトリックス蛋白質が架橋剤で架橋されており、前
記架橋剤は、ジメチルアジピミデート・２ＨＣｌ、ジメ
チルピメリミデート・２ＨＣｌ、ジメチルスベリミデー
ト・２ＨＣｌ、ジメチル３，３′−ジチオ−ビス−プロ
ピオンイミデート・２ＨＣｌ、２−イミノチオラン・Ｈ
Ｃｌ、ジスクシニミジルスベレート、ビス［２−（スク
シンイミドオキシカルボニルオキシ）エチル］スルホン
、ジスクシニミジルタートレート、ジチオビス（スクシ
ニミジルプロピオネート）、エチルグリコールビス（ス
クシニミジルスクシネート）、Ｎ−５−アジド−２−ニ
トロベンゾイルオキシスクシンイミド、ｐ−アジドフェ
ナシルブロミド、ｐ−アジドフェニルグリオキサール、
４−フルオロ−３−ニトロフェニルアジド、Ｎ−ヒドロ
キシスクシミジル４−アジドベンゾエート、Ｎ−ヒドロ
キシスクシニミジル−４−アジドサリチル酸、ｍ−マレ
イミドベンゾイルＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステ
ル、メチル４−アジドベンゾイミデート・ＨＣｌ、ｐ−
ニトロフェニル２−ジアゾ−３，３，３−トリフルオロ
プロピオネート、Ｎ−スクシニミジル−６−（４′−ア
ジド−２′−ニトロフェニルアミド）ヘキサノエート、
スクシニミジル４−（Ｎ−マレイミド−メチル）シクロ
ヘキサン−１−カルボキシレート、スクシニミジル４−
（ｐ−マレイミドフェニル）ブチレート、Ｎ−（４−ア
ジドフェニルチオ）フタルイミド、エチル−４−アジド
フェニル１，４−ジチオブチルイミデート・ＨＣｌ、Ｎ
−スクシニミジル（４−アジドフェニル−ジチオ）プロ
ピオネート、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベ
ンゼン、４，４′−ジフルオロ−３，３′−ジニトロジ
フェニルスルホン、４，４′−ジイソチオシアノ−２，
２′−ジスルホン酸、Ｎ−スクシニミジル３−（２−ピ
リジルジチオ）プロピオネート、４，４′−ジチオビス
フェニルアジドおよびエリスリトールビスカーボネート
から成る群より選択されることを特徴とする特許請求の
範囲第１または２項記載の磁気微小球。 ６、前記マトリックス蛋白質が球状の蛋白質、とくにア
ルブミンまたはオヴァルブミンであることを特徴とする
特許請求の範囲第１〜５項のいずれかに記載の磁気微小
球。 ７、磁気微小球が鉄および／またはニッケルおよび／ま
たはコバルトまたはこれらの元素の化合物または合金か
ら成ることを特徴とすることを特徴とする特許請求の範
囲第１〜６項のいずれかに記載の磁気微小球。 ８、架橋剤がグルタルアルデヒドであり、そしてマトリ
ックス蛋白質の表面上の官能基がこの架橋剤から生ずる
ことを特徴とする特許請求の範囲第３または４項記載の
磁気微小球。 ９、磁気微小球がそれらのマトリックス表面上の官能基
を介して生物学的粒子に結合していることを特徴とする
特許請求の範囲第１〜８項のいずれかに記載の磁気微小
球。 １０、磁気微小球が天然に産出する細胞または人工細胞
に結合していることを特徴とする特許請求の範囲第１〜
９項のいずれかに記載の磁気微小球。 １１、磁気微小球が細胞断片に結合していることを特徴
とする特許請求の範囲第１０項記載の磁気微小球。 １２、磁気微小球が抗体、レクチン類または細胞の成分
もしくは断片に対して向けられた他の構造体に結合して
いることを特徴とする特許請求の範囲第９項記載の磁気
微小球。 １３、磁気微小球が抗体、蛋白質類、ペプチド類または
ハプテン類に結合していることを特徴とする特許請求の
範囲第９項記載の磁気微小球。 １４、ａ）磁気成分をマトリックス蛋白質と混合し、そ
してコアセルベートを前記混合物から形成し、ｂ）前記
コアセルベートを凝固し、そしてｃ）適当な二官能性ま
たは多官能性の架橋剤で架橋することを特徴とする、凝
固したマトリックス蛋白質中に混入された磁気成分から
成り、前記マトリックス蛋白質の表面が官能基により生
物学的粒子の結合のために活性化されている磁気微小球
（ＭＩＭＳ）の製造方法。 １５、コアセルベートが、乳化により、あるいはスプレ
ーもしくは噴霧技術により調製されることを特徴とする
特許請求の範囲第１４項記載の方法。 １６、水混和性液体中のマトリックス蛋白質および磁気
成分の乳濁液を調製することを特徴とする特許請求の範
囲第１５項記載の方法。 １７、超音波、ホモジナイザー、高速ミキサーなどを乳
濁液の調製に使用することを特徴とする特許請求の範囲
第１５または１６項記載の方法。 １８、凝固を熱により実施することを特徴とする特許請
求の範囲第１６または１７項記載の方法。 １９、凝固を熱水不混和性液体中で実施することを特徴
とする特許請求の範囲第１５〜１８項のいずれかに記載
の方法。 ２０、凝固を５０℃〜１８０℃の熱油中で実施すること
を特徴とする特許請求の範囲第１５〜１９項のいずれか
に記載の方法。 ２１、架橋を適当な溶媒中で実施することを特徴とする
特許請求の範囲第１５〜２０項のいずれかに記載の方法
。 ２２、使用する架橋剤が、ジメチルアジピミデート・２
ＨＣｌ、ジメチルピメリミデート・２ＨＣｌ、ジメチル
スベリミデート・２ＨＣｌ、ジメチル３，３′−ジチオ
−ビス−プロピオンイミデート・２ＨＣｌ、２−イミノ
チオラン・ＨＣｌ、ジスクシニミジルスベレート、ビス
［２−（スクシンイミドオキシカルボニルオキシ）エチ
ル］スルホン、ジスクシニミジルタートレート、ジチオ
ビス（スクシニミジルプロピオネート）、エチルグリコ
ールビス（スクシニミジルスクシネート）、Ｎ−５−ア
ジド−２−ニトロベンゾイルオキシスクシンイミド、ｐ
−アジドフェナシルブロミド、ｐ−アジドフェニルグリ
オキサール、４−フルオロ−３−ニトロフェニルアジド
、Ｎ−ヒドロキシスクシミジル４−アジドベンゾエート
、Ｎ−ヒドロキシスクシニミジル−４−アジドサリチル
酸、ｍ−マレイミドベンゾイルＮ−ヒドロキシスクシン
イミドエステル、メチル４−アジドベンゾイミデート・
ＨＣｌ、ｐ−ニトロフェニル２−ジアゾ−３，３，３−
トリフルオロプロピオネート、Ｎ−スクシニミジル−６
−（４′−アジド−２′−ニトロフェニルアミド）ヘキ
サノエート、スクシニミジル４−（Ｎ−マレイミド−メ
チル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、スクシ
ニミジル４−（ｐ−マレイミドフェニル）ブチレート、
Ｎ−（４−アジドフェニルチオ）フタルイミド、エチル
−４−アジドフェニル１，４−ジチオブチルイミデート
・ＨＣｌ、Ｎ−スクシニミジル（４−アジドフェニル−
ジチオ）プロピオネート、１，５−ジフルオロ−２，４
−ジニトロベンゼン、４，４′−ジフルオロ−３，３′
−ジニトロジフェニルスルホン、４，４′−ジイソチオ
シアノ−２，２′−ジスルホン酸、Ｎ−スクシニミジル
３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート、４，４′
−ジチオビスフェニルアジドおよびエリスリトールビス
カーボネートから成る群より選択されることを特徴とす
る特許請求の範囲第１５〜２１項のいずれかに記載の方
法。 ２３、グルタルアルデヒドを架橋剤として使用し、そし
てエタノールを可溶化剤の存在下に溶媒として使用する
特許請求の範囲第１２または１９項記載の方法。 ２４、凝固したマトリックス蛋白質中に混入された磁気
成分から成り、前記マトリックス蛋白質の表面が官能基
により生物学的粒子の結合のために、生物学的粒子の結
合および／または分離のために活性化されている磁気微
小球（ＭＩＭＳ）の使用。 ２５、凝固したマトリックス蛋白質中に混入された磁気
成分から成り、前記マトリックス蛋白質の表面が官能基
により生物学的粒子の結合のために、天然または人工の
細胞の不均質混合物中の細胞および細胞断片の分離およ
び精製のために活性化されている磁気微小球（ＭＩＭＳ
）の使用。 ２６、凝固したマトリックス蛋白質中に混入された磁気
成分から成り、前記マトリックス蛋白質の表面が官能基
により生物学的粒子の結合のために、培養培地からの細
胞の単離のために活性化されている磁気微小球（ＭＩＭ
Ｓ）の使用。 ２７、凝固したマトリックス蛋白質中に混入された磁気
成分から成り、前記マトリックス蛋白質の表面が官能基
により生物学的粒子の結合のために、免疫化に使用でき
る蛋白質類、ペプチド類およびハプテン類のために活性
化されている磁気微小球（ＭＩＭＳ）の使用。 ２８、凝固したマトリックス蛋白質中に混入された磁気
成分から成り、前記マトリックス蛋白質の表面が官能基
により生物学的粒子の結合のために、抗体への結合のた
めに活性化されている磁気微小球（ＭＩＭＳ）の使用。 ２９、凝固したマトリックス蛋白質中に混入された磁気
成分から成り、前記マトリックス蛋白質の表面が官能基
により生物学的粒子の結合のために、レクチン類または
細胞成分に対して向けられた他の分子への結合のために
活性化されている磁気微小球（ＭＩＭＳ）の使用。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19843444939 DE3444939A1 (de) | 1984-12-08 | 1984-12-08 | Magnetische microspheres |
| DE3444939.6 | 1984-12-08 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61140523A true JPS61140523A (ja) | 1986-06-27 |
Family
ID=6252339
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60273527A Pending JPS61140523A (ja) | 1984-12-08 | 1985-12-06 | 磁気微小球、それらを製造する方法、それらの使用および生物学的粒子の単離 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0184710A3 (ja) |
| JP (1) | JPS61140523A (ja) |
| DE (1) | DE3444939A1 (ja) |
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|---|---|---|---|---|
| DE3522365A1 (de) * | 1985-06-22 | 1987-01-02 | Bayer Ag | Trenngeraet fuer magnetische partikel aus fluessiger phase |
| US4795698A (en) * | 1985-10-04 | 1989-01-03 | Immunicon Corporation | Magnetic-polymer particles |
| SE8704158L (sv) * | 1987-10-26 | 1989-04-27 | Carbomatrix Ab C O Ulf Schroed | Mikrosfaerer, foerfarande foer framstaellning daerav och anvaendning daerav |
| FR2624613B1 (fr) * | 1987-12-15 | 1994-08-26 | Toledano Jacques | Support microspherique de detection immuno-enzymatique, fluorescente, cheminumilescente ou radio-active de substances microdosees dans les milieux biologiques |
| AU634960B2 (en) * | 1988-03-28 | 1993-03-11 | Nano S Biotechnologie Gmbh | Process for immobilizing or depositing molecules or substances on a support |
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| DE10108857A1 (de) * | 2001-02-14 | 2002-09-19 | Hans-Dieter Hunger | Bioaktive und biokompatible Konjugate mit magnetischen Eigenschaften und Verfahren zu deren Herstellung |
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Family Cites Families (3)
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|---|---|---|---|---|
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| US4247406A (en) * | 1979-04-23 | 1981-01-27 | Widder Kenneth J | Intravascularly-administrable, magnetically-localizable biodegradable carrier |
-
1984
- 1984-12-08 DE DE19843444939 patent/DE3444939A1/de not_active Withdrawn
-
1985
- 1985-11-26 EP EP85114957A patent/EP0184710A3/de not_active Withdrawn
- 1985-12-06 JP JP60273527A patent/JPS61140523A/ja active Pending
Also Published As
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|---|---|
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| EP0184710A3 (de) | 1989-06-28 |
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