JPS6075285A - 安定化したアルコ−ルオキシダ−ゼ組成物 - Google Patents
安定化したアルコ−ルオキシダ−ゼ組成物Info
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- JPS6075285A JPS6075285A JP18321083A JP18321083A JPS6075285A JP S6075285 A JPS6075285 A JP S6075285A JP 18321083 A JP18321083 A JP 18321083A JP 18321083 A JP18321083 A JP 18321083A JP S6075285 A JPS6075285 A JP S6075285A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は安定化したアルコールオキシダーゼ組成物に関
する。アルコールオキシダーゼは、下記一般式（１） （ただしＲは水素原子または低級アルキル基を示ｊ） で表わされる反応を触媒する酵素で、釉々の生産菌が知
られている。このアルコールオキシダーゼは、例えはア
ルコール醗酵におけるアルコールの定量、飲食品中のア
ルコール濃度の測足、および＃所用としてのアルコール
濃度の測定などに利用でき、溶液状または粉末状として
供するか、またはアルコールオキシダーゼを固定化酵素
としてそのまま、または酵素センサーなどとして使用で
きるが、しかしアルコールオキシダーゼは不安定であり
、前記の諸口的の測定に供するにはなお実用上不適当な
ものであった。
する。アルコールオキシダーゼは、下記一般式（１） （ただしＲは水素原子または低級アルキル基を示ｊ） で表わされる反応を触媒する酵素で、釉々の生産菌が知
られている。このアルコールオキシダーゼは、例えはア
ルコール醗酵におけるアルコールの定量、飲食品中のア
ルコール濃度の測足、および＃所用としてのアルコール
濃度の測定などに利用でき、溶液状または粉末状として
供するか、またはアルコールオキシダーゼを固定化酵素
としてそのまま、または酵素センサーなどとして使用で
きるが、しかしアルコールオキシダーゼは不安定であり
、前記の諸口的の測定に供するにはなお実用上不適当な
ものであった。
従来、アルコールオキシダーゼを安定化する方法として
アジ化ナトリウムな重加する方法が知られている（特公
昭５８−２０２６７号公報）。しかしながら、−アルコ
ールオキシダーゼの安定化剤であるアジ化ナトリウムは
、アルコールオキシダーゼの酵素作用に対しては強い阻
害作用の呈するために反応系に加えることができない。
アジ化ナトリウムな重加する方法が知られている（特公
昭５８−２０２６７号公報）。しかしながら、−アルコ
ールオキシダーゼの安定化剤であるアジ化ナトリウムは
、アルコールオキシダーゼの酵素作用に対しては強い阻
害作用の呈するために反応系に加えることができない。
そのため保存時の組成物とアルコール測定時の反応組成
物とを別々にしなければならないので操作が煩雑であり
また測定中アルコールオキシダーゼが失活する可能性も
ある。
物とを別々にしなければならないので操作が煩雑であり
また測定中アルコールオキシダーゼが失活する可能性も
ある。
本発明は、上記諸欠点を解消する目的であって、アルコ
ールオキシダーゼの良好な安定剤としてハロゲン化アル
カリ金属塩、ハロゲン化二価金属塩、およびホルムアル
デヒド、メタノールなどの有機物質を見い出し、これら
の添加剤を含有する本発明の安定化したアルコールオキ
シダーゼ組成物は、測定のための反応液に用いても阻害
作用がないので組成物のままを使用づることができる。
ールオキシダーゼの良好な安定剤としてハロゲン化アル
カリ金属塩、ハロゲン化二価金属塩、およびホルムアル
デヒド、メタノールなどの有機物質を見い出し、これら
の添加剤を含有する本発明の安定化したアルコールオキ
シダーゼ組成物は、測定のための反応液に用いても阻害
作用がないので組成物のままを使用づることができる。
そのため測定中に失活１−ることもなく操作が容易であ
る。
る。
本発明のアルコールオキシダーゼ組成物は、ハロゲン化
金属塩およびハロゲン化二価金属塩からなる群から選ば
れた水溶性塩類の１種または２セに以上、またはホルム
アルデヒドおよびメタノールからなる右−１・からオー
ばれた有機物質の１独または２種以上と、アルコールオ
キシダーゼとを含有してなる安定化したアルコールオキ
シダーゼ組成物である。
金属塩およびハロゲン化二価金属塩からなる群から選ば
れた水溶性塩類の１種または２セに以上、またはホルム
アルデヒドおよびメタノールからなる右−１・からオー
ばれた有機物質の１独または２種以上と、アルコールオ
キシダーゼとを含有してなる安定化したアルコールオキ
シダーゼ組成物である。
本発記の組成物で使用するハロゲン化アルカリ金属塩と
しては、例えば塩化ナトリウム、塩化カリウムなどの塩
化物および臭化カリウム、臭化ナトリウムなどの臭化物
であり、ハロゲン化二価金属塩としては例えば塩化マン
ガン、ａ化カルシウム、およびこれらの臭化塩である。
しては、例えば塩化ナトリウム、塩化カリウムなどの塩
化物および臭化カリウム、臭化ナトリウムなどの臭化物
であり、ハロゲン化二価金属塩としては例えば塩化マン
ガン、ａ化カルシウム、およびこれらの臭化塩である。
また本発明で使用する有様物質としては、例えばホルム
アルデヒド、メタノールである。
アルデヒド、メタノールである。
また本発明で使用するハロゲン化アルカリ金わ１塩の使
用長としては、例えばアルコールオキシダーゼＯ，０Ｏ
ＩＵ〜１００ＯＵ渦り、一般に５μｍｏｌｅ以上でその
Ｉ２集反応を阻簀しない拓まで使用でき、好ましくは５
０μｍｏｌｅないし５００μｒｎｏｌｅ程度である。
用長としては、例えばアルコールオキシダーゼＯ，０Ｏ
ＩＵ〜１００ＯＵ渦り、一般に５μｍｏｌｅ以上でその
Ｉ２集反応を阻簀しない拓まで使用でき、好ましくは５
０μｍｏｌｅないし５００μｒｎｏｌｅ程度である。
またハロゲン化二価金属塩の使用量としては、アルコー
ルオキシダーゼ０．００１Ｕ〜１０００Ｕ当り、一般に
５μｍｏｌｅ 以」二でその酵素反応を阻害しない量ま
で使用でき、好ましくは２５ μｍｏｌｅ ないし５０
０ μｍｏｌｅ程度である。さらに有機物質の使用量と
しては、アルコールオキシダーゼＯ，０ＯＩＵ〜１００
ＯＵ当り、一般に０．１ ｎ ｍｏｌｅ ないし５００
ｎｍｏｌｅ 程度、好ましくは１ ｎ ｍｏｌｅ ない
し３０ ｎ ｍｏｌｅ 程度である。さらにまた対象と
するアルコールオキシダーゼの形態としては、溶液状で
もよく乾燥粉末状でもよく、さらにアルコールオキシダ
ーゼを固定化酵素としたものでもよく、またアルコール
オキシダーゼの固定化酵素を酸素電極や過酸化水素電極
に組み込んだ酵素センサーであってもよ（、アルコール
オキシダーゼを使用する種々ノモノを対象として挙けら
れる。例えば、アルコールオキシダーゼの溶液状の場合
には、アルコールオキシダーゼＯ，０ＯＩＵ〜１００Ｏ
Ｕ／づの濃度として使用すればよく、これに前記の安定
化のための添加剤を１種または２種以上添加せしめれば
よい。さらにこのような場合ハロゲン化アルカリ金属塩
は、一般に５ｍＭ以上、好ましくは５０ ｍ Ｍないし
５００ｍＭ程度、）・ロゲン化二価金属塩は一般に５ｍ
Ｍ以上、好ましくは２５ｍＭないし５００ｍＭ程度、有
機物質は一般に０．１μＭないし５００μＭ程度、好ま
しくは１μＭないし３０μＭ程度の濃度にて使用すれば
よい。また溶液とするに当っては、通常ｐＨ５，５〜９
．５好ましくはｐＨ６，５〜８の緩衝液、例えばリン酸
緩衝液、トリス−Ｈｃｔ緩衝液、トリシン−ＮａＯＨ緩
衝液［：Ｎ−）リス（ヒドロキシメチル）メチルグリシ
ン−水酸化ナトリウム緩衝液〕などが用いられる。また
これらの緩衝液に、あらかじめ１種または２棟以上の安
定化のための前記の添加剤を加え、これにアルコールオ
キシダーゼを添加してもよく、またこのアルコールオキ
シダーゼの代りにその固定化酵素や酵素センサーを用い
てその溶液に浸漬せしめてもよい。
ルオキシダーゼ０．００１Ｕ〜１０００Ｕ当り、一般に
５μｍｏｌｅ 以」二でその酵素反応を阻害しない量ま
で使用でき、好ましくは２５ μｍｏｌｅ ないし５０
０ μｍｏｌｅ程度である。さらに有機物質の使用量と
しては、アルコールオキシダーゼＯ，０ＯＩＵ〜１００
ＯＵ当り、一般に０．１ ｎ ｍｏｌｅ ないし５００
ｎｍｏｌｅ 程度、好ましくは１ ｎ ｍｏｌｅ ない
し３０ ｎ ｍｏｌｅ 程度である。さらにまた対象と
するアルコールオキシダーゼの形態としては、溶液状で
もよく乾燥粉末状でもよく、さらにアルコールオキシダ
ーゼを固定化酵素としたものでもよく、またアルコール
オキシダーゼの固定化酵素を酸素電極や過酸化水素電極
に組み込んだ酵素センサーであってもよ（、アルコール
オキシダーゼを使用する種々ノモノを対象として挙けら
れる。例えば、アルコールオキシダーゼの溶液状の場合
には、アルコールオキシダーゼＯ，０ＯＩＵ〜１００Ｏ
Ｕ／づの濃度として使用すればよく、これに前記の安定
化のための添加剤を１種または２種以上添加せしめれば
よい。さらにこのような場合ハロゲン化アルカリ金属塩
は、一般に５ｍＭ以上、好ましくは５０ ｍ Ｍないし
５００ｍＭ程度、）・ロゲン化二価金属塩は一般に５ｍ
Ｍ以上、好ましくは２５ｍＭないし５００ｍＭ程度、有
機物質は一般に０．１μＭないし５００μＭ程度、好ま
しくは１μＭないし３０μＭ程度の濃度にて使用すれば
よい。また溶液とするに当っては、通常ｐＨ５，５〜９
．５好ましくはｐＨ６，５〜８の緩衝液、例えばリン酸
緩衝液、トリス−Ｈｃｔ緩衝液、トリシン−ＮａＯＨ緩
衝液［：Ｎ−）リス（ヒドロキシメチル）メチルグリシ
ン−水酸化ナトリウム緩衝液〕などが用いられる。また
これらの緩衝液に、あらかじめ１種または２棟以上の安
定化のための前記の添加剤を加え、これにアルコールオ
キシダーゼを添加してもよく、またこのアルコールオキ
シダーゼの代りにその固定化酵素や酵素センサーを用い
てその溶液に浸漬せしめてもよい。
また特に添加剤として、ハロゲン化アルカリ金属塩また
はハロゲン化二価金属と有機物質との２釉を組み合せて
用いることが好ましシ・ものである。
はハロゲン化二価金属と有機物質との２釉を組み合せて
用いることが好ましシ・ものである。
次いで以下に、アルコールオキシダーゼの酵素活性測定
法、アルコールオキシダーゼの固定化酵素の製造例、ア
ルコールオキシダーゼの安定化のための各種添加物の影
響などについて述べる。
法、アルコールオキシダーゼの固定化酵素の製造例、ア
ルコールオキシダーゼの安定化のための各種添加物の影
響などについて述べる。
酵素活性測定法
本発明の組成物に含まれるアルコールオキシダーゼ活性
は次の分析法により決定した。
は次の分析法により決定した。
第 １ 表
０．２Ｍ リン酸緩衝液（ｐＨ７，５） ０．２−０．
３％（Ｖ／Ｖ） ４−アミノアンチピリン ０．１ｍ１
０、２ ％（Ｖ／Ｖ） フェノール ０．１ ｍｌ４５
Ｕ／ｄ ペルオキシダーゼ ０．１ ｍｅ蒸留水 ０
．４ ｍｅ Ｏ，９ｍｌ 第１表に示す反応液（１，９ｙｎｔ、にアルコールオキ
シダーゼ酵素溶液０．０５−を加え、３７℃、５分間恒
温にした。
３％（Ｖ／Ｖ） ４−アミノアンチピリン ０．１ｍ１
０、２ ％（Ｖ／Ｖ） フェノール ０．１ ｍｌ４５
Ｕ／ｄ ペルオキシダーゼ ０．１ ｍｅ蒸留水 ０
．４ ｍｅ Ｏ，９ｍｌ 第１表に示す反応液（１，９ｙｎｔ、にアルコールオキ
シダーゼ酵素溶液０．０５−を加え、３７℃、５分間恒
温にした。
次に６ｏｑ６（Ｖ／Ｖ）エタノール水溶液０．０５１ｎ
ｔを加えて３７℃にて１０分間反応さセタ後２．ｏ％（
Ｖ／Ｖ ）のホルマリン水溶液２ ｍｌを加えて反応を
停止させた。
ｔを加えて３７℃にて１０分間反応さセタ後２．ｏ％（
Ｖ／Ｖ ）のホルマリン水溶液２ ｍｌを加えて反応を
停止させた。
次いで反応によって呈する溶液の吸光度を５００ｎｍに
て測定した。また反応液のブランク試験は酵素溶液の代
りに蒸留水ｏ、０５イを加えて同様に測定した。
て測定した。また反応液のブランク試験は酵素溶液の代
りに蒸留水ｏ、０５イを加えて同様に測定した。
酵素活性は、
ΔＡ／１０ 全容量→
（式ψΔＡは試料の吸光度からブランク値を減じた値で
ある） 活性（Ｕ／ｍｅ ） ＝ｕ ／ｍＡ ｘ −！−〔式中
Ｃは溶解時の酵素溶液の濃度（ｍｙ／ｍｌ ） ）によ
り計算する。
ある） 活性（Ｕ／ｍｅ ） ＝ｕ ／ｍＡ ｘ −！−〔式中
Ｃは溶解時の酵素溶液の濃度（ｍｙ／ｍｌ ） ）によ
り計算する。
アルコールオキシダーゼの固定化酵素の製造上
ポリアクリロニトリル膜をリチウムアルミニウムヒトリ
ッド（Ｌｉ、４／Ｈ４）にて還元して得られたアミン化
したポリアクリロニトリル膜（直径５鯛、厚さ５０μ、
０．３８８＋ＩＩｆ乾燥物）ｓ枚ヲｘ、２．５％（重量
）のグルタルアルデヒド（特級東京化成）溶液に入れ、
水中で２０分間保持した。その後、０．１Ｍのホウ酸緩
衝液（ｐＨ８，５）で洗浄した。次にこのアミン化した
ポリアクリロニトリル膜をアルコールオキシダーゼを１
０ Ｕ ／ ｍｔ＝ 濃度になるように０．１Ｍリン酸
υ、衝液（ｐＨ７，５）にて溶解した溶液（以後酵素溶
液という）に入れ、３０℃にて１時間保持した。次いで
前記膜を酵素溶液より取り出して０．５ Ｎ Ｎａα
含有の０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐ）１７．５ ） １０
０ｍｌ、０．１ Ｍ ）リスーＨα緩衝液（ｐＨ８，０
） １００ゴ、０８１Ｍリン酸緩衝液（ｐ１１７．０
） １００ｍｅにて１１１２次洗浄し、アルコールオキ
シダーゼの固定化酵素膜を１弓整した。このアルコール
オキシダーゼ固定化酵素膜は、１１換算当りアルコール
オキシダーゼ５８、Ｕを保持していた。またこのアルコ
ールオキシダーゼ固定化酵素膜はアルコール測定用酵素
センサー用として ０．００２〜０１０３Ｕ／板（直径５間、厚さ５０μ）
にて利用できるものである。
ッド（Ｌｉ、４／Ｈ４）にて還元して得られたアミン化
したポリアクリロニトリル膜（直径５鯛、厚さ５０μ、
０．３８８＋ＩＩｆ乾燥物）ｓ枚ヲｘ、２．５％（重量
）のグルタルアルデヒド（特級東京化成）溶液に入れ、
水中で２０分間保持した。その後、０．１Ｍのホウ酸緩
衝液（ｐＨ８，５）で洗浄した。次にこのアミン化した
ポリアクリロニトリル膜をアルコールオキシダーゼを１
０ Ｕ ／ ｍｔ＝ 濃度になるように０．１Ｍリン酸
υ、衝液（ｐＨ７，５）にて溶解した溶液（以後酵素溶
液という）に入れ、３０℃にて１時間保持した。次いで
前記膜を酵素溶液より取り出して０．５ Ｎ Ｎａα
含有の０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐ）１７．５ ） １０
０ｍｌ、０．１ Ｍ ）リスーＨα緩衝液（ｐＨ８，０
） １００ゴ、０８１Ｍリン酸緩衝液（ｐ１１７．０
） １００ｍｅにて１１１２次洗浄し、アルコールオキ
シダーゼの固定化酵素膜を１弓整した。このアルコール
オキシダーゼ固定化酵素膜は、１１換算当りアルコール
オキシダーゼ５８、Ｕを保持していた。またこのアルコ
ールオキシダーゼ固定化酵素膜はアルコール測定用酵素
センサー用として ０．００２〜０１０３Ｕ／板（直径５間、厚さ５０μ）
にて利用できるものである。
立ｍｈｈ口［二り艷
各種添加物を含む０．２ Ｍ濃度のリン酸緩衝液（ｐＨ
’ｙ、 ５ ） ２ ＋ｎ７！にアルニア −ルオキシ
ダーゼ（ｓｕ／Ｗ１ｇ）を加え、アルコールオキシダー
ゼの保存安定性を調べた（３７℃）。
’ｙ、 ５ ） ２ ＋ｎ７！にアルニア −ルオキシ
ダーゼ（ｓｕ／Ｗ１ｇ）を加え、アルコールオキシダー
ゼの保存安定性を調べた（３７℃）。
第２表から添加剤としてＮａα、Ｋｃｌ、ＮａＢｒ、Ｋ
Ｂｒ を使用した場合に良好な結果が得られた。またＭ
ｎα２、Ｃａα２を使用した場合にも良好な結果が得ら
れた。
Ｂｒ を使用した場合に良好な結果が得られた。またＭ
ｎα２、Ｃａα２を使用した場合にも良好な結果が得ら
れた。
第 ２ 表
最初の酵素活性（無添加）を１００％とする。
００．２Ｍリン酸緩衝液の代りに０．２ Ｍ トリス−
Ｈα緩衝液を使用。
Ｈα緩衝液を使用。
Ｍは濃度を表わす。
各種の緩衝液による安定性
緩衝液としてリン酸緩衝液（○−○）、トリス−Ｈｃｔ
緩衝液（Δ−Δ）、トリシン−ＮａＣＨＩ ｇ仮数（
ローロ）を使用し、０．２Ｍ濃度の緩衝液（ｐＨ７，５
）を使用し、Ｋα＝１００ｍＭ、３７℃で試験した。
緩衝液（Δ−Δ）、トリシン−ＮａＣＨＩ ｇ仮数（
ローロ）を使用し、０．２Ｍ濃度の緩衝液（ｐＨ７，５
）を使用し、Ｋα＝１００ｍＭ、３７℃で試験した。
経過日数（日）に対する酵素活性残存率（＠を第１図に
示した。また対照としてにα無添加におけるリン酸緩衝
液（×・・・・・・×）中での酵素活性残存率（鉤をめ
た。
示した。また対照としてにα無添加におけるリン酸緩衝
液（×・・・・・・×）中での酵素活性残存率（鉤をめ
た。
アルコールオキシダーゼ４Ｕを含有するリン酸緩衝液（
ｐＨ７，５）の１−に対して、ハロゲン化アルカリ金属
塩としてにαを使用し、各種濃度のハロゲン化アルカリ
金属塩が酵素活性残存率（鋤に及はす影響を調べた。そ
の結果を第３表に示した。またごのにαの代りにＮａα
を用いても、はぼ同様の結果が得られた。
ｐＨ７，５）の１−に対して、ハロゲン化アルカリ金属
塩としてにαを使用し、各種濃度のハロゲン化アルカリ
金属塩が酵素活性残存率（鋤に及はす影響を調べた。そ
の結果を第３表に示した。またごのにαの代りにＮａα
を用いても、はぼ同様の結果が得られた。
第 ３ 表
１ １００ ２８ ６ ０
５ １００ ６０ ４２ ２９
５０ １００ ８０ ６０ ５０
１００ １００ ９８ ８６ ６０
５００ １００ １００ ８８ ６５
ハロゲン化二価金属塩としてＭ ｎ Ｃｔ ２を使用し
、各種濃度のＭｎα２が酵素活性残存率（効に及ぼす影
響を調べた。その結果を第４表に示した。
、各種濃度のＭｎα２が酵素活性残存率（効に及ぼす影
響を調べた。その結果を第４表に示した。
第 ４ 表
１ １００ ２６ ５ ０
５１００５１２８１７
２５ １００ ６５ ４７ ２５
１００ １００ ６８ ４９ ３０
５００ １００７０ ４８ ２８
第３表よりにαおよびＮａα のハロゲン化アルカリ金
属塩の使用量は５ｍＭ（５μｍｏｌｅ／−）以上が良好
であり、また５００ｍＭにてほぼ定常とみられるがこれ
以上の情用いてもよく、特に好ましくは５０ ｍ Ｍ
（５０μｍｏ ｌｅ／ ｍｌ’、 ）ないし５００ｍＭ
（５００μｍｏｌｅ肩）の範囲である。
属塩の使用量は５ｍＭ（５μｍｏｌｅ／−）以上が良好
であり、また５００ｍＭにてほぼ定常とみられるがこれ
以上の情用いてもよく、特に好ましくは５０ ｍ Ｍ
（５０μｍｏ ｌｅ／ ｍｌ’、 ）ないし５００ｍＭ
（５００μｍｏｌｅ肩）の範囲である。
また第４表よりＭｎＯ２などのハロゲン化二価金應塩の
使用量は５ｍＭ（５μｍｏｌｅ／ｍｅ）以上が良好であ
り、特に好ましくは２５ｍＭ（２５Ｉｔ ｍｏｌｅ／ｍ
Ａ ）ないし５００ｍＭ（５００μｍｏｌｅ／ｍ７りの
範囲である。
使用量は５ｍＭ（５μｍｏｌｅ／ｍｅ）以上が良好であ
り、特に好ましくは２５ｍＭ（２５Ｉｔ ｍｏｌｅ／ｍ
Ａ ）ないし５００ｍＭ（５００μｍｏｌｅ／ｍ７りの
範囲である。
アルコールオキシダーゼ含有０．２ Ｍ濃度のリン酸緩
衝液（ｐＨ７，５） （４Ｕ ／ ｍｌ、 ）を用いて
、有機物質としてホルムアルデヒド、アセトアルデヒド
、メタノール、エタノール、ブタノールを使用し、Ｋｃ
ｔの代りに各種濃度の有機物質における酵素活性残存率
（（６）を調べた。
衝液（ｐＨ７，５） （４Ｕ ／ ｍｌ、 ）を用いて
、有機物質としてホルムアルデヒド、アセトアルデヒド
、メタノール、エタノール、ブタノールを使用し、Ｋｃ
ｔの代りに各種濃度の有機物質における酵素活性残存率
（（６）を調べた。
第 ５ 表
ホルムアルデヒド濃度（μＭ） 酵素活性残存率幕（％
）０．０５ １００ ３０ ５ ０ ０．１ １００’ ３８ ２３ １１ １．０ １００ ４８ ２８ １８ ３．０ １００ ５０ ３０ ２０ ０．０５ １００ ３０ ５ ０ ３．０ １００ ３０ ０ ０ メタノール濃度（μＭ） ０日 １日 ３日 ７日０．
０５ １００ ３０ ５ ０ ０．１ １００ ３４ １６ ６ １．０ １００ ４０ １８ ９ ３．０ １００ ４０ ２０ １０ ３０．０ １００ ４０ ２０ １０ ０．０５ １００ ２８ ６ ０ ３．０ １００ ２８ ０ ０ ３０．０ １００ ２５ ０ ０ 第５表より、ホルムアルデヒドおよびメタノールは安定
化作用が認められ、濃度としては０．１ ｆｉ Ｍ （
０，１ｎ ｍｏｌｅ／ｍ１．）ないし５００ｔｔ Ｍ
（５００ｎ ｍｏｌｅ／ｍｇ ）が良好と認められ、好
ましくはＩ Ｉｔ Ｍ （１ｎ ｍｏｌｅＡｎｌ）ない
し′３０ Ａ Ｍ （３０ｎ ｍｏｌｅ／ｍ１．）であ
る。
）０．０５ １００ ３０ ５ ０ ０．１ １００’ ３８ ２３ １１ １．０ １００ ４８ ２８ １８ ３．０ １００ ５０ ３０ ２０ ０．０５ １００ ３０ ５ ０ ３．０ １００ ３０ ０ ０ メタノール濃度（μＭ） ０日 １日 ３日 ７日０．
０５ １００ ３０ ５ ０ ０．１ １００ ３４ １６ ６ １．０ １００ ４０ １８ ９ ３．０ １００ ４０ ２０ １０ ３０．０ １００ ４０ ２０ １０ ０．０５ １００ ２８ ６ ０ ３．０ １００ ２８ ０ ０ ３０．０ １００ ２５ ０ ０ 第５表より、ホルムアルデヒドおよびメタノールは安定
化作用が認められ、濃度としては０．１ ｆｉ Ｍ （
０，１ｎ ｍｏｌｅ／ｍ１．）ないし５００ｔｔ Ｍ
（５００ｎ ｍｏｌｅ／ｍｇ ）が良好と認められ、好
ましくはＩ Ｉｔ Ｍ （１ｎ ｍｏｌｅＡｎｌ）ない
し′３０ Ａ Ｍ （３０ｎ ｍｏｌｅ／ｍ１．）であ
る。
金属塩と基質化合物有機物質とを併用した場合の効果
４ Ｕ ／ ｍｅのアルコールオキシダーゼを含有する
リン酸緩衝液（ｐＨ７，５）を用いて、各種濃度（ｍ
Ｍ ）のＫｃｌと各ａｔ ９度（μＭ）のホルムアルデ
ヒドとの併用効果を第６表に、また各種濃度（ｍ Ｍ）
の勤α２と各ｆｉｌｔ濃度（μＭ）のホルムアルデヒド
（μＭ）との併用効果を第７衣にそれぞれ示した。
リン酸緩衝液（ｐＨ７，５）を用いて、各種濃度（ｍ
Ｍ ）のＫｃｌと各ａｔ ９度（μＭ）のホルムアルデ
ヒドとの併用効果を第６表に、また各種濃度（ｍ Ｍ）
の勤α２と各ｆｉｌｔ濃度（μＭ）のホルムアルデヒド
（μＭ）との併用効果を第７衣にそれぞれ示した。
第 ６ 表
３７℃、１週間後の酵素活性残存率を
示す。
第 ７ 表
３７℃、１週間後の酵素活性残存率を
示す。
次に実施例を掲げて本発明を説明でるがこれに限定され
るものではない。
るものではない。
実施例１
ピキア属のアルコールオキシダーゼ（８Ｕ／＋＋＋ｙ）
ｌｑを０．２ Ｍ）リシン−ＮａＯＨｆｆｌｉ液２ｍＡ
に浴かして３７℃で恒ＷＫ’Ｊ中に保存した。
ｌｑを０．２ Ｍ）リシン−ＮａＯＨｆｆｌｉ液２ｍＡ
に浴かして３７℃で恒ＷＫ’Ｊ中に保存した。
また同様にして、１００ｍＭの脳 を含む０．２Ｍのト
リシン緩衝液２１ｎ１．に前記アルコールオキシダーゼ
１π１を添加して３７℃に維持して安定性について実験
した。Ｋα無酢加の場合は１週間後には酵素活性は零に
なったが、１００ｍＭＫｃｔを添加した場合は酵素活性
残存率は８２％であった。
リシン緩衝液２１ｎ１．に前記アルコールオキシダーゼ
１π１を添加して３７℃に維持して安定性について実験
した。Ｋα無酢加の場合は１週間後には酵素活性は零に
なったが、１００ｍＭＫｃｔを添加した場合は酵素活性
残存率は８２％であった。
実施例 ２
実施例１のＫＣｔの代りにＮａＣｔ を使用して同様な
実検を行なった。この場合の酵素活性残存率は８０チで
あった。
実検を行なった。この場合の酵素活性残存率は８０チで
あった。
実施例 ３
アルコールオキシダーゼ（８Ｕ／■）２■をＱ、 ２
Ｍ ）リシン−ＮａＯＨ緩衝液２ ｍｌに溶かして３７
℃で保存した。又同様にして３μＭ濃度のホルムアルデ
ヒド（和光紬薬社製特級）を含む０．２Ｍ）！ｊシンー
ＮａＯＨ緩衝液に溶かし、３７℃に保存して安定性につ
いて実験を行なった。
Ｍ ）リシン−ＮａＯＨ緩衝液２ ｍｌに溶かして３７
℃で保存した。又同様にして３μＭ濃度のホルムアルデ
ヒド（和光紬薬社製特級）を含む０．２Ｍ）！ｊシンー
ＮａＯＨ緩衝液に溶かし、３７℃に保存して安定性につ
いて実験を行なった。
ホルムアルデヒド無添加の場合には１週間後には酵素活
性はＯになっていたが、３μＭ濃度のホルムアルデヒド
を添加した場合は酵素活性残存率は２１チであった。
性はＯになっていたが、３μＭ濃度のホルムアルデヒド
を添加した場合は酵素活性残存率は２１チであった。
実施例 ４
実施例１０１００ｍＭ濃度のにαの代りに、１００ｍＭ
濃度の薦および３μＭ濃度のホルムアルデヒドを添加し
て実施例１と同様に実験を行なった。その結果１週間後
の酵素活性残存率は９８％であった。
濃度の薦および３μＭ濃度のホルムアルデヒドを添加し
て実施例１と同様に実験を行なった。その結果１週間後
の酵素活性残存率は９８％であった。
実施例 ５
実施例１の１００ｍＭｆｉ度のにαの代りに５０ｍＭＱ
度のＭｎα２および３μＭ濃度のホルムアルデヒドを添
加して実施例１と同様に実検を行なった。その結果、１
週間後の酵素活性残存率は５０％であった。
度のＭｎα２および３μＭ濃度のホルムアルデヒドを添
加して実施例１と同様に実検を行なった。その結果、１
週間後の酵素活性残存率は５０％であった。
実施例 ６
アルコールオキシダーゼ（８Ｕ／Ｗ）を用いて、前記の
如くして得たアルコールオキシダーゼ固定化酵素膜を０
．０５Ｍ濃度のトリシン−Ｎａ ＯＨ緩衝液に入れ、３
７℃で恒温槽中に保存した。又同様にしてアルコールオ
キシダーゼ固定化酵素膜を１００ｍＭ濃度のＫｃＪを含
む０．０５Ｍ濃度のトリシン−ＮａＯＨ緩衝液に入れ、
３７℃の恒温槽中に保存した。
如くして得たアルコールオキシダーゼ固定化酵素膜を０
．０５Ｍ濃度のトリシン−Ｎａ ＯＨ緩衝液に入れ、３
７℃で恒温槽中に保存した。又同様にしてアルコールオ
キシダーゼ固定化酵素膜を１００ｍＭ濃度のＫｃＪを含
む０．０５Ｍ濃度のトリシン−ＮａＯＨ緩衝液に入れ、
３７℃の恒温槽中に保存した。
Ｋｃｔ無添加の場合は、１週間後には酵素活性はＯにな
ったが、１００ｍＭ濃度のにαを添加した場合には酵素
活性残存率は８５％であった。
ったが、１００ｍＭ濃度のにαを添加した場合には酵素
活性残存率は８５％であった。
実施例 ７
実施例６のにαの代りに、Ｎａαを使用して同様の実施
を行なった。その結果Ｎａα添加の場合の１週間後の酵
素活性残存率は８３％であった。
を行なった。その結果Ｎａα添加の場合の１週間後の酵
素活性残存率は８３％であった。
実施例 ８
実施例６のＫＣ／！の代りに３μＭ濃度のホルムアルデ
ヒドを用いて実施例６と同様の実験を行なった。その結
果ホルムアルデヒド添加の場合には酵素活性残存率は２
２％であった。
ヒドを用いて実施例６と同様の実験を行なった。その結
果ホルムアルデヒド添加の場合には酵素活性残存率は２
２％であった。
実施例 ９
実施例６の１００ｍＭｅｋ度のにαの代りに１００ｍＭ
濃度の薦および３μＭ濃度のホルムアルデヒドを用いて
実施例６と同様に実験した。その結果、Ｋαおよびホル
ムアルデヒド添加の場合には酵素活性残存率は１００襲
であった。
濃度の薦および３μＭ濃度のホルムアルデヒドを用いて
実施例６と同様に実験した。その結果、Ｋαおよびホル
ムアルデヒド添加の場合には酵素活性残存率は１００襲
であった。
アルコールオキシダーゼを１０８Ｕ／−の濃度で含む１
００ｍＭ濃度のＫＣｌｘ性液（ｌｏｍＭ！Ｊン酸緩衝溶
液を含む）２−を凍結乾燥して３９３ηの粉末状アルコ
ールオキシｐ”−セ（５，９Ｕ／■）を得た。このアル
コールオキシダーゼの冷所（４℃）保存安定性を調べた
。その結果は第８衣に示した。
００ｍＭ濃度のＫＣｌｘ性液（ｌｏｍＭ！Ｊン酸緩衝溶
液を含む）２−を凍結乾燥して３９３ηの粉末状アルコ
ールオキシｐ”−セ（５，９Ｕ／■）を得た。このアル
コールオキシダーゼの冷所（４℃）保存安定性を調べた
。その結果は第８衣に示した。
実施例 １１
キャンディダ・ボイデイニ−（Ｃａｎｄｉｄａｂｏｉｄ
ｉｎｉｉ ） 菌株に属する酵母の産生ずるアルコール
オキシダーゼ（ベーリンガー製）（５０Ｕ１５．５４Ｗ
Ｐｒｏｔ） ２Ｗを０．２ Ｍ ）リシン−ＮａＯＨ緩
衝液２ゴに溶かして３７℃の恒温槽中に保存した。
ｉｎｉｉ ） 菌株に属する酵母の産生ずるアルコール
オキシダーゼ（ベーリンガー製）（５０Ｕ１５．５４Ｗ
Ｐｒｏｔ） ２Ｗを０．２ Ｍ ）リシン−ＮａＯＨ緩
衝液２ゴに溶かして３７℃の恒温槽中に保存した。
また同様にして０．１Ｍ９度のにαおよび３μＭｔＡ度
のホルムアルデヒドを含む０．２ Ｍ ）リシン−Ｎａ
ＯＨ緩衝液２ ｍｇに前記アルコールオキシダーゼ２■
を添加して３７℃の恒副槽中に保存した。
のホルムアルデヒドを含む０．２ Ｍ ）リシン−Ｎａ
ＯＨ緩衝液２ ｍｇに前記アルコールオキシダーゼ２■
を添加して３７℃の恒副槽中に保存した。
Ｋα無添加の場合は、３日後には酵素活性は０になった
が、Ｋα とホルムアルデヒドとを併用した場合には酵
素活性残存率は４２チであった。
が、Ｋα とホルムアルデヒドとを併用した場合には酵
素活性残存率は４２チであった。
第１図は、ｐＨによる本発明のアルコールオキシダーゼ
組成物の安定性を示すグラフである。 代理人 三宅正夫他１名
組成物の安定性を示すグラフである。 代理人 三宅正夫他１名
Claims (6)
- （１）ハロゲン化アルカリ金属塩およびハロゲン化二価
金属塩からなる群から選ばれた水溶性塩類の１柚または
２種以上またはホルムアルデヒドおよびメタノールから
なる群から選ばれた有機物質の１種または２種以上とア
ルコールオキシダーゼとを含有することを特徴とする安
定化したアルコールオキシダーゼ組成物。 - （２） ハロゲン化アルカリ金４店が、塩化カリウム、
塩化ナトリウム、臭化カリウムまたは臭化ナトリウムで
ある特許請求の範囲第１項記載の組成物。 - （３）ハロゲン化二価金属塩が、塩化カルシウム−よた
は塩化マンガンである特許請求の範囲第１項記載の組成
物。 - （４） 水溶性塩類が５μｍｏｌｅ 以上である特許請
求の範囲第１項記載の組成物。 - （５）有機物質が０．１ ｎ ｍｏｌｅないし５００ｎ
ｍｏｌｅ の濃度である特許請求の範囲第１項記載の組
成物。 - （６）水溶性塩類と有機物質とアルコールオキシダーゼ
とを含有１−る特許請求の範囲第１項記載の組成物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18321083A JPS6075285A (ja) | 1983-10-03 | 1983-10-03 | 安定化したアルコ−ルオキシダ−ゼ組成物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18321083A JPS6075285A (ja) | 1983-10-03 | 1983-10-03 | 安定化したアルコ−ルオキシダ−ゼ組成物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6075285A true JPS6075285A (ja) | 1985-04-27 |
| JPH0429351B2 JPH0429351B2 (ja) | 1992-05-18 |
Family
ID=16131702
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18321083A Granted JPS6075285A (ja) | 1983-10-03 | 1983-10-03 | 安定化したアルコ−ルオキシダ−ゼ組成物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6075285A (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP5484985B2 (ja) | 2010-03-29 | 2014-05-07 | 三洋電機株式会社 | 電源装置及びこの電源装置を備える車両 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5820267A (ja) * | 1981-07-30 | 1983-02-05 | Toshiba Corp | 塗布装置 |
-
1983
- 1983-10-03 JP JP18321083A patent/JPS6075285A/ja active Granted
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5820267A (ja) * | 1981-07-30 | 1983-02-05 | Toshiba Corp | 塗布装置 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0429351B2 (ja) | 1992-05-18 |
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