JPS60502100A - 黄体活性を示すステロイド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 黄体活性を示すステロイド 発　明　の　分　野 この発明は、概略的にステロイドの分野に関し、詳細には黄体活性を示す新たな りラスの１７α−エチニルプロゲステロン類に関する。

「黄体期の」という言葉は「妊娠に先立つ」と云う意味を示し、既知の黄体物質 の中には偽妊娠を誘導するものがある。そのため、これらの物質は、避妊薬とし て有効であシ、月経不順に関連した疾患の治療にも有効である。非常によく知ら れた黄体物質は、ヒトの体内で造られるわけではないが、それでもやはシ天然の ダスターダン（例えばプロゲステロン）にＴｈ似の機能を発揮する。それゆえ、 有効性の高く（すなわち、少量を注射しても効果が得られ）、かつ比較的副作用 の低い黄体化合物を開発するために、多くの時間と原料が要求された。黄体活性 は通常いわゆるクローベルブアッセイによシ測定される。その方法では、活性を 測シたい化合物を、エストロゲンで前処理した雌のウサギに注射し、子宮内膜の 腺発育をマクフェイルスケイルに基すいて０ないし＋４の数字で評価する（キル イエラス）。

恐らく最も良く知られたダスターダンは、副腎、卵巣、胎盤で造られる天然に存 在するホルモン、プロゲステロンであシ、それは妊娠の維持に必要な主装置。

特性ホルモンである。プロゲステロンは黄体で分泌される２１個の炭素原子から 成るステロイドでアシ、次の構造を有する。式中の番号付けおよびアルファベッ トによる環の指定は、よく知られた俗称を持たない誘導体を命名するとき、従来 から用いられているものであシ、以下に示す。

上式中、明細書および請求の範囲で一貫していることであるが、紙面の表側から 環に付いた置換基はβで表わされ実線で示されており、−力紙面の裏側から付い た置換基はαで表わされ破線で示されている。

合成プロゲステロンは容易に入手し得る（例えば、アップジョン社、カラマズウ 、ミシガン州よシ）。プ０ケ゛ステロンは経口投与されたとき、弱い活性を示す たけであるが、さらに活性の高い経ログスターケ９ンが龜ぼ全面的にそれに代わ って登場してきた。

分子生物学者や内分泌学者は今や、ステロイドホルモン作用に係わる分子的機構 の主要な特性を確証するに至った（受容体とホルモン作用、　Ｂ、Ｗ、オウマレ イＡｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ　＋　Ｎ、Ｙ、　＋　１９７８参照）。ホルモ ン作用が生ずるためには、ステロイドホルモンは内分泌反応性細胞内に入らなけ ればならない。内分泌反応性細胞の特徴は、細胞質内および核内双方に、ステロ イドホルモンと結合親和性の高い特異的なタン・ぐりを有することである。その タンパクは［ホルモン受容体タンパク」またはＩＹに「容易体タン・マク」とし て知られている。そのような受容体タンパクの特徴はステロイドに対する高い特 異性と、それらの結合親和性をとうしてステロイド間の微妙な構造的差異を識別 する能力コルテコイドを除いて、市場を代表するステロイドとして構造的に異な る３つの型がある。

Ｉ　ｆｆ 化合物は黄体物質として幅広く利用されている。例え使用、良性前立腺肥大のよ うなある種の増生、前立腺癌、乳癌の治療用としての使用、抗アンドロゲン物質 ５ としての使用が挙げられる。現在市場を代表するステロイドとして酢酸メドロキ シプロヶゞステロン（Ｉ；Ｒ＝ＣＨ３）がある。

１９−ノルエチステロン（ＩＩ）。この化合物（■；Ｒ／　＝＝メチル）および その１８−メチル誘導体（■：ｎ／　＝＝エチル）は、エチニルエストシデオー ル（ＩＩ）と同時に使用されるので、世界中の市場に避妊薬としてよく出回わっ ている。それらには強力な黄体物質、アンドロダン物質等がある。

１７α−エチニルエストラデオール（■）。この化合物およびその３−メチルエ ーテル（メストラノール）は、実際上、避妊薬として現在用いられている唯一の 経口的に活性のあるエストローグンである。

（１）および（Ｈ）型の化合物は優れた黄体物質であるが、多くの医薬に共通し て−るように、望ましくない副作用を有している。が、それはその特徴的な構造 特性に由来している。例えば、実験動物において黄体物質の１７α−７セトキシ ノロダステロン（１；Ｒ−メチル）系の乳癌発生率は、１９−≠ルエチステロン （ｎ）のそれよシも高い（例えば、薬剤の安全性に関する委同様に、避妊薬とし て用いた場合、１７α−７セトキシグログステロンの血栓塞栓症の発生率は、相 当する待人昭ＧＯ−５０２１００（６） （ＩＩ）の製剤のそれよりも高い（例えは、インワンら。

Ｂｒｊｔ、Ｍｅｄ、　Ｊ、　（２）　２０３　（１９７０）参照）。

１９−ノルステロスト（ＩＩ）は対照的に高血圧の原因となることがある（　Ｌ ａｎｃｅｔ　、　ｌ　、　６２４　（１９７７）、）。

テストステロンの１７−アルキル化誘導体と同様に、それは肝機能妨害の指標と なるＢＳＰ貯留の原因となる。

発　明　の　要　約 この発明は、単分子で１７α−アセトキシ−１７β−アセチル（１）および１７ β−ヒドロキシ−１７α−エチニル（ｎ）ステロイドの構造的特徴を兼ね備えた １７β−アセテルー１７α−エチニルステロイトラ、初めて提供する。この発明 はさらに、１７β−アセチル−１７α−エチニルステロイドの新規な合成経路を 提供する。発明者らは、（ＩＩ）とは反対に本発明の新規な構造により望ましく ないアント°ログンは産生されないことを発見した。その産生はアンドロダン受 容体に対する結合親和性により測定される。またそれらによシ１．新規な構造の うちある種のものはグログステロン受容体に対して高い結合親和性を有し、かつ 強い黄体活性を有することが明らかになった。

この発明はさらに詳細には、単分子で（１）と（ＩＩ）双方に特有な構造的特性 を持った新規なステロイド構造に関する。それは部分式（■）で示される。

ｅ ■ （上式中、Ｒ１は以下のように定義する。）この化合物は今までこの分野で、そ の製剤化のための新しい方法、治療薬としてのその使用法、およびその薬剤に関 して記載されていない。

続いてここで詳述される特定の好寸しい具体例と同様に、この発明の範囲と目さ 九る他の具体例は一般的に次のように記述することができる。

（ａ）　Ｖ式のステロイド。

４ および （ｂ）　Ｖ１式のステロイド９゜ Ｒはメチル、エチルおよびプロピルよシ成る群より選ばれる。

Ｒ２はＨおよびメチルより成る群よシ選ばれる。

ＲはオキソおよびＨ（ＯＲ”）より成る群より選はれる。

ＲｕＨ２、Ｈ（メチル）、ｎ　（ｃｔ）、Ｈ（Ｆ）、オヨ９ び−ＣＨ２よ！ｌｌ成る群よシ選ばれる）であシ、または■ （上式中、 Ｒは水素、メチル、ＣｔおよびＦよシ成る群よシ選ばれる）である。

Ｒは水素または 炭素数１ないし１２のアシル、 ２−テトラヒドロピラニル、 ４−テトラヒドロピラニル、 炭素数５ないし７の１−シクロアルキル、シクロアルキル基が５ないし７の炭素 原子を有する ｌ−メトキシシクロアルキルおよび１−エトキシシクロアルキル、 シクロアルキル基が５ないし１０の炭素原子を有スルシクロアルキルカルボニル 、 １−アダマンチルカルボニル、 １−シクロペンチルカルボニル、 から成る群よシ選ばれる薬理学的に許容し得る置換基、Ｑ−３は−ＣＨ＝ＣＨ− および−ＣＨ２−ＣＨ２−よシ成る群よ）選ばれる。

上記の総称的な公式化におけると同様、明細書の残りの部分および請求の範囲に おいて、「Ｒ２」は同一炭素原子に結合した２つの炭素原子を示すもので、水素 分子を示すものではない。同様に、Ｈ（ＯＲ）　のような表示法は利用できる２ 価の炭素に結合した双方の置換基を示す。明細書中Δゞのような表示法、例えば Δ１゜Δ６等は、シクロペンタノフェナントレン環中の２つの炭素原子間の２重 結合を示し、肩の数字は環中２重結合の小さい方の数字を示す。これらの表示法 は当該分野ではよく知られているが、具体例を挙げるためにここで手短かに確認 しておく。

形態の詳細な説明 この発明の最良の形態は次のように要約できる。

（Ａ）１７α−エチニルグログステロン、（Ｂ）１７α−エチニル−５α−ジヒ ドロプロゲステロン、 （Ｃ’ｌ１７α−エチニル−１９−ノルプロゲステロン、■）　１７α−エチニ ル−５α−ジヒドロ−１９−ノルプロゲステロン、 ＠）　１７α−エチニル−６α−メチルグログステロン、 （Ｆ）１７α−エチニル−６α−メチル−５α−ジヒドロプロゲステロン、 （Ｇ）１７α−エチニル−６α−メチル−１９−ノルプロゲステロン、 ＠　１７α−エチニル−６α−メチル−５α−ジヒドロ−１９−ノルプロゲステ ロン、 （Ｉ）１７α−エチニル−６−メチルプレグナ−４，６−ノニン−３，２０−ジ オン、 （Ｊ）１７α−エチニル−６−メチル−１９−ノルプレグナ−４，６−ノニン− ３，２０−ジオン。

化合ｊｗＪ（Ｃ）および■）は、それぞれ化合物（（至）および（Ｂ）の１９− ノル類似体を示し、−劣化合物（匂およびＣ）は、化合物（Ａ）および（Ｂ）の ６α−メチル類似体を示す。化合物（Ｇ）および（６）は組合せ、すなわち化合 物（４）および（Ｂ）の６−メチル−１９−ノル誘導体を示す。化合物（Ｉ）お よび（Ｊ）は、それぞれ化合物（４）の６−メチル−Δ６−および６−メチル− Δ６−１９−ノル誘導体を示す。

この発明の化合物は、発明者の知るところでは、今までこの分野で記載されてい なかった。これらは以下の化合物から調製することができる。

（上式中のＲ１は前述したとうりに定義する）１７α−ヒドロキシメチル−１７ β−アセチルステロイド（Ｘ）はムクヘルシーおよびエンジョルの方法によよう なヒドロキシメチルステロイド（Ｘ）ｔ−１例えば塩入念に酸化すると、今まで 知られていない１７α−ホルミル誘導体ＣＭ）を得る。続いて後者は相当のエチ ニル誘導体に転化されるが、例えばＭｅＬｉ　（カルビンおよびハミ＃　ｒ　Ｊ −Ｃ，Ｓ、　Ｐｅｒｋｉｎ　Ｔｒａｎｓ、＋　１　＋　８９６（１９７７））ま たは第三ブトキシドカリウム（ＫＯＢｕ　）の存在下で、ジアルキル・ジアゾメ チルホスホネートを用いて処理する。ジメチル・ジアゾメチルホスホネに適して いることが分かった。一般的に、この反応はテトラヒドロフランのような溶媒に １当量のジメチル・ジアゾメチルホスホネートを溶かしたものを、室温以下で望 ましくは一７８℃で、同一溶媒中のＫＯＢｕｔのスラリーに加え、続いて同一溶 媒に溶かしたステロイドを添加することによって進行する。反応は薄層クロ１３ マトグシンイーによって調べることができる。反応が完了したら、水を加え有機 層と適宜混ぜ合わせる。

この反応は次のような基を含む多様な１７α−ホルミルステロイドに適用できる 。

例えばＣ１、Ｃ２、Ｃ５、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ１゜位についた水酸基。

アシル化されているならば、そのような基は反応中加水分解されることがある。

例えばＣ４、Ｃ３、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ１１位についたアルコキシ、アリロキシおよ びアリル、 例えばＣ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ４４位についたオキソ基のよう なオキソ、 例えば３−ＣＯ−Δ４．３−ＣＯ−Δ４３．３−ＣＯ−Δ１゛４．３−ｃｏ−Δ ｉ　、４．６．３−ｃｏ匈４．９（１０）、３−ＣＯ−Δ４．９（１ｏ）、ｕ、 （＋２）のような共役不飽和をもつオキソ、 Ｃ１・Ｃ２・Ｃ３・Ｃ４・Ｃ５・Ｃ６・Ｃ７、Ｃ１１位についたメチルのような アルキル、 例えば０３位についたメチレンジオキシ、例えば３−メトキシおよび３−シクロ ベンチルー３．５−４）ｃン（７）ｊつ＆エノールエーテル、例えばＣ１・Ｃ２ ・Ｃ３・Ｃ４・Ｃ３（１０）ＩＣ６・Ｃ９（１０）・１４　待人昭ＧＯ−５０２ １００（８）Ｃ１１（１２）位の不飽和結合、 １．３．５（１０）−エストラジェンおよびその誘導体のような芳香環構造。

（Ｖｌｌｌ）部分および（ＩＸ）部分を含む化合物はグログステロン受容体に対 する結合親和性および強力な黄体活性のために、特に価値がある。これらの化合 物は、この分野で既知の最も強力な黄体ホルモンのいくつかを含む。それ故にこ れらは次の方面で価値を有することがある。

ホルモン置換療法および月経過多、月経回器、月経前期症候群を含むホルモン不 均衡および閉経女性の顔面紅潮の治療、 「ミニビル」型才たは長期作中の注射可能薬物型の避妊薬、 飼育牛の発情期の同調、 イヌ捷たはネコのような愛玩動物の発情阻害、良性前立腺肥大および前立腺癌の 治療、乳癌および子宮癌の治療、 抗アンドロダンおよび抗エストロゲンとして。

エストローグンと併用し、特にエチニルエストラディオールと併用して、それら は、この分野で標準的な治療法および製剤にて、従来からの経口避妊薬および排 卵阻害剤中のプロダスターケ°ン成分として使用されることがある。

５ この発明の化合物は、経口、非経口、頬側、鼻内、経皮、子宮内、直腸内、およ び膣内吸収を目的として、様々な投与形態で注射され得る。却独の葦たけ複数の 活性成分を、硬質または軟質のゼラチンカプセルに封入することができ、またけ 直接錠剤の中へ圧縮することができる。それらは賦形剤および不活性希釈剤と混 ぜ合わすこともでき、トローチ、エリキシル、懸濁液、シロップ、ウェファ−、 チーーイングガム等の形で使用することができる。そのような組成物および製剤 は、単位投与型当、！ｌ１０．０１ｍ！７以上１ｙ−以下の活性成分を含み得る 。単位投与当り　Ｑ、　１　ｍ９ないし２５０ｍ９範囲の活性成分量を使用する ことが望廿しい。錠剤、トローチ、丸薬およびカプセルは、ガムトラガカント、 アカシア、コーンスターチ、ゼラチン、リン酸二カルシウムのような希釈剤、コ ーンスターチ、ポテトスターチ、アルギニン酸のような膨化剤、ステアリン酸マ グネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖、サッカリン、アノ・ぐルテイムのよ うな甘味料、ペパーミント油、アカモノ油、サクラ香のような香料を含む賦形剤 から成立つこともある。様々な他の物質が、剤皮として提供され得るし、または ショラックを被せた錠剤またはカプセル、およびショ糖を被せた錠剤を含む投与 単位の自然な形を別の方法で修飾するために提供されることもある。

シロップおよびエリキシルは、ヌテロイド成分に加えて、ショ糖のような甘味料 、防腐剤としてメチルおよびプロピルパラベン、および適当な染料、または香料 を含むことがある。

噴出銃によって注射され得る型を含む非経口的液状投与型または注入可能型は、 活性成分を水のような滅菌液状担体または生理食塩水に溶かして調製されること がある。非経口的使用に適した望捷しい透明度、安定性および適応性を備えた組 成物は、次寺、のようにして調製される。すなわち約０．１ｍ９ないし約３！ｉ ＋−の活性成分を、水および有機浴媒に溶け、約２００ないし約１５００の範囲 の分子量をもつ、不揮発液状ポリエチレングリコールの混合物から成る担体に溶 解する。

このような溶液は、カルボキシメチルナトリウム塩、メチルセルロース、ポリビ ニルピロリドンまたはポリビニルアルコールのような懸濁剤金倉めば都合がよい 。

注入可能型はさらに、例えばノ９ラベン、ペンチルアルコール、フェノールまた はチメロサールのような静菌剤および殺菌剤を含む防腐剤から成ることがある。

等張剤として砂糖または食塩が含まれることがある。局所麻酔剤のようなアノ− バント、安定剤および緩衝剤が加えられることもある。

単独の成分または複数の成分を錠剤または小さなシリンダー内に圧縮し、それら を蓄積性注入物または挿入片として皮下または筋肉内に移植することができ１７ る。挿入片として、生体内で分解されるポリマーまたはトウーコーニング社で製 造されるシリコンゴムであるシラスチック（商品名）を含む合成シリコンのよう な不活性物質が使用できる。

避妊剤として使用する場合、反応から得られる生産物は、そのような産物に対す るパック標準品として製造され、この分野の技術者によく知られて、いる。それ らは１ケ月の投与量型または食用マトリクスとして製造されることがある。それ Ｋは年月日および容易に分離し得る各単位投与量が付記される場合がある。例え ば、それらは必要に応じてプラセービ錠を含み、パック小片として製剤化される ことがある。

この発明を実施するために、１７β−アセテルー１７α−ホルミルステロイドＭ 　（ＸＩ）が必要とされる。

これらの化合物はこの分野で新規であシ、かつ驚くべきことにこの発明の実験条 件下で安定な構造をとることが分かった。それらは１７β−アセチル−１７α− ヒドロキシメチルステロイド類ヲ入念に酸化することにより調製することができ る。後者はこの分野では既知であシ、なかんずくムクヘルシーおよびエンジェル Ｃｈｉ’ｍ、　Ａｃｔａ　、　６１　、３０６８　（１９７８）によって報告さ れてきた。これらのヒドロキシメチル化ステロイを用いて実施することができる 。すなわちピリジン／クロム酸、塩化クロム酸ピリジニウム、塩化クロム酸２． ２′−バイピリジニウム、２．２’−バイピリジンクロムクロム酸、クロム酸テ トラ−ｎ−ブチルアンモニウム、クロムトリオキシド−グラファイト、求電子試 薬により活性化されたジメチルスルホオキシド、μｍオキソ−ビス（塩化トリフ ェニルビスマス）等である。そのよりな１７β−アセテルー１７α−ホルミルス テロイド類は、今までこの分野で記載されていないので、この発明の範囲内に入 るヌテロイド中間体類の１つの重要な新しいクラスを表わすことになる。

ジメチルジアゾメチルホスホネートはアルデヒドおよびケトン双方と反応するが 、これらの他の部分の存在下でこの一部との反応はまだ確立されていない。

発明者らはジメチルジアゾメチルホスホネート（１モル当量より若干量多く存在 することが好ましい）は、例えば立体障害を受けていない３−ＣＯ−Δ４残基の 存在下で立体障害を受けているホルミル基と選択的に反応する。これはステロイ ド合成の分野で重要な観察事項である。

この発明の生産物は、結晶化、調製用クロマトグラフィー等を含むこの分野で用 いられる標準的な方法によって、単離することができる。そのような方法は実施 例で例示される。

合成 化合物囚および（Ｂ）の合成経路を図式的流れ図で以下に示す。

上式中ａからｇの文字は、図示の転化を行なうのに用いられる次の試薬を示す。

ａ、メチルリチウム、 ｂ、ＺｎＣｌ２．　ＣＨ２Ｏ、 Ｃ３触媒として炭素上のパラジウムを使い、水素雰囲気中での水素添加、 ｄ６　塩化クロム酸パイピリジニウム捷たは塩化クロム酸ピリジニウム、 ｅ−酸 ｆ、０．０−ジメチルジアゾメチルホスホネートおよびｔ−ブトキシドカリウム （Ｎ２ＣＨＰ（０）（ＯＭｅ）、？／ＫＯＢｕ、）、ｇ、リチウム／アンモニア 。

化合物（Ａ）１７α−エチニルグログステロンの合成は流れ図上（１）→（２） →（３）→（蜀の順序を経て実施することができる。概念的に、合成は便宜上例 で説明する。

１．１７α−ホルミルグログステロン（３）の合成１７α−ヒドロキシメチル− ３β−ヒドロキシ−５−プレグネン−２０−オン（化合物（２）、Ｄ、ムクヘル シーおよびＣ，Ｒ，ｘ７ジエル、　５ｔｅｒｏｉｄｓ　＊　３４　＋３９７（１ ９７９）に従って調製）（５，２５β％）を温めた塩化メチレン（２５００ｍｌ ！　）中に溶解した。１８０〇−の塩化メチレンを蒸発させて除去する。冷却せ ずに濃縮溶液を、攪拌しながら塩化クロム酸ピリジニウム（ｔ３．５４Ｆ）に加 えた。蒸留水（０，５−）を加え、混合物を室温で１２５時間攪拌した。ワット マンＩＰＳ濾紙でａｈ適過後０液を薄層クロマトグラフ級のシリカゲル吸Ｍ　体 （７５０Ｐ　）を緊密につめたガラスカラム上に注いだ。その吸着体の上には砂 （１，５ｃＩｎ）を重層した。アセトン／塩化メチレン（２，５：　９７．５　 、　ｖ／ｖ）を用いてカラムから溶出させた。生成物（１７α−ホルミルゾレグ ンー５−エン−３，２０−ジオン）ｋ含す分画を混ぜ、蒸発された。残１ｋ、塩 化メチレン（２０ｙｄ）、メタノール（８０πｅ）および希塩酸（２０ｍｌ　） の混合物に浴解し、室温で３時間静置した。

塩化メチレンと蒸留水とを分離し、塩化メチレンを蒸発させると、１７α−ホル ミルプロゲステロンの残渣を得た。それはさらに精製せずに使用した。この化合 物を’Ｈ−ＮＭＲにかけると、δ：　０．８２　（１８−ＣＨ３）　。

１．１３（１９−Ｃ）Ｔ３）　、２．１８．（２１−ＣＨ６）　、５．６８（４ −Ｈ）および９．８０　（Ｈ−Ｃ＝Ｏ）　ｐｐｍにピークが現われた。また質量 分析にかけると、分子イオンｍ／ｅ　３４２　ｋ示した。

２．１７α−エチニルゾログヌテロン（Ａ）の合成１７α−ホルミルプロゲステ ロン（化合物（３）、７．１　ｔ　）　ｋ、ｏ、ｏ−ジメチルジアゾメチルホス ホネート（セイフェルスら、　Ｊ、　Ｏｒｇ、　Ｃｈｅｍ、　３６　、１３４８ （１９７１）およびギルバートおよびウエーランルジって調製、３．３８Ｐ）と テトラヒドロフラン（１４５−）中に溶かしたｔ−ブトキシド（２，５３ｐ）と の混合物と無水窒素雰囲気下−７８℃で１５．５時間反応させ、その後室温にま で暖めた。生成物は蒸留水で希釈し、塩化メチレンで抽出して得、続いて乾燥シ リカゲル上でクロマトグラフィーに掛け、アセトン／塩化メチレン（２，５：　 ９７．５　ｖ／ｖ　）で浴出させた。適当な分画を蒸発させ、最初にメタノール から最後にアセトニトリルから結晶化させて、純粋な１７α−エチニルゾロダル テロンを得た。融点は約１７９〜１８１℃であった。この化合物の１Ｈ−ＮＭＲ のピークはδ：０６３（１８−ＣＨ３）、１．１７　（１９−ＣＨ３）、２．２ ８（２１−ＣＨ５）、２４２（−Ｃミｃ−Ｈ）および５７２（４−Ｈ）　ｐｐｍ 　ｋ示した。高分解能質量分析によれば、分子イオンｙｎ／ｅ　３３８．２２４ ５　（計算値３３８．２２４５）を示した。

１７α−エチニル−５α−ノヒドログロヶ８ステロン（化合物（Ｂ）ｌ、すなわ ち流れ図によれば（１）→（２）→（４）→（５）→（Ｂ）である、は以下の合 成法によって記載することができる。その合成は理解しますいように流れ図で示 すような例で再び説明するが、それは１７α−ヒドロキシメチル−３β−ヒドロ キシ−５−プレグネン−２０−オン（前記の化合物（２））から誘導される１７ α−ヒドロキシメチル−３β−ヒドロキシ−５α３ −プレグナンー２０−オンの合成から始まる。

エタノール２０　ｍｌに溶かした１７α−ヒドロキシメチル−３β−ヒドロキシ グレグンー５−エン−２０−オン１５５ｍ９に活性炭触媒上のｌ０ｆｆラジウム ５０ｍ９に加え、そしてその混合物を水素雰囲気下、室温で１５時間水素添加し た。濾過して触媒を除き、溶媒全蒸発させると、１７α−ヒドロキシメチル−３ β−ヒドロキシ−５α−グレダナンー２０−オンから成る残渣を得た。この化合 物は塩化メチレン／メタノールから再結晶することができ、融点は２１３〜２１ ５℃でめった。Ｈ−ＮＭＲスペクトルはδ：０．６３（１８−ＣＨ３）　、　０ ．８０　（１９−ＣＥ（３）　、　２．１８　（２１−ＣＨ３）および３．４− ４．４．　（１７α−ＣＨ，、−ＯＨおよび３α−Ｈ）ｐｐｍにピークを示した 。

１７α−ヒドロキシメチル−３β−ヒドロキシ−５α−ゾレダナンー２０−オン （化合物（４）、１３０■）を塩化メチレン（２５ｍｌ　）に溶かした溶液に、 塩化クロム酸ビリノニウムを加えて室温で３時間攪拌した。反応混合物を塩化メ チレンを用いて抽出し、生成物１７α−ホルミル−５α−グレダナンー３，２０ −ジオン（化合物（５）　）　ｋ、溶出液としてアセトン／塩化メチレン（５二 ９５　、　Ｖ／Ｖ　）を用いてＳ　ｉＯ２カラムクロマトグラフイーによシさら にｍｌＡした。

−ジオン（Ｂ）の合成 １７α−ホルミル−５α−グレダナン−３，２０−ジオン（化合物（５）、９４ ．６　ｍ９　）、０，０−ジメチルジアゾメチルホスホネー）（５４ｒｎ９）お よびｔ−ブトキシカリウム（３６ｍ９）ｋ、前記の例２で記したようにテトラヒ ドロフラン（５，Ｏｒｎ！、）中で反応させた。１７α−エチニル−プロゲステ ロンのときに記したように、反応が進むと１７α−エチニル−５α−グレダナン −３，２０−ジオンが生成する。それをメタノールから再結晶させることができ る。生成物の融点は１７４〜１７５℃、’Ｈ−ＮＭＲのピークはδ：　０６４　 （１８−ＣＨ５）、１゜ＯＯ（１９−ＣＨ３）、２．２８　（２１−ＣＨ３）、 ２．４２（ｃ＝Ｃ）ｐｐｍを示し、質量分析スペクトルは分子イオン７ｔｐ／ｅ 　３４０を示した。

化合物（Ｂ）は、ステロイドΔ４−３−ケトンのよく知られたＬ　ｒＡＨ３還元 に基すいて、化合物（Ａ）から直接調製することもできる。しかしこの合成経路 外を上記の方法はど好ましくない。というのも、Ｃ−２（１ケトン基およびエチ ル基の共還元のために、通常複合混合物が得られるからである。それらはそれぞ れ主生成物である２０−ヒドロキシ−１７−エチニル誘導体および相当−計の１ ７−ビニル誘導体に変化する。しかしながら、混合物はクロマトグラフィーによ り分雅することができる。

次の３つの例（６〜８）は、共に１７α−エチニルプロゲステロン（Ａ）の６α −メチルおよび６−メチル−Δ類似体の合成を提示する。

６１７α−ホルミル−６α−メチルーゾロダステ１７α−ヒドロキシメチル−３ β−ヒドロキシ−〇−メチルプレグンー５−エンー２０−オンは、１７αヒドロ キシメチル−３β−ヒドロキシ−５−プレグネン−２０−オンの調製に用いた方 法（ｆｌｉ　１参照）と類似の方法によシ３β−アセトキシ−６−メチルブレグ ンー５−エン−２０−オンから調製した。それの融点は約２１９〜２３６℃、１ Ｈ−ＮＭＲのピーク（ＣＤＣ４３：ＣＤ３０Ｄ　、　１　：　１、ｖ／ｖ　）は 、０．６７　（１８−ＣＨ３）、１、　ＯＯ（１９−ＣＨ５）、１．６２　（６ −ＣＨ３）、２２０（２１４ＣＨ６）、３．３５　（３−Ｈ，ｍ　）、３．５７ および４、１７　（ＣＨ２−ＯＨ、２つの二重項、Ｊ＝１０Ｈｚ）、および分子 イオンｍ／８３６０．２６６６　（Ｃ，Ｈ３６０３の計算値は３６０．２６６４ 　）。例１の方法に従って酸化、異性化および精製すると１７α−ホルミル−６ α−メチルゾログステロンが生じた。それの　ＮｍＲのピークは、０、８３　（ ｉ　８−　ＣＨ，）、１．１３　（１，９−ＣＨ５）、１．０５（６α−ＣＨ３ １ｄｌＪ：６Ｈ２）、２．１８　（２］−−ＣＨ３）、５．７０（４−Ｈ，ｄ、 Ｊ＝１−２Ｈｚ）、および９７７（Ｈ−Ｃ＝Ｃ）　ｐｐｍ　ｆ示し、分子イオン ｍ／ｅ　３５６．２３５３′（Ｃ２３Ｈ３２０３の計算値は３５６．２３５３） を示した。

７．１７α−エチニル−６α−メチループロダステ例２の方法によって、１７α −ホルミル−６α−メチルプロダステロンを１７α−エチニル−６α−メチルゾ ログステロンに転化した。この化合物は約２００〜２０２℃で融解した。それの ’　Ｈ−ＮＭＲのピーク（ＣＤＣｌ２）は、１．、０５　（１８−ＣＦＩ３）、 １．１’３（１９−ＣＨ３）、１．０２（二重項、６α−ＣＨ５）、２３２（２ １−ＣＨ３）、２．３８（−Ｃ＝Ｃ−Ｉ（）および５６８（４−Ｈ，ｄ、Ｊ＝Ｉ Ｈｚ）ｐｐｍｋ示し、分子イオンｒｒｖ’ｅ　３５２．２４０６　（Ｃ２４Ｈ３ ２０２の計算値３５２．２４０１）を示した。

８、１７α−エチニル−６−メチルプレグナ−４，６デヒドロプログステロン） の合成 １７α−エチニル−６α−メチル−プロゲステロン（４０■）、ｐ−トルエンス ルホン酸（２ｒｎｇ）およびクロラニル（４０■）を還流しながら１時間キシレ ン（５ｍｌり中で反応させた。その結果得られる混合物全酢酸エチルで希釈し、 １俸水酸化ナトリウムと共に振盪し、有機層を減圧下で蒸発させた。生成物はシ リカゲルカラムのクロマトグラフィーにより得た。その際、溶出液は酢酸エチル ／ヘキサン（１：　３　、　ｖ／ｖ　）を用いた。純粋な１７α−エチル−６− メチルプレグナ−４，６−ジエン−３，２０−ジオンは、適当な分画を蒸発させ 、残渣を酢酸エチルから結晶化させて得た。

その融点は約２３４°〜２３６℃、’Ｈ−ＮＭＲのピークは０、７０　（１８− ＣＨ３）、１．０７　（１９−ＣＨ５）、１．８３（６−ＣＨ３）、２．３０　 （２１−ＣＩ（３）、２．４３（−Ｃ＝Ｃ−Ｈ）、５．８２（４−Ｈ）および５ ．９０（７−Ｈ）　ｐｐｍ　ｋ示し、その質量分析スペクトルは分子イオンｍ／ ｅ　３５０．２２４３　（計算値３５０．２２４５）を示した。

９．３−メトキシ−１７α−エチニル−１９−ノルプレグナ−１，３，５（１０ ）　−トリエンの合成粗３−メトキシー１９−ノルプレグナ−１、３、５（１０ ）−トリエン−２０−オール（０，９５７，、Ａ、クルバーおよびオリベット、 　Ｊ、　Ｏｒｇ、　Ｃｈｅｍ、　、　３１　、２４　（１９６５）に従って調製 ）を塩化メチレン（１００ｍ／）に溶かし、室温で５時間塩化クロム酸ピリジニ ウム（０，９ｇ−）と共に攪拌した。粗反応混合物をシリカゲルカラムの上に移 し、ＣＨ２Ｃ４２で溶出させた。その結果得られた３−メトキシ−１９−ノルプ レグナー１．３．５（１０）　−トリエン−２０−オンの’ＨＮＭＲはδ：　０ ９８　（１８−ＣＨ３）、２、１５　（２１−ＣＨ３）、および３．８　（０− ＣＨ３）　ｐｐｍでピークを示し、それのＩＲ（ＣＨ６）、中）は１７．０５ｃ ｍ−’で吸収帯を示した。この化合物を、３β−ヒドロキシ−５−プレグネン− ２０−オンをその１７α−ヒドロキシ−メチル類似体へ転化したときの方法（例 １に引用したムクヘルシーおよびエンジョルの方法参照）によシ、３−メトキシ −１７α−ヒドロキシメチル−１９−ノルプレグナ−１，３，５（１０）　−ト リエンに転化させた。粗生成物はシリカケ９ル乾燥カラムクロマトグラフイーに よシ精製した。その際、展開剤としてＣＨ２Ｃ４２に溶かした５係アセントを用 い、所望の１７α−ヒドロキシメチル誘導体を得た。その’Ｈ−ＮＭＲハ、δ： 　０．７０　（１８−ＣＨ３）、２．２０　（２１−ＣＨ３）、３、７６　（０ ＣＲ３）　ｐｐｍのピークおよび３７０と４．２０（１７α−ＣＨ２）に集中し た二重項ピークを示し、そのＩＲ（ＣＨＣｌ３中）は３４００　（ＯＨ）および １７０５（２０−Ｃ＝Ｏ’）ｃＩｎ−’に吸収帯を示した。

ＣＨ２Ｃ４２’　５０　ｙｄに溶かした後者の化合物（３１０ｍｇ）を、室温で １８時間塩化クロムｅｓリジニウム２５０ｍｇと共に攪拌した。混合物全直接乾 燥シリカダルカラム上に移し、塩化メチルに溶かした５％アセトンで溶出させた 。主要カラム分画は１７α−ホルミル−３−メトキシ−１９−ノルプレグナ−１ ，３，５（１０）　−２９ トリエン−２０−オンを含んでいた。それの１Ｈ−ＮＭＲはδ：　０８０　（１ ８−ＣＨ３）、２．２０　（２１−ＣＨ３）、３、７５　（０ＣＨ３）および９ ．８７　（−ＣＨｏ　）　ｐｐｍにピークを示し、それのＩＲ（ＣＨＣＬ３中） は１７２０　（ＣＨＯ）および１６９２　（Ｃ＝Ｏ）ｃｒｎ−１に吸収帯を示し た。この最後の化合物金側２の方法により、３−メトキシ−１７α〜エチニル− １９−ノルプレダナー１．３．５（１０）−トリエンに転化させた。それをシリ カケ９ルカラムクロマトグラフイーで精製し、メタノールから再結晶化した。そ れの融点は約１２３〜１２４℃であシ、それの高分解能質量分析スペクトルは分 子イオンｍ／ｅ３３６．２０８７（Ｃ２３Ｈ２８０２に対する計算値、３３６． ２０８８）を示し、’１（−ＮＰ訊はδ：　０．６０　（１８−ＣＨ３）、２２ ８（２１−ＣＨ３）、２．４８　（−Ｃ：ＣＨ）および３．７４（０−ＣＨ３） 　ｐｐｍにピークを示し、ＩＲは３３０５（ｃ＝ｃ−Ｈ）および１７００　（Ｃ ＝　Ｏ）　ｃｍ　’に吸収テトラブタノールおよびテトラヒドロフラン各１５− に溶かした１７α−ヒドロキシメチル−３−メトキシプレグナ−１，３，５（１ ０）　−トリエン−２０−オン（例９と同様に調製）（０，９８％）をアンモニ ア（６０ｍ）に溶かしたリチウム（０，８Ｐ　）と−７８℃−″　待人昭ＧＯ− ５０２１０００２）で反応させ、３．５時間後胞和塩化アンモニウム溶液（５ｍ ｌ）を加えて反応を止めた。窒素の気流をゆっく如と流して、加剰のアンモニア を蒸発させた。白色残ａを水で希釈し、酢酸エチル層と水層間で分離した。

有機抽出物を集め、乾燥させて、濃縮して粗反応生成物を得た。それをメタノー ル（５０ｍ７）に溶かし、１０％（ｖ／ｖ　）　ＨＣｔ溶液（１０ｍｌ）で処理 した。反応混合物を５０℃で１時間攪拌した。メタノールを蒸発させ、残渣を水 で希釈した。生成物を酢酸エチルで３回抽出した。有機抽出物を集め、硫酸す） 　ｌ）ラム上で乾燥させ、濾過して濃縮した。展開剤としてＣＨ２Ｃｌ２に溶か したアセトンを用い、粗反応生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに掛 けると、主要生成物として１７α−ヒドロキシメチル−２０−ヒドロキシ−１９ −ツルー４−プレグネン−３−オンを得た。それを１Ｈ−ＮＭＲに掛けると、δ ：　０．８０　（１８−ＣＨ３）、１３２（二重項、　２１−　ＣＨ３）、３． ５−４．２（１７−ＣＨ２０Ｈ）および５．７５　（４−Ｈ）　ｐｐｍＫ：ピー クが現れた。例１の方法に従って酸化すると、１７α−ホルミル−１９−ツルー ４−プレグネン−３，２０−ジオンを得た。それを、展開剤としてＣＨ２Ｃｌ２ ’ｅ用いて、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した。それを１Ｈ−出 化に掛けるとδ：０．８５（１８−ＣＨ３）、２．２０（２’１−　ＣＩ（３） 、５．７３（４−１（）および９８０１ （−ＣＨｏ　）　ｐｐｍにピークが現われた。壕だそのＩＲスペクトルは、Ｉ　 ７２０　（ＣＨＯ）、１’７１０（Ｃ＝Ｏ）および１６７０（エノン）Ｃｎ１− １に吸収体を示した。この化合物を例２の方法によって、１７α−エチニル−１ ９−ツルー４−プレグネン−３，２０−ジオンに転化した。これを、ＣＨ２Ｃ６ ２に溶かした３％アセトンを用いて、シリカダルカラムクロマトグラフィーで精 製し、メタノールから再結晶を繰り返した。それを高分解能質量分析スペクトル に掛けると、分子イオンｍ／ｅ３２４、２０８８　（Ｃ２２Ｈ，２８０２に対す る計算値３２４．２０９９）を示した。それのＩＲは３３０２（−Ｃ：Ｃ−Ｈ） 、１７０５　（２０−Ｃ＝Ｏ）および１６８０（３−エノン）副−１に吸収帯を 示し、’　Ｈ−ＮＭＲはδ：　０６８　（１８−０Ｍ３）、２．２８　（２１− ＣＩ（３）、２．４０（−ＣミＣＨ）および５．８０　（４−Ｈ）　ｐｐｍにピ ークを示した。

リチウム線（１（ｌＩ＆）ｋ含む液体アンモニア（２５ｍｌ　）に、ジオキサン およびエーテル各１．５　ｍｌ！に沼かした１７α−ヒドロキシメチル−２０− ヒドロキシ−１９−ツルー４−プレグネン−３−オン（例１０でのように調製） （１３０■）を加え、混合物を一７８℃で２時間攪拌した。飽和塩化アンモニウ ム２ゴを添加してその反応を止めた。上記の反応により粗反応生成物を得、それ をＣＨ２Ｃ７２（５ｏηｉ）に溶解し、塩化クロム酸ピリジニウム（１２０Ｉ・ ｊ））で４・匹埋した。混合物を窓温で３時間攪拌した。その反応混合物を短か いセリノドカラｌ−’ｒ通して濾過し、濾液と塩化メチレン洗液を訃わせ、復線 した。得られた残流をシリカケ９ルカラムクロマトグラフイーで精製した。その 際溶出剤としてＣＨ２Ｃｌ２を用い、１７α−ホルミル−１９−ツルー５α−プ レグナン−３，２０−ジオン全行た。それを高分解能質量分析スペクトルに掛け ると、分子イオンｍ／ｅ３３０２１９６（Ｃ２，Ｈ３ｏＯ３に対する計算値、３ ３０．２１９５）を示し、”ＨＮＭＲはδ二０．８２（１８−ＣＨ，）、２．２ ．０　（２１−ＣＨ３）および９．８２　（−ＣＨＯ）ｐｐｍにピークを示した 。この化合物金側２の方法に従って、１７α−エチニル−１９−ツルー５α−プ レグナン−３，２０−ジオンに転化した。これをシリカゲルカラムクロマトグラ フィーで精製した。この化合物の高分解能質量分析スペクトルは、分子イオンｍ ／ｅ３２６２２４４（Ｃ２２Ｈ３ｏＯ２に対する計算値３２６．２２４５）を示 し、ＩＲは３３０２　（Ｃ：Ｃ−Ｈ）およびｊ７０８（３，２０Ｃ＝　Ｏ）　ｃ ｍ−’に吸収バンドを示し、’　Ｈ−ＮＭＲはδ：　０６２　（１８−ＣＨ３） 、２．２９　（２１−ＣＨ３）、および２．４２（ｓ、、−ＣミＣＨ）　ｐｐｒ ｎにピークを示した。

３３ プロゲステロンおよびアンドロケ９ン受容体結合１７α−エチニルプロゲステロ ン系および何種かの既知プロダスターダンの生体外での生物活性７ハ、ニスドロ ーダンで前処理した未成熟ウサギ子宮の細胞質プロゲステロン受容体に対する、 これらのプロゲステロン関連化合物の結合親和性（ＲＢＡ　）を測定して判断す る。結果を表１に総括した。

エストローケ゛ンで前処理した未成熟ウサギ子宮の細胞質プロゲステロン受容体 に対する、一連の１７α−エチニルプロダステロン類および他の既知ゾロダスタ ーケ゛ン類の相対結合親和性（ＲＢＡ　）。培養時間は１６〜１８時間。

プロゲステロン　１００ １７α−エチニルグログステロン　１５６５α−ジヒドロ−１７α−エチニルプ ロゲステロン（ロット１）１ル ボノルダストレル　エ１１ プロゲステロン　１００ １７α−エチニルグログステロン　２６７特表昭Ｇ　Ｏ−５０２１００（１３） ５α−ジヒドロ−１７α−エチニル−プロゲステロン（ロッ）１）８６ ５α−ジヒドロ−１７α−ビニルプロゲステロン　４７アノセイ３ プロゲステロン　１００ １７α−エチニルプロゲステロン　１４４３３ ５α−ジヒドロ−１７α−ビニル−プロゲステロン　５１プロゲステロン　１０ ０ １７α−エチニル−１９−ノルプロゲステロン　１００５α−ジヒドロ−１７α −エチニル−１９−ノルプロゲステロン７ ６α−メチル−１７α−エチニルプロゲステロン　６３６α−メチル−１７α− アセチルゾレグンー４−エン−２０−イン−６α−メチルプロゲステロン　５７ プログステロン　１００ １７α−エチニル−１９−ノルプロゲステロン　１３３５α−ジヒドロ−１７α −エチニル−１９−ノルプロゲステロン６ ６α−メチル−１７α−エチニルグログステロン　６７６α−メチル−１７α− アセチルグレグンー４ーエン−２０−イン−プロゲステロン　１００ ６α−メチル−１７α−エチニルプロゲステロン　９１６α−メチル−６−ｆヒ ドロ−１７α−エチニルグログステロン０４ 表１のデータが示すところによれば、通常１７α−エチニルグログステロン系列 の化合物は、プロゲステロンよシ強くプロゲステロン受容体に結合する。０℃で １６〜１８時間の標準培養で試みた３回のアッセイによシ判断すると、１７α− エチニルプロゲステロン系統からは、ウサギ子宮のプロゲステロン受容体に対し て、１８９±５５（×±Ｓ．Ｄ．　）の相対結合親和性（　ＲＢＡ　）が得られ た。１７α−エチニルグログステロンの５α−還元類似体からも、ＲＢＡが１５ ４±２３の高い結合親和性が得られた。ひとつの疑わしい結果（ＲＢＡ＝１１） は、発明者らが誤まりであると思ったので、平均値に含めなかった。すなわち、 標識プロゲステロンの結合は非常に低く、還元体から得られた結果は疑わしくな った（恐らく受容体が少ししか存在しなかった）。それ故、１７α−エチニルグ ログステロンの５位還元体を使用しても、プロゲステロン受容体に対する結合親 和性への影響はほとんどない。

５α−ジヒドロ−１７α−ビニルプロゲステロンｉ、１７α−エチニルプロゲス テロンから５α−シエヒ ドロ−１７α−エチニルグログステロンを調製する過程で、過剰に還元された副 産物として得られた。２種ノ１７ーαーエチニル化グログヌテロンに対してこの 化合物のＲＢＡは実質的に低値（　ＲＢＡ　＝　４　７、５１）を示した。この ことは、プロケミステロン受容体への強い結合にとって１７α−エチニル基が重 要であることを示している（表１）。

２つの別のアッセイにおいて、プログ９ステロン受容体に対する】７α−エチニ ル−１９−ノルプロゲステロンのＲＢＡはそれぞれ１００および１３３であった （表１　）。故に、］］７αーエチニルプロダステロンノ１０βメチル基を除去 しても、プロゲステロン受容体親和性は高まらず、プロゲステロンに対する親和 性と同じであった。ところが、１９−ノルプロゲステロンのＲＢＡは、プログ９ ステロンのＲＢＡが１００であるの３７ に対して、２５８であった（コントウラら、ＡｃｔａＢａｄｏｃｒｉｎａｌ、　 ７８　ｔ　５７４　ｙ　１９７５　）　ｏそれにもかかわらず、１７α−エチニ ル−１９−ノルグログステロンのプロゲステロン結合受容体親和性はプロゲステ ロン自体のそれよシも若干太き因だけであった。

相当する５α還元型化合物、５α−ジヒドロ−１７α−エチニル−１９−ノルグ ログステロン＋７）　ＲＢＡは、２つの別のアッセイで６６および６７であった 。

これは、１９−ノル型のＣ−４の不飽和結合が、グログステロン受容体結合親和 性に著しく寄与していることを意味する（表１）。

１７α−アセトキシプロゲステロンの６α−メチルまたは６−メチル−６−デヒ ドロ誘導体（すなわち、プロペラ（商品名）および酢酸メジエステロール）は、 強い経口活性のある黄体化合物として知られている。

それ故、ｘ’ｒα−エチニルプロゲステロンの６α−メチルまたは６−メチル− ６−デヒドロ誘導体が調製され、プロゲステロン受容体に対するそれらの結合親 和性が測定された。２つの別のアッセイで、６α−メチル−１７α−エチニルプ ロゲステロンのＲＢＡ値、ツレぞれ６７および９１であった。さらに、プロゲス テロン受容体に対する６α−メチル−６−ジヒドロ−１フα−エチニルプロゲス テロンのＲＢＡは１０４であった（表１）。反対に、６α−メチル−１７α−エ チニル″″″　待人昭ＧＯ−５０２１０００４）プロゲステロンのＣ−１？立体 異性体は、プロゲステロン受容体に対する結合親和性が大幅に減少していた（　 ＲＢＡは５および６）。これによシ、１７α−エチニル−１７β−アセチル基の 立体化学的配置が、この系列においてはプロゲステロン受容体に対して極めて重 要であることが示された。

１７α−エチニルプロゲステロンおよび５α−ジヒドロ類似体それぞれに対して 培養時間が１６〜１８時間である表１のデータと比較して、発明者らはさらに、 ０℃で２時間培養してアッセイした場合、ＲＢＡは３５２および２１１であるこ とを測定した。これの重要性は、デウトンおよびレイノードの研究（Ｊ、　Ｓｔ ｅｒｏｌｄＢｉｏｃｈｅｍ、　９　、９　＋　（１９８７）およびＫｎｄｏｃｒ ｉｎｏｌｏｇｙ１０５．５０９．（１９７９））およびデウトンらの研究（Ｊ、 　５ｔｅｒｏｉｄ　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　９　、８３６　（１９７８））から分る 。彼等は、天然のホルモンとその細胞質受容体間の相互作用の動力学と関連して 選ばれた様々な培養条件下で、ＲＢＡを測定したが、それがステロイドホルモン の作用剤および拮抗剤をスクリーニングするための生体外アッセイとなシ得るこ とを確立した。短時間培養（例えば２時間）後０℃で記録したＲＢＡ値は、主に 拮抗リガンドの結合定数における差異を反映してお多、−刃長時間培養（例えば １６ないし２４時間）後および（または）高温で測定したそれは、もっばら９ 拮抗リガンドの解離定数によって影響を受ける。短時間培養後に測定されるＢＲ Ａは、主に天然ホルモンに例えられる拮抗剤の結合に左右されるが、反対に、長 時間培養後に測定されるＲＢＡは、天然ホルモンに例えられる拮抗剤の解離に左 右される。短時間および長時間両培養に対する１７α−エチニルプロゲステロン および５α−ジヒドロ類似体のＲＢＡは、１００以上であるので、これらの化合 物の結合定数はプロゲステロンより高いといえ、その解離定数はプログ９ステロ ンよシ低いといえる。このような特徴は、強力な黄体物質として非常に望ましい 。

ＲＢＡを測定するアッセイ法は、この分野でよく知られておシ、本質的に、ウサ ギ子゛ばのプロゲステロン受容体に対する拮抗リガンドの１つとして、放射線標 識プロゲステロンを用いる拮抗結合アッセイ法に相当する。またいかなる他のリ ガンド（もちろん非放射線活性である）の結合親和性も、既知量のそのリガンド に放射線標識したプロゲステロンを加えて、限定された数の結合部位に対して拮 抗させることによって測定できる。アッセイ成分を混合し、平衡化させて、未結 合の放射線標識物を活性炭によシ除去する。残シの試料上清中にカウントされた 放射線活性は、結合プログステロンノ測定値を直接示し、それ故、結合拮抗リガ ンドおよびそれに関連した相対（プロゲステロンに対して）結合親和性の直接の 測定値となる。このアッセイ法を更に詳しく知シたい場合は、例えば、リールら 。

Ｆｅｒｔｉｒｉｔｙ　ａｎｄ　５ｔｅｒｉｌｉｔｙ　ｒ　３１　ｅ　５５２　（ １９７９）を参照するとよい。表１で示されたＲＢＡ　’に測定するときの特別 な条件および試薬は次のとうシである。

動物種：未成熟雌ニーーシーラント白ウサギ、体重０８〜１．０Ｋ９（ダッチラ ンド研究所、デン／Ｎ　Ｎ　＜９：３０）皮下に処理。最後に注射して２４時間 後、動物を解剖。

組織：各子宮の重さは約１．０？、２または３個の子宮を各アッセイのために保 存しておいた。

識ホルモンおよび化合物浴液のために、０．０１　ｒｙｉＴＥｓ。

ｐＨ７，４，１綱ＥＤＴＡ、０．０１２　Ｍチオグリセロールおよび３０％グリ セロール。（Ｂ）活性炭溶液のために、０．０１ＭＴＥＳ　、　ｐＨ７，４，１ ｍＭＥＤＴＡおよび０．０１２ＭチオダリマンボリトロンＰｔ、１０ｅ使用し、 ５または６回５秒間破砕する。１回の破砕操作の間、３０秒間冷却する。

温度：すべての段階で０〜４℃。

遠心：１時間４５．００Ｏｒｐｍ、５０Ｔｉ　ｏ−ター、ペエクマンＴ、　８− ８０超遠心機。

ン２２．　ＯＯＯｃｐｍ／　０．１　ｍｌ。

ン、０１−試験試薬、０．３　ｄ緩衝液。

培養：４〜６℃で１６〜１８時間。

濃度：１×１０　ＭからｌＸ１ｏ　Ｍ（７段階製方法：未結合放射線活性を除去 するために活性炭吸着法を用いた。デキストラン被覆活性炭（０５チノリトＡお よび０．０５　％デキストランＴ−７０）０．５ｍｌを、総数射線活性試験管を 除くすべての試験管に加え（緩衝液０．５　ｍ／添加）、試験管を３５秒間振り 、１０分間静置し、０〜４℃にてペックマンＴＪ−６遠心機（２０００ｒｐｍ　 ）で１０分間遠心した。上清分画（０，６ｍｌ　）を液体シンチレーション１０ ｒｎ！、の中に傾捨し、２０分の冷却後パラカード液体シンチレーションスペク トロメーター３２５５で１分間カウントした。

データ解釈 拮抗結合曲線は、拮抗剤の濃度に対する結合〔３Ｈ〕グロダステロンの／（’− セントの値を取って描ける。それぞれの化合物の相対結合親和ｔ’ｌＥ　（ＲＢ Ａ　）は次の等式を用いて言１算した。

〔Ｐ〕５ｏ＝結合〔３Ｈ〕グログステロンを緩衝液対照（１００％結合〔３ＦＩ 〕グログステロン）の５０づまで減少させるに必要な未標識プロゲステロンのモ ル濃度、 〔Ｃ〕５ｏ＝結合〔３Ｈ〕プロダヌテロンを緩衝液対照（１００チ結合（’ｕ） 　ｆロケ゛ステロン）の５０チまで減少させるに必要な試験化合物のモル濃度。

１７α−エチニルプロゲステロン（Ａ）ノフロダステロン受容体結合親和性は高 いけれども、その化合物の雄ラットアンドロゲン受容体への結合親和性は極めて 低いため、それはほぼ全くアンドロケ゛ン副作用を示さない。データ全表２に示 す。

成熟ラット前立腺の細胞質アンドロゲン受容体に対スる１７α−エチニルプロゲ ステロンの相対結合親５α−ジヒドロテストステロン　１００１７α−エチニル プロゲステロン　０．０９アンドロゲン受容体に対するＲＢＡ　、おそらくアン ドロダン活性の測定に用いられるアッセイ法は、グログステロン受容体結合親和 性の測定に用いられるアッセイ法ト同じである。ただ結合部位が、プロゲステロ ン受容体ではなくアンドロゲンのそれであることが異なる。このアッセイ法はよ く知られておシ、様々なところで記載されている。例えば、カニンガムら。

５ｔｅｒｏｉｄｓ　＊　３３　ｔ　２６１　（１９７９）　ニライトら。

Ｊ、　５ｔｅｒｏｉｄ　Ｃｈｅｍ、　Ｉ　０　、４１９　（１９７９）　；およ び、参照。表２のデータを得るために定められた特別な条件、試薬等を以下に記 す。

前立腺いくつかを各アッセイのために保存した。

希釈率：１：１ 緩衝液：　０．０５　Ｍ　トリスＨＣ１，０，０５Ｍ　トリス塩基、１　？？＋ ＭＥＤＴＡ　、　０．１５　ｎＭジチオスレイトール。２３２ｍｆ７ＤＤＴ／ｍ ｌ蒸留水（１５娼）の溶液を製り、この溶液１０μｌを細胞質１ゴに加え、最終 濃度０．　Ｉ　５　ｒｒＭとした。

均質化ニブリンクマンポリトロンｐｔ、　１０　（３，５にセット）使用。５秒 間破砕、３０秒間冷却、これを３回縁勺返す。

−タ）使用。４５．００　Ｏｒｐｍ　１時間。

２５、　ＯＯＯｃｐｍ／　０．１　ｍｌ。

混合ｉ：ｏ１ｍｚ細胞質、０．１　ｍｌ　”Ｈ−ジヒドロテストステロン、ｏ、 　ｉ　ｆｎｌ試験化合物、０３−緩衝液。

方法：未結合放射線活性を除去するため活性炭吸着法を使用。デキストラン被覆 活性炭（０５チノリトＡおよび０．０５％デキストランＴ　−７０）　０．５　 ｍｌを総数射線活性試験管を除くすべての試験管に加え（緩衝液０．５７ｎＩ！ 、添加）、試験管を３５秒間振り、１ｏ分間静置し、０〜４℃にてベックマンＴ 　Ｊ　−６遠心機（２０００ｒｐｍ　）で１０分間遠心。上溝を液体シンチレー ション１０ｍ１中に傾捨し、２０分の冷却後ノｅ　７力−ド液体シンチレーシミ ンスベクトロメーター３２５５で１分間ログステロン受容体結合アッセイで上述 したと同様に計算した。

黄体活性 １７α−エチニルプロゲステロン（Ａ）オヨヒ１７α−エチニルー５α−ジヒド ログステロン（Ｂ）ｏ黄体活性を、クローベルブアッセイ法（クローベルブ、　 Ｚｅｎｔｒ。

（１９３５））によって調べた。未成熟ニー−ノーランド白ウサギの皮下に、１ 日目、３日目、５日目に、ピーナツ油０．５艷に溶かしたエストロン５μ？を注 射した。７日目、８日目、９日目および１００日目、そのウサギに皮下または経 口的に０．５１ｒｄ！のピーナツ油（対照）、プロゲステロンおよび試験化合物 を処理した。

最後の注射（１１１日目の１日後、動物を解剖し、子宮を摘出して、重さをはか った。各子宮角の中心部５一部位を切除し、１０％ホルマリン（中性緩衝液）で 液浸固定した。固定した子宮断片を切シ、加工し、包埋して、６ミクロンの切片 を製った。染色後、子宮内膜の樹枝状化の程度を、立体顕微炉下でマクフェイル 指数（０〜４）によシ評価した。指数Ｏは子宮内膜の樹枝状化が全く生じていな い（黄体活性なし）を示し、ｌから３へと段階的に活性の程度が増し、４は最高 の反応を示す。

皮下に注射した１７α−エチニルプロゲステロンの生体内での黄体活性（表１お よび表２で示されたような生体外でのデータとは反対に）は、表３および表４に 示す如く、プロゲステロン自体の活性と比較でき、非常に都合がよい。ここで重 要なこととして、皮下注射した１７α−エチニルプロゲステロンは、皮下注射し たグログステロンと実質的に同様かそれ以上の効果を発揮することに注意すべき である。子宮の重さとマクフェイル指数の検索から分かるように、皮下注射の場 合投与量がおおよそ１０分の１ないし２０分の１であることは１０ないし２０倍 、効果が強いことを意味している。

明らかに、表３は、経口投与の１７α−エチニルプロゲステロンと皮下（ｓｃ　 ）投与のグログステロンとの比較を示しているが、同等の投与量の場合、経口１ ７α−エチニルプロゲステロンの活性は皮下グログステロンのそれに等しいこと が分かる。

最初のパイオアンセイで、１７α−エチニルプロゲステロンの皮下への投与量は 、５０．１００．２００および４００μｇ−／ウサギ／日であった。４段階のす べての投与量で、完全な黄体反応がみられた（表４）。

投与量と反応との関係を確立するために、１７α−エチニルプロゲステロンの評 価をさらに低い４段階の皮下投与量で試みた。この化合物は、２．５μ２／μｌ ／ウサギ／活性を示さないが、この量の倍では部分的な黄体反応がみられた。１ ０および２０μｍ／ウサギ／日の７ 皮下投与量で最大の黄体反応が生じた（表３）。同様の方法でグログステロンを 段階的に投与して調べると、プロゲステロンと比較して１７α−エチニルプロゲ ステロンの効力を判定することができた。マクフェイルの等級に対して投与量の 対数（底１０）ｋプロットすると、１７α−エチニルプロゲステロンの黄体への 効果は、皮下に投与した場合、プロゲステロンよシも１３倍高いことが推定され た。

クローベルブアッセイＩｋよる１７α−エチニルプログ９ステロンの黄体活性化 合物　１日の投与量０子宮重量ω　マクフェイル指数（０〜４）（μｌ／ウサギ ）　（ｘ＋Ｓ、Ｄ、）　（ｘ±Ｓ、Ｄ、）対照（ｓｃ　）　０．５ｍ７　１．５ １±０．７５　０．０８±ｏ、１１（ピーナツ油） プロプステロン　５０．０　１．０９±０．０９　０．８５±０．４１（ｓｃ） 　１００．０　１．６４±０．２３　２．９０±０．２８２００．０　２．８３ ±〇、２６　３：９７±０．０５１７α−エチニル　２．５　０．９０＋０．０ ６　０．１７±０．２３１０．０　３．２３±０．８３　３．８３±０．１２２ ０．０　４．４１±０．３３　４．００±０．００１７α−エチニル　１０．０ 　０．９４±０．０９　０．０８±０．１１５０．０　０．８６±０．０２　０ ．００ｍ１ｍ０．００１００．０　１．７９±０．６３　１．３８±１．４６＊ 　このアッセイでは、ニストロダンで前処理した未成熟ニューシーラント白ウサ ギを使用。方法は、リールら、Ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　５ｔｅｒｉｌｉｔ ｙ　＋　３１　＋　５５２　＋（１９７９）参照。

＊＊　このアッセイでは、投与グループあたり３匹のウサギを使用。ピーナツ油 または化合物を指定のとぅシに注射した・クローベルブアッセイＣによる１７α −エチニルグログステロンの黄体活性化合物　１日の投与量＊“　子宮重量（ロ ）　マクフェイル指数（０〜４）（μｇ／ｆｔサギ）　（ｘ±Ｓ、Ｄ、）　（Ｘ ±Ｓ、Ｄ、）対照（ｓｃ）　０．５ＴＩ１．０．６２±０．１０　０　±０．０ ０５０　５．５４±０．１８　４．０　±０．００１７α−宅し　１００　４． １９±０．２２　４．０　±０．００ニア″′テ”　２００　４．９９±０．８ ９　４．０　±０．００＊　このアッセイ法では、エストロゲンで前処理した未 成熟ニー−シーラント白ウサギを使用。

方法は、リールら、Ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　５ｔｅｒｉｌｉｔｙ＋３１． ５５２　、（１９７９）参照。

＊＊　この方法では、投与量あたり３匹のウサギを使用。ピーナツ油および化合 物を、皮下（ｓｃ）に注射した。

１７α−エチニルグログステロンの経口黄体活性に関するさらに詳しい知見を得 るため、この化合物を別のアッセイで投与量を高めて試験した。最初のアッセイ （表３）と対照的に、１７α−エチニルグログステロンは、１００μｇ／ウサギ ／日（表５）の経口投与量で活性を示さなかった。この観察結果によれば、この 化合物のこの量は経口的に閾値に近いことが示唆される。１７α−エチニル！ロ グステロン／ウサギ／日２００および４００μＩの経口投与量で刺激すると、部 分的な黄体反応がある（表５）。

５α−ジヒドロ−１７α−エチニルグログステロンをクローベルグア、セイによ り、５　、１０．２００，２００μｇ／ウサギ／日の量を皮下投与、および１０ ０．２００．４００μｇ／ウサギ／日の量を経口投与して評価した（表６および 表７）。この化合物は、皮下であろうと経口投与であろうと、試験したすべての 投与量で活性がないことが確められた。

１７α−エチニル−１９−ノルプロゲステロンをクローベルブアッセイによシ、 ２．５，５，１０．２０μ９Ａ小ン日の量を皮下に投与、および５０，１００， ２００，４００μ９／ウサギ／日の量を経口投与して評価した。皮下投与した場 合、１７α−エチニル−１９−ノルプロゲステロンはプロゲステロンより約１０ ０倍作用が強がった。

ところが、経口投与した場合、１７α−エチニル−１９−ノルプロゲステロンの 作用は、おおよそ皮下に投与したプロゲステロンと同等の強さであった（表７お よび表８）。

６α−メチル−１７α−エチニルプロゲステロンをクローベルブアッセイにより 、２．５，５，１０゜２０μｇ／ウサギ／日の量を皮下投与、および１０，２５ ゜５０．１００μ９／ウサギ／日の量を経口投与して試験した（表７および表８ ）。皮下投与した場合、６α−メチル−１７α−エチニルグログステロンは、プ ロゲステロンに比べてほぼ２０ないし４０倍作用が強かった（表８）。経口投与 した場合、６α−メチル−１７α−エチニルプロケ”ステロンは、皮下投与した プロゲステロンより４倍強力であった（表７）。なお、以下の両化合物を経口投 与した場合、６α−メチル−１７α−エチニルプロゲステロンの作用は、６α− メチル１７−アセドキシグログステロン（商品名、プロペラ）より少々くとも２ 倍強かった（表７）。

６−メチル−６−ジヒドロ−１フα−エチニルプロゲステロンをクローベルブア ッセイにより、５．１０゜２５．５０μｇ／ウサギ／日の量を経口投与して評価 した（表９）。経口投与の場合、この化合物の作用は、皮下投与したプロゲステ ロンに比べて８倍以上強かった。

さらに、６−メチル−６−ジヒドロ−１フα−エチニルゾロケ゛ステロンの作用 力は、両化合物とも経口投与した場合、レポノルグステレルと等しいことが確め らクローベルブアッセイ”による、１７α−エチニルグログステロン、レポノル グステレルおよび酢酸メドロキシノロケゝステロン（商品名、７０ロベラ）の経 口黄体活性 １７α−エチニル　１００　１．１３±０．２Ａ、　０．２５±０．３５プロゲ ステロン　２００　１．．６７±０．３３　１．４０±１．５０（経口）　４０ ０　１．７０±０．５０　１．８０±１，７０レボノルゲス　１００　３．５７ ±１．０８　３．９０±０．１２トレル（経口）　２００　２．８０士旧４　４ ．００±０．００４００　２．６７±０．８０　３．７０±０．４７酢酸メドロ キ　１００　２．６５±０．３５　３．９０±０．１３シゾログステ　２００　 ３．３０±０．４１　４．００±０．００ロン（経口）４００　３．７３±０． ６１　４．００±０．００市このアッセイでは、エストロゲンで前処理した未成 熟ニューシーラント白ウサギを使用。方法は、リールら、　ＦｅｒｔｉＨｔｙ　 ａｎｄＳｔｅｒｉｌｉｔｙ　、　３１　、５５２　（１９７９）参照。

＊＊このアッセイでは、投与群あたり３匹のウサギを使用。ピーナツ油又は化合 物は、指定のとうりに投与。

５３ クローベルブアッセイ９による５α−ジヒドロ−１７α−エチニルプロダステロ ンの黄体活性 化合物　１日の投与量０　子宮重量■　マ〃エイル指数（０〜４）（μｐ切片） 　（ｘ±Ｓ、Ｄ、）　（ｘ±Ｓ、Ｄ、）５α−シシグヒ１トゞ「ゴー１７α−５ ０，９６±０．２９　０．０８　±０．１２モｈ咽グーわ啼５ン　１０　１．３ ３±０．０９　０．２９±０．２４（Ｂｃ）（ロット２）　２０　１．０３±０ ．１７　０．０４±０．０６５α−り」勺−１７α−１００１，００””　０° ＊七ｈＭｌｈわりやン　２００　１．３０±０．２２　０．０４±００６（経口 ）（ロット２）４００　１．１０±０．０８　０．０４±００６申　このアッセ イでは、エストロゲンで前処理した未成熟ニューシーラント白ウサギを使用。方 法は、リールら。

Ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　５ｔｅｒｉｌｉｔｙ　＋　３１　＋　５５２　＋ 　（１９７９）参照。

＊＊　このアッセイでは、投与グループあたり３匹のウサギを使用。ピーナツ油 または化合物を指定のとうりに注射した。

＊林解剖時、ウサギ１匹は雄であることがわかり、もう１匹には子宮角がちった 。それ故、このデータはこの群の中の残り１匹から得られたものである。

待人昭Ｇｏ−５０２１０００８） クローベルブアッセイ１による、５α−ジヒドロ−１７α−エチニルグログステ ロン、１７α−エチニル−１９−ノルプロゲステロン、６α−メチル−１７α− エチニルグログステロンおよび６α−メチル−１７α−プ５ケ〉ソロｙ（ｓｃ） 　２００．０　３．００±０．９３＊＊＊　３．９４±０．０６＊＊＊５α−穴 部−１７α−１００，０１，１８±０．２５　０．１３±０．１３：ｆ−ｆ−Ｊ η５グ乃−ン　２００．０　１．１５±０．０７　０．５８±０１６（ａ　ｃ　 ）　４００．０　１．２４±０．０９　０．３３±０．０６１７α−ニジｂ＝シ レー１９−　５０．０　１．４１±０．０２　０．３８±０．２７カＷヤ吹ンブ フン　１００．０　１．７２±０．３６　１．１７±１．１０（経口）　２００ ．０　１．７０±０．３３’　０．８３±０．７２４００．０　３．４０±１． １４　３．７５±０．１０６α−メチル−１０，０１，２８±０．３７　０．６ ７±０．４２１７α−エチニル−２５，０２，４３±０．４１　２．６７±１． ００プロゲステロン　５０．０　３．２１±０．７９　３．９２±０．１２（経 口）　１００．０　３．２８±０．３５　４．００±０．００６Ｃ１−メｆルー 　５．０　１．０８±０．０１　０．２９±０．０６１７α−アセトキシ　１０ ．０　１．３５±０．３４　０．７１±０．０６プログステロン　２５．０　１ ．１２±０．１９　０．２５±０．１０（経口）　５０．０　２．８２±０．９ ２　３．００±０．８３１００．０　２．１１±１．２８　２．６６±１．１０ ＊　このアッセイでは、エストロゲンで前処理した未成熟ニューノーランド白ウ サギを使用。方法は、リールら。

Ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　５ｔｅｒｉｌｉｔｙ　、　３１　＋　５５２　＋ 　（’　１９７９　）参照。

＊＊　このアッセイでは、投与グループあた９３匹のウサギを使用。ピーナツ油 または化合物を指定のとうシに注射した。

＊＊＊　この群の１匹のウサギは、実験期間中に死亡した。このデータはこの群 の残９の２匹の動物から得られた。

クローペルグア、セイ＊による、１７α−エチニル−１９−ノルプロゲステロン 、６α−メチル−１７α−エチニルグログステロンの黄体活性化合物　１日のａ −ｂｒ”　子宮重量（ト）　マ〃エイル指数（０−４）（ｔｔｇ７ｔｓギ）　（ ｘ±Ｓ、Ｄ、）　（ｘ±Ｓ、Ｄ、）１７α−エチニル−２，５２，６４±０．２ ２　３．２５±０．４１１９−ノルゾロケ゛ス　５．０　３．５５±０．５４　 ３．９７±００５テロン　（ｎ　ｃ　）　１０．０　４．５７±０．６７　３． ９２±０．１２２０．０　４．９４±０．８７　４．００±０．００６α−メチ ル−２，５１，３１±０．２０　０．２１±００６１７α−エチニル−５，０１ ，８４±０．４８　１．２９±１．４０プロゲステロン　１０．０　３．６８± ０．３１　３．９２±０．１２（ｓ　ｃ　）　２０．０　３．６９±０．６２　 ４．００±０．００＊　このアッセイでは、ニストロダンで前処理した未成熟ニ ューノーランド白ウサギを使用。方法は、リールら、　Ｆ６１−ｔｉｌｉｔｙａ ｎｄ　５ｔｅｒｉｌｉｔｙ　＋　３ユ、５５２．（１９７９）参照。

＊＊　このアッセイでは、投与グループあたり３匹のウサギを使用。

ピーナツ油または化合物は皮下に注射。

１本　試験中１匹のウサギは死亡し、剖検の際もう１匹は卵巣がなく子宮角は萎 縮していた。データはこの群の残りの１匹から得られた。

林＊本試験中１匹のウサギは死亡した。データはこの群の残り２匹のウサギから 得られた。

クローベルブアッセイ９による、６−メチル−６′−デヒドロ−１７α−エチニ ルプロデステロンおよびレボノルゲストレルの黄体活性化合物　１日の投与量” 　子宮重量Ｇ）マクフェイル指数（０〜４）（μ９／’）Ｍギ）　（ｘ±８．Ｄ 、）　（ｘ±Ｓ、Ｄ、）プロゲステロン　２００．０　１．６５±０．３０　１ ．７９±０．５０６−メチル−６−５，００，９９±０．３４　０．００±００ デヒドロ−１７α−１０，０１，１１±０．２３　０．１７十０．１２エチニル プロケプ　２５．０　２．９３±１．３３　３．３３±０．６２テロン（経口） 　５０．０　３．５９±０．４３　４．ｏｃ＋ｔｏ、ｏ。

＊　このアッセイでは、エストロゲンで前処理した未成熟ニー−シーラント白ウ サギを使用。方法は、リールら＋　Ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　５ｔｅｒｉｌ ｉｔｙ　、　３１　＋５５２、（１９７９）参照。

＊＊　このアッセイでは、投与グループあたり３匹のウサギを使用。ピーナツ油 または化合物を指定のとうりに注射した。

投与量レベル ヒトの女性および実験動物を対象とした何種かの薬理活性に関して、最近すぐれ た総説が出版された（　Ｆ、ノイマン＋　Ｐｒｏｓｔｇｒａｄ、　Ｍｅｄ、　Ｊ 、ｒ　５４　（補遺２）。

１１〜２４．１９７８）。ある化合物の黄体活性において、カウフマンアッセイ （卵巣摘出したまたは閉経女性をニストロダンで前処理した後の子宮内膜の形質 転換）とクローベルブアッセイ（エストロゲンで前処理した未成熟ウサギ）とは 高い相関性が見られた。表３からノイマンの代表例として、閾値すなわち有効投 与量を以下に示す。

クローベルブアッセイ　カウフマンアッセイ（ｒｎ９／動物）（１ｎ９／サイク ル）プロダスターダン　経口　５ｃ（ｉ、ｍ、）　経ロプロダステロン　１０． ０　０．５　２００（ｉ、ｍ、）ノルエチステロン　０．１〜０．３　０．１　 １００〜１５０（ト）ノルダストノル　０．０３〜０．１　０．０３　１２レポ ノルダストレル　０．０３　０．０１〜００３　６ノルエチノドレル　０．３　 ０．３　１５０〜２００酢酸メトヤ七η５ｔリーン　０．０１〜０．０３　０． ０１〜０．０３　４０〜７０酢酸メジエストロール　０．０３　０．０１〜０． ０３　３５〜５０併用経口避妊薬は、プロダスターダン０５ないし２．５■を含 み、プロダスターダン単独の経口避妊薬は活性化合物０．３５ソを含む（Ｊ、Ｅ 、フックおよびり、ヘルナンデツ、　Ｊ、　Ａｍｅｒ、　Ｐｈａｒｍａｃｅｎｔ 、　Ａｓ５ｏｃ−ｒ　ＮＳ　１４　＋２４５〜２５１．１９７４）。長期作用注 射型の避妊薬ノリスタート（商品名）（シ、エリングＡ、Ｇ、　、エナント酸ノ ルエチンドロン）を８週毎２００■で筋肉内投与する。またデポ−プロペラ（商 品名）（アブジョーン、酢酸メドロキシプロダステロン）ヲ、６週毎３ｏ。

ｍｔ２で、または３週毎１５０Ｔｎ９で筋肉内投与する（ベックらｒ　Ｒｅａｅ ａｒｃｈ　Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ　ｉｎ　ＦｅｒｔｉｌｉｔｙＲｅｇｕｌａｔｉｏ ｎ。

Ｇ、１．ザトゥチ（編）、第１巻、第１号、１〜１６頁。

１９８０：ナノシュ、　Ｈ−Ａ、　、　Ｃｏｎｔｒａ、ｃｅｐｔｉｏｎ　ｒ　１ ２　＋３７７〜３９３．１９７５）。ゾロベラ（商品名）（アッｆジョーン、酢 酸メドロキシゾログステロン）を、ホルモン不均衡による二次的無月経または子 宮の不正出血の治療のために、１０１ｎ？錠で毎日投与する（　Ｐｈｙｓｉｃｉ ａｎ’ｓ　Ｄｅｓｋ　Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　、　１９８０　ｒ　１７８４頁）。

メガス（商品名）（メードジョンンン、酢酸メジエステロール）を、進行した乳 癌および子宮内膜癌の緩和治療に利用する。乳癌に対する望ましい投与量は分割 投与で１６０■／日（４０〜錠＋　ｑ、ｔ、ｄ、）であシ、子宮内膜癌の場合は ４０ないし３２０■／日である（　Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ　Ｄｅｓｋ　Ｒｅｆ ｅｒｅｎｃｅ、　１９８０　＋１１１６頁）。

実験的に、子宮内膜癌患者１２人にリン酸ポリエストラジオール８０１ｎ９を単 独で投与し、続いて３ないし７週間、９人にカプロン酸１７α−ヒドロキシプロ ゲステロン１２５０■を週２回筋注し、３人にカプロン酸１９−ツルー１７α− ヒドロキシプロゲステロン３００〜を週２回投与した。１２人すべての患者から の掻爬検体で、核酸の著しい阻害が見られた。これはこの治療法の有効性を示す ものである（ノルクビス）　、　Ｓ。

Ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　、ブルユシュ、　Ｍ、Ｇ、、、Ｒ，Ｗ 、ティラーおよびり、Ｃ，ウィリアム（編）　、Ｗｉｌｌｉａｍ　Ｈｅｉｎｅｍ ａｎＭｅｄｌｃａｌ　Ｂｏｏｋｓ　、　Ｌｔｄ、　＊ロンドン、１９７３．３３ 頁）。

この限られた数の例に基ずくと、ヒトに黄体活性が現われる容量は０．００７■ ／ｋｇないし２５〜／ｋｙの範囲であり、これは本発明の使用に考えられる範囲 である。

グログステロンおよび１７α−エチニルプロゲステロンによるラットの排卵遮断 を評価するために、ビーティーおよびコルビンの方法（Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏ ｇｙ　＋９Ｌ８８５（１９７５）’）を用いた。発情周期のあるラットに、発情 が静止してから１３３０時間後、ピーナツ油０２ｍ、ｌ　（対照）、プログステ ｏｙ、１００，２５０，５００　ｔｔ９ｔたは１．７α−エチニルプロゲステロ ン、５０，１００゜２５０．５００μｇを単独で皮下注射した。処理したラット を発情が予想される日の朝解剖し１．もし卵があれば、卵管から洗い出し、数を 数えた。

ピーナツ油で処理した５匹のウサギすべては、平常数の卵を排卵した。同様に、 グログステロン、１００．２５０μｇｔ’＊は１７α−エチニルプロゲステロン ５０μｇで処理したラットも、通常どうりの排卵をした。ところが、プロゲステ ロン５００μｇまたは１７α−エチニルプロゲステロン１００．２５０．５００ μｇを投与されたラットのほとんどは、排卵が遮断された（表１０）。このデー タから、１７α−エチニルプロゲステロンは、う、ットの排卵遮断に関して、グ ログステロンより５倍も強いことを示している。ベティーおよびコルビンの研究 （Ｅｎｄｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、９７　、８８５　（１９７５）　）では、（±） −ノルケ゛ストレルも、排卵抑制において、プロゲステロンより５倍の有効性が あった。それ故、このアッセイにおいて１７α−エチニルプロゲステロンは、（ ±）−ノルケ゛ストレルと有効性が等しいようであった。

プロケ゛ステロンおよび１７α−エチニルグログステロン１によるラットの排卵 遮断化合物　投与量０　（４）　（Ｂ） （μｇ／ラット）　（ｘ±Ｓ　、Ｄ、　）（４）　排卵のあったラットの数／排 卵のあったラットの数（Ｂ）　排卵のあったラットの卵管内の卵の数＊　このア ッセイには、発情周期のあるチャーシスリバーＣＤラットを使用。方法は、ベラ ティー、　Ｃ，Ｗ、およびＡ。

コルビン、　Ｅｎｄｃｒｉｎｏｌｏｇｙ　ｒ　９ヱ、８８５（１９７５）参照。

林　ラットのそれぞれの群（５匹／群）に、発情が静止してから１３３０時間後 、ピーナツ油０．２７ｄ（対照）または化合物（０，２Ｖ！のピーナツ油に溶解 ）を単独皮下に注射した。

ラットは、発情が予想される日の朝、注射後４３ないし４４時間で解剖した。卵 があれば、卵管から洗い出し、立体顕微鏡下で数を数えた。

１７α−エチニルグログステロンによるラットの膣脂膏標本で判定されたように 、連続的に４日間の発情周期を示す、５匹のラットの各群に毎日１ｏ日間、１７ α−エチニルグログステロン、５０，１００゜２５０．５００μ夕を皮下注射し た。平行して、対照群には０．２　ｍのピーナツ油を毎日処理した。発情後期に 始める処理を、１ｏ日の処理期間の間毎朝およびその後の１６ないし１８日間行 ない、同時に膣脂膏標本を取った。

対照のラットすべてと１７α−エチニルグログステロン５．０μ 周期が規則的に続いた。一方１７αーエチニルゾａｙステロン、１００，　２５ ０，５００μｇ／日処理したラットの発情周期は乱れた。１７α−エチニルグロ グステロン１００μ 日あるいは４日目までに発情前期に入ったが、正常周期でのような発情は続いて 起きなかった。むしろ、次の２日または３日間観察した膣脂膏標本パターンは、 発情後期−発情静止期の状態と一致していた。これに次いて順次、発情前期およ び発情後期−発情静止期が、残り２または３日の処理期間に、再び現われた。こ の結果が示すところによれば、濾胞の発育はある程度起きたが、排卵は処理期間 中抑制された。処理後２ないし１０日で、ラットに規則的な発情周期が現われる という事実から、１７α−エチニルグログステロンの効果は可逆的であることが 分かる。同様の発情周期パター７が、１７α−エチニルプロゲステロン２５０μ ｇ／日の処理期間中観察されたが、処理後の規則的な発情周期の回復は、１７α −エチニルプロゲステロン１００μ！９／日の場合よシもより遅れだ（７ないし １２日）。

１７α−エチニルプロゲステロン１００μ！９／の効果は、この化合物をよシ低 レベルで投与したときより劇的であった。１０日処理の全期間を通じて、ラット は完全に発情静止期のままであった。これは、濾胞の発育および排卵が効果的に 抑制されたことを示している。正常な４日間の発情周期はすべてのラットで処理 中止後７ないし１２日間で回復した。

抗アンドロゲン活性 ６−）ｆルー６−ジヒドロ−１フα−エチニルプロゲステロンの経口抗アンドロ ゲン活性は、去勢未成熟雄ラットでのアッセイによって評価した（レルナーら＊ 　Ｐｒｏｃ．　Ｓｏｃ．　ＥＸＰ．　Ｂｉｏｌ．　Ｍｅｄ．　＋　１　０　３　 ＋　１　７　２（１９６０））。このアッセイ法は表１１の脚注に簡単に示す。

７日間経口投与（４００μｇ／ラット／日）して、同時にテストステロン（４０ ０μｇ／ラット／日）を皮下投与した場合、６−メチル−６−ジヒドロ−１フα −エチニルゾロダステロンは抗アンドロダン活性を発揮しだ。それは、前立腺重 量の著しい抑制により示された（表１１）。貯精嚢の重量も、同じ投与量レベル で抑えられたが、その減少量は極めて著しいものではなかった。同様の経口投与 量で、酢酸メジニストロールも、抗−アンドロダン活性を著しく発揮した。とこ ろが、皮下に注射したプログステロンは、４００μｇ／ラット／日程度毎日投与 しても活性を示さなかった。

６Ｓ 待人ｔｌａＧＯ−５０２１００（２１）０−（ｖ′）　の　へ　寸　ω ０　リ　Ｏ寸　→　０　寸 ０　０　０　ｅ、ｌ　０　０　０　０　０　ＣＱ　０　（）　０　０寸　寸　寸 　寸　−寸　寸　寸　寸　−寸　寸＊　この方法では、去勢した未成熟ラットを 使用。

方法は、レルナー、　Ｌ、Ｊ、、Ａ、ビアンチおよびＡ、ボルマンｒ　Ｐｒｏｃ 、Ｓｏｃ、Ｅｘｐ、Ｂｉｏｌ、Ｍｅｄ、　＋　１０３　＋　１７２　＋１９６０ 参照。

料　ラットの各群（７匹／群）に、７日間毎日、ゴマ油０．３　ｍｌ（対照）ま たは化合物（０，３−のゴマ油に溶解）を投与。アンドロゲン活性を評価するた め、皮下または経口投与で２種の黄体化合物を同時に与えた群もある。最後の投 与後１日して、ラットを解剖し、アンドロケ゛／標的器官の重さを量った。

＊＊＊テストステロン（４００μｇ／ラット／日）皮下注射群に対して、統計学 的有意（ｐ＜０．０５）に低い器官重量。ダンカンの複範囲試験（Ｄｕｎｃａｎ ’ａＭｕｌｔｉｐｕｌｅ　Ｒａｎｇｅ　ＴｅＢｔ）に関連した分散量解析により 決定した。器官重量が有意に低いことは、抗アンドロケ゛ン活性が明らかである ことを示している。

国際調査報告

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．１７β−アセチル−１７α−エチニルステロイド類。 ２゜ （、）　次式のステロイド ４ および （ｂ）　次式のステロイド 〔上式中、 Ｒ１はメチル、エチルおよびプロピルより成る群より選ばれ、 ＲはＨおよびメチルより成る群より選ばれ、・Ｒ３はオキソおよびＨ（ＯＲ”） より成る群より選ばれ、（ａ） Ｒ４はＲ２、Ｈ（メチル）、Ｉ（（ＣＡ）　、Ｈ（Ｆ）、および＝ＣＨ２よシ成 る群より選ばれる）であり、または（ｂ） （上式中、 ＲはＨ、メチル、ＣｔおよびＦよシ成る群よシ選ばれる）であり、 ７０ ＲはＨｌまたは 炭素数１ないし１２のアシル、 炭素数５ないし７の１−シクロアルキル、シクロアルキル基が５ないし７の炭素 原子を有する１−メトキシシクロアルキルおよび１−ニドキシンクロアルキル、 シクロアルキル基が５ないし１０の炭素原子を有スルシクロアルキルカルボニル 、 １−−ｙダマンチル力ルボニル、 １−シクロペンチルカルボニル、 から成る群より選ばれる薬理学的に許容し得る置換基、Ｑ−３は−ＣＨ＝ＣＨ− または−ＣＨ２−ＣＨ２−）より成る群より選ばれるステロイド。 待人ａａ６ｏ−５ｏｇ１ｏｏ　（２） （上式中、 Ｒはメチル、エチルまたはプロピル、 ＲはＨまたはメチル Ｒ４はＲ２、Ｈ（メチル）、Ｈ（Ｃ６）　、Ｈ（Ｆ）、およびＳ−Ｑは−ＣＨ＝ ＣＨ−または−ＣＴ（２−ＣＨ２−）で表わされる請求の範囲第２項記載のステ ロイド。 ４、　前記ステｏイ）’が１７α−エチニル−５α−グレダナンー３，２０−ジ オンである請求の範囲第３項記載のステロイド。 ５、前記ステロイドが１７α−エチニル−１９−ツル−５α−グレダナンー３， ２０−ノオンである言青求の範囲第３項記載のステロイド。 Ｒはメチル、エチルまたはプロピル、 Ｒは■またはメチル、 Ｒ４はＲ２、Ｈ（メチル）、ｎ（ｃｚ）　、Ｈ（Ｆ）または−ＣＲ２およびＳ− Ｑは一〇）（＝ＣＩ（−または−ＣＨ，、、−Ｃ：Ｒ２−）で表わされる請求の 範囲第２項記載のステロイド。 ７、前記ステロイドが１７α−エチニル−４−プレグナン−３，２０−ノオンで ある請求の範囲第６項記載のステロイド。 ８　前記ステロイドが１７α−エチニル−１９−ツルー４−プレグネン−３，２ ０−＆オンである請求の範囲第６項記載のステロイド。 ９、前記ステロイドが１７α−エチニル−６α−メチル−４−プレグネン−３， ２０−ジオンである請求の範囲第６項記載のステロイド。 １０、前記ステロイドが１７α−エチニル−６−メチレン−プロゲステロンであ る請求の範囲第６項記載のステロイド。 Ｊｌ、前記ステロイドが１７α−エチニル−６−メテレンー１９−ノルプロダス テロンである請求の範囲第６項記載のステロイド。 （上式中、 Ｒはメチル、エチルまたはプロピル、 ＲはＨまたはメチル、 ＲはＨ１メチル、塩素捷たはフッ素、およびＳ−Ｑは−ＣＨ＝ＣＨ−または−Ｃ Ｈ２−ＣＩ（２−）で表わされる請求の範囲第２項記載のステロイド。 １３、前記ステロイドが１７α−エチニル−６−フチルー４，６−ゾレグナノエ ンー３，２０−ジオンである請求の範囲第１２項記載のステロイド。 Ｒはメチル、エチルおよびプロピルよシ成る群より選ばれ、 ＲはＨおよびメチルより成る群よシ選ばれ、ＲはオキソおよびＨ（ＯＲ５）より 成る群よ９選はれ、７４ （、） Ｒ４はＲ２、Ｈ（メチル）、Ｈ（ｃｚ）、Ｈ（Ｆ）および＝ＣＨ２より成る群よ シ選ばれる）であυ、または（ｂ） （上式中、 ＲはＨ１メチル、ＣｔおよびＦよシ成る群より選ばれる）であシ、 Ｑ−３は、−Ｃ）（＝ＣＨ−および＝ＣＲ２−ＣＨ２〜よシ成る群より選ばれ〕 で表わされる化合物を黄体活性が発現するに足る量で、哺乳動物に投与すること を特徴とする、前記哺乳動物に黄体反応を惹起させる方法。 １５、前記ステロイドが Ｒ１はメチル、エチルまたはプロピル、ＲはＨまたはメチル、 Ｒ４はＲ２、Ｈ（メチル）、Ｈ（Ｃｔ）またはＨ（Ｆ）、ＲはＨ１メチル、Ｃｔ またはＦｌおよびＳ−Ｑは−ＣＨ＝ＣＨ−または−〇Ｈ２−ＣＨ２−）より成る 群よシ選ばれる請求の範囲第１４項記載の方法。 １６　前記の惹起される黄体反応が、繁殖力を調節するため、発情を調節するた め、ホルモン置換を行なう６ ため、ホルモン不均衡を矯正するため、ステロイド反応性の増生および腫瘍を治 療するためである請求の範囲第１４項記載の方法。 １７、前記ステロイドが１７α−エチニル−４−プレグネン−３，２０−ジオン である請求の範囲第１５項記載の方法。 １８、前記ステロイドが１７α−エチニル−１９−ツルー４−プレグネン−３， ２０−ジオンである請求の範囲第１５項記載の方法。 １９　前記ステロイドが１７α−エチニル−６α−メｆｖ−４−ｆレグネン−３ ，２０−ジオンである請求の範囲第１５項記載の方法。 ２０、前記ステロイドが１７α−エチニル−６−メチレンーブロケ゛ステロンで ちる請求の範囲第１５項記載の方法。 ２１４　前記ステロイドが１７α−エチニル−６−メチレン−１９−ノルプロケ ゞステロ／である請求の範囲第１５項記載の方法。 ２２、前記ステロイドが１７α−エチニル−６−メチル−４１６−：７’レグナ シエン−３，２０−ジオンである請求の範囲第１５項記載の方法。 ２３、前記哺乳動物が飼育動物である請求の範囲第１５項記載の方法。 ２４、前記踊乳動物が愛玩動物である請求の範囲第１５項記載の方法。 ２５　前記ホルモン不均衡が臨床的ｒ無月経と表って表われる請求の範囲第１５ 項記載の方法。 ２６、前記ステロイド反応性の腫瘍が、乳癌、子宮内′膜癌、前立腺癌および良 性前立腺肥大のひとつである請求の範囲第１５項記載の方法。 ２７、前記ステロイドを、体重１キログラム当り約０．００７ないし２５ｍｇの 量で非経口的に投与する請求の範囲第１５項記載の方法。 ２８、前記ステロイドを、体重１キログラム当シ約０００７ないし２５ｍ９の量 で経口的に投与する請求の範囲第１５項記載の方法。 ２９　前記ステロイドをエストロゲンと組合わせて経口投与する請求の範囲第１ ５項記載の方法。 ３０前記エストロゲンがエチニルエストラジオールである請求の範囲第２９項記 載の方法。 ３１．１７β−アセチル−１７α−ヒドロキシメチルステロイドを対応する１７ β−アセチル−１７α−ホルミルステロイドに酸化し、該１７β−アセチルー１ ７α−ホルミルステロイドを１７β−アセテルー１７α−エチニルステロイドに 転化することからなる１７β−アセテルー１７α−エチニルステロイド類の調製 法。 ３２−　前記１７β−アセチル−１７α−ホルミルステ７８ ０イドをテトラブトキシカリウムの存在下、無水溶媒中で０，０−ツメチル・ノ アジメチルホスホネートと反応させる請求の範囲第２９項記載の方法。 ３３、　（ａ）　次式のステロイド （ｂ）　次式のステロイド Ｒはメチル、エチルおよびゾロビルよす成る群よシ選ばれ、 ＲはＨおよびメチルより成る群より選ばれ、Ｒ３はオキソおよびＨ（ＯＲ５）よ シ成る群より選ばれ、７９　待人昭Ｇｏ−５０２１００（４）（ａ） ＲはＲ２、Ｈ（メチル）、Ｈ（Ｃｔ）、Ｈ（Ｆ）、オヨび＝ｃＨ２よす成る群よ り選ばれる）であり、または（ｂ） ＲはＨ、メチル、ＣｔおよびＦよシ成る群より選ば炭素数１ないし１２のアシル 、 炭素数５ないし７の１−シクロアルキル、シクロアルキル基が５ないし７の炭素 原子を有する１−メトキシシクロアルキルおよび１−エトキシシクロアルキル、 シクロアルキル基が５ないし１０の炭素原子を有スルシクロアルキルカル？ニル 、 １−７ｒマンチルカルボニル、 １−シクロペンチルカルボニル、 から成る群より選ばれる薬理学的に許容し得る置換基、Ｑ−８は−ＣＩ（＝ＣＩ （−または−ＣＨ２−ＣＨ２−３より成る群より選ばれるステロイド。 ３４、前記ステロイドが１７α−ホルミルゾログステロンである請求の範囲第３ ３項記載のステロイド。 ３５、前記ステロイドが１７α−ホルミル−１９−ノルプロダステロンである請 求の範囲第３３項記載のステロイド。 ３６、前記ステロイドが１７α−ホルミル−６α−メチル−プロゲステロンであ る請求の範囲第３３項記載のステロイド。 ３７、前記ステロイドが１７α−ホルミル−６−メチルプレグナ−４，６−ノニ ン−３−オンである請求の範囲第３３項記載のステロイド。 ３８、前記ステロイドが１７α−ホルミル−３−メトキシ−１９−ノルゾレグナ ー１．３．５（１０）　−トリエン−２０−オンである請求の範囲第３３項記載 のステロイド。 ３９、前記ステロイドが１７α−ホルミル−５α−プレグナン−３，２０−ジオ ンである請求の範囲第３３項記載のステロイド。 ４０、前記ステロイドが１７α−ホルミル−１９−ツルー５α−プレグナン−３ ，２ｏ−フォノである請求の範囲第３３項記載のステロイド。 ４１　前記ステロイドが１７α−エチル−３−メトロキシ−１９−ノルゾレグナ ー１．３．５（１０）　−）ジエン−２０−オンである請求の範囲第３３項記載 のステロイド。 ４２、特許請求の範囲第２項記載の黄体活性ステロイドと薬剤的に許容し得る担 体を含む組成物。 １