JPS6039560A - 食品・醸造物中の亜硫酸の微量検出法 - Google Patents
食品・醸造物中の亜硫酸の微量検出法Info
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- JPS6039560A JPS6039560A JP14758183A JP14758183A JPS6039560A JP S6039560 A JPS6039560 A JP S6039560A JP 14758183 A JP14758183 A JP 14758183A JP 14758183 A JP14758183 A JP 14758183A JP S6039560 A JPS6039560 A JP S6039560A
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- sulfurous acid
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- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
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- G01N33/02—Food
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- Engineering & Computer Science (AREA)
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- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は液中亜硫酸の微量検出法に関し、特に、食品、
醸造の分野で問題と々る微量の亜硫酸を高感度で定量す
ることのできる微量検出法に関する。
醸造の分野で問題と々る微量の亜硫酸を高感度で定量す
ることのできる微量検出法に関する。
ワイン、カンビョウなどの飲料品や食料品には抗酸化、
防腐、漂白などの目的で亜硫酸処理しているものがあり
、とれらの残存亜硫酸を測定管理する必要がある。この
ような亜硫酸の定長方法としては、従来から滴定法（ヨ
ードメトリー）、比色法（ｐ−ローザニリン法）、蒸留
法などが知られているが、いずれも定量限界あるいは必
要試料量などにおいて十分なものでガく、着た、操作も
煩雑であった。
防腐、漂白などの目的で亜硫酸処理しているものがあり
、とれらの残存亜硫酸を測定管理する必要がある。この
ような亜硫酸の定長方法としては、従来から滴定法（ヨ
ードメトリー）、比色法（ｐ−ローザニリン法）、蒸留
法などが知られているが、いずれも定量限界あるいは必
要試料量などにおいて十分なものでガく、着た、操作も
煩雑であった。
滴定法は、工、の標準液な用い、ＳＯ，をＩ、で滴定す
るものであるが、定量限界が１０ ｐｐｍ程度と大きく
検出感度が十分なものではｋかった。
るものであるが、定量限界が１０ ｐｐｍ程度と大きく
検出感度が十分なものではｋかった。
比色法は、８０．とホルムアルデヒドおよびｐ−ローザ
ニリン（ｐ −ｒｏｓａｎｉｌｉｎｅ ） との反応を
利用し、ｐ−ローザニリンメチルスルホン酸を比色定量
する方法であって、定量限界が１ ｐｐｍ程度であり未
だ十分なものではなかった６また、上記２つの方法では
遊離の８０２シか定量できず、結合されたＳＯｌを含め
た全ＳＯ７を定量するには予め水酸化ナトリウムなどで
加水分解しておく必要があった。
ニリン（ｐ −ｒｏｓａｎｉｌｉｎｅ ） との反応を
利用し、ｐ−ローザニリンメチルスルホン酸を比色定量
する方法であって、定量限界が１ ｐｐｍ程度であり未
だ十分なものではなかった６また、上記２つの方法では
遊離の８０２シか定量できず、結合されたＳＯｌを含め
た全ＳＯ７を定量するには予め水酸化ナトリウムなどで
加水分解しておく必要があった。
蒸留法は、炭酸ガスなどの不活性ガス雰囲気下に試料中
のＳＯｌを蒸留し、過酸化水素水溶液で捕集してＳ０４
！−に変化させ、これをＮａ ＯＨで滴定するものであ
り、定量限界は０．１ ｐｐｍ程度で感度が高いものの
、１００７！程度の試料を必要としｇ！！、景分析には
適さず、また、定量操作も煩雑であった。
のＳＯｌを蒸留し、過酸化水素水溶液で捕集してＳ０４
！−に変化させ、これをＮａ ＯＨで滴定するものであ
り、定量限界は０．１ ｐｐｍ程度で感度が高いものの
、１００７！程度の試料を必要としｇ！！、景分析には
適さず、また、定量操作も煩雑であった。
本発明は、このような従来方法のもっている問題点を解
決し、微量試料を用いて高感度で液中ＳＯ！を検出する
ことができ、しかも定量操作が容易な検出方法を提供す
ることを目的とする。
決し、微量試料を用いて高感度で液中ＳＯ！を検出する
ことができ、しかも定量操作が容易な検出方法を提供す
ることを目的とする。
すなわち、本発明の液中亜硫酸の検出法は、試料液にＮ
−（９−アクリジニル）マレイミドを添加し、試料液中
の亜硫酸とＮ−（９−アクリジニル）マレイミドとを反
応せしめることを特徴とする。
−（９−アクリジニル）マレイミドを添加し、試料液中
の亜硫酸とＮ−（９−アクリジニル）マレイミドとを反
応せしめることを特徴とする。
以下、本発明についてさらに詳細に説明する。
Ｎ−（９−アクリジニル）マレイミ）’（ＮＡＭ）は、
それ自体は無螢光であるが、ＳＲ基と特異的に反応して
発螢光性の付加化合物を生成する螢光試薬として、奈良
らによって合成されたものであ、り ［Ｙ＋ Ｎａｒａ
ａｎｄ Ｋ、 Ｔｕｚｉｍｕｒａ、 ＡｇｒＩｃ。
それ自体は無螢光であるが、ＳＲ基と特異的に反応して
発螢光性の付加化合物を生成する螢光試薬として、奈良
らによって合成されたものであ、り ［Ｙ＋ Ｎａｒａ
ａｎｄ Ｋ、 Ｔｕｚｉｍｕｒａ、 ＡｇｒＩｃ。
Ｂｉｏｔ、 Ｏｈｅｍ、 、旦、７９３（１９７８））
、生体試料中の低分子チオール化合物（システィン、グ
ルタチオンなど）や薬物関連チオール化合物（Ｎ−アセ
チルシスティン、カプトゾリル■々ど）の微量定員法と
して応用されている。
、生体試料中の低分子チオール化合物（システィン、グ
ルタチオンなど）や薬物関連チオール化合物（Ｎ−アセ
チルシスティン、カプトゾリル■々ど）の微量定員法と
して応用されている。
本発明者らは、ＮＡＭが亜硫酸と反応してＳＯ２−ＮＡ
Ｍ を形成して螢光を発し、このＳＯ，−ＮＡＭの螢光
強度が非常に強く、等モル濃度のシスティン−ＮＡＭよ
シも強いことを見い出した。
Ｍ を形成して螢光を発し、このＳＯ，−ＮＡＭの螢光
強度が非常に強く、等モル濃度のシスティン−ＮＡＭよ
シも強いことを見い出した。
さらに−高速液体クロマトグラフィー（ＩＩＰＬＯ）に
よシ、クロマトグラム上で８０．−ＮＡＭのピークが検
出されることを見い出した。
よシ、クロマトグラム上で８０．−ＮＡＭのピークが検
出されることを見い出した。
ＮＡＭを溶媒、例えばアセトンに溶解しく好ましくは試
料中の５Ｏ１０１０〜１００倍モル程度）、この溶液と
試料液とを、Ｎａ２ Ｃｏ＠ −ＨＩ Ｂ ０３ ’
ＫＯｔ緩衝液などの緩衝液中でｐＨ７〜１ｏ、好ましく
はｐＨ８，８テ混合すると、８０．− ＮＡＭ −ＪＥ
影形成れて濃青色の螢光を呈する（螢光最大波長４３５
ｎ ｍ ％励起最大波長３６０ｎｍ）６試料液の量け０
．１〜ｌ−程度で十分である。
料中の５Ｏ１０１０〜１００倍モル程度）、この溶液と
試料液とを、Ｎａ２ Ｃｏ＠ −ＨＩ Ｂ ０３ ’
ＫＯｔ緩衝液などの緩衝液中でｐＨ７〜１ｏ、好ましく
はｐＨ８，８テ混合すると、８０．− ＮＡＭ −ＪＥ
影形成れて濃青色の螢光を呈する（螢光最大波長４３５
ｎ ｍ ％励起最大波長３６０ｎｍ）６試料液の量け０
．１〜ｌ−程度で十分である。
定量測定のためには、混合後３５℃、３０分程度保持し
、８０．− ＮＡＭ を生成させたのち、螢光分光光度
計により測定するのが好ましい。
、８０．− ＮＡＭ を生成させたのち、螢光分光光度
計により測定するのが好ましい。
さらに、ＨＰ Ｔ、 Ｏで分離、定量することも可能で
ある。とくに、試料中に８Ｈ基含有化合物が共有する場
合にＮＡＭはこれとも反応し、また、Ｈ，８゜メルカプ
タンなどが多量に共存した場合には悪影響を受けるが、
□ｕ ＋＋ 、 Ｈｇ ＋＋などの重金属で８Ｈ化合物
をマスフレ８０．のみを測定するか、またはＨＰＬＯに
よって８０．−ＮＡＭビークを分離することでＳＯ７を
正確に定量することができる。
ある。とくに、試料中に８Ｈ基含有化合物が共有する場
合にＮＡＭはこれとも反応し、また、Ｈ，８゜メルカプ
タンなどが多量に共存した場合には悪影響を受けるが、
□ｕ ＋＋ 、 Ｈｇ ＋＋などの重金属で８Ｈ化合物
をマスフレ８０．のみを測定するか、またはＨＰＬＯに
よって８０．−ＮＡＭビークを分離することでＳＯ７を
正確に定量することができる。
本発明の検出方法によれば、少ない試料で、且つ、簡便
な操作で液中の遊離および結合型ＳＯ７を定量すること
ができる。本発明の方法は、一般的なＳ０２検出試薬と
して、特に、飲料品、食料品中の亜硫酸の定量、ビール
などの醸造に際しての発酵反応によシ生成する亜硫酸の
定量 １に肩側である。
な操作で液中の遊離および結合型ＳＯ７を定量すること
ができる。本発明の方法は、一般的なＳ０２検出試薬と
して、特に、飲料品、食料品中の亜硫酸の定量、ビール
などの醸造に際しての発酵反応によシ生成する亜硫酸の
定量 １に肩側である。
実施例１
終濃度が反応液中で１．２．４．６．８および】Ｏｎｍ
ｏ１７ｍｌになるようにｓｏ、の水溶液０．１ ｍｌを
、ｐＨ８，８（Ｄ緩衝液３．０ ｍおよびＮＡＭ ＋７
）７セトン溶液０．４ ｍｌ （ＮＡＭの終濃度Ｉ／′
ｉ１００ｎｍｏｔ／＋＋＋／とした）に加えてよく混合
し、３５℃で１時間反応させた後、励起波長３６０ ｎ
ｍ、螢光波長４３５ｎｍで螢光測定した。得られた検ｆ
１−線を第１図に示した。
ｏ１７ｍｌになるようにｓｏ、の水溶液０．１ ｍｌを
、ｐＨ８，８（Ｄ緩衝液３．０ ｍおよびＮＡＭ ＋７
）７セトン溶液０．４ ｍｌ （ＮＡＭの終濃度Ｉ／′
ｉ１００ｎｍｏｔ／＋＋＋／とした）に加えてよく混合
し、３５℃で１時間反応させた後、励起波長３６０ ｎ
ｍ、螢光波長４３５ｎｍで螢光測定した。得られた検ｆ
１−線を第１図に示した。
また、終濃度が反応液中で０．１．０．２． ’０．４
．０．６゜０８および１． Ｏｎ ｍｏｌ／ｍｅになる
ようにｓｏ、の水溶液０．１−を、ｐＨ８，８の緩挿Ｉ
液３． ＯａｒｅおよびＮＡＭのアセトン溶液０．４
ｍｌ！ （ＮＡＭの終濃度（ｄ ｉ ｏ ｎｍｏｌ／ｍ
ｌ とした）に加えてよく混合し、３５℃で１時間反応
させた後、励起波長３６０ｎｍ％螢光波長４３５ ｎｍ
で螢光測定した。得られた検前線を第２図に示した。
．０．６゜０８および１． Ｏｎ ｍｏｌ／ｍｅになる
ようにｓｏ、の水溶液０．１−を、ｐＨ８，８の緩挿Ｉ
液３． ＯａｒｅおよびＮＡＭのアセトン溶液０．４
ｍｌ！ （ＮＡＭの終濃度（ｄ ｉ ｏ ｎｍｏｌ／ｍ
ｌ とした）に加えてよく混合し、３５℃で１時間反応
させた後、励起波長３６０ｎｍ％螢光波長４３５ ｎｍ
で螢光測定した。得られた検前線を第２図に示した。
略施例２
ｐＨ８，８の緩衝液３．０−１終濃度として４ｎｍｏｔ
、６艷になるようなＮＡＭのアセトン浴液０．２−およ
び終濃度として４ ｎｍｏｔ／ｄになるよりなＯｕ ０
４水溶液０，２−の混合液に終濃度θ、１，０．２゜０
３および０．４ ｎｍｏｔ／ｍｅ Ｉｃなるように８０
２水溶液を加えてよく混合し、３５℃で１時間反応させ
た後、励起波長３６０ ｎｍ、螢光波長４３５ ｎｍで
螢光測定した。この検量線を第３図に示した。
、６艷になるようなＮＡＭのアセトン浴液０．２−およ
び終濃度として４ ｎｍｏｔ／ｄになるよりなＯｕ ０
４水溶液０，２−の混合液に終濃度θ、１，０．２゜０
３および０．４ ｎｍｏｔ／ｍｅ Ｉｃなるように８０
２水溶液を加えてよく混合し、３５℃で１時間反応させ
た後、励起波長３６０ ｎｍ、螢光波長４３５ ｎｍで
螢光測定した。この検量線を第３図に示した。
この反応液にＳＯ３と等モル濃度のシスティンを加えて
も螢光の値＃′ｉ＃１ぼ同じであった。
も螢光の値＃′ｉ＃１ぼ同じであった。
実施例３
遠心分離によって酵母を除去したビール発酵液４．５−
に０． Ｉ Ｍ−ＢＤＴＡ Ｏ，２５ｒｎｔ、 ４ Ｎ
−ＨＯｔｏ、 ２５ ｍｌを加えて混合した。
に０． Ｉ Ｍ−ＢＤＴＡ Ｏ，２５ｒｎｔ、 ４ Ｎ
−ＨＯｔｏ、 ２５ ｍｌを加えて混合した。
Ｏ１５Ｍ −Ｎａ２００ｇ −１（Ｉ ＳＯ４ｅＫＯ４
緩衝液（ｐＨ８，８）１．９ｄを５−容共栓付試験管に
採り、上記試料０．３−およびＮＡＭアセトン溶液（５
４Ｑ／１００ｖｔｌアセトン）０．３−を加えたところ
、励起最大波長３６０ ｎｍ、螢光最大波長４３５ ｎ
ｍの螢光を呈した。この反応液を１５時間放置したのち
、メンブランフィルタ−（きりボア社製、 ｂｌＮｔｔ
ｅｘ−Ｇ８．孔径０．２２／Ｊ濯）で濾過し、Ｆ液２０
μｔをＩ（ＰＬＯに注入した。
緩衝液（ｐＨ８，８）１．９ｄを５−容共栓付試験管に
採り、上記試料０．３−およびＮＡＭアセトン溶液（５
４Ｑ／１００ｖｔｌアセトン）０．３−を加えたところ
、励起最大波長３６０ ｎｍ、螢光最大波長４３５ ｎ
ｍの螢光を呈した。この反応液を１５時間放置したのち
、メンブランフィルタ−（きりボア社製、 ｂｌＮｔｔ
ｅｘ−Ｇ８．孔径０．２２／Ｊ濯）で濾過し、Ｆ液２０
μｔをＩ（ＰＬＯに注入した。
ＨＰＬＯの分析条件
機 種；ウォーターズ ＡＬＯ／ＧＰＯ型カラム： ｐ
Ｂｏｎｄａｐａｋ ０１８ （４ｖｍｎφｘ ３ｏ
ｏ Ｊ）移動層；アセトニトリルと０．０５ ＭＡＲア
ンモニウムの混合液をｆＩＺ用。アセトニトリル５％（
ｖ／ｖ）から２０チ（ｖ／ｖ）まで１０分間で直線クラ
ジエント分析す る。
Ｂｏｎｄａｐａｋ ０１８ （４ｖｍｎφｘ ３ｏ
ｏ Ｊ）移動層；アセトニトリルと０．０５ ＭＡＲア
ンモニウムの混合液をｆＩＺ用。アセトニトリル５％（
ｖ／ｖ）から２０チ（ｖ／ｖ）まで１０分間で直線クラ
ジエント分析す る。
流 速、” １．５ ｍｅ／ｒｒＬｎ
検出器；ミクロフロー七ル付ＪＡ８００ＦＰ−４星祭光
分光光度計（励起波長３６０ｎｍ。
分光光度計（励起波長３６０ｎｍ。
螢光波長４３５ｎｍ）
ついで、ＨＰＬＯクロマトグラム上のＳＯ２−ＮＡＭの
ピーク高さをめた。
ピーク高さをめた。
上記の繰作を、２つのビール発酵タンク（タンクＡ ｌ
ｓ Ａ ２ ）の発酵液に対して経時的に行ない、発
酵工程中での８０２−ＮＡＭビークの消長を第４図に示
した。この結果は蒸留法で測定した発酵工程中における
ＳＯ３含量の消長と一致した。
ｓ Ａ ２ ）の発酵液に対して経時的に行ない、発
酵工程中での８０２−ＮＡＭビークの消長を第４図に示
した。この結果は蒸留法で測定した発酵工程中における
ＳＯ３含量の消長と一致した。
第１図〜第３図はＳＯ３濃度と螢光強度との関係を示す
検量線である。 第４図は発酵工程中における８０．−ＮＡＭピーク高さ
の変化を示すグラフである。 ｉ１閃
検量線である。 第４図は発酵工程中における８０．−ＮＡＭピーク高さ
の変化を示すグラフである。 ｉ１閃
Claims (1)
- １、 食品・＠遺物から得た試料液にＮ−（９−アクリ
ジニル）マレイミドを添加し、試料中の亜硫酸とＮ−（
９−アクリジニル）マレイぐドとを反応せしめることを
特徴とする液中亜硫酸の微量検出法７
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14758183A JPS6039560A (ja) | 1983-08-12 | 1983-08-12 | 食品・醸造物中の亜硫酸の微量検出法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14758183A JPS6039560A (ja) | 1983-08-12 | 1983-08-12 | 食品・醸造物中の亜硫酸の微量検出法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6039560A true JPS6039560A (ja) | 1985-03-01 |
| JPH0321068B2 JPH0321068B2 (ja) | 1991-03-20 |
Family
ID=15433585
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14758183A Granted JPS6039560A (ja) | 1983-08-12 | 1983-08-12 | 食品・醸造物中の亜硫酸の微量検出法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6039560A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011048922A1 (ja) * | 2009-10-23 | 2011-04-28 | 国立大学法人岐阜大学 | グリコサミノグリカンの検出法及びそのための分子プローブ |
-
1983
- 1983-08-12 JP JP14758183A patent/JPS6039560A/ja active Granted
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011048922A1 (ja) * | 2009-10-23 | 2011-04-28 | 国立大学法人岐阜大学 | グリコサミノグリカンの検出法及びそのための分子プローブ |
| JP5723285B2 (ja) * | 2009-10-23 | 2015-05-27 | 富雄 矢部 | グリコサミノグリカンの検出法及びそのための分子プローブ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0321068B2 (ja) | 1991-03-20 |
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