JPS60258129A - インタ−フエロンの活性化法 - Google Patents
インタ−フエロンの活性化法Info
- Publication number
- JPS60258129A JPS60258129A JP59115072A JP11507284A JPS60258129A JP S60258129 A JPS60258129 A JP S60258129A JP 59115072 A JP59115072 A JP 59115072A JP 11507284 A JP11507284 A JP 11507284A JP S60258129 A JPS60258129 A JP S60258129A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- interferon
- activity
- buffer solution
- diluted
- protein
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は改良されたインターフェロンの活性化方法に関
する。
する。
従来の技術
■ いくつかの酵素で、塩酸グアニジン・尿素などの蛋
白質変性剤で完全変性させたのち、希釈、透析などによ
り蛋白質変性剤濃度を減少させることによって活性が回
復すること（「蛋白質とは何か」蛋白質核酸酵素別冊Ｖ
ｏ１．２７ Ｎｏ、 ６Ｐ、９１５〜Ｐ、 ９２９ 、
共立出版、 １９１３２年、タンパク質化学 ３高次構
造、Ｐ、５５０〜Ｐ、 ６２６ 、共立出版、 １９７
３年など） ■ ヒト白血球インターフェロンとヒト線維部インター
フェロンを１００℃、２．５分煮沸して失活させた後、
１％ＳＤＳ中におき、希釈又は透析で活性化されること
（Ｗ、Ｂ、 Ｓｔｅｗａｒｔ ＩＩ ｅｔ。
白質変性剤で完全変性させたのち、希釈、透析などによ
り蛋白質変性剤濃度を減少させることによって活性が回
復すること（「蛋白質とは何か」蛋白質核酸酵素別冊Ｖ
ｏ１．２７ Ｎｏ、 ６Ｐ、９１５〜Ｐ、 ９２９ 、
共立出版、 １９１３２年、タンパク質化学 ３高次構
造、Ｐ、５５０〜Ｐ、 ６２６ 、共立出版、 １９７
３年など） ■ ヒト白血球インターフェロンとヒト線維部インター
フェロンを１００℃、２．５分煮沸して失活させた後、
１％ＳＤＳ中におき、希釈又は透析で活性化されること
（Ｗ、Ｂ、 Ｓｔｅｗａｒｔ ＩＩ ｅｔ。
ａｔ、： 、Ｊ、 ｇｅｎ、 Ｖｉｏｌ、 ２６．３２
７．１’９７５ ）■ ヒト白血球インターフェロンと
ヒト線維部インターフェロンを１００℃、２．５分煮沸
して失活させに後、１．５ Ｍ ｇｕａｎｉｄｉｎｅ
ｔｙｏｃｙａｎａｔｅ中におき、透析により再活性化さ
れること（Ｒ，Ｊ。
７．１’９７５ ）■ ヒト白血球インターフェロンと
ヒト線維部インターフェロンを１００℃、２．５分煮沸
して失活させに後、１．５ Ｍ ｇｕａｎｉｄｉｎｅ
ｔｙｏｃｙａｎａｔｅ中におき、透析により再活性化さ
れること（Ｒ，Ｊ。
Ｊａｒｉ ｗａｌｌａ ｅｔ、 ａｌ、： ロｘｐｅｒ
ｉｅｎｔｉａ ３６． １３９０゜１９８０ ）などが
知られている。
ｉｅｎｔｉａ ３６． １３９０゜１９８０ ）などが
知られている。
発明が解決しようとする問題点
組換ＤＮＡ技術によって得られた微生物を用いてインタ
ーフェロンを生産するとインターフェロンのアミノ酸シ
ーケンスを有する蛋白の固まり（以下顆粒という）を菌
体内に生成することがある。しかし、この顆粒自体は溶
媒に不溶で実質的にインターフェロン活性を有しない。
ーフェロンを生産するとインターフェロンのアミノ酸シ
ーケンスを有する蛋白の固まり（以下顆粒という）を菌
体内に生成することがある。しかし、この顆粒自体は溶
媒に不溶で実質的にインターフェロン活性を有しない。
又、インターフェロンは熱あるいは、酸処理によっても
しくは長期間の放置によって失活する。このように実質
的に活性を有しないあるいは失ったもしくは活性の減じ
た蛋白のインターフェロン活性を向上もしくは付与する
優れた方法の開発が望まれている。
しくは長期間の放置によって失活する。このように実質
的に活性を有しないあるいは失ったもしくは活性の減じ
た蛋白のインターフェロン活性を向上もしくは付与する
優れた方法の開発が望まれている。
問題点を解決するための手段
インターフェロンの活性の向上もしくは付与について種
々検討した結果、インターフェロンを蛋白質変性剤で処
理し、鉱酸塩を含む緩衝液で希釈した後、無機吸着体に
吸着させ、ついで溶出剤で溶出することにより活性が向
上したインターフェロンを得るこ七ができる。
々検討した結果、インターフェロンを蛋白質変性剤で処
理し、鉱酸塩を含む緩衝液で希釈した後、無機吸着体に
吸着させ、ついで溶出剤で溶出することにより活性が向
上したインターフェロンを得るこ七ができる。
本発明に使用されるインターフェロンとしては、天然の
インターフェロン、動物細胞の培養によって製造される
インターフェロン、組換えＤＮＡ技術によって得られる
微生物の培養によって製造されるインターフェロンなど
が含まれ、すだ、α。
インターフェロン、動物細胞の培養によって製造される
インターフェロン、組換えＤＮＡ技術によって得られる
微生物の培養によって製造されるインターフェロンなど
が含まれ、すだ、α。
β、Ｔのいずれの型のインターフェロンも含まれる。
特に、組換えＤＮＡ技術によって得られる微生物の培養
によって製造される活性を有していない顆粒状のインタ
ーフェロン又は失活したインターフェロンの活性の向上
に有用である。
によって製造される活性を有していない顆粒状のインタ
ーフェロン又は失活したインターフェロンの活性の向上
に有用である。
蛋白質変性剤としては、尿素、グアニジン塩（塩酸塩、
チオシアン酸塩等）等があげられる。
チオシアン酸塩等）等があげられる。
使用濃度としては、４モル以上、好ましくは６〜１０モ
ルの範囲である。上記蛋白質変性剤でインターフェロン
を処理した後、該蛋白質変性剤の濃度が１モル以下にな
るように鉱酸塩を含む緩衝液で希釈する。
ルの範囲である。上記蛋白質変性剤でインターフェロン
を処理した後、該蛋白質変性剤の濃度が１モル以下にな
るように鉱酸塩を含む緩衝液で希釈する。
鉱酸塩としては、塩酸、硫酸、リン酸のアルカリ金属塩
、アンモニウム塩があげられ、具体例としては、塩化ナ
トリウム、塩化カリウム、硫酸アンモニウム等があげら
れる。その濃度としては００１モル以上、好ましくはＱ
、５〜２モルである。
、アンモニウム塩があげられ、具体例としては、塩化ナ
トリウム、塩化カリウム、硫酸アンモニウム等があげら
れる。その濃度としては００１モル以上、好ましくはＱ
、５〜２モルである。
緩衝液としては、例えば、リン酸、トリス−塩酸緩衝液
が用いられる。ｐＨは通常５〜９、好ましくは６．５〜
７．５である。
が用いられる。ｐＨは通常５〜９、好ましくは６．５〜
７．５である。
次いで、この希釈溶液を無機吸着体に接触させ、インタ
ーフェロンを吸着させる。
ーフェロンを吸着させる。
本発明で用いられる無機吸着体としては、インターフェ
ロンを吸着しろるものであればいずれも用いられる。具
体的にはシリカ系吸着体があげられ、その例として、シ
リカゲル、カラムライト（富士化学工業）、サイロイド
（富士デビソン化学）、ＣＰＧ−１０（エレクトロニュ
ーヌクレオニクス社）、ラジオライト（昭和化学工業）
などがあげられる。
ロンを吸着しろるものであればいずれも用いられる。具
体的にはシリカ系吸着体があげられ、その例として、シ
リカゲル、カラムライト（富士化学工業）、サイロイド
（富士デビソン化学）、ＣＰＧ−１０（エレクトロニュ
ーヌクレオニクス社）、ラジオライト（昭和化学工業）
などがあげられる。
溶出剤としては、ｐＨ８以上、好ましくはｐＨ９〜１０
のアルカリ性緩衝液、ｐＨ３以下、好ましくはｐＨ２〜
３の酸性緩衝液、水溶性有機溶剤。
のアルカリ性緩衝液、ｐＨ３以下、好ましくはｐＨ２〜
３の酸性緩衝液、水溶性有機溶剤。
界面活性剤の溶液が用いられる。ｐＨ１０を越えるとイ
ンターフェロンの安定性が下がることかある・ ・ニド アルカリ性緩衝液としては、ホウ酸緩衝液等が用いられ
る。
ンターフェロンの安定性が下がることかある・ ・ニド アルカリ性緩衝液としては、ホウ酸緩衝液等が用いられ
る。
酸性緩衝液としては、リン酸緩衝液、グリシンー塩酸緩
重液、塩化カリー塩酸緩衝液等が用いられる。
重液、塩化カリー塩酸緩衝液等が用いられる。
水溶性有機溶剤としては、エチレングリコール等があげ
られ、これは単独もしくは緩衝液と組合わせて用いられ
る。
られ、これは単独もしくは緩衝液と組合わせて用いられ
る。
界面活性剤としては、非イオン性又はアニオン性界面活
性剤ｂ＜０．０１１（ｉｌｌ／Ｖ％）テ用イラれ、特に
非イオン性界面活性剤としてはアルキルエーテル系又は
ポリエチレングリコール系のものが好ましい。又、アニ
オン性界面活性剤としてはドデシル硫酸ナトリウム、コ
ール酸ナトリウム等゛が好適である。
性剤ｂ＜０．０１１（ｉｌｌ／Ｖ％）テ用イラれ、特に
非イオン性界面活性剤としてはアルキルエーテル系又は
ポリエチレングリコール系のものが好ましい。又、アニ
オン性界面活性剤としてはドデシル硫酸ナトリウム、コ
ール酸ナトリウム等゛が好適である。
この様にして、溶出液中に活性の向上したインターフェ
ロンを得る。
ロンを得る。
インターフェロンの活性測定は、ヒト羊膜細胞由来であ
るＦＬ細胞、シンドビス・ウィルス（Ｓｉｎｄｂｉｓ
ｕｉｒｕｓ ）を用いた細胞変性（ＣＰＥ）阻止・色素
取り込み法によって測定する。
るＦＬ細胞、シンドビス・ウィルス（Ｓｉｎｄｂｉｓ
ｕｉｒｕｓ ）を用いた細胞変性（ＣＰＥ）阻止・色素
取り込み法によって測定する。
以下に実施例及び参考例を示す。
実施例１゜
参考例２で得たＴ−インターフェロンに７Ｍ尿素、１％
β−メルカプトエタノール、ｌＱｍＭＥＤＴＡ、５０ｍ
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）を加え、２．５Ｉｌの液
を碍る（γ−インターフェロン濃度として０．６４ ｍ
ｇ／ｍｌ ）。次に膣液を１Ｍ塩化ナトリウム、５０ｍ
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）からなる３ ０．５１１
の液に加える。Ｔ−インターフェロン濃度は４０μｇ
／ｍｌである。３０時間目で比活性２Ｘ１０６Ｕ／ｍｇ
である。合計３：ｌの液を３０ Ｑｍｌのマイクロビー
ズシリカゲル（５００人）（富士デビソン社製）のカラ
ムに３０時間かけて通塔、洗浄した後、１Ｍ塩化ナトリ
ウム。
β−メルカプトエタノール、ｌＱｍＭＥＤＴＡ、５０ｍ
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）を加え、２．５Ｉｌの液
を碍る（γ−インターフェロン濃度として０．６４ ｍ
ｇ／ｍｌ ）。次に膣液を１Ｍ塩化ナトリウム、５０ｍ
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）からなる３ ０．５１１
の液に加える。Ｔ−インターフェロン濃度は４０μｇ
／ｍｌである。３０時間目で比活性２Ｘ１０６Ｕ／ｍｇ
である。合計３：ｌの液を３０ Ｑｍｌのマイクロビー
ズシリカゲル（５００人）（富士デビソン社製）のカラ
ムに３０時間かけて通塔、洗浄した後、１Ｍ塩化ナトリ
ウム。
４０％エチレングリコール、５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ７，０）の９ Ｑ Ｑｍｌで溶出する。活性ある両分
として、比活性１．５ Ｘ １０’ Ｕ／ｍｇのＴ−イ
ンターフェロン６７５ｍｇを含む液８５ Ｑｍｌが得ら
れる。
Ｈ７，０）の９ Ｑ Ｑｍｌで溶出する。活性ある両分
として、比活性１．５ Ｘ １０’ Ｕ／ｍｇのＴ−イ
ンターフェロン６７５ｍｇを含む液８５ Ｑｍｌが得ら
れる。
実施例２゜
一参考例１と同様にして得た１０ｍｇのＴ−インターフ
ェロンを含む４０％エチレングリコール、１モル食塩、
２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐ）１７．０）の水溶液１５ｍ
ｌを５分間煮沸する。
ェロンを含む４０％エチレングリコール、１モル食塩、
２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐ）１７．０）の水溶液１５ｍ
ｌを５分間煮沸する。
この液に最終的に３Ｑｍｌ；５Ｍ塩酸グアニジン。
１％β−メルカプトエタノール、ｌＱｍＭＥＤＴＡにな
るように、塩酸グアニジン、β−メルカプトエタノール
、ＥＤＴＡ、水を加える。攪拌後、白濁した液は完全に
透明となる。膣液を１Ｍ硫酸アンモニウム、５０ｍＭＩ
Ｊン酸緩衝液（ｐＨ７，０）の液２．９７ Ａに加える
。合計３１（Ｔ−インターフェロンの比活性： ３ Ｘ
１０６Ｕ／ｍｇ）の液をｌ Ｑ＋＋＋１のマイクロビ
ーズシリカゲル（孔径５０〇人）のカラムに５０時間か
けて通塔、洗浄した後、１Ｍ硫安、４０％エチレングリ
コール。
るように、塩酸グアニジン、β−メルカプトエタノール
、ＥＤＴＡ、水を加える。攪拌後、白濁した液は完全に
透明となる。膣液を１Ｍ硫酸アンモニウム、５０ｍＭＩ
Ｊン酸緩衝液（ｐＨ７，０）の液２．９７ Ａに加える
。合計３１（Ｔ−インターフェロンの比活性： ３ Ｘ
１０６Ｕ／ｍｇ）の液をｌ Ｑ＋＋＋１のマイクロビ
ーズシリカゲル（孔径５０〇人）のカラムに５０時間か
けて通塔、洗浄した後、１Ｍ硫安、４０％エチレングリ
コール。
５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐ Ｈ７，０）の３０ｍ１で溶
出する。活性ある両分として、比活性Ｌ２Ｘ１０７Ｕ
／ ｍｇのＴ−インターフェロン３．５ ｍｇを含む液
１５ｍ１が得られる。
出する。活性ある両分として、比活性Ｌ２Ｘ１０７Ｕ
／ ｍｇのＴ−インターフェロン３．５ ｍｇを含む液
１５ｍ１が得られる。
参考例１゜
（液体状態のＴ−インクーフ、ロンの分離）Ｂｓｃｈｅ
ｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ Ｉ Ｇ Ｋ Ａ −２による
インターフェロン−Ｔの生産： 組換え体プラスミドｐＧＫＡ−２をもつＢｓｃｈｅ−ｒ
ｉｃｈｉａｃｏｌｉ ＩＧＫＡ−２（ＦＥＲＭ ＢＰ４
９６）をＬＧ培地〔トリプトファン１０ｇ、酵母エキス
５ｇ、Ｎａ（Ｊ５ｇ、グルコース２ｇを水１ｊ２にとか
しＮａＯＨにてｐＨを７．０とする。〕で３３７℃１８
時間培養し、この培養液４ｍｌを２００ｍｌのＭＣＧ培
地［Ｎａ２１１ＰＯ＜ ０．６％、Ｋ８２Ｐ口、０．３
％。
ｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ Ｉ Ｇ Ｋ Ａ −２による
インターフェロン−Ｔの生産： 組換え体プラスミドｐＧＫＡ−２をもつＢｓｃｈｅ−ｒ
ｉｃｈｉａｃｏｌｉ ＩＧＫＡ−２（ＦＥＲＭ ＢＰ４
９６）をＬＧ培地〔トリプトファン１０ｇ、酵母エキス
５ｇ、Ｎａ（Ｊ５ｇ、グルコース２ｇを水１ｊ２にとか
しＮａＯＨにてｐＨを７．０とする。〕で３３７℃１８
時間培養し、この培養液４ｍｌを２００ｍｌのＭＣＧ培
地［Ｎａ２１１ＰＯ＜ ０．６％、Ｋ８２Ｐ口、０．３
％。
ＮａＣ１Ｏ，５％、 Ｎ１１．ＣＬ Ｏ，１％、グルコ
ース０．５％。
ース０．５％。
カザミノ酸 ０，５％、 ｂｓＯ４１ｍ Ｍ 、ビタミ
ンＢ ＋４μｇ／ｍｌ、［）８７．２：ｌに接種し、３
０℃で４〜８時間培養後、トリプトファン遺伝子のイン
デューサーであるインドールアクリル酸を１０μｇ／１
Ｔ１１加え、さらに２〜１２時間培養を続ける。すると
菌体内細胞質に液体状態及び顆粒状態のＴ−インターフ
ェロンが形成される。この培養液を８，０００ｒｐｍ、
ＩＱ分間遠心して集菌し、３０ｍＭＮａＣｊ！、３０ｍ
Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ２（ｐＨ７，５）緩衝液で洗浄す
る。
ンＢ ＋４μｇ／ｍｌ、［）８７．２：ｌに接種し、３
０℃で４〜８時間培養後、トリプトファン遺伝子のイン
デューサーであるインドールアクリル酸を１０μｇ／１
Ｔ１１加え、さらに２〜１２時間培養を続ける。すると
菌体内細胞質に液体状態及び顆粒状態のＴ−インターフ
ェロンが形成される。この培養液を８，０００ｒｐｍ、
ＩＱ分間遠心して集菌し、３０ｍＭＮａＣｊ！、３０ｍ
Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ２（ｐＨ７，５）緩衝液で洗浄す
る。
液体状態のＴ−インターフェロンの精製は以下の如く行
う。
う。
洗浄菌体を上記緩衝液２０ｍ１に懸濁し、４ｍｇのリゾ
チーム、 ０．２５Ｍ ＥＤＴＡ （エチレンジアミン
テトラ酢酸）を０．１ｍｌ加えて３０分間０℃に放置し
た後、凍結・融解を３回くり返して菌体をこわす。これ
を１５，０００ ｒｐｍ、３Ｑ分間遠心して上清を得、
上清を硫安沈殿、セファデックスＧ−７５によるゲル濾
過およびイオン交換クロマトグラフィーなどの処理をし
て、インターフェロン−γ約２ Ｘ １０’単位を得る
。
チーム、 ０．２５Ｍ ＥＤＴＡ （エチレンジアミン
テトラ酢酸）を０．１ｍｌ加えて３０分間０℃に放置し
た後、凍結・融解を３回くり返して菌体をこわす。これ
を１５，０００ ｒｐｍ、３Ｑ分間遠心して上清を得、
上清を硫安沈殿、セファデックスＧ−７５によるゲル濾
過およびイオン交換クロマトグラフィーなどの処理をし
て、インターフェロン−γ約２ Ｘ １０’単位を得る
。
参考例２゜
（顆粒状態のＴ−インターフェロンの分離））・参考例
１と同様にして得た培養液３０Ｉ１分の凍結菌体を６ｊ
２の２０ｍＭリン酸緩衝液ｐ重液 ７．０に懸濁し、Ｍ
ａｎｔｏｎ−Ｇａｕｌｉｎ Ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｒ
（ＭへＮＴＯＮ−ＧへＩＩＬＩＮ ＭへＩＩＩＵＦＡＣ
ＴＵ旧ＩＮＧ ＣＤ、、ＩＮＣ，ＵＳＡ ） で、４０
０ｋｇ／ｃｍの圧力で菌体破砕し、遠心分離機として旧
ｔａｃｈｉ ２０ ＰＲ−５２（日立製作所＠）をロー
ターとしてＲＰＲ９−２−３５３（５００＋ｎ１ＸＢ本
）を用い、８．００Ｏｒｐｍ、４０分の遠心をし、沈殿
をとる。ＳＤＳポリアクリルアミド電気泳動（ＳＤＳ−
ＰＡＧ Ｅ ） ［： Ｌａｅｍｍｌｉの方法： Ｎａ
ｔｕｒｅ２２７、６８０ （１９７０） ）のクマジー
ブリリアントブルーの蛋白質染色で判定すると、この沈
殿のＴ−インターフェロン純度は約５０％であった。次
に、この沈殿を６βの１モルのショ糖水溶液に懸濁し、
前と全く同じ遠心条件で遠心し、沈殿（純度：約８５％
）を得る。
１と同様にして得た培養液３０Ｉ１分の凍結菌体を６ｊ
２の２０ｍＭリン酸緩衝液ｐ重液 ７．０に懸濁し、Ｍ
ａｎｔｏｎ−Ｇａｕｌｉｎ Ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｒ
（ＭへＮＴＯＮ−ＧへＩＩＬＩＮ ＭへＩＩＩＵＦＡＣ
ＴＵ旧ＩＮＧ ＣＤ、、ＩＮＣ，ＵＳＡ ） で、４０
０ｋｇ／ｃｍの圧力で菌体破砕し、遠心分離機として旧
ｔａｃｈｉ ２０ ＰＲ−５２（日立製作所＠）をロー
ターとしてＲＰＲ９−２−３５３（５００＋ｎ１ＸＢ本
）を用い、８．００Ｏｒｐｍ、４０分の遠心をし、沈殿
をとる。ＳＤＳポリアクリルアミド電気泳動（ＳＤＳ−
ＰＡＧ Ｅ ） ［： Ｌａｅｍｍｌｉの方法： Ｎａ
ｔｕｒｅ２２７、６８０ （１９７０） ）のクマジー
ブリリアントブルーの蛋白質染色で判定すると、この沈
殿のＴ−インターフェロン純度は約５０％であった。次
に、この沈殿を６βの１モルのショ糖水溶液に懸濁し、
前と全く同じ遠心条件で遠心し、沈殿（純度：約８５％
）を得る。
次に、この沈殿を３ｐの２０ｍＭ！Ｊン酸緩衝液ｐＨ７
，０，２％トリトンＸ−１００，１０ｍＭＥＤＴＡに懸
濁し、１晩攪拌する。その後、再び同じ遠心条件で遠心
し、沈殿（純度：約９０％）をとる。
，０，２％トリトンＸ−１００，１０ｍＭＥＤＴＡに懸
濁し、１晩攪拌する。その後、再び同じ遠心条件で遠心
し、沈殿（純度：約９０％）をとる。
更にこの沈殿を９１の７Ｍ尿素、２０ｍＭ！７ンｆＢ［
清液ｐ）（７，０，１％β〜メルカプトエタノール、１
０ｍＭ ＥＤＴＡの液で溶解する。その後、前と同じ条
件で遠心し、上清（純度：約９５％）を得る。この上清
を７Ｍ尿素、２０ｍＭ’Ｊン酸緩１０ｍＭ ＥＤＴＡで
平衡化された２、ｉ２のＤＥＡＥ−３ｅｐｈａｒｏｓｅ
ＣＬ −６Ｂ （ファルマシア社製）のカラムに通塔
し、通過液を集める（純度：約９９％）。
清液ｐ）（７，０，１％β〜メルカプトエタノール、１
０ｍＭ ＥＤＴＡの液で溶解する。その後、前と同じ条
件で遠心し、上清（純度：約９５％）を得る。この上清
を７Ｍ尿素、２０ｍＭ’Ｊン酸緩１０ｍＭ ＥＤＴＡで
平衡化された２、ｉ２のＤＥＡＥ−３ｅｐｈａｒｏｓｅ
ＣＬ −６Ｂ （ファルマシア社製）のカラムに通塔
し、通過液を集める（純度：約９９％）。
発明の効果
本発明方法により、インターフェロンの活性は顕著に向
上される。
上される。
Claims (1)
- インターフェロンを蛋白質変性剤で処理し、鉱酸塩を含
む緩衝液で希釈した後、無機吸着体に吸着させ、ついで
溶出剤で溶出することを特徴とするインターフェロンの
活性化法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59115072A JPS60258129A (ja) | 1984-06-05 | 1984-06-05 | インタ−フエロンの活性化法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59115072A JPS60258129A (ja) | 1984-06-05 | 1984-06-05 | インタ−フエロンの活性化法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60258129A true JPS60258129A (ja) | 1985-12-20 |
Family
ID=14653477
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59115072A Pending JPS60258129A (ja) | 1984-06-05 | 1984-06-05 | インタ−フエロンの活性化法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60258129A (ja) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59161321A (ja) * | 1982-12-22 | 1984-09-12 | ジエネンテツク・インコ−ポレイテツド | 沈澱異種蛋白質の精製及び活性化法 |
-
1984
- 1984-06-05 JP JP59115072A patent/JPS60258129A/ja active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59161321A (ja) * | 1982-12-22 | 1984-09-12 | ジエネンテツク・インコ−ポレイテツド | 沈澱異種蛋白質の精製及び活性化法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0363126B1 (en) | Method for the purification of vitamin K-dependent proteins | |
| US4382028A (en) | Separation of plasma proteins from cell culture systems | |
| US4470969A (en) | Process for producing a concentrate of coagulation factors VII and VIIa | |
| Caprioli et al. | A cell division-active protein from E. coli | |
| JPS6269998A (ja) | 不溶性封入体からの蛋白質の精製および活性化 | |
| WO1989008702A1 (en) | Improved methods for recovery of tissue plasminogen activator using chaotropic agents | |
| JPS6277332A (ja) | 蛋白質の回収 | |
| US5578480A (en) | Methods for the isolation and purification of the recombinantly expressed chondroitinase I and II enzymes from P. vulgaris | |
| JPH07267997A (ja) | ＩｇＧ− モノクロナール抗体の精製方法及びその使用方法 | |
| JP2507339B2 (ja) | 粗ｔＰＡの精製方法 | |
| Sakai et al. | Purification of cytosine deaminase from Serratia marcescens | |
| JPH05279396A (ja) | 第ｖｉｉｉ因子の精製法と、それによって得られた調製品 | |
| US4637932A (en) | Process for producing a concentrate enriched in coagulation factors VII and VIIa | |
| US5075230A (en) | Stabilized plasminogen activator precursor and method of producing the same | |
| WO1995011966A1 (fr) | Preparation de proteine c humaine activee et son procede de production | |
| JPS60258129A (ja) | インタ−フエロンの活性化法 | |
| JPH07330626A (ja) | 血清アルブミン製剤の製造方法 | |
| Gauldie et al. | Purification of tetrahydrofolate dehydrogenase by affinity chromatography | |
| EP0098123B1 (en) | A process for concentrating and purifying human urinary kallikrein | |
| EP0868507B1 (en) | Process for the purification of urease from helicobacter pylori | |
| EP0232384A1 (en) | Isolation of an endotoxin inactivator from human plasma | |
| JPS62244441A (ja) | 抗体固定化担体 | |
| JP2828988B2 (ja) | 新規ｄｎａとその生産方法、それを有する新規プラスミド、新規ポリペプチドとその生産方法、及び該ポリペプチドからなる新規抗腫瘍剤 | |
| JP2861655B2 (ja) | ヒト尿性トリプシンインヒビター含有液状製剤及びその製造方法 | |
| US20030148488A1 (en) | Method for the production of pure virally inactivated butyrylcholinesterase |