JPS60253870A - 免疫学的診断方法 - Google Patents
免疫学的診断方法Info
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- JPS60253870A JPS60253870A JP9216284A JP9216284A JPS60253870A JP S60253870 A JPS60253870 A JP S60253870A JP 9216284 A JP9216284 A JP 9216284A JP 9216284 A JP9216284 A JP 9216284A JP S60253870 A JPS60253870 A JP S60253870A
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- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/80—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood groups or blood types or red blood cells
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（技術分野）
本発明は免疫学的診断方法、特に１組繊細胞に存在する
血液型物質の有無を免疫学的に判断し。
血液型物質の有無を免疫学的に判断し。
該Ｍｉ織における腫瘍の存在の有無と腫瘍が存在する場
合にはその予後とを診断する方法に関する。
合にはその予後とを診断する方法に関する。
（従来技術）
血液型物質は細胞膜複合糖質でなり、赤血球のみならず
多くの上皮細胞や内皮細胞に存在する。
多くの上皮細胞や内皮細胞に存在する。
細胞が腫瘍化すると細胞膜の生化学的・構造的変化、特
に、糖類および糖蛋白の変化が起こる。細胞が腫瘍化す
ると血液型物質は細胞から消失もしくは滅弱し、かつ腫
瘍化の進行度合に比較して血液型物質が消失してゆくこ
とが知られている。そのため細胞に存在する血液型物質
の有無もしくはその消失の度合を判定する方法が、特に
尿路上皮腫瘍や膀胱腫瘍の診断法として知られている。
に、糖類および糖蛋白の変化が起こる。細胞が腫瘍化す
ると血液型物質は細胞から消失もしくは滅弱し、かつ腫
瘍化の進行度合に比較して血液型物質が消失してゆくこ
とが知られている。そのため細胞に存在する血液型物質
の有無もしくはその消失の度合を判定する方法が、特に
尿路上皮腫瘍や膀胱腫瘍の診断法として知られている。
特異的赤血球付着法（Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｒｅｄ ｃｅ
ｌｌａｄｈｅｒｅｎｃｅ ｔｅｓｔ； ５ＲＣＡ法）は
１９６８年にＫｏｖａｒｉｋらにより開発された。５Ｒ
ＣＡ法では組繊細胞に抗Ａ型血清もしくは抗Ａ型血清か
ら精製して得られる免疫グロブリンＧ （ＩｇＧ ）を
作用させ５組繊細胞に存在する血液型物質にＩｇＧを結
合させる。これに。
ｌｌａｄｈｅｒｅｎｃｅ ｔｅｓｔ； ５ＲＣＡ法）は
１９６８年にＫｏｖａｒｉｋらにより開発された。５Ｒ
ＣＡ法では組繊細胞に抗Ａ型血清もしくは抗Ａ型血清か
ら精製して得られる免疫グロブリンＧ （ＩｇＧ ）を
作用させ５組繊細胞に存在する血液型物質にＩｇＧを結
合させる。これに。
さらに、Ａ型赤血球を作用させると血液型物質に結合し
たＩｇＧに赤血球が吸着する。この赤血球を顕微鏡で観
察することにより組繊細胞に存在する血液型物質の分布
状態がわかる。Ｔｏｈｏｋｕ Ｊ、 ｅｘｐ。
たＩｇＧに赤血球が吸着する。この赤血球を顕微鏡で観
察することにより組繊細胞に存在する血液型物質の分布
状態がわかる。Ｔｏｈｏｋｕ Ｊ、 ｅｘｐ。
Ｍｅｄ、、 ２３９〜２４６，１２１ （１９７７年）
には正常膀胱組織と癌化膀胱組織とにおける血液型物質
の存在状態の相違を５ＲＣＡ法で調査した報告がある。
には正常膀胱組織と癌化膀胱組織とにおける血液型物質
の存在状態の相違を５ＲＣＡ法で調査した報告がある。
しかし。
５ＲＣＡ法では血液型物質のうちＨ抗原に対するＩｇＧ
の反応性が低い。さらに、赤血球は比較的粒径が大きい
ため吸着されにくいうえに、吸着された赤血球は組織構
造を被覆するので同一標本を用いて病理組織の所見を検
討することが困難であるなどの欠点を有する。
の反応性が低い。さらに、赤血球は比較的粒径が大きい
ため吸着されにくいうえに、吸着された赤血球は組織構
造を被覆するので同一標本を用いて病理組織の所見を検
討することが困難であるなどの欠点を有する。
このような５ＲＣＡ法の欠点を補う改良法が例えば日泌
尿会誌、７１巻、７号（１９８０年）に報告されている
。そこには、 ５ＣＲＡ法における赤血球の代わりに螢
光イソチオシアネー） （ＦＴＴＣ）で標識した抗Ｉｇ
Ｇを用いる螢光抗体法が記載されている。ＦＩＴＣを利
用した螢光抗体法では赤血球を使用しないため螢光抗体
の物理的吸着が容易であり、 ５ＲＣＡ法よりも感度が
向上する。また１日泌尿会誌、７４巻。
尿会誌、７１巻、７号（１９８０年）に報告されている
。そこには、 ５ＣＲＡ法における赤血球の代わりに螢
光イソチオシアネー） （ＦＴＴＣ）で標識した抗Ｉｇ
Ｇを用いる螢光抗体法が記載されている。ＦＩＴＣを利
用した螢光抗体法では赤血球を使用しないため螢光抗体
の物理的吸着が容易であり、 ５ＲＣＡ法よりも感度が
向上する。また１日泌尿会誌、７４巻。
３号（１９８３年）には組繊細胞に存在する血液型物質
に第一抗体として抗血清を、第二抗体としてヤギ産生抗
ヒトＩｇＧ抗体を順次吸着させ、さらにチンパンジーＰ
ＡＰ（Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ−ａｎｔｉｐｅｒｏｘｉｄ
ａｓｅ）を１乍用させた後これを発色して顕微鏡下に血
液型物質タミンＨ）と蛋白質の一種であるアビジンとの
結合力が抗原抗体反応による吸着よりもはるかに強いこ
とを利用したＡｖｉｄｉｎ−ｂｉｏｔｉｎ ｐｅｒｏｘ
ｉｄａｓｅｃｏｍｐｌｅｘ（八ＢＧ）法についての記載
がある。ＡＢＣ法においては組繊細胞に第一次抗体とし
て抗血清を。
に第一抗体として抗血清を、第二抗体としてヤギ産生抗
ヒトＩｇＧ抗体を順次吸着させ、さらにチンパンジーＰ
ＡＰ（Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ−ａｎｔｉｐｅｒｏｘｉｄ
ａｓｅ）を１乍用させた後これを発色して顕微鏡下に血
液型物質タミンＨ）と蛋白質の一種であるアビジンとの
結合力が抗原抗体反応による吸着よりもはるかに強いこ
とを利用したＡｖｉｄｉｎ−ｂｉｏｔｉｎ ｐｅｒｏｘ
ｉｄａｓｅｃｏｍｐｌｅｘ（八ＢＧ）法についての記載
がある。ＡＢＣ法においては組繊細胞に第一次抗体とし
て抗血清を。
第二次抗体としてビオチン化抗ヒ）ＩｇＧとビーオチン
化抗ヒ目ｇＭとを順次作用させて組繊細胞に含まれる血
液型物質に抗体を順次吸着させる。これにＡＢＣを作用
させるとビオチンとの結合作用により八ＢＣが第一抗体
に結合する。これを発色させると血液型物質が顕微鏡で
容易に検索できる。ＰＡＰ法、 ＡＢＣ法ともに５ＲＣ
Ａ法およびＦＩＴＣ法を上まわ゛る感度で血液型物質を
検索することが可能である。
化抗ヒ目ｇＭとを順次作用させて組繊細胞に含まれる血
液型物質に抗体を順次吸着させる。これにＡＢＣを作用
させるとビオチンとの結合作用により八ＢＣが第一抗体
に結合する。これを発色させると血液型物質が顕微鏡で
容易に検索できる。ＰＡＰ法、 ＡＢＣ法ともに５ＲＣ
Ａ法およびＦＩＴＣ法を上まわ゛る感度で血液型物質を
検索することが可能である。
■（抗原も感度よく検出することができる。しかし。
ＰＡＰ法およびＡＢＣ法はともに５ＲＣＡ法やＦＩＴＣ
法よりも操作が複雑であり長時間の検査時間を要する。
法よりも操作が複雑であり長時間の検査時間を要する。
感度が高り、シかも検査時間の短い血液型物質の検出方
法の開発が望まれている。
法の開発が望まれている。
（発明の目的）
本発明の目的は組繊細胞に含まれる血液型物質を簡単な
操作で短時間のうちに感度良く検出できる免疫学的診断
方法を提供することにある。
操作で短時間のうちに感度良く検出できる免疫学的診断
方法を提供することにある。
（発明の構成）
本発明は、抗血液型物質抗体を微細な粒子の試薬として
これを被検組繊細胞に接触させれば被検組繊細胞に存在
する血液型物質に試薬が吸着されるため一段階の操作で
血液型物質が容易に検出される。との発明者らの知見に
もとづいて完成された。それゆえ２本発明の免疫学的診
断方法はｆｉ＋抗血液型物質抗体を平均粒径０．０５〜
１０μ田の不活性担体に吸着さゼて試薬を得る工程、（
２）該試薬を組繊細胞に接触させる工程、および（３）
該組繊細胞への不活性担体の吸着の度合を顕微鏡下に観
察する工程、を包含し、そのことにより上記目的が達成
される。
これを被検組繊細胞に接触させれば被検組繊細胞に存在
する血液型物質に試薬が吸着されるため一段階の操作で
血液型物質が容易に検出される。との発明者らの知見に
もとづいて完成された。それゆえ２本発明の免疫学的診
断方法はｆｉ＋抗血液型物質抗体を平均粒径０．０５〜
１０μ田の不活性担体に吸着さゼて試薬を得る工程、（
２）該試薬を組繊細胞に接触させる工程、および（３）
該組繊細胞への不活性担体の吸着の度合を顕微鏡下に観
察する工程、を包含し、そのことにより上記目的が達成
される。
本発明方法に用いられる抗血液型物質抗体のうち例えば
ヤギを免疫して得られる抗Ａ型物質抗体および抗Ｂ型物
質抗体としては、それぞれ、抗Ａ。
ヤギを免疫して得られる抗Ａ型物質抗体および抗Ｂ型物
質抗体としては、それぞれ、抗Ａ。
血清および抗Ｂ血清からのＩｇＧ分画が用いられる。
ＴＢＧ分画は抗Ａおよび抗Ｂ血清をそれぞれ硫酸アンモ
ニウムで塩析後ＤＥＡＥセルロースイオン交換り１］マ
ドグラフイーによって精製する常法により得られる。抗
Ｈ型物質としてはＵｌｅｘ ｅｕｒｏｐｅｕｓからの抽
出液が用いられる。
ニウムで塩析後ＤＥＡＥセルロースイオン交換り１］マ
ドグラフイーによって精製する常法により得られる。抗
Ｈ型物質としてはＵｌｅｘ ｅｕｒｏｐｅｕｓからの抽
出液が用いられる。
抗血液型物質抗体が担持される不活性担体にはカオリン
、炭素粉末、赤血球１合成高分子ラテックスなどが使用
される。なかでも合成高分子ラテックスが生体に対し不
活性であり化学的安定性が高いため好んで用いられる。
、炭素粉末、赤血球１合成高分子ラテックスなどが使用
される。なかでも合成高分子ラテックスが生体に対し不
活性であり化学的安定性が高いため好んで用いられる。
合成高分子ラテックスにはポリスチレンやポリスチレン
成分を含有する共重合体などが用いられる。その粒径は
０．０５〜１０μｍである。粒径が小さずき゛ると組織
片試料に試薬を接触させた際に試薬が顕微鏡下で検出さ
れにくい。粒径が大きすぎると試薬が血液型物質に免疫
反応で固定されにくくなる。不活性担体の比重は特に制
限されないが好ましくは１．２以上である。比重が１．
２以上であると組織片試札と接触させた際の沈降速度が
大きいため反応時間を短縮することが可能である。不活
性担体をリン酸−食塩緩衝液（ＰＢＳ）に分散させ上記
抗Ａ ＩｇＧ分画、抗ＢＩｇＧ分画もしくは１ｌｅｙ
ｅｕｒｏｐｅｕｓ抽出液を加え。
成分を含有する共重合体などが用いられる。その粒径は
０．０５〜１０μｍである。粒径が小さずき゛ると組織
片試料に試薬を接触させた際に試薬が顕微鏡下で検出さ
れにくい。粒径が大きすぎると試薬が血液型物質に免疫
反応で固定されにくくなる。不活性担体の比重は特に制
限されないが好ましくは１．２以上である。比重が１．
２以上であると組織片試札と接触させた際の沈降速度が
大きいため反応時間を短縮することが可能である。不活
性担体をリン酸−食塩緩衝液（ＰＢＳ）に分散させ上記
抗Ａ ＩｇＧ分画、抗ＢＩｇＧ分画もしくは１ｌｅｙ
ｅｕｒｏｐｅｕｓ抽出液を加え。
３７℃で約１００分間攪拌する。これを遠心分離し。
沈渣をアルブミン、蔗糖などの安定化剤などを必要に応
じて含有するＰＢＳなどの緩衝液に分散さゼるとＡ型、
Ｂ型、０（Ｈ）型試薬がそれぞれ得られる。本発明に用
いる組織片は次のようにして調製される。この調製法は
格別である必要はなく９例適宜の厚さの切片としてスラ
イドグラスに固定する。これをキシレンとアルコールに
より脱パラフィンして組織片試料とする。
じて含有するＰＢＳなどの緩衝液に分散さゼるとＡ型、
Ｂ型、０（Ｈ）型試薬がそれぞれ得られる。本発明に用
いる組織片は次のようにして調製される。この調製法は
格別である必要はなく９例適宜の厚さの切片としてスラ
イドグラスに固定する。これをキシレンとアルコールに
より脱パラフィンして組織片試料とする。
スライドグラスに固定した組織片試料に前記試薬を加え
て室温で１０分〜３時間静置する。組織片試料上に吸着
した試薬をＰＢＳで洗浄すると非特異的に吸着した試薬
は除去される。この組織片を顕微鏡下で観察すると組織
片試料の血液型物質が存在する位置には試薬の不活性担
体粒子が吸着されている。そのため３組織に含有される
血液型物質の有無あるいは消失の度合が的確に判断され
る。
て室温で１０分〜３時間静置する。組織片試料上に吸着
した試薬をＰＢＳで洗浄すると非特異的に吸着した試薬
は除去される。この組織片を顕微鏡下で観察すると組織
片試料の血液型物質が存在する位置には試薬の不活性担
体粒子が吸着されている。そのため３組織に含有される
血液型物質の有無あるいは消失の度合が的確に判断され
る。
洗浄に用いるＰＢＳにツイーン２０（商品名）などの界
面活性剤が０，０５％程度添加されると非特異的吸着が
起こりにくくなる。
面活性剤が０，０５％程度添加されると非特異的吸着が
起こりにくくなる。
抗Ａ ＩｇＧ分画、抗Ｂ ＩｇＧ分画お上びＵｌｅｘｅ
ｕｒｏｐｅｕｓ抽出液をあらかじめ螢光イソチオシアネ
−） （ＦＩＴＣ）などの螢光物質で標識しておき、こ
れを不活性担体に吸着させた試薬を用いると螢光顕微鏡
を使用して、より高感度に血液型物質を検出することが
可能である。このとき不活性担体の粒径が０．１μｍ以
下であれば、不活性担体が組織片試料の細部にも浸入す
るため、より正確な検出が可能である。不活性担体の粒
径が１μｍ以上であれば光学顕微鏡で容易に観察するこ
とができる。
ｕｒｏｐｅｕｓ抽出液をあらかじめ螢光イソチオシアネ
−） （ＦＩＴＣ）などの螢光物質で標識しておき、こ
れを不活性担体に吸着させた試薬を用いると螢光顕微鏡
を使用して、より高感度に血液型物質を検出することが
可能である。このとき不活性担体の粒径が０．１μｍ以
下であれば、不活性担体が組織片試料の細部にも浸入す
るため、より正確な検出が可能である。不活性担体の粒
径が１μｍ以上であれば光学顕微鏡で容易に観察するこ
とができる。
（実施例）
以下に本発明を実施例により説明する。
実施例１
（Ａ）試薬の調製：ヒ）Ａ型赤血球と、ヒ）Ａ型唾液の
アジュバントをウサギに免疫して抗Ａ血清を得た。これ
を硫酸アンモニウムにより塩析しＤＥＡＥイオン交換ク
ロマトグラフィーで精製し抗ＡＩｇＧ分画を得た。 抗
Ａ ＩｇＧ分画２■を平均粒径１．０μｍのポリスチレ
ンラテックスがＰＢＳに２重量％含有されるラテックス
液１０ｍ ｉｔに加えた。これを３７℃で６０分間攪拌
した後１０．００Ｏｒρｍで３０分間遠心分離を行った
。 沈渣をウシｍｌ清アルブミン（ＢＳＡ）を１％含有
するＰＢＳに分散させてＡ型試薬を得た。
アジュバントをウサギに免疫して抗Ａ血清を得た。これ
を硫酸アンモニウムにより塩析しＤＥＡＥイオン交換ク
ロマトグラフィーで精製し抗ＡＩｇＧ分画を得た。 抗
Ａ ＩｇＧ分画２■を平均粒径１．０μｍのポリスチレ
ンラテックスがＰＢＳに２重量％含有されるラテックス
液１０ｍ ｉｔに加えた。これを３７℃で６０分間攪拌
した後１０．００Ｏｒρｍで３０分間遠心分離を行った
。 沈渣をウシｍｌ清アルブミン（ＢＳＡ）を１％含有
するＰＢＳに分散させてＡ型試薬を得た。
° （Ｂ）血液型物質の検出＝Ａ型、Ｂ型、ＡＢ型およ
びＯ型のヒト正常膀胱組織を常法により脱脂し、パラフ
ィン処理を行い、約４μｍの厚さの切片としてスライド
グラス上にそれぞれ固定した。
びＯ型のヒト正常膀胱組織を常法により脱脂し、パラフ
ィン処理を行い、約４μｍの厚さの切片としてスライド
グラス上にそれぞれ固定した。
これをキシレンとアルコールで脱パラフィンし各唾液型
の正常組織片試料を得た。正常組織片試料が固定された
スライドグラスをペトリ皿に入れ。
の正常組織片試料を得た。正常組織片試料が固定された
スライドグラスをペトリ皿に入れ。
これに（Ａ）項で得られたＡ型試薬を２０ｍ ｌ！加え
て１時間静置した。このスライドグラスをホルダー上に
逆にして置き、 ０．０５％のツイーン２０を含有する
ＰＢＳで３回洗浄した。この組織片試料を顕微鏡で観察
した。 膀胱粘膜の偏平上皮化成組織に吸着したラテッ
クスの状態を示す顕微鏡写真（×１００）を第１図（ａ
ｌおよび第２図（ａｌに示す。第１図（ｂｌおよび第２
図ｔｂ＋はそれぞれ第１図ｔａ＋および第２図＋ａ）の
説明図である。第１図および第２図に示すように膀胱粘
膜の偏平上皮化成組織上皮１にラテックス２が吸着され
ているのがわかる。第２図においては血管内皮細胞３に
もラテックス２が吸着されているのが観察される。これ
らの観察結果を表１に示す。ラテックスの吸着が認めら
れる組織片試料を（＋）、認められない組織片試料を（
−）で示した。別に各血液型の膀胱腫瘍患者から得た膀
胱腫瘍組織を同様の方法でスライドグラス上に固定し、
試薬と反応させた。これを顕微鏡で観察（Ｘ１００）し
たところ上皮細胞にはラテックスはほとんど吸着されて
いないことがわかった。これらの観察結果を表１に示す
。
て１時間静置した。このスライドグラスをホルダー上に
逆にして置き、 ０．０５％のツイーン２０を含有する
ＰＢＳで３回洗浄した。この組織片試料を顕微鏡で観察
した。 膀胱粘膜の偏平上皮化成組織に吸着したラテッ
クスの状態を示す顕微鏡写真（×１００）を第１図（ａ
ｌおよび第２図（ａｌに示す。第１図（ｂｌおよび第２
図ｔｂ＋はそれぞれ第１図ｔａ＋および第２図＋ａ）の
説明図である。第１図および第２図に示すように膀胱粘
膜の偏平上皮化成組織上皮１にラテックス２が吸着され
ているのがわかる。第２図においては血管内皮細胞３に
もラテックス２が吸着されているのが観察される。これ
らの観察結果を表１に示す。ラテックスの吸着が認めら
れる組織片試料を（＋）、認められない組織片試料を（
−）で示した。別に各血液型の膀胱腫瘍患者から得た膀
胱腫瘍組織を同様の方法でスライドグラス上に固定し、
試薬と反応させた。これを顕微鏡で観察（Ｘ１００）し
たところ上皮細胞にはラテックスはほとんど吸着されて
いないことがわかった。これらの観察結果を表１に示す
。
実施例２
（Ａ）試薬の調製：ヒ）Ａ型赤血球とヒトＡ型唾液との
代わりにヒ）Ｂ型赤血球とヒトＢ型唾液とを用いたごと
以外は実施例１ （Ａ）項に準じてＢ型試薬を得た。
代わりにヒ）Ｂ型赤血球とヒトＢ型唾液とを用いたごと
以外は実施例１ （Ａ）項に準じてＢ型試薬を得た。
（Ｂ）血液型物質の検出：Ａ型試薬の代わりに本実施例
（Ａ）項で得られたＢ型試薬を用いたこと以外は実施例
１ （Ｂ）項に準じて試験を行った。
（Ａ）項で得られたＢ型試薬を用いたこと以外は実施例
１ （Ｂ）項に準じて試験を行った。
顕微鏡による観察の結果を表１に示す。
犬隻咋主
（Ａ）抗Ａ ＩｇＧ分画の代わりにＵｌｅｘ ｅｕｒｏ
ｐｅｕｓ抽出液を用いたこと以外は実施例１ （Ａ）項
に準じてＯ型試薬を得た。
ｐｅｕｓ抽出液を用いたこと以外は実施例１ （Ａ）項
に準じてＯ型試薬を得た。
（Ｂ）血液型物質の検出：Ａ型試薬の代わりに本実施例
（Ａ）項で得られたＯ型試薬を用いたこと以外は実施例
１ （Ｂ）項に準して試験を行った。
（Ａ）項で得られたＯ型試薬を用いたこと以外は実施例
１ （Ｂ）項に準して試験を行った。
顕微鏡による観察の結果を表１に示す。
」狙
ポリスチレンラテックスにＩｇＧ分画を吸着させずにＢ
ＳＡのみを吸着させた試薬を実施例１ （Ａ）項の方法
に準じて調製した。これを実施例１ （Ｂ）項の方法に
準じて各血液型のヒト正常膀胱組織と腫瘍膀胱組織に反
応させた。その結果を表１に示す。
ＳＡのみを吸着させた試薬を実施例１ （Ａ）項の方法
に準じて調製した。これを実施例１ （Ｂ）項の方法に
準じて各血液型のヒト正常膀胱組織と腫瘍膀胱組織に反
応させた。その結果を表１に示す。
表１から、この試薬は非特異的凝集反応を起こさないこ
とが明らかである。
とが明らかである。
（以下余白）
汰１１江１
（Ａ）試薬の調製：ヒ）Ａ型赤血球と、ヒ）Ａ型唾液の
アジュバントをヤギに免疫して抗Ａ血清を得た。 これ
を硫酸アンモニウムにより塩析しＤＥＡＥイオン交換ク
ロマトグラフィーで精製し抗ＡＩｇＧ分画を得た。これ
にＦＩＴＣを標識し、 ＦＩＴＣ標識抗ＡＩｇＧ分画を
得た。平均粒径０．０５μｍ、比重１．５のラテックス
が０．０５Ｍグリシン溶液に１重量％分散されたラテッ
クス液１０ｍＪに上記のＦＩＴＣ標識抗Ａ ＩｇＧ分画
を１０■加えた。これを３７°Ｃで１８０分間攪拌した
後、ＢＳＡ Ｏ，５％および蔗糖２％を含有する０、０
５Ｍグリシン溶液１０ｍ ｌに分散させてＰＩＴＣ標識
Ａ型試薬を得た。
アジュバントをヤギに免疫して抗Ａ血清を得た。 これ
を硫酸アンモニウムにより塩析しＤＥＡＥイオン交換ク
ロマトグラフィーで精製し抗ＡＩｇＧ分画を得た。これ
にＦＩＴＣを標識し、 ＦＩＴＣ標識抗ＡＩｇＧ分画を
得た。平均粒径０．０５μｍ、比重１．５のラテックス
が０．０５Ｍグリシン溶液に１重量％分散されたラテッ
クス液１０ｍＪに上記のＦＩＴＣ標識抗Ａ ＩｇＧ分画
を１０■加えた。これを３７°Ｃで１８０分間攪拌した
後、ＢＳＡ Ｏ，５％および蔗糖２％を含有する０、０
５Ｍグリシン溶液１０ｍ ｌに分散させてＰＩＴＣ標識
Ａ型試薬を得た。
（Ｂ）血液型物質の検出： （Ａ）項で得られた試薬を
用い９組織片試料の観察を螢光顕微鏡で行ったこと以外
は実施例１ （Ｂ）項の方法で試験を行った。
用い９組織片試料の観察を螢光顕微鏡で行ったこと以外
は実施例１ （Ｂ）項の方法で試験を行った。
実施例５ ・
（Ａ）試薬の調製：抗Ａ血清の代わりにカメの赤血球を
ヤギに免疫して得られた抗Ｂ血清を用いたこと以外は実
施例４ （Ａ）項に準してＦＩＴＣ標識Ｂ型試薬を得た
。
ヤギに免疫して得られた抗Ｂ血清を用いたこと以外は実
施例４ （Ａ）項に準してＦＩＴＣ標識Ｂ型試薬を得た
。
（Ｂ）血液型物質の検出：Ａ型試薬の代わりに本実施例
（Ａ）項で得られたＢ型試薬を用いたこと以外は実施例
５ （Ｂ）項と同様である。
（Ａ）項で得られたＢ型試薬を用いたこと以外は実施例
５ （Ｂ）項と同様である。
」１組
（Ａ）試薬の調製：抗Ａ、 ＴｇＧ分画の代わりに１Ｊ
ｌｅｘ ’ｅｕｒｏｐｅｕｓ抽出液を用いたこと以外は
実施例４ （Ａ）項に準じてＦＩＴＣ標識Ｏ型試薬を得
た。
ｌｅｘ ’ｅｕｒｏｐｅｕｓ抽出液を用いたこと以外は
実施例４ （Ａ）項に準じてＦＩＴＣ標識Ｏ型試薬を得
た。
（Ｂ）血液型物質の検出：Ａ型試薬の代わりに本実施例
（Ａ）項で得ら−れたＯ型試薬を用いたこと以外は実施
例４（Ｂ）項と同様である。
（Ａ）項で得ら−れたＯ型試薬を用いたこと以外は実施
例４（Ｂ）項と同様である。
比較例２
ポリスチレンラテックスにＴｇＧ分画を吸着させずにＦ
ＩＴＣ標識ＢＳＡのみを吸着させた試薬を実施例４（Ｂ
）項の方法に準して各血液型のヒト正常膀胱組織と反応
させた。その結果を表２に示す。
ＩＴＣ標識ＢＳＡのみを吸着させた試薬を実施例４（Ｂ
）項の方法に準して各血液型のヒト正常膀胱組織と反応
させた。その結果を表２に示す。
表２から、この試薬は非特異的凝集反応を起こさないこ
とが明らかである。
とが明らかである。
（発明の効果）
本発明によれば、このように、抗血液型物質をラテ・７
クスなどの不活性担体に吸着させて試薬としたため１Ｍ
ｉ繊細繊細台まれる血液型物質を簡単な操作で短時間の
うちに高感度で検出することが６１能である。Ｈ抗原も
高精度で検出可能である。
クスなどの不活性担体に吸着させて試薬としたため１Ｍ
ｉ繊細繊細台まれる血液型物質を簡単な操作で短時間の
うちに高感度で検出することが６１能である。Ｈ抗原も
高精度で検出可能である。
粒径の小さいラテックスに螢光標識した試薬を用いて反
応後の組織を螢光顕微鏡で観察すれば、さらに検出の精
度を上げることができる。このように組織に含まれる血
液型物質の有無とその消失の度合を観察すれば、腫瘍の
存在の有無と、腫瘍が存在する場合にはその予後とを的
確に判断することが可能となる。
応後の組織を螢光顕微鏡で観察すれば、さらに検出の精
度を上げることができる。このように組織に含まれる血
液型物質の有無とその消失の度合を観察すれば、腫瘍の
存在の有無と、腫瘍が存在する場合にはその予後とを的
確に判断することが可能となる。
第１図（ａｌおよび第２図（，１１は膀胱粘膜の偏平上
皮化成組織にラテックスが吸着した状態の顕微鏡写真、
第１図（ｂ）および第２図ｆｂｌはそれぞれ第１図（ａ
ｌおよび第２図（ａｌの説明図である。 １・・・膀胱粘膜の偏平上皮化成組織、２・・・ラテッ
クス、３・・・血管内皮細胞。 鉦 ■ 匣 ― 乎−綻にネ甫ｊＪ三書 （自発） 昭和６０年 ７月 ５日 １、事件の表示 昭和５９年特許願第９２１６２号 ２、発明の名称 免疫学的診断方法 ３．７市正をする省 事件との関係 特許出願人 郵便番号 ５３０ 住 所 大阪市北区西天満二丁目４番４、図面の簡単な
説明の欄 ５、 補正の内容 ｆｌｌ 明細書第２頁第８行に、 「糖類Ｊとあるのを 「糖脂質」と訂正する。 （２） 同頁第１０行に、 「比較して」とあるのを 「相関して」と訂正する。 （３） 同頁第１３〜１４行に、 ［特に尿路上皮腫瘍や膀胱腫瘍］とあるのを、「主に尿
路上皮腫瘍中でも膀胱腫瘍」と訂正する。 （４） 同頁第１７〜１８行に、 ［抗Ａ型血清もしくけ抗Ａ型血清」とあるのを 「抗Ａ、Ｂ、ＡＢ型血清もしくは抗血清」と訂正する。 （５）第３頁第１行に１ 「Ａ型赤血球」とあるのを 「同型指標赤血球」と訂正する。 （６） 同頁第２行及び第１０頁１１行Ｋ「赤血球」と
あるのを 「指標赤血球」と訂正する。 （７）第７頁第１６〜１８行に、 「ホルマリンとキシレンで固定する。次いで、ノベラフ
イン処理し適宜の厚さの」とあるのを、「ホルマリンで
固定し組織内の水を順次アルコール、キシレン、／（ラ
フインでＷ換ｆる。 次いで、適宜の厚さの」と訂正する。 （８）第９頁第１７行に、 「ヒト正常膀胱組織を常法により脱脂」とあるのを、 「ヒト非腫瘍膀胱組織を常法により固定」と訂正する。 （９） 第１０頁第１行に、 「正常組織片試料を得た。正常組織片試料」とあるのを
、 「非腫瘍組織片試料を得た。組織片試料」と訂正する。 （ｌＯ） 同頁第４〜６行に、 「このスライドグラスをホルダー上に逆にして置き、Ｑ
Ｏ５％のツイーン２０を含有するＰ Ｂ Ｓ、で３回洗
浄した。」とあるのを、［このスライドグラスをツイー
ン２０を含むＰＢＳ中で逆にして置き、非吸着ラテック
スが重力により沈降し組織片から離脱するようにした。 これを半乾燥の状態にし、セロイジンで被膜してヘマト
キシリンにより染色を施した。」と訂正する。 （！リ 同頁第７行に１ 「膀胱粘膜の偏平上皮化成組織Ｋ」とあるのを、 ［偏平上皮化成に陥った膀胱粘膜に」と訂正する。 ０２１ 同頁第１２行Ｋ。 「膀胱粘膜の偏平上皮化成組織上皮１」とあるのを、 ［扁平上皮化成に陥った膀胱上皮１」と訂正する。 １１１ 第１７頁下から２行目に、 「膀胱粘膜の偏平上皮化成組織」とあるのを「扁平上皮
化成に陥った膀胱粘膜」と訂正する。 以 上
皮化成組織にラテックスが吸着した状態の顕微鏡写真、
第１図（ｂ）および第２図ｆｂｌはそれぞれ第１図（ａ
ｌおよび第２図（ａｌの説明図である。 １・・・膀胱粘膜の偏平上皮化成組織、２・・・ラテッ
クス、３・・・血管内皮細胞。 鉦 ■ 匣 ― 乎−綻にネ甫ｊＪ三書 （自発） 昭和６０年 ７月 ５日 １、事件の表示 昭和５９年特許願第９２１６２号 ２、発明の名称 免疫学的診断方法 ３．７市正をする省 事件との関係 特許出願人 郵便番号 ５３０ 住 所 大阪市北区西天満二丁目４番４、図面の簡単な
説明の欄 ５、 補正の内容 ｆｌｌ 明細書第２頁第８行に、 「糖類Ｊとあるのを 「糖脂質」と訂正する。 （２） 同頁第１０行に、 「比較して」とあるのを 「相関して」と訂正する。 （３） 同頁第１３〜１４行に、 ［特に尿路上皮腫瘍や膀胱腫瘍］とあるのを、「主に尿
路上皮腫瘍中でも膀胱腫瘍」と訂正する。 （４） 同頁第１７〜１８行に、 ［抗Ａ型血清もしくけ抗Ａ型血清」とあるのを 「抗Ａ、Ｂ、ＡＢ型血清もしくは抗血清」と訂正する。 （５）第３頁第１行に１ 「Ａ型赤血球」とあるのを 「同型指標赤血球」と訂正する。 （６） 同頁第２行及び第１０頁１１行Ｋ「赤血球」と
あるのを 「指標赤血球」と訂正する。 （７）第７頁第１６〜１８行に、 「ホルマリンとキシレンで固定する。次いで、ノベラフ
イン処理し適宜の厚さの」とあるのを、「ホルマリンで
固定し組織内の水を順次アルコール、キシレン、／（ラ
フインでＷ換ｆる。 次いで、適宜の厚さの」と訂正する。 （８）第９頁第１７行に、 「ヒト正常膀胱組織を常法により脱脂」とあるのを、 「ヒト非腫瘍膀胱組織を常法により固定」と訂正する。 （９） 第１０頁第１行に、 「正常組織片試料を得た。正常組織片試料」とあるのを
、 「非腫瘍組織片試料を得た。組織片試料」と訂正する。 （ｌＯ） 同頁第４〜６行に、 「このスライドグラスをホルダー上に逆にして置き、Ｑ
Ｏ５％のツイーン２０を含有するＰ Ｂ Ｓ、で３回洗
浄した。」とあるのを、［このスライドグラスをツイー
ン２０を含むＰＢＳ中で逆にして置き、非吸着ラテック
スが重力により沈降し組織片から離脱するようにした。 これを半乾燥の状態にし、セロイジンで被膜してヘマト
キシリンにより染色を施した。」と訂正する。 （！リ 同頁第７行に１ 「膀胱粘膜の偏平上皮化成組織Ｋ」とあるのを、 ［偏平上皮化成に陥った膀胱粘膜に」と訂正する。 ０２１ 同頁第１２行Ｋ。 「膀胱粘膜の偏平上皮化成組織上皮１」とあるのを、 ［扁平上皮化成に陥った膀胱上皮１」と訂正する。 １１１ 第１７頁下から２行目に、 「膀胱粘膜の偏平上皮化成組織」とあるのを「扁平上皮
化成に陥った膀胱粘膜」と訂正する。 以 上
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 ｌ１ｌ）抗血液型物質抗体を平均粒径０．０５〜１０μ
ｍの不活性担体に吸着させて試薬を得る工程。 （２）該試薬を組繊細胞に接触させる工程、および （３）該組繊細胞への不活性担体の吸着の度合を顕微鏡
下に観察する工程。 を包含する免疫学的診断方法。 ２、前記不活性担体が合成高分子ラテックスである特許
請求の範囲第１項に記載の方法。 ３、前記合成高分子ラテックスの比重が１．２以上であ
る特許請求の範囲第２項に記載の方法。 ４、前記抗血液型物質抗体が螢光物質で標識された特許
請求の範囲第１項に記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9216284A JPS60253870A (ja) | 1984-05-08 | 1984-05-08 | 免疫学的診断方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9216284A JPS60253870A (ja) | 1984-05-08 | 1984-05-08 | 免疫学的診断方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60253870A true JPS60253870A (ja) | 1985-12-14 |
Family
ID=14046727
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9216284A Pending JPS60253870A (ja) | 1984-05-08 | 1984-05-08 | 免疫学的診断方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60253870A (ja) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS56151357A (en) * | 1980-04-25 | 1981-11-24 | Hitachi Ltd | Immunoassay method |
| JPS56166465A (en) * | 1980-04-21 | 1981-12-21 | Pooru Fuera Kurisuchiyan | Method of detecting blood typing antigen in tissue piece and product obtained thereby |
| JPS5814057A (ja) * | 1981-07-17 | 1983-01-26 | Toray Ind Inc | 生物学的に活性な物質の測定法およびそれに使用する標識剤 |
| JPS5860256A (ja) * | 1981-10-06 | 1983-04-09 | Toray Ind Inc | 生物学的に活性な物質の測定法およびそれに使用する標識剤 |
-
1984
- 1984-05-08 JP JP9216284A patent/JPS60253870A/ja active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS56166465A (en) * | 1980-04-21 | 1981-12-21 | Pooru Fuera Kurisuchiyan | Method of detecting blood typing antigen in tissue piece and product obtained thereby |
| JPS56151357A (en) * | 1980-04-25 | 1981-11-24 | Hitachi Ltd | Immunoassay method |
| JPS5814057A (ja) * | 1981-07-17 | 1983-01-26 | Toray Ind Inc | 生物学的に活性な物質の測定法およびそれに使用する標識剤 |
| JPS5860256A (ja) * | 1981-10-06 | 1983-04-09 | Toray Ind Inc | 生物学的に活性な物質の測定法およびそれに使用する標識剤 |
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