JPS60242863A - 低比重リボ蛋白質吸着用の多孔性吸着材 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、血漿脂質の増加に起因する各種疾患と密接な
関係を持つと考えら九ている低比重リボ蛋白質を選択的
に吸着除去する低比重リポ蛋白質吸着材に関する。

（従来の技術） 血液中の脂質、特に低比重リボ蛋白質の増加は、動脈硬
化の原因あるいは進行と密接な関係を持っていると考え
られており、動脈硬化が進むと心筋梗塞、脳梗塞等循゛
壇器系の重篤な症状に陥る可能性が非常に高くなり、死
亡率も高い。そこで、血液、血漿等の体液成分から低比
重リボ蛋白質を選択的に吸着除去することＫよって、上
記の如き疾患の進行を防止し、症状を軽減せしめ、さら
Ｋは治ゆを早めることが期待されていた。゛上記ｉ的に
使用可層な既存の技術には、アガロースゲルにヘパリン
を固定化した吸着材による吸着（Ｌｕｐｉｅｎ、　Ｐ−
Ｊ、　ｅｔ、　ａｌ、：　Ａ　ｎｅｗ　ａｐｐｒｏａｃ
ｈｔｏ　ｔｈｅ　ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ｆａｍ
ｉｌｉａｌ　ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅ−ｒｏｌｅｍ
ｉａ、　Ｒｅｍｏｖａｌ　ｏｆ　ｐｌａｓ、ｍａ−ｃｈ
ｏｌｅｓｔｅｒｏｌ　ｂａｓｅｄｏｎ　ｔｈｅ　ｐｒｉ
ｎｃｉｐｌｅ　ｏｆ　ａｆｆｉｎｉｔｙ　ｃｈｒｏｍ−
ａｔｏｇｒａｐｈｙ。

ＬａｎＣｅｔ、２　：　１２６１〜１２６４．１９７６
、）、およびガラスパウダーまたはガラスピーズを用ム
たクロマトグラフィー（Ｃａｒｌｓｏｎ、　Ｌ、Ａ、　
：１ｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ　ｏｎ　ｇｌａｓｓ　ｐｏｗ
ｄｅｒ　ｃｏｌｕｍｓ。

Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ
　ａｎｄ　ｓｏｍｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｃｌ１
ｎ、Ｃｈｉｍ、　Ａｃｔａ、５　：　５２８〜５３８．
１９６０．）がある。

（発明が解決しようとする問題点） ヘパリンを７ガロースに固定した吸着材は、低比重リボ
蛋白質に選択的吸着能を示すものの吸着能力が充分でな
く、また、担体にアガａ−スを用いているため、機械的
強度が不充分で取シ扱い性、操作性が悪く、体液を流し
た場合の目づまりが起こり易く、また、滅菌操作による
ボアーの破壊があり、非常に使い難いものであった。ま
た、ガラスパウダーやガラスピーズを用いる方法は、吸
着能力が低く、その上、吸着選択性が低いという欠点が
あり、実用的でなかった。したがって、一般的に普及可
能であり、低比重リボ蛋白質を高い効率で選択的に吸着
し、非選択的な吸着が少なく、安全性があり、滅菌操作
も簡単に行なうことができ、体液浄化ある゛いは再生用
に適した吸着材の出現が望まれていた。

（問題を解決するための手段） 本発明者らは、上記問題を解決するために鋭意研究した
結果、分子中に負電荷を示す官能基を多数個持ち、分子
量が比較的大きいポリアニオン部を表面に有する吸着材
が、高め効率で低比重リボ蛋白質を吸着し、非選択的な
吸着が少なく、かつ、血液の凝固、線溶系、補体系を活
性化することが少ないことを見出し、既に！許出願しｆ
Ｃ（特願昭５８−８０７７７．８０７７８．２２０５５
２）。

本発明者らは、体液浄化用吸着材として、さらに高い効
率で低比重リボ蛋白質を吸着除去できる、すなわち、コ
ンパクトでプライミング・ボリュームの少ない吸着器と
することができる吸着材を提供すること、および血液や
血漿に対して悪影響全与えない吸着材を提供することを
目標にして、さらに、吸着材の微細孔構造を中心に検討
を重ねた結果、従来は低比重リボ蛋白質の直径、すなわ
ち、２００〜３００Ｘよシ少し大きい程度の細孔が、シ
ャープな孔径分布で存在するのが、吸着表面積を大きく
できるということで高い吸着能力が得られると考えられ
ていたのに対し、低比重リボ蛋白質の直径付近から直径
の数十倍までの広い範囲の孔径を持つ細孔が分布してお
り、かつ、ある特定の孔径以上の表面積が大きい吸着材
が、驚くべきほど高い吸着能力を発揮できることを見出
し、さらには、ポリアニオン部を表面に持つ多孔性吸着
材は、高比重リボ蛋白質、フイ゛プリノーゲン等、生体
にとって有用な蛋白質に対する選択性〃五非常に良いこ
とを確認し、本発明を得るに至った。

すなわち、本発明は、表面に分子量が６００以上である
ポリアニオン部を有する多孔性吸着材に□おいて、該吸
着材の全細孔容積の７０％以上刃フ孔径ｚｏｏｉから１
２５００Ｘの範囲に分布し、力・つ、孔径？Ｄとすると
き、いかなる孔径においても０．８Ｄから１．２Ｄの範
囲の全細孔容量力；全細孔容量の８０チよシ少なく、孔
径ｚｓｏＸ以上の表面積示吸着材１−当シ１０ゴ以上で
あることを特徴とする低比重リボ蛋白質吸着用の多孔性
吸着材である。

本発明で対象とする吸着物質は、低比重リボ蛋白質であ
るが、より詳細に説明すると、分子量が２．２　Ｘ　１
０６から３．５　Ｘ　１０’、水利密度が１．００３か
ら１．０３４（ｔ　／　ｔｎｌ　）　、浮上係数（１，
ｏ　６５　）が０から２０×１Ｏ−１ｓｃｒ１１・式−
簾−ｄｙｎ−”　−ｆ−”、直径が２０．０から３０．
Ｏｎｍのリボ蛋白（５ＣＡＮＵ　、　Ａ、Ｍ。

：　ｐｌａｓｍａ　１ｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｓ；　ａｎ
　１ｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ。

”　Ｔｈｅ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ａｔｈ
ｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ　”　ｅｄ。

ｂｙ　５ＣＡＮＵ　Ａ、Ｍ、　、　１９７９　、　Ｐ、
３〜８．による）を言う。これよシ比重の小さいリボ蛋
白、すなわち、浮上係数（１，０６５）が、２０　Ｘ　
１０−”ｃＷＩ−ｓｅｃ−鳳・ｄｙｎ”−ｆ−”より大
きいリボ蛋白質は吸着されてもよいが、比重の高い高比
重リボ蛋白は吸着されないことが好ましｂｏ 本発明で言うポリアニオン部とは、１分子中の分子量が
６００以上であシ、１分子中に負電荷を示す官能基、す
なわち、カルボキシル基（Ｃ０ＯＨ。

ＣＯＯ−）、スルホン酸基（５ＯｓＨ、５Ｏｓ−）など
血漿中で負電荷を示す官能基を多数個持つものを言う。

例示すると、ポリアクリル酸、ポリビニルスルホン酸、
ポリビニルリン酸等のビニル系合成ポリアニオン、ポリ
スチレンスルホン酸、ポリスチレンリン酸等のスチレン
系ポリアニオン、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン
酸等のペプチド系ポリアニオン、ＲＮＡ、ＤＮＡ等の核
酸系ポリアニオンやポリメタクリル酸、ポリリン酸、ポ
リホスフェイトエステル、ポリ−α−メチルスチレンス
ルホン酸、スチレン−マレイン酸共重合体などのポリア
ニオンがあげられる。

中でも合成ポリアニオンは、化学的安定性に優れ、高圧
蒸気滅菌、γ線滅菌、エチレンオキサイド滅菌等に対し
ても安定なものを得易く、また、分子量の調節も比較的
簡便に行なえる等の点で天然の物より優れ、推奨できる
。また、合成によシ得られるポリアニオンの場合、天然
の多糖類にみられるような補体の活性化を起こし難いポ
リアニオンが容易に得られるため好ましい。さらに、ビ
ニル系アニオンのように１担体に対して直接グンフト重
合を行なえるものは、担体に対して分子量の大きいポリ
アニオンを高保持量で固定することができる点で、より
好ましい結果を与える。

また、吸着目的物質である低比重リボ蛋白質は、直径が
２００〜３００Ｘという巨大なリボ蛋白であるため、ポ
リアニオン部の構造は鎖状構造であることが好ましく、
吸着材表面から長く伸びている方が好ましい。また、ポ
リアニオン部中の負電荷密度は、分子量５００当りに少
なくと４１個あるのが好ましい。さらに好ましくは、分
子量２００当ＪｉＣ１個以上でちゃ、分子量７０から１
５０の単位［１個あるのが望ましい。ここで言う分子量
には、負電荷を示す官能基の分子量も含む。ポリアニオ
ン部の分子量は、小さくなると低比重リボ蛋白質をあま
ル吸着しなくなるので、少なくとも６００は必要である
。好ましいのは５０００以上であり、２５０００からｔ
ｏｏｏｏｏｏの範囲が望ましい。

ポリアニオン部が持つ多数個の負電荷を示す官能基が、
低比重リボ蛋白質の多数点を認識することＫより、強い
クーロン力で低比重リボ蛋白質全結合すると考えられる
。

負電荷の密度は吸着材１４当、！７１μｅｑからＩｍｅ
ｑの範囲が低比重リボ蛋白質の吸着性能が良く、吸着選
択性が良く、凝固線溶系、補体系への影響が少ない適当
な範囲である。１μｅｑ／ｄより負電荷密度が低くなる
と、低比重リボ蛋白質の吸着能力が実用性能に満たず、
ｔｍｅｑを越えると非選択的な吸着が増え、凝固線溶系
に悪影響を与える。より好ましい範囲は５　ｐｅｑ　／
　ｔｄから７００μｅｑ／ｍ、さらに好ましいのは１０
μｅｑ／−から５００μｅｑ／−５より望ましくは２０
　ｐｅｑ　／　ｗｄから５００μｅｑ／−である。

負電荷密度の測定は、通常の陽イオン交換樹脂のイオン
交換容量測定方法に準じて行なうことができる。

本発明吸着材の全細孔容量、孔径は水銀圧入法（例えば
、触媒工学講座−４，触媒測定法、触媒学会編、地大書
館、６９頁から７５頁）によシ得られる水銀圧大曲線か
ら計算によってめられる値を言う。

ここで、全細孔容量はＱ、ｓｇ／Ｖ（乾燥吸着材以上お
るのが好ましく、１．０ｃｃ／を以−ヒあるのがさらに
好ましい。望ましくは２６口ａ；７ｙより大きいことで
あｔ）、５．０ｃｃ／？以上あるのがさらに望ましい。

細孔容量は材質にもよるが、値が大きいほど単位体積当
りの吸着材内部空間容積が大きくな力、それだけ低比重
リボ蛋白質の吸着容量を大きくできる。

吸着材の孔径分布は、孔径２００５Ｌから１２５００λ
の範囲に全細孔容量の７０チ以上が含まれているのが好
ましい。すなわち、低比重リボ蛋白質の直径よシも大き
い孔径側に幅広く分布してｂるこ　・とが好ましい。

孔径の分布状態は、孔径’ｋＤとするとき、いかなる孔
径りにおいても（２００から１２ｓｏｏＸの　、間のど
の孔径をとってみても）　０．８　Ｄから１．２Ｄの範
囲の細孔容量が全細孔容量の８０チよシ少ないことが必
要である。すな“わち、特定の孔径範囲にのみに細孔が
集中しておらず、広い孔径範囲に細孔が分布しているこ
とが好ましい。

血液、体液中から低比重リボ蛋白質′ｔ−吸着しようと
する時、低比重リボ蛋白質の吸着表面積を大きくとるた
めには、孔径２００〜３ｏｏＸの孔径範囲に細孔が集中
していることが望ましいが、孔径分布が狭いと、低比重
リポ蛋白質よりも大きい直径を持つ超低比重リポ蛋白質
（直径５００〜ａｏｏＸ）やカイ。ミク。ン（直径７５
０〜１ｏｏｏｏ　Ｘ　）等の共存物質により、吸着材の
粒子表面で目詰りを起こしてしまうことが多く、−担目
詰ｂｔ起こしてしまうと、低比重リボ蛋白質が吸着材粒
子内に入れなくなシ、吸着材の低比重リポ蛋白質吸着能
力が低下してしまう。吸着材粒子表面での目詰９を起こ
し難くするためには、孔径の大きな吸着材を使用すれば
よいのであるが、この場合は、吸着材の表面積が小さく
なり、低比重リボ蛋白質の吸着容量が小さくなってしま
う。

このように、孔径分布の狭い吸着材の場合、血液、体液
中の共存物質の影響を非常に受け易く、吸着性能會上げ
ることは非常に困難である。これに対し孔径分布の広い
吸着材の場合には、低比重リボ蛋白質よシも大きめ直径
を持つ超低比重リポ蛋白質、カイロミクロン等は、孔径
の大きい細孔に捕捉されるため、低比重リボ蛋白質が通
過するための細孔全潰してしまうことが少なくなり、結
果として吸着容量の大幅な増大が可能となるものと考え
られる。

より好ましい孔径の分布状態は、孔径をＤとするとき、
いかなる孔径においても０．８Ｄから１．２Ｄの範囲の
細孔容量が全細孔容量の７５−以下であり、望ましくは
７０−以下、さらに望ましくは６５チ以下である。

吸着材の孔径２５０　′に以上の表面積は、水銀圧入法
による正大曲線から、細孔は一様な円筒状であり、無限
に交わらないという仮定の基ＫＳａ−ｂ：孔径ａから孔
径すの間の表面積ｖａ−ｂ’　細孔容量 ｒａ−ｂ：　ｌ　ｌ　平均孔径 なる式で計算される値で定義される表面積の孔径２５０
Ｘ以上の積分値を言う。

すなわち、孔径２５０Ｘ以上の表面積Ｓは次式で定義さ
れる。

Ｓ　＝　ｆ−２／ｒ　−Ｄ（ｒ）ｄｒ Ｄ（ｒ）：細孔分布函数　ｒ：細孔の半径この値が小さ
いと、吸着表面積が小さくなるため、低比重リボ蛋白質
の吸着能力が下がってしまう。

好ましい゛表面積（孔径２５０Ｘ以上の表面積）は、吸
着材１−当り１０７ＦＬ’以上、よシ好ましくは１５１
ｆｔ以上、望ましくは２０１ｆｔ以上である。　・広い
孔径分布と孔径２５０Ｘ以上の表面積の広さの相乗効果
によシ、ポリアニオン部の低比重リポ蛋白質吸着性を最
大限に発揮し、高い低比重リポ蛋白質吸着性能が得られ
ると考えられる。

本発明吸着材を製造する方法は、例えば、担体を活性化
し、鎖状合成ポリアニオンをその片末端で共有結合させ
る方法、担体にアニオンモノマーを・グラフト重合させ
、ポリアニオンのグラフト鎖を形成する方法などが挙げ
られる。

担体は、少なくとも６００の分子量を持つポリアニオン
を固定できれば、どのような材質のものを用いて本よい
。使用できる担体としては、セルロース系ゲル、デキス
トラン系ゲル、アガロース系ゲル、ポリアクリルアミド
系ゲル、多孔質ガラス、とニルポリマーゲル等の有機ま
たは無機の多孔体が使用でき、通常のアフィニティーク
ロマトグラフィーに用いられる担体用の材料は全て用い
ることができるが、前記した孔径、孔径分布および表面
積の条件を満たすものである必要がある。

少なくとも６００の分子量を持つポリアニオンを不溶性
担体の表面に固定する方法は、共有結合、イオン結合、
物理吸着、包埋あるいは重合体表面への沈殿不溶化等あ
らゆる公知の方法を用いることができるが、ポリアニオ
ンの溶出性から考えると、共有結合によシ、固定、不溶
化して用いることが好ましい。そのため通常固定化酵素
、アフイニテイクロマトグラフイーで用いられる公知の
担体の活性化方法、リガンドとの結合方法、および担体
または活性化担体を幹ポリマーとし、ポリアニオンを枝
とするグラフト重合の手法４用いることができる。

活性化方法を例示すると、ノ・ロダン化シアン法、エピ
クロルヒドリン法、ビスエポキシド法、ハロゲン化トリ
アジン法、ブロモアセチルプロミド法、エチルクロロホ
ルマート法、１＋１’−カルボニルジイミダゾール法等
をあげることができる。本発明の活性化方法は、リガン
ドのアミノ基、水酸基、カルボキシル基、チオール基等
の活性水素を有する核反応基と置換および／または付加
反応できればよく、−り記の例示に限定されるものでは
ないが、化学的安定性、熱的安定性等を考慮するさ、エ
ポキシドを用いる方法が好ましく、特にエピクロルヒド
リン法が推奨できる。

また、シリカ系、ガラス系等のシラノール基金持つ担体
については、γ−グリシドキシプロビルトリメトキシシ
ラン、γ−アミノプロピ化トリエトキシシラン、γ−メ
ルカプトプロピルトリメトキシシラン、ビニルトリクロ
ロシラン等の各種シランカップリング剤が好ましく用い
られる。

クラフト重合法を例示すると、連鎖移動反応を利用する
方法、放射線、紫外線などによる脱水素、脱ハロゲンな
どの反応を利用する方法、過酸化物の形成を利用する方
法などがあげられるが、水酸基、チオール、アルデヒド
、アミンなどの還元性基を有する担体に、セリウム塩、
鉄塩などを開始剤としてアニオンモノマーをグラフト重
合して行く方法が簡便であシ、推奨できる。また、クラ
フト重合の系は、比較的分子量の大きいポリアニオンを
担体の内部まで固定できるので好ましく用いられる。

担体に、少なくとも６００の分子量を持つポリアニオン
を２種類以上結合させてもさしつかえない。

以上、本発明吸着材の製造方法を例示して、少なくとも
６００の分子量を持つポリアニオンを担体に結合する方
法について詳細に説明したが、本発明は、これに限定さ
れるものではない。

例えば、少なくとも６００の分子量を持つポリアニオン
部を有する重合性モノマーを用いて重合（共重合）する
方法、少なくとも６０００分子量を持つポリアニオンを
活性化した後に担体と結合する方法等も採用することが
できる。

すなわち、本発明は、吸着材表面に５少なくとも６００
の分子量を持つポリアニオン部を有することにより、そ
の効果を発揮するものであり、製造方法に左右されるも
のではない。

本発明吸着材は、体液の導出入口を備えた容器内圧充填
保持されて使用されるのが一般的である。

図面において、１は本発明低比重リボ蛋白質の吸着材を
納めてなる吸着装置の一例を示す本のであり、円筒２の
一端開口部に、内側にフィルター５を張ったバッキング
４を介して体液導入口を有するキャップをネジ嵌合し、
円筒２の他端開口部に内側にフィルター５′ヲ張ったバ
ッキング４′會介して体液導出ロアを有するキャップ８
をネジ嵌合して容器を形成し、フィルター５および３′
の間隙に吸着材を充填保持させて吸着材層９全形成して
なるものである。

吸着材層９には、本発明低比重リボ蛋白質の吸着材を単
独で充填してもよく、他の吸着材と混合本しくは積層し
てもよい。他の吸着材として゛は、例えば、幅広い吸着
能を有する活性炭のようなものを用いることができる。

これにより吸着材の相乗効果によるよシ広範な臨床効果
が期待できる。

吸着材層９の容積は、体外循環に用いる場合、５０〜４
０ロ一程度が適当である。本発明の装置を体外循環で用
いる場合には、大路次の二通りの方法がある。一つには
、体内から取シ出した血液を遠心分離冊本しくけ模型血
漿分離器を使用して、血漿成分と血球成分とに分離した
後、血漿成分を該装置に通過させ、浄化した後、血球成
分と合わせて体内にもどす方法でア夛、他の一つ６体内
から取り出した血液を直接核装置に通過させ、浄化する
方法である。

また、血液本しくけ血漿の通過速度については、該吸着
材の吸着能率が非常に高いため、吸着材の粒度を粗くす
ることができ、また充填度を低くできるので、吸着材層
の形状の如何にか＼わりなく、高い通過速度を与えるこ
とができる。そのため多量の体液処理をすることができ
る。

体液の通液方法としては、臨床上の必要に応じ、あるい
は設備の装置状況に応じて、連続的に通液してもよ”　
シ％　また断続的に通液使用してもよい。

（発明の効果） 本発明の吸着材は、以上述べてきたように、体液中の低
比重リボ蛋白を高率かつ選択的に吸着除去し、該吸着材
を用いた吸着装置は非常にコンパクトであると共に簡便
、かつ安全である。そして、特定の孔径範囲内にブロー
ドな孔径分布を持ち、かつ、特定孔径以上の表面積が大
きい吸着材であるため、吸着材の目詰まりによる低比重
リボ蛋白質の吸着能力低下を防ぐことができた結果、従
来にない、驚くべきほど高い吸着能力を達成することが
可能になった。さらに、ポリアニオン部の低比重リボ蛋
白質吸着性を利用しているため、選択性が非常に良い。

本発明は、高脂血症等の体液を浄化、再生する一般的な
用法に適用可能であり、高脂血症に起因した疾患の安全
で確実な治療に有効である。

（実施例） 実施例１ シラン・カップリング剤を用いて多孔質ガラス表面にポ
リアニオンを結合した吸着材を用−５家族性高コレステ
ロ一ル患者血症患者血漿中の低比重リポ蛋白質（以下Ｌ
ＤＬと略す）吸着性を調べた。

使用した吸着材は、孔径２００　Ｘから１２５００＾の
範囲に全細孔容量（３，７５（Ｘ；／ｆ　）の９１％が
分布し、２００〜１２５ｏＯＸの孔径範囲で孔径をＤと
するとき、０．８Ｄから１．２Ｄの範囲の細孔容量で最
大の値が全細孔容量の５１チであり、孔径２５０　Ｘ以
上の表面積が２４ゴ／ゴであった。

細孔の分布はカル口・エルバ社（イタリア）の水銀圧入
式ポロシメーターを用いて測定した。

上記吸着材は以下のようにして得た。

ＣＰＧ５００Ｃエレクトロ・ニュークレオニクス社與、
平均孔径４９５λ）２Ｃ１ｄｉｌＮの水酸化ナトリウム
４〇−中に浸漬し、室温で１２時間、振とうしながらガ
ラスの溶解処理を行なった後、充分水洗し、乾燥した。

この多孔質ガラス５−をアセトンで洗浄した後、２０容
量チ、γ−クリシトキシプロビルトリメトキシシランの
アセトン溶液２２−中に浸漬し、振とうしなから５０Ｃ
で４０時間反応させた。得られた活性化多孔質ガラスを
アセトン、水、０．１Ｍ炭酸ナトリウムバッファー（Ｐ
）１９．８　）　ノ順に洗浄した後、１００Ｉｎ９の片
末端アミン基のポリアクリル酸（分子量約１４０００　
）を含む０．１Ｍ炭酸ナトリウムバッファー１０−中に
移し、５０Ｃで６日間、攪拌しながら固定化反応を行な
った。この後、充分水洗してＬＤＬ吸着材を得た。片末
端アミン基のポリアクリル酸は、２−アミノエタンチオ
ールを連鎖移動剤とし、α、α′−アゾビスインブチロ
ニトリルを開始剤とするアクリル酸の低重合反応によシ
得ｆｃ（ｒ日本化学−会誌、１９７７、（１）、Ｐ８８
〜９２，２−ヒドロキシエチル−メタクリラート−スチ
レン系ＡＢＡ型ブロック共重合体の合成およびその構造
とぬれ、岡野光夫、他」を参考にし７′Ｃ）。多孔質ガ
ラスに固定されたポリアクリル酸は５　ＩＩ＃９／ｄで
めった。

吸着実験は、得られた吸着材１ｇｔに対し、１２−の家
族性高コレステロール血症患者血漿を加え、振とうしな
がら３７Ｇで３時間インキュベートする方法で行なった
。インキュベート後、吸着材を沈降させ、上清を分析し
、使用した患者血漿と比較した。

分析は、低比重リポ蛋白質（ＬＤＬ　）を比濁法で、高
比重リボ蛋白質（以下ＨＤＬ−Ｃと略す）をヘパリン−
マンガン沈殿法で、アルブミンをブロムクレゾールグリ
ーン法で、フィブリノーゲンをシングル・ラジアル・イ
ムノロディフュージョン法で測定した。

分析の結果、血漿中のＬＤＬが６２０　＃／ｃｕであっ
たのに対し、吸着後は１２０〜／ａ（吸着前の１９％）
低下したが、）Ｉ　Ｄ　Ｌ−、Ｃ＃′ｉ１８　＃／ｃ＃
カ１７ａｙ／４／（９４９ｋ　）、アルブミンは５，５
９／ｄｔがｓ、ｚｒ／ｃｕ（９７％）、フィブリノーゲ
ンは１９０　ｓｐ７’ｃｕが１７０　ｍｙ／ｄｔ　（８
９％　）と殆んど下がらず、ＬＤＬを選択的に、かつ高
率に吸着した。

比較例１　。

ＣＰＧ５００ｉ１　Ｎの水酸化ナトリウムで処理せずに
用すたこと以外は、実施例１と同様にポリアクリル酸の
固定を行ない、吸着実験をした。

得られた吸着材のポリアクリル酸保持量は４．７Ｉｎｇ
／ｍ／であった。

得られた吸着材は、孔径２００Ｘから１２５００λの範
囲に全細孔容量（ｏ、９　ｑｃｃ／ｙ　）の９８チが分
布し、孔径２５０Ｘ以上の表面積は３０ゴ／献あったが
、２００〜１２５００　Ｘの範囲で孔径をＤとするとき
、０，８Ｄから１．２Ｄの範囲の細孔容量で最大の値は
、全細孔容量の９４％であった。すなわち、孔径分布が
非常にシャープであった。

吸着実験の結果、ＨＤＬ−Ｃは１８　ｍ９７ｄｌ力１７
ｍｇ／ｃ／１７（９４％）、アルブミンはｓ、ｓｙ／ｃ
ｔｌが３．１ｆ　／ｄｉ　（９４％）、フィブリノーゲ
ンは１９０ｍ９７ｄｌが１８０ｍ９／ｄｊ（９５％）と
あまシ下からなかつ：Ａ７＞（、ＬＤＬも６２０１１Ｑ
　／　ｄｌカ５８０〜／ｃｕ（６１チ）とあまり吸着さ
れなかった。

比較例２ 実施例１の活性化多孔質ガラスの段階で実施例１と同様
の吸着実験を行なった。

その結果、ＭＤＩ、−Ｃは１８　ｍ？　／　ｄｉ　カ１
７　ｍｙ／（１１（９４チ）、アルブミンは３．３ダ／
ａが３．３〜／ａ（１００％）、フィブリノーゲンは１
９０　Ｒ９７ｄｉが１８０〜／＃（９５チ）とあまり下
がらなかったが、ＬＤＩ、も６２０　ｍ９／ｄｌｉＥ　
６００　ａｙ／（／１７　（９７％）と殆んど吸着され
なかった。すなわち、ポリアクリル酸を固定しな一段階
では血漿蛋白に対する吸着性が見られなかった。

比較例３ ＣＰＧ５００の代わシＫＣＰＧ２０００を１Ｎの水酸化
ナトリウムで処理せずに用いたこと以外は、実施例１と
同様にポリアクリル酸の固定を行ない、吸着実験をした
。

得られた吸着材のポリアクリル酸保持量は２．８ｍ９／
−であった。

得られた吸着材は、孔径２００Ｘから１２５００又の範
囲に全細孔容量（０，８９ＣＣ／ｆ　）の９７％が分布
しているが、孔径２５０Ｘ以上の表面積は６．８ゴ／Ｗ
ｔＬかなかった。また、２００〜１２５００・ｌの範囲
で孔径をＤとするとき、０，８Ｄから１．２Ｄの範囲の
細孔容量で最大の値は、全細孔容量の９３チであった。

吸着実験の結果、ＨＤＬ−Ｃは１８Ｉｎ９／ｄｊが１８
ＩＩＩ９／ｄｊ（１ｏｏ％）、７Ａ／プミンはｙｓ、ｓ
ｉｒ／ｄｌが５．２　ｆｆｄｌ　（９７％）、フィブリ
ノーゲンは１９０Ｉｎ？／ｄｌＥ　１７５１ｒＱ／ｄｌ
　（９２％　）とめまり下がらなかつｉが、ＬＤＬも６
２０４／ｄｊカ４８０＃／＃（７７％）とあまり吸着さ
れなかった〜。

比較例４ ＣＰＧ５００の代わシにＣＰＧ３５０を１Ｎの水酸化す
）　ＩＪウムで処理せずに用い几こと以外は、実施例１
と同様に、ポリアクリル酸の固定を行ない、吸着実験を
した。

得られた吸着材のポリアクリル酸保持量は５．８Ｑ／＋
ｄであった。

得られた吸着材は、孔径２００Ｘから１２５００又の範
囲に全細孔容量（１，０１００／ｌ　）の９７％が分布
し、孔径２５０又以上の表面積も４３ゴ／−あったが、
２００〜１２５００　Ｋの範囲で孔径をＤとするとき、
０．１３Ｄから１．２Ｄの範囲の細孔容量で最大の値は
、全細孔容量の９４チであった。すなわち、孔径分布が
非常にシャープであった。

吸着実験の結果、ＨＤＬ−Ｃは１８Ｉｖ／ｄｔが１８ｇ
ｔｇ　／ｄｉ　（１００％　）、７にプミンは５．５ｔ
ｌｄｌｉ１５．２　ｆｆ１ｄｉ　（ｃｐ　ｙチ）、フィ
ブリノーゲンは１９０ダ／ａが１７０ダ／ｄＡ！（８９
チ）とあまシ下がらなかっタカ、ＬＤＬも６２　ａｎｙ
／ｄｔカ５８０４／ｄ／（９４ｍ）と殆んど吸着されな
かった。

実施例２ ＣＰＧ５００．２０−を０．５Ｎの水酸化ナトリウム溶
液６０−に浸漬し、室温で１５時間、ガラスの溶解処理
を行なった後、実施例１と同様にポリアクリル酸の固定
を行ない、吸着実験をした。

得られた吸着材のポリアクリル酸保持量は５．２ダ／−
であった。

得られた吸着材は、孔径２００λ力・ら１２５００＾の
範囲に全細孔容量（２，２０ｃｃ／Ｖ）の９２−が分布
し、２００〜１２５００大の孔径範囲で孔径′ｔＤとす
るとき、０．８Ｄから１．２Ｄの範囲の細孔容量で最大
の値が全細孔容量の７０チでアル、孔径２５０　Ｘ以上
の表面積が２１　ｙｒｔ／−であった。

吸着実験の結果、ＬＤＬが６２０〜／ａであったのに対
し、吸着後は２０　ｏダ／ｃｕ（３２％）と低下したが
、ＨＤＬ−Ｃは１８ｍ９７ｄｌが１８呼／（４（ｉ　０
０％）、アルブミンは３．３ｆ／ｄｌが３．２Ｙ／ｄｌ
ｃ９７％）、フィブリノーゲンは１９０ダ／ｄｌが１８
０〜／ｄ／（９ｓチ）と殆んど下がらず、ＬＤＬｉ選択
的に、かつ高率に吸着した。

実施例３ ＣＰＧ２　ａ　０１２０ｔｄを５Ｎの水酸化ナトリウム
溶液１００−に浸漬し、室温で１２時間、ガラスの溶解
処理を行なった後、実施例１と同様にポリアクリル酸の
固定を行ない、吸着実験をした。

得られた吸着材のポリアクリル酸保持量は４．７〜／−
であった。

得られた吸着材は、孔径２００Ｘから１２５００人の範
囲に全細孔容量（Ｓ、Ｓ　Ｏα／ｆ）の８０チが分布し
、２００〜１２５００　Ｘの孔径範囲で孔径ｉＤとする
とき、０，８Ｄから１．２Ｄの範囲の細孔容量で最大の
値が全細孔容量の４０チでちゃ、石径２５０Ｘ以上の表
面積が２２１ｒｔ／−であった。

吸着実験の結果、ＬＤＬが６２０　Ｉｎ９＃／テ１ツた
のに対し、吸着後は２ａａｍｇ／ｄｌ（４５チ）と低下
したが、ＨＤＬ−Ｃは１８１ｒ１９／Ｊが１７１Ｑ／ｄ
ｉ；（９４％）、アルブミンは３．３　ｆ　／　ｄｌ　
カ３，２　ｆ／ｄｌ（９７％）、フィブリノーゲンは１
９０１ｎ９／＃が”　ｏ！ｎ９．、’ｙ（９５％　）と
殆んど下がらず、ＬＤＬを選択的に、かつ高率に吸着し
た。

実施例４ ＣＰＧ　７００．２０−を５Ｎの水酸化ナトリウム溶液
１００ｄｉＣ浸漬し、室温で１２時間、ガラスの溶解処
理を行なつ友後、実施例１と同様にポリアクリル酸の固
定を行ない、吸着実験をした。

得られた吸着材のポリアクリル酸保持量は４．５ｍｇ／
１ｔｒｌであった。

得られた吸着材は、孔径２００Ｘから１２５００人の範
囲に全細孔容量（ｓ、１ｏｏｃ／ｌ　）の９２チが分布
し、２００〜１２５００＾の孔径範囲で孔径ｉＤとする
とき、０，８Ｄから１．２Ｄの範囲の細孔容量で最大の
値が全細孔容量の６４チであり、孔径２５０Å以上の表
面積が１５１ｒｔ／−であった。

吸着実験の結果、ＬＤＬが６２０ｒＱｌｄｉであったの
罠対し、吸着後は２７　ｇｓｙ／ｄ／（４４％）と低下
Ｌ＊が、ＨＤＬ−Ｃ１ｉｌ　８１１１ｇ／＃カ１７＃１
９／＃（９４％）、−フルツミンは５．３ｆ　／　ｃａ
ｌ　カ３．１　ｆ／ｄｉ（９４％）、フィブリノーゲン
は１９０Ｉｎ９／ｄｊが１７０ｍ９７ｄｉ（８９％）と
殆んど下がらず、ＬＤＬ全選択的に５かつ高率に吸着し
た。

実施例５ シラン・カップリング剤を用いて多孔質ガラス表面にポ
リビニル硫酸を結合した吸着材を用い、家族性高コレス
テロール患者血症患者血漿中の低比重リボ蛋白質（以下
ＬＤＬと略す）吸着性を調べた。

使用した吸着材は、孔径２００＾から１２５００スの範
囲に全細孔容量（ｓ、ｑ　ｏ　ｃｃ／ｆ　）の８９％が
分布し、２００〜１２５００Ｘの孔径範囲で孔径をＤと
するとき、０．８Ｄから１．２Ｄの範囲の細孔容量で最
大の値が全細孔容量の２９％であり、孔径２５０Ｘ以上
の表面積が２１ｍ’／Ｗｔであった。

上記吸着材は、以下のようにして得た。

ＣＰＧ５００（エレクトロ−ニュークレオニクス社製、
平均孔径５１５Ｘ）２０−を１Ｎの水酸化ナトリウム４
０ｄ中に浸漬し１、室温で１２時間、振とうしながらガ
ラスの溶解処理を行なった後、充分水洗し、乾燥した。

この多孔質ガラス５−をアセトンで洗浄した後、２０容
＠チ、γ−グリシドキシプロビルトリメトキシシランの
ア七トン溶液２２ゴ中に浸漬し、振とうしなから５０［
で４０時間反応させた。得られた活性化多孔質ガラスを
アセトン、水、０．ＩＭ炭酸ナトリウムバッフ□　アー
（ｐＨ９，８）の順に洗浄した後、１００〜の片末端ア
ミン基のポリビニル硫酸（分子量約２００００）を含む
０．１Ｍ炭酸ナトリウムバッファー１０ｒｎｔ中に移し
、５０Ｃで３日間、攪拌しながら固定化反応を行なった
。この後、充分水洗してＬＤＬ吸着材を得た。片末端ア
ミノ基のポリビニル硫酸は、２−アミノエタンチオール
を連鎖移動剤とし、α、α′−アゾビスイソブチロニト
リルを・開始剤とするビニルスルホン酸ナトリウムの低
重合反応により得た（「日本化学会誌、１９７７゜Ｉｌ
ｌ　、　ｐ　８８〜９２，２−ヒドロキシエチル＝メタ
クリラート−スチレン系ＡＢＡ型ブロック共重合体の合
成およびその構造とぬれ、岡野元夫、他」を参考にした
）。多孔質ガラスに固定されたポリアクリル酸は４．５
ｍｇ／ｌｎｌであった。

実施例１と同様に吸着実験を行なったところ、血漿中の
ＬＤＬが６２０　ｍｇ／ｄｌであったのに対し、吸着後
は１４０　ｍＱ／ｄｔ　（吸着前の２５％）低下したが
、ＨＤＬ　−Ｃは１　Ｂ　：ｒ＋ｑ／　ｄｔが１７　ｍ
ｑ／　ｄ７　（９４％）、アルブミンは５．６ｆ／ｄ、
／−が３゜ＩＳ’／ｄＡ　（９４％）、フィブリノーゲ
ンは１９０　ｍｐ／　ｄｌが１７０　ｍｇ／ｄｔ（８９
％）と殆んど下がらず、ＬＤＬを選択的に、かつ高率に
吸着した。

【図面の簡単な説明】

図面は本発明低比重リボ蛋白質吸着用の多孔性吸着材を
使用した吸着列置の１例を示す断面図である。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 表面に分子量が６００以上であるポリアニオン部を有す
   る多孔性吸着材において、該吸着材の全細孔容積の７Ｄ
   チ以上が孔径２００Ｘから１２５００１の範囲に・分布
   し、かつ、孔径をり、とするとき、いかなる孔径におい
   ても０．８Ｄから１．２Ｄの範囲の全細孔容量が全細孔
   容量の８０−より少なく、孔径２５０Ｘ以上の表面積が
   吸着材１ｄ当夛１Ｄは以上であることを％黴とする低比
   重リボ蛋白質吸着用の多孔性吸着材。