JPS60215685A - ２’−デオキシアリステロマイシン誘導体およびその用途 - Google Patents
２’−デオキシアリステロマイシン誘導体およびその用途Info
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- JPS60215685A JPS60215685A JP59073822A JP7382284A JPS60215685A JP S60215685 A JPS60215685 A JP S60215685A JP 59073822 A JP59073822 A JP 59073822A JP 7382284 A JP7382284 A JP 7382284A JP S60215685 A JPS60215685 A JP S60215685A
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明はτ−デオキシアリステロマイシン誘導体および
その用途に関するものである。
その用途に関するものである。
さらに詳しくは、本発、明はオリゴデオキシヌクレオチ
ドを固相合成法で有利に製造するための原料となるτ−
デオキシアリステロマイシン誘導体、ならびに遺伝子操
作技術の分野において遺伝子への組み込み等を目的とし
て利用されるオリゴデオキシヌクレオチドを提供するも
のである。
ドを固相合成法で有利に製造するための原料となるτ−
デオキシアリステロマイシン誘導体、ならびに遺伝子操
作技術の分野において遺伝子への組み込み等を目的とし
て利用されるオリゴデオキシヌクレオチドを提供するも
のである。
従来の技術
近年遺伝子操作技術の進歩と相呼応して遺伝子への組み
込みを目的とするオリゴデオキシヌクレオチド（以下、
単にオリゴマーと略称することがある）の化学合成が盛
んに行われるようになってきた。その結果、人類にとっ
て有用であシながら天然の材料からはごく微量にしか得
られなかったペプチドや蛋白質が微生物の助けを借りて
工場で生産可能な段階に至っている。このように化学合
成されたオリゴマーは遺伝子操作上必要不可欠のものと
なったが、これらのオリゴマー合成法の主流である固相
合成法は依然として重大な欠点を有している。一般に同
相合成法はポリスチレン樹脂またはンリカゲμなどを担
体とし、コハク酸などのスペーサーを介して／−デオキ
シヌクレオシドの３′位とエステμ結合をもった出発原
料を用い、木ヌクレオシドの５′位の水酸基保護基、た
とえばジメトキシトリチＡ／（ＤＭＴ）基を酸性条件下
で取９除いて脱保護された中間体に導き、その５′位の
水酸基に目的とするオリゴマー〇塩基配列に従って、１
〜３個の保護ヌクレオチドブロックを順次縮合させてい
くものである。液相法と比較すると固相法は合成時間が
きわめて短いこと、また縮合に要する試薬類や保護ヌク
レオチドブロックの量も少量で済むことから非常に好都
合である。
込みを目的とするオリゴデオキシヌクレオチド（以下、
単にオリゴマーと略称することがある）の化学合成が盛
んに行われるようになってきた。その結果、人類にとっ
て有用であシながら天然の材料からはごく微量にしか得
られなかったペプチドや蛋白質が微生物の助けを借りて
工場で生産可能な段階に至っている。このように化学合
成されたオリゴマーは遺伝子操作上必要不可欠のものと
なったが、これらのオリゴマー合成法の主流である固相
合成法は依然として重大な欠点を有している。一般に同
相合成法はポリスチレン樹脂またはンリカゲμなどを担
体とし、コハク酸などのスペーサーを介して／−デオキ
シヌクレオシドの３′位とエステμ結合をもった出発原
料を用い、木ヌクレオシドの５′位の水酸基保護基、た
とえばジメトキシトリチＡ／（ＤＭＴ）基を酸性条件下
で取９除いて脱保護された中間体に導き、その５′位の
水酸基に目的とするオリゴマー〇塩基配列に従って、１
〜３個の保護ヌクレオチドブロックを順次縮合させてい
くものである。液相法と比較すると固相法は合成時間が
きわめて短いこと、また縮合に要する試薬類や保護ヌク
レオチドブロックの量も少量で済むことから非常に好都
合である。
発明が解決しようとする問題点
上記固相合成法におけるほとんど唯一の欠点は、酸性条
件下で脱保護して５′−ヒドロキシμ体を得る工程にお
いてヌクレオシドの塩基部分が脱離するいわゆる脱プリ
ン化反応が起こシ、副生成物が混入することにある。特
に３′末端がデオキシアデノシンのときに顕著である（
１． Ｓｔａｗｉｎｓｋｉら。
件下で脱保護して５′−ヒドロキシμ体を得る工程にお
いてヌクレオシドの塩基部分が脱離するいわゆる脱プリ
ン化反応が起こシ、副生成物が混入することにある。特
に３′末端がデオキシアデノシンのときに顕著である（
１． Ｓｔａｗｉｎｓｋｉら。
Ｎｕｃｌ、Ａｃ１ｄｓ Ｒｅｓ、、 ｌ ３５３（１９
７７）） ｏ この副生成物は目的とするオリゴマーを
単離精製する際に除去しにくいものであ夛、まだ精製操
作中にオリゴマーの鎖長短縮をもたらし目的物の純度を
低下させるばかシでなく、場合によってはベクターに導
入するなどの遺伝子操作実験を行うとき、誤って取り込
まれ目的とは異った塩基配列をもつ遺伝子となる可能性
が高い。このような副生成物が生じないように、使用す
るプロトン酸の種類を変えたシ反応溶媒の組成を変える
改良が試みられている（ Ｍ、 Ｓｍ１ｔｈら、 Ｊ、
Ａｍ Ｃｈｅｍ、 Ｓｏｃ、 、 ８４ ＋４３０（
１９６２） 、に、 Ｊａｙａｒａｍａｎら、 Ｔｅｔ
ｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔ、、 ２３ 、５３７７（１
９８２） 、Ｔ、 Ｐ、 Ｐａｔｅｌら。
７７）） ｏ この副生成物は目的とするオリゴマーを
単離精製する際に除去しにくいものであ夛、まだ精製操
作中にオリゴマーの鎖長短縮をもたらし目的物の純度を
低下させるばかシでなく、場合によってはベクターに導
入するなどの遺伝子操作実験を行うとき、誤って取り込
まれ目的とは異った塩基配列をもつ遺伝子となる可能性
が高い。このような副生成物が生じないように、使用す
るプロトン酸の種類を変えたシ反応溶媒の組成を変える
改良が試みられている（ Ｍ、 Ｓｍ１ｔｈら、 Ｊ、
Ａｍ Ｃｈｅｍ、 Ｓｏｃ、 、 ８４ ＋４３０（
１９６２） 、に、 Ｊａｙａｒａｍａｎら、 Ｔｅｔ
ｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔ、、 ２３ 、５３７７（１
９８２） 、Ｔ、 Ｐ、 Ｐａｔｅｌら。
Ｎｕｃｌ、 Ａｃ１ｄｓ Ｒｅ＆、 １０．５６０５（
１９８２） 、 Ｍ−；ｆ−Ｇａｉｔら、 Ｃｈｅｍ、
Ｃｏｍｍｕｎ、、 １９８２ ＋ ３７ ＋ Ｔ、
Ｔａｎａｋａら、 ＮｕｃＬＡｃｉｄｓ Ｒｅ＆、 １
０．３２４９（１９８２）など）。まだ臭化亜鉛などの
ルイス酸を用いる工夫がなされている（ Ｍ、 Ｈ，Ｃ
ａｒｕｔｈｅｒｓら、 Ｕ、 Ｓ、 ＰＦＬｔ１２６．
０２５ Ｆｅｂ、２９ １９８０（Ｃ，Ａ、、９６゜Ｐ
７０３５ｆ ）−、Ｋｏｈｌｉら、 Ｔｅｔｒａｈｅ
ｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ、、、 ２１．２６８３（１９８０
） 、 Ｆ、 Ｃｈｏｗら、 ＮｕｃＬ Ａｃ１ｄｓＲ
ａａ、、９．２８０７（１９８１）ｆｘど）。しかしそ
の後ルイス酸を用いる場合には不完全な反応によって５
′位の保護基がかなシ残存することが明らかとなり（Ｍ
、 Ｓ、 Ｕｒｄｅａら、 Ｐｒｏｃ、 ＮａｔＬ Ａ
ｃａｄ、 Ｓｃｉ。
１９８２） 、 Ｍ−；ｆ−Ｇａｉｔら、 Ｃｈｅｍ、
Ｃｏｍｍｕｎ、、 １９８２ ＋ ３７ ＋ Ｔ、
Ｔａｎａｋａら、 ＮｕｃＬＡｃｉｄｓ Ｒｅ＆、 １
０．３２４９（１９８２）など）。まだ臭化亜鉛などの
ルイス酸を用いる工夫がなされている（ Ｍ、 Ｈ，Ｃ
ａｒｕｔｈｅｒｓら、 Ｕ、 Ｓ、 ＰＦＬｔ１２６．
０２５ Ｆｅｂ、２９ １９８０（Ｃ，Ａ、、９６゜Ｐ
７０３５ｆ ）−、Ｋｏｈｌｉら、 Ｔｅｔｒａｈｅ
ｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ、、、 ２１．２６８３（１９８０
） 、 Ｆ、 Ｃｈｏｗら、 ＮｕｃＬ Ａｃ１ｄｓＲ
ａａ、、９．２８０７（１９８１）ｆｘど）。しかしそ
の後ルイス酸を用いる場合には不完全な反応によって５
′位の保護基がかなシ残存することが明らかとなり（Ｍ
、 Ｓ、 Ｕｒｄｅａら、 Ｐｒｏｃ、 ＮａｔＬ Ａ
ｃａｄ、 Ｓｃｉ。
ＩＪＳＡ、８０．７４６１（１９８３）） 、合成上の
重大な障害となっている。
重大な障害となっている。
このように現在のところ脱プリン化を阻止する決定的な
方法は知られておらず、一般にはやむを得ずオリゴマー
〇３′末端がアデニル酸とならないような合成計画を立
て、それに従ってオリゴマーを合成しているのが現状で
ある。
方法は知られておらず、一般にはやむを得ずオリゴマー
〇３′末端がアデニル酸とならないような合成計画を立
て、それに従ってオリゴマーを合成しているのが現状で
ある。
問題を解決するための手
上記の問題点に鑑み、本発明者らは下記の構造式で表わ
されるアリステロマイシン（Ｔ、 Ｋｕａａｋａら、
Ｊ、 Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、 ２１ 、２５５（１
９６８） ）が７デノシンのアイソスター（１ｓｏａｔ
ｅｒｅ ）であることに着目し、これをグーデオキシ体
に誘導したのち担体に支持させ、通常の同相合成法に従
ってこの化合物が３′末端に位置するオリゴマーを合成
したところ、酸性条件下でも脱プリン化反応が起こらな
いことを見出し、また得られたオリゴマーは天然のオリ
ゴマーと同様に遺伝子操作上使用できることも合せて発
見し、さらに研究して本発明を完成した。
されるアリステロマイシン（Ｔ、 Ｋｕａａｋａら、
Ｊ、 Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、 ２１ 、２５５（１
９６８） ）が７デノシンのアイソスター（１ｓｏａｔ
ｅｒｅ ）であることに着目し、これをグーデオキシ体
に誘導したのち担体に支持させ、通常の同相合成法に従
ってこの化合物が３′末端に位置するオリゴマーを合成
したところ、酸性条件下でも脱プリン化反応が起こらな
いことを見出し、また得られたオリゴマーは天然のオリ
ゴマーと同様に遺伝子操作上使用できることも合せて発
見し、さらに研究して本発明を完成した。
ＯＦ［ＯＨ
すなわち、本発明は
１）一般式ＣＩ）
（式中、Ｒ１はアミノ基保護基を、Ｒ２は水素またはス
ペーサー残基金、Ｒ３は水素または水酸基保護基をそれ
ぞれ示す）で表わされるτ−デオキシアリステロマイシ
ン誘導体、 ２） 一般式ＣＩ）の２′−デオキシアリステロマイシ
ンをご位を介して結合せしめてなるオリゴデオキシヌク
レオチド固相合成用担体、および３） ３’末端に２′
−デオキシアリステロマイシンを有するオリゴデオキシ
ヌクレオチド、である。
ペーサー残基金、Ｒ３は水素または水酸基保護基をそれ
ぞれ示す）で表わされるτ−デオキシアリステロマイシ
ン誘導体、 ２） 一般式ＣＩ）の２′−デオキシアリステロマイシ
ンをご位を介して結合せしめてなるオリゴデオキシヌク
レオチド固相合成用担体、および３） ３’末端に２′
−デオキシアリステロマイシンを有するオリゴデオキシ
ヌクレオチド、である。
一般式〔工〕の化合物において、Ｒ１におけるアミノ基
保護基 Ｒ２におけるスペーサー残基およびＲ３におけ
る水酸基保護基は、通常、オリゴデオキシヌクレオチド
の化学合成において用いられるものが挙げられ、例示す
れば次のとお９である。
保護基 Ｒ２におけるスペーサー残基およびＲ３におけ
る水酸基保護基は、通常、オリゴデオキシヌクレオチド
の化学合成において用いられるものが挙げられ、例示す
れば次のとお９である。
アミノ基保護基としては、炭素数１〜２ｏの脂肪族アシ
ル基、炭素数７〜１ｏの芳香族アシル基が挙げられる。
ル基、炭素数７〜１ｏの芳香族アシル基が挙げられる。
具体伊１としては、アセチμ、イソブチリμ、トリメチ
ルアセチ〃、ハロゲノアセチ／Ｌ／（例、トリフμオロ
アセチ〃、クロロアセチルなど）、アルコキシアセチ／
Ｉ／（例、トリチルオキシアセチル、フェノキシアセチ
ル、メトキシアセチμなど）、アルコキシアセチニ／ｌ
／（例、バラニトロフェノキＶカ〃ダニμ、イソブチル
オキシカルボニル、トリプロムエトキシカルダニμ、バ
ラニトロフェニルエトキシカルポニμなト）、ベンシイ
μ、アニソイμなどが挙げられる。
ルアセチ〃、ハロゲノアセチ／Ｌ／（例、トリフμオロ
アセチ〃、クロロアセチルなど）、アルコキシアセチ／
Ｉ／（例、トリチルオキシアセチル、フェノキシアセチ
ル、メトキシアセチμなど）、アルコキシアセチニ／ｌ
／（例、バラニトロフェノキＶカ〃ダニμ、イソブチル
オキシカルボニル、トリプロムエトキシカルダニμ、バ
ラニトロフェニルエトキシカルポニμなト）、ベンシイ
μ、アニソイμなどが挙げられる。
次に、水酸基保護基としては、上記のアミノ基保護基と
同一のものに加えて、炭素数３〜１０のアルキルシリル
（例、ｔ−ブチμジメチμシリｙナト）、炭素数５〜８
のテトラヒドロピラニμ（例、テトラヒドロピラニμ、
メトキシテトラヒドロピラニμなど）、炭素数３〜１ｏ
のアルコキシアルキル（例、エトキシエチル、メトキシ
エチ／ｌ／など）、トリチルおよびその置換体（例、モ
ノメトキシトリチル、ジメトキシトリチｐなど）等が例
示される。
同一のものに加えて、炭素数３〜１０のアルキルシリル
（例、ｔ−ブチμジメチμシリｙナト）、炭素数５〜８
のテトラヒドロピラニμ（例、テトラヒドロピラニμ、
メトキシテトラヒドロピラニμなど）、炭素数３〜１ｏ
のアルコキシアルキル（例、エトキシエチル、メトキシ
エチ／ｌ／など）、トリチルおよびその置換体（例、モ
ノメトキシトリチル、ジメトキシトリチｐなど）等が例
示される。
また、スペーサーとしてはＨＯＯＣ（ＯＨ，２）ｎＣｏ
ｏＨ（ｎ＝２〜５）で表わされる二塩基酸、たとえばコ
ハク酸、グルタ−／Ｌ’酸、アジピン酸が例示され、な
かでもコハク酸が最も好ましい。
ｏＨ（ｎ＝２〜５）で表わされる二塩基酸、たとえばコ
ハク酸、グルタ−／Ｌ’酸、アジピン酸が例示され、な
かでもコハク酸が最も好ましい。
次に、一般式〔工〕の化合物は、アリステロマイシンま
たは２′−デオキシアリステロマイシン（特開昭５Ｏ−
６２９９２）を出発原料とし、上記に例示されたアミノ
基保護基、水酸基保護基およびスペーサー残基を次のよ
うな方法により導入することによって製造される。
たは２′−デオキシアリステロマイシン（特開昭５Ｏ−
６２９９２）を出発原料とし、上記に例示されたアミノ
基保護基、水酸基保護基およびスペーサー残基を次のよ
うな方法により導入することによって製造される。
たとえば、！−デオキシアリステロマイシンに、上記の
保護基を酸クロリドまたは無水物として作用させ、４＝
Ｔ３’および６′位の水酸基と６位のアミノ基を同時に
アシρ化し、水酸化アμカリ金属（例、水酸化ナトリウ
ム、水酸化カリウム）などの強アルカリで処理し、水酸
基保護基を選択的に除去する。次いで、６′位の水酸基
を保護する。この保護法は、テトラヒドロピラニル以外
の保護基の場合は、ピリジン中、または有機溶媒中で塩
基性触媒、たとえば←ジメチルアミノピリジン、トリエ
チμアミンの存在下に、保護基をクロリドとして作用さ
せることによって実施できる。一方、テトラヒドロピラ
ニル基の場合は、ジヒドロビラニμを酸触媒などの存在
下で付加せしめることによって導入される。
保護基を酸クロリドまたは無水物として作用させ、４＝
Ｔ３’および６′位の水酸基と６位のアミノ基を同時に
アシρ化し、水酸化アμカリ金属（例、水酸化ナトリウ
ム、水酸化カリウム）などの強アルカリで処理し、水酸
基保護基を選択的に除去する。次いで、６′位の水酸基
を保護する。この保護法は、テトラヒドロピラニル以外
の保護基の場合は、ピリジン中、または有機溶媒中で塩
基性触媒、たとえば←ジメチルアミノピリジン、トリエ
チμアミンの存在下に、保護基をクロリドとして作用さ
せることによって実施できる。一方、テトラヒドロピラ
ニル基の場合は、ジヒドロビラニμを酸触媒などの存在
下で付加せしめることによって導入される。
次いで、１位の水酸基にスペーサーを導入するが、これ
はピリジン中で二塩基酸の無水物を作用させることによ
シ目的が達せられる。
はピリジン中で二塩基酸の無水物を作用させることによ
シ目的が達せられる。
以下に、一般式ＣＩ）の化合物の製造法について Ｒ１
がペンシイμ基（Ｂｚ）、Ｒ２がコハク酸残基１、Ｒ３
がジメチルトリチμ基（ＤＭＴ）である場合を具体例と
して、反応工程表をあげて以下に説明する。
がペンシイμ基（Ｂｚ）、Ｒ２がコハク酸残基１、Ｒ３
がジメチルトリチμ基（ＤＭＴ）である場合を具体例と
して、反応工程表をあげて以下に説明する。
アリステロマイシン（１）をピリジン中でベンゾイル化
し、テトラベンゾイル体（２）を得る。（２）を部分加
水分解に供し、Ｈ６−ペンゾイμアリヌテロマイシン（
３）としたのち３’、６’位の水酸基を選択的にシリル
化保護してサイクリックシリルエーテル（４）を得る。
し、テトラベンゾイル体（２）を得る。（２）を部分加
水分解に供し、Ｈ６−ペンゾイμアリヌテロマイシン（
３）としたのち３’、６’位の水酸基を選択的にシリル
化保護してサイクリックシリルエーテル（４）を得る。
該化合物（４）の７位の水酸基をチオカルボニルイミダ
ゾリル ｌ−アゾビスイソブチロニトリ／Ｌ／（ＡＩＢＮ）存在
下にトリブチｌ’ｆａｒヒドリドを用いて還元し、２′
−一デオキシ体（６）を得る。なおチオカルボニル基を
導入するためにチオカルポニ〜ジイミダゾーμのホカ、
フエノキシチオカｐダニルクロリドなども好都合に使用
され得る。希塩酸中またはフッ素イオン存在下に化合物
（６）のシリル保護基を除去し Ｈ６−ペンゾイμ−τ
−デオキシアリステロマイシン（７）を得る。次いで、
６′位の水酸基をＤＭＴで保護する。このＤＭＴ保護体
（８）をジメチルアミノピリミジン（ＤＭＡＰ ）の存
在下に、３′位の水酸基に無水コハク酸を作用させ、コ
ハク酸モノエステμ体（９）が得られる。
ゾリル ｌ−アゾビスイソブチロニトリ／Ｌ／（ＡＩＢＮ）存在
下にトリブチｌ’ｆａｒヒドリドを用いて還元し、２′
−一デオキシ体（６）を得る。なおチオカルボニル基を
導入するためにチオカルポニ〜ジイミダゾーμのホカ、
フエノキシチオカｐダニルクロリドなども好都合に使用
され得る。希塩酸中またはフッ素イオン存在下に化合物
（６）のシリル保護基を除去し Ｈ６−ペンゾイμ−τ
−デオキシアリステロマイシン（７）を得る。次いで、
６′位の水酸基をＤＭＴで保護する。このＤＭＴ保護体
（８）をジメチルアミノピリミジン（ＤＭＡＰ ）の存
在下に、３′位の水酸基に無水コハク酸を作用させ、コ
ハク酸モノエステμ体（９）が得られる。
（５）
（６）
＋１
ジイル基）、Ｐｙはピリジンを示す。
次ニ、一般式ＣＩ）のグーデオキシアリステロマイシン
誘導体を３′位を介して同相合成用担体に結合せしめる
。ここで、担体自体は、通常のオリゴデオキシヌクレオ
チドの同相合成法において用いるものであればよく、た
とえばアクリルアミド糸担体（例、ポリジメチルアクリ
ルアミド、ポリアクリμモルフオリドなど）、ポリスチ
レン系担体（例、［Ｆ］−Ｃ６Ｈ４ＣＨ２ＮＨ２ 、［
Ｆ］はポリマーを示す）、七μロース系担体く例、ブミ
ノエチ〃セルロニスなど）、シリカゲル担体などがあげ
られる。
誘導体を３′位を介して同相合成用担体に結合せしめる
。ここで、担体自体は、通常のオリゴデオキシヌクレオ
チドの同相合成法において用いるものであればよく、た
とえばアクリルアミド糸担体（例、ポリジメチルアクリ
ルアミド、ポリアクリμモルフオリドなど）、ポリスチ
レン系担体（例、［Ｆ］−Ｃ６Ｈ４ＣＨ２ＮＨ２ 、［
Ｆ］はポリマーを示す）、七μロース系担体く例、ブミ
ノエチ〃セルロニスなど）、シリカゲル担体などがあげ
られる。
一般式ＣＩ）の化合物は、デオキシアデノシンの場合に
おける公知方法Ｃ Ｌ Ｍｉｙｏａｈｉら， Ｎｕｃｌ
。
おける公知方法Ｃ Ｌ Ｍｉｙｏａｈｉら， Ｎｕｃｌ
。
Ａｃｉｄｓ Ｒｅ＆，旦，５４７３（１９８０））に準
じて、そのスペーサー残基の力μボキシμ基を、ＤＣＣ
ノ存在下、ペンタクロロフエニμ，ｐ−ニトロフェニル
などの活性エステルとしたのち、担体のアミノ基と反応
させることにより、担体と結合される。
じて、そのスペーサー残基の力μボキシμ基を、ＤＣＣ
ノ存在下、ペンタクロロフエニμ，ｐ−ニトロフェニル
などの活性エステルとしたのち、担体のアミノ基と反応
させることにより、担体と結合される。
次に、本発明の３′末端に２′−デオキシアリステロマ
イシンを有するオリゴデオキシヌクレオチドしめてなる
オリゴデオキシヌクレオチド同相合成用担体を用いて、
通常のオリゴデオキシヌクレオチドの固相合成法〔たと
えば、ケミカル・アンド・エンザイマテイツク・スイン
セスイス・オプ・ジーン・フラグメンツ；ア・フボフト
リー・マニュアｌｖ；エッチ・ジ・ガアラセン・アンド
・アンネ・ラング編（Ｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｅｎ
ｚｙｍａｔｉｃＳｙｎｔｈｅｓｉＳｏｆ Ｇｅｎｅ Ｆ
’ｒａｇｍｅｎｔａ、Ａ Ｌａｂｏｒａ−ｔｏｒｙ、Ｍ
ａｎｕａｌ、Ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｈ，Ｇ、Ｇａ５ａｅ
ｎ ａｎｄＡｎｎｅ Ｌａｎｇ、ＷｅｉｎｈｅｉｍｌＤ
ｅｅｒｆｉｅｌｄ Ｂｅａｃｈ。
イシンを有するオリゴデオキシヌクレオチドしめてなる
オリゴデオキシヌクレオチド同相合成用担体を用いて、
通常のオリゴデオキシヌクレオチドの固相合成法〔たと
えば、ケミカル・アンド・エンザイマテイツク・スイン
セスイス・オプ・ジーン・フラグメンツ；ア・フボフト
リー・マニュアｌｖ；エッチ・ジ・ガアラセン・アンド
・アンネ・ラング編（Ｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｅｎ
ｚｙｍａｔｉｃＳｙｎｔｈｅｓｉＳｏｆ Ｇｅｎｅ Ｆ
’ｒａｇｍｅｎｔａ、Ａ Ｌａｂｏｒａ−ｔｏｒｙ、Ｍ
ａｎｕａｌ、Ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｈ，Ｇ、Ｇａ５ａｅ
ｎ ａｎｄＡｎｎｅ Ｌａｎｇ、ＷｅｉｎｈｅｉｍｌＤ
ｅｅｒｆｉｅｌｄ Ｂｅａｃｈ。
Ｆ’１ｏｒｉｄａ−Ｂａ５ｅｌ −１９８２、第８１〜
１０２頁に記載の方法）〕と同様の方法により製造する
ことができる。
１０２頁に記載の方法）〕と同様の方法により製造する
ことができる。
すなわち、本発明の同相合成用担体における２′−デオ
キシアリステロマイシン誘導体の６′位水酸基が保護さ
れている場合は、常法によシ酸（例、ベンゼンスμホン
酸、トリクロロ［９酸、ジクロロ＃酸などで保護基を除
去し、ジクロルメタンなどでよく洗浄する。この６′位
の水酸基に、目的とするオリゴデオキシヌクレオチドの
塩基配列に従って、３′位のリン酸の保護基を多らかじ
め除去した１〜３ｔ（ｔ４＝ｍ合剤（例、メンチレンス
ｐホニμニトロトリアゾリド、メンチＶンスμホニ〃テ
トラゾリドあるいはメシチレンメ〃ホニｙクロリドとＮ
−メチルイミダゾ−ｙの混合物など）の存在下で反応さ
せ結合せしめる。次いで、未反応の６′位水酸基を、ピ
リジン中で、Φ−≠〒寺−ジメチルアミノ〃ピリジンの
存在下、無水酢酸でアセチル化する。以下、この操作を
く）返えすことによシ、任意の塩基配列を有する２〜５
０量体のオリゴデオキシヌクレオチドを合成することが
できる。
キシアリステロマイシン誘導体の６′位水酸基が保護さ
れている場合は、常法によシ酸（例、ベンゼンスμホン
酸、トリクロロ［９酸、ジクロロ＃酸などで保護基を除
去し、ジクロルメタンなどでよく洗浄する。この６′位
の水酸基に、目的とするオリゴデオキシヌクレオチドの
塩基配列に従って、３′位のリン酸の保護基を多らかじ
め除去した１〜３ｔ（ｔ４＝ｍ合剤（例、メンチレンス
ｐホニμニトロトリアゾリド、メンチＶンスμホニ〃テ
トラゾリドあるいはメシチレンメ〃ホニｙクロリドとＮ
−メチルイミダゾ−ｙの混合物など）の存在下で反応さ
せ結合せしめる。次いで、未反応の６′位水酸基を、ピ
リジン中で、Φ−≠〒寺−ジメチルアミノ〃ピリジンの
存在下、無水酢酸でアセチル化する。以下、この操作を
く）返えすことによシ、任意の塩基配列を有する２〜５
０量体のオリゴデオキシヌクレオチドを合成することが
できる。
目的とするオリゴマーを担体から切）離すためにピリジ
ン−２−アルドキシムおよびテトラメチルグアニジン溶
液中、４０℃で一夜処理したのち担体を沖表し、炉液を
濃縮し濃アンモニア水中で６０℃、４ｈｒ加熱してアシ
ル保護基を除去する。
ン−２−アルドキシムおよびテトラメチルグアニジン溶
液中、４０℃で一夜処理したのち担体を沖表し、炉液を
濃縮し濃アンモニア水中で６０℃、４ｈｒ加熱してアシ
ル保護基を除去する。
粗生成物をＭＭＣ−ＧＥＬ（山村化学研究新製。
ＯＤＳ ニー４０／４６）上で大まかに精製したのち、
イオン交換高速液体クロマト（ギルソン社、 Ｐａｒｔ
ｉｓｉｌ １０５ＡＩ） 上で目的とするオリゴマーを
分取し、脱塩したのち、８０％酢酸中でＤＭＴ保護基を
除去する。ついで逆相系高速液体クロマト（Ｎｕｃｌｅ
ｏｓｉｌ ５ＣＩＢ ）上で目的とするオリゴマーを精
製する。
イオン交換高速液体クロマト（ギルソン社、 Ｐａｒｔ
ｉｓｉｌ １０５ＡＩ） 上で目的とするオリゴマーを
分取し、脱塩したのち、８０％酢酸中でＤＭＴ保護基を
除去する。ついで逆相系高速液体クロマト（Ｎｕｃｌｅ
ｏｓｉｌ ５ＣＩＢ ）上で目的とするオリゴマーを精
製する。
作用
本発明の一般式ＣＩ）のグーデオキシアリステロマイシ
ン誘導体は、次式 で表わされる部分構造を有しているために、本誘導体を
３′末端に有するオリゴマーを固相法で合成する場合に
おいて、脱保護等の酸性条件でも脱プリン化を起こすこ
となく、目的とするオリゴマーを容易に得ることができ
る。
ン誘導体は、次式 で表わされる部分構造を有しているために、本誘導体を
３′末端に有するオリゴマーを固相法で合成する場合に
おいて、脱保護等の酸性条件でも脱プリン化を起こすこ
となく、目的とするオリゴマーを容易に得ることができ
る。
実施例
実施例Ｉ
ＮＬペンゾイルプリヌテロマイシン（３）の合成アリス
テロマイシン（９，４６ｆ 、 ３５．７ｍｍｏｌ）を
乾燥ピリジン１００＊／にけんだくし、共沸脱水したの
ち１５０ｇ／の乾燥ピリジンに溶かしペンシイμクロリ
ド（２３ｒｘ１．０．２０ｍｏｌ）を加え室温で２ｈｒ
かくはんした。反応液に２５奪１の水を加え室温で２ｈ
ｒかくはんした。反応混合物を減圧濃縮して得られる固
体をＣＨＣｌ３（３００ｄ ＞に溶かし水洗、乾燥（無
水硫酸す）Ｕラム）後ｃＨｃｘ３を減圧下留去した。得
られた黄色固体状のテトラペンシイｙ体（２）を２００
ｍ１のピリジン、１５０ｔｘｌのＴＨＦ、および１００
ｇ／のＭｅＯＨに溶かし５０ｗｔの２ Ｎ ＮａＯＨを
加え室温下２ｈｒかくはんした。得られた赤色溶液に３
５ｗｔのＤｏｗｅｘ−５０（Ｉ（）を加えて中和したの
ち樹脂をろ過し樹脂を水／ＭｅＯＨ−１／ １ （ｖ／
ｖ ） １００ｓｔで洗いろ液と洗液を合わせて減圧
濃縮した。析出した白色沈澱をろ取し、水およびアセト
ンで洗ったのち風乾し１０．８２ｇの化合物（３）を白
色粉末として得た。一部をＥｔＯＨから再結晶して無色
柱状晶を得たーｍｐ １９９−２００℃。
テロマイシン（９，４６ｆ 、 ３５．７ｍｍｏｌ）を
乾燥ピリジン１００＊／にけんだくし、共沸脱水したの
ち１５０ｇ／の乾燥ピリジンに溶かしペンシイμクロリ
ド（２３ｒｘ１．０．２０ｍｏｌ）を加え室温で２ｈｒ
かくはんした。反応液に２５奪１の水を加え室温で２ｈ
ｒかくはんした。反応混合物を減圧濃縮して得られる固
体をＣＨＣｌ３（３００ｄ ＞に溶かし水洗、乾燥（無
水硫酸す）Ｕラム）後ｃＨｃｘ３を減圧下留去した。得
られた黄色固体状のテトラペンシイｙ体（２）を２００
ｍ１のピリジン、１５０ｔｘｌのＴＨＦ、および１００
ｇ／のＭｅＯＨに溶かし５０ｗｔの２ Ｎ ＮａＯＨを
加え室温下２ｈｒかくはんした。得られた赤色溶液に３
５ｗｔのＤｏｗｅｘ−５０（Ｉ（）を加えて中和したの
ち樹脂をろ過し樹脂を水／ＭｅＯＨ−１／ １ （ｖ／
ｖ ） １００ｓｔで洗いろ液と洗液を合わせて減圧
濃縮した。析出した白色沈澱をろ取し、水およびアセト
ンで洗ったのち風乾し１０．８２ｇの化合物（３）を白
色粉末として得た。一部をＥｔＯＨから再結晶して無色
柱状晶を得たーｍｐ １９９−２００℃。
Ｎ Ｍ Ｒ（６０ＭＨｚ 、ＤＭＳＯｄ６）δｐｐｍ：
１（３Ｈ＊Ｈ４’ ＊ Ｈ５’ ）＋ ３．５ （３
Ｈ、ｍ 、Ｈ６’ ＊ ＯＨ） 、 ４．２５−１ （
５ａ Ｉ ｍ ｒ ＨＩＰ’＋ ■〆＋ ■３’ ＯＨ
×２） １７．４４（３Ｈ，ｍ）、７．９７（２Ｈ，ｍ
）、８．５０（ＩＨ，ａ）。
１（３Ｈ＊Ｈ４’ ＊ Ｈ５’ ）＋ ３．５ （３
Ｈ、ｍ 、Ｈ６’ ＊ ＯＨ） 、 ４．２５−１ （
５ａ Ｉ ｍ ｒ ＨＩＰ’＋ ■〆＋ ■３’ ＯＨ
×２） １７．４４（３Ｈ，ｍ）、７．９７（２Ｈ，ｍ
）、８．５０（ＩＨ，ａ）。
８．６５（ＩＨ，ａ）、１０．０（ＩＨ，ｂｒ）実施例
２ Ｎ６−ペンゾイμ−了、σ−０−（テトフイソプロピ〃
ジシロキサ＝／ｌ／）アリステロマイシン（４）の合成 実施例１で得たベンゾイル体（３）（８，３６９゜２２
、６ ｍｍｏｌ ）を８０ｔｓｌの乾燥ピリジンにけん
だくし減圧下に共沸脱水した。次いで１００４の乾燥ピ
リジンに溶かし、１，３−ジクロロ−１，１，３，３−
テトライソプロピルジシロキサン（９，４１’ｉ 、
３０．８ ｍｍｏｌ ）を加えたのち室温下２ｈ１−か
くはんした。反応液を冷蔵庫中で一夜保存したのち溶媒
を減圧下に除去して黄色シロップ状物質を得た。これを
１００ｓｓ／の酢酸エチ７Ｉ／（ＥｔＯＡｃ ）と１０
０ゴの水で分配したのち、水層を１００＊ＪのＥｔＯＡ
Ｑ で抽出した。あわせたＥｔＯＡｃ溶液を水洗（５０
ｘｌｘ３）、乾燥後（無水硫酸ナトリウム）減圧濃縮し
て約１５ｇの黄色シロップ状物質を得た。粗生成物をシ
リカゲルクロマト（１５０１Ｆ、溶媒ｉ ＣＨＣｌ３お
よびＣＨＣｌ３／ＭｅｌＯＨ＝５ｏ、／１．２５／１
）上で精製し淡黄色ガラス状の化合物（４） （１０，
５−９）を得た。副生成物として少量のｂｉａ体を得た
。
２ Ｎ６−ペンゾイμ−了、σ−０−（テトフイソプロピ〃
ジシロキサ＝／ｌ／）アリステロマイシン（４）の合成 実施例１で得たベンゾイル体（３）（８，３６９゜２２
、６ ｍｍｏｌ ）を８０ｔｓｌの乾燥ピリジンにけん
だくし減圧下に共沸脱水した。次いで１００４の乾燥ピ
リジンに溶かし、１，３−ジクロロ−１，１，３，３−
テトライソプロピルジシロキサン（９，４１’ｉ 、
３０．８ ｍｍｏｌ ）を加えたのち室温下２ｈ１−か
くはんした。反応液を冷蔵庫中で一夜保存したのち溶媒
を減圧下に除去して黄色シロップ状物質を得た。これを
１００ｓｓ／の酢酸エチ７Ｉ／（ＥｔＯＡｃ ）と１０
０ゴの水で分配したのち、水層を１００＊ＪのＥｔＯＡ
Ｑ で抽出した。あわせたＥｔＯＡｃ溶液を水洗（５０
ｘｌｘ３）、乾燥後（無水硫酸ナトリウム）減圧濃縮し
て約１５ｇの黄色シロップ状物質を得た。粗生成物をシ
リカゲルクロマト（１５０１Ｆ、溶媒ｉ ＣＨＣｌ３お
よびＣＨＣｌ３／ＭｅｌＯＨ＝５ｏ、／１．２５／１
）上で精製し淡黄色ガラス状の化合物（４） （１０，
５−９）を得た。副生成物として少量のｂｉａ体を得た
。
Ｎ Ｍ Ｒ（６０ＭＨｚ 、 ＣＤ０１３ ）δｐｐｍ
： １．１（２ｓｕ。
： １．１（２ｓｕ。
ｍ）＋２．２３（３Ｈ，ｍ、Ｈ４’ 、１１５１ ）、
３．３６（ＩＨ，ｂｒ。
３．３６（ＩＨ，ｂｒ。
ｔ−０Ｈ）、３．９６（２）１．ｍ、Ｈ６’ ）、４．
４６（ＩＨ，ｍ。
４６（ＩＨ，ｍ。
Ｈ２＃）４．７３（２Ｈ＋ｍ、Ｈ１’ 、 Ｈ３Ｐ）、
７．５（３Ｂ、ｍ）。
７．５（３Ｂ、ｍ）。
８．０４（３Ｈ，ｓ ａｎｄ ｍ、ＨＢ ｏｒ ＨＢ）
＋８．６７（ＩＨ＋８、ＨＢ ｏｒ ＨＢ）、９．７
２（ＩＨ，ｂｒ 、ＮＨ）実施例３ Ｎ６−ペンゾイμｍ３’、６’−０−テトライソプロピ
ｐジシロキサニμｍ２’−０−ＣＣイミダゾ−１−イＡ
／）−チオカルポニμ〕アリステロマイシン（５）の合
成 シリル中間体（４）（３，２７９、１，３ｍｍｏｌ ）
を３０ｓｌの乾燥ジクロロメタンに溶かしチオヵμポ二
μジイミダゾー／’（３，３４９、１８，８ｍｍｏｌ
）を加え、室温下２ｈｒかくはんした。減圧下に溶媒を
除いて得られる残留物を１００＊ＪのＥｔＯＡｃと５０
＃ｔの水で分配し、水層を１ｏ−ｏｙのＥｔＯＡｃで抽
出した。ＥｔＯＡｃ 溶液を合わせ、水洗（５０ｓｌ
×２ ） ＊乾燥後（無水硫酸ナトリウム）減圧濃縮し
て黄色ガラス状物質を得た。これをシリカゲルクロマト
上（７０１Ｆ、溶Ｋ ＨＣＨＣｌ３ オｘヒＣＨＣｌ３
／ＭｅＯＨ＝ ５０／ １ ）で精製し淡黄色ガラス状
の化合物（５）（３，１５１Ｆ ）を得た。
＋８．６７（ＩＨ＋８、ＨＢ ｏｒ ＨＢ）、９．７
２（ＩＨ，ｂｒ 、ＮＨ）実施例３ Ｎ６−ペンゾイμｍ３’、６’−０−テトライソプロピ
ｐジシロキサニμｍ２’−０−ＣＣイミダゾ−１−イＡ
／）−チオカルポニμ〕アリステロマイシン（５）の合
成 シリル中間体（４）（３，２７９、１，３ｍｍｏｌ ）
を３０ｓｌの乾燥ジクロロメタンに溶かしチオヵμポ二
μジイミダゾー／’（３，３４９、１８，８ｍｍｏｌ
）を加え、室温下２ｈｒかくはんした。減圧下に溶媒を
除いて得られる残留物を１００＊ＪのＥｔＯＡｃと５０
＃ｔの水で分配し、水層を１ｏ−ｏｙのＥｔＯＡｃで抽
出した。ＥｔＯＡｃ 溶液を合わせ、水洗（５０ｓｌ
×２ ） ＊乾燥後（無水硫酸ナトリウム）減圧濃縮し
て黄色ガラス状物質を得た。これをシリカゲルクロマト
上（７０１Ｆ、溶Ｋ ＨＣＨＣｌ３ オｘヒＣＨＣｌ３
／ＭｅＯＨ＝ ５０／ １ ）で精製し淡黄色ガラス状
の化合物（５）（３，１５１Ｆ ）を得た。
Ｎ Ｍ Ｒ（６０ＭＨｚ、（！ＤＣ１３）δｐｐｍ：
１．０３（２８Ｈｒ ｍ） ｔ ２．２ ２＝５（３Ｈ
ｓ ｍ ＊ Ｈ４’ ＊ ）１５’ ） ＋ ３．８８
（２Ｈ＋ ｍ＊ ■６’ ） ＋ ４−７ ５−３
（２Ｈ＋ ｍ ＊ Ｈ１’ ＋ Ｈ３’ ） ＋ ５−
８３（ｌＨＩｄＸｄ、Ｊ＝２ ａｎｄ５Ｈｚ、Ｈ〆）、
６．８５（ＩＨ。
１．０３（２８Ｈｒ ｍ） ｔ ２．２ ２＝５（３Ｈ
ｓ ｍ ＊ Ｈ４’ ＊ ）１５’ ） ＋ ３．８８
（２Ｈ＋ ｍ＊ ■６’ ） ＋ ４−７ ５−３
（２Ｈ＋ ｍ ＊ Ｈ１’ ＋ Ｈ３’ ） ＋ ５−
８３（ｌＨＩｄＸｄ、Ｊ＝２ ａｎｄ５Ｈｚ、Ｈ〆）、
６．８５（ＩＨ。
ｍ）、７．３７（４Ｈ，ｍ）、７．８２（ＩＨ，ｓ）、
７．８３（２Ｈ、ｍ）、ｓ、１２（ｔＨ，ｍ）、ｓ、＋
３（１ａ、ａ）、９．２ａ（ｘＨ，ｂｒ） 実施例４ Ｎ６−ペンゾイ１ｖ−３’、６’−０−テトライソプロ
ビルジシロキサニル−グーデオキシアリステロマイシン
（６）の合成 ２−チオカμポニｐ体（５）（３，１５Ｑ 、 ４．４
ｍｍｏｌ ）を５０ＷＩｔの乾燥ジオキサンに溶かし減
圧濃縮した（ ｃｕｃ１３ を除くため）。次いで３０
ｓｌの乾燥ジオキサンに溶かし加熱還流しながらトリブ
チルスズヒドリド（４，２４ｆ 、 １４．６ｍｍｏｌ
）の乾燥ジオキサン（ｘｏｄ）溶液を滴下した。途中
α、ｌ−アゾビスイソブチロニトリ／Ｉ／（ＡよりＭ）
の結晶（６００ｗｇ）を少量ずつ加えた。３０分で滴下
を終シ、さらに１．５ ｈｒ還流を続けた。減圧下に溶
媒を除いたのち得られた油状物を２００ｓ＋／のＥｔＯ
Ａｃ に溶かし水洗（５０ゴ×４）、乾燥（無水硫酸ナ
トリウム）後減圧濃縮し黄色シロップ状物質を得た。こ
れをシリカゲルクロマト上（４０９，溶ｊｇ ； ＣＨ
Ｃｌ３） ｆ精製ＬＪ色カ”） ７ 状の化合物（６）
（１，９６９）を得た。
７．８３（２Ｈ、ｍ）、ｓ、１２（ｔＨ，ｍ）、ｓ、＋
３（１ａ、ａ）、９．２ａ（ｘＨ，ｂｒ） 実施例４ Ｎ６−ペンゾイ１ｖ−３’、６’−０−テトライソプロ
ビルジシロキサニル−グーデオキシアリステロマイシン
（６）の合成 ２−チオカμポニｐ体（５）（３，１５Ｑ 、 ４．４
ｍｍｏｌ ）を５０ＷＩｔの乾燥ジオキサンに溶かし減
圧濃縮した（ ｃｕｃ１３ を除くため）。次いで３０
ｓｌの乾燥ジオキサンに溶かし加熱還流しながらトリブ
チルスズヒドリド（４，２４ｆ 、 １４．６ｍｍｏｌ
）の乾燥ジオキサン（ｘｏｄ）溶液を滴下した。途中
α、ｌ−アゾビスイソブチロニトリ／Ｉ／（ＡよりＭ）
の結晶（６００ｗｇ）を少量ずつ加えた。３０分で滴下
を終シ、さらに１．５ ｈｒ還流を続けた。減圧下に溶
媒を除いたのち得られた油状物を２００ｓ＋／のＥｔＯ
Ａｃ に溶かし水洗（５０ゴ×４）、乾燥（無水硫酸ナ
トリウム）後減圧濃縮し黄色シロップ状物質を得た。こ
れをシリカゲルクロマト上（４０９，溶ｊｇ ； ＣＨ
Ｃｌ３） ｆ精製ＬＪ色カ”） ７ 状の化合物（６）
（１，９６９）を得た。
Ｎ Ｍ Ｒ（６０ＭＨｚ、ＣＤＣ１３）δｐｐｍ： １
．０７（２８Ｈ＊ ｓ） ＋ １．８ ２．５（５Ｈ、
ｍ 、Ｈ２ｔ ｌ Ｈ，ｔ 、 １（５ｔ ） 。
．０７（２８Ｈ＊ ｓ） ＋ １．８ ２．５（５Ｈ、
ｍ 、Ｈ２ｔ ｌ Ｈ，ｔ 、 １（５ｔ ） 。
３．８０（２Ｈ，ｍ、Ｈ６’）、４．３ ５．２ （２
Ｈ＋ ｍ ＋ Ｈ１’ ＋ Ｈ３’ ）、７．２３（３
Ｈ，ｍ）、７．７７（ＩＨ，ａ）、７．８０（２Ｈ，ｍ
）、９．６０（１Ｂ、ｂｒ、ＮＨ） 実施例５ Ｎ６−ペンゾイμ−τ−デオキシアリステロマイシン（
７）の合成 ａ）実施例４で得た化合物（６）（１，９６９。
Ｈ＋ ｍ ＋ Ｈ１’ ＋ Ｈ３’ ）、７．２３（３
Ｈ，ｍ）、７．７７（ＩＨ，ａ）、７．８０（２Ｈ，ｍ
）、９．６０（１Ｂ、ｂｒ、ＮＨ） 実施例５ Ｎ６−ペンゾイμ−τ−デオキシアリステロマイシン（
７）の合成 ａ）実施例４で得た化合物（６）（１，９６９。
３．３ｍｍｏｌ）を３０−のテトラヒドロフラン（ＴＨ
Ｆ）に溶かし各５ｔｘｌのＩＭ臭化テトラエチμアンモ
ニウム溶液（５ｒ／）とｌ ＭＫＦ溶液（５譚ｔ）を加
え、４０−４５℃で４日間加熱した。溶媒を減圧下に除
いて得られる油状物を５０ゴの水とＣＨＣｌ３ （３０
ゴ×３）で分配し有機層を乾蝕後（無水硫酸す、トリウ
ム）減圧濃縮し無色シロップ状物質を得た。このものを
シリカゲルクロマト（３０ｇ、溶媒ｉ ＣＨＣｌ３およ
びＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ＝２５０／１５．２５，３５．
５０）で精製し無色シロップ状物質０．４ｇを得た。Ｔ
ＬＣ上の挙動およびＮＭＲスペクトμデータからこのも
のは目的とする化合物（７） 、 還元時に副生じたと
考えられるグーデオキシアリステロマイシン、およびト
リグチ＊ｇヒドリドに由来する化合物の混合物でおるこ
とが明らかになった。
Ｆ）に溶かし各５ｔｘｌのＩＭ臭化テトラエチμアンモ
ニウム溶液（５ｒ／）とｌ ＭＫＦ溶液（５譚ｔ）を加
え、４０−４５℃で４日間加熱した。溶媒を減圧下に除
いて得られる油状物を５０ゴの水とＣＨＣｌ３ （３０
ゴ×３）で分配し有機層を乾蝕後（無水硫酸す、トリウ
ム）減圧濃縮し無色シロップ状物質を得た。このものを
シリカゲルクロマト（３０ｇ、溶媒ｉ ＣＨＣｌ３およ
びＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ＝２５０／１５．２５，３５．
５０）で精製し無色シロップ状物質０．４ｇを得た。Ｔ
ＬＣ上の挙動およびＮＭＲスペクトμデータからこのも
のは目的とする化合物（７） 、 還元時に副生じたと
考えられるグーデオキシアリステロマイシン、およびト
リグチ＊ｇヒドリドに由来する化合物の混合物でおるこ
とが明らかになった。
Ｎ Ｍ Ｒ（６０ＭＨｚ、ＣＤＣ１３）δｐｐｍ： ２
．０−２．５（５Ｈ，ｍ、Ｈ〆、Ｈ４夕ｒ Ｈ５’ ）
＋ ３．６３ （２Ｈ、ｍ 。
．０−２．５（５Ｈ，ｍ、Ｈ〆、Ｈ４夕ｒ Ｈ５’ ）
＋ ３．６３ （２Ｈ、ｍ 。
Ｈ６’）、４．３７（３Ｈ，ｂｒ、Ｈ３Ｆ、ＯＨ）、４
．８−５．２（ＩＨ，ｂｒ、ＨＩ？）、７−２７（３Ｈ
，ｍ）、７．８０（２Ｈ＊ｍ）１８．１２（ｉｎ、８）
、８．４５（ＩＨ，ｓ）、９．５（ＩＨ，ｂｒ）ｂ）ｚ
−デオキシアリステロマイシン（５００ｑ）を乾燥ピリ
ジン１０ｙｓｌに懸濁し、ペンシイ！クロリド（２ｇ／
）を加え、室温で３ｈｒ攪拌した。反応液を４０℃以下
で濃縮乾固したのち、残留物をＣＨＣｌ３ ２０ ｍｌ
に溶解し、水洗したのち、濃縮乾固した。固体を実施例
１と同様にして２Ｎ ＮａＯＨで加水分解し、白色粉末
状のＮ６−ペンゾイ〃−グーデオキシアリステロマイシ
ン（７）の４８０ｍｇを得た。
．８−５．２（ＩＨ，ｂｒ、ＨＩ？）、７−２７（３Ｈ
，ｍ）、７．８０（２Ｈ＊ｍ）１８．１２（ｉｎ、８）
、８．４５（ＩＨ，ｓ）、９．５（ＩＨ，ｂｒ）ｂ）ｚ
−デオキシアリステロマイシン（５００ｑ）を乾燥ピリ
ジン１０ｙｓｌに懸濁し、ペンシイ！クロリド（２ｇ／
）を加え、室温で３ｈｒ攪拌した。反応液を４０℃以下
で濃縮乾固したのち、残留物をＣＨＣｌ３ ２０ ｍｌ
に溶解し、水洗したのち、濃縮乾固した。固体を実施例
１と同様にして２Ｎ ＮａＯＨで加水分解し、白色粉末
状のＮ６−ペンゾイ〃−グーデオキシアリステロマイシ
ン（７）の４８０ｍｇを得た。
Ｃ）チオカルボニル体（５）（１０，８３ｆ 、 １５
．２ｍｍｏｌ ）を１００ｓ／の乾燥ジオキサンに溶か
し加熱還流下にトリブチル錫ヒドリド（１４，１９１Ｆ
。
．２ｍｍｏｌ ）を１００ｓ／の乾燥ジオキサンに溶か
し加熱還流下にトリブチル錫ヒドリド（１４，１９１Ｆ
。
４８、８ ｍｍｏｌ ）のジオキサン溶液とＡよりＨの
結晶（１，８２１Ｆ）を３０分にわたシ少量ずつ加えた
のち更に３０分間加熱還流した。反応液に４．５−の濃
塩酸を滴下したのち室温で３０分間放置した。
結晶（１，８２１Ｆ）を３０分にわたシ少量ずつ加えた
のち更に３０分間加熱還流した。反応液に４．５−の濃
塩酸を滴下したのち室温で３０分間放置した。
重曹（２，５９）を加えたのち溶媒を減圧濃縮して得ら
れた油状物と水溶液の混合物をＣＨＣｌ３ で抽出した
。目的とする（７）は水層にあることがＴＬＣによシ確
認された。この水溶液を２７０９の活性炭カラムに通し
目的物を吸着させ、カラムを水洗したのちアセトン／水
−４／１（ＬＳＩ）で溶出スると少量のグーデオキシア
リステロマイシンがえられる。次いでピリジン／水＝
１／１ （１，５１）で溶出すると目的とする化合物（
７）が得られた。
れた油状物と水溶液の混合物をＣＨＣｌ３ で抽出した
。目的とする（７）は水層にあることがＴＬＣによシ確
認された。この水溶液を２７０９の活性炭カラムに通し
目的物を吸着させ、カラムを水洗したのちアセトン／水
−４／１（ＬＳＩ）で溶出スると少量のグーデオキシア
リステロマイシンがえられる。次いでピリジン／水＝
１／１ （１，５１）で溶出すると目的とする化合物（
７）が得られた。
ここに得られた化合物（７）は褐色に着色しているため
ＨＰ−２０樹脂上で脱色した。水／エタノ−／Ｉ／−３
／２で溶出されるフラクションから化合物（７）の粗÷
Ｉ！ｉ晶２３３ｇを得た。淡黄色柱状晶ｍｐ１７４−１
７５℃（ｆｒｏｍ ＥｔＯＨ）ゎｔ伊竹鮪、１１工９Ｎ
５０３１７今ケ’ｌ ３５３．３９として。
ＨＰ−２０樹脂上で脱色した。水／エタノ−／Ｉ／−３
／２で溶出されるフラクションから化合物（７）の粗÷
Ｉ！ｉ晶２３３ｇを得た。淡黄色柱状晶ｍｐ１７４−１
７５℃（ｆｒｏｍ ＥｔＯＨ）ゎｔ伊竹鮪、１１工９Ｎ
５０３１７今ケ’ｌ ３５３．３９として。
＄： Ｃ；６１．１８． Ｈ；５．４２． ｗｒｘ９．
８２゜勢咋ＪＬ： Ｃ７６１，０８，Ｈ；５．４９．
Ｎ；１９．７１゜実施例６ Ｎ６−ベンゾイル−グーデオキシ−ｅ−０−（４、イー
ジメトキシトリチ／ｌ／）アリステロマイシン（８）の
合成 デオキシ体（７）（１，２５９、３，５ｍｍｏｌ ）を
２０ｍ１の乾燥ピリジンにけんだくし、減圧下共沸脱水
した。次いで１５ｇｔの乾燥ピリジンに溶かし４゜イー
ジメトキシトリチルクロリド（１，４６９゜４．３ｍｍ
＋ｏｌ）を加えたのち室温で４夕ｒ反応した。
８２゜勢咋ＪＬ： Ｃ７６１，０８，Ｈ；５．４９．
Ｎ；１９．７１゜実施例６ Ｎ６−ベンゾイル−グーデオキシ−ｅ−０−（４、イー
ジメトキシトリチ／ｌ／）アリステロマイシン（８）の
合成 デオキシ体（７）（１，２５９、３，５ｍｍｏｌ ）を
２０ｍ１の乾燥ピリジンにけんだくし、減圧下共沸脱水
した。次いで１５ｇｔの乾燥ピリジンに溶かし４゜イー
ジメトキシトリチルクロリド（１，４６９゜４．３ｍｍ
＋ｏｌ）を加えたのち室温で４夕ｒ反応した。
反応液に１ｍｌの水を加え減圧濃縮し、得られた黄色油
状物を１００ｄのＥｔＯＡｃ に溶かし、水洗。
状物を１００ｄのＥｔＯＡｃ に溶かし、水洗。
乾燥後減圧下に溶媒を除き２．２ｇの黄色油状物を得た
。このものをシリカゲルクロマトＣ４ｏｙ。
。このものをシリカゲルクロマトＣ４ｏｙ。
溶媒ｉ ＣＨＣｌ３およびＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ−８０
／ １ ’）にてＭａｌし黄色油状物として１．５ｇの
化合物（８）を得た。
／ １ ’）にてＭａｌし黄色油状物として１．５ｇの
化合物（８）を得た。
ＨＭ Ｒ（６０ＭＨｚ、ＣＤＣ１３）δｐｐｍ： １．
８−２．５（５Ｈ＊ ｍ、Ｈ４Ｆ ＃ Ｈ４’ ｅ Ｈ
５’ ） ＋ ３．７８（６Ｈ、Ｂ ） 。
８−２．５（５Ｈ＊ ｍ、Ｈ４Ｆ ＃ Ｈ４’ ｅ Ｈ
５’ ） ＋ ３．７８（６Ｈ、Ｂ ） 。
３３−８２（２Ｈ１＋Ｈ６Ｑ＃４．３−５．３（２Ｈ，
ｍ、Ｅｌｊ。
ｍ、Ｅｌｊ。
Ｅ３’） 、６．７−７．２（８Ｈ，ｍ） 、７．２７
（８Ｈ，ａおよびＩｎ）、８．１５（１Ｂ、ｓ）、８．
４３（１Ｂ、ｓ）、９．６（ＩＨ、ｂｒ） 実施例７ Ｎ６−ペンゾイμｍグーデオキシ−６’−〇−（４、イ
ージメトキシトリチ／Ｌ’）アリステロマイシン−ｒ−
モノコハク酸エステ１ｖ（９）の合成無水コハク酸（１
，１２９、１１，２ｍｍｏｌ ） 、ジメチルアミノピ
リジン（１，３４９、１１，０ｍｍｏｌ）２および実施
例６で得たデオキシ体（８）（３，２３ｇ＋ ４．’
９ ｍｍｏｌ ）を１６ｇ／の無水ピリジンに溶かし、
室温で一夜反応を行う。反応液を約青まで濃縮しだのち
少し濁シが生じる程度にアセトンと水を加え、Ｌｉｃｈ
ｒｏｐｒｅｐ ＲＰ −８（６０ｔ ）のカフム上で精
製する。アセトン／水＝ １５／ ８５ （ｖ／ｖ）、
２５／７５ （ｖ／ｖ） （いずれも０．１％のピリ
ジンを含む）の順にカラムを洗ったのら６０／４０（ｙ
／ｖ、０．１％ピリジン含有）で目的物を溶出し、溶液
を濃縮乾固した。得られる油状物を少量のジクロルメタ
ンに溶かし、この溶液をヘキサン中に滴下して生じる沈
殿を集めた。真空乾燥し３．２゜すの本発明のグーデオ
キシアリステロマイシン誘導体（９）を得た。
（８Ｈ，ａおよびＩｎ）、８．１５（１Ｂ、ｓ）、８．
４３（１Ｂ、ｓ）、９．６（ＩＨ、ｂｒ） 実施例７ Ｎ６−ペンゾイμｍグーデオキシ−６’−〇−（４、イ
ージメトキシトリチ／Ｌ’）アリステロマイシン−ｒ−
モノコハク酸エステ１ｖ（９）の合成無水コハク酸（１
，１２９、１１，２ｍｍｏｌ ） 、ジメチルアミノピ
リジン（１，３４９、１１，０ｍｍｏｌ）２および実施
例６で得たデオキシ体（８）（３，２３ｇ＋ ４．’
９ ｍｍｏｌ ）を１６ｇ／の無水ピリジンに溶かし、
室温で一夜反応を行う。反応液を約青まで濃縮しだのち
少し濁シが生じる程度にアセトンと水を加え、Ｌｉｃｈ
ｒｏｐｒｅｐ ＲＰ −８（６０ｔ ）のカフム上で精
製する。アセトン／水＝ １５／ ８５ （ｖ／ｖ）、
２５／７５ （ｖ／ｖ） （いずれも０．１％のピリ
ジンを含む）の順にカラムを洗ったのら６０／４０（ｙ
／ｖ、０．１％ピリジン含有）で目的物を溶出し、溶液
を濃縮乾固した。得られる油状物を少量のジクロルメタ
ンに溶かし、この溶液をヘキサン中に滴下して生じる沈
殿を集めた。真空乾燥し３．２゜すの本発明のグーデオ
キシアリステロマイシン誘導体（９）を得た。
実施例８
Ｎ６−ベンゾイル−グーデオキシー６’−０−（４，４
′−ジメトキシトリチ）Ｖ）アリステロマイシンーコー
コハク酸ペンタクロロフェニルエステ！（１０）の合成 実施例７で得た２−デオキシアリステロマイシン誘導体
（９）（４２０ｑ、０．５ｍｍｏｌ ）とペンタクロロ
フェノ−／’（１４０ｑ、０．５ｍｍｏｌ ）を５ゴの
ジクロロメタンに溶かし、ジシクロへキシル力μポジイ
ミド（Ｄ ＣＣ、２０６’ｆ 、 １．Ｏｍｍｏｌ）を
加え室温で一夜反応を行った。析出したジシクロヘキシ
μ尿素を炉去したのち炉液を減圧濃縮し褐色油状物を得
た。これに少量のトルエンを加え、不溶物を枦去したの
ちヘキサン中に滴下して生成する沈殿を遠沈、乾燥し目
的とする化合物（１ｏ）（Ｄ粉末５８０１’ｌを得た（
少量のジシクロヘキシμ尿素を含む）。
′−ジメトキシトリチ）Ｖ）アリステロマイシンーコー
コハク酸ペンタクロロフェニルエステ！（１０）の合成 実施例７で得た２−デオキシアリステロマイシン誘導体
（９）（４２０ｑ、０．５ｍｍｏｌ ）とペンタクロロ
フェノ−／’（１４０ｑ、０．５ｍｍｏｌ ）を５ゴの
ジクロロメタンに溶かし、ジシクロへキシル力μポジイ
ミド（Ｄ ＣＣ、２０６’ｆ 、 １．Ｏｍｍｏｌ）を
加え室温で一夜反応を行った。析出したジシクロヘキシ
μ尿素を炉去したのち炉液を減圧濃縮し褐色油状物を得
た。これに少量のトルエンを加え、不溶物を枦去したの
ちヘキサン中に滴下して生成する沈殿を遠沈、乾燥し目
的とする化合物（１ｏ）（Ｄ粉末５８０１’ｌを得た（
少量のジシクロヘキシμ尿素を含む）。
実施例９
アミノメチル化したポリスチレン樹脂に担持しｆｃ保ａ
ｉ−デオキシアリステロマイシンの製造アミノメチル化
したポリスチレン樹脂（ＮＨ２含量： ０．６３ ｍｍ
ｏｌ／ＩＦ 、蛋白質研究奨励金）２．７０ｇ（１，７
ｍｍｏｌ ）と実施例８で得た活性エステル５８０ツを
２０ｇ／の乾燥ＤＭＦ中で混合し、トリエチルアミン（
０，１４ｙｔｔ１．１．Ｏｍｍｏｌ ）を加えたのち２
５−２８℃で１８ｈｒかくはんした。樹脂を沖取し、Ｄ
ＭＦ’、ピリジンの順に洗い、ついで２５ｔｔｌの無水
ピリジン、５ゴの無水酢酸および１０ＩＩＩｌのトリエ
チルアミン中２５−２８℃でｌｈｒかくはんし遊離して
いるアミノ基を保獲した。樹脂をピリジン、ジクロルメ
タン、エーテμの順に洗ったのち真空乾燥し、樹脂上に
担持されたグーここでＡｒは！−デオキシアリステロマ
イシンであることを示す。
ｉ−デオキシアリステロマイシンの製造アミノメチル化
したポリスチレン樹脂（ＮＨ２含量： ０．６３ ｍｍ
ｏｌ／ＩＦ 、蛋白質研究奨励金）２．７０ｇ（１，７
ｍｍｏｌ ）と実施例８で得た活性エステル５８０ツを
２０ｇ／の乾燥ＤＭＦ中で混合し、トリエチルアミン（
０，１４ｙｔｔ１．１．Ｏｍｍｏｌ ）を加えたのち２
５−２８℃で１８ｈｒかくはんした。樹脂を沖取し、Ｄ
ＭＦ’、ピリジンの順に洗い、ついで２５ｔｔｌの無水
ピリジン、５ゴの無水酢酸および１０ＩＩＩｌのトリエ
チルアミン中２５−２８℃でｌｈｒかくはんし遊離して
いるアミノ基を保獲した。樹脂をピリジン、ジクロルメ
タン、エーテμの順に洗ったのち真空乾燥し、樹脂上に
担持されたグーここでＡｒは！−デオキシアリステロマ
イシンであることを示す。
実施例１０
５’ＧＴＣＣＴＧＧＣＡＴＧＣＡＣＴＴＧＣＡｒ３’の
合成ア□９□、ゎえ。ＭＴ−Ｘニー。２．□□合成用反
応器に入れ、３％トリクロル酢酸（ＴＣＡ）のジクロロ
メタン溶液と接触させ、σ位のジメトキシトリチ／ｌ／
（ＤＭＴ）基を除去し、１位を水酸基にもどした。この
ＤＭＴ脱保護体に、しｂ ス）のごリン酸エステルのシアノエチ／Ｉ／（ＣＥ）保
護基を塩基性条件下で除去したものを、メシチレンスμ
ホニＡ／−３−ニトロトリアゾリド（ＭＳＮＴ）３０１
１ｇの存在下に、４０℃、２０分間反応させて縮合させ
た。かくして得られた Ｄ ｕ Ｔ ＧｌＢＣ” Ａｒ’”−［Ｆ］ヲＴ ＣＡ
溶ｅ、 テ’ＡＮ Ｌ テ５’位のＤＭＴ基を除去し
たのち、同様にして次のダイマーブロックＴＴを縮合さ
せた。以下、この方法で、ＡＣ，ＧＣ，ＡＴ、ＧＣ，Ｔ
Ｇ、ＣＧ、ＧＴの順にダイマーブロックを縮合させ、Ｄ
ＭＴＧを得た。このものを、０．５Ｍピリジンアルドキ
シムおよびテトラメチルグアニジンの混合溶液１．８ば
て処理したのち、樹脂粒を除去した。本オリゴマー溶液
を濃アンモニア水中で６０℃、４ｈｒ加熱し、塩基部分
の各保護基を除去した。反応混合物を、イオン交換高速
液体クロマトグツフィー（Ｐａｒｔｉａｌ ｌＯＳＡＸ
、溶媒＝５％ＣＨ３０Ｎ および３０％ＣＨ３０Ｈの
０．３ Ｍ ＫＨ２ＰＯ４溶液（ｐＨ６，３））上で直
線濃度勾配法により精製した。最も遅く溶出される目的
物フラクションを脱塩したのち、８０％酢酸でＤＭＴ基
を除去し、逆相高速液体クロマトグラフィー（Ｎｕｃｌ
ｅｏｓｉｌ ５Ｇ１Ｂ、溶媒：５％ＣＨ３ＣＭ を含む
０．１Ｍトリエチルアミン−酢酸（ＴＥＡＡ）溶液およ
び４０％Ｃ）１３ＯＮ を含む０．１ Ｍ Ｔ Ｅ Ａ
Ａ溶液の直線濃度勾配法で溶出〕上で精製し、目的と
するオリゴマー（１４ｏｌ）２６０）を得た。
合成ア□９□、ゎえ。ＭＴ−Ｘニー。２．□□合成用反
応器に入れ、３％トリクロル酢酸（ＴＣＡ）のジクロロ
メタン溶液と接触させ、σ位のジメトキシトリチ／ｌ／
（ＤＭＴ）基を除去し、１位を水酸基にもどした。この
ＤＭＴ脱保護体に、しｂ ス）のごリン酸エステルのシアノエチ／Ｉ／（ＣＥ）保
護基を塩基性条件下で除去したものを、メシチレンスμ
ホニＡ／−３−ニトロトリアゾリド（ＭＳＮＴ）３０１
１ｇの存在下に、４０℃、２０分間反応させて縮合させ
た。かくして得られた Ｄ ｕ Ｔ ＧｌＢＣ” Ａｒ’”−［Ｆ］ヲＴ ＣＡ
溶ｅ、 テ’ＡＮ Ｌ テ５’位のＤＭＴ基を除去し
たのち、同様にして次のダイマーブロックＴＴを縮合さ
せた。以下、この方法で、ＡＣ，ＧＣ，ＡＴ、ＧＣ，Ｔ
Ｇ、ＣＧ、ＧＴの順にダイマーブロックを縮合させ、Ｄ
ＭＴＧを得た。このものを、０．５Ｍピリジンアルドキ
シムおよびテトラメチルグアニジンの混合溶液１．８ば
て処理したのち、樹脂粒を除去した。本オリゴマー溶液
を濃アンモニア水中で６０℃、４ｈｒ加熱し、塩基部分
の各保護基を除去した。反応混合物を、イオン交換高速
液体クロマトグツフィー（Ｐａｒｔｉａｌ ｌＯＳＡＸ
、溶媒＝５％ＣＨ３０Ｎ および３０％ＣＨ３０Ｈの
０．３ Ｍ ＫＨ２ＰＯ４溶液（ｐＨ６，３））上で直
線濃度勾配法により精製した。最も遅く溶出される目的
物フラクションを脱塩したのち、８０％酢酸でＤＭＴ基
を除去し、逆相高速液体クロマトグラフィー（Ｎｕｃｌ
ｅｏｓｉｌ ５Ｇ１Ｂ、溶媒：５％ＣＨ３ＣＭ を含む
０．１Ｍトリエチルアミン−酢酸（ＴＥＡＡ）溶液およ
び４０％Ｃ）１３ＯＮ を含む０．１ Ｍ Ｔ Ｅ Ａ
Ａ溶液の直線濃度勾配法で溶出〕上で精製し、目的と
するオリゴマー（１４ｏｌ）２６０）を得た。
実施例１１
Ｎｒｕ Ｉ用リンカ−（ＡＡＴＴＴＣＧＣＧＡｒ ）の
合成 りＭＴ−大ｒ−［Ｆ］ ２５＃、市販の保護上ツマ−お
よびダイマーを用い、実施例１０と同様の方法により、
次の順序で上記のオリゴマーを合成した。
合成 りＭＴ−大ｒ−［Ｆ］ ２５＃、市販の保護上ツマ−お
よびダイマーを用い、実施例１０と同様の方法により、
次の順序で上記のオリゴマーを合成した。
逆相およびイオン交換高速液体クロマトグラフィー（Ｉ
（ＰＬＣ）を用いて生成物を精製し、３０ｏｎ）２６０
の目的物を得た。
（ＰＬＣ）を用いて生成物を精製し、３０ｏｎ）２６０
の目的物を得た。
（イ）は溶液中において、
Ｆ； ＡＡＴＴＴＣＧＣＧＡｒ ３’
’ｉｔ ＡｒＧ Ｃａ ＣＴ Ｔ Ｔ Ａ ｐ、 ｓ’
なる部分的自己相補鎖となりプラスミドのＥｃｏＲＩ切
断箇所に挿入できることは後述の参考例から明らかであ
る。
なる部分的自己相補鎖となりプラスミドのＥｃｏＲＩ切
断箇所に挿入できることは後述の参考例から明らかであ
る。
実施例１２
オリゴマー（イ）の５′末端のリン酸化（イ）の水溶液
５μＪ（１μす７μｍ）を６μ！のリン酸化用バッファ
ー（０，５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＭＣＩ ｐＨ７，６，０，１
ＭＭｇＣ１２−０，１Ｍ ２−メ／Ｌ’カフ’）−１ｍ
タ／−／ｌ／）と３９μ！の蒸留水に混合し、７０℃で
２分間加熱したのち３７℃に冷却し、この溶液に６μ！
の１ｍＭＡＴＰ、３＃ｊのＴ ４ ｐｏ１３ｍｕｃｌｅ
ｏｔｉｄｅｋｉｎａａｅ （宝酒造）、および１μ！の
蒸留水を加参考例１ ｐＢＲ３２２のＥｃｏＲＩによる消化 市販のｐＢＲ３２２の溶液１５μＪ（１，ｓμｇ）を３
μｍのバッファー（Ｉ Ｍ ＮａＣ１，０，５Ｍ Ｔｒ
ｉａ−ＨＣＩ ｐＨ１５，０，１ＭＭｇＧ１２，１０ｍ
Ｍ ＤＴＴ）、３μ７！のＥｃｏＲＩ、および１０μ！
の蒸留水と混合し、３７℃で４ｈｒ加温した。ついでフ
ェノール処理したのち消化されたＤＮＡをＥｔＯＨで沈
殿させることによＦ）ＥｃｏＲ工部位で切断されたｐＢ
Ｒ３２２を採取した。
５μＪ（１μす７μｍ）を６μ！のリン酸化用バッファ
ー（０，５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＭＣＩ ｐＨ７，６，０，１
ＭＭｇＣ１２−０，１Ｍ ２−メ／Ｌ’カフ’）−１ｍ
タ／−／ｌ／）と３９μ！の蒸留水に混合し、７０℃で
２分間加熱したのち３７℃に冷却し、この溶液に６μ！
の１ｍＭＡＴＰ、３＃ｊのＴ ４ ｐｏ１３ｍｕｃｌｅ
ｏｔｉｄｅｋｉｎａａｅ （宝酒造）、および１μ！の
蒸留水を加参考例１ ｐＢＲ３２２のＥｃｏＲＩによる消化 市販のｐＢＲ３２２の溶液１５μＪ（１，ｓμｇ）を３
μｍのバッファー（Ｉ Ｍ ＮａＣ１，０，５Ｍ Ｔｒ
ｉａ−ＨＣＩ ｐＨ１５，０，１ＭＭｇＧ１２，１０ｍ
Ｍ ＤＴＴ）、３μ７！のＥｃｏＲＩ、および１０μ！
の蒸留水と混合し、３７℃で４ｈｒ加温した。ついでフ
ェノール処理したのち消化されたＤＮＡをＥｔＯＨで沈
殿させることによＦ）ＥｃｏＲ工部位で切断されたｐＢ
Ｒ３２２を採取した。
参考例２
新プラスミドｐＢＲ２５５２の構築
実施例１２で得たリンカ−の溶液４μｌｃ０．２μｇ）
と参考例１で得たＤＮＡの溶液（７５μ！。
と参考例１で得たＤＮＡの溶液（７５μ！。
０．６μｇ）を２μｊのバッファー（０，６６Ｍ、 Ｔ
ｒｉｓ−ＨＣＩ ｐＨ７，６、６６ｍＭ ＭｇＣｌ２．
０．１ ＭＤＴＴ）、２／ＡＪの１０ｍＭ ＡＴＰ、３
１１１のＴ４ＤＮＡ１１ｇａａｅ 、および１．５／ｊ
Ｊの蒸留水と混合し、１４℃で一夜ライゲーションを行
ない、新規プラスミドｐＢＲ２５５２を得た。
ｒｉｓ−ＨＣＩ ｐＨ７，６、６６ｍＭ ＭｇＣｌ２．
０．１ ＭＤＴＴ）、２／ＡＪの１０ｍＭ ＡＴＰ、３
１１１のＴ４ＤＮＡ１１ｇａａｅ 、および１．５／ｊ
Ｊの蒸留水と混合し、１４℃で一夜ライゲーションを行
ない、新規プラスミドｐＢＲ２５５２を得た。
参考例３
ｐＢＲ２５５２の大腸菌（Ｅ、 ｃｏｌｉ Ｄ Ｈｌ
（ｃｏｍｐｅ−ｔｅｎｔ ｃｅｌｌ） ）への取シ込み
と形質転換参考例２で得たプラスミドｐＢＲ２５５２を
含む溶液を、Ｅ、 ｃｏｌｉ Ｄ Ｈｌ （ｃｏｍｐｅ
ｔｅｎｔ ｃｅｌｌ ）を浮遊させた溶液１００＃Ｊ
（１ｘｌＯ７ｃａｌ１ｇ）に加え０℃で３０分、４２℃
で９０秒、ついで０℃の培養を行った。ここに得た培養
液を寒天培地（０，１１１ＭＩ／ａｔのアンピシリンを
含むＬ−ｂｒｏｔｈ）に移し、３７℃で一夜保温しコロ
ニーを成育させた。多数の成育したコロニーから６０個
を選び、アルカリ法によるミニスクリーニングを行った
ところ、Ｎｒｕ Ｉで約９８０ ｂｐおよび約３４００
ｂｐの断片を与える３８個のクローンが発見された。
（ｃｏｍｐｅ−ｔｅｎｔ ｃｅｌｌ） ）への取シ込み
と形質転換参考例２で得たプラスミドｐＢＲ２５５２を
含む溶液を、Ｅ、 ｃｏｌｉ Ｄ Ｈｌ （ｃｏｍｐｅ
ｔｅｎｔ ｃｅｌｌ ）を浮遊させた溶液１００＃Ｊ
（１ｘｌＯ７ｃａｌ１ｇ）に加え０℃で３０分、４２℃
で９０秒、ついで０℃の培養を行った。ここに得た培養
液を寒天培地（０，１１１ＭＩ／ａｔのアンピシリンを
含むＬ−ｂｒｏｔｈ）に移し、３７℃で一夜保温しコロ
ニーを成育させた。多数の成育したコロニーから６０個
を選び、アルカリ法によるミニスクリーニングを行った
ところ、Ｎｒｕ Ｉで約９８０ ｂｐおよび約３４００
ｂｐの断片を与える３８個のクローンが発見された。
参考例４
新しいプラスミドｐＢＲ２５５２の大量分離および各種
制限酵素による消化 参考例３で行われたミニスクリーニングの結果をもとに
選択されたコロニーを大量培養（Ｌ−ｔ）ｒｏｔｈ 、
α１呼／ゴのアンピシリン含有）し、遠沈して集めた菌
体をリゾチームおよびＲＮａｓｅ Ａで処理し、ついで
塩化セシウム溶液中超遠心（５５０００回転 １７時間
）によりプラスミドｐＢＲ２５５２を単離した。発色に
使用したエチジウムプロミドをブタノ−μで抽出したの
ち１０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣＩ（ｐＨ８）および１ｍＭＥ
ＤＴＡ（ｐＨ８）を含む水溶液ＩＪ中で透析を行い、１
．３ｇｊのプラスミド溶液（１０ｔｔｙ／μｊ）を得た
。
制限酵素による消化 参考例３で行われたミニスクリーニングの結果をもとに
選択されたコロニーを大量培養（Ｌ−ｔ）ｒｏｔｈ 、
α１呼／ゴのアンピシリン含有）し、遠沈して集めた菌
体をリゾチームおよびＲＮａｓｅ Ａで処理し、ついで
塩化セシウム溶液中超遠心（５５０００回転 １７時間
）によりプラスミドｐＢＲ２５５２を単離した。発色に
使用したエチジウムプロミドをブタノ−μで抽出したの
ち１０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣＩ（ｐＨ８）および１ｍＭＥ
ＤＴＡ（ｐＨ８）を含む水溶液ＩＪ中で透析を行い、１
．３ｇｊのプラスミド溶液（１０ｔｔｙ／μｊ）を得た
。
ここに得たプラスミドを数種の制限酵素を組み合わせて
消化実験を行い、アガロースおよびポリアクリ！アミト
ゲｙ上での電気泳動による切断片の挙動を観察しく第４
表参照）、目的とするプラスミドｐＢＲ２５５２（第１
図）が得られたことを確認した。
消化実験を行い、アガロースおよびポリアクリ！アミト
ゲｙ上での電気泳動による切断片の挙動を観察しく第４
表参照）、目的とするプラスミドｐＢＲ２５５２（第１
図）が得られたことを確認した。
さらにｐＢＲ３２２とｐＢＲ２５５２を比較するためＨ
ａｅｌｌＩおよびＨａｅ Ｍ −Ｎｒｕ Ｉによる消化
実験を行った。ｐ８Ｒ３２２ではＩｃｏＲＩの認識部位
を含むＨａｅ ｍ の断片の長さは１９２ｂｐである。
ａｅｌｌＩおよびＨａｅ Ｍ −Ｎｒｕ Ｉによる消化
実験を行った。ｐ８Ｒ３２２ではＩｃｏＲＩの認識部位
を含むＨａｅ ｍ の断片の長さは１９２ｂｐである。
ｐＢＲ２５５２はＥｃｏＲＩの認識部位を切夛開いて新
たにＮｒｕＩ用リンカ−（ｌＱｍｅｒ）を組み込んだた
め１９２ｂｐの断片は得られず、２０２ ｂｐの断片と
なるはずである。このことが消化物のポリアクリルアミ
トゲ／ｌ’電気泳動上の挙動から確認された（第２図）
。
たにＮｒｕＩ用リンカ−（ｌＱｍｅｒ）を組み込んだた
め１９２ｂｐの断片は得られず、２０２ ｂｐの断片と
なるはずである。このことが消化物のポリアクリルアミ
トゲ／ｌ’電気泳動上の挙動から確認された（第２図）
。
また上記２０２ ｂｐと５１ｂｐの断片（ｐＢＲ２５５
２から）はＮｒｕ Ｉの認識部位をもっているためＨａ
ｅｌ［−Ｎｒｕ工による消化を受けさらに短い断片とな
る（２０２ｂｐ→１８０ｂｐ＋２２ｂｐ、５１ｂｐ→３
１ｂｐ ＋２０ｂｐ）。このこともポリアクリルアミト
ゲルミ気泳動上の挙動から確認された（第３図）。した
がってｐＢＲ３２２の１［ｉ：ｃｏＲ工消工部化部位ｒ
を含むＮｒｕＩ用リンカ−（イ＋ １０ 、ｍａｒ ）
は−個だけ組み込まれたこと。
２から）はＮｒｕ Ｉの認識部位をもっているためＨａ
ｅｌ［−Ｎｒｕ工による消化を受けさらに短い断片とな
る（２０２ｂｐ→１８０ｂｐ＋２２ｂｐ、５１ｂｐ→３
１ｂｐ ＋２０ｂｐ）。このこともポリアクリルアミト
ゲルミ気泳動上の挙動から確認された（第３図）。した
がってｐＢＲ３２２の１［ｉ：ｃｏＲ工消工部化部位ｒ
を含むＮｒｕＩ用リンカ−（イ＋ １０ 、ｍａｒ ）
は−個だけ組み込まれたこと。
が明白である。
発明の効果
本発明の一般式〔工〕の２′−デオキシアリステロマイ
シン誘導体は、これを３′位を介して同相合成用担体に
結合せしめて、３′末端に７−ダオキシアリステロマイ
シンを有するオリゴデオキシヌクレオチドの固相合成法
に有利に適用できる。すなわち、本固相合成法によると
、酸性条件下でも、オリゴマーの３′末端に位置するグ
ーデオキシアリステロマイシンの脱プリン化が全く起こ
らナイトいう特徴がある。しかも、かくして得られたオ
リゴデオキシヌクレオチドは、前述の参考例でも示すよ
うに、遺伝子操作において３′末端にデオキシアデノシ
ンを有するオリゴマーと同様に用いることができる。す
なわち、本発明のオリゴデオキシヌクレオチドが挿入さ
れたベクターは、微生物によ）、デオキシアデノシンを
含むものと全く同様に認識され、プラスミド複製の際に
はデオキシアデノシンに置換されるので、極めて好都合
である。
シン誘導体は、これを３′位を介して同相合成用担体に
結合せしめて、３′末端に７−ダオキシアリステロマイ
シンを有するオリゴデオキシヌクレオチドの固相合成法
に有利に適用できる。すなわち、本固相合成法によると
、酸性条件下でも、オリゴマーの３′末端に位置するグ
ーデオキシアリステロマイシンの脱プリン化が全く起こ
らナイトいう特徴がある。しかも、かくして得られたオ
リゴデオキシヌクレオチドは、前述の参考例でも示すよ
うに、遺伝子操作において３′末端にデオキシアデノシ
ンを有するオリゴマーと同様に用いることができる。す
なわち、本発明のオリゴデオキシヌクレオチドが挿入さ
れたベクターは、微生物によ）、デオキシアデノシンを
含むものと全く同様に認識され、プラスミド複製の際に
はデオキシアデノシンに置換されるので、極めて好都合
である。
第１図はプラスミドｐＢＲ２５５２の制限酵素地図を示
し、図中の数字はｐＢＲ３２２におけるＥｃｏＲＩから
の塩基数を示す。第２図は、ｐＢＲ３２２およびｐＢＲ
２５５２をＨａｅ Ｉ［で消化したときの、また第３図
は）ｌａｅ ｍ−Ｎｒｕ Ｉによシ消化したときの消化
物のポリアクリルアミトゲ／Ｌ／′ｆｌＬ気泳動上の挙
動をそれぞれ示す。
し、図中の数字はｐＢＲ３２２におけるＥｃｏＲＩから
の塩基数を示す。第２図は、ｐＢＲ３２２およびｐＢＲ
２５５２をＨａｅ Ｉ［で消化したときの、また第３図
は）ｌａｅ ｍ−Ｎｒｕ Ｉによシ消化したときの消化
物のポリアクリルアミトゲ／Ｌ／′ｆｌＬ気泳動上の挙
動をそれぞれ示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）一般式 （式中、Ｒ１はアミノ基保護基を、Ｒ２は水素またはス
ペーサー残基を、Ｒ３は水素または水酸基保護基をそれ
ぞれ示す）で表わされるｌ−デオキシアリステロ７４７
７４４体。 ２）一般式 （式中、Ｒ１はアミノ基保護基を、Ｒ２は水素またはス
ペーサー残基を、Ｒ３は水素または水酸基保護基をそれ
ぞれ示す）で表わされるｌ−デオキシアリステロマイシ
ン誘導体を３′位を介して結合せしめてなるオリゴデオ
キシヌクレオチド同相合成用担体。 ３） ３’末ＭＫτ−デオキシアリステロマイシンを有
するオリゴデオキシヌクレオチド。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59073822A JPS60215685A (ja) | 1984-04-11 | 1984-04-11 | ２’−デオキシアリステロマイシン誘導体およびその用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59073822A JPS60215685A (ja) | 1984-04-11 | 1984-04-11 | ２’−デオキシアリステロマイシン誘導体およびその用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60215685A true JPS60215685A (ja) | 1985-10-29 |
Family
ID=13529224
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59073822A Pending JPS60215685A (ja) | 1984-04-11 | 1984-04-11 | ２’−デオキシアリステロマイシン誘導体およびその用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60215685A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4968674A (en) * | 1986-03-06 | 1990-11-06 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Antiviral carbocyclic purine nucleosides |
-
1984
- 1984-04-11 JP JP59073822A patent/JPS60215685A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4968674A (en) * | 1986-03-06 | 1990-11-06 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Antiviral carbocyclic purine nucleosides |
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