JPS60202361A - 改良螢光測定法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は改良螢光測定法に関する。

臨床医学診断分野における普通の非同位元累分析法には
以後配位子とよばれる臨床的に重要物質の分光又は螢光
測定法がある。この方法は非常に敏感で特殊であり、光
学的性質、即ち試験溶液中の特定配位子の存在で生ずる
試験溶液の透光性又は螢光性変化の測定に基づく。

分光試験における試験溶液内の測定される配位子と配位
子に特定の試薬系間の相互作用は試験溶液の透光性に測
定できる変化を生ずる。透過性の変化とは既知強さの光
線が試験溶液をとおった時の特定波長帯内の試験溶液に
よって吸収された又は散乱された光量をいう。試験溶液
の透過性の変化は既知強さをもつ単色光全試験溶液にと
おし透過又は散乱光強さの入射光強さに対する比率を検
査して測定する。試験溶液の透過性の検出できる変化を
生成するため殆んど全配位子が特定波長のエネルギーを
吸収するか又は試験溶液中特定試薬系と相互作用するか
いづれかである事実は多数の特殊分光測定法の開発とな
っている。試験溶液中の配位子測定として試験溶液の透
光性の変化測定に基づく分光測定には例えば試験溶液の
色変化による比色試験および試験溶液内の濁度変化によ
る濁度又は比濁試験がある。

比色試験では試験溶液の透光性の変化は一般に試験溶液
の吸光度といい測定する配位子と配位子に特定の試薬系
の相互作用による試験溶液の色の変化によるのである。

試験溶液の吸光度はその中の配位子濃度に比例する。比
色試験は試験溶液の透光性、特に色の検出できる変化を
生成するため試験溶液中で問題の特定配位子と相互作用
しうる発色試薬系を利用する。特定配位子測定に便利な
発色試薬系が多数開発されており市販されている。比濁
試験の原理は試験溶液を元が通過する際特定物質により
散乱される又は阻止される光量の測定にある。比濁試験
において問題の配位子は試験溶液中に粒子の懸濁物をつ
くるため配位子に特定の試薬系と相互に作用する。既知
強さをもつ光線が試験溶液をとおる際配位子と試薬系の
相互作用で生じた粒子懸濁液は入射光を阻止又は散乱し
て試験溶液をとおる光強さを減少する。濁度測定におけ
る透光性変化は試験溶液をとおる光強さの減少をいい、
粒子懸濁物によって散乱又は阻止された入射光量に比例
し存在する粒子数とこの粒子の断面積による。比濁試験
は問題の配位子が配位子に特定の試薬系と相互作用して
試験溶液中粒子懸濁物を生成する点で濁度試験と同じで
ある。比濁試験では試験溶液の透光性変化も粒子懸濁物
によって散乱され又は阻止される入射光量に比例にする
が、試験溶液をとおる光強さを測定する濁度試験とちが
って試験溶液への光入射角における散乱又は阻止された
光を測定する。したがって比濁試験で扛透光性の変化は
試験溶液に入る光と入射光に対する角で散乱された光と
の強さの差をいう。濁度試験と比濁試験は血液、尿、を
髄液等の分析で有効な発色試薬系のないため比較する比
色試験のない蛋白質の様な配位子測定に使われる。ヨー
エとクリムマンはニューヨーク市つイレイ　アンド　サ
ンズ社編Ｐｈｏｔｏｅ１ｇｃｔｒｉｃ　Ｃｈｅｍｉｃａ
ｌ　ＡｎａＬｙｓｉｓ　１１巻：Ｎ５ｐｈｅ　ｌ　ｏｓ
ｓ　ｔｒｙ　（１９２９）に種々の比濁試験について記
載している。

一般に螢光試験においては試験溶液中の配位子は化学的
に又は免疫学的に螢光性複合物又は共役物に変えられて
試験溶液の螢光性に検知できる変化を生ずる。試験溶液
の螢光性変化は生成した螢光性複合物又は共役物を螢光
体の励起波長帯内の波長をもつ単色光で励起し螢光体の
放射波長帯内の波長をもつ放射光強さを測定して見られ
る。放射光の螢光強さは配位子濃度に比例する。しかし
試験溶液によって放出された螢光強さは測定する配位子
が試料中にある蛋白質又はりん酸塩の様な非螢光性妨害
物と複合する場合又は測定する配位子ｔ＝ｔむ試料がフ
ィルターとして働らくに十分な色をもって放射螢光強さ
を減少する場合抑制される。螢光測定試験の感度と特異
性を最大とするためこれらの抑制要素があるならば分析
前に非螢光性妨害物又は色生成物質を除去するか又は試
料の第２部分に加えた内部標準を用いてこの要素の存在
を補償しまた内部標準音もつ試料を用いて全試験法を行
なうかいづれかでこれら抑制要素をなくす必要があるこ
とがよくわかる。

本発明の目的は試験溶液によって放射された螢光強さが
測定する配位子と配位子の存在で試験溶液の透光性の変
化を生じうる試薬系との相互作用により生ずる透光性変
化に比例する様な試験溶液中の配位子の螢光測定法を提
供するものである。また本発明の目的は試験溶液中の配
位子濃度の分光測定か螢ツ鏝１１定のいづれかを利用で
きる新規の試薬組成物の提供にある。

本発明は配位子ｒｔむと思われる試料中の配位子測定法
に関するもので、その方法は上記試料、螢光体の有効量
および測定する配位子の存在で螢光体の励起および（又
ａ）放射波長帯と重なる波長帯内で試験浴液の透光性を
変えうる試薬系の有効量を混合して試験溶液全生成し試
験溶液を螢光体の励起波長帯内の波長をもつ光で照射し
た後試験溶液によって放射された螢光強さｔ試料中の配
位子濃度の尺度として測定することより成る。

本発明は更に配位子を宮む溶液の透光性変化音生じうる
試薬系の有効量および試薬と配位子を営む溶液の透光性
変化と開巻した波長帯と重複する励起および（又は）放
射波長帯をもつ螢光体の有効量より成る上記配位子を宮
むと思われる試料中の配位子螢光測定用新規試薬組成物
に関する。

本発明の方法により生物学的試料中の配位子は試験溶液
中に上記試料、試薬系有効量および螢光体有効量を混合
して測定される。試験溶液を螢光体の励起波長帯内の波
長をもつ光で照射し試験溶液によって放出された螢光強
さを試料中の配位子濃度の指示として測定するのである
。試験溶液によって放出された螢光強さは配位子と試薬
系の相互作用から生ずる試験溶液の透光性変化に比例す
る。

本明細書で使う“試験溶液の透光性変化″とは既知強さ
の光線が試験溶液をとおる時特定波長帯内で試験浴液に
より吸収又は散乱された光量をいい、一般に試験溶液の
色又は濁度の変化による。特に透過性の変化は配位子と
配位子に特定な試薬系の相互作用から実質的に生ずる様
な特定波長帯内の試験溶液により吸収された又は散乱さ
れた光量変化？いう。透過性の変化は一般に既知強さを
もつ単色光全試験溶液にとおし入射光強さに対する透過
又は散乱光強さの比全測定してめられる。透過性変化、
即ち特定波長帯内の試験溶液により吸収又は散乱された
光量変化は試験溶液中の配位子濃度に比例する。今や配
位子、試薬系および螢光体を含む試験溶液において螢光
体の励起および■は）放射波長帯と重なる波長帯内で配
位子と試薬系の相互作用から生ずる透過性の変化も試験
溶液から放出される螢光強さの比例的変化となることが
わかっている。故に本発明の方法にエリ試験溶液により
放出される螢光強さの変化は試験浴液の配位子濃度に比
例する。重要なことは本発明の方法による測定する配位
子、試薬系および螢光体’ｔ−ｔむ試験、溶液により放
出された螢光強さの変化は試薬系と螢光体のみを含む試
験溶液から放出される螢光強さと比べると全く配位子と
試薬系の相互作用によって生じた透過性変化によるもの
である。試験溶液中螢光体と他のどの成分、即ち測定す
る配位子又は試薬系との間には化学的又は免疫学的のい
づれの反応もない。故に試験溶液により放出された螢光
強さは螢光体と試験浴液内にあるかもしれない発色物質
又は懸濁粒子との間の分子間距離によるものではない。

本発明の方法によって測定できる配位子には比色的、濁
度的又は比濁的に測定できる臨床的に重要な物質がある
。

即ち配位子は試験浴液中の配位子濃度に比例して透過性
の検出できる変化を生ずる様試薬系と相互作用しうるも
のでなけれはならない。本発明の方法により分析できる
代弄的配位子には例えばグルコース、ウル酸、コレステ
ロール、クガチニン、ラフティト、ラフティト　デヒド
ロジエナーゼ（ＬＤＨ）、）リグリセリド、イムノグロ
ブリン、ユリネステラーゼ、血清グルタメイト　オキサ
ラクチイトトランスアミナーゼ、（ＳＧＯＴ）、血清グ
ルタメイト　ビルヴエイトトランスアミナーゼ（ＳＧＰ
Ｔ）、クレアチンホスホキナーゼ（ＣＰＫ八エへノール
、全蛋白質、アルブミン、カルシウム、ビリルビン、血
液尿Ｘ窒素（ＥＵＮ）、アンモニア、マグネシウム、り
ん、塩化物等がある。

“螢光体″とは試薬系と配位子を含む溶液の透光特性に
関連した螢光特性をもつ化合物又は組成物をいう。特に
螢光体と関連した励起又は放射波長帯は配位子と試薬系
の相互作用から生ずる試験溶液の透光性変化と関連した
波長帯と重複する必要がある。また上記のとおり螢光体
と測定する配位子又は試薬系の間の化学的又は免疫学的
納会はない。

他の考えは試薬系のｐＨに関する。螢光体は試薬系に対
し測定する配位子と相互反応するに有効なｐＨ範囲内で
螢光を発しなければならない。また本発明の方法に有効
な螢光体は非結合および非複合状態において螢光性であ
る。比色試験において螢光体と関連する励起波長帯又は
放射波長帯は少なくともある程度配位子と呈色試薬系の
相互作用に関連する吸収波長帯と重複する必要がある。

最大試験感度のためには配位子と呈色試薬系の相互作用
から生ずる吸収波長帯が螢光体に関連する励起波長帯と
放射帯の両方と重複することが好ましい。濁度試験又は
比濁試験では螢光体に関連した励起又は放射波長帯は少
なくもある程度配位子と濁度測定又は比濁測定試薬系’
ｔｆむ試験溶液の濁度が測定される様な波長帯と重複す
る必要がある。本明細書で透光性変化と関連した波長帯
および螢光体の励起および（又は）放射波長帯の“重複
″はそれぞれの波長帯の一部又は全部の重複のいずれか
をいう。

本発明の方法には広く種々の螢光体か使用できる。すで
に述べたとおり螢光体の選択は測定する特定配位子と使
用する試薬糸によるだろう。本発明の方法に使用できる
螢光体の代表的なものは例えばフルオレジイン、ローダ
ミン、フラビン、クーマリン、ナフタレン、アクリジン
、アンスラセン、多核溶融炭化水素、スチルベン、アン
トラニル酸、アミノスチリルピリジン、キノリン、サリ
チル酸、シアニン、オクソノール、フェナンチジン、フ
ルオレスカミン並びにその誘導体と塩がめる。使用でき
る螢光体の特例には例えばエオシン、ローダミン、アミ
ノナフタレンスルボネイト、アクリフラビン、フルオレ
ジイン、ジヒドロキシ安息香酸、ヒドロキシキノリン、
ＮＡＤＨ，リボフラビン、ブリリアントサルファフラビ
ン、キニン、ナフトールスルホン酸、チオフラビン、ク
ーマリン、アクリジンオレンジ、８−キノリン−１−ナ
フタレンスルホン酸、オキサジン、ウンベリフェロン、
アクリジン、レゾルフィンおよびこれらの誘導体と塩が
ある。本発明の方法に有効な螢光体の選択線この分野の
技術をもつ者には容易に確認できるだろう。

本明細書で使う“螢光体の有効量″とは試験溶液に配位
子とそれに特定の試薬系を加えた場会試験溶液によって
放出される螢光強さの認められる変化を生ずるに十分な
試験溶液中の螢光体濃度をいう。この有効量は一般にこ
の技術分野の仰識ある者によって確かめられ、例えば特
定試薬系、測定する配位子、特定螢光体又は螢光強さ測
定器械の様な１又は２以上の要素による。

本明細書で使う”試薬系″とは問題の配位子の存在で螢
光体の励起および（又は）放射波長帯と重なる波長帯内
の試験溶液の透過性変化金主ずる１又は２以上の試薬を
含む化学系をいう。本発明の方法に有効な試薬系は測定
する特定配位子に依りまた測定する透過性変化が試験溶
液の色又は濁度の変化によるかどうかである。試験溶液
の色変化が試験溶液の送元性変化と関連する比色試験で
は呈色試薬系が試薬系として使われる。濁度、即ち懸濁
粒子によって阻止又は散乱される光量が試験溶液の透過
性変化と関連する濁度又は比濁試験では濁度測定試薬系
又は比濁測定試薬系がそれぞれ使われる。

本明細書で使用する”呈色試薬糸”とは透過性、特に螢
光体の励起および（又は）放射波長帯と重なる波長帯内
で試験浴液の比色性の認められる変化を生ずる様測定す
る配位子と特定反応順序によって反応するｌ又は２以上
の試薬を含む化学系をいう。本発明の目的のためこの呈
色試薬系を含む株々の試薬はその添加順序が特定反応ｊ
臓序によって制限されない限り単独で又は混合して試験
溶液に添加できる。配位子の比色測定に利用できる呈色
試薬系はこの分野ではよく知られており、例えばニュー
ヨーク、ヘーバーメディカルデイビジョン、ハーバ−ア
ンド　ロー（１９６４）のヘンリーらのＣ１１ｖｉｃａ
ｌ　Ｃｈｇｍｉｓｔｒｙ。

Ｐｒ１ｎｃｉｐｌｅｓ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ
：Ｗ、Ｂ、サランダース　カンパニ（１９７０）＋７）
テ’ｆ　−ツノＦｕｎｄａｍｅｎ−ｔａＬｓ　ｏｆ　Ｃ
１１ｎｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙの文献がある。種
々の試験道具箱と試薬系が市販されており標準法と試薬
音用いる。一般にこの比色法は配位子が発色試薬を営む
呈色試薬糸と反応して試験溶液中に認めうる変イヒ金生
ずるという原理に基づく。代表的呈色試薬糸には例えは
終点と運動測定を含むオキシダーゼ反応系とＮＡＤＩｉ
／ＨＡＤ反応系がめる。例えばオキシダーゼ反応系は配
位子と反応して過酸化水素を放出しそれが次いでペルオ
キシダーゼの存在で染料と反応して試料中の配位子量の
指示として試験溶液の比色性変化を生ずる酸化性酵素を
利用する。ＮＡＤＨ／ＨＡＤ反応系はＮＡＤのＮＡＤＨ
への還元又はＨＡＤＨのＮＡＤへの酸化とつづく染料系
との反応による試料中の配位子濃度尺度としての試験溶
液の比色性変化生成に基づく。

本明細書で使う”試薬系の有効量″とは配位子の存在に
おいて試験溶液の比色性の認めうる変化を生ずるに十分
な試薬系の量をいう。この有効量はこの技術知識をもつ
ものには容易に確かめられるだろう。

次は本発明の方法により使用できる種々の呈色試薬系と
その反応順序を示すに役立つだろう。次の記号を本明細
書で使用している： ＤＩＩＢ８　３　、５−ジクロロ−２−ヒドロキシベン
ゼンスルホン酸ナトリウム、 ＡＡＰ　４−アミノアンチピリジン、 ＨＲＰＯ西洋わさび　ペルオキシダーゼ、ＨＡＤ　ｒＲ
化されたニコチンアミド−アデニンジヌクレオチド、 ＨＡＤＨ還元されたニコチンアミド−アデニンジヌクレ
オチド、 ＬＤＨ５クチイト　デヒドロジェナーゼ、５ＧＯＴ　血
清グルタミック　オキザルアセチック　トランスアミナ
ーゼ、 ５ＧＰＴ　血清グルタミック　ビルヴイック　トランス
アミナーゼ、 ＣＰＫ　クレアチン　ホスホキナーゼ、ＩＮＴ　２−（
ｐ−アイオドフェニル）−３−（ｐ−二トロフェニル）
−５−フェニルテトラツリウム塩化物、 ＡＴＰ　アデノシン　トリホスフェイトＡＤＰ　アデノ
シン　ジホスフエイト ＥＧＴＡ　エチレングリコール−ビス（β−アミノエチ
レンエーテル）−Ｎ、Ｎ’−テトラ酢酸 また次の反応順序のある生成物の特定構造が不確実なた
め試験溶液の色を生じ分光測定試験で測定される特定反
応順序の生成物は詳しく固定しない限り一般に本明細書
では“発色体″という。ＮＡＤＨ７ＮＡＤ糸を示してい
る反応順序１１−１６において試験溶液の色を生ずる生
成物はフォルマシンである。血液尿素窒素の試験を示す
反応順序２１において試験溶液の色を生ずる生成物はイ
ンドフェノールである。塩化物の試験を示す反応順序２
４においては試験溶液の色を生ずる生成物はチオシアン
酸第２鉄である。

Ｌ　配位子ニゲルコース 発色試薬糸ニゲルコースオキシダーゼ ＨＢＳ ＡＡＰ ＨＲＰＯ 反応順序： グルコースオギシダーゼ Ｄ−グルコース＋Ｑｔ＋ＨｔＱ Ｄ−グルコン酸十Ｈ，０゜ ２Ｈ，Ｏ＋ＤＨＢＳ＋ＡＡＰノμＦ９→発色体２、配位
子：ウル酸 発色試薬系：ウリカーゼ ＨＢＳ ＡＡＰ ＨＲＰＯ 反応順序： ＋７　ル酸＋　Ｃｈ　＋　２　ＨｔＯり」ノ位？レアラ
ントイン＋ＣＱｚ十Ｈｚ　Ｑｔ ２ｕ、ｏ＋ｒｍＢｓ＋　ＡＡｐ−！：ψア＆発色体３、
配位子：コレステロール（コレステロールとコレステロ
ールエステル） 発色試薬系：コレステロールエステラーゼコレステロー
ルオキシダーゼ ＤＨＥＳ ＡＰ ＨＲＰＯ 反応順序： コレステロールエステル：ｙｖ冬ｙｒｙ　−ｐｖｘｘ＝
ｙ　−−ｖコレステロール コレステ０−／Ｌ／十〇、−己Ｌ／し７．　ｆ　ｏ二）
Ｌ＃？ｒ’／Ｐ−−Ｍ。

△４コレステロン十Ｈ，０゜ ２１ｋ（）２＋ＤＨＢ　Ｓ＋ＡＡＰ４ψＶアう発色体４
、配位子：クレアチニン 発色試薬系：クレアチニナーゼ クレアチナーゼ サルコシンオキシダーゼ ＤＨＢＳ ＲＰＯ 反応順序： クレアチニン十Ｈ，ＯＩ　Ｋ乙な＝賢”！−りＶアチン
クレアチン十Ｈ，Ｏ？ｌ／７’Ｆ−）−−＋≦サルコシ
ン＋尿素サすコシンオキシグーゼ サルコシン十Ｈ２０＋０２ １ グリシン＋ＨＣＨ＋Ｈ２Ｏ２ ＲＰＯ ２Ｈｚ　Ｏｔ　十ＤＭＥ　Ｓ　十ＡＡＰ−〉発色体５、
配位子ニラクチイト 発色試薬系：ＮＡＤ ＤＨ ピルヴエイトオキシダーゼ ＩＩＥＳ ＡＰ １ＲＰＯ 反応順序 ＤＨ ラフティト十ＨＡＤ＝−へピルヴエイト＋ＮＡＤＨピル
ヴエイト＋０２±４り二巳立１±き乏ヱー＝４ラアセチ
ルホスフエイト十Ｃ（ｈ　＋　Ｈｔ（ｈ２Ｈ２０２＋　
ＤＨＢＳ＋ＡＡＰ二仏瞥ヴ１発色体６、配位子ニトリグ
リセリド 発色試薬系：リパーゼ グリセロールキナーゼ グリセロールホスフェイトオキシダーゼＨＢＳ ＡＰ ＲＰＯ 反応順序ニ トリグリセリド＋３Ｍ、０２柊とボタグリセロール＋脂
肪酸グリセロール＋ＡＴＰ　グ１縁０−″キナーゼ　〉
グリセロール−３−ホスフェイト＋ＡＤＰグリセロール
＋３−ホスフェイト ジヒドロキシアセトンホスフェイト＋Ｈｔ　Ｏｔ２Ｈ２
Ｑｔ＋ＤＨＢＳ＋ＡＡＰ−！！μ！９）発色体発色試薬
系ニアセチルコリネステラーゼ　□。

７、配位子：コリネステラーゼ コリネステラ−ゼ ＤＨＢＳ　′ ＡＰ ＲＰＯ 反応順序ニ アセチルコリネステラーゼ アセチルコリン コリン＋アセテイト コリン＋Ｏ！−二」３二芭」−ど！ドニニー　２ｆｆ！
０ｔＥＲＰＯ ２Ｈ２０ｔ　＋ＤＨＥＳ＋ＡＡＰ□発色体８、配位子：
５ＧＯＴ 発色試薬系：アスパレイト α−ケトグルタレイト オキサａアセティトデヵルボキシラーゼビルヴエイトオ
キシダーゼ ＤＨＢＳ ＡＰ １ＲＰＯ 反応１＠序： アスパレイト＋α−クトグルタレイト　５ＧＯＴ＋ グルメメイト＋オキサロアセティト ピルヴエイト＋ＣＯ。

ピルウェイ）十〇、ぎ丑ゴ６一り上オ」コ会−二’＞Ｈ
ｔ　Ｏｔ＋アセチルホスフェイト＋ｃｏｘ２Ｈ２０ｚ　
＋　ＤＨＢＳ　＋ＡＡ７’　”ηνび一発色体９、配位
子：５ＧＰＴ 発色試薬系：Ｌ−アラニン α−ケトグルタレイト ピルヴエイトオキシダーゼ ＤＨＢＳ ＡＰ ＲＰＯ 反応順序： ＧＰＴ アラニン＋α−ケトグルタレイトーーーーーーー）グル
タメイト＋ピルグエイト ピルグエイトオキシダーゼ ピルヴエイト十〇、□ アセチルホスフェイト＋ＨｔＯｔ　十〇ｏｔ２ＨｚＯｘ
　十ＤＨＢＳ　＋ＡＡＰ　ＨＲ”−一一→発色体 損、配位子：ＣＰＫ 配色糸：クレアチンホス７エイト クレアチナーゼ サルコシンオキシダーゼ ′　ＤＨＢＳ ＡＰ ＲＰＯ 反応順序： クレアチンホス７エイト＋ＡＤＰ　ＣＰＫゝ−一一一〉 クレアチン＋ＡＴＰ クレアチン＋ＩＩ、０　クレアチナーゼサルコシン＋尿
素 サルごシン十Ｈ２Ｏ＋　Ｏｘ　’　”″″′′オキ′ダ
ー ゼ１ グリシン＋ＨＣＨ＋ＨｔＯ。

ｚＨ，Ｏｘ　＋ＤＨＢＳ＋ＡＡＰ！！星ご４発色体■、
配位子：エタノール 発色試薬系：ＮＡＤ アルコールデヒドロジェナーゼ ＮＴ ディアフオラーゼ １５ｔ１５１＠Ｆ’Ｆ　：　、： エタ／−）Ｌｔ＋ＮＡＤ　アルコールデヒドロジエナー
ゼーーーー−一一−−−−−−−÷　） ５□９□＋７＋３’）ｋｆｅ　）−Ｉ ＮＡＤＨ＋ＩＮＴ　ＭＡＤ＋ポルマシン　−ディアフオ
ラーゼ ｎ配位子：５ＧＯＴ 発色試薬系：アスパラティト α−ケトグルタレイト ＮＡＤ グルメメイトテヒドロジェナーゼ ディアフオラーゼ ＩＮＴ 反応１１１序： ＧＯＴ アスパレイト＋α−ケトグルタレイトーーーー−〉グル
タメイト＋オキサロアセテイト ＮＡＤＨ＋２−オクソグルタレイト＋ｎ＆ＮＡＤＡ＋Ｉ
ＮＴ　”””　’　ＮＡＤ＋ホルマジ７Ｂ、配位子：５
ＧＰＴ 発色試薬系：Ｌ−アラニン α−ケトグルタレイト ＡＤ グルタレイトデヒドロジエナーゼ ディアフオラーゼ ＩＮＴ 反応順序 ＧＰＴ アラニン＋α−ケトグルタレイト□ グルタメイト＋ピルヴエイト グルタメイト＋ＮＡＤ＋Ｈ２０”’メイトデ８１°６ジ
１ナー５ＮＡＤＨ＋２−オクソグルタレイト十ＮＨｓＮ
ＡＤＨ十ｌＮＴ１に１−Ｐ（４二茎ＨＡＤ＋ホルマリン
靴配位子ニゲルコース 発色試薬系：ＡＴＰ ヘクンキナーゼ ＡＤ グルコース−６−ホス７エイトデヒドロジエナーゼ ＩＮＴ ディアフオラーゼ 反応順序： ヘクソキナーゼ グルコース＋ＡＰＴ□ グルコース−６−ホス７エイト＋ＡＤＰグルコース−６
−ホス７エイト＋ＮＡＤＮＡＤＨ＋グルコネイト−６−
ホスフェイトｂ、配位子　ＣＰＫ 発色試薬系　クレアチンホスフェイト ＤＰ グルコース ヘクソキナーゼ ＡＤ グルコース−６−ホス７エイトデヒドロジエナーゼ ＩＮＴ ディアホラーゼ 反応順序： クレアチンホスフェイト＋ＡＤＰ　ＣＰＫ　〉クレアチ
ン＋ＡＴＰ グルコース＋ＡＴＰ−ユヱヱ２し？ニーー）グルコース
−６−ホス７エイト＋ＡＤＰグルコース−６−ホス７エ
イト＋ＮＡＤＮＡＤＨ＋グルコネイト−６−ホスフェイ
トＮＡＤＨ＋ＩＮＴ”−ひ！二二ＮＡＤ＋ホルマリン迅
、配位子：ＬＤＨ 発色試薬系：Ｌ−ラフティト ＡＤ ＩＮＴ ディアホラーゼ 反応順序： ＬＡＤ Ｌ−ラクテイト＋ＨＡＤ□ＮＡＤＨ＋ピルヴエイトディ
アフオラーゼ ＮＡＤＨ＋ＩＮＴ−一一−−−→ＮＡＤ＋ホルマリン１
７、配位子：全蛋白質 発色試薬系：銅タータレイト ナトリウムタータレイト リチウムアセチイト 反応順序： 蛋白質＋銅タータレイト＋ナトリウムタータレイト＋リ
チウム水酸化物→発色体 Ｂ、配位子：アルブミン 発色試薬系：プロムクレオゾルグリーン反応順序： アルプミン＋プロムクレオゾルグリーンーン発色体ｐ、
配位子：カルシウム 発色試薬系：Ｏ−クレゾールフタレインコンプレクソン
８−キノリノ硫酸塩 反応順序： カルシウム十〇−クレゾールフタレイン＋８−キノリツ
ル硫酸塩−〉発色体 ２０、配位子：ビリルビン 発色試薬系：２，４−ジクロロアニリンのジアゾニウム
塩メタノール スルファミン酸 反応順序： ビリルビン＋２，４−ジクロロアニリンのジアゾニウム
塩２１、配位子：血液尿素窒素（尿素） 発色試薬系：ウレアーゼ 次亜塩素酸ナトリウム フェノ−１し 水酸化ナトリウム ナトリウムニトロプルシド 反応順序： 尿素二ηど乙二竺＞　Ｚ　ＮＨｓ　十ＣＱｔ２　ＮＨｓ
　＋　２Ｎａ　Ｃ１０−〉ｌ／Ｖｆｆｔ　ＣＬ　＋　２
　Ｎａ　０Ｈ２ＮＩＩ、Ｃ１＋２フエノール＋２ＮａＯ
Ｈ−〉２ｐ−７ミノフエノール＋２ＮａＣＬ＋２Ｈ，０
２１−アミノフェノール＋２フエノール十〇、−−−ラ
２インドフェノール＋２Ｈ２０ ２２６配位子：マグネシウム 発色試薬系：塩化カリウム カルマガイト シアン化カリウム 水酸化カリウム ＧＴＡ 反応順序： マグネシウム＋ＫＣ１＋カルマガイト十ＫＣＮ２３、配
位子：りん 発色試薬系：モリブデン酸 硫酸 触媒 反応順序二 ホスフェイト＋モリブデン酸＋硫酸」！シ発色体２４、
配位子：塩化物 発色試薬系：尿素 チオシアン酸カリウム 塩化第２水銀 過塩素酸 過塩素酸第２水銀 過塩素酸第２鉄 反応順序： ２Ｃｔ−十Ｈｙ（ＳＣＮ）ｚ−一すＨｙＣ４＋２８ＣＭ
−３８ＣＮ−十Ｆｇ＋十−〉Ｆｅ　Ｃ３ＣＮ）ｓ本明細
書で使っている“濁度測定試薬系”とは特定方法により
測定する配位子と相互作用して螢光体の励起および（又
は）放射波長帯と重なる波長帯内で試験溶液の透光性、
特に濁度の認めうる変化を生ずる様な１又は２以上の試
薬を含む化学系をいう。本発明の目的のため濁度測定試
薬系を含む棟々の試薬は特定反応順序によってその添加
１−序が制限されなければ単独で又は他と混合して試験
溶液に添加できる。種々の濁度測定試薬系はこの技術分
野でよく知られている。濁度測定試薬系を用いる重要な
１試験は人のイムノグロブリンの濁度測定試験である。

この試験の基本原理は測定するイムノグロブリンに特定
の抗血清より成る濁度測定試薬系と問題のイムノグロブ
リンの反応による懸濁粒子より成る特殊複合物の生成に
基づく。抗血清−イムノグロブリン複合物の生成による
懸濁粒子は試験溶液の濁度変化を生ずる。故に試験溶液
に人のイムノグロブリン以上に過剰の抗血清を使用する
と試料中のイムノグロブリン濃度が増すにつれて懸濁液
をとおる光は減少する。本明細書で使う“比濁測定試薬
系”とは特定方法により測定する配位子と相互作用し螢
光体の励起８よび（又は）放射波長帯と重なる波長帯内
で試験溶液の透光性、特に濁度の認めうる変化を生ずる
様な１又は２以上の試薬を含む化学系をいう。比濁測定
試験は濁度測定試験と同じ原理に基づくが、但し試験浴
液の比濁測定は濁度測定とちがって入射光に対する角度
における散乱光を測定するのである。多くの濁度および
比濁測定法がこの分野で知られているが、この試験に使
う試薬系はこの分野の知識ある者には容易に確かめられ
るであろう。

本発明の方法を行なうには試験溶液を螢光針セル中に入
れる。励起波長の選択は使う螢光体、配位子および試薬
系による。放射スペクトルを測定する特定波長又は帯波
長は一般に放射最大による。一定強さの光源を使って放
射スにクトルを検べ特定波長又は波長の特定帯に８ける
放射強さを測定してこの結果を既知標準と比較できる。

本発明の試　。

験方法を測定する配位子の既知量を含む標準と実質的に
同じ方法で未知試料について行なって未知試料中にある
配位子量を定性的に又は定量的に測定できるのである。

本発明の方法により測定できる配位子濃度が殆んど使う
特定螢光針と使う特定試薬系によるが、０．０１乃至０
．１ｒＩＬＭの濃度の配位子を含む試料が測定されてい
る。

試験溶液のｐＨは一般に使う特定試薬系による。試薬系
のｐＨ範囲内で螢光体が螢光を出すことが必要である点
で試薬系のｐＨは螢光体選択の条件であろう。

ある配位子と螢光体においては配位子と螢光体の蛋白質
への非特定結合が少量であるが問題にならぬ量あっても
よい。蛋白質妨害が問題であれば試料の超濾過、ゲル濾
過、沈澱、透析等による予備処理によって試験溶液の蛋
白質濃度を最少とすればよい。また配位子又は螢光体の
蛋白質への非特定結合は試験溶液にトリトンＸ−１００
などの様な訣面活性剤の添加によって最少にできる。

本発明の方法は一般に約１５−４０℃、好ましくは約２
５乃至４０℃の温度範囲で行なわれる。試験を一定温度
で行なうことも好ましい。

次の実施例は本発明の方法を示すに役立つであろう。試
薬濃度と他の種々の助変数り本発明の方法を示すのみで
本発明を限定するものではない。市販箱、即ちアボット
Ａ−Ｇｔｔｎｔ臨床化学試薬を用いる試験は一般に箱に
用意された内容物により試薬系として使われる。唯一の
追加試薬は使用する特定螢光体である。また次の実施例
における各試験溶液の螢光強さくＦハはアボットＴｌ−
分析器を用いて励起用４８５　ｎｍと放射用５２５　ｎ
ｍの波長において測定している。次の実施例の標準曲線
は各標準液について測定した螢光強さ対標準溶液濃度を
プロットしてつくることができる。また直線標準曲線を
望むならば各標準溶液について測定した螢光強さ対標準
液濃度の対数の負数をプロットすればよい。

未知又はグルコース標準を含む試料５μｔにグルコース
オキシダーゼ２２００単位／ｄを含む液２５μｔ、０．
２ＭＤＨＢＳｓ；よび１０−”Ｍフルオレジインを含む
液２５μ４および０．１　％　４−アミノアンチピレン
と西洋わさびペルオキシダーゼ４００単位／１１Ｌｌを
含む液２５μｔを含む牛ガンマグロブリンとのりん酸塩
緩衝液（ｐＨ７，５）　２．０５ｍＪを加えた。えた試
験溶液を３５℃において最大色生成をさせた。吸光度と
螢光強さを測定し０−５００■／ｄｔグルコースを含む
標準液に対してえた結果を次表に示している。

０　０．０２６　α０１６　０．００３　５５１２９５
０　α１１７　α１２９　０．１１３　４＆０３５１０
０　α２０５　α２３６　０．２２７　３４１４１２０
０　α３９２　α４６９　０．４６５　２１．０１０３
００　０．５７７　０．６９７　α６９５　１３１０６
５００　α８３６　ＬＯ１６ＬＯ１９！％９６０これら
の結果から未知試料中のグルコース濃度が決定できる様
な標準曲線をえることができる。

実施例２ ウル酸試験 未知又はウル酸標準を含む試料２０μｔにウリカーゼ１
０単位／ｄを含む液２５μ４０．２Ｍ　ＤＨＢＳと１０
−５Ｍフルオレジインを含む液２５μｔおよび０．１％
４−アミノアンチピレンと西洋わさびペルオキシダーゼ
４００単位／ｄを含む液２５μｔを含む牛ガンマグロブ
リンとのりん酸塩緩衝液（ｐＨ７，５）　２．０５−を
加えた。えた試験溶液を３５℃で５分間培養し試験溶液
の螢光強さを測定した。

０−９η／ｄｔのウル酸を含む試料から見られた結果を
次表に示す。

ウル酸濃度（グ／ｄｔ）　Ｆ（ ０５７，５８８ ２５４４４０ ４５２４３１ ５５１，４２６ ６１７７４ ９４７，７６７ この結果から未知試料中のウル酸濃度を決定できる様な
標準曲線をつくることができる。

次表は上記表の結果からつくった標準曲線を用いてＤａ
ｔｉｅＭｏｎｉ−Ｔｒｏｌ　Ｉおよび…化学調整試料に
ついて測定したウル酸濃度を表わす。

Ｈａｎｔ−ＴｒｏＬ　ｌ　４．１　４．０Ｍｏｎｉ−Ｔ
ｒｏｌ［９，５８，４ 実施例３ コレステロール試験 未知又はコレステロール標準を含む試料１０μｔをコレ
ステロールエステラーゼ１１０単位／ｙｄ、コレステロ
ールオキシダーゼ１００単位／ｍｌ、２０％トリトンＸ
−１００および０．２　Ｍコレイトを含む液２５μｔ；
約ｌＸｌ０−’Ｍフルオレジインと０．２Ｍ　ＤＨＢＳ
を含む液２５μｔ；Ｏ，１％４−アミノアンチピレンお
よび西洋わさびペルオキシダーゼ４００μ／ｍｌを含む
液２５μｔを含む牛ガンマグロブリンとのりん酸塩緩衝
液（ｐＨ７，５）λ０５−を加えた。

えた試験溶液を３５℃で５分間億養した。コレステロー
ル０−０−４Ｏ０／ｄｔ含む標準液からえた結果は次表
のとおりである： コレステロール濃度（ｍｙ／ｌｉ　ｔ　）　ｐｒｏ　６
！％１７５ ５０　５へ９０９ １００　４９．９９８ ２００　３３４０４ ３００　２へ１４９ ４００　２２２７３ この結果から未知試料中のコレステロール濃度を決定で
きる様な標準曲線がえられる。

次表は上記表中の結果からつくった標準曲線を用いてＤ
ａｄｓ　Ｍｏｎ１−Ｔｒｏｌ　ｌと■について決定した
コレステロール濃度を示す。

Ｍｏｎ１−Ｔｒｏｌ　Ｉ　１１６　ｌ１０Ｍｏｎ１−Ｔ
ｒｏｌ　ｎ　２２０　２１２実施例４ １．５　Ｘ　１０−’Ｍフルオレジインを含む様調節さ
れた再構成されたアボツ）Ａ−Ｇｔｔｎｔ全蛋白質試薬
３Ｈに未知又は標準を含む試料５０μｔを加えた。試薬
と試料を混合し少なくも１０分間２０℃で培養した。試
験溶液の螢光強さを測定し蛋白質０−８ｇ／ｄｔを言む
標準液についてえた結果を次表に示している。

０　５４．０６８ ４　３７．３８３ ６　３２．７６０ ８　２７．７９２ この結果から未知試料中の全蛋白質濃度を決定できる様
な標準曲線かえられる。

ｍ工Ｌ ＬＤＨ試験 未知又は標準液を含む試料２０μｔにリチウム−Ｌ−ラ
フティト２５０ダ／ＷＬｌとＨＡＤ　１２５Ｉｎｇ／ｍ
Ａ’を含む液２５ｐＬ、ＩＮＴ　２５ｍｙ／ｌｎｌとＩ
　Ｘ　１０−”Ｍ７ｎｔオレシインを含む５０％エタノ
ール溶液２５μｔおよびジアホラーゼ１００単位／ｄを
含む５０％グリセロール液２５μｔを含む牛ガンマグロ
ブリンとのりん酸塩緩衝液２，０５１ｎ７を加えた。試
料と試薬溶液を混合しえた試験溶液を３５℃で１４分間
培養し試験溶液の螢光強さを測定した。ＬＤＨＯ−５０
０単位／ｌを含む標準液でえた結果を次表に示してい　
゛る： ０　４５．７９７ ５０　４３．１７０ １００　４１．４７０ ２００　３８．４８４ ３００　３５．９０９ ５００　２８．０２１ この結果から未知試料中のＬＤＨ濃度を決定できる様な
標準曲線かえられる。

実施例６ クレアチニン試験 ピクリンｆｉ５．５ｄと２．５Ｎ水唾化ナトリウム１．
１　ｍｉ含む水溶液２０−に１０−”Ｍフルオレジイン
２００　ｐＬを加えて１０−″Ｍフルオレジインを含む
試薬液をつくった。上記試薬液２−に未知又は標準を含
む試料１００μｔを加えた。えた試験溶液を３５℃で約
１５分培養し試験浴液の螢光強さを測定した。タレアチ
ニンｏ−１ｏｍｙ／ｄｔ＋含む標準液についてえた結果
を次表に示す：０　８２８２ ２　７６６５ ６　６１５９ １０　４９７２ この結果から未知試料中のクレアチニン濃度を決定でき
る様な標準曲線かえられる。

実施例７ ＢＵＮ試験 未知又は標準を含む試料２０μｔに０．１　Ｍりん酸カ
リウム（ｐＨ７，５）緩衝液：牛ガンマグロブリン；０
．１％アジ化ナトリウム：ウレアーゼ１３０単位／ｄを
含む５チグリセロール液２５μｚ；ｉ＊水にナトリウム
ニトロプルジッド３００■の液ラフエノール５ｄ１グリ
セロール１ゴ２よびエタノール１ｍＪＪよび十分なフル
オレジインに加えてつくった１０−’Ｍフルオレジイン
液２５μｔ；オよび５．７％次亜塩素酸ナトリウムを含
む液５０ｍに水酸化ナトリウム２５Ｊを加えてつくった
液２５μｔより成る試薬溶液２．０５０ｍｌを加えた。

試料と試薬溶液を混合しえた試験溶液を３５℃で約５分
間培養した。試験溶液の螢光強さを測定し尿素０−１０
０ｍｇ１　ｄｔを含む標準液の螢光強さを次表に示して
いる： ０　３１８４７ ６．２５　２８７１３ １２．５　２５７４５ ２５　２０９６２ ５０　１５５３８ １００　８７９８ この結果から未知試料中の尿素濃度を決定できる様な標
準曲線かえられる。

１０−″Ｍフルオレジインを含む様調整された再構成さ
れ　□たアボットＡ−Ｇｅｎｔビリルビン試薬２ｄに未
知又は標準　７を含む試料５０μｔを加えた。試薬と試
料を混合し３７℃で約１０分培養した。えた試験溶液の
螢光強さを測定しビ　“リルピンｏ−２ｏ、２ｍｙ／ｄ
ｔを含む標準液についてえた結果を次表に示している： ０　６５．２５６ ４　５９．３７１ １０．１　５０，３５３ ２０．２　３２，７４０ この結果から未知試料中のビリルビン濃度を決定できる
様な標準曲線がえられる。

次表は上記表の結果からつくった標準曲線を用いてＤａ
ｄｅ　Ｍｏｎ１−Ｔｒｏｌ　Ｉと■化学調整試料にライ
て決定したビリルビン濃度を表わす： Ｍｏｎ１−Ｔｒｏｌ　Ｉ　１．２　１．ｌＭｏｎ１−Ｔ
ｒｏｌ　ｎ　４．０　４．５１．５Ｘ１０−’＆フルオ
レジインを言む様調整された再構成アボットＡ−Ｇｅｎ
ｔカルシウム試薬３ｄに未知又はカルシウム標準を含む
試料ｉ　ｏ　ｏ　ｐｔを加えた。試薬と試料を混合し２
０℃で約１０分培養した。試験溶液の螢光強さを測定し
カルシウム０−１２ａ７／ｄｚを含む標準液についてえ
た結果を次表に示している： ０　４１．８８１ ８　３０．７６２ １０　２９．０２９ １２　２６．４１　に の結果から未知試料中のカルシウム濃度を決定できる様
な標準曲線がえられる。

５Ｘ１０−’Ａｆブリリアントサルファフラヴインを含
む様調節された再構成アボットＡ−Ｇｅｎｔアルブミン
試薬２ｄに未知又は標準を含む試料１０μｔｔ−加えた
。試薬と試料を混合し２０℃で５分間培養した。えた試
験溶液の螢光強さを測定しアルブミン０−８ｇ／ｄｔを
宮む標準液についてえた結果は次表のとおりである： ０　２．８８８ ３　２．４３０ ８　２．０５　に の結果から未知試料中のアルブミン濃度を決定できる様
な標準曲線をえることができる。

実施例１１ 塩化物試験 ５Ｘ１０−’Ｍブリリアントサルファフラヴインを宮む
様調節されたハーレコ埴化物デペローピング試薬゛２Ｒ
／に未知又は標準を含む試料２０μｔを加えた。えた混
合物に０．２Ｍ過塩素酸第２水銀溶液１滴を加ええた試
験溶液の螢光強さを測定した。塩化物０−２００　ｒｎ
ｅｑ／ｌを含む標準液についてえた結果を次表に示す： ０　５４．０４７ ５０　４８．９５９ １００　２３．９００ ２００　１０．３６８ この結果から未知試料中の塩化物濃度を決定できる様な
標準曲線かえられる。

次表は上記表の結果からつくった標準曲線を用いてＤａ
ｄｅ　Ｍｏルｉ−’ｆｒｏＬ　ｌと■化学調整試料につ
いてえた塩化物濃度を示している： Ｍｏｎ１−Ｔｒｏｌ　ｌ　１１２　１１０Ｍｏｎｉ−Ｔ
ｒｏｌ　ｌ　９６　８５ マグネシウム試験 ５Ｘ１０−’Ａ（フルオレジインを含む様調節はれたマ
グネシウム染料試薬（Ｐ、Ｌ、バイオケミカルズ社）１
．０ｍＪにマグネシウム主体試薬（Ｐ、Ｌ、バイオケミ
カルズ社）ｉ、ｏｙと未知又は標準を含む試料２０μｔ
を加えた。えた試験溶液を２０℃で少なくも１分間放置
し試験溶液の螢光強さを測定した。マグネシウムＯ−６
，０ｍｅ　ｑ／ｌ　）を含む標準液についてえた結果を
次表に示している：０　３１．６１２ ２・０　２２．５１０ ４．０　１７．３３０ ６．０　１２．８０２ この結果から未知試料中のマグネシウム濃度を決定でき
る標準曲線がえられる。

次表は上記の結果からりくった標準曲線を用いてＤαｄ
ａＭｏｎｉ−Ｔｒｏｌ　Ｉおよび■化学調整試料につい
て測定したマグネシウム濃度を示している： Ｍｏｎ１−Ｔｒｏｌ　Ｉ　２．１　２．２未知又はグル
コース標準を富む試料５μｔにグルコースオキシダーゼ
２２００単位／ｍｌ！、チメルゾＪＬ１０，０２５ｌｌ
ｙ／ｄＳよび１．５Ｍ硫酸アンモニウムを含む液２５μ
ｔ；０．２ＭＤＨＢＳ、０．１−フェリシアン化カリウ
ム、０．１％４−アミノアンチピレン、０．１％トリト
ンｘ−ｉｏｏ、チメルゾル０．０２５ダ／ｄＳよびリボ
フラグイン５．６３３Ｘ１０一番モル／ｌを含む０．１
Ｍりん酸塩緩衝液２５μｔ；Ｚよび西洋わさびイルオキ
シダーゼ４００単位／ＩＲ１，ｔｏ％子牛血清、０．６
ｒｒＭＥＤＴＡ％０．１ｆｂＡＮｓ、１％トリトンＸ−
１００、リパーゼ２０００単位／ｄ、チメルゾルｏ、ｏ
ｚｓｌ／ｄを含む０．１Ｍりん酸塩緩衝液２５μｔを含
み牛ガンマグロブリンを含むりん酸塩緩衝液（ｐＨ７，
０）ｌシミを加えた。

えた試験溶液を３５℃で最大色生成をえる迄培養した。

吸光度と螢光強さを測定しグルコース０−０−５Ｏ０／
ｄｔを含む標準液についてえた結果は次表のとおりであ
る＝０　３７．４３２ ５０　２８．７３１ １００　２２．０１９ ２００　１２．５４７ ３００　７．２９１ ５００　２．２６９ イムノグロブリンＧ　＜ＩｆＧ＞試験 アボットＡ−ＧｅｎｔイムノグロブリンＧ臨床化学診断
箱で供給された試薬を使い山羊抗−人間１９Ｇ抗血清４
００μｔを４１ポリエチレングリコールを含むりん酸塩
緩衝塩溶液１１．６ｍと混合してつくった働らく抗血清
試薬２．５ｒＩＬｌに箱で供給された標準を用いてアポ
ツ）Ａ−ＧｅｎｔイムノグロブリンＧ臨床化学診断箱の
指示によりつくった標準液１００μｔを加えた。混合物
に１０−”Ｍフルオレジイン液果は次衆のとおりである
： ２５μｔを加え試験溶液の螢光強さを測定しイムノグロ
ブリンＧ３８２−６０９３ダ／ｄｔを含む標準液からえ
た結３８２　１０．５５６ ７６１　１０．２６２ １５２６　１Ｑ１３２ ３０４６　９．３９７ ６０９３　８．８４９ 前記した実施例で明白なと８す、本発明の方法は広範な
試験に応用できるのである。既知発色試薬系を用いて未
知配位子の螢光測定を可能にする他に本発明の方法は発
色試薬系を用いて試験の直線性を増す。特に本発明の方
法は高吸光度値における試験の直線性範囲を増す。器械
の制限によって比色試験の直線性は２．０以上の吸光度
をもつ発色体濃度において実質的に減少することはよく
知られている。

本発明の方法を用いて２．０以上の吸光度をもつ発色体
濃度をつくる試薬系と配位子の濃度を用いて試験の直線
性を拡張することは可能である。

上述のとおり本発明は試験溶液中の配位子濃度の分光測
定又は螢光測定のいづれかに利用できる新規の試薬組成
物に関する。この様な試薬組成物は配位子に特定の試薬
系、即ち測定する配位子を含む溶液の透光性に変化を与
えうる試薬系の有効量および試薬系と測定する配位子を
含む溶液の透光性変化と関連する波長帯と重なる励起お
よび（又は）放射波長帯をもつ螢光体の有効量より成る
。本発明の方法により配位子を螢光測定するに便利な試
薬組成物生成に要する螢光体有効量は試験溶液の透光性
測定を妨害しないことはわかっている。故に測定する配
位子とその配位子に特定の本発明の試薬組成物を含む試
験溶液はその中の配位子濃度決定のため分光測定又は螢
光測定できる。

本発明を特定実施態様について記述したが、本発明の真
意や範囲から逸脱しない限り種々の同等法、変更法およ
び修正法もできることは明らかであろうから、実施態様
が本発明を限定するものと考えるべきでないしまた同等
の実施態様も本発明に包含されるものと考えるものであ
る。

特許出願人　アボット　ラボラトリーズ化　理　人　弁
理士　川　瀬　良　治ニー）代　理　人　弁理士　斉　
藤　武　彦″、′へ手続補正書（方式） ％式％ １、事件の表示 昭和５９年特許願第５４５６７号 ２、発明の名称 改良螢光測定法 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 名称　アボット　ラボラトリーズ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 Ｌ　ａ）試験溶液を生成するため リ　配位子を含むと思われる試料； １１）　螢光体の有効量： １１１）測定する配位子の存在で螢光体の励起および（
   又は）放射波長帯と重複する波長帯内で試験溶液の透光
   性に変化を与えうる様な試薬系の有効量を混合し、 り試験溶液を螢光体の励起波長帯内の波長全もつ光で照
   射した後、 Ｃ）試験溶液により放射された螢光強さ全試料中の配位
   子濃度の尺度として測定する ことヲ竹徴とする配位子を含むと思われる試料中の配位
   子ａ　試薬系が発色試薬系である特許請求の範囲第２Ｊ
   Ｊに記の励起波長帯と重複する特許請求の範囲第３項に
   記載の方法。 ５　試験溶液の透光性変化と関連する吸光波長帯が螢ツ
   Ｃ体の放射波長帯と重複する特許請求の範囲第３項に記
   載の方法。 ６　試験溶液の透光性変化と関連した吸光波長帯が螢光
   体の励起および放射波長帯と重なる特許請求の範囲第３
   項に記載の方法。 ７　配位子’ｔｔんでいると思われる試料と配位子の存
   在で波長帯内で試験溶液の透光性変化を与えうる試薬系
   の有効量を含む試験溶液中の配位子測定用の改良螢光測
   定法において、試験溶液にその透光性変化と関連した波
   長帯と重複する励起および（又鉱）放射波長帯をもつ螢
   光体の有効量金加え、試験溶液を螢光体の励起波長帯内
   の波長をもつ光で照射した後試験溶液によって放射され
   た螢光を試料中の配位子濃度の尺度として測定すること
   ｔ％徴とする改良法。 ＆　試薬系が発色試薬系又は濁度測定試薬系である特許
   請求の範囲第７項に記載の方法。 ａ　試薬系が発色試薬糸である特許請求の範囲第８項に
   記載の方法。 ｌα螢九体が試験溶液の透光性変化と関連した吸光波長
   帯と重複する励起波長帯をもつ特許請求の範囲第９項に
   記載の方法。 １Ｌ螢光体が試験溶液の透光性変化と関連した吸光波長
   帯と重複する放射波長帯をもつ特許請求の範囲第９項に
   記載の方法。 ■螢光体が試験溶液の透光性変化と関連した吸光波長帯
   と重複する励起波長帯と放射波長帯をもつ特許請求の範
   囲第９項に記載の方法。