JPS60177026A - 親水性蛋白質のグラフト剤及びその製造方法 - Google Patents
親水性蛋白質のグラフト剤及びその製造方法Info
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- JPS60177026A JPS60177026A JP59031269A JP3126984A JPS60177026A JP S60177026 A JPS60177026 A JP S60177026A JP 59031269 A JP59031269 A JP 59031269A JP 3126984 A JP3126984 A JP 3126984A JP S60177026 A JPS60177026 A JP S60177026A
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- Emulsifying, Dispersing, Foam-Producing Or Wetting Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は一般式Ｒ１・０Ｒ２（ただし、Ｒ工及びＲ２は
前記に同じ）で示される遊離のアミノ酸エステルよりな
る親水性蛋白質のグラフト剤及びその製造方法に関する
。
前記に同じ）で示される遊離のアミノ酸エステルよりな
る親水性蛋白質のグラフト剤及びその製造方法に関する
。
本発明に係る上記一般式にて示される遊離のアミノ酸エ
ステルを製造する際の前駆体の１であるアミノ酸アルキ
ルエステル−Ｐ−）ルエンスルフォン酸塩の製造方法は
既に知られている。例えばアミノ酸とアルコールとをＰ
−）ルエンスルフオン酸１水和物の存在下で反応せしめ
、アミノ酸アルキルエステル・Ｐ−１−ルエンスルフオ
ン酸塩を製造する方法が提案されている。（加藤他、日
本化学雑誌村［１０１８７〜９０（１９６２）そして本
発明者らは、親水性蛋白質と前記アミノ酸アルキルエス
テル・Ｐ−）ルエンスルフオン酸塩とをエンドペプチダ
ーゼの存在下で反応させて、親水性蛋白質分解物のカル
ボキシ末端とアミノ酸アルキルエステル・Ｐ−）ルエン
スルフオンＨ１Ｈのアミド部分をアミド結合させて蛋白
質系乳化剤を製造する方法を提案した。（Ｉｌ（！和５
８年特許願第２０１８２３号）しかし、この方法で用い
られるアミノ酸アルキルエステル・Ｐ−）ルエンスルフ
オン酸塩は、ｉ水性蛋白質とエンドペプチダーゼの存在
下で反応させる場合、溶媒である緩衝液−ア七トン混液
に対し、溶解性が悪く、特にアルキル基の炭素数が１４
より大のとき、長鎖になる程、均一系になり難く、蛋白
質系乳化剤の反応収率が今一つであった。また、上記反
応に於いて原料として使用するアミノ酸アルキルエステ
ル・Ｐ−トルエンスルフォン酸塩はその製造に際しエス
テル合成反応終了後、未反応の不純物を除去するため、
アセトン等の溶媒で、くり返し再結晶化して、精製する
が、未反応のアミノ酸、Ｐ−）ルエンスルフオン酸等の
不純物を充分に除去することが困難であった。従ってか
かるアミノ酸アルキルエステル・Ｐ−トルエンスルフォ
ン酸塩をグラフト剤として使用する場合、目的とする蛋
白質系乳化剤への転化率が低いうえ、不純物を多く含有
するため、純度の高い蛋白質系乳化剤を取得するには、
最終工程に於いて熱アセトン等による洗浄を何回もくり
返す必要があった。
ステルを製造する際の前駆体の１であるアミノ酸アルキ
ルエステル−Ｐ−）ルエンスルフォン酸塩の製造方法は
既に知られている。例えばアミノ酸とアルコールとをＰ
−）ルエンスルフオン酸１水和物の存在下で反応せしめ
、アミノ酸アルキルエステル・Ｐ−１−ルエンスルフオ
ン酸塩を製造する方法が提案されている。（加藤他、日
本化学雑誌村［１０１８７〜９０（１９６２）そして本
発明者らは、親水性蛋白質と前記アミノ酸アルキルエス
テル・Ｐ−）ルエンスルフオン酸塩とをエンドペプチダ
ーゼの存在下で反応させて、親水性蛋白質分解物のカル
ボキシ末端とアミノ酸アルキルエステル・Ｐ−）ルエン
スルフオンＨ１Ｈのアミド部分をアミド結合させて蛋白
質系乳化剤を製造する方法を提案した。（Ｉｌ（！和５
８年特許願第２０１８２３号）しかし、この方法で用い
られるアミノ酸アルキルエステル・Ｐ−）ルエンスルフ
オン酸塩は、ｉ水性蛋白質とエンドペプチダーゼの存在
下で反応させる場合、溶媒である緩衝液−ア七トン混液
に対し、溶解性が悪く、特にアルキル基の炭素数が１４
より大のとき、長鎖になる程、均一系になり難く、蛋白
質系乳化剤の反応収率が今一つであった。また、上記反
応に於いて原料として使用するアミノ酸アルキルエステ
ル・Ｐ−トルエンスルフォン酸塩はその製造に際しエス
テル合成反応終了後、未反応の不純物を除去するため、
アセトン等の溶媒で、くり返し再結晶化して、精製する
が、未反応のアミノ酸、Ｐ−）ルエンスルフオン酸等の
不純物を充分に除去することが困難であった。従ってか
かるアミノ酸アルキルエステル・Ｐ−トルエンスルフォ
ン酸塩をグラフト剤として使用する場合、目的とする蛋
白質系乳化剤への転化率が低いうえ、不純物を多く含有
するため、純度の高い蛋白質系乳化剤を取得するには、
最終工程に於いて熱アセトン等による洗浄を何回もくり
返す必要があった。
本発明者らは、かかる既存の親水性蛋白質のグラフト剤
の有する上記問題点に鑑み、鋭意研究を続けた結果、親
水性蛋白質のグラフト剤として以下に示す遊離のアミノ
酸エステルを適用すると、特段の効果を発現することを
見出し本発明を完成したものであって、その目的とする
ところは、親水性蛋白質のグラフト剤及びその製造方法
を提供するにある。
の有する上記問題点に鑑み、鋭意研究を続けた結果、親
水性蛋白質のグラフト剤として以下に示す遊離のアミノ
酸エステルを適用すると、特段の効果を発現することを
見出し本発明を完成したものであって、その目的とする
ところは、親水性蛋白質のグラフト剤及びその製造方法
を提供するにある。
上述の目的は、一般式
％式％
［ただし、式中Ｒ工及びＲ２は前記に同じ。〕で示され
るＭ４ Ｍのアミノ酸エステルよりなる親水性蛋白質の
グラフト剤、及びＰ−）ルエンスルフオン酸の上記一般
式＋１＋にて示される遊離のアミノ酸エステルの塩をア
ルカリ性媒質と接触し、Ｐ−トルエンスルフォン戯“を
脱離せしめることを特徴とする親、水性蛋白負のグラフ
ト剤の製造方法により達成される。
るＭ４ Ｍのアミノ酸エステルよりなる親水性蛋白質の
グラフト剤、及びＰ−）ルエンスルフオン酸の上記一般
式＋１＋にて示される遊離のアミノ酸エステルの塩をア
ルカリ性媒質と接触し、Ｐ−トルエンスルフォン戯“を
脱離せしめることを特徴とする親、水性蛋白負のグラフ
ト剤の製造方法により達成される。
上記一般式ｆｉｌに於いてＲｏで示されるアミノ酸本発
明に係る上記一般式（出ごて示される遊離のアミノ酸エ
ステルとしては、例えばグリシン、アラニン、フェニル
アラニン等の疎水性が高く直鎖状のアルキル基を有する
アミノ酸、バリン、ロイシン、インロイシン、ノルロイ
シン、プロリン等の疎水性は高いが分岐のあるアルキル
基を有するアミノ酸、リジン、オルニチル、ヒスチジン
等の上記以夕１のアミノ酸等のアミノ酸類のカルボキシ
ル基の水酸基が、ヘキサノール、オクタツール。
明に係る上記一般式（出ごて示される遊離のアミノ酸エ
ステルとしては、例えばグリシン、アラニン、フェニル
アラニン等の疎水性が高く直鎖状のアルキル基を有する
アミノ酸、バリン、ロイシン、インロイシン、ノルロイ
シン、プロリン等の疎水性は高いが分岐のあるアルキル
基を有するアミノ酸、リジン、オルニチル、ヒスチジン
等の上記以夕１のアミノ酸等のアミノ酸類のカルボキシ
ル基の水酸基が、ヘキサノール、オクタツール。
デカノール、ドデカノール等の炭素数１４未満のアルコ
ール、ミリスチルアルコール、ペンタデシルアルコール
、セチルアルコール、２−へキシルデカノール、ヘプタ
デシルアルコール、ステアリルアルコール、インステア
リルアルコール、オレイルアルコール、アラキルアルコ
ール、２−オクチルドデカノール、ベヘニルアルコール
等の炭素数１４〜２２のアルコール等のアルコール類の
、アルコキシ基によって置換された化合物が挙げられる
。
ール、ミリスチルアルコール、ペンタデシルアルコール
、セチルアルコール、２−へキシルデカノール、ヘプタ
デシルアルコール、ステアリルアルコール、インステア
リルアルコール、オレイルアルコール、アラキルアルコ
ール、２−オクチルドデカノール、ベヘニルアルコール
等の炭素数１４〜２２のアルコール等のアルコール類の
、アルコキシ基によって置換された化合物が挙げられる
。
上記遊離のアミノ酸エステル中、疎水性が高く直鎮状の
アルキル基を有するアミノ酸又は疎水性は高いが分岐の
あるアルキル基を有するアミノ酸のカルボキシル基の水
酸基がアルコール類のアルコキシ基によって置換された
下記一般式（２）にて示されるものは、親水性蛋白のグ
ラフト化反応に於ける酵素反応（アミノリンス反応）の
反応性が高い点で好ましいものである。
アルキル基を有するアミノ酸又は疎水性は高いが分岐の
あるアルキル基を有するアミノ酸のカルボキシル基の水
酸基がアルコール類のアルコキシ基によって置換された
下記一般式（２）にて示されるものは、親水性蛋白のグ
ラフト化反応に於ける酵素反応（アミノリンス反応）の
反応性が高い点で好ましいものである。
１（３ＣＨ（ＮＨ２）Ｃ００Ｒ２・・・・・・ （２）
［Ｒ２及びＲ３は前記に同じ。〕 そして、上記一般式（２）で示される２種の遊離のアミ
ノ酸エステルを比較すると、直鎖状のアルキル基を有す
るアミノ融のカルボキシル基の水酸基がアルコール類の
アルコキシ基によって置換されたものの方が好適である
。
［Ｒ２及びＲ３は前記に同じ。〕 そして、上記一般式（２）で示される２種の遊離のアミ
ノ酸エステルを比較すると、直鎖状のアルキル基を有す
るアミノ融のカルボキシル基の水酸基がアルコール類の
アルコキシ基によって置換されたものの方が好適である
。
更に、」二月一般式（２）で示される遊離のアミノ酸エ
ステルをイ８成するアルコール類のアルコキシ基の炭素
数が１４−２２である下記一般式（３）で示される遊ｆ
、Ｆのアミノ酸エステルは更に好ましいものである。
ステルをイ８成するアルコール類のアルコキシ基の炭素
数が１４−２２である下記一般式（３）で示される遊ｆ
、Ｆのアミノ酸エステルは更に好ましいものである。
Ｒ３ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＣｎＨｚｎ＋１ −・＝ ｉ
３）〔Ｒ３及びｎは前記に同じ。］ アルコキシ基の炭素数が１４未満の遊離のアミノ酸エス
テルをグラフトした蛋白質系乳化剤を配合したものは、
高滓で長時間（４５℃６ケ月）保存しておくと、非乳化
物に若干の異臭を生起する傾向があり、一方炭素数が２
２を上廻る遊ｒイＦのアミノ酸エステルは、溶解性が悪
く、親水性蛋白質のグラフト反応に於ける酵素反応（ア
ミツリシス反応）牲が低い傾向がある。
３）〔Ｒ３及びｎは前記に同じ。］ アルコキシ基の炭素数が１４未満の遊離のアミノ酸エス
テルをグラフトした蛋白質系乳化剤を配合したものは、
高滓で長時間（４５℃６ケ月）保存しておくと、非乳化
物に若干の異臭を生起する傾向があり、一方炭素数が２
２を上廻る遊ｒイＦのアミノ酸エステルは、溶解性が悪
く、親水性蛋白質のグラフト反応に於ける酵素反応（ア
ミツリシス反応）牲が低い傾向がある。
以上の一般式ｆ１１〜（３）に示される遊落のアミノ酸
エステルに於いて、Ｌ型（天然性）アミノ酸により構成
されているものは親水性蛋白質のグラフト率の点で普し
い好結果をもたらす。
エステルに於いて、Ｌ型（天然性）アミノ酸により構成
されているものは親水性蛋白質のグラフト率の点で普し
い好結果をもたらす。
上記本発明に係る親水性蛋白質のグラフト剤は、上記し
たアミノ酸類とアルコール類とを原料とし、公知のエス
テル化反応を適宜徴択し適用することによっても得るこ
とができるが、以下に述べる遊離のアミノ＋’！’；：
エステルのＰ−トルエンスルフォン酸を経由する方法に
よると一段と優れた結果が得られる。すなわち、上記の
様なアミノ酸とアルコールトヲフレンステッド酸触媒の
Ｐ−）ルエンスルフォン酸の存在下反応させ、アミノ酸
エステルのＰ−トルエンスルフォン酸塩を得る。
たアミノ酸類とアルコール類とを原料とし、公知のエス
テル化反応を適宜徴択し適用することによっても得るこ
とができるが、以下に述べる遊離のアミノ＋’！’；：
エステルのＰ−トルエンスルフォン酸を経由する方法に
よると一段と優れた結果が得られる。すなわち、上記の
様なアミノ酸とアルコールトヲフレンステッド酸触媒の
Ｐ−）ルエンスルフォン酸の存在下反応させ、アミノ酸
エステルのＰ−トルエンスルフォン酸塩を得る。
このアミノ酸アルキルエステル・Ｐ−）ルエンスルフォ
ン酸塩をアルカリ性媒質と接触し、Ｐ −トルエンスル
フォン酸を脱Ｎ１［せしめる。アルカリ性媒質としては
、ＮａＯＨまたはＫＯＨ水溶液が好ま↓く用いられる。
ン酸塩をアルカリ性媒質と接触し、Ｐ −トルエンスル
フォン酸を脱Ｎ１［せしめる。アルカリ性媒質としては
、ＮａＯＨまたはＫＯＨ水溶液が好ま↓く用いられる。
アルカリ両度は、好ましくは０．０１Ｎ〜５Ｎ、四番ど
好ましくは０．０５Ｎ〜２Ｎである。また、上記アルカ
リ処理は塩類との共伴下で塩析により行うことが好まし
い。塩析用の塩としては、アルカリ金属塩、アンモニウ
ム塩害があり、具体的には例えば塩化ナトリウム、塩化
カリウム。
好ましくは０．０５Ｎ〜２Ｎである。また、上記アルカ
リ処理は塩類との共伴下で塩析により行うことが好まし
い。塩析用の塩としては、アルカリ金属塩、アンモニウ
ム塩害があり、具体的には例えば塩化ナトリウム、塩化
カリウム。
炭酸カリウム、リン酸カリウム、硫酸アンモニウム、硫
酸ナトリウム等が挙げられるが、塩化ナトリウム及び塩
化カリウムが好適である。塩析の塩嫉度は、通常０．５
％〜２５％の範囲であり、好ましくは１％〜１０％であ
る。
酸ナトリウム等が挙げられるが、塩化ナトリウム及び塩
化カリウムが好適である。塩析の塩嫉度は、通常０．５
％〜２５％の範囲であり、好ましくは１％〜１０％であ
る。
この様にして得られたＭｌ！ｌｉｔのアミノ酸エステル
は、油状又は融点の低い固体状態のものであり後述する
親水性蛋白質との反応の際、反応系溶媒として用いられ
る緩衝液−アセトン混液等に対し、溶解性がよく、均−
系で反応し得るものである。
は、油状又は融点の低い固体状態のものであり後述する
親水性蛋白質との反応の際、反応系溶媒として用いられ
る緩衝液−アセトン混液等に対し、溶解性がよく、均−
系で反応し得るものである。
また、生成系中のＬ−ロイシン等の未反応アミノ酸やｐ
−トルエンスルフォン酸等の残流は、効果的に除去され
非常に精製された状態で目的物が得られる。
−トルエンスルフォン酸等の残流は、効果的に除去され
非常に精製された状態で目的物が得られる。
上記のようにして得られた遊１１ｔのアミノ酸アルキル
エステルを親水性蛋白質とともに酵素反応に供する。
エステルを親水性蛋白質とともに酵素反応に供する。
上記のようにして得られた電離のアミノ酸エステルは、
例えば下記に列挙する親水性蛋白質と下記に示すエンド
ペプチダーゼの存在下で反応させる。
例えば下記に列挙する親水性蛋白質と下記に示すエンド
ペプチダーゼの存在下で反応させる。
本発明に適用される親水性蛋白質としては、例えばカゼ
イン、ゼラチン、セリシン、可溶性コラーゲン、ゼイン
、血清アルブミン、ラクトアルブミン、卵白アルブミン
等が挙げられることは単独でもしくは併せて用いられる
。これらの蛋白質のうち、セリシン以外の蛋白質は、試
薬として販売されている。また、セリシンは切り繭から
熱水抽出し凍結乾燥することにより得ることができる。
イン、ゼラチン、セリシン、可溶性コラーゲン、ゼイン
、血清アルブミン、ラクトアルブミン、卵白アルブミン
等が挙げられることは単独でもしくは併せて用いられる
。これらの蛋白質のうち、セリシン以外の蛋白質は、試
薬として販売されている。また、セリシンは切り繭から
熱水抽出し凍結乾燥することにより得ることができる。
７酵素反応に用いられるエンドブチダーゼは蛋白質をそ
の中央部分より切断する作用を備えており、これには、
セリンプロテアーゼ、チオールプロテアーゼ、カルボキ
シルプロテアーゼ、金属プロテアーゼ、その他のエンド
ペプチダーゼが含まれる。
の中央部分より切断する作用を備えており、これには、
セリンプロテアーゼ、チオールプロテアーゼ、カルボキ
シルプロテアーゼ、金属プロテアーゼ、その他のエンド
ペプチダーゼが含まれる。
これらΦ内、チオールプロテアーゼを用いることが最も
好ましい。このチオールプロテアーゼとしては、パパイ
ン、カテプシンＢ、プロメライン。
好ましい。このチオールプロテアーゼとしては、パパイ
ン、カテプシンＢ、プロメライン。
キモパパイン、カテプシンＬ、酵母プロテナーゼＢ、カ
テプシンＳ、ＴＺ−ペプチダーゼが挙げられ、これらは
用独でもしくは併せて用いられる。
テプシンＳ、ＴＺ−ペプチダーゼが挙げられ、これらは
用独でもしくは併せて用いられる。
そして上記遊離のアミノ酸エステルと親水性蛋白質をエ
ンドブチダーゼの存在下に反応させると、親水性蛋白Ｔ
（がエンドペプチダーゼの作用により中央から切断させ
て分解し、同時にその生成分解物のカルボキシ末端にア
ミノ酸アルキルエステルのアミノ部分がアミド結合し目
的とする蛋白質系乳化剤が得られる。
ンドブチダーゼの存在下に反応させると、親水性蛋白Ｔ
（がエンドペプチダーゼの作用により中央から切断させ
て分解し、同時にその生成分解物のカルボキシ末端にア
ミノ酸アルキルエステルのアミノ部分がアミド結合し目
的とする蛋白質系乳化剤が得られる。
遊離のアミノ酸エステルは、親水性蛋白質と反応する際
、その得られる性状（油状又は融点の低い固体状態）で
あるため反応系の溶媒中に均一に分散する。しかして、
遊離のアミノ酸エステルと親水性蛋白質とをエンドペプ
チダーゼの存在下、反応させる場合、反応効率が著しく
改善され、高純度の乳化特性に優れた蛋白質系乳化剤が
高収率で得られるものである。
、その得られる性状（油状又は融点の低い固体状態）で
あるため反応系の溶媒中に均一に分散する。しかして、
遊離のアミノ酸エステルと親水性蛋白質とをエンドペプ
チダーゼの存在下、反応させる場合、反応効率が著しく
改善され、高純度の乳化特性に優れた蛋白質系乳化剤が
高収率で得られるものである。
このようにして得られた上記蛋白質系乳化剤は、皮膚等
に対する刺激が少なく、かつ乳化作用が強くしかも保湿
性を備えているため、例えば化粧料に用いた場合には、
−Ｒ優れた効果かえられるようになる。また、これを食
品の乳化剤として利用する場合には、その強力な乳化作
用により乳化剤の使用量を低減させつるようになる。し
かも、この乳化剤は、その構成部分の殆どが天然物由来
物であるため、繰り返し摂取しても何ら問題を生じない
。本発明によれば、遊離のアミノ酸エステルと親水性蛋
白質をエンドペプチダーゼの存在下に反応させ、親水性
蛋白質を切断すると同時にその切断部に遊離のアミノ酸
エステルを結合させるようにするため、親水基部の後端
に疎水基部が結合した典型的な界面活性剤構造の乳化剤
を容易に、かつ極めて高収率で得ることができるように
なる。
に対する刺激が少なく、かつ乳化作用が強くしかも保湿
性を備えているため、例えば化粧料に用いた場合には、
−Ｒ優れた効果かえられるようになる。また、これを食
品の乳化剤として利用する場合には、その強力な乳化作
用により乳化剤の使用量を低減させつるようになる。し
かも、この乳化剤は、その構成部分の殆どが天然物由来
物であるため、繰り返し摂取しても何ら問題を生じない
。本発明によれば、遊離のアミノ酸エステルと親水性蛋
白質をエンドペプチダーゼの存在下に反応させ、親水性
蛋白質を切断すると同時にその切断部に遊離のアミノ酸
エステルを結合させるようにするため、親水基部の後端
に疎水基部が結合した典型的な界面活性剤構造の乳化剤
を容易に、かつ極めて高収率で得ることができるように
なる。
以下に、実施例を挙げて本発明を具体的に説明する。
実施例 ｌ
遊離のアミノ酸アルキルエステルを下記のようにして製
造し、つぎにこれを酵素反応に供した。
造し、つぎにこれを酵素反応に供した。
（アミノ酸アルキルニスデル−Ｐ−トルエンスルホン６
ｊｉ塩の合成） アミノ酸としてロイシンを０．０５ｍｏｌ 採取すると
ともに、Ｐ−）ルエンスルフォンｅ−水和物を０．０５
５ｍｏＪ 採取し、さらにアルコールとしてミリスチル
アルコールを０．０７５ｍｏＪ を採取シ、これに溶剤
としてのベンゼン２００ｍｏ／加えて充分撹拌混合し、
ベンゼンの還流温度で加熱還流させエステル化反応を進
めた。この場合、そのエステル化反応の進行に伴って生
じた水がベンゼンと共沸状態で出てくるので、それを反
応系外に除きながら約５〜ＩＯ時間で反応を完了させた
。つぎに溶剤であるベンゼンを減圧濃縮して除去し、エ
ーテルと石油エーテルを添加して生成結晶を濾取し。
ｊｉ塩の合成） アミノ酸としてロイシンを０．０５ｍｏｌ 採取すると
ともに、Ｐ−）ルエンスルフォンｅ−水和物を０．０５
５ｍｏＪ 採取し、さらにアルコールとしてミリスチル
アルコールを０．０７５ｍｏＪ を採取シ、これに溶剤
としてのベンゼン２００ｍｏ／加えて充分撹拌混合し、
ベンゼンの還流温度で加熱還流させエステル化反応を進
めた。この場合、そのエステル化反応の進行に伴って生
じた水がベンゼンと共沸状態で出てくるので、それを反
応系外に除きながら約５〜ＩＯ時間で反応を完了させた
。つぎに溶剤であるベンゼンを減圧濃縮して除去し、エ
ーテルと石油エーテルを添加して生成結晶を濾取し。
得られた粗結晶をアセトン、エーテル、石油エーテル等
から再結晶させた。。
から再結晶させた。。
得うれたロイシンミリスチルエステル−Ｐ−）ルエンス
ルフォン酸堝を再度ベンゼン２００ ｔｎｌに溶解し、
０．Ｉ ＮＮａＯＨ３００−で３度くり返し処理晩乾燥
した。乾燥後ベンゼン層を濾取し、このベンゼン浴液を
エバポレーターで溶媒除去し、精製された遊離のロイシ
ンミリスチルエステルの油状物質を得た４、 得られたロイシンミリスチルエステルの赤外吸収スペク
トルを第１図に示す。図においてピーク５．６は、エス
テル結合由来のＣ＝０伸縮とＣ−〇伸Ｍａ＆勅を示す。
ルフォン酸堝を再度ベンゼン２００ ｔｎｌに溶解し、
０．Ｉ ＮＮａＯＨ３００−で３度くり返し処理晩乾燥
した。乾燥後ベンゼン層を濾取し、このベンゼン浴液を
エバポレーターで溶媒除去し、精製された遊離のロイシ
ンミリスチルエステルの油状物質を得た４、 得られたロイシンミリスチルエステルの赤外吸収スペク
トルを第１図に示す。図においてピーク５．６は、エス
テル結合由来のＣ＝０伸縮とＣ−〇伸Ｍａ＆勅を示す。
ピーク７．８．９は、それぞれ第１アミンのＮＨ伸縮、
ＮＨ変角振動、Ｃ−Ｎ伸縮振動を示す１、ピーク１０は
ＣＨ変角振動を示す。
ＮＨ変角振動、Ｃ−Ｎ伸縮振動を示す１、ピーク１０は
ＣＨ変角振動を示す。
（酵素反応）
１Ｍ濃度の炭酸緩衝液（ｐＨ９，０）２００−に親水性
蛋白質であるゼラチン５０ｙを溶解し、これに５０ｍ１
’のアセトンを添加し、３７℃の温水バスに浸漬し、充
分に撹拌して均一化した。つぎに、これに前記の様にし
て得られたロイシン晋ミリスチルエステルｌａ、４２ｃ
ゼラチン１０００ｆに対して１ｍｏｌＶになる童）を添
加して充分に撹拌し均一化した。この場合、ロイシン全
ミリスチルエステルの′ようなアミノ酸アルキルエステ
ルは、ゼラチンのような親水性蛋白１１０（ＩＯＰに対
して１ｍｏｌ！の割合になるように添加することが反応
効率上好ましい。ついで、これに、Ｌ−システィン塩酸
塩（和光紬薬Ｎ）ｔ３Ｂ＋〜を加え、さらに、エンドペ
プチダーゼであるパパイン（シグマ社１ｍ ）２５ ｍ
ｇを添加して撹拌しながら１５分間反応させた。そ゛し
て、２Ｎｆ’４酸を用いて全体のｐｎを２にして反応を
とめ、これをセロファンチューブ（透析チューブ）に入
れて２昼夜流水中で透析し、その後凍結乾燥した。つぎ
に、これを熱アセトンで洗浄して未反応のロイシン十ミ
リスチルエステルヲ除去し、目的とする蛋白質乳化剤を
得た。このようにして得られた蛋白質系乳化剤の赤外線
吸収スペクトルを第２図に示す。第２図において、ピー
ク１１は、蛋白の吸収を示し、ピーク１２．１３は水素
の吸収を示す。
蛋白質であるゼラチン５０ｙを溶解し、これに５０ｍ１
’のアセトンを添加し、３７℃の温水バスに浸漬し、充
分に撹拌して均一化した。つぎに、これに前記の様にし
て得られたロイシン晋ミリスチルエステルｌａ、４２ｃ
ゼラチン１０００ｆに対して１ｍｏｌＶになる童）を添
加して充分に撹拌し均一化した。この場合、ロイシン全
ミリスチルエステルの′ようなアミノ酸アルキルエステ
ルは、ゼラチンのような親水性蛋白１１０（ＩＯＰに対
して１ｍｏｌ！の割合になるように添加することが反応
効率上好ましい。ついで、これに、Ｌ−システィン塩酸
塩（和光紬薬Ｎ）ｔ３Ｂ＋〜を加え、さらに、エンドペ
プチダーゼであるパパイン（シグマ社１ｍ ）２５ ｍ
ｇを添加して撹拌しながら１５分間反応させた。そ゛し
て、２Ｎｆ’４酸を用いて全体のｐｎを２にして反応を
とめ、これをセロファンチューブ（透析チューブ）に入
れて２昼夜流水中で透析し、その後凍結乾燥した。つぎ
に、これを熱アセトンで洗浄して未反応のロイシン十ミ
リスチルエステルヲ除去し、目的とする蛋白質乳化剤を
得た。このようにして得られた蛋白質系乳化剤の赤外線
吸収スペクトルを第２図に示す。第２図において、ピー
ク１１は、蛋白の吸収を示し、ピーク１２．１３は水素
の吸収を示す。
従来のアミノ酸アルキルエステル・Ｐ−）ルエンスルフ
ォン酸塩と親水性蛋白質と反応させた場合と、本発明で
得られる遊離のアミノ酸アルキルエステルと親水性蛋白
質を反応させた場合の蛋白質系ＩＬ乳化剤収率をアルキ
ル基がラウリル、ミリス〃ル、セチル及びステアリルの
場合について、比較検討した結果を爾１表に示す。同表
からアルキル基がいずれの鎖長でも、遊離のアミノ酸ア
ルキルエステルと親水性蛋白質を反応させた場合の方が
、著しく収率を増すことが認められる。
ォン酸塩と親水性蛋白質と反応させた場合と、本発明で
得られる遊離のアミノ酸アルキルエステルと親水性蛋白
質を反応させた場合の蛋白質系ＩＬ乳化剤収率をアルキ
ル基がラウリル、ミリス〃ル、セチル及びステアリルの
場合について、比較検討した結果を爾１表に示す。同表
からアルキル基がいずれの鎖長でも、遊離のアミノ酸ア
ルキルエステルと親水性蛋白質を反応させた場合の方が
、著しく収率を増すことが認められる。
以ｌ下″＊ｊ）
岬ノ Ｉ７１
上記第１表に於ける収率は次の様にして算出した。即ち
、蛋白質乳化剤を最終処理工捏の熱アセトンで３度洗浄
した後、濾過して得られたアセトンロ液を合一、その溶
媒を除去した後に得られるロイシンアルキルエステル・
Ｐ−トルエンスルフォン酸塩又はロイシンアルキルエス
テル塩酸塩の未反応残流量より換葬して、収率（モル％
）を計算した。（以下同じ） 実施例 ２ まず、遊離のアミノ酸アルキルエステルを下記のように
して製造し、つぎにこれを酵素反応に供した。
、蛋白質乳化剤を最終処理工捏の熱アセトンで３度洗浄
した後、濾過して得られたアセトンロ液を合一、その溶
媒を除去した後に得られるロイシンアルキルエステル・
Ｐ−トルエンスルフォン酸塩又はロイシンアルキルエス
テル塩酸塩の未反応残流量より換葬して、収率（モル％
）を計算した。（以下同じ） 実施例 ２ まず、遊離のアミノ酸アルキルエステルを下記のように
して製造し、つぎにこれを酵素反応に供した。
（遊離のアミノ酸アルキルエステル−Ｐ−）ルエンスル
フォン酸塩の合成） アミノ酸としてグリシンを０．０５ ｍｏ ／採取する
とともに、Ｐ−トルエンスルフォン酸−水和物ヲ０．０
５５ｍｏ／採取し、さらにアルコールとしてステアリル
アルコールを０．０７５ ｍｏｌ！を採取し、これに溶
剤としてのベンゼン２００ ｍｅ を加えて充分Ｕ拌混
合し、ベンゼンの還流温度で加熱還流させエステル化反
応を進めた。この場合、そのエステル化反応の進行に伴
って生じた水がベンゼンと共沸状態で出てくるので、そ
れを反応系外に除きながら約７−＝ｔ−ｏ＝時間で反応
を完了させた。つぎに、溶剤であるベンゼンを減圧濃縮
して除去し、エーテルと石油エーテルを添加して生成結
晶を濾取し、得られた粗結晶をアセトン、エーテル、石
油エーテル等から再結晶させた。得られたグリシンステ
アリルエステル・Ｐ−トルエンスルフォン酸塩を再度ベ
ンゼン２００ｍ１に港解し、０．Ｉ ＮａＯＨを含む３
％ＮａＣ１溶Ｗ ３０ Ｑ ｍｅ を加え、塩析条件下
、アルカリ処理を行った。アルカリ処理は３度くり返し
た。その後、ベンゼン層を採取し、充分３％食塩水で洗
浄した。その後の工程は、実施例１と！同様に処理し、
精製された遊離のグリシンステアリルエステルを得た。
フォン酸塩の合成） アミノ酸としてグリシンを０．０５ ｍｏ ／採取する
とともに、Ｐ−トルエンスルフォン酸−水和物ヲ０．０
５５ｍｏ／採取し、さらにアルコールとしてステアリル
アルコールを０．０７５ ｍｏｌ！を採取し、これに溶
剤としてのベンゼン２００ ｍｅ を加えて充分Ｕ拌混
合し、ベンゼンの還流温度で加熱還流させエステル化反
応を進めた。この場合、そのエステル化反応の進行に伴
って生じた水がベンゼンと共沸状態で出てくるので、そ
れを反応系外に除きながら約７−＝ｔ−ｏ＝時間で反応
を完了させた。つぎに、溶剤であるベンゼンを減圧濃縮
して除去し、エーテルと石油エーテルを添加して生成結
晶を濾取し、得られた粗結晶をアセトン、エーテル、石
油エーテル等から再結晶させた。得られたグリシンステ
アリルエステル・Ｐ−トルエンスルフォン酸塩を再度ベ
ンゼン２００ｍ１に港解し、０．Ｉ ＮａＯＨを含む３
％ＮａＣ１溶Ｗ ３０ Ｑ ｍｅ を加え、塩析条件下
、アルカリ処理を行った。アルカリ処理は３度くり返し
た。その後、ベンゼン層を採取し、充分３％食塩水で洗
浄した。その後の工程は、実施例１と！同様に処理し、
精製された遊離のグリシンステアリルエステルを得た。
（６ｊ１累反応）
ゼラチン５０ｙに代えてゼイン３０２を用い、これをＩ
Ｍの炭酸緩衝液２００−に溶解した。ついで、これに５
０ｄのアセトンを加え、３５℃の温水バスに浸漬して撹
拌均一化したのち、前もって５０℃の水浴上で、溶融さ
せておいたグリシン令ステアリルエステルｌＯ，７ｆを
添加（セリシン１００（ｌに対し１ ｍｏ／になる凰）
し、撹拌均一化した。これ以降は、結晶パパインの使用
量を２０ｍｇに減少させた以外は実施例１と同様にして
蛋白質系乳化剤を得た。
Ｍの炭酸緩衝液２００−に溶解した。ついで、これに５
０ｄのアセトンを加え、３５℃の温水バスに浸漬して撹
拌均一化したのち、前もって５０℃の水浴上で、溶融さ
せておいたグリシン令ステアリルエステルｌＯ，７ｆを
添加（セリシン１００（ｌに対し１ ｍｏ／になる凰）
し、撹拌均一化した。これ以降は、結晶パパインの使用
量を２０ｍｇに減少させた以外は実施例１と同様にして
蛋白質系乳化剤を得た。
つぎに、」１記の実施例１で得られた蛋白質系乳化剤の
表面張力を、ゼラチンを対照例として第３図に示した。
表面張力を、ゼラチンを対照例として第３図に示した。
第３図において、曲線Ａが実施例１で得られた蛋白質系
乳化剤の濃度−表面張力曲線、曲線Ｂが対照例のそれで
ある。曲線Ａ、Ｂの対比より、実施例１で得られた蛋白
質系乳化剤の活性剤性能がゼラチンよりも著しく優れて
いることがわかる。
乳化剤の濃度−表面張力曲線、曲線Ｂが対照例のそれで
ある。曲線Ａ、Ｂの対比より、実施例１で得られた蛋白
質系乳化剤の活性剤性能がゼラチンよりも著しく優れて
いることがわかる。
第１図はロイシンミリスチルエステルの赤外吸収スペク
トル図、第２図はゼラチンにロイシンミリスチルエステ
ルを反応せしめた本発明に係る蛋白質系乳化剤の赤外吸
収スペクトル図であり、第３因はゼインにグリシンステ
アリルエステルを反応せしめた本発明に係る蛋白質系乳
化剤の赤外吸収スペクトル図である。
トル図、第２図はゼラチンにロイシンミリスチルエステ
ルを反応せしめた本発明に係る蛋白質系乳化剤の赤外吸
収スペクトル図であり、第３因はゼインにグリシンステ
アリルエステルを反応せしめた本発明に係る蛋白質系乳
化剤の赤外吸収スペクトル図である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 ＋１１一般式 ％式％ で示される遊離のアミノ酸エステルよりなる親水性蛋白
質のグラフト剤 （２）一般式 ％式％（２） で示される特許請求の範囲第（１）項記載の親水性蛋白
質のグラフト剤 （３）一般式 ％式％（ で示される特許請求の範囲第（２１項記載の親水性蛋白
質のグラフト剤。 （４）遊離のアミノ酸エステルがＬ型アミノ酸から誘導
されたものである特許請求の範囲第（１）項記載の親水
性蛋白質のグラフト剤。 ｉｌｌ Ｐ −トルエンスルフォン酸の下記一般式にて
示される遊離のアミノ酸エステル塩をアルカリ性媒質と
接触し、Ｐ−トルエンスルフォン酸を脱離せしめること
を特徴とする親水性蛋白質のグラフト剤の製造方法。 Ｒ４・ＯＲ２・・・・・（１ン 〔ただし、Ｒ１及びＲ２は前記に同じ〕（６）アルカリ
性媒質が不活性溶媒及びアルカリ性物質である特許請求
の範囲第（５）項記載の親水性蛋白質のグラフト剤の製
造方法。 （７）アルカリ性物質がＮａＯＨ又はＫＯＨである特許
請求の範囲第（６）項記載の親水性蛋白質のグラフト剤
の製造方法。 （８）アルカリ性媒質との接触が塩類との共存下で行わ
れるものである特許請求の範囲第（［＋）〜（７）項の
何れかに記載の親水性蛋白質のグラフト剤の製造方法。 （９）塩類がアルカリ金属塩又はアンモニウム塩である
特許請求の範囲第（８）項記載の親水性蛋白質のグラフ
ト剤の製造方法。 （ｌＯ）アルカリ金属塩がＮａＣ／又はＫＣｌ１である
特許請求の範囲第（９）項記載の親水性蛋白質のグラフ
ト剤の製造方法。 （ｌ １）遊離のアミノ酸エステルがＬ型アミノ酸から
訊導されたものである特許の範囲第（６）項記載の親水
性蛋白質のグラフト剤の製造方法。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59031269A JPS60177026A (ja) | 1984-02-20 | 1984-02-20 | 親水性蛋白質のグラフト剤及びその製造方法 |
| US07/153,561 US4826818A (en) | 1983-10-26 | 1984-10-26 | Proteinaceous emulsifier, process for preparing same and emulsion type cosmetic compositions containing same |
| PCT/JP1984/000512 WO1985001890A1 (en) | 1983-10-26 | 1984-10-26 | Proteinous emulsifier, process for its preparation, and emulsified cosmetic preparation containing same |
| DE8484903982T DE3482551D1 (de) | 1983-10-26 | 1984-10-26 | Proteinhaltiges emulgiermittel, dessen herstellung und dieses enthaltende emulgierte kosmetische zusammensetzung. |
| EP84903982A EP0160103B1 (en) | 1983-10-26 | 1984-10-26 | Proteinous emulsifier, process for its preparation, and emulsified cosmetic preparation containing same |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59031269A JPS60177026A (ja) | 1984-02-20 | 1984-02-20 | 親水性蛋白質のグラフト剤及びその製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60177026A true JPS60177026A (ja) | 1985-09-11 |
Family
ID=12326612
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59031269A Pending JPS60177026A (ja) | 1983-10-26 | 1984-02-20 | 親水性蛋白質のグラフト剤及びその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60177026A (ja) |
-
1984
- 1984-02-20 JP JP59031269A patent/JPS60177026A/ja active Pending
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