JPS60176581A - 生物学的変換能を有する新規微生物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、共同してＣ［ＪＣ／Ｃ，ＳＶと称ケる新規な
グリコペプチド系抗生物質を共同合成することのできる
２種の新しいアクチノプラネス・ミソウリエンシス（Ａ
ｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓ　ｍ１ｓｓｏｕｒｉｅｎｓｉｓ
）菌株を提供するものである。さらに、これらの各菌株
は、別々に、アクタプラニン因子Ａを、１−記の新規な
抗生物質ＣＵＣ／Ｃ８Ｖに、生物学的に変換するのに使
用することができる。

抗生物質ＣＵＣ／ＣＳＶは、式（Ｉ）：（式中、ＲはＬ
−リストザミニ°ル、Ｒ１は三糖類マンノンル−グルコ
ンルであり、Ｒ２およびＲ３はマノノノルを表わす） て示される。ＣＵＣ／Ｃ８Ｖおよびその塩類、特にその
薬学的に許容し得ろ塩類は有用な新規抗生物質である。

本発明は、２種のアクチノプラネス・ミソウリエンシス
菌株類 になって新規なグリコペプチド抗生物質を共同合成（２
、また互いに独立して、ある種の生物学的変換反応に使
用することもてきる。更に詳しくは、本発明は、ＣＵＣ
／Ｃ８Ｖと呼称される式（１）のグリコペプチド抗生物
質を共同合成する能力を持ったアクチノプラネス・ミソ
ウリエンシス菌株類に関するものである。

本発明の新規なアクチノプラネス・ミソウリエンシス菌
株は、それぞれ、便宜的にＣＵＣＯＩ４およびＣＳ　Ｖ
　５５８と命名された。ＣＳ　Ｖ　５５８およびＣＩ］
Ｃ０１４の培養物は、グリコペプチド系抗生物質アクタ
プラニンを産生ずるアクチノプラネス・ミソウリエンシ
スＡ　ｌ”　ＣＣ３１６８３の化学的変異誘発処理によ
って得られた菌株である。Ａ　ミソウリエンシスＡ　Ｔ
　ＣＣ３１６８３は、一連の突然変異によって野生型の
Ａ　ミソウリエンシスＡ　ＴＣ０２３３４２菌株から導
かれたものである。

グリコペプヂト系抗生物質アクタプラニン（抗生物質Ａ
４６９６としても知られている）お、及びΔ　ミソウリ
エンシス菌株ΔＴ　ＣＣ２３３４２は、ハミル（１１ａ
ｍｉ１１）らによってアメリカ特許第３，９５２，０９
５号おｊ；び第４．１１５，５５２号に記載されている
。また、アクタプラニン産生性のＡ　ミソウリエンシス
菌株、Ａ　Ｔ　ＣＣ３２６８０、ＡＴＣＣ３１６８２お
よびＡＴＣＣ３１６８３は、　Ｉ）ｅｈｏｎｏらによっ
て、アメリカ特許第４，３２２．４０６および第４，３
７５，５１３号に記載されている。

本発明の新規なΔ　ミソウリエンシス菌株Ｃ８■５５８
およびＣ［ＪＣＯ１４は測定可能な量のアクタプラニン
を産生じない。その代わり、ＣｔＪＣＯＩＩＩはある中
間体を分泌し、この中間体を、ＣＳ　Ｖ　５５８が式（
Ｉ）の化合物に変換する。

ｑＳｙ国ｉ熱砕並−（９１４賓秀物省時世新規なＣ８Ｖ
　５５８およびＣＵＣＯＩ４培養物の完全な評価を行う
ために、下記の分類学的研究を、母株ΔＴＣＣ３１６８
３閑株４１７びに野生株Ａ　Ｔ　ＣＣ２３３４２閑株と
同時に行った。

ＣＳ　Ｖ　５５８およびＣ１，Ｃ０Ｉ４培養物はアクチ
ノプラネス・ミソウリエンシスの菌株としそ分類された
。これらの培養物をＡ　ミソウリエンシス菌株として分
類４−ろに当たっては、インターナショナル・ストレブ
トマイノス・プロソエクト（Ｉ　ｎｔｅｒｎａ［１ｎｎ
ａｌ　５［−ｒｅｐ４ｇｍｙ、ｃｅｓ　Ｐｒｏｊｅｃｔ
、ｌ５Ｐ）の推奨オろ、ストレプトマインス種の確認法
［Ｅ、　Ｂ）ｒ−リング（１；：、１１．Ｓｈｉｒｌｉ
ｎｇ）およびり、ボッチリーブ（Ｄ　、Ｇｏｔｔｌｉｅ
ｈ）、「メソッド・オシ・キャラクタリゼインヨン・オ
シ・ストレプトマイシス・スペノース（Ｍｅｔｈｏｄｓ
　ｏｒＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆ　Ｓｔ−
ｒｅｐＬｏｍｙｃｅｓ　５ｐｅｃｉｅｓ）Ｊインンター
ナショナル・ジャーナル・オシ・システマチック・ハタ
テリオロンー（Ｔ　ｎｔ、　Ｊ　、　Ｓ　ｙｓＬ、　Ｂ
　ａｃｔｅｒｉｏｌ、　ｌ’６（３）、３１３−３４０
（１９６６））］並びにある種の補助的な試験法に従っ
た。

炭素利用性は、終濃度が１０％となる様に、シ濾過滅菌
炭素源を加えた１ｓＰＮｏ９基礎培地を用いてめた３、
平板を３０℃でインギコベートシ、１４１１目に読みと
った３、 メラニン色素の産生（色素生成）は、ｌ５ＰＮｏｌ（ト
リプトン−酵母エギスブロス）、Ｉ　Ｓ　Ｐ　Ｎ（１６
（ペプトン−酵母エキス鉄寒天）、ｌ５ＰＮｏ７（ヂ〔
ｌ’７ン寒天）　＝＋１２びに改良ＩＳｒ’１ｌｏ７（
チ〔１ンノを欠くらの）を用い−ご決定した。

硫化水讃の産生け、ＩＳｒ”Ｎｏ６寒天斜而にテストス
トリップ ップ デンプンの加水分解は、ＩＳＰＮｏ４（無機塩−デンプ
ン寒天）平板上のデンプンの存在をヨウ素を用いて試験
することで決定した（Ｄ．Ｊ　ブランコウィック（Ｄ　
、　Ｊ　、　Ｂ　ｌａｚｅｕｉｃ）およびＧ．Ｍニブレ
ール（Ｇ　、Ｍ．Ｅｄｅｒｅｒ）、［プリンンンプルズ
・オシ・バイオケミカル・テスラ・イン・ダイアグシス
チック・マイクロバイオロジー（Ｐ　ｒｉｎｃｉｐｌｅ
ｓ　ｏｆ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｔｅ５ｔｓ　ｉｎ
’Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ）
Ｊノヨーン・ウィリー・アンド・ソング（、Ｊｏｈｎ　
Ｗｉｌｅｙ　ａｎｄ　５ｏｎｓ）、　Ｉｎｃ、　Ｎ’ｅ
ｗ　Ｙｏｒｋ。

１９７５、ｐ、　１３６）。

温度域、ＮａＣ１およびシュクロース耐性、ｐＨ域、お
よび抗生物質感受性は、ｌ５ＰＮｏ２（酵母−麦芽エキ
ス寒天）平板を用いて決定した。平板を３０°Ｃで１４
日間インキュベートした。試験した温度は、５．１０．
１５．２０．２５．３０，３７．４０．４５．５０およ
び５５°Ｃであった。

ＮａＣｌ耐性は、寒天にＮａＣｌを、０．２．４．６．
８．１０および１２％となる様に加えて測定した。ツユ
クロース耐性は、同じくンコクロースを０１．２．４．
６．８、ｌ０１１２．１５および２０％になる様に加え
て測定した。ｐＨ域は、下記の緩衝剤を０．０５Ｍの濃
度で用いて決定したクエン酸、ｐＨ３，４および５１２
（Ｎ−モルホリノ）エタンスルポン酸（ＭＥＳ、　シグ
マ・ケミカルズ（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｎｉｃａｌｓ）　
Ｃｏ、　）ｐＨ６；　３（Ｎ−モルホリノ）プロパンス
ルホン酸（ＭＯＰＳ、アルドリッチ・ケミカル（Ａｌｄ
ｒｉｃｈ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　）Ｃ。

）、ｐＨ７：Ｎ−［トリス−（ヒドロキシメチル）メヂ
ル］グリシン（ツリンン、カルバイオケｌ、（Ｔｒｉｃ
ｉｎｅ、　ＣａｌＢｉｏｃｈｅｍ））、ｐｒ−ｒｓ　；
　２−（ンクロへキンルアミノ）エタンスルホン酸（Ｃ
Ｉ−［ＥＳ、　Ｐｌ、バイオケミカルス（Ｂ　ｉｏｃｈ
ｅｍｉｃａｌｓ、）　Ｉ　ｎｃ、）、ｐ　Ｈ８、５，９
０および９５．３−ンクロへキンルアミノ−１，１−プ
ロパンスルホン酸（ＣＡＰＳ）、ｐＩ−（１θ０および
１０５゜寒天平板の測定は、表面が平らな電極で行い、
接種面に測定したｐＨ値を正しい値と（刃こ。

ある種の緩衝剤は、調節され／コｐＨを保ち得なかった
。緩衝剤を全てｐＨ７，０に調節し、増殖を検査するこ
とにより、その毒性を試験した。全ての変異株かクエン
酸感受性であったが、野生型菌株はクエン酸に感受性を
示さなかった。

抗生物質感受性は、播挿し／ｊ寒天（Ｆ板の表面に感受
性ディスクを押し付（Ｉて調へた。以−１・の抗生物質
を使用した。セファロチン（ナトリウム）３０ｆＬｇ、
エリス〔ノマインン（ｊ、ストレート）１５１１ｇ１　
り〔７０マイセヂン３０ＩＢ、ノボビオツノ３ｏμｇ１
ペニンジン（Ｇ）１０７１’ｆ１“１１リーフアノ、ピ
ン５／ＩＬス）・レプトマイノン１０μｇ１テトラサイ
タリン３０μｇおよびバンコマイシン３０メｔｇ。

酵素分析は、ブラゼヒック（Ｂ　１ａｚｅｖｉｃ）およ
びニブレール（Ｅｄｅｒｅｒ）の方法に従って行った（
ＤＪ、ブラゼビック（Ｄ　、　Ｊ　、　Ｂ　１ａｚｅｖ
ｉｃ）およびＧ。

Ｍ、ニブレール（Ｇ、Ｍ、Ｅｄｅｒｅｒ）［プリンシプ
ルズ・オブ・バイオケミカール・テスラ・イン・ダイア
グツチック・マイクロバイオ口’）　（Ｐ　ｒｉｎｃｉ
ｐｌｅｓｏｆ　Ｂｉｏｃｈｍｉｃａｌ　Ｔｅ５ｔｓ　ｉ
ｎ　Ｄｉａｇｎｏｔｉｃ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ）
Ｊジョーン・ウィリー・アンド・ソング（Ｊｏｈｎ　Ｗ
ｉｌｌｙ　ａｎｄ　５ｏｎｓ）、Ｉｎｃ、　、Ｎｅｗ　
Ｙｏｒｋ、　１９７５） 色名は、ＴＳＣＣ−ＮＢＣセントロイド・カラー・チャ
ーブ（Ｃｅｎｔｒｏｉｄ　Ｃｏ１ｏｒ　Ｃｈａｒｔｓ　
）のスタンダードサンプルＮｏ２１（１６を用いて定め
た（Ｋ。

Ｌ　ケリー（Ｋ、Ｌ、Ｋｅｌｌｙ）およびり、Ｂ　ンヤ
ット（Ｄ、Ｂ、Ｊｕｄｄ）、米国商務省米国規格標準間
、Ｗａ、ｓｈｉｎｇｔｏｎ　Ｄ　、　Ｃ，２０２３４，
１９７６）。

リゾチーム抵抗性、並びにカゼイン、ニスぞリン、ヒボ
キサンチン、チロノンおよびキザンチンの分解をＢ　ｅ
ｒｇの方法に従って測定したデヒッド・バージ［ラホラ
トリー・アイデンティフィケーション・オブ・クリニッ
カリイ・インボータント・エーロビック・アクチノマイ
セテスＪ（［Ｄ　ａｖｉｄＢｅｒｇｒＬａｂｏｒａｔｏ
ｒｙ　Ｉ　ｄｅｎｔｉｒｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃ１１
ｎｉｃａｌｌｙ　Ｔ　ｍｐｏｒｔａｎＬ　Ａｅｒｏｂｉ
ｃ　ＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓＪ）アプライド・マイ
クロバイオロノー（代理１四見ｃｒｏｂｉ−。

し）閑：６６５−６８１（１９７３）］。

樟養特性 これらの４菌株の増殖および培養特性は類似していた。

基質性のまたは一次の菌糸体のみが生成された。二次菌
糸体または胞子のうのいずれも、本研究に係る１４個の
寒天平板培地」二のいずれにも認められなかった。元の
単離体の胞子のうに関しては、Ｄｒ、ンヨーンＮ、コー
チ（ユニバージティー・オブ・ノース・カロライナＸＤ
　ｒ、　、１　ｏ１＋ｎ　ＮＣｏｕｃｈ（［Ｊｎｉｖｅ
ｒｓｉｔｙ、　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈ　Ｃａｒｏｌｉｎａ）
）により、以前に報告された。

これらの変異株（Ａ　Ｔ　ＣＣ３！６８３、ＣＳ　Ｖ　
５５８およびＣＵＣＯＩ４は黄灰色およびのコロニーを
形成するので、それを、培地に応じて中程度ないし帯温
色の橙色から強い橙色に至る、明瞭な橙色の色素を産生
ずる野性型菌株（Ａ　Ｔ　ＣＣ２３３４２）と区別する
ことは容易である。他方、これらの変異株群は、大多数
の寒天平板培地上では区別できない。

これら変異株相互の培養上の差異は次の通りであろ：Ｃ
ＵＣＯ１４はある種ゐ培地で、濃い赤褐色の可溶性色素
を産性する。このことは、酵母−麦芽エキス寒天（Ｉ　
Ｓ　Ｐ　Ｎｏ２）、グリセリン−アスパラギン寒天（ｌ
ｓＰＮｏ５）およびチロノン寒天（ＩＳＰＮ。

７）で観察される。ＣＳ　Ｖ　５５８はトマトペースト
−オートミル寒天（ＴＰＯ）では増殖できないか、これ
に対してＡＴｃｃ３１６８およびＣｔＪＣＯ１４は非常
に良く増殖する。上記の結果を表１にまとめた。

ｉｔ：アクチノプラネス・ミソウリエノノス菌株の培養
特性ＡＴＣＣ２３３４２Ａ丁ＣＣ３１８８，’ｌ　ＣＳ
Ｖ　５５１１　ＣｌＩＣ０１４ＩＳＰ　２　Ｇ　良好　
良好　良好　良好Ｒ５３，ｍ、ｏ　９０．ｇｙ、Ｙ　９
０．ｇｙ、ｙ　９０．ｇｙＹＡＩＩなし　なし　なし　
なし Ｓｐなし　なし　なし　赤褐色 ＩｓＰ　ａ　Ｇ　不良　良好　まずまず　まずまずＲ７
６，１，ｙｌｌｒ　９３．ｙＧｒａｙ　９３．ｙＧｒａ
ｙ　９３．ｙＧｒａｙＡｍなし　なし　なし　なし Ｓｐなし　なし　なし　なし ＩＳＰ　４　Ｇ　豊富　良好　まずまず　まずまずＲ５
Ｇ、ｓ、０　７９．１．ｇｙ、ｙｌ（ｒ　９３．ｙＧｒ
ａｙ　９３．ｙＧｒａｙＡｍなし　なし　なし　なし ｓｐなし　なし　なし　なし ＩＳＰ　５　Ｇ　まずまず　まずまず（鈍い光）良好　
良好Ｒ６ｇ、ｓ、０１’　９［１，ｇｙＹ９０．ｇｙ、
Ｙ　８３．１．ｂｒＧｙＡｍなし　なし　なし　なし Ｓｐなし　なし　なし　薄赤褐色 ＩＳＰ　７　Ｇ　不良　まＣまず　良好　良好Ｒ５４，
ｂｒＯ８０，ｇｙ、ｙＢｒ　８０．ｇｙ、ｙＢｒ　８０
．ｇｙ、ｙＢｒＡｍなし　なし　なし　なし ｓｐ赤褐色　薄茶色　なし　深赤褐色 ベネット　Ｇ　！富　豊富　良好　良好Ｒ５３Ｉ１１．
０　９３．ｙＧｒａｙ　９３．ｙＧ＋ａｙ　ｉｉ３．ｙ
ＧｒａｙＡＩなし　なし　なし　なし Ｓｐなし　なし　なし　薄赤褐色 リンゴ酸　Ｇ　良好（光沢）　良好（光沢）　まずまず
　まずまずカルシウム　Ｒ５０，ｓ、０　９３．ｙＧｒ
ａｙ　９３．ｙＧｒａｙ　９３．ｙＱｒａｙＡｍなし　
なし　なし　なし Ｓｐなし　なし　なし　なし ツアペック　Ｇ　良好　豊富　良好　良好Ｒ７１１Ｉ１
．ＯＹ　９３．ｙＧｒａｙ　９３．ｙｇｒａｙ　９ｇ、
ｙＧｒａｙＡｍなし　なし　なし　なし Ｓｐなし　なし　なし　なし グルコース−Ｇ　良好　良好　なし　なしアスパラギ：
／　Ｒ７１，ｍ、ＯＹ　９３．ｙｆｉｒａｙ　なし　な
し八ｍなし　なし　なし　なし Ｓｐなし　なし　なし　なし ＴＰＯＧ　良好　良好　なし　豊富 Ｒ５５，ｓ、Ｂｒ　９１．ｄ、ｇｙ、Ｙ　なし　９＋、
ａ、ｇｙＪｈ［−なし　なし　なし　なし Ｓｐかすかな赤褐色なし　なし　なし アニｎ−Ｇ　不良　まずま「　まずまず　まずまずＩ＼
ノセ：／　１　７Ｇ、１．ＯＹ　９１．ｄ、ｇｙ、Ｙ　
９３．ｙＧｒａｙ　９３．ｙＧｒａｙＡｍなし　なし　
なし　なし Ｓｐなし　なし　なし　なし ５３１１培地ｃ）　Ｇ　まずまず　良好　まずまず　ま
ずまずＲ５４，ｂｒｏ　９１．ｄ、ｇｙ、Ｙ　９３．ｙ
Ｇｒａｙ　９３．ｙＧｒａＶＡｍなし　なし　なし　な
し Ｓｐなし　なし　なし　薄赤褐色 ツアペックの　Ｇ　豊富　豊富　豊富　ｅ富ベプト７　
Ｒ５４Ｊｒ０　９ｏ、ｇｙ、ｙ　９０．ｇｙ、Ｙ　９０
．ｇＹ、ＹＡｍなし　なし　なし　なし ｓｐなし　なし　なし　なし ａ）Ｇ−増殖、Ｒ−逆、Ａｍ−気中゛菌糸、Ｓｐ−可溶
性色素を表わす。

ｂ）菌株を３０°Ｃで１４日間インキコヘートした。

Ｃ）培地５３１１は下記の組成を有する（ｐ１４は７０
に調節されている）。

成−外　ｌ 酵母エキス　２．０ｇ ＣａＣ（）３　３．０ｇ Ｎａ２Ｓ、０３・５Ｈ２００，５ｇ Ｖ−Ｓ　ジュース　２００．０Ｊ 脱イオン水　８００．０ｍ児 寒天　２００ｇ 形梨ｊ！コな特徴 どの培養物も気中菌糸や胞子のうを産性しなかった。従
って、形独学上の比較は、基質性菌糸体に関してのみな
され、その−次菌糸の形聾は互いに区別できなかった。

生理学的特性 Ａ　Ｔ　ＣＣ２３３４２、ＡＴＣＣ３１６８３、ＣＳ　
Ｖ　５５８およびＣＵＣＯ１４について、９種類の抗生
物質に対する感受性を試験した。そイ１らの感受性のパ
ターンは同一であった。即ち、ノホビオンンお、ｌ；び
ペニシリンＧに対して抵抗性であ−）た。また、セファ
ロチン、クロロマイセチン、エリスロマイシン、リファ
ムピン、ストレプトマイノン、テトラサイクリンお３１
：びバンコマイシンには感受性を示した。

試験の結果を表■にまとぬた。

青−叶アクチノプラネス・ミソウリエンシス菌株の抗生
物質に対する感受性 ＡＴＣＣＡＴＣＣＣ８Ｖ　ＣＵＣ 抗生物質　濃度　２３３４２３１６８３５５８０１４セ
フアロヂン　３０μｇ＋＋＋＋ クロロマイセチン　３０７ｚｇ　＋　＋　＋　＋エリス
ロマイシン　１５７１ｇ＋　＋　＋　＋ノボヒオノン　
３０μｇ　−−−− ペニシリン０　１０単位　−一一一一 すファムピン　５μｇ　−１−十＋＋ ストレプトマイノン１０μｇ　＋　十＋＋テトラザイク
リン　３０μｇ　十十＋　−＋バンコマイシン　３０μ
ｇ　十　十　→−＋＋感受性あり（阻止帯あり） −抵抗性（阻止帯なし） 炭素利用性は、ＣＳ　Ｖ　５５８とＣｔＪＣＯ１４で同
一であった。Ａ　Ｔ　Ｃ０２３３４２はサリシン利用性
において異なり、Ａ　Ｔ　ＣＣ３１６８３はリボース利
用性において異なっていた。これらの試験の結果を表１
１にまとめた。

４−ＩＩＩ−：アクチノプラネス・ミソウリエンシス菌
株の炭素利用性 炭素源　ＡＴＣＣＡＴＣＣＣＳＶ　ＣｔｌＣ２３３＋１
２３１６８３５５８　０１４炭素源なし　−−−− りλレコース　（＋−１１−＋＋＋＋ １、−アラビノース　→」−→−＋」−Ｉ−−１−４−
セロピ゛オース　＋＋　士士＋＋　十→−Ｄ−フルクト
ース　＋→−＋＋−２−→−」−〇−ガラクトース　＋
＋　十十十−１−＋十ｉ−イノシトール　−　−−− Ｄ−マンニトール　＋＋　＋　＋＋　−１十メリピ“オ
ース　」−→−１−十十 ラフイノース　−−−− Ｄ−ラムノース　→−＋　→−十＋＋＋Ｄ−リポース　
−（’十）　−−− サリンン　→−−−− ツユクロース　＋＋　（＋）　＋十＋＋Ｄ−ギンロース
　−１−＋　＋＋　＋＋　十＋（」−９≧グルコース対
照：炭素利用性は陽性→−、〈クルマース対照、〉炭素
源無しの対照、炭素利用性は陽性 （＋）、増殖は疑わしい、炭素利用性は不明−増殖なし
　、炭素利用性は陰性 ＣＳ　Ｖ　５５８とＣＵＣＯ１４との生理学的な差異は
以下の点に存する。即ち、ツユクロース耐性、温度域、
およびゼラチンの酸化度。即ち、ＣＳ　Ｖ　５５８は−
１−眼が１２％までのツユクロースに耐性を有し、５〜
３０℃の温度域で増殖し、３０℃で１４日間インキユヘ
ーンヨンすれば約５０％のゼラチンを液化する。

他方ＣＵＣＯ１４は１５％までのノコクロースに耐性を
有し、５〜３７°Ｃの温度域で増殖し、３０℃で１４日
間インギコベーンヨンずろと約８０％のゼラチンを液化
する。これらの差異を、４菌株全部に関するその他の生
理学的な特徴をも含めて表■に示した。

畦：アクチノプラネス・ミソウリエンシス菌株の生理学
的な特徴（前記以外のもの） ＡＴＣＣＡＴＣＣＣ８Ｖ　ＣＵＣ 特性（特徴）　２３３４２　３１６８３　５５８　０１
４カゼインの分解　十　＋＋十 カタラーゼ反応　→−→−＋　」 エスクリンの分解　モ　＋　１−）− ゼラチンの液化　＋（４０％）　＋（１００％）　−１
−（５０％１−（８０％）Ｈ２Ｓの産生　ｔｒ、　ｔｒ
　ｔｒ　ｔｒヒボキザンヂンの分解　−一一一 リゾチーム抵抗性　−−−−−−− メラノイト色素　−−−−−− ＮａＣｆＬ耐性　〈２％　〈２％　〈２％　く２％硝硝
酸塩光　−− 生育ｐＨ域　６−７　６−８．４．　．６−８　６−８
ホスフアターゼの産生　千　十　１　＋スキムミルク　
−−−−− デンプン加水分解　→−−−−１−１ ノコクロース耐性１５％　２０％　１２％　１５％生育
温度域　１５〜３７°Ｃ５−４０°Ｃ５−３０°Ｃ５３
７℃ヂロノンの分解　−十−− ウレアーゼの生成　＋−−−＋　＋ キザンチンの分解　一 本発明に係るアクチノプラネス・ミソウリエンシス菌株
ＣＵＣＯ１４およびＣＳ　Ｖ　５５８は、ノーザン・レ
ジオナル・センター・アクリカルチコラル・リージョン
・１８１５ノース・二二ノく−シティー・スト　ＩＪ　
−１−、ヘオリア、イリノイス、６１６０４（Ｎｏｒｔ
ｈｅｒｎ　Ｒｅｇｉｏｎａｌ　Ｃｅｎｔｅｒ、Ａｇｒｉ
ｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｒｅｇｉｏｎ、１８１５　Ｎｏｒｔ
ｈ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉ’ｔｙ　５ｔｒｅｅＬ、　Ｐｅｏ
ｒｉａ、Ｔ　１１ｉｎｏｉｓ、６１６０４）に寄託され
、そのスト・ソクカルチャーコレンンヨノの一部となっ
ており、寄託番号Ｎｒ（ＲＬＩ５６４７　（ＣＵＣＯ１
４）およびＮ　ＲＲＬ　１５６４６（Ｃ５Ｖ　５５ｇ）
の下で、誰でも入手することができる。

他の微生物におけると同様、アクチノプラネス・ミソウ
リエンシスＮＲＲＬ］５６４６およびＮＲＲＬ１５６４
７菌株の性質は変動し得る。例えば、この菌株の組換え
株、突然変異株、あるいは人工的な変異株（」、該菌株
を様々な周知の物理的ないし化学的変異誘発素、例えば
紫外線、Ｘ−線、γ−線、およびＮ−メチル−Ｎ′−ニ
トロ−Ｎ−ニトロソクアニジン等で処理することにより
得ることができろ。Ａ　ミソウリエンシスＮ　ＲＲＬ　
１５６４６お上びＮ　ＲＲＬ　１５６４７菌株の天然ま
たは人工的な変異株、突然変異株および相換え株はオへ
て、それがＣｔＪＣ／Ｃ５Ｖを共同合成する機能を有す
る限り、本発明で使用し得るものである。

抗生物質ＣＩＪ　Ｃ／　ＣＳ　Ｖの）（同合成は、分泌
型ＣＵ　Ｃ０１４（Ｎ　ＲＲＬ　１５６４７）培養物と
、転換型ＣＳＶ　５５８（Ｎ　ＲＲＬ　１５６４６）培
養物とを、液中好気条件下、適当な培地中て実質的な抗
生物質活性が産生されるまで一緒に発酵させることによ
り、達成されろ。これらを別々に発酵さＵた場合には、
ＣＩＪＣ０１４培養物、ＣＳ　Ｖ　５５８培養物のいず
れも抗生物質活性を産生じない。

当業者にとっては理解し得ることだが、共同合成を行う
Ａ　ミソウリエンシス菌株を増殖さ且るために用いる培
地は、数多の培地のうちのどれであってもよい（例えば
、アメリカ特許第４．３２２，４０６号参照。これには
、親株のＡ、ミソウリエンシスＡ　’［’　ＣＣ３１６
８３菌株にとって有用な種々の培地か記載されている。

）。抗生物質ＣｔｌＣ／Ｃ８Ｖを共同合成するには、共
通の培地に２種の培養物を同時に接種して発酵させれば
よい。別法として、増殖中のＡ　ミソウリエンシスＣＵ
ＣＯＩ４培養物を調製し、次いでこの物を、増殖中のＣ
３Ｖ５５８菌株の培養物と一緒にしてもよい。

抗生物質の生産は、発酵期間を通して得られるブ「１ス
試月を、この抗生物質に対して感受性を有することか分
かっている微生物で試験することにより、追跡−４−ろ
ことかできる。有用な分析用微生物の１つはバヂラス・
ザブヂリス（枯草菌、ＢａｃｉｌｌＬＩｓ　５ｕｂｔｉ
ｌｉｓ）である。このバイオアッセイは寒天平板」二で
のペーパー・ディスク分析により、簡便に行うことかで
きる。更に、抗生物質の生産は、Ｕ■検出による高速液
体クロマトグラフィー（１−［Ｐ　１．、　Ｃ）てモニ
ターオろこともてきる。

液中好気発酵条件下て生産させた後、抗生物質Ｃ［ＪＣ
／Ｃ８Ｖを発酵培地から、当業者周知の方法、例えば、
吸着と抽出操作、により回収することかてきろ。

抗生物質ＣＵＣ／Ｃ８Ｖは、ＣＵＣＯ１４培養物ま）こ
ｉ−４：　ＣＳ　Ｖ　５５８培養物のいずれかを用いて
アクタプラニン因子Δを生物学的に変換さＨることによ
り、調製することもてきる。

介囮ｐ匁果 抗生物質ＣＩＩ　Ｃ７０Ｓ　Ｖは病原性を杓する細菌類
、特にクラム陽性菌の生長を阻市オろ。ｉ；！Ｑ　ＫＮ
　１１′コな寒天希釈法でめた、Ｃ［ＪＣ／Ｃ８Ｖの、
いくつかの微生物に関４〜ろ最少ｌ１１１＋ｌ−濃度（
ＭＩＧ）を表■にまとめた。

表Ｖ：ＣＬＩＣ／Ｃ３Ｖ（７’）イ：／　ヒ’　ｌ−［
７活ヤ１微生物−Ｍｌｏ（ｍ旦／ｍ０ スタフィ〔１コツカス・アウレウスＮ　１７１＋　１、
Ｂ５１３　８（Ｓｔａｒｌｈｙｊｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕ
ｒｅｕ、５ＮＲＲ１，８３１３）スタフィロコッカス・
アウレウスｖ４１８（Ｓ［、ａｐｈｙｌ＝、＝ｃｑｓ　
Ｕ町０！Ｓｖ’ｌｌ：）スタフィ［ｌコツカス・アウレ
ウスＸ４００　１６（Ｓ−ＬａｐｌＢｙ−ｊｏｃ、ｏｃ
ｃ、ｕＳａ、ｕ、ｒｅ腎Ｘ４００）スタフィ〔７コツカ
ス・アウレウス５１３Ｅ８（剣鴫Ｐ虹１ｏｑｑｃ、ｃ期
１［リリ５１３Ｅ）スタフィロコッカス・エビデルミゾ
イスＥＰ１１１６（＄趨Ｒ用９Ｃ−ＱＣＣ！！旦ｅ−ｐ
ｉ傾覗匝す１シＰ１１）スタフィロコッカス・エビデル
ミゾイス２２２８（汁ａ帥しユ朋ｃｃｕｓ　ｅｐｉｄｅ
ｒｍ−ｉｄｉｓ　２２２）ストレプトコッカス・ニュー
モニアエＰａｒｋｌ　０．５（５−ｔｒｅｐｔｏｃｑｃ
ｃ４＋ｓ　ｐｎｅ明匹ハｅ　Ｐａｒｋ　Ｉ）ストレプト
コッカス・ファンムＡＴＣＣ９７９０４（５Ｌ−ｒｅｐ
Ｌｏｃｏｃｃｕｓ　ｊａｅｃｉｕｍ　ＡＴＣＣ９７９０
）ストレプトコッカスｓｐグループＤ９９６０　４（針
ｒｅｐ−頃鮒竺朋迂、ｇｒｏｕｐ　Ｄ　９９６０）抗生
物質ＣＩＪ　Ｃ７０Ｓ　Ｖは姫気性菌の成長をも阻市す
る。種々の嫌気性単離体のＣＵ　Ｃ７０Ｓ　Ｖに対する
感受性を表■にまとめた。

Δ■嫌気性菌単離体のＣＬＪＣ／Ｃ３Ｖに対する感受性 蝉束判薗　財以ｔｔ１／ｍ克）ａ） クロストリジウム・ディフィンール２９９４　１（Ｃ−
１ｏｓｔ−ｒｊ＋ｌｊｕ；　ｄ…’１ｃ−ｉｌｑ　２９
９４）り［１ストリンウム・パーツリンケンス８１４（
Ｃ，４−Ｑ谷σ−可ｊｕｍ　ｐヅ↓■耶叩ジ８１）り［
１ストリソウム・セプチカム　＋１２８　４ニーバクテ
リウム・エーロファノエシス＋２３５　２（朋４眸（旦
亘り肘胎（基１卯ジ１２３５）ペプトコッカス・アザッ
カロリヂヵス＋３０２　４ｊＰｅｐｔｏｑｏｃｃ、ｕｓ
　ａｓａｃｃｊａ、ｒｏｊｙＬｉｃｕｓ　１３０２）ペ
プトコッカス・プレホラティ　１２ＰＩＩ　８（Ｐｅｐ
ｔｏｃｏｃｃ見旦　ｐｒ一旦ｖｏＬｊ、１２ｇ＋）ペプ
トストレプトコッカス・アネ〔ノヒウス１４２８　２（
ｒ亜ゆ廷朋ｐ（、，９す９９り旦邸鼾９埴り１４２８）
ペプトストレプトコツカス・インターミディγノ、＋２
６４４（ｐｐｐｔｏｓｉ−Ｈ６ｐｔｏｃｐｏ：、ｃｕｐ
　ｉｎｔ＝ｍｅ＋Ｉｊ！１ｍ　１２６４）プロピオニバ
クテリウ１、・アクネス７９　１（ＰｒｏｐｉｏＢｉｂ
ａｃｔｅｒｉｕｍ　ａｃｎｅｓ　７９）バタテロイズ・
フラギリスＩ１１　＞１２８（ｐａｃｔｅｒ９．ｊｄｅ
ｓ　ｆｒ、ａｇｉｌｉｓ　ｌ１ｌ）バクテ〔フイズ・フ
ラギリス＋８７７　＞１２８（β基（ｅ　ｒ、ｑ　＋１
９９ｕａｇす嶋１８７７）バクテロイズ・フラギリス１
９３６Ｂ　＞１２８（１３基！、ｅｒｑｉφ９シ［−Ｖ
１鼾ｌｊｓ　１９３６Ｂ）バタテロイズ・テタイオタオ
ミタ「！ン１４３８　＞１２８（Ｂａｃｊｅｒｏｊｄｅ
ｓ　ｔｂｅ［ａｉｏＬａＯｍｊｃｒｏｎ　１１３８）バ
クテロイズ・メラニノゲニカス１８５−６７２８〉１２
８（１３ａｇ４ｃｒ９ｉ４ｑｓ　１ＩＶｅｌａＢ、ｉｎ
ｏｇｅｎｉｃｕｓ　ｌｌ！５６／２８）バタテ〔ノイズ
・メラニノゲニカス２７３６　１６（ｌ（ａｃＬｅｒｏ
ｉｄｅｓ　ｍｅｌ＋！ｎ１ｎｏ５ｅｎｊｃｕｓ　２７３
６）バクテロイズ・ブルガチス１２＋１　＞１２８（膣
倶−ｅｒｏｊ−ｄ明些国ジ（膵１２１１）バクテ［ノイ
ズ・コロデンス１ｌｔ７４　＞　１２８（Ｂｑｃｔｅｒ
ｏｉｄｅｓ　ｃｏｒｒｏｄｅｎｓ、　１８７４）フッバ
クテリウム・ンンピオザム１４７０　＞　１２８（−放
ハ戟蜘３明ジ郷弁靭ｍ　１４７０’）フッバクテリウム
・ネクロフオラム６０５４Ａ　２（膿９甲旦■凹凹ザ亜
回艷６０５４Ａ）ａ）：ＭＩＣ値は寒天希釈法でぬた。

終末点は、インギュヘーンヨンの２４時間後に読み取っ
た。

また、ＣＵＣ／Ｃ５Ｖは実験的感染症マウスに投与され
た、実験的感染症誘発性菌に対し、インヒポにおいて抗
微生物活性を示した。この観察された活性をＥＤ　ｓ　
ｏ値［被検動物の５０％を保護するのに有効な投与量（
ｍｇ／ｋｇ）　：ワレン・ウィック（Ｗａｒｒｅｎ　Ｗ
ｉｃｋ）ら、ジャーナル・オブ・バクテリオロン−（、
！−川用ｃ−ｔｙ−ｅｒｉｏ１．）　８１．２３３２３
５（１９６１’）参照コとして測定した。ＣｔＪ　Ｃ／
　ＣＳ　Ｖに関して観察されたＥＤ５ｏ値を表■に示４
．。

表ｖｌ！：マウスにお（するＣＩｊＣ／Ｃ９ＶのＥＩ）
、。

値 隼トｑと仰（少牛勿　」≧−（ンりく町名〆ｋｇ〆２）
岐スタフィ〔ｌコツカス・アウレウス　１．５９ｑ印Ｉ
）！！　Ｉ−ｏｑ９９−ｃ明≦町！邦〕ストレプトコッ
カス・ピオネケス　１．０９（＄（井町９９砦型畦旦糾
凹５） ストレプトコブカス・ニコーモニアエ　０８４（針腑９
４（ＯＣｑＣ，Ｃ明Ｐ牲−９吋粍）ａ）感染の１および
４時間後に皮下投与した。

以下に実施例を挙げ、本発明の具体例を示−ｊｌ−。

１−上ｑ　ｔ＋−ｃ　Ｑ旦境秀物（−９、違■翻づ峰璋
物革ｑ腹則灸醪りφ蕪ＩＷｑ−見Ｖ乙ｃ’　５．　、ｙ
〜ｐ）１；Ａ　岳Ｗす…芋蒼吻＋木碧ＣＳ　Ｖ−５賭埼
遣葡Δ艮東ス５７．Ｊ叩 アクチノプラネス・ミソウリエンノスのＣｔＪ　Ｃ０１
４菌株（Ｎ　ｒ（ＲＬ　１５６４７）、もしくはＣＳ　
Ｖ　５５ｇ閑株（Ｎ　ＲＲＬ　１５６４６）の凍結乾燥
ペレットを滅菌水Ｉ−釦兇に溶かす。この懸濁液を用い
て、次の組成の寒天斜面培地に接種する。

成分　量（％） 前調理したオートミール　６．０ 酵母　０２５ に、ｌ−ｌＰＯ４０，１ ツアペックのミネラルストックａ）　０．５寒　天ｂ）
２５ 脱イオン水　適ｍを加えて１００％ とする 未調節時のｐＨ＝６．２＋５Ｎ　Ｎａ０ＩＩＩこよりｐ
Ｈ＝７３に調節、滅菌後のｐ＋−１＝６．７ａ）ツアペ
ックのミネラルストックは以下の組成を有４−ろ 成−分、　鼾１ ＫＣ克　１０．０ Ｍｇ５　Ｏ、・７１−Ｔ　、０　１０．０ＦｅＳ　Ｏ４
・７１（２ｏ　Ｏ，２（２ｍＲ。

の濃塩酸に溶解） 脱イオン水　適ｍを加えて１００％ とする ｂ）ディフコ・ラボラドリース（Ｄｌｆｃｏ　Ｌａｂｏ
ｒａｔｏ−ｒｉｓｅ） 接種した斜面培地を３０°Ｃで約８〜１０日間インキ：
１ベートオろ。熟成した斜面培地を滅菌した白金耳（ル
ープ）の鋸歯状になった端縁て削−で菌糸体マットを浸
漬し、はくオ。はぐｌ刃こマットの約１／４を以下の組
成の増殖用培地５０ｍ　ｌに接種４−るのに用いノこ。

成−分　量（％） グルご１−ス　２．０ トリプトンａ）０５ 酵ＩＩ）　：ｒ、ギス　０５ 水道水　適ｊへを加え−ご１００％ とケろ 滅菌前のｐＨ＝６．５、調節時のｐｌｌ　＝７．２（５
Ｎ　−Ｎａ０１１による）、滅菌後のｐｌｌ−６９ａ）
バクト・トリプトン、ディフコ（Ｂａｃｔｏ　Ｔｒｙｐ
−ｔｏｎｏ、Ｄｉｒｃｏ） 接種した増殖用培地を２５０ｍ　ｆｌのエーレンマイヤ
ーフラスコ中、回転振盪器（動径２インチ、回転数２５
Ｏｒｐｍ）ｊ：で振盪しながら３０℃で約７２時間イン
キュベートする。

増殖型培養は、寒天−斜面培養物、この培養物の７１ｉ
結乾燥ペレツト（２５０ｍ　ｌのフラスコ中、５０ｍ！
の培地について１個の凍結乾燥物を用いる）および液体
窒素中に保存した培養物（接種物０８％）を用いて開始
することができる。

インキコヘートした増殖用培地（５％、Ｖ／Ｖ）を次の
組成の製造用培地５０ｍｆｌに接種する。

【」−乳（％） クルコース　２５ コーン・スターチ　３５ 糖蜜を割ったラム混合酒　１．５ クリセリン　１．５ 酵母　２．０ に２１１Ｐ０．　０．．０５ （Ｎｉ１．）　２ＳＯ，Ｏ，Ｑ２５ ＣａＣ０３０２ 水道水　適量を加えて１００％とする 滅菌前のｐＨ＝６．５、調節時のｐｌ＋＝６．８、滅菌
後のｐＨ−６，５゜ 接種した製造用培地を２５０ｍＪｌのエーレンマイヤー
フラスコ中、回転振盪器（動径２インチ、回転数２５Ｏ
ＲＰＭ）上で３０℃において７２時間インギコベート４
゛る。

１３、＠ｒｌ！％算ｑｙ−以４（ン旦−■９基回命盛Ｃ
１ＪＣＯＩＩＩ培養物とＣＳ　Ｖ　５５８培養物とを別
個に７２時間発酵させた後、夫々の発酵で得た全ブロス
から等容重をとり、無菌的に滅菌フラスコ中で一緒にす
る。このフラスコを、回転振盪器１．て３０℃において
更に９６時間インギコベート４ろ１゜Ｃ炸快＋！１！質
１Ｍ−１メーｑ−蓄−ｙの分セテ全ソロス（１）＋１１
０．５に調節）を遠心する。上ｔｌ￥をｐｌ−１７、０
に調節ずろ。この様にし−ζ調製した試料をノ＼チラス
・ザブヂリス平板分析、並びに、ノリカケルプレート（
メルク（Ｍｅｒｃｋ）のブレ・コー）・・プラスヂック
ンート、シリカゲル６０、蛍光性指示薬を含よない）と
、アセトン；水：アンモニア（１６０：４０：１）溶媒
系とを用いろ薄層クロマトグラフィーによって分析する
。検出は、最少増殖培地中で、Ｂ　サブチリスを用いて
、平板を３７℃で約１８時間インキュベート４−ろこと
からなる、バイオオートグラフィー（生物学的自己描写
法）で行う。

寒廊、（Ｍｌ　２−仮ｆ（シラ真視ｑ乙ｑジｙｐ単雛実
施例１と同様の方法で調製した３０ツトの発酵全ブロス
を一緒にした（総ｆｆ１＝４５．９）。このブロスをＣ
ｅｐａ遠心機で遠心した。菌糸体を、水酸化ナトリウム
でｐＴ（１０，５に調節した水で２回抽出した。抽出液
を合わせ（２４１）、塩酸でｐＴ−１７，０に調節し、
４０！のノアイオン（Ｄｉａｉｏｎ）　ＩＩＰ２０（三
菱化成株式会社、東京、日本）を充填したカラムに、流
速１６０ｍ！／分で流し込んだ。このカラｌ、を、水８
！とメタノール水（１：３）］Ｌｅとで順次洗浄した後
、メタノール・水（ｌ：１）８．Ｍ、メタノール水（３
：Ｉ）８ｊｉｊ、およびメタノール２０！で溶離し４児
の分画を集めた。

各分画の生物学的な活性を分析した。このバイオアッセ
イは、バチラス・サブチリスを播種した寒天平板−１−
てのペーパーディスクθ、に、１、り行−・た。

所望の活性を含む分画を合わｕ、ｉｉ＆圧濃縮ｊ２、ｌ
中結乾燥して１００ｇの相生酸物を得た。

この物質の　・部（ｏ　、　５ｇ）をメタノール水（３
・２）１０ｍ！に溶かしてシ濾過Ｉ７た。このシ戸ｉ＆
を、２５４０ミクロンのりクロプレプ（１，１ｃｈｒｏ
ｐｒｅｐ）　Ｒ１’　１８逆相シリカゲル（ＭＣ／Ｂマ
ニュファクチコアーリング・ケミストリー１インコーボ
レーテツト、ノンンナソティ、オハイオ（Ｍａｎｕｆａ
ｃｔｕｒｉｎｇ　Ｃｈｅｍｉｓｔ、Ｉｎｃ、、Ｃ１ｎｃ
ｉｎａｔｉ、０１１．））５９０ｍ、９を充填した５、
２−Ｘ４ｍ−ｃｍマイケル−ミラー（Ｍｉｃｈｅｌ−Ｍ
ｉｌｌｅｒ）　１ＩＰＬＰ１．ｃガラスカラムに適用し
た。このカラムを、配合比３５：６５のメタノール、り
ん酸二水素カリウム緩衝液（濃度００５Ｍ、りん酸でｐ
ｌ−１３，５に調節されている）により、流速１０１１
１！／分で溶離し２０ｍ！の分画を集めた１、この溶出
液を、Ｔｙｐｅ６オプテイカル・ユニットを備えたｌ５
ｃｏ　Ｍｏｄｅｌ　ＵＡ−５ＵＶモニター（インストル
メンテーション・スペンヤリティーズ・カンパニー１　
リンカーン、ネバダ（ｔｎｓｔｒｕｍｅｎＬａｔｉｏｎ
　５ｐｅｃ’１ａｌｔｉｃｓ　Ｃｏ、、ｌ、１ｎｃｏＩ
ｎ、ＮＥ））を用いて、２８０ｎｍにおいてモニクーし
た。ハヂラス・ザブチリスが播種されている最小培地を
含有する寒天平板にペーパーディスクを押し付ける方法
で全ての分画を分析した。所望の活性を有する分画を合
わせ、水酸化ナトリウ１１てｐｌ−１を７０に調節し、
減圧濃縮した。この濃縮されたプール（１００Ｊ）を、
Ｄｉａｉｏｎ　ＩＩＰ−２０（９０＋＋＋４）を充填し
たカラムに適用した。このカラムを水４００ｍ！て洗浄
し、次いでアセトニトリル水（４Ｉ）で溶離した。最初
の溶出液（２９ｍ　ｌ　）を捨て、次の溶出液（１５Ｊ
）を集めて減圧濃縮し、凍結乾燥することにより、純化
抗性物質ＣｔＪＣ／Ｃ８Ｖ２７ｍｇを得た。

ＣＵＯ／Ｃ８■の特性値を次に示４゛。

陽炎分析（ｃ、。ＨＲｅＮ７０−１・１２＋−１ｚＯ）
ｉｊ％　イ１１、　実〆１す（メ堕 Ｃ−９０　４９．４６　４９．２８ ・ト９８　５．６３Ｌ３５ Ｎ４　４．４９　Ｌ５５ （１，４＋　３８．８　３９．８２（差による）ＣＪｌ
　ｌ　１．６２　２．００ λｍａｘ　２７８ｎｍ、酸ＰＬ（ε−１’ｌ、ｏｏｏ）
入ｍａｘ　２７７＋＋ｍ、３６１ｎｍ、中性（ε〜１８
．ＱＯ（１，９，ＯＯ［ｌ’）λｍａｘ　２９５ｎｍ、
３４０ｎｍ、アルカリＩ’ｌ（ε−２１，０００，１１
１，５００） 分子量の計詐値は１．２００である。この化合物は２３
０ｎｍに線吸収を示す。

凄詑瞥 ノメチルスルホキシド、ノメチルホル１１アミド、アセ
トニトリル水混合物およびアルコ１−ル水混合物に可溶
てある。

マス・スペクトロ少メトリー（１冒、速１京ｒ・衝撃イ
オン化方式、Ｉ・’ＡＩ＋　ＭＳ） ＦＡ１トＭＳに、１、ろ分子ｆＴｔは１９６８てあろ３
、実施（＋り聯　ＣＳ　Ｖ　５５８培芥物に、１、ろア
ノ７タブラ丹ン〜困子の変準にＪ古つくにＩＪＣ／Ｃ８
Ｖの製造Ａ　イ４ｉ物７的変換 アクタプラニンＡ因ｆ’（ｌｏＯ＋ｎｇ）を水に溶かし
２、シ濾過して滅菌し、５１１令の△　ミノウリエンシ
スＣ６Ｖ　５５ｇ（Ｎ　ＲＲｌ　１５６４６）の変換型
培養物の発酵物１！に加える（終濃度ｏ３ｍｇ／Ｊ）。

この発酵産物を更に４８時間インキュベートオろ。全ブ
ロスのｐＨを水酸化ナトリウムで１０．５に調節する。

このブロスを遠心し、遠心物（セントレー１−１（４で
中和ずろ。

Ｔ３．　ＣＵＣ／Ｃ８Ｖの単離 Ａで述へた方法に従って生物学的変換を行った。

ブロスをシ濾過して除き、菌糸体を水（ｐｉ−１１０，
５）で抽出した。この抽出物（５５０ｍｊ２）を、実施
例２で述へたごと＜ｌｏｏｍｚのＨＰ−２０を充填した
カラムで精製し、凍結乾燥して粗生成物（１９０ｍ［り
を得た。この生成物の一部（ｌｏｏｍｇ）を、ｐＨ３，
６の５ｍＪｌのＣＨ３ＣＮ　ｐｙｒＯΔｃ（３６：６４
）に溶か１７、リクロプレプ（Ｌｉｃｈｒｏｐｒｅｐ）
　１ｔＰ−８樹脂（２５−４０μｍ）を充填した３００
−ｍ！のガラスカラムに適用した。このカラムを、ｐｌ
−１３、６のＣｌ１３ＣＮ：０．０５％ｐｙｒＯＡｃ（
１：４）で、流速８ｍｉ／分て溶離した生成物を、２８
０ｎｍにおけるｔＪＶ吸収、Ｂ　ザブチリスによるバイ
オアッセイ、および分析的ＨＰ　Ｌ　Ｃで検出した。所
望の活性を有する分画を合わｔｔ、Ｎ−ＮａＯＨで叶Ｉ
を６５に調節し、次いで濃縮してＣｌｌ３ＣＮを除去し
た。得られた水溶液（５０ｍ、ｉ）を、水中に入れたＬ
［’１−Ｃ１ｇ樹脂１２ｍｊＬを満たした４０ｍＪｌの
カラムに適用した。カラムを水（１００ｍりで洗浄して
塩を除き、活性物質をＣＩｌ、ＣＮ：１１，０（７，３
）で溶離した。溶出液を濃縮して凍結乾燥するごとによ
り、純化抗生物質ＣＩＪ　Ｏ／　ＣＳ　Ｖ　ｌｏｍｇを
得ノこ。

実ｔＬ剋−４−ｃ−早」ン−９）−４填−答物に−杼ア
二２ノノラー丑Ｚ肚へｑ牛胸、学的東を１９皆シー仝−
ρ８−リーＣ／　Ｃ，５ｖｏｌ遣 ＣＳ　Ｖ　５５１’ｌ培養物の代わりニＣ［Ｉ　Ｃ［１
１４（Ｎ　１１１’（Ｌ１５６４７）培養物を用いろこ
と以外は実施例３の方法に従い、アクタプラニンへ因子
を抗生物質０【ＪＣ／Ｃ８■に変換した。

実施例−ゆ　抗生物質〔２す（ン、／−ＣＳ−Ｖの〕→
めの・９＠ｍｌＱ　ｇ　Ｌ　ＣイＺ？ム カラム；４，５−Ｘ２５０−ｍｍステンレス鋼製充填物
、ノヤントン（Ｓｈａｎｄｏｎ）　ＯＤＳ　ハイパーノ
ル（Ｉｌｙｐｅｒｓｉｌ）−５ミクロン溶媒：ＣＨ３０
Ｎ：０．０５ＭＫＨ２ＰＯ，（１−１３Ｐ０４でｐＨ３
，２に調節されている）の（２１ニア９）混合物 流速：１．ＯＪ／分 検出（Ｊ　Ｖ　（２２０ｎｍ） 作図速度（チャー１・・スピード）＋２０ｃｍ／時保持
時間、９３分 特許出願人、イーライ・リリー・アンド・カンパニー 代　理　人、弁理士　前出　葆　（ほか１名）手続補正
書（ヵ、い 昭和に（）年　３月２７日 □□　長　官　ウ　４１１ １　事件の表示 昭和５９年特許願第　２２１１２１　号２発明の名称 生物学的変換能を有する新規微生物 ３補正をする者 事件との関係　特許出願人 住所　アメリカ合衆国インディアナ州インディア方、ポ
リス市、住所　大阪府大阪市東区本町２−ＩＯ不可ビル
内６　補正（Ｄ対象：明細書の全文

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ｌアクチノプラネス・ミソウリエンシスＮＲｒ（Ｌ１５
   ６４７と一緒に培養することにより、抗生物質ＣＵＣ／
   Ｃ８Ｖを共同′合成することができるアクチノプラネス
   ・ミソウリエンシスＮ　ＲＲＬ　１５６４６、その変異
   株、突然変異株および組換え株。 ２、アクチノプラネス・ミソウリエンシスＮＲＲＬ１５
   ’６４６である第１項に記載の菌株。 ３アクチノプラネス・ミソウリエンシスＮＲＲＬＩ５６
   ４６と一緒に培養することにより、抗生物質ＣＵ　Ｃ／
   ＣＳ　Ｖを共同合成することができるアクチノプラネス
   ・ミソウリエンシスＮ　ＲＲＬ　１５６４７、その変異
   株、突然変異株および組換え株。 ４アクヂノブラネス・ミソウリエンシスＮＲＲＬ）５６
   ４７である第３項に記載の菌株。