JPS60165549A - 抗工抗体吸収剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、抗■抗体の吸収剤に関する。更に詳しくは、
本発明１ｄ輸血に伴う交差適合試験や抗体スクリーニン
グなどの血液検査において、しばしば偽陽性の原因とな
る抗Ｉ抗体ケ特異的に吸収することにより、まぎられし
い反応を防ぎ、正確迅速にこれらの検査を実施するため
の簡便、安価な抗Ｉ吸収剤を提供することを目的とする
。

いわゆる寒冷凝集素、特に自己抗体の存在が血液型判宇
、抗体スクリーニング、交差適合試験などに影響を与え
、輸血検査の大きな障菩となることは良く知られている
。この内、特に問題となるのが抗工自己抗体の存在であ
る。抗］自己抗体はほとんどの人が保有している抗体で
、低温において、自己あるいは他人の赤血球を凝集する
性質を有する。普通はごく弱いが、マイコプラズマ肺炎
や自己免疫性、溶血性貧血など各種の疾患に伴って、力
価が高くなり反応温度も広くなって、しばしば検査の妨
害となる。最も単純なミスは血液型表試験でＡＢ型と判
定してしまう誤りである。

このような単純なミスはどでなくても、寒冷性自己抗体
が存在する材料では、生体内あるいは試験管内で抗体と
血球上の抗原とが反応し、補体を結合する。この状態の
血球は温かい生食水で洗っても抗体は洗い去られるが、
補体は依然として血球上に残存する。このような血球で
は、クームス法でしかタイピングできない抗体、たとえ
ば抗Ｆｙ　ａで反応を試みると、使用するクームス試薬
が抗ＩｇＧであれば正しい結果が得られるが、広範囲ク
ームス試率では、偽陽性金呈することがある。このよう
なり−ムス試験の際に起こりうる寒冷性抗体の補体結合
による干渉も、技工抗体による妨害の例として留意され
ねばならない。

これらの寒冷凝集性自己抗体、とりわけ抗工自己抗体に
よる検査の妨害を防止する方法として、被験血清中に存
在する抗工抗体をあらかじめ中和したシ、吸収、除去し
た後、検査することが考えられる。これまでこの目的の
ために、しばしば患者自身の赤血球により技工抗体を吸
収、除去することが行なわれるが、操作が煩雑であるこ
と、吸収が必ずしも完全でないことなどの問題点がある
。

一方、このような抗り抗体を吸収、除去するためす の試薬として固定化クギギ赤血球膜が用いられているが
、抗Ｔ抗体に対する特異性やコスト面で鎗点があった。

本発明者らは、上記の如き輸血検査における技工抗体の
影４１を除くための従来技術の問題点を解決すべく、抗
工抗体を簡便かつ安価に中和あるいは、吸収、除去でき
る試薬について鋭意検討した結果、１式血液型活性を持
つ物質として、■綱咄乳類、ｌＸ−３亜綱獣類、下綱３
真獣類、目２６偶蹄類、亜目１イノシシ類または、回目
９兎類に由来するムチン２　ヒトまたは、回目２６亜目
３反別類の乳汁、　ｖｍ綱鳥類、■１−３亜綱真鳥類、
目１６キジ類、亜目１キジ類に由来するオボムコイドを
見出し、これらを単独にあるいは混合して作用させるこ
とによ！ｌｌ極めて顕著に技工抗体を抑制することがで
きることを見出し、本発明に到達した。

すなわち本発（７）の要旨は、真獣類由来のムチン。

乳汁、真鳥類由来のオボムコイドからなる群より選ばれ
た１種以上の化合物を含有する技工吸収試薬である。ま
たこれらの化合物を不溶性の担体に結合せしめ、担持さ
せることを特徴とするものである。

本発明で対象とする技工自己抗体についてより詳細に説
明する。抗工抗体は、ＯＩ型型面血球０型謂帯血及びＯ
ｉ型型面血球対する凝集反応の相違から４種類（抗ＩＰ
、抗ＪＤ、抗ＩＴ、抗Ｉｓ　）に分離されている。たい
ていの技工は抗ＩＰか抗ＩＤである。このＦとかＤは、
その抗体が反応する■抗原の主成分を指している。Ｆは
ｆｅｔａｌ　（胎児性）を意味し、ｉ型の成人や屓帯血
などを含むすべてのヒト血球に共通な１部分と考えられ
ている。また、ザル血球もこの抗原を持っている。ＩＤ
　のＤはｄｅｖｅｌｏｐｅｄ　（成熟性）に由来した記
号で、屓帯血球や成人のｉ型血球、サル血球はこの抗原
を欠いている。ｒＴは１９６６年に見つかった抗体で、
従来の抗■と違って、贋帯血球と最も強く反応すること
から、ｉから■へ移り変わる時期に滴帯血球に出現する
抗原として１１の名が与えられた。

Ｔはｔｒａｎｓｉｅｎｔに由来している。一方、抗Ｉ５
は極めて稀な抗体であり、唾液によってのみしか抑制さ
れないため５ａｌｉｖａ　にちなんで抗Ｉｓ　とよばれ
る。

本発明で用いられる１式血液型活性物質は、真獣類、就
中イノシシ類または、見知に由来するムチン、人乳や真
獣類、就中反別類の乳汁、真鳥類。

就中キジ類由来のオボムコイドなどの糖蛋白であるＯ イノシシ類にはイノシシ、豚、イボイノシシ。

マレー野猪、カバなどが、反別類にはシカ、トナカイ、
キリン、水牛、牛、ヤク、ヤギ、ヒツジなどが、元類に
はナキウサギ、ノクサギ、夕ロクサギ、カイクサイなど
が、キジ類には雷鳥、クズラ。

コジュケイ、ヤマドリ、セイラン、クジャク、ニワトリ
、七面鳥などが属しており、いずれも本発Ａ月の工式血
液型活性物質原となるが、以下イノシシ類については豚
、反別類については牛、元類についてはクサイ、キジ類
についてはニワトリを例にとって説明する。

豚由来ムチンとしては、豚の敦下腺、胃粘膜などより公
知の方法で分離、精製したものや市販の胃由来ムチンを
用いることができる。これらは抗Ｊ自己抗体の内とりわ
け抗工′抗体の吸収に良好な結果を与える。

一方、クサイムチンとしては、クサイの胃粘膜。

腸粘膜などより従来知られている方法で分離、精製した
ものを用いることができる。クサヤムチンＳ１抗ＩＦ抗
体と共に抗ＩＤ抗体全顕著に吸収することができる。

本発明に用いるヒト乳汁及びウシ乳汁としてはこれらを
そのまま用いることもできるが、遠心分離などで乳汁を
脱脂した後、酸処理によってカゼインを除去した乳清を
使用することもできる。これらヒト乳汁及びクシ乳汁由
来の１血液型物質は、抗ＩＴ及び抗ｔｓ抗体の吸収に良
好な結果を与える。

似し、市販の加工牛乳は好ましくない場合もある。

卵白オボムコイドとしては、ニワトリの卵白よシ公知の
方法で分離、精製したもの、必るいは市へ販のオボムコ
イドを用いることもできる。捷だ、オボムコイドをプロ
ナーゼのような蛋白分解酵素で加水分解した後に得られ
る糖ペプチドを用いることもできる。これらは抗工抗体
の内とシわけ抗工０抗体の吸収に顕著な効果を示す。

これら１式血液型物質によりて抗工抗体を中和吸収する
には検査に先だって被験血清に対して、上記の型物質を
添加するだけでよい０添加の方法は型物質を直接添加し
てもよく、また型物質を生理食塩水などの適当な溶媒に
溶解せしめて添加してもよい。更にこれらの型物質を水
不溶性の担体粒子に結合させて使用しても何ら差支えな
い。

■型物質による抗Ｉ抗体の吸収操作は、１５〜４０℃、
好ましくは２２〜３７℃で、５〜３０分間。

好ましくは１０〜２０分間行なう。反応終了後、可溶性
の型物質を用いた場合はそのままで、不溶性の担体粒子
に結合させた場合は、ろ過、遠心分離など適当な手段で
粒子を分離したのち検査を実施すればよい。

上述した如く、■型物質社遊離の形態でもよく、あるい
は不溶性の担体粒子に担持された形態でもよい。本発明
で用いられる担体粒子としては、ポリスチレン、スチレ
ン−ブタジェン共重合体の如き乳化重合により得られる
有機畠分子のラテックス、あるいはシリカ、アルミナ、
ゼオライトの如き無機酸化物が好ましい結果を与える。

本発明において、かかる不溶性担体粒子にＩ血液型物質
を担持させる（感作させる）には、型物質を担体に対し
て物理的に吸着させてもよいし、化学的に吸着きせても
よい。通常は、ｐＨ４〜１０の緩衝液中で分散濃度０．
０１〜１％のゼオライト粒子と０．００１〜１％の１型
物質を４〜６０℃で１５分〜２時間程度ゆるやかに攪拌
しながら接触させることにより行なう。緩衝液としては
、例えば酢酸緩衝液、リン酸緩衝液またはグリシン緩衝
液を用いればよい。感作終了後は、リン酸緩衝液など中
性付近の緩衝液で数回洗浄し、最後に懸濁液に担体粒子
を懸濁し保存する。懸濁液としては、リン酸緩衝液など
に窒化すトリクム（ＮａＮ５）　０．０１〜０．５％添
加したものを用いる。

以下実施例によシ、本発明の実施の態様をより詳細に説
明する。

実施例１゜ 豚胃粘膜２１６ＰＫ蒸留水を加えミキサーにてホモゲナ
イズした。遠心分離により得られる上清のｐＨを塩酸で
２に調整した後、ペプシンを添加し、３７℃で４日間消
化した。遠心分離により上清を得、これに２．５倍容量
のエタノールを添加した。

得られた沈殿をエーテルで洗浄後、乾燥することによｐ
３．７４Ｆのムチン粉末を得た。このものを生理食塩水
溶液に１■／ゴになるように溶解し、抑制実験に供した
。

技工抗体抑制試験は、試験管に被験血清２滴とムチン溶
液１滴を加えて混合後、室温で３０分放置した。次に２
％０型赤血球を１滴加え４℃にて２０分インキュベート
した後、３．４０Ｏｒｐｍ、１５を行ないコンドロール
ドシタ。

１６種の技工抗体について、抑制の実験を行なった結果
を表１に示した。これにより豚胃粘膜より調製したムチ
ンが、ある種の抗Ｉ抗体を抑制することは明らかである
〇 実施例Ｚ 市販の豚胃由来ムチンを用いて実施例１．と同じように
行なった結果を表１に示した。市販のムチ実施例３゜ 生理食塩水に溶解し、実施例１．と同様に１６種の抗Ｉ
抗体に対する抑制作用を検討した結果を表１に示した。

これよりクサギムチンが豚胃由来ムチンとは異なった抑
制パターンを示すのは明らかである。

実施例４゜ 人乳５００−を遠心分離により脱脂した。得られた脱脂
乳のｐＨを塩酸で４．６〜４．７に調整し、沈殿するカ
ゼインを遠心分離により除き乳清を得た。このものを試
料として、実施例１．と同様に抗ｌ抗体の抑制作用につ
いて検討した結果を表１に示した。

実施例５゜ 人乳の代りに牛乳を用いた以外は、実施例４．と同様に
操作した。得られた牛乳乳清について実施例１．と同様
に抑制実験を行なった。表１の結果より、人乳及び牛乳
は同様のパターンを示すことが明らかである。

一施例６゜ ニワトリの卵白３６０ゴに、０．５Ｍ）リクロル酢酸と
アセトンの１：２の混合液３６〇−加え攪拌する。生じ
た沈殿を遠心分離により除去した上清に２．５倍容量の
アセトンを加えた。生成した沈殿を遠心分離により集め
蒸留水に溶解し、蒸留水に対して透析して、ニワトリオ
ボムコイド溶液を得た。このものについて実施例１．と
同様に抗Ｉ抗体の抑制実験を行なった結果を表１に示し
た。

実施例７゜ 実施例１．で用いた豚ムチン、実施例４．で用いた人乳
及び実施例６．で得られたニワトリオボムコイドの混合
液を調製した０このものについて実施例１、と同様に抑
制実験を行なった結果を表１に示した。これより、これ
ら３種の■型物質を混合することにより、すべての種類
の抗Ｉ抗体を抑制できることは明らかである。

鵠施例８゜ 実施例７．で調製した豚ムヂン２人乳、ニワトリオボム
コイドの混合液のｐＨを８．５に調整し、このものにゼ
オライト粒子（東洋ソーダ■製ゼオラムＦ−９）を０．
２５％濃度で分散させる。３７℃、２時間ゆるやかに攪
拌しながら接触させることにより、■型物質を感作させ
た。感作終了後、ゼオライト粒子をリン酸緩衝液で洗浄
し、０．０１％　の窒化ソーダを含む同緩衝液に懸濁さ
せ、■型物負感乍ゼオライト粒子を調製した。

技工抗体抑制試験は、試験管に被験血清２滴と１型物質
感作ゼオライト粒子懸濁液１滴を加えて混合後、室温で
３０分軽＜賃とつした・遠心分ｌによシゼオライト粒子
を除去した上清について実施例１．と同様にして、抗Ｉ
抗体の有無を判定した結果を表１に示した。これより、
これらＩ型物質をゼオライトのような担体に担持せしめ
ても、遊離の状態と何ら変りなく技工抗体を抑制するこ
とができることは明らかである。

１較例１゜ 市販のクザギ赤血球膜に由来する技工吸収剤を用いて実
施例１．と同様に抑制実験を行なった。

結果を表１に示した。これにより市販の抗Ｉ吸収剤を用
いた場合、抑制できない抗Ｉ抗体が存在すること、本発
明による技工吸収剤によればそれらも抑制しうろことが
明らかで多る。

手続補正ｌｓ（自発） 昭和５９年１０月９日 特許庁長官　志賀　学殿　昭和ｓｒ＋ｒ＋−ｔｒ＋＋＋
　ｔｏｘ」差出１　事件の表示 昭和５９年特許恥第２１４９１号 ２、発朗の名称 抗ｌ抗体吸収剤 ３、補正をする者 事件との関係　特豹出願人 〒６７５−０１ カコｒＩ７１１リマ七〇ミヤニシ 住　所　兵Ｒ＠加古郡播磨町宮西３４６番地の１（置０
７つ４−３７−２１５１１ ５、補正の内容 ［１］ｍ１ｌｌの発明の名称の欄の１゛抗Ｉ抗体吸収剤
−１を［抗Ｉ吸収剤ｊと補正する。

「２］明１ｌＩｉＩ第１頁、１、発明の名称の「抗Ｉ抗
体吸収剤」を「抗Ｉ吸収剤」と補正する。

［３］明ｌｌｌ書第１〜２頁、２、特許請求の範囲を以
下のとおり補正する。

ｒ（１）１式血液型物質として冥獣類由来のムチン、乳
汁、真鳥類由来のオボムコイドの少なくとも１種を含む
ことを特徴とする抗Ｉ吸収剤。

（２）ムチンがイノシシ類（下１１１３Ｒ獣類、目２６
偶蹄類、亜目１）由来のものである特許請求の範囲第１
項記戦の吸収剤。

（３）ムチンがウサギ類（下網３真獣類、目９）由来の
ものである特許請求の範囲第１項記載の吸収剤。

（４）ムチンが反祁類（下網３真獣類、目２６偶蹄類、
亜目３）由来のものである特許請求の範囲第１項記載の
吸収剤。

（５）ムチンがウマ類（下＄１１３真獣類、目２５奇類
、亜目１）由来のものである特許請求の範囲第１項記載
の吸収剤。

（６）乳汁がヒトのものである特許請求の範囲第１項記
載の吸収剤。

〈７）乳汁が反槁類（下網３真獣類、目２６偶蹄類、亜
目３）のものである特許請求の範囲第１項記載の吸収剤
。

（８）オボムコイドがキジ類（■−３亜綱真Ｉ！！＆類
。

目１６．亜目１）由来のものである特許請求の範囲第１
項記載の吸収剤。

（９）１式血液型物質が溶液の状態である特許請求の範
囲第１項記載の吸収剤。

（１０）１式血液型物質が不溶性担体に担持されている
特許請求の範囲第１項記載の吸収剤。

（１１）不溶性担体がポリスチレンラテックス粒子また
は、ゼオライト粒子である特許請求の範囲第１０項記載
の吸収剤。ｊ ［４］明細同第２頁第１１行および第１４（う「技工抗
体」を「抗Ｉ」と補正する。

［５コ明細書第３頁第７行「自己免役性、溶血性貧血Ｊ
を［自己免疫性溶血性貧血」と補正する。

［６］明細書第４頁第３行第７行第１０行第１３行第１
５行第１７行および第１８行［［技工抗体、１を「抗Ｉ
」と補正する。

［７コ明細書第５頁第４行イノシシ類の次に以下を加入
する。、［同亜目３反異類、回目２５奇蹄類。

亜目１ウマ類」 ［８コ明細自第５頁第９行および第１８行Ｆ「抗Ｉ抗体
Ｊｔ、ｒ抗Ｉ」と補正する。

［８］明細書第６頁第２行「分離ｊを「分類」と補正す
る。

［１０〕明細書第６頁末行イノシシ類の次に以下を加入
する。「反襲類、ウマ類」 ［１１］明細書第７頁第４行第１２行および第１５行「
豚」を「ブタ」と補正する。

［１２］明ＩＯｍ第７頁第６行および第１２行Ｉ牛」を
「ウシ」と補正する。

［１３］明細書第７頁第６行ヒツジなどかの次に以下を
加入する。［ウマ類にはウマ、ロバ、シマウマなどが」 ［１４］明ａｍ第７頁第１２行ウシの次に以下を加入す
る。［、ヒツジ、ウマ類についてはウマ」［１５］明細
書第７頁第１８行［抗１抗体１を「抗Ｉ」と補正する。

［１６コ明細書第７頁未行に以下を加入する。

「ウシ、ヒツジおよびウマ由来のムチンとしては、これ
らの顎下腺、胃粘膜などから公知の方法で分館精製した
ものを用いることができる。これらは抗■および抗■の
吸収に良好な結果を与える。

［１７］明ｌ！Ｉ第８頁第４行第１１行および第１９行
「抗体」を削除する。

［１８］明細書第９頁第１行第２行および第９行「抗体
」を削除する。

［１９］明ｂ ム」を「アジ化ナトリウム」と補正する。

［２０］明細円第１１頁第２行および末行「豚Ｊを「ブ
タ」と補正する。

［２１］明細８第１１頁第１１行おＪ：び第１８行「抗
１抗体」を「抗１」と補正する。

［２２］明細書第１２頁第１行ａ３よび第１２行「抗１
抗体」を「抗Ｉ」と補正する。

［２３］明ｂ と補正する。

［２４］明＠需第１２頁第８行「実施例３」を「実施例
６」と補正し、その前に以下の実施例を加入する。

「実施例３」 ウシ顎下腺２３５Ｑを実施例１と同様に処理し、１４．
８Ｑのムチンを得た。このものを１ｍｑ／ｍ１に生理食
塩水で溶解し、実施例１と同様に１６種の抗ｌに対する
抑制作用を検討した結果を表１に示した。

「実施例４」 仔ヒツジの胃粘膜１３７Ｑを実施例１と同様に処理し、
２．２８Ｇのムチンを得た。このものの１６種の抗Ｉに
対する抑制作用を表１に示した。

「実施例５」 ウマの胃粘膜１００ｑを実施例１と同様に処理し、１．
２６Ｇのムチンを得た。このものについて実施例１と同
様に抗Ｉ抑１１作用を検討した結果を表１に示した。

［２５］明ＩＩ１円第１２頁第１６行１実施例４［を「
実施例７」と補正する。

［２６］明細再第１３頁第１行および第１６？う「抗Ｉ
抗体」を「抗Ｉ」と補正する。

［２７］明細書第１３頁第３行「実施例５１を「実施例
８」と補正する。

［２８］明！Ｉ４円第１３頁第９行１一実施例６１を「
実施例９」と補正する。

［２９］明細祝第１３頁第１８行ｌ実施例７」を［実施
例１０Ｊと補正する。

［３０］明細丹第１３頁末行［豚］を「ブタ」と補正す
る。

［３１］ｌ１１１１１１１１第１３頁末行ブタムヂン、
の次に以下を加入ブる。「実施例３で用いたウシ由来ｌ
＼チン、実施例４で用いたヒツジ由来ムチン１［３２］
明細書第１３頁末行「実施例４」を「実施例７」と補正
づる。

［３３］明細町第１４頁第１行「実施例６」を「実施例
９」と補正する。

［３４コ明細劃１４頁第４行「３種Ｊを「５種」と補正
する。

［３５コ明細書第１４頁第５行「抗Ｉ抗体」を「抗■」
と補正する。

［３６コ明細書第１４頁第７行「実施例８」を「実施例
１１」と補正する。

［３７］明細訓１４頁第８行「実施例７」を「実施例１
０Ｊと補正する。

［３８］明細店第１４頁第８行「豚」を「ブタ」と補正
する。

［３９コ明ＩＩＩ第１４頁第８行ブタムチンの次に以下
を加入する。「ウシムチン、ヒツジムチン、」［４０コ
明１１１Ｆ！第１４頁第１５行〜第１６行「窒化ソーダ
」を「アジ化ナトリウム」と補正する。

［４１コ明細出第１４頁第１７行「抗Ｉ抗体」を「抗１
」と補正する。

［４２コ明細残第１５頁第２行、第５行および第１１行
「技工抗体」を「抗Ｉ」と補正する。

［４２］明細書第１６頁〜第１７頁第１表を以下のとお
り補正する。

表　１ 表　１　（つづき） 注；＋：凝集　−二非凝集

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）１式血液型物質として真獣類由来のムチン。 乳汁、真鳥類由来のオボムコイドの少なくとも１種を含
   むことを特徴とする技工抗体吸収剤（２）ムチンがイノ
   シシ類（下網３真獣類、　１ｉ２６偶蹄類、亜目ｌ　Ｓ
   ｕｉｆｏｒｍｅｓ　）由来のものである特許請求の範囲
   第１項記載の吸収剤 （３）ムチンが兎類（下＃４３真獣類、目９Ｌｏｇｏ−
   ｍｏｒｐｈａ　）由来のものである特許請求の範囲第１
   項記載の吸収剤 （４）乳汁が人類のものである特許請求の範囲第１項記
   載の吸収剤 （５）乳汁が反舞類（下網３真獣類、目２６偶蹄類、亜
   目３　Ｒｕｍｎａｎｔ　ｉａ　）のものである特許請求
   の範囲第１項記載の吸収剤 （６）オボムコイドがキジ類（Ｖｌ−３亜綱真鳥類。 目１６．亜用Ｉ　Ｇａ１ｌｉ、）由来のものでちる特許
   請求の範囲第１項記載の吸収剤 （７）１式血液型物質が溶液の状態である特許請求の範
   囲第１項記載の吸収剤 （８）１式血液型物質が不溶性担体に担持されている特
   許請求の範囲第１項記載の吸収剤（９）不溶性担体がポ
   リスチレンラテックス粒子またはゼオライト粒子である
   特許請求の範囲第８項記載の吸収剤