JPS60156386A - 安定化されたグリセロリン酸オキシダ−ゼ組成物 - Google Patents
安定化されたグリセロリン酸オキシダ−ゼ組成物Info
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- JPS60156386A JPS60156386A JP25817184A JP25817184A JPS60156386A JP S60156386 A JPS60156386 A JP S60156386A JP 25817184 A JP25817184 A JP 25817184A JP 25817184 A JP25817184 A JP 25817184A JP S60156386 A JPS60156386 A JP S60156386A
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- Japan
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は安定化されたグリセロリン酸オキシダーゼ組成
物に関するものである。
物に関するものである。
近年、Ｌ−ａ−グリセロリン酸を酸化してジヒドロキシ
アセトンリン酸と過酸化水素を生成するＬ−α−グリセ
ロリン酸オキシダーゼ（以下ＧＰＯと略称する）は診断
用試薬として使用され、その重要性が１丁１丁増加して
きた。ところがＧＰＯは不安定であり、特にＧＰＯを水
溶液にした場合、該水溶液中のＧＰＯ濃度が１■／−以
下の低濃度では極端に不安定である。さらにＧＰＯ’ｌ
ｒ含有する組成物は凍結乾燥に極めて敏感で弱く、ＧＰ
Ｏ活性は凍結乾燥の間、あるいは凍結乾燥後、相当低下
する。したがって、低濃度のＧＰＯ水溶液では長時間に
亘る品質の維持が困難である。このような理由からＧＰ
Ｏｉ用いる利点が失われる場合が多い。
アセトンリン酸と過酸化水素を生成するＬ−α−グリセ
ロリン酸オキシダーゼ（以下ＧＰＯと略称する）は診断
用試薬として使用され、その重要性が１丁１丁増加して
きた。ところがＧＰＯは不安定であり、特にＧＰＯを水
溶液にした場合、該水溶液中のＧＰＯ濃度が１■／−以
下の低濃度では極端に不安定である。さらにＧＰＯ’ｌ
ｒ含有する組成物は凍結乾燥に極めて敏感で弱く、ＧＰ
Ｏ活性は凍結乾燥の間、あるいは凍結乾燥後、相当低下
する。したがって、低濃度のＧＰＯ水溶液では長時間に
亘る品質の維持が困難である。このような理由からＧＰ
Ｏｉ用いる利点が失われる場合が多い。
本発明者等はこのような欠点金石し々い安定なＧＰＯ含
有絹成物ケ得るべく、種々鋭意検討した結果、安定化剤
として、アルブミン、糖類とアミノ酸、アルブミンと糖
類、ｔｆｃはアルブミンとアミノ酸を使用すると所期の
目的全達成するＯとを見出し、本発明に到達した。すな
わち本発明は（１）アルブミン又は（１１）糖類とアミ
ノ酸または（曲糖類およびアミノ酸からなる群から選択
され’ｆｒ−１ｍ １ ｆｃは２種以上の化合物とアル
ブミンおよび（＋Ｖ）Ｇ Ｐ Ｏを含有する水性組成物
葦たはその凍結乾燥物からなる安定化されたグリ七日リ
ン酸オキシダーゼ組放物である。
有絹成物ケ得るべく、種々鋭意検討した結果、安定化剤
として、アルブミン、糖類とアミノ酸、アルブミンと糖
類、ｔｆｃはアルブミンとアミノ酸を使用すると所期の
目的全達成するＯとを見出し、本発明に到達した。すな
わち本発明は（１）アルブミン又は（１１）糖類とアミ
ノ酸または（曲糖類およびアミノ酸からなる群から選択
され’ｆｒ−１ｍ １ ｆｃは２種以上の化合物とアル
ブミンおよび（＋Ｖ）Ｇ Ｐ Ｏを含有する水性組成物
葦たはその凍結乾燥物からなる安定化されたグリ七日リ
ン酸オキシダーゼ組放物である。
本発明では、上記安定剤全使用することにより、低濃度
の水溶液においても、あるいは凍結乾燥によってもＧＰ
Ｏの活性低下が見られない。さらに、安定化効果は長期
間に亘って、持続することができる。
の水溶液においても、あるいは凍結乾燥によってもＧＰ
Ｏの活性低下が見られない。さらに、安定化効果は長期
間に亘って、持続することができる。
本発明において使用する糖類としてはブドウ糖、ソルビ
トール、マンニトールがどの単糖類、乳糖、シボ糖など
の三糖類、可溶性デンプンなどの多糖類が添げられ、好
葦しぐは単糖類または三糖類である。
トール、マンニトールがどの単糖類、乳糖、シボ糖など
の三糖類、可溶性デンプンなどの多糖類が添げられ、好
葦しぐは単糖類または三糖類である。
アルブミンとしてはヒト血清アルブミン、ウマ血清アル
ブミン、ウシ血清アルブミン、羊血清アルブミンなどの
血清アルブミンが挙げられ、好壕しくはウシ血清アルブ
ミンである。
ブミン、ウシ血清アルブミン、羊血清アルブミンなどの
血清アルブミンが挙げられ、好壕しくはウシ血清アルブ
ミンである。
アミノ酸としてはグリシン、アラニン、リジン、アルギ
ニン、トリプトファン、ロイシン、イソロイシン々どか
ある。
ニン、トリプトファン、ロイシン、イソロイシン々どか
ある。
本発明の水性組成物は緩衝液にＧＰＯと（１）アルブミ
ン又は（１１）糖類とアミノ酸又は（ｔｉｌｌ糖類およ
びアミノ酸からなる群から選択さ九た１種又は２種以上
の化合物とアルブミンを含有させたものである。
ン又は（１１）糖類とアミノ酸又は（ｔｉｌｌ糖類およ
びアミノ酸からなる群から選択さ九た１種又は２種以上
の化合物とアルブミンを含有させたものである。
緩衝剤どして（は通常のものが使用され、該水性組成物
の１）Ｈ’ｒ通常５〜１０とするものが好ましい。
の１）Ｈ’ｒ通常５〜１０とするものが好ましい。
本発明の水性組成物には必要により、他の成分全添加し
てもよい。
てもよい。
本発明の水性組成物において、糖類の含有量は通常、該
水性組成物１ｍ７！当り １００ＸＩＯ−’ 〜５０Ｘ
１０−”？である。アルブミンの含有量は通常、該水性
組成物１−当り、１×１０″ａ〜１００×１Ｏ−３ｆテ
アル。アミノ酸の含有量は通常、該水性組成物１−当り
、１００ＸＩＯ”〜１００ｘ１０−”ｒである。
水性組成物１ｍ７！当り １００ＸＩＯ−’ 〜５０Ｘ
１０−”？である。アルブミンの含有量は通常、該水性
組成物１−当り、１×１０″ａ〜１００×１Ｏ−３ｆテ
アル。アミノ酸の含有量は通常、該水性組成物１−当り
、１００ＸＩＯ”〜１００ｘ１０−”ｒである。
安定化剤としては上記化合物のうち、２種以上を用いる
ことが好摩しく、特にアルブミンと糖類またはアミノ酸
との併用が好ましい。
ことが好摩しく、特にアルブミンと糖類またはアミノ酸
との併用が好ましい。
糖類、アルブミン、アミノ酸をそれぞれ併用する場合、
含有量は各々の含有量の和となる量でよいＯ 水性組成物を調製する場合、緩衝液への各物質の添加順
序は特に制限されない。
含有量は各々の含有量の和となる量でよいＯ 水性組成物を調製する場合、緩衝液への各物質の添加順
序は特に制限されない。
本発明の水性組成物は通常の方法に従い、凍結乾燥して
凍結乾燥物を得る。
凍結乾燥物を得る。
本発明では溶液状態（水性組成物）である場合にも、凍
結乾燥状態（凍結乾燥物）である場合にも、ＧＰＯの安
定性は著しく高く、長期間に亘って安定性が維持される
。
結乾燥状態（凍結乾燥物）である場合にも、ＧＰＯの安
定性は著しく高く、長期間に亘って安定性が維持される
。
次に本発明全実施列により説明する。
なおＧＰＯの酵素活性の測定は次の方法に従った。０．
２ Ｍ トリス塩酸緩衝液（ｐＨ８，０） ０．２ ｍ
ｌ、パーオキシダーゼ（３４０単位／ ｍｌ ） ０．
１ ｍｌ！、 ４−アミノアンチピリン（０，３％水１
１ｉＷ−） ０．１ ｍｔ。
２ Ｍ トリス塩酸緩衝液（ｐＨ８，０） ０．２ ｍ
ｌ、パーオキシダーゼ（３４０単位／ ｍｌ ） ０．
１ ｍｌ！、 ４−アミノアンチピリン（０，３％水１
１ｉＷ−） ０．１ ｍｔ。
フェノール（０，２％水溶液） ０．１ ｍｅ、グリセ
ロール−３−リン酸（０，５ＭｐＨ８，０） ０．２７
！、トリトンＸ−１００（０，５％水溶液）０．１ｍ７
！および水０．２−を混合（７，３７℃で５分間加温し
た後、２０（ｔＬの酵素溶解液中加え、３７℃で１０分
間加温した。次いで１％ラウリルベンゼンスルホン酸ソ
ーダ水溶液０．５ゴを加えて反応全停止はせ、さらに水
］。５ｍｅｆ加えて５００ｎｍ の吸光度を測定した。
ロール−３−リン酸（０，５ＭｐＨ８，０） ０．２７
！、トリトンＸ−１００（０，５％水溶液）０．１ｍ７
！および水０．２−を混合（７，３７℃で５分間加温し
た後、２０（ｔＬの酵素溶解液中加え、３７℃で１０分
間加温した。次いで１％ラウリルベンゼンスルホン酸ソ
ーダ水溶液０．５ゴを加えて反応全停止はせ、さらに水
］。５ｍｅｆ加えて５００ｎｍ の吸光度を測定した。
）
Ｘ：酵素溶解液中の酵素濃度
ΔＡ：Ａｓ−Ａｃ
Ａｓ：酵素溶解液を用いたときの吸光度Ａｃ；酵素溶解
液に代えて水を用いたときの吸光度 実施例 １゜ ＧＰＯを０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）に溶解
した。溶液中のＧＰＯａ度は０．０３ ＩＩり／７であ
った。下記表の添加ｖ／Ｊを該溶液に加え、４℃にて４
週間、さらに２５℃にて１週間保存し、安定性を検討し
た。その結果を第１表お・よび第２衣に示す。溶液調製
直後の酵素活性’ｅｌｏｏ％とした。
液に代えて水を用いたときの吸光度 実施例 １゜ ＧＰＯを０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）に溶解
した。溶液中のＧＰＯａ度は０．０３ ＩＩり／７であ
った。下記表の添加ｖ／Ｊを該溶液に加え、４℃にて４
週間、さらに２５℃にて１週間保存し、安定性を検討し
た。その結果を第１表お・よび第２衣に示す。溶液調製
直後の酵素活性’ｅｌｏｏ％とした。
（１）４℃、４週間
第 １ 表
（２）２５℃、１週間
第 ２ 表
（１）、（２）のいずれの保存においても、本発明の安
定剤を添加した場合、ＧＰＯの安定性が著しく向上した
。
定剤を添加した場合、ＧＰＯの安定性が著しく向上した
。
実施例 ２゜
ＧＰＯを０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）に溶解
した。溶液中のＧＰＯの濃度は０．５ｍｇ／−であった
。下記表の添加物を該溶液に加え、凍結乾燥し、安定性
を検討した。その結果を第３表に示す。溶液調製直後の
酵素活性全１００％とした。
した。溶液中のＧＰＯの濃度は０．５ｍｇ／−であった
。下記表の添加物を該溶液に加え、凍結乾燥し、安定性
を検討した。その結果を第３表に示す。溶液調製直後の
酵素活性全１００％とした。
以下余白
第 ３ 表
上記表のごとく、本発明の安定剤を添加して凍結乾燥し
た場合、無添加に比較して著しく失活が少なく、糖類、
アミノ酸単独の場合よりも失活が少ない。
た場合、無添加に比較して著しく失活が少なく、糖類、
アミノ酸単独の場合よりも失活が少ない。
実施例 ３゜
下記表の添加物を加えたＧＰＯ溶液を凍結乾燥した凍結
乾燥品の、４０℃、１週間での安定性を検討した。その
結果を第４表に示す。溶液調製直後の酵素活性全１００
％とした。
乾燥品の、４０℃、１週間での安定性を検討した。その
結果を第４表に示す。溶液調製直後の酵素活性全１００
％とした。
第４表
本発明の安定剤を添加した凍結乾燥品は無添加に比べ著
しく安定化され、糖類またけアミノ酸単独に比べ安定性
が優れる。
しく安定化され、糖類またけアミノ酸単独に比べ安定性
が優れる。
特許出願人 東洋紡績株式会社
Claims (1)
- （１）アルブミンまたけ（ＩＩ）糖類とアミノ酸筐たは
（１１ｂ糖類およびアミノ酸からなる群から選択された
１種または２種以上の化合物とアルブミンおよび（１い
グリセロリン酸オキシダーゼを含有する水性組成物また
はその凍結乾燥物からなる安定化されたグリセロリン酸
オキシダーゼ組成物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25817184A JPS60156386A (ja) | 1984-12-05 | 1984-12-05 | 安定化されたグリセロリン酸オキシダ−ゼ組成物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25817184A JPS60156386A (ja) | 1984-12-05 | 1984-12-05 | 安定化されたグリセロリン酸オキシダ−ゼ組成物 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14588180A Division JPS5768788A (en) | 1980-10-17 | 1980-10-17 | Stablized glycerophosphate oxidase composition |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60156386A true JPS60156386A (ja) | 1985-08-16 |
Family
ID=17316509
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP25817184A Pending JPS60156386A (ja) | 1984-12-05 | 1984-12-05 | 安定化されたグリセロリン酸オキシダ−ゼ組成物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60156386A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5116729A (en) * | 1989-03-10 | 1992-05-26 | Miles Inc. | Stabilization of oxidase enzyme-based test strips |
| US5185247A (en) * | 1989-03-10 | 1993-02-09 | Miles Inc. | Stabilization of oxidase enzyme-based test strips |
| JPH1084954A (ja) * | 1996-07-25 | 1998-04-07 | Rikagaku Kenkyusho | 酵素を熱活性化する方法 |
| JP2005176834A (ja) * | 2003-11-28 | 2005-07-07 | Sysmex Corp | コレステロール脱水素酵素の安定化方法、コレステロール脱水素酵素含有組成物及びコレステロール測定試薬 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5534001A (en) * | 1978-08-28 | 1980-03-10 | Noda Sangyo Kagaku Kenkyusho | Stabilization of sarcosine oxidase |
-
1984
- 1984-12-05 JP JP25817184A patent/JPS60156386A/ja active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5534001A (en) * | 1978-08-28 | 1980-03-10 | Noda Sangyo Kagaku Kenkyusho | Stabilization of sarcosine oxidase |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5116729A (en) * | 1989-03-10 | 1992-05-26 | Miles Inc. | Stabilization of oxidase enzyme-based test strips |
| US5185247A (en) * | 1989-03-10 | 1993-02-09 | Miles Inc. | Stabilization of oxidase enzyme-based test strips |
| JPH1084954A (ja) * | 1996-07-25 | 1998-04-07 | Rikagaku Kenkyusho | 酵素を熱活性化する方法 |
| JP2005176834A (ja) * | 2003-11-28 | 2005-07-07 | Sysmex Corp | コレステロール脱水素酵素の安定化方法、コレステロール脱水素酵素含有組成物及びコレステロール測定試薬 |
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