JPS5988095A - 発酵法によるｌ−リジンの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は発酵法によるし一リジンの製造法に関する。さ
らに詳しくは２本発明はコリネバクテラリム属およびブ
レビバクテリウム属に属する微生物の同一菌種または異
菌種間のプロトプラスト融合によって得られた微生物で
、かつ抗生物質抵抗性およびピリミジンアナログ抵抗性
を有するＬ−リジン生産株を栄養培地に培養し、培養物
中に１゜−リジンを生成蓄積せしめ、該培養物からし一
リジンを採取することを特徴とする発酵法によるし一リ
ジンの製造法に関する。

本発明の目的とするところは、飼料、飼料添加物１食品
添加物、医薬品の原料、その他広い使途を有するし一リ
ジンの工業的に安価な製造法を提供するにある。

従来１発酵法によるし一リジンの製造法に関しては、コ
リネバクテリウム属、ブレビバクテリウム属、アースロ
バフタ−属、シュードモナス属。

バチルス属、ノカルディア属、サツカロマイセス属、エ
シェリヒア属、タレブシエラ属、ストレプトミセス属、
アルカリ土類金属、ミクロバクテリウム属、アクロモバ
クタ−属、セラチア属に属する微生物の各種栄養要求性
株や、各種薬剤感受性株、薬剤耐性株を用いる方法、あ
るいはこれらの組合せの性質を有する突然変異株を用い
る方法などが知られている。

本発明者らは、プロトプラスト融合株を用いることによ
り、Ｌ−リジンの生産性が改善される方法を見い出し、
すでに特許出願している（特願昭５６−１８２０９５）
。

さらに、該方法の改良法として１本発明者らはプロトプ
ラスト融合株で抗生物質およびピリミジンアナログ抵抗
性を有するし一リジン生産株がさらに著量のＬ−リジン
を製造することを見い出し本発明を完成した。

以下に１本発明の詳細な説明する。

本発明の微生物としては、異なる性質を有するコリネバ
クテリウム属およびプレビバクテリウノ・属の親株の組
合せのプロトプラスト融合から生した抗生物質抵抗性お
よびピリミジンアナログ抵抗性を有するし一リジン生産
菌株があげられる。

抗生物質抵抗性としては、たはえばペニシリン類９　セ
ファロスポリン類、ストレプトマイシン。

ジヒドロストレプトマイシン、リファンピシン。

クロラムフェニコール、テトラサイクリン類、スピラマ
イシン、エリスロマイシン、カナマイシン。

カスガマイレン。マイトマイシンＣ，アクチノマイシン
Ｄ、ポリミキシン、コリスヂン、リンコマイシン、ゲン
タマイシン、ツガミシン。フォーティミシン、オレアン
ドマイシンなどに対する抵抗性があげられる。

また、ピリミジンアナログ抵抗性としては、たとえば５
−ブロモウラシル、６−アザウラシル。

５−フロロウラシル、５−ブロモ−２−デオキシウリジ
ン、２−チオウラシル、６−メチル−２＝チオウラシル
、アミセチンなどに対する抵抗性があげられる。

具体的な菌株の例としては、コリネバクテリウム・グル
タミクムＨ−３１２２（ロイシン要求性。

（３） チアリジン抵抗性、サルファメサジン抵抗性、リファン
ピシン抵抗性、ストレプトマイシン感受性。

２−チアゾールアラニン感受性）（微工研条寄第１５０
号）とコリネバクテリウム・グルタミクムＨ−３１１９
（ロイシン非要求性、チアリジン抵抗性、サルファメサ
ジン感受性、リファンピシン感受性、ストレプトマイシ
ン抵抗性、２−チアゾールアラニン抵抗性）（微工研条
寄第１４９号）とのプロトプラスト融合株コリネバクテ
リウム・グルタミクムＨ−３０５５（ロイシン非要求性
、チアリジン抵抗性、サルファメサジン感受性、リファ
ンピシン抵抗性、ストレプトマイシン抵抗性１２−チア
ゾールアラニン感受性）（微工研条寄第１４７号）を親
株として、この親株から誘導された６−アザウラシル抵
抗性株、コリネバクテリウム・グルタミクムＨ−３１４
９（微工研条寄第１５８号）があげられる。

次にＨ−３１４９株の取得例を以下に示す。

Ｈ−３０５５株を親株として、この株を０．ＩＮトリス
マレイン酸緩衝液（ｐＨ６，０）中に１０日ｃａｌｌｓ
／ｍｌの濃度に懸濁した。この懸濁液にＮ−メチルーＮ
′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンを最終濃度が０．
２■／ｍｌになるように添加した。

ついで、室温で３０分間静置した後、該液を６−（４） アザウラシル１■／ｍｌを含むブイヨン寒天平板培地に
塗抹した。該培地を３０℃で２〜１０日間保温した後、
培地に生育するコロニーの中から選択された変異株とし
てコリネバクテリウム・グルタミクムＨ−３１４９を得
た。第１表にＨ−３０５５とＨ−３１４９の６−アザウ
ラシルに対する感受性を示す。

第　　１　　表 （什：充分な生育、＋：成る程度の生育、−：生育せず
）本発明に使用する培地組成としては使用菌株の利用し
うる炭素源、無機物その他の必要な栄＃累を程良く含有
するものであれば合成培地、天然培地のいずれも使用で
きる。

すなわち炭素源としてはグルコース、フラクトース、ソ
ルビトール、グリセロール、蔗糖、でん粉、でん粉加水
分解物、糖蜜、果汁などの各種炭水化物、酢酸、フマー
ル酸、乳酸などの有ａ酸。

さらにエタノール、メタノールなどのアルコール類も使
用できる。

窒素源としては，アンモニア、塩化アンモニウム、硫酸
アンモニウム、酢酸アンモニウム、リン酸アンモニウム
などの各種無機酸や有機酸のアンモニウム塩，尿素，ア
ミン類，その信金窒素化合物，ならびにペプトン、肉エ
キス、酵母エキス。

コーン・スチープ・リカー、カゼイン加水分解物。

大豆粕酸加水分解物，各種発酵菌体およびその消化物な
どが使用できる。

さらに無機物としては，リン酸第−カリウム。

リン酸第二カリウム．リン酸マグネシウム、硫酸マグネ
シウム、塩化ナトリウム、硫酸第一鉄，硫酸マンガン、
硫酸銅．炭酸カルシウムなどを使用する。勿論本発明に
使用する微生物が生育のために特定の栄養素を必要とす
る場合には，その栄養素を適当量培地中に存在させなけ
ればならないが。

これらの物質は窒素源として例示した天然物に含まれて
添加される場合がある。

また培地中に各種の添加物，例えば各種抗生物質，α−
アミノ酪酸，システィン、ロイシン、ロイシン発酵液あ
るいはアスパラギン酸，グルタミン酸などを添加するこ
とによりＬ−リジン生産量を増加させうる場合がある。

培養は振盪培養あるいは深部通気攪拌培養などの好気的
条件下で行う。培養温度は通常２０〜４０℃の範囲で、
培地のｐＨは３〜９の範囲で、好ましくは中性付近に保
持することが望ましいが、これ以外の条件下でも使用菌
株が生育すれば実施できる。培地のｐ　Ｈ調節は、炭酸
カルシウム、酸、あるいはアルカリ溶液、アンモニア、
ｐｒ−＋緩衝剤などによって行う。培養期間は通常１〜
６日間で培養液中にＬ−リジンが生成蓄積する。

培養終了後、培養液から菌体などの沈殿物を除去し、公
知のイオン交換処理法、濃縮法、吸着法。

塩析法などを併用することにより、培養液から１−一リ
ジンを回収することができる。

以下に実施例を示す。

実施例１゜ 種菌としてコリネバクテリウム・グルタミクムＨ−３１
’４９（微工研条寄第１５８号）を使用した。

この菌株をグルコース４０ｇ　／　１　、尿素３ｇ／ｊ
！。

ＫＨ２ＰＯ４１，５ｇ／ｊ！、に２ＨＰ○４　０．５ｇ
／β、ＭｇＳＯ４・７　Ｈ２００，５ｇ　／　ＩＩ　、
ビオチン５０μ ５ｇ／ｊ！からなる種培地（ｐＨ７．２）２０ｍｌを含
む３００ｍ１容三角フラスコに接種し，３０℃で２４時
間培養した。この培養液２ｍｌを廃糖蜜１００ｇ／ＩＩ
　（グルコース換舅）、硫安４０ｇ／Ｉ！．ＫＨ２（７
） ＰＯ４　　０．５ｇ　、Ｍｇ　ＳＯ４　　０．５ｇ，　
　Ｃａ　Ｃｏ　３　　３０ｇ／Ｉ！からなる発酵培地（
ｐ　Ｉ４７．２）　２　（１ｍｌを含む３００ｍ１容三
角フラスコに接種し，３２℃で３日間振盪培＃（２２Ｏ
ｒｐｍ＞を行った。このとき培養液中にＬ　−　リジン
・塩酸塩が４３ｇ／β蓄積した。対照として，同一の条
件で同時に培養した親株のＨ−３０５５のし一リジン塩
酸塩の生成量は４１ｇ／Ａであった◇ 特許出願人（１０２）協和醗酵工業株式会社（８）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 コリネバクテリウム属およびブレビバクテリウム属に属
   する微生物の同一菌種または異菌種間のプロトプラスト
   融合によって得られた微生物で。 かつ抗生物質抵抗性およびピリミジンアナログ抵抗性を
   有するし一リジン生産株を栄養培地に培養し、培養物中
   に■、−リジンを生成蓄積せしめ、該培養物からし一リ
   ジンを採取することを特徴とする発酵法によるＬ−リジ
   ンの製造法。