JPS5984163A - 免疫分析方法 - Google Patents
免疫分析方法Info
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- JPS5984163A JPS5984163A JP19511782A JP19511782A JPS5984163A JP S5984163 A JPS5984163 A JP S5984163A JP 19511782 A JP19511782 A JP 19511782A JP 19511782 A JP19511782 A JP 19511782A JP S5984163 A JPS5984163 A JP S5984163A
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-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔発明の技術分野〕
この発明は、試料中の特定の抗原または抗体な定量分析
するための免疫分析方法（二関する。
するための免疫分析方法（二関する。
従来の免疫分析方法として、たとえば、ラジオアイソト
ープで標識した抗体（または抗原）と生体より採取した
試料中の抗原（または抗体）との抗原抗体反応を利用し
て試料中の特定の抗原（または抗体）を定量分析するラ
ジオイムノアッセイ法や、酵素で４１μ識した抗体（ま
たは抗原）と生体より採取した試料中の抗ＪＬＪ、（ま
たは抗体）との抗原抗体反応により抗原抗体結合物を得
、その抗原抗体結合物に標識した酵素（二よる酵素反応
を利用して試料中の特定の抗原（または抗体）を定量分
析するエンザイムイムノアッセイ法等がある。
ープで標識した抗体（または抗原）と生体より採取した
試料中の抗原（または抗体）との抗原抗体反応を利用し
て試料中の特定の抗原（または抗体）を定量分析するラ
ジオイムノアッセイ法や、酵素で４１μ識した抗体（ま
たは抗原）と生体より採取した試料中の抗ＪＬＪ、（ま
たは抗体）との抗原抗体反応により抗原抗体結合物を得
、その抗原抗体結合物に標識した酵素（二よる酵素反応
を利用して試料中の特定の抗原（または抗体）を定量分
析するエンザイムイムノアッセイ法等がある。
しかしながら、前記ラジオイムノアッセイ法は、放射性
物外を利用するので設備が大がかりになるという欠点が
あり、まｋ、ラジオイムノアッセイ法およびエンザイム
イムノアッセイ法のいずれにおいても、十分な検出感度
に達するまでには数時間から数十時間を要して分析に長
時間を要するという欠点がある。
物外を利用するので設備が大がかりになるという欠点が
あり、まｋ、ラジオイムノアッセイ法およびエンザイム
イムノアッセイ法のいずれにおいても、十分な検出感度
に達するまでには数時間から数十時間を要して分析に長
時間を要するという欠点がある。
この発明は前記事情に無みてなされたものであり、極め
て短い分析時間で試料中の抗原や抗体を分析することの
できる免疫分析用試薬を用いた免疫分析方法を提供する
ことを目的とするものである。
て短い分析時間で試料中の抗原や抗体を分析することの
できる免疫分析用試薬を用いた免疫分析方法を提供する
ことを目的とするものである。
［発明の概要〕
前ｉビ目的を達成するだめのこの発明の概要は、袖体活
性Ｃ二より細胞溶解作用を受ける細胞、膜（二抗原また
は抗体を結合する細胞と７１ｈ体とを少なくとも含有す
る試薬と、前記抗原または抗体と抗原抗体反応を生ずる
抗体または抗屏、を有する試料とを混合し、生ずる抗原
抗体反応（二より活性化さＪまた補体の細胞溶解作用（
二よる細胞の破壊により放出された細胞内容物を含有す
る反応液を遠心分離し、固形分を除去した液を比色分析
することによって、試料中の抗原または抗体を９爺する
ことを性徴とするものである。
性Ｃ二より細胞溶解作用を受ける細胞、膜（二抗原また
は抗体を結合する細胞と７１ｈ体とを少なくとも含有す
る試薬と、前記抗原または抗体と抗原抗体反応を生ずる
抗体または抗屏、を有する試料とを混合し、生ずる抗原
抗体反応（二より活性化さＪまた補体の細胞溶解作用（
二よる細胞の破壊により放出された細胞内容物を含有す
る反応液を遠心分離し、固形分を除去した液を比色分析
することによって、試料中の抗原または抗体を９爺する
ことを性徴とするものである。
この発明（１係る方法における試薬は、袖体活性により
溶解作用を受ける細胞膜（＝抗原または抗体を結合する
細胞を含有する液である。
溶解作用を受ける細胞膜（＝抗原または抗体を結合する
細胞を含有する液である。
抗体（または抗原）を結合することのできる細胞として
は、１１１物たとえば羊の赤血球を好治に用いることが
できる。羊の赤血球は、その細胞膜に結合する抗体（ま
たは抗原）の耐抗性が小さいので、遠択性の大きい人工
膜たとえばリポゾームよりもはるかに優れている。なお
、他の動物の赤血体あるいは歩積１球以外の動物細胞で
あっても、細胞膜。二抗体（または抗原）を結合ず鼠こ
とができれば、この発明における細胞として（ｃ １４
４することができる。
は、１１１物たとえば羊の赤血球を好治に用いることが
できる。羊の赤血球は、その細胞膜に結合する抗体（ま
たは抗原）の耐抗性が小さいので、遠択性の大きい人工
膜たとえばリポゾームよりもはるかに優れている。なお
、他の動物の赤血体あるいは歩積１球以外の動物細胞で
あっても、細胞膜。二抗体（または抗原）を結合ず鼠こ
とができれば、この発明における細胞として（ｃ １４
４することができる。
細胞膜に結合する抗体（または抗原）は、試料中の抗原
（または抗体）と特異７．［抗原抗体反応を惹起するも
のが適宜に選ばれる。たとえば、試料中の抗ＩＰＡがα
−フェトプロティンであるときは、α−７エトフロテイ
ン抗体が挙げられる。
（または抗体）と特異７．［抗原抗体反応を惹起するも
のが適宜に選ばれる。たとえば、試料中の抗ＩＰＡがα
−フェトプロティンであるときは、α−７エトフロテイ
ン抗体が挙げられる。
細胞内には、通常、細胞質たとえばヘモグロビ（二、細
胞内に細胞内容物として酵素または基質を刺入しておい
てもよい。というのは、後述のように、細＆！、ｔｓを
溶解することにより放出した酵素または基質ととれに対
応する基質または酵素とで酵素反応を進行させ、得られ
る酵素反応生成物を含イ１する液の比色９資を行なうこ
と（二より、この発明の目的を達成することができるか
らである。したがって、内部に酵素または基質を封入し
た細胞を用いるときには、試薬には、前記細胞のはか（
二、１１・素反応の回部な基質またはｉ！ｖ、素を含め
ておくことを要する。
胞内に細胞内容物として酵素または基質を刺入しておい
てもよい。というのは、後述のように、細＆！、ｔｓを
溶解することにより放出した酵素または基質ととれに対
応する基質または酵素とで酵素反応を進行させ、得られ
る酵素反応生成物を含イ１する液の比色９資を行なうこ
と（二より、この発明の目的を達成することができるか
らである。したがって、内部に酵素または基質を封入し
た細胞を用いるときには、試薬には、前記細胞のはか（
二、１１・素反応の回部な基質またはｉ！ｖ、素を含め
ておくことを要する。
細胞内に収容する酵素は、たとえば酌゛化酵素たとえは
グルコースオキシグー七、ウリカーゼ、グリセロールオ
キシターゼ、およびコレステロールオキシタ゛−ゼ、脱
水素酵素たとえば乳酸脱水素ロン素、ブドウ糖脱水素酵
素およびクルタミン酸脱水素酵素、脱炭酸酵素たとえば
グルタメートデカルボキシターセ、ウレアーゼおよびビ
ルベートデカルボキシターゼ、加水分解酵素たとえはア
スパルターゼ、アテノシンデアミナーゼ、ヌクレオシダ
ーゼ、クレアチン・アミジノヒドラーゼ、アルカリホス
ファターゼおよび酸性ホスホター七、転移酵素たとえば
ピルビン酌キナーゼ、クレアチンキナーゼおよびアスパ
ラギン酷アミノトランスフェラーゼ、異性化酵素たとえ
ばグルタミン酸ラセマーゼおよびアラニンラセマーゼ、
あるいは前記各種の酵素を混合したものが挙げられる。
グルコースオキシグー七、ウリカーゼ、グリセロールオ
キシターゼ、およびコレステロールオキシタ゛−ゼ、脱
水素酵素たとえば乳酸脱水素ロン素、ブドウ糖脱水素酵
素およびクルタミン酸脱水素酵素、脱炭酸酵素たとえば
グルタメートデカルボキシターセ、ウレアーゼおよびビ
ルベートデカルボキシターゼ、加水分解酵素たとえはア
スパルターゼ、アテノシンデアミナーゼ、ヌクレオシダ
ーゼ、クレアチン・アミジノヒドラーゼ、アルカリホス
ファターゼおよび酸性ホスホター七、転移酵素たとえば
ピルビン酌キナーゼ、クレアチンキナーゼおよびアスパ
ラギン酷アミノトランスフェラーゼ、異性化酵素たとえ
ばグルタミン酸ラセマーゼおよびアラニンラセマーゼ、
あるいは前記各種の酵素を混合したものが挙げられる。
また、細胞内番＝酵素を収容する態様として、そのよう
な酵素を含有する微生物を細胞内（＝収容するものであ
ってもよい。細胞内に前記酵素を収容するかわりに前記
した各種の酵素と特異的（二反応する基質な収容しても
よい。ただし、酵素を収容した細胞を有する免疫分析用
試薬を長期間（二わたって保存しておくと、酵素が失活
してしまうことがあるので、細胞内に収容するのは酵素
よりも基ηであるのが好ましい。
な酵素を含有する微生物を細胞内（＝収容するものであ
ってもよい。細胞内に前記酵素を収容するかわりに前記
した各種の酵素と特異的（二反応する基質な収容しても
よい。ただし、酵素を収容した細胞を有する免疫分析用
試薬を長期間（二わたって保存しておくと、酵素が失活
してしまうことがあるので、細胞内に収容するのは酵素
よりも基ηであるのが好ましい。
Ｉ（１１胞内に収容する酵素（または基’ｔ＋ ＞の邦
としては、細胞Ｊｌｋｔ二結合する抗体（または抗原）
と反応する抗原（または抗体） ｔ １ｎ ｔ／ｍｔ〜
１μｆ／ｍｅＣ′″一対し十分に過剰な卸たとえば１１
・素活件［ｉ、 ｌ二換算し５て１００Ｕ／ｍｅ以上、
☆イ・ましくは５００ Ｕ／ｍ１−１０００Ｕ／ｒｄで
ある。このようＣ二抗体（または抗原）量（二対して細
胞内の酵素（または基質）量が大過剰であるので、この
発明の免疫分相用試薬を用いた免役分析測定を短詩ＩＬ
Ｉのうちに行なうことができる。
としては、細胞Ｊｌｋｔ二結合する抗体（または抗原）
と反応する抗原（または抗体） ｔ １ｎ ｔ／ｍｔ〜
１μｆ／ｍｅＣ′″一対し十分に過剰な卸たとえば１１
・素活件［ｉ、 ｌ二換算し５て１００Ｕ／ｍｅ以上、
☆イ・ましくは５００ Ｕ／ｍ１−１０００Ｕ／ｒｄで
ある。このようＣ二抗体（または抗原）量（二対して細
胞内の酵素（または基質）量が大過剰であるので、この
発明の免疫分相用試薬を用いた免役分析測定を短詩ＩＬ
Ｉのうちに行なうことができる。
細胞たとえば羊の赤血球の細ＩＩｉ！ ＪｌｉΔに抗体
たとえはα−フェトプロティン抗体を結合し、赤血球内
に酵素たとえばグルコースオキシダーゼを収納した細胞
の調製は、たとえは次のようにして行なうことができる
。
たとえはα−フェトプロティン抗体を結合し、赤血球内
に酵素たとえばグルコースオキシダーゼを収納した細胞
の調製は、たとえは次のようにして行なうことができる
。
先ず、動物たとえばウザギ、ヤギ、マウス、ラット等（
二α−フェトプロティンをたとえ番゛よ皮下注射すると
、これらｉｌｒ物の感作（二より動物体内でσ−フェト
プロティン抗体が産生する。皮下注射後１週間程経溝し
てから、その動物より所定鼠のｘ（ｒ＋液を採取し、得
られた拍【液の土澄み液を分離すること（二より、ａ−
フェトプロティン抗体を櫓する抗血清を得る。なお、抗
原抗体反応のｑｊｒ異性を向上させるためじ、前記抗仙
消をさらに和製し１もよい。−力、他の動物たとえばヒ
ツジから所定侶の血液を採取してこ」１を精製し、等張
ｎ（たとえをま０．１５Ｍの濃度の地を含有する緩衝液
（、Ｈ７）と混合すること（二より赤血球をサスペンド
した等張液を祷る。次いで、ヒツジの赤血球をサスペン
ドした等供液と前記のα−フェトプロティン抗体を有す
る抗血７１１スとを混合すると、ヒツジの赤Ｊｆｎ球の
細胞膜上（二σ−〕ニドプロティン抗体が吸着され、α
−７エトフロテイン抗体を細胞膜じ結合する赤血球を壱
する等張沼こが得られる。この等張渡中にサスペンドし
た赤、ＩｆＩ１球中にｉｉ、 ＊ａ Ｈｚ液、ミトコン
ドリア等が含まれているので、′帛法である透析法によ
って赤血球内から細胞液等を排出して赤崩球内Ｃ二酵素
であるグルコースオキシダーゼを収容する。
二α−フェトプロティンをたとえ番゛よ皮下注射すると
、これらｉｌｒ物の感作（二より動物体内でσ−フェト
プロティン抗体が産生する。皮下注射後１週間程経溝し
てから、その動物より所定鼠のｘ（ｒ＋液を採取し、得
られた拍【液の土澄み液を分離すること（二より、ａ−
フェトプロティン抗体を櫓する抗血清を得る。なお、抗
原抗体反応のｑｊｒ異性を向上させるためじ、前記抗仙
消をさらに和製し１もよい。−力、他の動物たとえばヒ
ツジから所定侶の血液を採取してこ」１を精製し、等張
ｎ（たとえをま０．１５Ｍの濃度の地を含有する緩衝液
（、Ｈ７）と混合すること（二より赤血球をサスペンド
した等張液を祷る。次いで、ヒツジの赤血球をサスペン
ドした等供液と前記のα−フェトプロティン抗体を有す
る抗血７１１スとを混合すると、ヒツジの赤Ｊｆｎ球の
細胞膜上（二σ−〕ニドプロティン抗体が吸着され、α
−７エトフロテイン抗体を細胞膜じ結合する赤血球を壱
する等張沼こが得られる。この等張渡中にサスペンドし
た赤、ＩｆＩ１球中にｉｉ、 ＊ａ Ｈｚ液、ミトコン
ドリア等が含まれているので、′帛法である透析法によ
って赤血球内から細胞液等を排出して赤崩球内Ｃ二酵素
であるグルコースオキシダーゼを収容する。
収容するグルコースオキシダーゼ量としては、全赤血球
（二つき５００〜１ｏｏｏＵ／ｙであるが、これに限る
ことはすく、後述する免疫分析測定法の必要（１応じて
適宜に決定することができる。
（二つき５００〜１ｏｏｏＵ／ｙであるが、これに限る
ことはすく、後述する免疫分析測定法の必要（１応じて
適宜に決定することができる。
試薬中の補体は、動物の血液中に含まれているものを使
用することができ、たとえばモルモットの血清を袖体含
有液としてそのまま使用することができる。
用することができ、たとえばモルモットの血清を袖体含
有液としてそのまま使用することができる。
試３４Ｆ５中の細胞内に酵素または基質を刺入した場合
、試薬中の紺、６成分としての基質（または酵素）は、
前Ｍ＋２ ＋１’ｌｌｌ胞中（＝収容された酵素（また
は基質）と／Ｒｒ異的に酵素反応をする前述の基質（ま
たは酵素）を使用することができる。、ｉ！ｉ！−ＪＲ
（または酵素）の知としては、１ＩＩＩ胞内に収容され
ている酵素（または基質）（二対応する量でよい。
、試薬中の紺、６成分としての基質（または酵素）は、
前Ｍ＋２ ＋１’ｌｌｌ胞中（＝収容された酵素（また
は基質）と／Ｒｒ異的に酵素反応をする前述の基質（ま
たは酵素）を使用することができる。、ｉ！ｉ！−ＪＲ
（または酵素）の知としては、１ＩＩＩ胞内に収容され
ている酵素（または基質）（二対応する量でよい。
この発明における試料は生体より採取したところの抗体
または抗原を有するものであり、たとえは患者より採取
した血液、尿、リンパ液等が挙げられる。
または抗原を有するものであり、たとえは患者より採取
した血液、尿、リンパ液等が挙げられる。
この発明においては、ＩＦｌｆｆｌｊ！試薬と前ＩＬｆ
試料とを混合することにより、第１図に示すように、前
記試薬中の細胞における抗体３または抗原と前記耘料中
の抗原４または抗体とで抗原抗体反応を進行させ、この
抗原抗体反応によりｎ１１記試薬中の補体５を活性化す
ることにより補体５の細胞溶解作用を発現し、これ（：
よって細胞１膜１を級壊し、細胞内より反応液中に計１
胞内容物２を放出させる。これら一連の過程は、通常の
反応容器内で行なうこともできるが、後述の遠心分離器
付き比色分析装置に装備されるところの、遠沈管の後能
をも有する反応セル内で行なうのが好ましい。前記反応
セルで前記一連の過程を行なうと、そのまま次の過程で
ある遠心分離、比色分析を行ＩＬうことかでき、通猟の
反応容器で前記一連の過程を行なった場合の、反応容器
から反応セルへの反応液の移しかえ作業を省略すること
ができるからである。
試料とを混合することにより、第１図に示すように、前
記試薬中の細胞における抗体３または抗原と前記耘料中
の抗原４または抗体とで抗原抗体反応を進行させ、この
抗原抗体反応によりｎ１１記試薬中の補体５を活性化す
ることにより補体５の細胞溶解作用を発現し、これ（：
よって細胞１膜１を級壊し、細胞内より反応液中に計１
胞内容物２を放出させる。これら一連の過程は、通常の
反応容器内で行なうこともできるが、後述の遠心分離器
付き比色分析装置に装備されるところの、遠沈管の後能
をも有する反応セル内で行なうのが好ましい。前記反応
セルで前記一連の過程を行なうと、そのまま次の過程で
ある遠心分離、比色分析を行ＩＬうことかでき、通猟の
反応容器で前記一連の過程を行なった場合の、反応容器
から反応セルへの反応液の移しかえ作業を省略すること
ができるからである。
遠心分離器付き比色分析装置につき、第２図を参照しな
がらその説明をする。
がらその説明をする。
第２図において、１５で示すのは駆動モータであり、そ
の回転軸（二、反応セル１４を回動自在（二保持するＴ
字型の保持部材１６が結合され、駆動モータ１５の停止
時（二は、保持部１６に反応セル１４がその開口部を上
方に向けて垂直に保持されており、駆動モータ１５を高
速回転たとえば２０００〜３０００ｒｐｍで回転させる
と反応セル１４がほぼ水平Ｃ二保持されて回転するよう
に、遠心分離器部が構成される。比色分析部は、光源８
、集光レンズ９，１０、光電変換素子たとえば］、１
）グよりの電気信号（二より吸光度を演算する演算部１
６および吸光度を表示する表示部１７とを有し、反応セ
ル１４を回転させてその姿勢を水平に維持したときに、
集光レンズ９よりの光ビームを反応セル１４内（二通過
させ、反応セル内の反応液の吸光度を？Ｉ′ｌｌｌ定す
ることができるよう（二構成されている。
の回転軸（二、反応セル１４を回動自在（二保持するＴ
字型の保持部材１６が結合され、駆動モータ１５の停止
時（二は、保持部１６に反応セル１４がその開口部を上
方に向けて垂直に保持されており、駆動モータ１５を高
速回転たとえば２０００〜３０００ｒｐｍで回転させる
と反応セル１４がほぼ水平Ｃ二保持されて回転するよう
に、遠心分離器部が構成される。比色分析部は、光源８
、集光レンズ９，１０、光電変換素子たとえば］、１
）グよりの電気信号（二より吸光度を演算する演算部１
６および吸光度を表示する表示部１７とを有し、反応セ
ル１４を回転させてその姿勢を水平に維持したときに、
集光レンズ９よりの光ビームを反応セル１４内（二通過
させ、反応セル内の反応液の吸光度を？Ｉ′ｌｌｌ定す
ることができるよう（二構成されている。
なお、吸光度測定時には、駆動モータ１５の回転数を約
７５０ｒｐｍｌ二するのが好ましい。
７５０ｒｐｍｌ二するのが好ましい。
次に、反応液中に細胞内容物を放出した反応液は、前記
遠心分離器付き比色測定装置内の反応セル１４に収容さ
れる。その後、駆動モータ１５の駆動）二より反応セル
１４を回転させると、第２図（二示すように、反応セル
１４の底部に反応液内の細胞膜や細胞膜が未破壊のまま
である細胞等の固形分が集約され、その結果反応セル１
４内の反応液は上澄＠７と固形分６とに分離される。こ
の場合前記試薬中の細胞の内部に、細胞質、ヘモグロビ
ン等のｌｆ４＋１胞内容物が存在するときには、前記透
上澄７は前記細胞内容物を含肩する。また、前記試薬中
の細胞の内部に酵素または基質を封入するときは、細胞
膜の破壊により放出された酵素または基質と、試薬中の
第３成分である基質または酵素と（二よる酵素反応の生
成物を、前記上澄型７中：二含有することとなる。
遠心分離器付き比色測定装置内の反応セル１４に収容さ
れる。その後、駆動モータ１５の駆動）二より反応セル
１４を回転させると、第２図（二示すように、反応セル
１４の底部に反応液内の細胞膜や細胞膜が未破壊のまま
である細胞等の固形分が集約され、その結果反応セル１
４内の反応液は上澄＠７と固形分６とに分離される。こ
の場合前記試薬中の細胞の内部に、細胞質、ヘモグロビ
ン等のｌｆ４＋１胞内容物が存在するときには、前記透
上澄７は前記細胞内容物を含肩する。また、前記試薬中
の細胞の内部に酵素または基質を封入するときは、細胞
膜の破壊により放出された酵素または基質と、試薬中の
第３成分である基質または酵素と（二よる酵素反応の生
成物を、前記上澄型７中：二含有することとなる。
次いで、駆動モータ１５の回転速度を低減し、たとえば
７５０ｒｐｍ程度の回転数で反応セル１４を回転させた
まま、反応セル１４内の上澄＾７に光ビームを照射し、
上ｆ＆７中の特定成分たとえばヘモグロビン、あるいは
酵素反応生成物につき、上澄ＷＬ７の吸光度を測定する
。この場合、上澄型７は、遠心分離操作により固形分を
全く含んでいないので、固形分による光散乱を除去する
ことができ、その結果、正確な吸光度測定を行なうこと
ができる。吸光度測定Ｃ二より、細胞内容物あるいは酵
素反応生成物を定量することができ、その定量により試
料中の抗体あるいは抗原の定量を行なうことができる。
７５０ｒｐｍ程度の回転数で反応セル１４を回転させた
まま、反応セル１４内の上澄＾７に光ビームを照射し、
上ｆ＆７中の特定成分たとえばヘモグロビン、あるいは
酵素反応生成物につき、上澄ＷＬ７の吸光度を測定する
。この場合、上澄型７は、遠心分離操作により固形分を
全く含んでいないので、固形分による光散乱を除去する
ことができ、その結果、正確な吸光度測定を行なうこと
ができる。吸光度測定Ｃ二より、細胞内容物あるいは酵
素反応生成物を定量することができ、その定量により試
料中の抗体あるいは抗原の定量を行なうことができる。
特（二、細胞内容物の含有量は、試料中の抗体あるいは
抗原の量に比して大過剰であるから、従来方法では数１
０時間もの時間を要していた抗体あるいは抗原の定量を
５〜１−０分相度の短時間のうちに迅速（１行なうこと
ができる。
抗原の量に比して大過剰であるから、従来方法では数１
０時間もの時間を要していた抗体あるいは抗原の定量を
５〜１−０分相度の短時間のうちに迅速（１行なうこと
ができる。
１、ＬＢ８分栢１テンカン治療のために使用される抗テ
ンカン剤を抗原とする抗テンカン剤の生体内濃度の定量
分析等（二つききわめて有効に適用することができる。
ンカン剤を抗原とする抗テンカン剤の生体内濃度の定量
分析等（二つききわめて有効に適用することができる。
免役分相方法の実験例
この発明の免疫分析方法の具体化を示す。
この実験例は、細胞として羊赤血球を用い、細胞内容物
として羊赤血球内のヘモグロビンを用い、比色測定の際
の測定波長はヘモグロビンの最大吸収波長である４１２
ｎｒｎに選んで行なったものである計 あらかじめ調製したα−ＦＰ抗体を結合する羊赤血球お
よび補体を含肩する試薬と、α−Ｆ”Ｐ含有量が既知で
ある血液試料とを混合し、抗原抗体反応（Ｑζ亀へ＼ζ
９帆へ帆鴨＼曳〜嶌ζへ帆化弯鵬ζ鵬鴨により羊赤血球
の細胞膜を破壊し、細胞内部のヘモグロビンを反応液内
に放出した。次いで、遠心分離器付き比色測定装置すに
より反応液を固形分と上澄＼とに遠心分離し、前記上澄
飄中のヘモグロビンにつき比色測定をし、吸光度値を得
た。測定吸光度値とｍ＋＋液試料中のα−ＦＰ聞との関
係を第３図に示す。
として羊赤血球内のヘモグロビンを用い、比色測定の際
の測定波長はヘモグロビンの最大吸収波長である４１２
ｎｒｎに選んで行なったものである計 あらかじめ調製したα−ＦＰ抗体を結合する羊赤血球お
よび補体を含肩する試薬と、α−Ｆ”Ｐ含有量が既知で
ある血液試料とを混合し、抗原抗体反応（Ｑζ亀へ＼ζ
９帆へ帆鴨＼曳〜嶌ζへ帆化弯鵬ζ鵬鴨により羊赤血球
の細胞膜を破壊し、細胞内部のヘモグロビンを反応液内
に放出した。次いで、遠心分離器付き比色測定装置すに
より反応液を固形分と上澄＼とに遠心分離し、前記上澄
飄中のヘモグロビンにつき比色測定をし、吸光度値を得
た。測定吸光度値とｍ＋＋液試料中のα−ＦＰ聞との関
係を第３図に示す。
一方、従来方法であるラジオイムノアッセイ法（ＲＩ
Ａ ） ｌ二より血液試料中のα−ＦＰ自有量自定片結
果と、この発明の免役分析方法（不法）による定−吊結
宋とは、第４図に示すようＣ二、きわめてよい相関が認
めら力、る。したがつ°Ｃ，ｇ３図（二示すグラフな検
拐線として、σ−ＦＰ含有量が未知である血液試料（二
つき、この発明の免疫分析方法により、α−Ｉｉ’Ｐを
精度良く、かつ迅速（二定楡することが、裏伺けられる
。
Ａ ） ｌ二より血液試料中のα−ＦＰ自有量自定片結
果と、この発明の免役分析方法（不法）による定−吊結
宋とは、第４図に示すようＣ二、きわめてよい相関が認
めら力、る。したがつ°Ｃ，ｇ３図（二示すグラフな検
拐線として、σ−ＦＰ含有量が未知である血液試料（二
つき、この発明の免疫分析方法により、α−Ｉｉ’Ｐを
精度良く、かつ迅速（二定楡することが、裏伺けられる
。
この発明によると、試料中の含有虻の少ない抗体または
抗原につき、抗原抗体反応（二より破壊されて細胞内よ
り放出されるところの、前記抗体または抗原よりも過剰
量である細胞内容物の定量によって、従来法におけるよ
りもはるかに迅速に定量分析をすることができる。しか
も、細胞内容物の定量Ｃ１際し、遠心分離法の採用Ｃ二
より、光散乱の原因となる固形分を除去して得た上澄翫
（二つき比色分相を行なうので、正確な定杯分析値を得
ることができる。
抗原につき、抗原抗体反応（二より破壊されて細胞内よ
り放出されるところの、前記抗体または抗原よりも過剰
量である細胞内容物の定量によって、従来法におけるよ
りもはるかに迅速に定量分析をすることができる。しか
も、細胞内容物の定量Ｃ１際し、遠心分離法の採用Ｃ二
より、光散乱の原因となる固形分を除去して得た上澄翫
（二つき比色分相を行なうので、正確な定杯分析値を得
ることができる。
第１１ン１はこの発明に係る免役分析方法の原理を示す
説明図、η）、 ２ ＋＊＋は遠心分離器付き比色分析
装他を示す説明図、第５図は試料中のび−ＦＰの含有上
）とこの発明の免疫分析方法によりイ１≠だ吸光度との
相関を示す特性図、および第３図はラジオイムノアッセ
イ法の分析結果とこの発明に係る免疫分析方法の分析結
果との相関を示すグラフである。 １・・・細胞膜、 ２・・・Ｉｌｌ ＪＰＮ内容物、
６・・・抗体、４・・・抗原、 ５・・・補体、
７・・・上澄 。 ベーＦＰ ＄ 蹟 。 （ｎ（１／ｍｌ） 特許庁長官 若杉和夫殿 １、事件の表示 昭和５７年特 許 願第１９５１１７１％２・発明の
名称 免疫分析方法 ３ 補正をする者 事件との関係 特許出願人 ４、代理人 ５、補正命令の日付 昭ｙＦ１１５８年２月２日（同年
２月２２日発送）訂正する。
説明図、η）、 ２ ＋＊＋は遠心分離器付き比色分析
装他を示す説明図、第５図は試料中のび−ＦＰの含有上
）とこの発明の免疫分析方法によりイ１≠だ吸光度との
相関を示す特性図、および第３図はラジオイムノアッセ
イ法の分析結果とこの発明に係る免疫分析方法の分析結
果との相関を示すグラフである。 １・・・細胞膜、 ２・・・Ｉｌｌ ＪＰＮ内容物、
６・・・抗体、４・・・抗原、 ５・・・補体、
７・・・上澄 。 ベーＦＰ ＄ 蹟 。 （ｎ（１／ｍｌ） 特許庁長官 若杉和夫殿 １、事件の表示 昭和５７年特 許 願第１９５１１７１％２・発明の
名称 免疫分析方法 ３ 補正をする者 事件との関係 特許出願人 ４、代理人 ５、補正命令の日付 昭ｙＦ１１５８年２月２日（同年
２月２２日発送）訂正する。
Claims (3)
- （１） 補体活性（二より細胞溶解作用を受ける細胞
膜（二抗原または抗体を結合する細胞と補体とを少なく
とも含有する試薬と、前記抗原または抗体と抗原抗体反
応を生ずる抗体または抗原を有する試料とを混合し、生
ずる抗原抗体反応（二より活性化された補体の細胞溶解
作用による細胞の破壊（−より放出された細胞内容物を
含有する反応液を遠心分離し、固形分を除去した液を比
色分相すること（二よって、試料中の抗原または抗体を
９昂することを／ｌ！ｒ徴とする免疫分相方法。 - （２）前ｉｉ２試薬は、第３成分として酵素または基α
を含有すると共に、前記試薬中の細胞内に、前ＭＬ’、
酵素または基欠１とのｎ”ｉ素反応が可能である基質ま
たは酵素を細胞内容物として刺入した細胞を含廟するこ
とを特徴とする特許請求の範囲罪１枦（二ｉ１′載の免
役分４３−＋方法。 - （３）前記試薬は、第３成分として基質を含有すると共
に、前記試薬中の細胞内に、前記基質との酵素反応が１
」能である酵素を産生ずる微生物を細胞内容物として封
入した却１胞を含有することを特徴とする特許請求の勅
、囲１．１項ｃ ８ｉ：載の免疫分析方法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19511782A JPS5984163A (ja) | 1982-11-05 | 1982-11-05 | 免疫分析方法 |
| EP83107664A EP0103139B1 (en) | 1982-08-11 | 1983-08-03 | Reagent composition for immunoassay and immunoassay using the same |
| DE8383107664T DE3381055D1 (de) | 1982-08-11 | 1983-08-03 | Reagenszusammensetzung fuer immuntest und dieselbe verwendender immuntest. |
| US07/062,383 US4820634A (en) | 1982-08-11 | 1987-06-15 | Immunoassay method and immunoreactive cell reagent |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19511782A JPS5984163A (ja) | 1982-11-05 | 1982-11-05 | 免疫分析方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5984163A true JPS5984163A (ja) | 1984-05-15 |
Family
ID=16335773
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP19511782A Pending JPS5984163A (ja) | 1982-08-11 | 1982-11-05 | 免疫分析方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5984163A (ja) |
-
1982
- 1982-11-05 JP JP19511782A patent/JPS5984163A/ja active Pending
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