JPS5983057A - オ−トラジオグラフ測定法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、オートラジオグラフ測定法に関するものであ
る。

放射性標識を伺領した物質を生物体に投与したのち、そ
の生物体、あるいは、その生物体の組織の一部を試料と
し、この試料と高感度Ｘ線フィルムなどの放射線フィル
ムとを一定時間重ね合わせることによって、該フィルム
を感光（あるいは、露光）させ、その感光部位から該試
料中における放射性標識物質の位置情報を得ることから
なるオートラジオグラフィー（ラジオオートグラフィー
とも呼ばれる）、すなわちオートラジオグラフ測定法は
、従来より知られている。このオートラジオグラフィー
は、たとえば、生物体における投与物質の代謝、吸収、
排泄の経路、状態などを詳しく研究するために利用され
ている。このようなオートラジオグラフィーについては
、たとえば、次に示す文献に記載されている。

生化学実験講座６　トレーサー実験法←に）２７１〜２
８９頁、「８．　オートラジオグラフィーｊ末吉徹、重
松昭世（１９７７年、−東京化学同人刊） また、オートラジオグラフィーは、放射性標識を何与さ
れた生物体の組織および／または生物体由来の物質を含
む媒体における放射性標識物質の位置情報を得るために
も利用されている。

たとえば、蛋白質、核酸などのような生物体由来の高分
子物質に放射性標識を付与し、その放射性標識高分子物
質、その誘導体、あるいはその分解物などをゲル゛屯気
泳動などの分離操作にかけてゲル状支持体において分離
し、そのゲル状支持体と高感度Ｘ線フィルムとを一定時
間重ね合わせることにより、該フィルムを感光させ、そ
の感光部位から得られる該ゲル中における放射性標識物
質の位置情報を基にして、その高分子物質の分離、同定
、あるいは高分子物質の分子量、特性の評価などを行な
う方法も開発され、実際に利用されている。

４．１に近年においては、オートラジオグラフィーはＤ
ＮＡなどの核酸の塩基配列の決定にも有効に利用されて
おり、従って生物体に由来する高分子物質の構造決定に
おいて非常に有用な手段となっている。

このオートラジオグラフィーを利用することによりＤＮ
Ａの塩基配列を決定する方法としては、マキサム舎ギル
バート（Ｍａｘａｍ−Ｇ　ｉ　Ｉ　ｂｅ　ｒ　ｔ）法、
およびサンガー脅り−ルソｙ　（Ｓａｎｇｅｒ−Ｃｏｕ
ｌｓｏｎ）法が知られている。これらの方法は、ＤＮＡ
が二重ラセン構造を有し、かつ、その二重ラセンを形成
する二本の鎖状分子の間の結合が、その分子の構成中位
である多数の塩基間の水素結合に起因すること、そして
、その多数の構成塩基単位は、アデニン（Ａ）、グアニ
ン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）そしてチミン（Ｔ）の四４ｉ
１ｉ類の塩基のみからなり、かつ各構成塩基単位の間の
水素結合は、Ｇ−ＣおよびＡ−Ｔの二種類の組合わせの
みにおいて実現しているというＤＮＡの特徴的な構造を
巧妙に利用して、その塩基配列を決定する方法である。

たとえば、マキサム番ギルパーＩ・法は次に記載するよ
うな操作により実施中る。

塩基配列を決定しようとしているＤＮＡあるいはＤＮＡ
の分解物の鎖状分子の一方の側の端部に燐（Ｐ）の放射
性同位元素を含む基を結合させることにより、その対象
物を放射性標識物質としたのち、化学的手段を利用して
鎖状分子の各塩基の間の結合を特異的に切断する。次に
、この操作により得られるＤＮＡあるいはＤＮＡの分解
物の多数の切断分解物の混合物をゲル電気泳動法により
分離し、多数の切断分解物がそれぞれ帯状を形成して分
離されたラジオクロマトグラム（ただし、視覚的には見
ることができない）を得ることができる。このラジオク
ロマＩ・グラムと高感度Ｘ線フィルムとを低温下にて長
時間重ね合わせておくと、放射性回位元素を分子中に含
む切断分解物が存在する位置に面したＸ線フィルムの部
分は感光して潜像を形成する。このようにして潜像を形
成したＸ線フィルムを現像することによりラジオクロマ
トグラムに対応する多数の帯状帯域を含むクロマトグラ
ムがＸ線フィルム上に可視像として現われる。そして、
このｒ＝ｆ視化されたクロマトグラムと特異的＋）Ｊ断
手段とから、放射性同位元素が結合された鎖状分子の端
部から一定の位ｎ関係にある塩基を順次決定することが
でき、このようにして対象物のすべての塩基の配列を決
定することができる。

なお、上記に要約したマキサム番ギルバート法について
は次の文献に詳細に記載されている。

ＭＥＴＨＯＤＳ　　ＩＮ　　ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ、　
　ＶＯＬ、ｅ５．ＰＡＲＴ　　Ｉ（ＡＣＡＤＥＭＩＣＰ
ＲＥＳ９．　　ＮＥＷ　　ＹＯＲＫ　　ＬＯＮＤｆ３Ｎ
　　ＴＲ０ＮＴＯ９ＹＤＮＥＹ　　ＳＡＮ　　ＦＲＡＮ
Ｃ［５ＩＣＯ，１８８０）サンガー・クールノン法もま
たＤＮＡの特徴的な構造に着目し、ＤＮＡ合成酵素、ゲ
ル電気泳動およびオートラジオグラフィーを利用してＤ
ＮＡの塩基配列を決定する方法であり、このサンガー・
クールノン法および前記のマキサム・キルバート法の特
徴および操作についての簡単な記述は次の文献に見られ
る。

「遺伝情報を原語で読む・意表を衝いたＤＮＡの塩基配
列解析法」玉浦謹一部、現代化学、１９７７年９月号４
６〜５４頁（■東京化学同人刊）これまでに述べたよう
にオートラジオグラフィーは、生物体の組織、そして、
生物体由来の物質および組織を含む媒体などの試料に含
まれている放射性標識物質の一次元的もしくは二次元的
な位置情報を検出するために非常に有用な手段であり、
このオートラジオグラフィーを利用することにより、た
とえば、生物体における投与物質の代謝、吸収、排油の
経路、状態の研究、あるいは生体高分子の構造決定など
を効率良く達成することができる。

しかしながら、このように有用なオートラジオグラフィ
ーを実際に利用する場合には、いくつかの問題がある。

その第一は、オートラジオグラム、または放射性標識を
伺与した物質を生物体に投与した生物体、あるいは、そ
の生物体の組織の一部などの放射性標識物質を含む試料
における放射性物質の位置を可視化するために、その試
料と高感度Ｘ線フィルムなどの放射線フィルムとを−・
定時間重ね合ゎ世ることによって、該フィルムを感光（
露光）させる操作か煩雑で、かつ長時間を必要とする点
である。すなわち従来のオートラジオグツイーにおいて
」−記の露光操作は、低温（たとえば、ｏ′ｃ付近、そ
して核酸の塩基配列決定などにおけるゲルクロマトダラ
ムの露光の場合には−７０〜−９０’Ｃ）で、かつ長時
間（たとえば、数日間）かけて実施されている。これは
、オートラジオグラフィーの測定対象となる試料は一般
に高い放射性が伺す−されていないため、充分な感光を
得るためには露光を長時間しなければならないこと、そ
して、たとえば室温などの比較的高い温度にて試料と放
射線フィルムとを長時間重ね合わせておくと、放射線フ
ィルムの感光成分である銀塩が試料中の各種の物質によ
り化学カブリを受け、このため該フィルムに精度の高い
感光画像が得られにくく、従って、そのような化学カブ
リを低減するために露光操作を低温下で行なう必要があ
ることなどの理由による。そのような厳しい露光条件を
緩和するために放射線フィルムの感度を更に高めること
も考えられるが、従来のオートラジオグラフィーにおい
て放射線フィルムは、既に非常に高感度にされたものが
用いられており、得られる画像のＡ￥明さを考慮すると
、放射線フィルムの飛躍的な高感度化は困難である。

また、放射線フィルムの感光成分の銀塩は化学的刺激の
みでなく、物理的な刺激にも影響されやすい欠点があり
、これもオートラジオグラフィーの操作を困難にし、か
つその精度を低下させる原因となる。すなわち、オート
ラジオグラフィーにでは一般に放射線フィルムを試料と
接触した状態として露光操作を行なう必要があるため、
放射線フィルムの移動、設置などの作業は放射線フィル
ムを裸の状態にして行なうことが多い。従って、そのよ
うな作業の際に、放射線フィルムが操作担当者の手ある
いは機器などに接触する機会が増加し、その接触などに
起因する物理的圧力などによって放射線フィルムは物理
的カブリ現象を起す傾向があり、この点もオートラジオ
グラフィーの精度を低下させる原因となる。そして、そ
のような放射線フィルムの物理的カブリの発生を回避す
るためには、その取扱い作業において高度の熟練と注意
とを必要とし、オーＩ・ラジオグラフィーの操作をさら
に複雑にする結果となる。

またさらに、従来のオートラジオクラフィーでは上記の
ように長時間の露光操作が行なわれるため、放射性標識
物質以外に試料中に含まれる自然放可能もまた放射線フ
ィルムの露光に関与し、得られる放射性標識物質の位置
情報の精度を低下させるとの問題がある。そのような自
然放射能による妨害を除くために、たとえば、対照試料
を用いた並行実験の実施、露光時間の適正化などが図ら
れているが、並行実験の実施による実験回数の増大、好
適な露光時間の決定を行なうための予備実験の必要性な
どにより、その操作全体が煩雑になるとの欠点がある。

本発明者は、従来のオートラジオグラフィーに１（ｆ４
随する上記のような問題点の解決を目的として鋭意研究
を行なった結果、感光材料として放射線フィルムの代り
に、輝尽性蛍光体を結合剤中に分散してなる蛍光体層を
有する蓄積性蛍光体シートを用いることにより、前記の
問題点の解決あるいは欠点の低減が実現することを見出
し、本発明に到達した。

すなわち、オートラジオグラフィーにおける試料に含ま
れている放射性標識物質の位置情報を得るために用いる
感光材料として、輝尽性蛍光体を結合剤中に分散してな
る蛍光体層を有する蓄積性フ１ｆ光体シー）・を用いた
場合、露光時間の大幅な短ｍｌＷ化が実現するのみでな
く、環境温度あるいはそのイζ１近の温度という温度条
件であっても、得られる試料中の放射性標識物質の位置
情報の精度を低ドさせることなく、露光を行なうことが
できることが判明した。この点は従来のおいて冷却下に
実施されていたオートラジオグラフィーにおける露光操
作を訊しく簡略化するものである。また露光時間の大幅
な短縮化が実現することにより、オートラジオグラフィ
ーの操作全体が短時間で効率良〈実施できることになり
、この点も実用上非常に４１利となる。

さらに、オートラジオグラフィーの感光材料としてＬ記
の蓄積性蛍光体シートを利用することにより、従来放射
線フィルムの使用において大きな問題となっていた化学
カブリおよび物理カブリが実質的に発生しなくなる点も
、オートラジオグラフィーの精瓜の向上および作業性に
おいて非常に有利に作用する。

また、感光材料として蓄積性蛍光体シートを使用した場
合には、試料から蓄積性蛍光体シートに転写された放射
性標識物質の位置情報を得るためには、特に画像化する
必要はなく、その蓄積性蛍光体シートをレーザーなどの
電磁波で走査することにより上記の位置情報を読み出し
、その位置情報を画像、記号あるいは数値、あるいはそ
れらの組合わせなどの任意な形態に変えて取り出すこと
が可能となる。さらに、上記の位置情報を電気的手段な
どを利用して更に加工することにより、所望の各種の形
態で必要な情報を人手することも可能である。

さらにまた、試料中に含まれていた自然放射能などに起
因する粘度を妨害するような＃響は、蓄積性蛍光体シー
トに蓄積されている位置情報を電気的に処理することに
より容易に低減あるいは消去することも可能となる。

従って、本発明は、生物体の組織、および、生物体の組
織および／または生物体由来の物質を含む媒体からなる
群より選ばれる試料に含まれている放射性標識物質の一
次元的もしくは二次元的な位置情報を検出することから
なるオートラジオグラフ１ｌｌｌｌ定法において、該試
料と、輝尽性蛍光体を結合剤中に分散してなる蛍光体層
を有する蓄積性、１７７、光体シートとを一定時間重ね
合わせることにより、該試料中の放射性標識物質から放
出される放射線エネルギーの少なくとも一部を該蛍光体
シートに吸収させたのち、該蓄積性蛍光体シートを電磁
波により走査して、該蓄積性蛍光体シートに蓄積されて
いる放射線エネルギーを輝尽光として放出させ、そして
その輝尽光を検出することにより試料中の放射性標識物
質の位置情報を得ることからなる方法を提供するもので
ある。

また本発明は、上記のようにして得た試料中の放射性標
識物質の位置情報を画像として得ることからなる方法、
および、記号および／または数値で表現された情報とし
て得ることからなる方法をも提供するものである。

本発明において使用する蓄積性蛍光体シートは放射線像
変換パネルとも呼ばれものであり、その例は、たとえば
、米国特許第３．８５９．５２７号明細書および特開昭
５５−１２１４５号公報などに記載されており、一般的
な構成としては既に公知である。

すなわち、蓄積性蛍光体シートは被写体を透過した放射
線エネルギー、あるいは被検体から発せられた放射線エ
ネルギーを該パネルの輝尽性蛍光体に吸収させ、そのの
ちに輝尽性蛍光体を可視光線および赤外線などの電磁波
（励起光）を用いて時系列的に励起することにより、輝
尽性蛍光体中に蓄積されている放射線エネルギーを蛍光
として放出させ、この頌光を光電的に読み取って電気信
号を得、この電気信号を感光フィルムなどの記録材料、
ＣＲＴなどの表示装置１−に可視画像として再生するか
、あるいは数値化もしくは記号化した位置情報などとし
て表わすものである。

以下に１本発明のオートラジオグラフィーにおいて好適
に使用される蓄積性蛍光体シートについて簡単に説明す
る。

上記の蓄積性蛍光体シートは、基本構造として支持体と
、その片面に設けられた蛍光体層とからなるものである
。ただし、この蛍光体層の支持体とは反対側の表面（支
持体に面していない側の表面）には一般に、透明な保護
膜が設けられ、蛍光体層を化学的な変質あるいは物理的
な衝撃から保護し−Ｃいる。

蛍光体層は、輝尽性蛍光体と、これを分散状態で含有支
持する結合剤とからなるものであり、この輝尽性蛍光体
は、放射線を吸収したのち、可視光線および赤外線など
の電磁波（励起光）の１１に射を受けると発光（輝尽発
光）を示す性質を有するものである。従って、たとえば
、放射性標識物質を含む試料などのような被検体から発
せられた放！１１線は、その放０４線量に比例して蓄積
性蛍光体シーＩ・のイｔｔ光体層に吸収され、蓄積性蛍
光体シート１−には被検体の放射線像が放射線エネルギ
ーの蓄積像として形成される。この蓄積像は、可視光線
および赤外線などの電磁波（励起光）で励起することに
より、輝尽発光（蛍光）として放射させることかでき、
この輝尽発光を光電的に読み取って電気信号に変換する
ことにより、放射線エネルギーの蓄積像を可視画像、あ
るいは放射性（標識）物質の位置情報を示す数値、記号
などに変換することが可能となる。

本発明において使用する蓄積性蛍光体シートの支持体は
、従来の放射線写真法における増感紙の支持体として用
いられている各種の材料から任意に選ぶことができる。

そのような材料の例としては、セルロースアセテート、
ポリエステル、ポリエチレンテレツクレート、ポリアミ
ド、ポリイミド、トリアセテート、ポリカーポネ−１・
などのプラスチ・ンク物質のフィルム、アルミニウム箔
、アルミニウム合金箔などの金属シート、通常の紙、バ
ライタ紙、レジンコート紙、二酸化チタンなとの顔料を
含有するピグメント紙、ポリビニルアルコールなどをサ
イジンブレだ紙などを挙げることができる。ただし、蓄
積性蛍光体シートの情報記録材料としての特性および取
扱いなどを考慮した場合、本発明において特に好ましい
支持体の材ネ：１はプラスチックフィルムである。この
プラスチックフィルムにはカーボンブラックなどの光吸
収性物質が練り込まれていてもよく、あるいは二酸化チ
タンなどの光反射性物質が練り込まれていてもよい。前
者は高鼾鋭度タイプの蓄積性蛍光体シートに適した支持
体であり、後者は高感度タイプの蓄積性蛍光体シー）・
に適した支持体である。

公知の蓄積性蛍光体シートにおいて、支持体と蛍光体層
の結合を強化するため、あるいは蓄積性蛍光体シー）・
とじての感度もしくは画質を向上させるために、蛍光体
層が設けられる側の支持体表面にゼラチンなどの高分子
物質を塗布して接着性伺与層としたり、あるいは二酸化
チタンなどの光反射性物質からなる光反射層、もしくは
カーボンブラックなどの光吸収性物質からなる光吸収層
を設けることも行なわれている。本発明において用いら
れる支持体についても、これらの各種の層を設けること
ができ、それらの構成は所望の蓄積性蛍光体シートの目
的、用途などに応じて任意に選択することができる。

さらに、水出願人による特願昭５７−８２４３１号明細
書に開示されているように、得られる画像の鮮鋭度を向
上させる目的で、支持体の蛍光体層側の表面（支持体の
蛍光体層側の表面に接着性伺与層、光反射層、光吸収層
、あるいは金属箔などが設けられている場合には、七の
表面を意味する）には、凹凸が形成されていてもよい。

支持体の上には、前記のように蛍光体層が形成されてい
る。蛍光体層は、基本的には粒子状の輝尽性蛍光体を分
散状態で含有支持する結合剤からなる層である。

輝尽性蛍光体は、先に述べたように放射線を照１１４シ
た後、励起光を照射すると輝尽発光を示す蛍光体である
が、実用的な面からは波長が４００〜８００ｎｍの範囲
にある励起光によって３００〜５００ｎｍ（７）波長範
囲の輝尽発光を示す蛍光体であることが望ましい。本発
明において利用されるの蓄積性蛍光体シートに用いられ
る輝尽性蛍光体の例としては、 米国特許第３．８５９．５２７号明細書に記載されてい
るＳｒＳ：Ｃｅ、Ｓｍ、ＳｒＳ：Ｅｕ。

Ｓｍ、Ｔｈ０２　：　Ｅ　ｒ、およびＬａ２Ｏ２Ｓ；Ｅ
ｕ　、Ｓｍなどの組成式で表わされる蛍光体、特開昭５
５−１２１４２号公報に記載されているＺｎＳ：Ｃｕ、
Ｐｂ、ＢａＯ＊ｘＡｌ２Ｏ３：Ｅｕ［ただし、０４８≦
Ｘ≦１０］、および、Ｍ２＋０・ｘＳ　＋０２　：Ａ　
［ただし、Ｍ２＋はＭｇ、Ｃａ、Ｓｒ、Ｚｎ、Ｃｄ、ま
たはＢａであり、ＡはＣｅ、Ｔｂ、Ｅｕ、Ｔｍ、Ｐｂ、
Ｔｎ、Ｂｉ、またはＭｎであり、Ｘは、０，５≦Ｘ≦２
．５である〕なとの組成式で表わされる蛍光体、特開昭
５５−１２１４３号公報に記載されている　　（Ｂ　　
ａ　　Ｉ−ｘ　　−ｙ　　、　　Ｍ　　ｇ　　ｘ　　、
　　Ｃａ　　ｙ　　）　　　Ｆ　　Ｘ　　：ａＥｕ２＋
［ただし、Ｘはｃ！ｌおよびＢｒのうちの少なくとも一
つであり、Ｘおよびｙは、０＜ｘ＋ｙ≦０．６、かつｘ
ｙ”ｒ、Ｏであり、ａは、１０−ｇ≦ａ≦５　Ｘ　Ｉ　
Ｏ−２である］の組成式で表わされる伍°光体、 特開昭５５−１２３．４４号公報に記載されているＬｎ
ＯＸ：ｘＡ［ただし、ＬｎはＬａ、Ｙ、Ｇｄ、およびＬ
ｕのうちの少なくとも−っ、ＸはＣ父およびＢｒのうち
の少なくとも−・っ、ＡはＣｅおよびＴｂのうちの少な
くとも一つ、そして、Ｘは、Ｏ＜ｘ＜Ｏ、ｌである］の
組成式で表わされる蛍光体。

特開昭５５−１２１４５号公報に記載されている（Ｂａ
Ｉ−）（、Ｍ″ｘ）　ＦＸ　：　ｙＡ　［り？、：：Ｌ
、ＭｌｌはＭｇ、Ｃａ、Ｓｒ、Ｚｎ、およびＣｄのうち
の少なくとも一つ、Ｘは６文、Ｂｒ、および工のうちの
少なくとも一つ、ＡはＥｕ、Ｔｂ、Ｃｅ、Ｔｍ、Ｄｙ、
Ｐｒ、Ｈｏ、Ｎｄ、Ｙｂ、およびＥｒのうちの少なくと
も一つ、そしてＸは、０≦Ｘ≦０．６、ｙは、０≦ｙ≦
０．２である］の組成式で表わされる蛍光体、 特開８／Ｊ　５５−１６００７８号公報に記載されてい
るＭ”　ＦＸ−ｘＡ　：　ｙＬｎ　［ただし、ＭＩ［は
Ｂａ、Ｃａ、Ｓ　ｒ、Ｍｇ、Ｚｎ、およυ’Ｃｄのうち
の少なくとも一種、ＡはＢｅ０１Ｍｇ０．ＣａＯ，Ｓｒ
Ｏ，Ｂａｄ、ＺｎＯ１ＡＪ１．．０３、Ｙ２Ｏ３、Ｌ　
ａ、　２０３、Ｉｎ２Ｏ３，５ｉ０２、Ｔ９０２、Ｚｒ
Ｏ２、ＧｅＯ２，５ｎ０２、Ｎｂ２Ｏ５、Ｔａ２０５、
およびＴｈ０２（７）うちの少なくとも一種、ＬｎはＥ
ｕ、Ｔｂ、Ｃｅ、Ｔｍ、Ｄｙ、　Ｐｒ、　Ｈｏ、Ｎｄ、
　Ｙｂ、Ｅｒ、　Ｓｍ、およびＧｄのうちの少なくとも
一種、ＸはＣ１、Ｂｒ、および工のうちの少なくとも一
種であり、ｘおよびｙはそれぞれ５　Ｘ　１０−Ｉｌ≦
Ｘ≦０．５、およＣ０くｙ≦０．２である〕の組成式で
表わされる優先体、 特開昭５６−１１６７’７７号公報に記載されている（
Ｂ　ａｌ−Ｘ　、Ｍ”Ｘ）Ｆ２　＊　ａＢ　ａＸ２　：
ｙＥｕ、ｚＡ、［ただし、Ｍ！！はベリリウム、マグネ
シウム、カルシウム、ストロンチウム、亜鉛、およびカ
ドミウムのうちの少なくとも一種、Ｘは１！１素、臭素
、および沃素のうちの少なくとも一種、Ａはジルコニウ
ムおよびスカンジウムのうちの少なくとも一種であり、
ａ、ｘ、ｙ、および２はそれぞれ０．５≦ａ≦１．２５
．０≦Ｘ≦１、ｉｏ−”≦ｙ≦２Ｘ１０−’、およびＯ
＜ｚ≦１０−２である］の組成式で表わされる蛍光体。

特開昭５７−２３６７３号公報に記載されている（Ｂａ
ｄ−）（、Ｍ”Ｘ）Ｆ２　ｅ　ａＢａ、Ｘ２　：ｙＥｕ
、ｚＢ［ただし、ＭＩＩはベリリウム、マグネシウム、
カルシウム、ストロンチウム、亜鉛、およびカドミウム
のうちの少なくとも一種、Ｘは塩素、臭素、および沃素
のうちの少なくとも一種であり、ａ、、ｘ、ｙ、および
Ｚはそれぞれ０．５≦ａ≦１，２５．０≦Ｘ≦ｉ、ｉｏ
−”≦ｙ≦２×１０−１、およびＯ＜ｚ≦２ＸＩＯ司で
ある］の組成式で表わされる蛍光体、 特開昭５７−２３６７５号公報に記載されている（Ｂａ
Ｉ−ｘ、Ｍ”Ｘ）Ｆ２＊ａＢａＸ２：ｙＥｕ、ｚＡ［た
だし、ＭＵはへリリウム、マグネシウム、カルシウム、
ストロンチウム、亜鉛、およびカドミウムのうちの少な
くとも一種、又は塩素、臭素、および沃素のうちの少な
くとも一種、Ａは砒素および硅素のうちの少なくとも一
種であり、ａ、ｘ、ｙ、および２はそれぞれ０．５≦ａ
≦１．２５．０≦Ｘ≦１．１０−＠≦ｙ≦２×１Ｏ−１
、およびＯ＜ｚ≦５　Ｘ　１０−’である］のＭｌ成式
で表わされる蛍光体、 本出願人による特願昭５６−１６７４９８号明副書に記
載されているＭ”ＯＸ　：　ｘＣｅ　［ただし、Ｍｍは
Ｐｒ、Ｎｄ、Ｐｍ、Ｓｍ’、Ｅｕ、Ｔｂ、Ｄｙ、ＨＯｌ
Ｅｒ、Ｔｍ、Ｙｂ、およびＢｉからなる群より選ばれる
少なくとも一種の三価金属であり、又はＣＩおよびＢｒ
のうちのいずれか一方あるいはその両方であり、ＸはＯ
＜ｘ＜０．１である］の組成式で表わされる蛍光体、 本出願人による特願昭５７−８９８７５号明細書に記載
されているＢＥｘ−ｘＭｘ／２Ｌｘ／２ＦＸ　：ｙＥｕ
”［ただし、Ｍは、Ｌｉ、Ｎａ、に、Ｒｂ、およびＣｓ
からなる群より選ばれる少なくとも一種のアルカリ金属
を表わし；Ｌは、Ｓｃ、Ｙ、Ｌａ、Ｃｅ、Ｐｒ、Ｎｄ、
Ｐｍ、Ｓｍ、Ｇｄ、Ｔｂ、Ｄｙ、Ｈｏ、Ｅ　ｒ、Ｔｍ、
Ｙ　ｂ、Ｌｕ、Ａｎ、Ｇａ、Ｉｎ、およびＴｕからなる
群より選ばれる少なくとも一種の三価金属を表わし；Ｘ
は、Ｃ１，Ｂｒ、および工からなる群より選ばれる少な
くとも一種のハロゲンを表わし；そして、Ｘは１ｏ−２
≦Ｘ≦０．５、ｙはｏ＜ｙ≦０．１である］の組成式で
表わされる蛍光体、 本出願人による特願昭５７−１３７３７４号明細書に記
載されているＢａＦＸ＊　ｘＡ　：　ｙＥｕ”［ただし
、Ｘは、Ｃ１、Ｂｒ、およびＩからなる群より選ばれる
少なくとも一種の／＼ロゲンてあり；Ａは、テトラフル
オロホウ酸化合物の焼成物であり；そして、Ｘは１０′
４≦Ｘ≦０．１、ｙはＯくｙ≦０．１である］の組成式
で表わされる蛍光体、 本出願人による特願昭５７−１５８０４８号（昭和５７
年９月１３日出願）明細書に記載されているＢａＦＸ＊
　ｘＡ　：　ｙＥｕ”　［ただし、Ｘは、Ｃｕ、Ｂｒ、
および工からなる群より選ばれる少なくとも一種のハロ
ゲンであり；Ａは、ヘキサフルオロケイ酸、ヘキサフル
オロチタン酸およびヘキサフルオロジルコニウム酸の一
価もしくは二価金属の塩からなるヘキサフルオロ化合物
群より選ばれる少なくとも一種の化合物の焼成物であり
：そして、Ｘは１０−’≦Ｘ≦０．１、ｙはｏ＜ｙ≦０
．１である］の組成式で表わされる蛍光体、本出願人に
よる特願昭５７−　　　　　　号（昭和５７年９月２４
日出願）明細書に記載されているＢ　ａ　ＦＸ　＊　ｘ
　Ｎ　ａＸ’：ａＥ　ｕ”　［ただし、−ＸおよびＸ゛
は、それぞれ（ＩＬ、Ｂｒ、およびＩのうちの少なくと
も一種であり、ＸおよびａはそれぞれＯ＜ｘ≦２、およ
びＯｖａ≦０．２である］の組成式で表わされる蛍光体
、 本出願人による特願昭５７−　　　　　　号（昭和５７
年９月２７出願）明細書に記載されているＭ”ＦＸ＠　
ｘＮａＸ’：ｙＥｕ”：　ｚＡ　［ただし、Ｍ「は、Ｂ
ａ、Ｓｒ、およびＣａからなる群より選ばれる少なくと
も一種のアルカリ土類金属であり、ＸおよびＸ′は、そ
れぞれＣＪｌ、Ｂｒ、およびＩからなる群より選ばれる
少なくとも一種のハロゲンチおり；Ａは、■、Ｃｒ、Ｍ
ｎ、Ｆｅ、Ｃｏ、およびＮｉより選ばれる少なくとも−
・種の遷移金属であり；そして、ＸはＯ＜ｘ≦２、ｙは
ｏ＜ｙ≦０．２、および２はＯ＜ｚ≦１０−２である］
の組成式で表わされる蛍光体、本出願人による特願昭５
７−　　　　　　号（昭和５７年１０月２２１」出願）
明細書に記載されているＭ”ＦＸ＊　ａＭ”Ｘ’　拳ｂ
Ｍ’　”Ｘ”　２　＊ｃ　Ｍ　■Ｘ”’８命ｘＡ　：　
ｙＥｕ”　［ただし、ＭｌはＢａ、Ｓｒ、およびＣａか
らなる群より選ばれる少なくとも一種のアルカリ土類金
属であり；ＭｌはＬｉ、Ｎａ、に、Ｒｂ、およびＣｓか
らなる群より選ばれる少なくとも一種のアルカリ金属で
あり：Ｍ″はＢｅおよびＭｇからなる群より選ばれる少
なくとも一種の二価金属であり；ＭＴＭはＡ文、Ｇａ、
Ｉｎ、および１文からなる群より選ばれる少なくとも一
種の三価金属であり；Ａは金属酸化物であり；Ｘは０文
、Ｂｒ、およびＩからなる群より選ばれる少なくとも一
種のハロゲンであり、　Ｘ　ｌ　、　Ｘ　１１、および
Ｘ”′は、Ｆ、０文、Ｂｒ、および工からなる群より選
ばれる少なくとモー・種のハロゲンであり；そして、ａ
はＯ≦ａ≦２、ｂはＯ≦ｂ≦１０−”、ＣはＯ≦Ｃ≦１
０−２、かつａ＋ｂ＋ｃ≧ｔｏ”ｔ’あり；ＸはＯ＜ｘ
≦０．５、ｙはｏ＜ｙ≦０．２である］の組成式で表わ
される蛍光体、 などを挙げることができる。

ただし１本発明に用いられる輝尽性蛍光体は上述の蛍光
体に限られるものではなく、放射線を照射したのちに励
起光を照射した場合に、輝尽発光を示す蛍光体であれば
いかなるものであってもよい。

また蛍光体層の結合剤の例としては、ゼラチンＡ・の蛋
白質、デキストラン等のポリサッカライド、またはアラ
ビアヨムのような天然高分子物質；および、ポリビニル
ブチラール、ポリ酢酸ビニル、ニトロセルロース、エチ
ルセルロース、塩化ビニリデン−塩化ビニルコポリマー
、ポリメチルメタクリレ−１＝　、塩化ビニルや酢酸ビ
ニルコポリマー、ポリウレタン、セルロースアセテート
ブチレーＩ・、ポリビニルアルコール、線状ポリエステ
ルなとような合成高分子物質などにより代表される結合
剤を挙げることができる。このような結合剤のなかで特
に好ましいものは、ニトロセルロース、線状ポリエステ
ル、およびニトロセルロースと線状ポリエステルとの混
合物である。

蛍光体層は、たとえば、次のような方法により支持体上
に形成することができる。

まず上記の輝尽性蛍光体粒子と結合剤とを適当な溶剤（
たとえば、低級アルコール、塩素原子含有炭化水素、ケ
トン、エステル、エーテル）に加え、これを充分に混合
して、結合剤溶液中に蛍光体粒子が均一に分ｎｋシた塗
布液を調製する。

塗布液における結合剤と輝尽性蛍光体粒子との混合比は
、目的とする蓄積性蛍光体シー！・の特性、蛍光体粒子
の種類などによって異なるが、一般には結合剤と蛍光体
粒子との混合比は、１：１乃至１　：　１００　（重量
比）の範囲から選ばれ、そして特に１：８乃至１：４０
（重量比）の範囲から選ぶことが好ましい。

なお、塗布液には、該塗布液中における蛍光体粒子の分
散性を向上させるための分散剤、また、形成後の蛍光体
層中における結合剤と蛍光体粒子との間の結合力を向上
させるだめの口ｆ塑剤などの種々の添加剤が混合されて
いてもよい。そのような目的に用いられる分散剤の例と
しては、フタル酸、ステアリン酸、カプロン酸、親油性
界面活性剤などを挙げることができる。そして可塑剤の
例としては、燐酸トリフェニル、燐酸トリクレジル、燐
酸ジフェニルなどの燐酸エステル；フタル酸ジエチル、
フタル酸ジメトキシエチルなどのフタル酩エステル；グ
リコール酸エチルフタリルエチル、グリコール酪ブチル
フタリルブチルなどのグリコール酸エステル；そして、
トリエチレングリコールとアジピン酸とのポリエステル
、ジエチレングリコールとコハク酸とのポリエステルな
どのポリエチレングリコールと脂肪族二用基酸とのポリ
エステルなどを挙げることができる。

１４記のようにして調製された蛍光体粒子と結合剤とを
含有する塗布液を、次に、支持体の表面に均一に塗ＩＨ
３することにより塗布液の塗膜を形成する。この塗′Ｉ
＋ｊ　操作は、通常の塗布手段、たとえば、ドクターブ
レード、ロールコータ−、ナイフコーク−などを用いる
ことにより行なうことができる。

ついで、形成された塗膜を徐々に加熱することにより乾
燥して、支持体上への蛍光体層の形成を完了する。蛍光
体層の層厚は、目的とする蓄積性蛍光体シートの特性、
蛍光体粒子の種類、結合剤と蛍光体粒子との混合比など
によって異なるか、通常は２０ｇｍ乃至１ｍｍとする。

ただし、この層厚は５０乃至５００μ１ｍとするのが好
ましい。

なお、蛍光体層は、必ずしも上記のように支持体上に塗
布液を直接塗布して形成する必要はなく、たとえば、別
に、ガラス板、金属板、プラスチンクシ−１・などのシ
ート上に塗布液を塗布し乾燥することにより蛍光体層を
形成した後、これを、支持体上に押圧するか、あるいは
接着剤を用いる方法などにより支持体と蛍光体層とを接
合してもよい。

蛍光体層の」二には前記のように保護膜が設けられてい
ることが好ましい。この保護膜は、たとえば、酢酸セル
ロース、ニトロセルロースなどの透明なセルロース誘導
体；ポリメチルメタクリレ−Ｉ・、ポリビニルブチラー
ル、ポリビニルホルマール、ポリカーボネート、ポリ酢
酸ビニルや酢酸ビニルコポリマー、ポリエチレテレフタ
レーＩ・、ポリエチレン、ポリ塩化ビニリデン、ポリア
ミドなどの透明な合成高分子物質から形成されるもので
ある。保護膜のＩ模厚は、通常ｌ乃至１００μｍ、好ま
しくは３乃至５０ｇｍとされる。

本発明は、オートラジオグラフィーにおいて、以ｊ二に
記載したような構成を有する蓄積性蛍光体シートを、従
来の放射線フィルムからなる感光材才゛１の代りに使用
するものであり、その露光操作は、放射性標識物質を含
む試料と蓄積性蛍光体シーＩ・とを一定時間重ね合わせ
て露光操作を実施することにより、その試料中の放射性
標識物質から放出される放射線の少なくとも一部を該蛍
光体シートに吸収させて実施する。

本発明のオートラジオグラフ測定方法においてｉｌ＋１
１定の対象となる試料は、前述のように、生物体の組織
、および、生物体の組織および／または生物体由来の物
質を含む媒体からなる群より選ばれる試料であり、それ
らの試料に含まれている放射性標識物質の位置情報を上
記のような蛍光体シートを介して得ることがその目的と
なる。

本発明は、そのなかでも、生物体の組織および／または
生物体由来の物質を含む媒体を測定対象の試料とした場
合に有用である。

さらに、本発明は、放射性標識物質が分離展開された支
持体であり、かつ、放射性標識物質が、放射性標識が伺
与された生体高分子物質、その誘導体もしくはそれらの
分解物である場合に特に有用である。ここで生体高分子
物質の例としては、蛋白質、核酸、それらの誘導体、そ
れらの分解物のような高分子物質を挙げることができる
。そして、たとえば、これらの生体高分子物質の全体的
な、あるいは部分的な分子構造あるいはそれらの基本単
位構成などの解析に本発明は有効に利用することができ
る。

また、放射性標識物質を支持体を用いて分離展開するた
めの方法としては、たとえば、ゲル状支持体（形状は層
状、柱状など任意）、アセテート膜などのポリマー成形
体、あるいは濾紙などの各種の支持体を用いる電気泳動
、そしてシリカゲルなどの支持体を用いる薄層クロマト
グラ２イか、その代表的方法として挙げられるが、分離
展開方法はこれらの方法に限定されるものではない。

また、放射性標識物質が分離展開された支持体は、その
まま、あるいは乾燥処理、分離展開物の固定処理などの
任意の処理を行なったのちに蓄積性ｉｉ４光体シートと
重ね合わされ、これによりその露光操作が実施される。

上記のいわゆる露光操作において、」二記の試料と蓄積
性蛍光体シートとを重ね合わせた状態は、通常は試料と
蓄積性蛍光体シートを密着させることにより実現するが
、必ずしもそれらを密着する必要はなく、それらが近接
した状態で配置されていれば良い。

また、いわゆる露光時間は、試料に含まれる放！１１性
標識物質の放射能の強さ、該物質の濃度、密度など、＃
抗性蛍光体シートの感度、試料と蓄積性蛍光体シートと
の位置関係などにより変動するか、露光操作は一定時間
、たとえば、数秒程度以１−は必要とする。ただし、本
発明に従って感光材料として蓄積性蛍光体シーｉ・を用
いた場合には、従来の放射線フィルムを使用する場合に
必要な露光時間に比較して、その露光時間は大幅に短縮
される。また、露光により試料から蓄積性蛍光体シート
に転写蓄積された試料中の放射性標識物質の位置情報を
読み出す操作において、該蛍光体シートに蓄積されてい
るエネルギーの強さ、分布、所望の情報などに応じて各
種の電気的処理を施すことにより、得られる位置情報の
状態を変えることが可能であるため、露光操作時におけ
る露光時間の厳密な制御は特に必要とはしない。

また、露光操作を実施する温度は特に制限はないが、本
発明の蓄積性蛍光体シー）・を利用したオートラジオグ
ラフィーは、特に１０〜３５℃などの環境温度にて実施
することが可能である。ただし、従来のオートラジオグ
ラフィーにおいて利用されている低温（たとえば、５°
Ｃ伺近、あるいはそれ以丁の温度）において露光操作を
行なってもよい。

次に本発明において蓄積性蛍光体シーｉ・に転写蓄積さ
れた試ネ：１中の放射性標識物質の位置情報を読み出す
ための方法について、絵付図面の第１図に示した読出装
置（あるいは読取装置）の例を参照しながら略述する。

第１図は、蓄積性蛍光体シート（以下においては、蛍光
体シートと略記することもある）１に蓄積記憶されてい
る放射性標識物質の一次元もしくは二次元的な位置情報
を仮に読み出すための先読み用続出部２と、放射性標識
物質の位置情報を出力するために蛍光体シート１に蓄積
記憶されている放射線画像を読み出す機能を有する本読
み用読出部３から構成される装置 している。

先読み用読出部２においては次のような先読み操作が行
なわれる。

レーザー光源４かも発生したレーザー光５はフィルター
６を通過することにより、このレーザー光５による励起
に応じて蛍光体シートｌから発生する輝尽発光の波長領
域に該当する波長領域の部分がカットされる。次いでレ
ーザー光は、ガルバノミラ−等の光偏向器７により偏向
処理され、平面反射鏡８により反射されたのち蛍光体シ
ートｌ上に一次元的に偏向して入射する。ここで用いる
レーザー光源４は、′そのレーザー光５の波長領域が、
蛍光体シー１・１から発する輝尽発光の主要波長領域と
重複しないように選択される。

蛍光体シー１・１は、上記の偏向レーザー光の照射下に
おいて、矢印９の方向に移送される。従って、蛍光体シ
ートｌの全面にわたって偏向レーザー光が照射されるよ
うになる。なお、レーザー光源４の出力、レーザー光５
のビーム径、レーザー光５の走査速度、蛍光体シー１・
ｌの移送速度については、先読み操作のレーザー光５の
エネルギーが本読み操作に川ｉｚられるエネルギーより
も小さくなるように調整される。

蛍光体シー１・ｌは、」二記のようなレーザー光の照射
を受けると、蓄積記録されている放射線エネルギーに比
例する光量の輝尽発光を示し、この光は先読み用心光性
シー１−　１　０に入射する。この導光性シート１０は
その入射面が直線状で、蛍光体シート１上の走査線に対
向するように近接して配置されており、その射出面は円
環を形成し、フォ１・マルなどの光検出器１１の受光面
に連絡している。この導光性シートｌＯは，たとえばア
クリル系合成樹脂などの透明な熱可塑性樹脂シートを加
工してつくられたもので、入射面より入射した光がその
内部において全反射しながら射出面へ伝達されるように
構成されている。蛍光体シートｌからの輝尽発光はこの
導光性シート１０内を導かれて射出面に到達し、その射
出面から射出されて光検出器１１に受光される。

なお、導光性シートの好ましい形状、材質等は特開昭５
５−８７９７０号公報、同５６−１１３９７号公報等に
開示がある。

光検出器ｌ１の受光面には、輝尽発光の波長領域の光の
みを透過し、励起光（レーザー光）の波長領域の光をカ
ヤ１・するフィルターが貼着され、カ１１尽発光のみを
検出しうるよラにされている。光検出器１ｌにより検出
された輝尽発光は電気信号に変換され、さらに増幅器ｌ
２により増幅され出力される。増幅器ｌ２から出力され
た蓄積記録情報は、本読み用続出部３の制御回路１３に
入力される。制御回路ｌ３は，得られた蓄積記録情報に
応じて、濃度およびコントラス１・が最も均一でかつ観
察読影性能の優れた画像が得られるように、増幅率設定
値ａ、収録スケールファクターｂ、および、再生画像処
理条件設定値Ｃを出力する。

以上のようにして先読み操作が終了した蛍光体シー１−
　１は本読み用続出部３へ移送される。

木読み用読出部３においては次のような本読み操作が行
なわれる。

木読み用レーザー光源ｌ４から発せられたレーザー光１
５は、前述のフィルター６と同様な機能　゛を有するフ
ィルターｌ６を通過したのちビーム・エクスパンダ−ｌ
７によりビーム径の大きさが厳密に調整される。次いで
レーザー光は、ガルバノミラ−等の光偏向器１８により
偏向処理され、平面反射鏡工９により反射されたのち蛍
光体シート１上に一次元的に偏向して入射する。なお、
光偏向器ｌ８と平面反射鏡ｌ９との間にはｆθレンズ２
０が配置され、蛍光体シー１・ｌの一Ｌを偏向レ−チー
光が走査した場合に、常に均一なビーム速度を維持する
ようにされている。

イｉｔ光体シートｌは、上記の偏向レーザー光の照射下
において、矢印２１の方向に移送される。従って、先読
み操作におけると同様に蛍光体シート１の全面にわたっ
て偏向レーザー光が照射されるようになる。

蛍光体シー１−１は、」二記のようにしてレーザー光の
照射を受けると、先読み操作におけると同様に、蓄＄７
１１記録されている放射線エネルギニに比例する光量の
輝尽発光を発し、この光は木読み用導光性シート２２に
入射する。この本読み用導光性シート２２は先読み用心
光性シーｉ・１ｏと同様の月質、構造を有しており、本
読み用心光性シート２２の内部を全反射を繰返しつつ導
かれた輝尽発光はその射出面から射出されて、光検出器
２３に受光される。なお、光検出器２３の受光面には輝
尽発光の波長領域のみを選択的に透過するフィルターが
貼着され、光検出器２３が輝尽発光のみを検出するよう
にされている。

光検出器２３により検出された輝尽発光は電気信号に変
換され、前記の増幅率設定値ａに従って感度設定された
増幅器２４においで適正レベルの電気信号に増幅された
のち、Ａ／Ｄ変換器２５に入力される。Ａ／Ｄ変換器２
５は、収録スケールファクター設定値すに従い信号変動
幅に適したスケールファクターでデジタル信号に変換さ
れ、信号処理回路２６に入力される。信号処理回路２６
では、再生画像処理条件設定値Ｃに基づいて、濃度およ
びコンＩ・ラストが適正で観察読影適正の優れた可視画
像が得られるように信号処理が行なわれ、次いで必要に
より磁気テープなどの保存手段を介して、記録装置（図
示なし）へ゛電送される。

記録装置としては、たとえは、感光材料上をレーザー光
等で走査して光学的に記録するもの、ＣＲＴ等に電子的
に表示するもの、ＣＲＴ等に表示されたＸ線画像をビデ
オ中プリンター猪−に記録するもの、熱線を用いて感熱
記録材料」−に記録するものなど種々の原理に基づいた
記録装置を用いることができる。

ただし、記録装置は上記のように可視画像化するものに
限られるものではなく、前述したように試料中の放射性
標識物質の一次元的もしくは二次元的な位置情報を、た
とえば数字化もしくは記号化するなどして記録すること
もできる。

なお、本発明における蓄積性蛍光体シートに転写蓄積さ
れた試料中の放射性標識物質の位置情報を読み出すため
の方法について、」−記においては先読み操作と本読み
操作とからなる読出し操作を説明したが、本発明におい
て利用することができる読出し操作は、」二記の例に限
られるものではない。たとえは、試ネ゛１中の放射性物
質の含有量および、その試料についての蓄積性蛍光体シ
ートの露光時間が予めわかっていれば、上記の例におい
て先読み操作を省略することもできる。

また、本発明における蓄積性蛍光体シートに転′ケ′蓄
積された試料中の放射性標識物質の位置情報を読み出す
だめの方法としては、上記に例示した以外の任意な方法
を利用することも当然可能である。

なお、本発明において試料中の放射性標識物質の「位置
情報」とは、試料中における放射性標識物質もしくはそ
の集合体の位置を中心とした各種の情報、たとえば、試
料中に存在する放射性物質の集合体の存在位置と形状、
その位置における放射性物質の濃度、分４１などからな
る情報の一つもしくは任意の組合わせとして得られる各
種の情報を意味する。

次に本発明の実施態様を、前述のマキサム・ギルバート
法を利用したＤＮＡの塩基配列決定法の操作を例にして
記載する。なお、以下の実施例および比較例において用
いたＤＮＡ　［大腸菌プラスミドＤＮＡ　（ｐＢＲ３２
２）］は既にその塩基配列が解明されており、得られた
クロマトダラムの評価および分析は、それらの既知デー
タを基礎に実施例 また、以下の実施例において使用した蓄積性蛍光体シー
トは下記の方法により調製したものである。

輝尽性のユーロピウム賦活弗化臭化バリウム蛍光体（Ｂ
ａＦＢｒ：Ｅｕ）の粒子と線状ポリエステル樹脂との混
合物にメチルエチルケトンを添加し、さらに硝化度１１
．５％のニトロセルロースを添加して蛍光体粒子を分散
状態で含有する分散液を調製する。次に、この分散液に
燐酸トリクレジル、ｎ−ブタノール、そしてメチルエチ
ルケトンを添加したのち、プロペラミキサーを用いて充
分に攪拌混合して、蛍光体粒子が均一に分散し、かつ粘
度が２５〜３５ＰＳ　（２５°ｃ）ノ塗布液を調製する
。

次に、カラス板上に水平に置いたカーボンブランク練り
込みポリエチレンテレフタレートシーＩ・（支持体、厚
み：２５０ｇｍ）の上に塗布液をドクターブレードを用
いて均一に塗１１ｊする。そして塗布後に、塗膜が形成
された支持体を乾燥器内に入れ、この乾燥器内部の温度
を２５°Ｃがら１００°Ｃに徐々に−に’ｉｆさせて、
塗膜の乾燥を行なった。

このようにして、支持体上に層厚が３００ルｍのイ１１
光体層を形成する。

そして、この蛍光体層の上に、透明なポリエチレンテレ
フタレートフィルム（厚ミニ　１２　ｇｍ）の片面にポ
リエステル系接着剤を付与したのち、接着剤層側を下に
向けて置いて接着することにより、保護膜を形成し、支
持体、蛍光体層、および保護膜から構成された蓄積性蛍
光体シーＩ・を調製する。

［実施例１］ （１）塩基配列決定の対象となるＤＮＡの分離および放
射性標識化 常法により大腸菌プラスミドＤＮＡ　（ｐＢＲ３２２）
を制限酵素Ｈｉｎｄ−Ｈにより切断したのち、５“−末
端を３２　ｐで標識して、二本鎖ＤＮＡ（３２Ｐ標識物
）ｌルｇを得た。

別に調製した５ｍＭの塩化マグネシウムおよび１ｍＭの
ジチオスレイトールを含む２０ｍＭのトリス［トリス（
ヒドロキシメチル）アミノメタン］・塩酸緩衝液（ｐＨ
７，４）２０ル文に」−記の二本鎖ＤＮＡ　ｌ　ｐＬｇ
と制限酵素Ｈａｅ−１［約１単位を加え、３７°Ｃにて
１時間の特異的分解反応を行ない、上記断片の分解生成
物を含む分解Ｉｇ合物溶液を得た。

１−記の分解混合物溶液を試料として、８％ポリアクリ
ルアミド（架橋剤率＝３％）のスラブゲル（１，５ｍｍ
Ｘ２００ｍｍＸ２００ｍｍ）を用い、かつ１ｍＭのＥＤ
ＴＡを含む５０ｍＭのトリス・ホウ酸緩衝液（ｐＨ８，
３）を電極液として、電圧５００Ｖにて電気泳動操作を
実施した６試料に予め加えておいたマーカー色素がゲル
の下端部に到達した時点にて泳動を停止させ、座標軸の
原点となる位置に３２　ｐ含有インクで印を付けた。

１−記のゲルと蓄積性蛍光体シートとを重ね合わせて、
室温（約２５℃）にて１分間保持して露光操作を行なっ
たのち、その蓄積性蛍光体シートを第１図に示すような
続出装置に導入し、３２Ｆ含有インクで印をイリけた位
置を座標軸の原点として、３２　ｐ標識断片の分解生成
物の泳動位置を示す位置情報を読出した。次いで、この
位置情報に従い、３２　ｐ標識を有する分解生成物を含
むゲル部分を薄いカミソリを用いて切出して、これを試
験管に移した。

なお、確認のために、上記の一部切出し操作を行なった
残りのゲルを同様にして蓄積性蛍光体シーＩ・と重ね合
わせたのち、読出装置にて３２　ｐ標識を有する分解生
成物の残存の有無を調べたところ、３２Ｐ標識を有する
分解生成物の全量が取り去られていることがわかった。

すなわち、」−記の蓄積性蛍光体シートを介して得た３
２　ｐ標識を有する分解生成物の位置情報は精度の高い
ものであることが確認された。

（２）分離した３２　ｐ標識ＤＮＡ断片の特異的分解 上記の（１）において取出したゲルを常法に従って抽出
処理して３２Ｆ標識ＤＮＡ断片を分離させた。得られた
３２　ｐ標識ＤＮＡ断片のカウント数は約ｌＸｌ０’ｃ
ｐｍであった。

抽出液を減圧下にて濃縮してぞの全量を約２０ル又とし
、この濃縮液を四本のエッペンドルフ社（西独）製のミ
クロチューブに分割した。それぞれの濃縮液を試料とし
て、マキサム・ギルバー）・法に従う分解反応により、
構成Ｊ！ｉ基の間を特異的に！ｉｌＪ断した。

特異的切断のための分解方法は、切断が、ｌ）グアニン
（Ｇ） ２）グアニン（Ｇ）＋アデニン（Ａ） ３）チミン（Ｔ）＋シ；・シン（Ｃ） ４）シトシン（Ｃ） の位置にて選択的に行なわれるような条件を選んだ。

たとえは、上記ｌ）のグアニン（Ｇ）の位置における選
択的切断反応は、常法に従って、次のようにして行なっ
たものであり、２）、３）および４）についても同様に
常法に従って行なった。

試料（抽出物の濃縮液）５ル文を、１ｍＭのＥＤＴＡを
含む５０ｍＭのカコジル酸ナトリウム水溶液２００　Ｉ
Ｌ見に加え、０℃に冷却した。これにジメチル硫酸１壓
文を加えて２０°Ｃに加温し、１５分間反応させた。こ
の反応液に、０°Ｃに冷却しておいた１、　−５Ｍｍ酸
ナトリウム、ＩＭメルカプトエタノール、およびｔ　Ｒ
ＮＡ　Ｌ　ＯＯｐｇ／ｍ文を含む水性ｔ（＋　５０　ｇ
文とエタノール７５０ｐ文を冷却した。

」二記の冷却液を１２．０ＯＯＧの遠心分離操作にかけ
て上澄み液を除去し、沈澱物に、０°Ｃに冷却した０、
３Ｍ酢酸すトリウム水溶液２５０ｇＭを加えてＤＮＡお
よびｔＲＮＡを溶解させた６次いで、この溶液に約７５
０　ｇ　ｘのエタノールを加えて同様の遠心分離操作を
行ない、」二澄み液を除去することによりＤＮＡおよび
ｔＲＮＡを洗浄した。続いて、１ｍ文のエタノールを用
いて同様の洗２′１１操作を再度行なった。

得られた沈澱物を数分間減圧下にて乾燥したのち、これ
に、新たに蒸留したピペリジンの１Ｍ水溶液１００７ｚ
ｕを加え、９０°Ｃで３００分間反応せた。反応液を凍
結乾燥してピペリジンを除去してから、１０ＩＬｌの水
を用いる凍結乾燥による洗浄操作を二回行なった６ ８０％ホルムアミド、１０ｍＭの水酸化ナトリウム、１
ｍＭのＥＤＴＡ、そし−ｃ−ＢＰＢ　（ブロムフェノー
ルブルー：マーカー色素）からなる水性液ｌＯ川用に、
上記にて得られた凍結乾燥物（ＤＮＡ断片の分解物）を
溶解し、９０°Ｃで数分間加熱したのち、氷水で冷却し
て電気泳動用試料を調製した。

（３）電気泳動用ゲルの調製 アクリルアミド１０．６９ｇ、ビスアクリルアミド０．
５６ｇ、尿素３．７　、８　ｇ、および２０ｍＭのＥＤ
ＴＡを含むｊ、ＯＭ）リス・ホウ酸Ｍ衝液（ｐＨ８，３
）９ｍ文を蒸留水に溶解して全量を９０ｍ１としたゲル
液を得た。このゲル液に窒素カスを吹込んで酸素を除い
たのち、これに１０％過硫酸アンモニウム水溶液６００
μ文と触媒のＴＥＭＥＤ　（テトラメチルエチレンジア
ミン）２５川文を加えた。このようにして処理したゲル
液を、充分に洗浄した二枚の厚さ３ｍｍのガラス板から
形成したモールド（０，５ｍｍＸ３００ｍｍＸ４００ｍ
ｍ）の中に注入し、さらに上記のゲル液の上端部に、四
個のスロット（各、０．５ｍ＋ｎＸ１５ｍｍＸ２０ｍｍ
）形成用のスロットフォーブーを挿入したのち、−夜装
置してゲル化させて目的の四個のスロットを有する電気
泳動用ゲルを調製した。

（４）電気泳動操作 スロットを形成したゲルを電気泳動操作に装着し、１０
０ＯＶ／４０ｃｍにて約１８０分間のプレラン（予備泳
動操作）を行なった後、第１スロットにｌ）　−（Ｇ）
特異的分解物、第２スロツトに２）−（Ｇ＋Ａ）特異的
分解物、第３スロツトに３）−（Ｔ＋Ｃ）特異的分解物
、そして第４スロットに４）−（Ｃ）特異的分解物を、
それぞれの３２Ｆのカウント数が約２ＸＩＯ５ｃｐｍと
なるように導入した。

次に同様に、１０００　Ｖ　／　４０　ｃ　ｍにて試料
の電気泳動を行なった。この電気泳動は、マーカー色素
がゲルの下端部に到達するまで継続したのち停止した。

次いで一方のガラス板を除去し、ゲルを１０％酢酸中で
２回洗浄した。ゲルを濾紙の上に移し、その状態で減圧
下にて加熱乾燥した。

（５）Ｒ光操作 上記において得られた乾燥ゲルと蓄積性蛍光体シーＩ・
とを重ね合わせてカセット内に収納し、室温（約２０°
Ｃ）にて、４０分間露光したのち、第１図に示した続出
装置に装填して、蛍光体シーＩ・に転写蓄積されたゲル
上における放射性標識物質の位１σを示す凹刻のクロマ
トグラムを読出し、次いでその情報をデジタル情報とし
て記憶させた。

」二記のデジタル情報に基づいてクロマトダラムの可視
画像を得たところ灯明な画像が得られた。

そして、このクロマトグラムを既知の大腸菌プラスミド
ＤＮＡ　（ｐＢＲ３２２）のクロマトグラムと照合した
ところ、充分な一致が見られた。

別に、第２スロットおよび第３スロツＩ・からのそれぞ
れのクロマトグラムを座標軸とし同様な読出し操作を実
施し、コンピューター処理により次のような比較対照を
行なうことにより目的のＤＮＡの塩基配列を決定した。

第２スロットの（Ｇ　十Ａ）特異的分解物、のクロでト
ダラムと第１スロツトの（Ｇ）特異的分解物ノクロマト
ダラムとを比較させることにより座標軸の原点を基準と
したＧとＡの位置をそれぞれ決定する。

次に、第３スロツトの（Ｔ＋Ｃ）特異的分解物のクロマ
Ｉ・ダラムと第４スロツトの（Ｃ）特異的分解物のクロ
マトグラムとを比較させることにより座標軸の原点を基
準としたＴとＣの位置をそれぞれ決定する。そして、こ
れらを座標軸の原点から遠い順に並べることによりＤＮ
Ａの塩基配列を得る。

以上に記憶したのコンピューター処理により決定された
塩基配列は、調査対象とした大腸菌プラスミドＤＮＡ　
（ｐＢＲ３２２）の既知の塩基配列と一致した。

上記の結果から、蓄積性蛍光体シートを用いて室温で短
時間の露光操作を行なうことにより、マキサム台ギルバ
ート法に基づ＜ＤＮＡの塩基配列決定法を実施すること
は充分可能であることが確認された。

［比較例１］ 実施例１の「（５）露光操作ｊに記載した電気泳動操作
を実施したのちの乾燥ゲルによる蓄積性蛍光体シートの
露光操作を、蛍光体シートの代りにＸ線フィルム（ＲＸ
タイプ：富士写真フィルム＠製）と蛍光増感紙（ライト
ニングプラス：米国デュポン社製）とを組合わせて使用
し、通常のＸ線フィルム用カセツテに収納して実施例１
と同一の条件（室温、４０分間露光）にて露光操作を行
なった。次いで、Ｘ線フィルムを現像したが、判読可能
なりロマトグラムを得ることができなかった。

次に上記の露光操作を、通常のマキサム◆ギルバート法
に憎して一８０°Ｃにて１０００分間実施したのち、同
様にＸ線フィルムを現像したところ、実施例１にて可視
画像として得られたクロマトグラムと同程度の鮮明度を
有するクロマトグラムをｆｌＩることができた。ここで
得られたクロマトグラムは、実施例１において可視画像
として得られたクロマトダラムと一致した。

【図面の簡単な説明】

１１図は、本発明において蓄積性蛍光体シートに転写蓄
積された試料中の放射性標識物質の位置情報を読み出す
ための続出装置（あるいは読取装置）の例を示すもので
ある。 １；蓄積性蛍光体シート、２−先読み用読出部、３：本
読み用読出部、４：レーザー光源、５：レーザー光、６
：フィルター、７：光偏向器、８：平面反射鏡、９：移
送方向、１０：先読み用導光性シート、１１：光検出器
、１２：増幅器、１３：制御回路、１４：レーザー光源
、１５：レーザー光、１６：フィルター、１７：ビーム
・エクスパングー、１８；光偏向器、１９；平面反射鏡
、２０：ｆθレンズ、２１：移送方向、２２：本読み用
導光性シート、２３：光検出器、２４：増幅器、２５　
：　Ａ／Ｄ変換器、２６；信号処理回路 特許出願人　富士写真フィルム株式会社代理人　　　弁
理士　　　柳川泰男 手続補正書 昭和りＳ年り月／／日 Ｅｌ、許庁長官　　若杉和夫　　　　殿１　事件の表示 昭和５７年　　特　許願第１９３４１８号２　　発明の
名称　　　　　オートラジオグラフ測定法３　補正をす
る者 ４１ｆ’ｌとの関係　　特許出願人 （＋：　　　ｌｉ　　　　　　　（５２０）富士写真フ
ィルム株式会社氏　名（名ｈ・）　　代表者　　大　西
　　實４、代理人 住　所　　東京都新宿区四谷Ｊ−／／ｌミッヤ四谷ビル
ｇ階（ｊ　補止により増加する発明の数　　　なし７　
補正の対象 明細書の「発明の詳細な説明」の欄を下記の如く補正致
します。 記 一二服ロ町一　　　−」町ＩＪＬ− （１）　２２頁１６行目　の　　　　　　　→　削除（
２）　２８頁２０行目　号　　　　　　→　↓旦ｌユヱ
麿号（３）　２９頁７行目　号　　　　　　　　→　エ
１６コ辷９１ＪＬ号（４）　２１１頁１８行目　号　　
　　　　　→　１旦工±ｙ支号（５）　３９頁６行目　
記憶　　　　　　→　２屡（［１）　３８頁８行］１　
記憶　　　　　　→　記Ｕ（７）　４４頁頁Ｏ行目　観
察読影適正　　→　我寒諒彪性折（８）　４４頁１３行
目　電送　　　　　　→　伝送（９）　４５頁１９行目
　任意　　　　　　→　適当以上 手続補正書 昭和５８年６　ｎｌ、”、ｊ！　９８ 特許庁長官　　若杉和夫　　殿 １、事件の表示 昭和５フイ１　　　特許１第１９３４１８号２　発明の
名称　　　　オートラジオグラフ測定法３、　補正をす
る者 月１イ１１との関係　　　特許出願人 ４、代理人 ６、　補正により増加する発明の数　　　　　な　し７
　補正の対象 明細書の「発明の詳細な説明」の欄を下記の如く補正致
します。 記 −」叱皿し−　　　　　」ｌ目し く１）　＋７頁２０行口　　米国特許第３，８５９．　
　　→　　削除〜１８頁１行目　　５２７号明細書およ
び以」ニ 手続補正書 昭和５８年９月７　日 特許庁長官　若杉和夫殿 １、事件の表示 昭和５７年　　特許ＩＦＪＩ第１９３４１８号２　発明
の名称　　　　オートラジオグラフ測定法３　補正をす
る者 沖件との関係　　　　特許出願人 ４、代理人 ６　補正により増加する発明の数　　　　　な　し７　
補正の対象 明細書の「発明の詳細な説明」の欄を下記の如く補正致
します。 記 一一補正前−−−一前几唐一一 （＋）　３５頁３行目　　ｌ乃〒ｌｏＯｐＬｍ　　−＋
　　０．１ｈ至去００ｇｍ（２）同頁４行１」３乃至５
０ｐｍ　　　→　０３乃至５０ＩＬｍ（３）　４４頁１
７行目　　Ｘ線画像　　　　　→　放Ｑ４＃Ｑ画像以　
　　Ｉ 手続補正書 昭和５８年９月３０日 特許庁長官　若杉和夫　殿 １　事件の表示 昭和５７年　　特許願第１９３４１８号２、発明の名称
　　　　オートラジオグラフ測定法３、　　Ｍｌｉ正を
する者 事ｆｌ＋との関係　　　特許出噸人 ４代理人 ６、　補正に」、り増加する発明の数　　　　な　し別
紙の通り 明細書の「発明の詳細な説明」の欄を下記の如く補正致
します。 記 （＋）　３５頁１３行目から同頁１４行目吸収させて実
施する。本発明のオートラジオグラフ測定方法−一補正
孜一一 吸収させて実施する。 以」二

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ■。生物体の組織、および、生物体の組織および／また
   は生物体由来の物質を含む媒体からなる群より選ばれる
   試料に含まれている放射性標識物質の−・次元的もしく
   は二次元的な位置情報を検出することからなるオートラ
   ジオグラフ測定法において、該試料と、輝尽性蛍光体を
   結合剤中に分散してなるか光体層を有する蓄積性蛍光体
   シーＩ・とを一定時間重ね合わせることにより、該試料
   中の放射性標識物質から放出される放射線エネルギーの
   少なくとも一部を該蛍・光体シートに吸収させたのち、
   該蓄積性蛍光体シートを電磁波により走査して、該蓄積
   性、Ｈｉ／、光体シートに蓄積されている放射線エネル
   ギーを輝尽光として放出゛させ、そしてその輝尽光を検
   出することにより試料中の放射性標識物質の位置情報を
   得ることからなる方法。 ２゜放射性標識物質を含む試料が、放射性標識を付与さ
   れた生物体の組織および／または生物体由来の物質を含
   む媒体であることを特徴とする特許請求の範囲第１項記
   載のオー：・ラジオグラフ測定法。 ３゜媒体が、放射性標識物質が分Ｐｉｔ展開された支持
   体であり、かつ、放射性標識物質が、放射性標識が伺与
   された生体高分子物質、その誘導体もしくはそれらの分
   解物であることを特徴とする特許請求の範囲第２項記載
   のオートラジオグラフ測定法。 ４゜支持体が、電気泳動により生体高分子物質が分離展
   開された支持体であることを特徴とする特許請求の範囲
   第３゛項記載のオートラジオグラフ測定法。 ５゜生体高分子物質が、核酸、その誘導体もしくはそれ
   らの分解物であることを特徴とする特許請求の範囲第４
   項記載のオートラジオグラフ測定法。 ６゜（１）放射性標識が付かされているＤＮＡ切断物も
   しくはＤＮＡ分解物からなる４尾合物を支持体にで゛心
   気泳動させて書た支持体と、輝尽性蛍光体を結合剤中に
   分散してなる蛍光体層を有する蓄積性蛍光体シートとを
   一定時間重ね合わせることにより、該ＤＮＡ切断物もし
   くはＤＮＡ分解物中の放射性標識から放出される放射線
   エネルギーの少なくとも一部を該蛍光体シートに吸収さ
   せる上程：そして （２）該蓄積性蛍光体シートを電磁波により走査して、
   該蓄積性蛍光体シートに蓄積されている放射線エネルギ
   ーを輝尽光として放出させ、そしてこの輝尽光を検出す
   ることにより支持体上のＤＮＡすＪ断物もしくはＤＮＡ
   分解物の位置情報を検出する上程； を含むことを特徴とする特許請求の範囲第５項記戦のオ
   ートラジオグラフ測定法。 ７゜蓄積性蛍光体シートが、支持体、輝尽性蛍光体を結
   合剤中に分ｎｋ　Ｌでなる蛍光体層、そして保護１１便
   を含むものであることを特徴とする特許請求の範囲第１
   乃至６項のいずれかの項記載のオートラジオグラフ測定
   法。 ８゜生物体の組織、および、生物体の組織および／また
   は生物体由来の物質を含む媒体からなる群より選ばれる
   試料に含まれている放射性標識物質の一次元的もしくは
   二次元的な位置情報を検出することからなるオートラジ
   オグラフ測定法において、該試料と、輝尽性蛍光体を結
   合剤中に分散してなる蛍光体層を有する蓄積性蛍光体シ
   ートとを一定時間重ね合わせることにより、該試料中の
   放射性標識物質から放出される放射線エネルギーの少な
   くとも一部を該蛍光体シートに吸収させたのち、該蓄積
   性蛍光体シートを電磁波により走査して、該蓄積性蛍光
   体シー）・に蓄積されている放射線エネルギーを輝尽光
   として放出させ、その輝尽光を検出することにより、試
   料中の放射性標識物質の位置情報を得、そしてその位置
   情報を画像化することからなる方法。 ９゜生物体の′組織、および、生物体の組織および／ま
   たは生物体由来の物質を含む媒体からなる群より選ばれ
   る試料に含まれている放射性標識物質の一次元的もしく
   は二次元的な位置情報を検出することからなるオートラ
   ジオグラフ測定法番こおいて、該試＊１と、輝尽性蛍光
   体を結合剤中に分散してなる蛍光体層を有する蓄積性蛍
   光体シーＩ・とを一定時間重ね合わせることにより、該
   試料中の放射性標識物質から放出される放射線エネルギ
   ーの少なくとも一部を該蛍光体シートに吸収させたのち
   、該蓄積性イｉ↑光体シートを電磁波により走査して、
   該蓄積性蛍光体シートに蓄積されている放射線エネルギ
   ーを輝尽光として放出させ、その輝尽光を検出すること
   により、試料中の放射性標識物質の位置情報を得、そし
   てその位置情報を記号および／または数個で表現するこ
   とからなる方法