JPS5982093A - インタ−フエロンの効率的生産法 - Google Patents
インタ−フエロンの効率的生産法Info
- Publication number
- JPS5982093A JPS5982093A JP57189244A JP18924482A JPS5982093A JP S5982093 A JPS5982093 A JP S5982093A JP 57189244 A JP57189244 A JP 57189244A JP 18924482 A JP18924482 A JP 18924482A JP S5982093 A JPS5982093 A JP S5982093A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- interferon
- cells
- produce
- production
- treatment
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
インターフエロン（以下ＩＰＮと略す）の生産には、白
血球、リンパ芽球様細胞、センイ芽細胞、ヒト詳膜細胞
などを培養し、一定細胞濃度に達した後、該細胞を単離
し、もしくは単離しないで種々のウィルスや合成二本鎖
ＲＮＡ（ＰｏｌｙＩ：Ｃりなどの誘発剤で銹発し、ＩＦ
Ｎを誘導する方法が知らｆている。
血球、リンパ芽球様細胞、センイ芽細胞、ヒト詳膜細胞
などを培養し、一定細胞濃度に達した後、該細胞を単離
し、もしくは単離しないで種々のウィルスや合成二本鎖
ＲＮＡ（ＰｏｌｙＩ：Ｃりなどの誘発剤で銹発し、ＩＦ
Ｎを誘導する方法が知らｆている。
ＩＦＮは、誘発剤処理後、数時間後より細胞から分泌さ
れ、一定時間後には、その力価は一定の値を示す様にな
ると考えられている（Ａｎｔｉ−ｍｉｃｒｏｂｏａｌ
Ａｇｅｎｔ ａｎｄ Ｏｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｈｙ 、
２０ （１）５、 １９８１ ）。 これらの知見
より、従来、工ＦＮの生産は、自発産生細胞によるＩＦ
Ｎの生産を除いては、その培地中に分泌されたＩＦＮを
一度、採取するのみであった。
れ、一定時間後には、その力価は一定の値を示す様にな
ると考えられている（Ａｎｔｉ−ｍｉｃｒｏｂｏａｌ
Ａｇｅｎｔ ａｎｄ Ｏｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｈｙ 、
２０ （１）５、 １９８１ ）。 これらの知見
より、従来、工ＦＮの生産は、自発産生細胞によるＩＦ
Ｎの生産を除いては、その培地中に分泌されたＩＦＮを
一度、採取するのみであった。
本発明者らは、用いた細胞の増殖生庁と培養条件等を種
々検討した結果、ＩＦＮ生産能をもはや喪失したと思わ
牡る細胞を培養系よシ単離し、程よく栄養分を加えた新
たな新鮮培地に再本発明により、同量の細胞を用いても
、従来本発明による丁ＦＨの取得方法を説明すると、・
ｊｉｌ！えば、リンパ芽球細胞を用いる場合には、！１ パ先ず該細胞を高濃度培養法を調製する。このとき細胞
濃度が濃いほど効率的である。高濃度細胞Ｆ？ｉ養液を
得るためには種々の工夫が行なわわ。
々検討した結果、ＩＦＮ生産能をもはや喪失したと思わ
牡る細胞を培養系よシ単離し、程よく栄養分を加えた新
たな新鮮培地に再本発明により、同量の細胞を用いても
、従来本発明による丁ＦＨの取得方法を説明すると、・
ｊｉｌ！えば、リンパ芽球細胞を用いる場合には、！１ パ先ず該細胞を高濃度培養法を調製する。このとき細胞
濃度が濃いほど効率的である。高濃度細胞Ｆ？ｉ養液を
得るためには種々の工夫が行なわわ。
ている。本発明においては新手法により該高濃度液が調
製さ扛ている。その詳細は本願と同日に、同−出１頗人
により出ｌｉｍされる出願「発明の名称、浮遊細胞の高
濃度培養法並びにその装置」に詳述さ扛ている。
製さ扛ている。その詳細は本願と同日に、同−出１頗人
により出ｌｉｍされる出願「発明の名称、浮遊細胞の高
濃度培養法並びにその装置」に詳述さ扛ている。
次いで得られた細胞液を希釈するかもしくは該細胞を単
離しＩＦＮ産生に好適な濃度で新鮮培地に浮遊し誘発剤
で処理する。誘発剤の処理に先立ち、処理剤で処理して
該細胞を単離回収し改めて新鮮培地に再浮遊培萼すると
一層効果的である。
離しＩＦＮ産生に好適な濃度で新鮮培地に浮遊し誘発剤
で処理する。誘発剤の処理に先立ち、処理剤で処理して
該細胞を単離回収し改めて新鮮培地に再浮遊培萼すると
一層効果的である。
かくして培養液中にｉＦＮが産生し、一定時離回収、再
浮遊培養をくり返す。かくして一定本発明で用いるＩＦ
Ｎ産生用の培地としては、？ 及びイーグル！、ＩＩ Ｅ Ｍ培地が適しており、血清
は種々の血清が用いらｎ０５〜２０％、好ましくは３〜
１０％が適している。さらに、インターフェロンの精製
分離を容易ならしめるためには無血清培地も効果的であ
る。無血清培地としては、上記の培地の血清の替りにイ
ンシュリン０．３〜１００ ｐｆ／／−好ましくは１−
１０ ｐｆｌ／ｍｌ。
浮遊培養をくり返す。かくして一定本発明で用いるＩＦ
Ｎ産生用の培地としては、？ 及びイーグル！、ＩＩ Ｅ Ｍ培地が適しており、血清
は種々の血清が用いらｎ０５〜２０％、好ましくは３〜
１０％が適している。さらに、インターフェロンの精製
分離を容易ならしめるためには無血清培地も効果的であ
る。無血清培地としては、上記の培地の血清の替りにイ
ンシュリン０．３〜１００ ｐｆ／／−好ましくは１−
１０ ｐｆｌ／ｍｌ。
トランスフェリン０１〜１００μグｉｍ７！、好’！シ
くは１〜１０μｆ ／ｍｌ、亜セレン酸０１〜１１００
Ｘ１０７． 好ましくは０．５〜１０Ｘ１０’Ｍ。
くは１〜１０μｆ ／ｍｌ、亜セレン酸０１〜１１００
Ｘ１０７． 好ましくは０．５〜１０Ｘ１０’Ｍ。
ピルビン酸ナトリウム０．１〜１ｏ ｏ ｍＭ、 好
捷しくは０５〜２０ ｍＭを加え、場合によシ血清アル
ブミン０．１〜２００μ’ｉ’／ｍｌ、好ましくは１〜
５０μｔ／ｍ７！が適している。さらに、種々のホルモ
ン類、ビタミン類などを加えても良い。
捷しくは０５〜２０ ｍＭを加え、場合によシ血清アル
ブミン０．１〜２００μ’ｉ’／ｍｌ、好ましくは１〜
５０μｔ／ｍ７！が適している。さらに、種々のホルモ
ン類、ビタミン類などを加えても良い。
処理剤による処理方法についてのべると、リンパ芽球細
、唯を用いる場合は公知の誘発剤で処の組合せで゛処理
するとよシ好−ましい結果が得らを用いて誘発する。細
胞濃度は１〜２０ Ｘ ｉ ０６ｃｅｌｌｓ ／ ｍｌ
の範囲であれば良いが、好ましくは４〜７ Ｘ １０６
ｃｅｌｌｓ ／′−が望ましい。
、唯を用いる場合は公知の誘発剤で処の組合せで゛処理
するとよシ好−ましい結果が得らを用いて誘発する。細
胞濃度は１〜２０ Ｘ ｉ ０６ｃｅｌｌｓ ／ ｍｌ
の範囲であれば良いが、好ましくは４〜７ Ｘ １０６
ｃｅｌｌｓ ／′−が望ましい。
センイ芽細胞に於ては、合成二本鎖ＲＮ Ａ（ｐｏｌｙ
工：Ｃ〕等により誘発さｎるが場合によっては、引
き続いて超誘発処理（例えば、シクロヘキサミドとアク
チノマーｆシンＤの組合せ）する。
工：Ｃ〕等により誘発さｎるが場合によっては、引
き続いて超誘発処理（例えば、シクロヘキサミドとアク
チノマーｆシンＤの組合せ）する。
とｎらの誘発処理後、２８°〜３７℃下で１８〜４８時
間培養して、インターフェロンを生産せしめインターフ
ェロンの力価が最大値を示す時点附近（誘発後１５〜２
４時間）で細胞を回収し、さらに新鮮な培地に再浮遊さ
せ、再びインターフェロンを生産せしめる。この操作は
、インターフェロンが分泌され続けるかぎり何度でも行
うことができる。
間培養して、インターフェロンを生産せしめインターフ
ェロンの力価が最大値を示す時点附近（誘発後１５〜２
４時間）で細胞を回収し、さらに新鮮な培地に再浮遊さ
せ、再びインターフェロンを生産せしめる。この操作は
、インターフェロンが分泌され続けるかぎり何度でも行
うことができる。
Ｘ １０−７ Ｍ亜セレン酸を含むＲＰＭニー１６４０
無血清培地に浮遊させた。さらに１ｍＭ／ｍ／！になる
ようにソジウムブチレイトを加え、２４時間、３７℃で
培養した。培養後、上記の条件で細胞を回収し、上記の
新鮮な無血清培地に再浮遊させ、５００ ：ＨＡｕ−／
ｍｌとなる様、センダイウィルスを接押した。３７℃
、７時間処理後、２８℃に温度を下け、１５時間処理し
た。ここで培養液を遠心分離して、細胞を回収すると共
に上清に含ま扛るインターフェロンを回収した。細胞を
さらに、無血清培地に再浮遊させ２８℃、２４時間培養
し、インターフェロンの生産を見た。その結果を下記に
示す。
無血清培地に浮遊させた。さらに１ｍＭ／ｍ／！になる
ようにソジウムブチレイトを加え、２４時間、３７℃で
培養した。培養後、上記の条件で細胞を回収し、上記の
新鮮な無血清培地に再浮遊させ、５００ ：ＨＡｕ−／
ｍｌとなる様、センダイウィルスを接押した。３７℃
、７時間処理後、２８℃に温度を下け、１５時間処理し
た。ここで培養液を遠心分離して、細胞を回収すると共
に上清に含ま扛るインターフェロンを回収した。細胞を
さらに、無血清培地に再浮遊させ２８℃、２４時間培養
し、インターフェロンの生産を見た。その結果を下記に
示す。
表１
実施例２
法ｉで回収し、無血清培地４３０ ｍｌに再浮遊した。
・・ １
さらにｉｍｐ／′−になる様にソジウムブチレイト及び
１ ％ ｖ／ｖとなる様にＤＭＳ Ｏを加え、２４時間
、３７℃で培養した。培養後、実施例１に示した方法に
より、インダクションを行い、遠心分離、新鮮培地への
再浮遊を三回繰返し、それぞ扛の上清に含°まｎるＩＦ
Ｎの生産量を測定した。結果を下記に示す。
１ ％ ｖ／ｖとなる様にＤＭＳ Ｏを加え、２４時間
、３７℃で培養した。培養後、実施例１に示した方法に
より、インダクションを行い、遠心分離、新鮮培地への
再浮遊を三回繰返し、それぞ扛の上清に含°まｎるＩＦ
Ｎの生産量を測定した。結果を下記に示す。
この三回の操作により、１バツチで得らｎる全力価の１
．９倍のインターフェロンが得られた。
．９倍のインターフェロンが得られた。
特許出願人 （＋１４）工業技術院長石板誠−
Claims (2)
- （１）動物細胞を用い、誘発剤により誘発してインター
フェロンを生産するに際し、インターフェロン生産後の
動物細胞を培養液から単離し、これをくり返し使用する
ことを特徴とするインターフエロンの効率的生産法。 - （２）誘発剤による誘発前に処理剤で処理する第１項記
載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57189244A JPS6018398B2 (ja) | 1982-10-29 | 1982-10-29 | インタ−フエロンの効率的生産法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57189244A JPS6018398B2 (ja) | 1982-10-29 | 1982-10-29 | インタ−フエロンの効率的生産法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5982093A true JPS5982093A (ja) | 1984-05-11 |
| JPS6018398B2 JPS6018398B2 (ja) | 1985-05-10 |
Family
ID=16238030
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57189244A Expired JPS6018398B2 (ja) | 1982-10-29 | 1982-10-29 | インタ−フエロンの効率的生産法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6018398B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61135598A (ja) * | 1984-12-04 | 1986-06-23 | Green Cross Corp:The | インタ−フエロン−αの製造方法 |
| EP0649900A3 (en) * | 1993-09-08 | 1996-07-03 | Suntory Ltd | Protein production process. |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS50100223A (ja) * | 1974-01-11 | 1975-08-08 | ||
| JPS50140689A (ja) * | 1974-04-30 | 1975-11-11 | ||
| JPS57105195A (en) * | 1980-10-24 | 1982-06-30 | Nat Res Dev | Production of interferon |
-
1982
- 1982-10-29 JP JP57189244A patent/JPS6018398B2/ja not_active Expired
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS50100223A (ja) * | 1974-01-11 | 1975-08-08 | ||
| JPS50140689A (ja) * | 1974-04-30 | 1975-11-11 | ||
| JPS57105195A (en) * | 1980-10-24 | 1982-06-30 | Nat Res Dev | Production of interferon |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61135598A (ja) * | 1984-12-04 | 1986-06-23 | Green Cross Corp:The | インタ−フエロン−αの製造方法 |
| EP0649900A3 (en) * | 1993-09-08 | 1996-07-03 | Suntory Ltd | Protein production process. |
| US5834249A (en) * | 1993-09-08 | 1998-11-10 | Suntory Limited | Process for production of protein |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6018398B2 (ja) | 1985-05-10 |
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