JPS596886A - 巨大多孔質で親水性の酵素用担体 - Google Patents
巨大多孔質で親水性の酵素用担体Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、巨大多孔質で架橋された親水性の重合物、及
び酵素を固定化するためのその使用方法に関する。
び酵素を固定化するためのその使用方法に関する。
固定化されたすなわち担体に結合された酵素は、特に医
学上の分析イ秦＃、医薬品の製造、光学活性物質の製造
、ならびに栄養剤たとえばイングルコースの製造に利用
される。固定化された酵素を使用する利点は、それが再
使用可能なこと、基質又はその溶液からの分離が容易で
あること、溶解された形に比して、それが多くの場合安
定性を高め、したがって与えられた条件下で寿命が長い
こと、反応生成物の夾雑化を回避しうろことならびにカ
ラム又はそれに類似の反応器内での連続的反応が実施可
能であること等にある。
学上の分析イ秦＃、医薬品の製造、光学活性物質の製造
、ならびに栄養剤たとえばイングルコースの製造に利用
される。固定化された酵素を使用する利点は、それが再
使用可能なこと、基質又はその溶液からの分離が容易で
あること、溶解された形に比して、それが多くの場合安
定性を高め、したがって与えられた条件下で寿命が長い
こと、反応生成物の夾雑化を回避しうろことならびにカ
ラム又はそれに類似の反応器内での連続的反応が実施可
能であること等にある。
酵素の固定化を可能にする多くの方法がすでに知られて
いる。詳細な概説はたとえばメソツズ・イン・エンジモ
ロジーＸＴ−ｒｖ 巻ヶ「イムモビライズド・エンザイ
ムズ」 （アカデミツク出版社１９７６年）及びイムモ
ビライズド・エンザイムズ（シバタ著コウダンシャ／ジ
ョン・ウィリー・アンド・ザンズ社１９７８年）に記載
されている。普通に行われる方法は、酵素の担体への吸
着、イオン又は共有結合による結合であり、その場合に
有機及び無機の担体材料ならびに天然起源のものが用い
られる。
いる。詳細な概説はたとえばメソツズ・イン・エンジモ
ロジーＸＴ−ｒｖ 巻ヶ「イムモビライズド・エンザイ
ムズ」 （アカデミツク出版社１９７６年）及びイムモ
ビライズド・エンザイムズ（シバタ著コウダンシャ／ジ
ョン・ウィリー・アンド・ザンズ社１９７８年）に記載
されている。普通に行われる方法は、酵素の担体への吸
着、イオン又は共有結合による結合であり、その場合に
有機及び無機の担体材料ならびに天然起源のものが用い
られる。
近年ポリエチレンイミンを用いて製造される多数の担体
が報告されている。若干のものでは骨格材料として、酵
素の共有結合のための機能性基を備えたポリエチレンイ
ミンが用いられる（ ２ クロモレクラーレ・ヘミ−１
８２巻１９８１年２６４１〜２６５７頁、ナツールヴイ
ツセンシャフテン６８巻１９５１年５２５及び５２６頁
参照）。他の場合ではポリエチレンイミンが共有結合で
ナイロンに結合され、そしてこれにより酵素の共有結合
を起こす無水マレイン酸／ビニルメチルエーテル共重合
物を結合するために役立っている（スギタチらトロムボ
ース・ヘモスタス、シュツットガルト１９７８年、ｌＳ
９巻４２６〜４６５頁参照）。ポリエチレンイミン含有
担体の第三の群は、部分的に重合体により包囲された無
機物質を基礎とし、この物質」二にポリエチレンイミン
が伺着され、次いでグルタルジアルデヒド、ジイソシア
ネ−１・又は他の多機能性物質が架橋される（ビオヘミ
力・工・ビオフユジ力・アクタ、４８５巻１９７７年３
６７〜６７８頁、゛西゛ドイツ特許出願公告２６０５７
９７号明細書、米国特許４１４１８５７号、同４２６８
４１９号、同４２６８４２３号各明細書参 ５− 照）。これらの担体は、その中に又はその上に存在する
ポリエチレンイミンが共有結合により架橋されている点
ですべて共通している。これには追加の操作工程及び」
二記の記載から知られるように毒性のある物質たとえば
ジイソシアネートの使用が必要である。さらにこの担体
物質は、酵素結合基たとえばインシアネート基又は無水
マレイン酸基を結合すると水分に過敏になり、使用前に
水を遮断して保管せねばならない。
が報告されている。若干のものでは骨格材料として、酵
素の共有結合のための機能性基を備えたポリエチレンイ
ミンが用いられる（ ２ クロモレクラーレ・ヘミ−１
８２巻１９８１年２６４１〜２６５７頁、ナツールヴイ
ツセンシャフテン６８巻１９５１年５２５及び５２６頁
参照）。他の場合ではポリエチレンイミンが共有結合で
ナイロンに結合され、そしてこれにより酵素の共有結合
を起こす無水マレイン酸／ビニルメチルエーテル共重合
物を結合するために役立っている（スギタチらトロムボ
ース・ヘモスタス、シュツットガルト１９７８年、ｌＳ
９巻４２６〜４６５頁参照）。ポリエチレンイミン含有
担体の第三の群は、部分的に重合体により包囲された無
機物質を基礎とし、この物質」二にポリエチレンイミン
が伺着され、次いでグルタルジアルデヒド、ジイソシア
ネ−１・又は他の多機能性物質が架橋される（ビオヘミ
力・工・ビオフユジ力・アクタ、４８５巻１９７７年３
６７〜６７８頁、゛西゛ドイツ特許出願公告２６０５７
９７号明細書、米国特許４１４１８５７号、同４２６８
４１９号、同４２６８４２３号各明細書参 ５− 照）。これらの担体は、その中に又はその上に存在する
ポリエチレンイミンが共有結合により架橋されている点
ですべて共通している。これには追加の操作工程及び」
二記の記載から知られるように毒性のある物質たとえば
ジイソシアネートの使用が必要である。さらにこの担体
物質は、酵素結合基たとえばインシアネート基又は無水
マレイン酸基を結合すると水分に過敏になり、使用前に
水を遮断して保管せねばならない。
本発明の課題は、毒性物質をできるだけ回避して、使用
に際し問題なく取扱うことができる、すなわち特別な留
意基準なしに貯蔵が可能で、かつ良好な機械的及び流体
力学的な性状を有する、高い酵素活性をもつ酵素を永続
的に固定化するための、簡単に製造できる担体を開発す
ることであった。
に際し問題なく取扱うことができる、すなわち特別な留
意基準なしに貯蔵が可能で、かつ良好な機械的及び流体
力学的な性状を有する、高い酵素活性をもつ酵素を永続
的に固定化するための、簡単に製造できる担体を開発す
ることであった。
本発明は、重合物がスルホン基を含有し、そしてポリエ
チレンイミンが架橋されずかつ重合物に共有結合もされ
ていないことを特徴とする、ポリエチレンイミンを負荷
した重合物からの、巨４− 犬多孔質で親水性の酵素用担体である。
チレンイミンが架橋されずかつ重合物に共有結合もされ
ていないことを特徴とする、ポリエチレンイミンを負荷
した重合物からの、巨４− 犬多孔質で親水性の酵素用担体である。
スルホン基含有の重合物力、（ａ）シヒニルヘンゾール
１０〜１００重滑％、 （ｂ） Ｃ，−Ｃ，−アルキル
基によりモノ置換又は多置換されていてよいスチロール
０〜９０重量％及び（Ｃ）スチロール及びジビニルペン
ゾールと共重合可能なモノマー０〜２０重量％からの重
合物を、重合後にスルホン化したものであるものは特に
優れている。
１０〜１００重滑％、 （ｂ） Ｃ，−Ｃ，−アルキル
基によりモノ置換又は多置換されていてよいスチロール
０〜９０重量％及び（Ｃ）スチロール及びジビニルペン
ゾールと共重合可能なモノマー０〜２０重量％からの重
合物を、重合後にスルホン化したものであるものは特に
優れている。
この担体は、巨大多孔質の架橋されたスルホン基含有重
合物粒子を、ポリエチレンイミンで処理することにより
得られる。その場合意外にもポリエチレンイミンの架橋
が省略でき、これにより全く予想外であるが、結合され
た酵素の活性が高められる。
合物粒子を、ポリエチレンイミンで処理することにより
得られる。その場合意外にもポリエチレンイミンの架橋
が省略でき、これにより全く予想外であるが、結合され
た酵素の活性が高められる。
ラジカル重合により製造される重合物は、ジビニルペン
ゾール１０〜１００ｉｉ％好マｔ、 ＜は１５〜４０重
量％、核において０１〜Ｃ４−アルキル基によりモノ置
換又は多置換されていてもよいスチロール０〜９０重量
％好ましくは輸６０〜８５重鼠％、ならびにジビニルペ
ンゾール及びスチｆｉｉ −ルと共重合が可能なモノマ
ーたとえばアクリル酸又はメタクリル酸のアルキルエス
テル０〜２０重量％好ましくは０〜１０重量％を重合含
有する。水溶性モノマーたとえばアクリル酸、メタクリ
ル酸又はビニルイミダゾールの添加も、同様に少量（１
０重量％まで）で可能である。特に好ましい重合物は、
工業用ジビニルペンゾール（ジビニルペンゾール約５０
％、残部は主としてエチルスチロールで、そのほかトリ
ビニルペンゾールも少量含まれる）６０〜６０重量％と
スチロール７０〜４０重量％から成る。
ゾール１０〜１００ｉｉ％好マｔ、 ＜は１５〜４０重
量％、核において０１〜Ｃ４−アルキル基によりモノ置
換又は多置換されていてもよいスチロール０〜９０重量
％好ましくは輸６０〜８５重鼠％、ならびにジビニルペ
ンゾール及びスチｆｉｉ −ルと共重合が可能なモノマ
ーたとえばアクリル酸又はメタクリル酸のアルキルエス
テル０〜２０重量％好ましくは０〜１０重量％を重合含
有する。水溶性モノマーたとえばアクリル酸、メタクリ
ル酸又はビニルイミダゾールの添加も、同様に少量（１
０重量％まで）で可能である。特に好ましい重合物は、
工業用ジビニルペンゾール（ジビニルペンゾール約５０
％、残部は主としてエチルスチロールで、そのほかトリ
ビニルペンゾールも少量含まれる）６０〜６０重量％と
スチロール７０〜４０重量％から成る。
モノマー（又はその混合物）の重合は、外相としての水
による懸濁重合の形で行われ、その場合に０．０５〜３
Ｔｒｒｍ好ましくは０．２〜０．８ ｍの粒径に達する
ようにする。重合物の巨大多孔質性を得るためには、孔
隙形成剤が用いられる。
による懸濁重合の形で行われ、その場合に０．０５〜３
Ｔｒｒｍ好ましくは０．２〜０．８ ｍの粒径に達する
ようにする。重合物の巨大多孔質性を得るためには、孔
隙形成剤が用いられる。
孔隙形成剤としては、この重合を妨害することがなく、
水と混合せず、モノマーを溶解するが重合体は溶解しな
いか又はわずかに膨潤させる程度の液体、たとえば７〜
１２個の炭素原子を有するアルカン、好ましくはｎ−オ
クタン又は１００℃以−にの沸点を有するベンジンが適
する。
水と混合せず、モノマーを溶解するが重合体は溶解しな
いか又はわずかに膨潤させる程度の液体、たとえば７〜
１２個の炭素原子を有するアルカン、好ましくはｎ−オ
クタン又は１００℃以−にの沸点を有するベンジンが適
する。
孔隙形成剤の量はモノマーに対し５０〜４００重量％で
ある。孔隙形成剤量の」−眠は、重合物の機械的性状か
ら定められ、またそれぞれの孔隙形成剤にも依存する。
ある。孔隙形成剤量の」−眠は、重合物の機械的性状か
ら定められ、またそれぞれの孔隙形成剤にも依存する。
水銀ポロシメーターによる測定で０．８〜４ Ｃｍ”／
ｇ 、好ましくは１．２〜６゜Ｏｔｓ”／ｊｉの孔容積
を生ずることが重要であって、その場合の孔径は２．５
Ｘ １０−’〜２ Ｘ ＬＯ−”咽好ましくは４Ｘ１
０−５〜５Ｘ１０’ｍｍである。孔隙形成剤は出来」二
つだ重合物から低沸点溶剤たとえばアセトンにより洗出
され、次いで重合物は乾燥される。巨大多孔質の粒状重
合物の製造は公知であって、たとえば英国特許８４９１
２２号明細書が参照される。
ｇ 、好ましくは１．２〜６゜Ｏｔｓ”／ｊｉの孔容積
を生ずることが重要であって、その場合の孔径は２．５
Ｘ １０−’〜２ Ｘ ＬＯ−”咽好ましくは４Ｘ１
０−５〜５Ｘ１０’ｍｍである。孔隙形成剤は出来」二
つだ重合物から低沸点溶剤たとえばアセトンにより洗出
され、次いで重合物は乾燥される。巨大多孔質の粒状重
合物の製造は公知であって、たとえば英国特許８４９１
２２号明細書が参照される。
重合を塊状で行うことも当然可能であるが、その場合は
重合物を後から粉砕せねばならず、その結果粒子の形状
が不規則となって流体力学７− 的性質の低下を来たすという欠点がある。
重合物を後から粉砕せねばならず、その結果粒子の形状
が不規則となって流体力学７− 的性質の低下を来たすという欠点がある。
固定化酵素のより高い活性を得るために、欧州特許出願
公開４９３８５号明細書の方法によって、重合物の表面
を機械的に後処理することが有利である。
公開４９３８５号明細書の方法によって、重合物の表面
を機械的に後処理することが有利である。
重合物を親水性にするために、その表面をスルホン化す
る。スルホン化は自体既知の手段で硫酸又はクロルスル
ホン酸を用いて行われる。
る。スルホン化は自体既知の手段で硫酸又はクロルスル
ホン酸を用いて行われる。
スルホン化法の説明は特に下記文献が参照される。ブラ
ウン、チャドロン及びケルン著［プラクティクム・デル
・マクロモレクラーレン・オルガニツシエン・ヘミ−Ｊ
１９６６年２３４頁；ウルマンス・エンチクロイ１４
４版１６巻６０１頁；ホーペン−ワイル著「メトーデン
・デル・オルガニツシエン・ヘミ−ｊ １９６３年ＸＩ
Ｖ／２巻６８２〜６８５頁。スルホン化は、重合表面が
それに続くポリエチレンイミンの負荷のため充分に酸性
でかつ親水性になるまで行われる。
ウン、チャドロン及びケルン著［プラクティクム・デル
・マクロモレクラーレン・オルガニツシエン・ヘミ−Ｊ
１９６６年２３４頁；ウルマンス・エンチクロイ１４
４版１６巻６０１頁；ホーペン−ワイル著「メトーデン
・デル・オルガニツシエン・ヘミ−ｊ １９６３年ＸＩ
Ｖ／２巻６８２〜６８５頁。スルホン化は、重合表面が
それに続くポリエチレンイミンの負荷のため充分に酸性
でかつ親水性になるまで行われる。
ポリエチレンイミンは、スルホン化重合物の上に水溶液
で施される。直鎖状でも分岐状でも８− よいポリエチレンイミンの分子量は、１０００〜５００
００好ましくは５００００〜４５０００である。
で施される。直鎖状でも分岐状でも８− よいポリエチレンイミンの分子量は、１０００〜５００
００好ましくは５００００〜４５０００である。
浸透作用による重合物の機械的損傷を避けるため、ポリ
エチレンイミンを数回に分けて添加すべきであり、その
際のその溶液濃度は最初に約２重量％で、いずれの場合
も３重量％を越えないようにする。スルホン化された重
合物の量に対して１０倍景の水溶液を用いる場合は、溶
液のポリエチレンイミン最終濃度は１〜６重量％である
。最適なポリエチレンイミン負荷は、予備試験において
固定化可能な酵素活性を測定することにより容易に定め
られる。ポリエチレンイミンの添加は、０〜１００℃好
ましくは室温で１〜１２時間好ましくは４〜８時間の間
行われる。ポリエチレンイミンの濃度が低いので、溶液
の粘度を下げるために高温度を適用する必要がない。ポ
リエチレンイミンを５〜３０重量％好ましくは１０〜２
０重量％添加したのち、担体な水洗できる。しかしそれ
は必要ではない。
エチレンイミンを数回に分けて添加すべきであり、その
際のその溶液濃度は最初に約２重量％で、いずれの場合
も３重量％を越えないようにする。スルホン化された重
合物の量に対して１０倍景の水溶液を用いる場合は、溶
液のポリエチレンイミン最終濃度は１〜６重量％である
。最適なポリエチレンイミン負荷は、予備試験において
固定化可能な酵素活性を測定することにより容易に定め
られる。ポリエチレンイミンの添加は、０〜１００℃好
ましくは室温で１〜１２時間好ましくは４〜８時間の間
行われる。ポリエチレンイミンの濃度が低いので、溶液
の粘度を下げるために高温度を適用する必要がない。ポ
リエチレンイミンを５〜３０重量％好ましくは１０〜２
０重量％添加したのち、担体な水洗できる。しかしそれ
は必要ではない。
担体は酵素を負荷するまで適宜に乾燥状又は湿潤状で貯
蔵することができる。
蔵することができる。
酵素を担体に負荷させることは、酵素の種類により好１
：（〜くは緩衝液を含有してもよい酵素水溶液を用いて
行われる。酵素水溶液中の濃度は１〜１００ ｍｇ ／
ｍｅ、負荷時間は１〜８０時間好ましくは１０〜４０時
間である。酵素溶液の温度は、酵素によって異なるが０
〜９０℃である。負荷ののち水洗して担体から過剰の酵
素を除き、酵素活性を有する不均一触媒として、非連続
又は連続の操作において、たとえばカラム中に装入する
。酵素負荷担体の貯蔵性は、酵素によって異なる。通常
は酵素負荷を、使用の短時間前に行うことが好ましい。
：（〜くは緩衝液を含有してもよい酵素水溶液を用いて
行われる。酵素水溶液中の濃度は１〜１００ ｍｇ ／
ｍｅ、負荷時間は１〜８０時間好ましくは１０〜４０時
間である。酵素溶液の温度は、酵素によって異なるが０
〜９０℃である。負荷ののち水洗して担体から過剰の酵
素を除き、酵素活性を有する不均一触媒として、非連続
又は連続の操作において、たとえばカラム中に装入する
。酵素負荷担体の貯蔵性は、酵素によって異なる。通常
は酵素負荷を、使用の短時間前に行うことが好ましい。
共有結合は別として、他の結合機構を原則的に除外する
ことなしに、担体上に酵素がイオン結合されることが認
められる。
ことなしに、担体上に酵素がイオン結合されることが認
められる。
この担体は取扱いの簡単な点で優れている。
なぜならば担体が水分により不活性化されることがなく
、また使用前に活性化する必要もないからである。これ
は高度の酵素活性な鴇固定化することを可能にし、卓越
した流体力学的性質を有し、かつ微生物により侵されな
い。
、また使用前に活性化する必要もないからである。これ
は高度の酵素活性な鴇固定化することを可能にし、卓越
した流体力学的性質を有し、かつ微生物により侵されな
い。
実施例１
Ａ）巨大多孔質粒状重合物の製造
攪拌器及び還流冷却器を備えたフラスコに窒素を導通し
ながら、スチロール５０９、工業用ジビニルペンゾール
５０ｇ、ｎ−オクタン１８０ ｍｌ、ラジカル生成剤と
してのラウロイルパーオキシド１ｇ、水５００ ｒｎｌ
！ならびに懸濁助剤としてのポリビニルピロリドン１ｇ
を装入し、７０°Ｃに４時間次いで９５℃に４時間加熱
して粒状重合物を製造する。重合物を順次にアセトン、
水及びメタノールで洗浄し、次いで７０℃で真空乾燥す
る。この重合物を３．１ Ｘ １０−２〜５×１０１０
７２ｃの粒子大きさにふるい分け、こうしてふるい分け
された重合物２５ｇを、内容２５０ｍ１のガラス製フラ
スコ中で機械的に激しく振とうしたのち、再度アセトン
、水及びメタノールで洗浄し、次いで７０℃で真空乾燥
する。
ながら、スチロール５０９、工業用ジビニルペンゾール
５０ｇ、ｎ−オクタン１８０ ｍｌ、ラジカル生成剤と
してのラウロイルパーオキシド１ｇ、水５００ ｒｎｌ
！ならびに懸濁助剤としてのポリビニルピロリドン１ｇ
を装入し、７０°Ｃに４時間次いで９５℃に４時間加熱
して粒状重合物を製造する。重合物を順次にアセトン、
水及びメタノールで洗浄し、次いで７０℃で真空乾燥す
る。この重合物を３．１ Ｘ １０−２〜５×１０１０
７２ｃの粒子大きさにふるい分け、こうしてふるい分け
された重合物２５ｇを、内容２５０ｍ１のガラス製フラ
スコ中で機械的に激しく振とうしたのち、再度アセトン
、水及びメタノールで洗浄し、次いで７０℃で真空乾燥
する。
Ｂ）巨大多孔質粒状重合物のスルホン化Ａ）により製造
された重合物２０ｇを、濃硫酸ｓｏｏｍｅと一緒に室温
で１時間、次いで１００℃で８時間攪拌する。重合物を
ガラスＰ材上で吸引１過し、まず半濃硫酸中に、次いで
水中に移し、水を多数回交換して充分に洗浄し、その後
に７０°Ｃで真空乾燥する。収量：３１．５，９゜Ｃ）
スルホン化された粒状重合物のポリエチレンイミンによ
る負荷 Ｂ）によりスルホン化された重合物１０ｇを、約４００
００の分子量を有するポリエチレンイミン１．５ｇの水
溶液９０ｍ１中で、室温で２時間攪拌する。次いでさら
に水８．５ ｍｌ、に溶解したポリエチレンイミン１．
５ｇを加え、４時間攪拌する。担体をガラス沢材上で吸
引ｆ過し、水１００ ｍｌで洗浄し、次いで７０℃で真
空乾燥する。
された重合物２０ｇを、濃硫酸ｓｏｏｍｅと一緒に室温
で１時間、次いで１００℃で８時間攪拌する。重合物を
ガラスＰ材上で吸引１過し、まず半濃硫酸中に、次いで
水中に移し、水を多数回交換して充分に洗浄し、その後
に７０°Ｃで真空乾燥する。収量：３１．５，９゜Ｃ）
スルホン化された粒状重合物のポリエチレンイミンによ
る負荷 Ｂ）によりスルホン化された重合物１０ｇを、約４００
００の分子量を有するポリエチレンイミン１．５ｇの水
溶液９０ｍ１中で、室温で２時間攪拌する。次いでさら
に水８．５ ｍｌ、に溶解したポリエチレンイミン１．
５ｇを加え、４時間攪拌する。担体をガラス沢材上で吸
引ｆ過し、水１００ ｍｌで洗浄し、次いで７０℃で真
空乾燥する。
Ｄ）担体の酵素による負荷及び固定化された酵素活性の
測定 担体０，２ｇを、０．００５Ｍ酢酸ナトリウム水溶液（
ｐＨ５，６）中のインベルターゼ１００■（１２− １５０国際単位／ｍｇ）の溶液’１０ｍ１に添加し、室
温で２１時間攪拌する。次いで担体を、５分間２回及び
１時間１回それぞれ０．００２５Ｍ酢酸ナトリウム水溶
液（ｐＨ！５．３ ） ５０ ｍｌで洗浄する。
測定 担体０，２ｇを、０．００５Ｍ酢酸ナトリウム水溶液（
ｐＨ５，６）中のインベルターゼ１００■（１２− １５０国際単位／ｍｇ）の溶液’１０ｍ１に添加し、室
温で２１時間攪拌する。次いで担体を、５分間２回及び
１時間１回それぞれ０．００２５Ｍ酢酸ナトリウム水溶
液（ｐＨ！５．３ ） ５０ ｍｌで洗浄する。
酵素活性（固定化された活性）を測定するため、重合物
を０．０１ Ｍ酢酸ナトリウム水溶液（ｐＨ５，５）中
の蔗糖１Ｚ５９の溶液！５０ ｍｌの中で振とうする。
を０．０１ Ｍ酢酸ナトリウム水溶液（ｐＨ５，５）中
の蔗糖１Ｚ５９の溶液！５０ ｍｌの中で振とうする。
蔗糖の加水分解を旋光針により調べると、担体１１及び
１時間当り蔗糖４５．６．９の固定化活性が認められる
。
１時間当り蔗糖４５．６．９の固定化活性が認められる
。
比較例（架橋されたポリエチレンを有する担体〕実施例
１（Ａ）〜（Ｃ）により製造された担体１０ｇを、攪拌
器、還流冷却器及び乾燥管（塩化カルシウムを充填）を
備えた丸底フラスコ中で、無水アセトン中のエピコー）
８２８ （シェル社製）１０ｇの溶液１００ ｍ、ｌ
と一緒に５０℃で５時間攪拌する。次いで溶液をガラス
ｒ材上で吸引１過して担体を分離し、そして担体を７０
°Ｃで真空乾燥する。インベルターゼによる担体の負荷
とそれに続く結合されたインベルターゼ活性の試験を実
施例１（Ｄ）によって行うと、２３．４．９蔗糖／Ｊｆ
１体１ｇ・１時間の活性が得られる。本発明による担体
に比して活性が低いことが知られる。
１（Ａ）〜（Ｃ）により製造された担体１０ｇを、攪拌
器、還流冷却器及び乾燥管（塩化カルシウムを充填）を
備えた丸底フラスコ中で、無水アセトン中のエピコー）
８２８ （シェル社製）１０ｇの溶液１００ ｍ、ｌ
と一緒に５０℃で５時間攪拌する。次いで溶液をガラス
ｒ材上で吸引１過して担体を分離し、そして担体を７０
°Ｃで真空乾燥する。インベルターゼによる担体の負荷
とそれに続く結合されたインベルターゼ活性の試験を実
施例１（Ｄ）によって行うと、２３．４．９蔗糖／Ｊｆ
１体１ｇ・１時間の活性が得られる。本発明による担体
に比して活性が低いことが知られる。
実施例２
実施例１と同様にして、担体０．５ｇを直径１゜６ ｃ
ｍのカラムに充填する。次いで０．０５Ｍ酢酸ナトリウ
ム緩衝液（ｐＨ５，５） １００ｍｌ中のβ−フラクト
シダーゼ５００ ｍ９の溶液を、室温で１ＱＱｍ（！／
時間の速度で、１６時間カラムを通してポンプ循環させ
る。非結合酵素の除去のため、０℃で８６ ｍｅ ７時
間の速度で、０．０５ Ｍ酢酸ナトリウム水溶液（ｐＨ
５，３）中の蔗糖３５０ ｊ；ｌ／影の溶液をカラムを
通してポンプ輸送する。蔗糖の加水分解を旋光針により
測定する。初めにはβ−フラクトシダーゼを負荷した担
体１ｇ当り、蔗糖２１５ｇ／時間が加水分解される。７
０日後に担体は、その最初に固定化された活性糸や７％
を有する。
ｍのカラムに充填する。次いで０．０５Ｍ酢酸ナトリウ
ム緩衝液（ｐＨ５，５） １００ｍｌ中のβ−フラクト
シダーゼ５００ ｍ９の溶液を、室温で１ＱＱｍ（！／
時間の速度で、１６時間カラムを通してポンプ循環させ
る。非結合酵素の除去のため、０℃で８６ ｍｅ ７時
間の速度で、０．０５ Ｍ酢酸ナトリウム水溶液（ｐＨ
５，３）中の蔗糖３５０ ｊ；ｌ／影の溶液をカラムを
通してポンプ輸送する。蔗糖の加水分解を旋光針により
測定する。初めにはβ−フラクトシダーゼを負荷した担
体１ｇ当り、蔗糖２１５ｇ／時間が加水分解される。７
０日後に担体は、その最初に固定化された活性糸や７％
を有する。
実施例６
実施例２で用いた担体０．２ｇを、０．、０５ Ｍ酢酸
ナトリウム水溶液（ｐＨ４，８）中のβ−アミラーゼ１
００ｍ９（２８国際単位／ｍ９）の溶液２０ｍ１中で、
４℃で６４時間振と５する。次いで担体を、それぞれ室
温で５分間２回及び１時間２回、ｐＨ４，８の０．０５
Ｍ酢酸ナトリウム水溶液各５Ｄｍ１で洗浄する。固定化
した酵素の活性を測定するため、担体を０．０１６Ｍ酢
酸ナトリウム水溶液（ｐＨ４，８）中のズルコウスキー
による殿粉（メルク社製）５ｇの溶液５０ｍ１中で、３
０℃で６０分間振とうする。生成したマルトースヲ、ヘ
ーレンフエルト法（メソツズ・イン・エンジモロジー５
巻１４９頁１９５５年）により３，５−ジニトロサリチ
ル酸を用いて定量する。担体の活性は、１１及び１時間
当り生成マルトース１．１ｇである。
ナトリウム水溶液（ｐＨ４，８）中のβ−アミラーゼ１
００ｍ９（２８国際単位／ｍ９）の溶液２０ｍ１中で、
４℃で６４時間振と５する。次いで担体を、それぞれ室
温で５分間２回及び１時間２回、ｐＨ４，８の０．０５
Ｍ酢酸ナトリウム水溶液各５Ｄｍ１で洗浄する。固定化
した酵素の活性を測定するため、担体を０．０１６Ｍ酢
酸ナトリウム水溶液（ｐＨ４，８）中のズルコウスキー
による殿粉（メルク社製）５ｇの溶液５０ｍ１中で、３
０℃で６０分間振とうする。生成したマルトースヲ、ヘ
ーレンフエルト法（メソツズ・イン・エンジモロジー５
巻１４９頁１９５５年）により３，５−ジニトロサリチ
ル酸を用いて定量する。担体の活性は、１１及び１時間
当り生成マルトース１．１ｇである。
実施例４
実施例６と同様にしてアミログルコシダーゼ １５−
を担体に結合させる。担体の活性は、１ｇ及び１時間当
り生成グルコース０，６ｇである。
り生成グルコース０，６ｇである。
出願人 バスフ・アクチェンゲゼルシャフト代理人 弁
理士 小 林 正 雄 １６− ドイツ連邦共和国６７００ルードウ イツヒスハーフエン・コペルニ クスシュトラーセ４９
理士 小 林 正 雄 １６− ドイツ連邦共和国６７００ルードウ イツヒスハーフエン・コペルニ クスシュトラーセ４９
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、 重合物がスルホン基を含有し、そしてポリエチレ
ンイミンが架橋されずかつ重合物に共有結合もされてい
ないことを特徴とする、ポリエチレンイミンを負荷した
重合物からの、巨大多孔質で親水性の酵素用担体。 ２、 スルホン基含有の重合物力、（ａ）ジビニルペン
ゾール１０〜１００重量％、 （ｂ） Ｃ，〜Ｃ４−ア
ルキル基によりモノ置換又は多置換されていてよいスチ
ロール０〜ｑｏ重ｘ％及ヒ（Ｃ）スチロール及びジビニ
ルペンゾールと共重合可能なモノマー０〜２０重量％か
らの重合物を、重合後にスルホン化したものであること
を特徴とする特許請求の範囲第１項に記載の担体。 ６、担体が０．８〜４Ｃｍ３７ｇの孔容積及び２．５
Ｘ １０−５〜２）＜１０−’ｉｎの孔径を有すること
を特徴とする特許請求の範囲第１項に記載の担体。 ４、担体が１．２〜６．０ ｃｍ３７９の孔容積及び４
Ｘ １０−’〜５Ｘ１０−’ａの孔径を有することを
特徴とする特許請求の範囲第１項に記載の担体。 ５、 使用するポリエチレンイミンが１０００〜５００
００の分子量を有することを特徴とする特許請求の範囲
第１項に記載の担体。 ６、特許請求の範囲第１項ないし第４項のいずれかに記
載の担体な酵素の固定化に使用する方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE32238851 | 1982-06-26 | ||
| DE19823223885 DE3223885A1 (de) | 1982-06-26 | 1982-06-26 | Makroporoese, hydrophile traeger fuer enzyme |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS596886A true JPS596886A (ja) | 1984-01-13 |
Family
ID=6166909
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58107985A Pending JPS596886A (ja) | 1982-06-26 | 1983-06-17 | 巨大多孔質で親水性の酵素用担体 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4551482A (ja) |
| EP (1) | EP0097898B1 (ja) |
| JP (1) | JPS596886A (ja) |
| AT (1) | ATE32086T1 (ja) |
| DE (2) | DE3223885A1 (ja) |
Families Citing this family (26)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3537259A1 (de) * | 1985-10-19 | 1987-04-23 | Hoechst Ag | Copolymerisat, verfahren zu seiner herstellung und seine verwendung als enzymtraeger |
| US4753983A (en) * | 1986-05-07 | 1988-06-28 | Bioprobe International, Inc. | Polymeric matrix for affinity chromatography and immobilization of ligands |
| CA1315968C (en) * | 1987-04-24 | 1993-04-13 | David Colin Sherrington | Substrate and process for making a substrate |
| GB8729889D0 (en) * | 1987-12-22 | 1988-02-03 | Unilever Plc | Bio-catalysts support systems |
| US4952519A (en) * | 1988-05-02 | 1990-08-28 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Protein immobilization with poly(ethyleneimine) derivatized with a hydroprobic group |
| US5628943A (en) * | 1991-03-27 | 1997-05-13 | Woog; Manfred J. | Method of making resin kernels and foam-like material containing reactive media |
| US6045899A (en) * | 1996-12-12 | 2000-04-04 | Usf Filtration & Separations Group, Inc. | Highly assymetric, hydrophilic, microfiltration membranes having large pore diameters |
| US6652720B1 (en) | 2001-05-31 | 2003-11-25 | Instrumentation Laboratory Company | Analytical instruments, biosensors and methods thereof |
| US6872297B2 (en) * | 2001-05-31 | 2005-03-29 | Instrumentation Laboratory Company | Analytical instruments, biosensors and methods thereof |
| US6960466B2 (en) * | 2001-05-31 | 2005-11-01 | Instrumentation Laboratory Company | Composite membrane containing a cross-linked enzyme matrix for a biosensor |
| US7906102B2 (en) | 2001-10-03 | 2011-03-15 | Vanderbilt University | Ligands to radiation-induced molecules |
| CA2476556A1 (en) | 2002-02-13 | 2003-08-21 | Duke University | Modulation of immune response by non-peptide binding stress response polypeptides |
| US20080159957A1 (en) * | 2002-10-01 | 2008-07-03 | W Michael Kavanaugh | Anti-Cancer and Anti-Infectious Disease Compositions and Methods for Using Same |
| WO2004053483A2 (en) * | 2002-12-11 | 2004-06-24 | Instrumentation Laboratory Company | Multi-analyte reference solutions |
| US20040154933A1 (en) * | 2003-02-11 | 2004-08-12 | Instrumentation Laboratory Company | Polymeric membranes for use in electrochemical sensors |
| US20040256227A1 (en) * | 2003-02-11 | 2004-12-23 | Jungwon Shin | Electrochemical urea sensors and methods of making the same |
| US20110200525A1 (en) * | 2008-10-09 | 2011-08-18 | Patz Jr Edward F | Vhh antibody fragments for use in the detection and treatment of cancer |
| US8518405B2 (en) | 2009-10-08 | 2013-08-27 | The University Of North Carolina At Charlotte | Tumor specific antibodies and uses therefor |
| US8889373B2 (en) | 2010-08-12 | 2014-11-18 | Eastman Chemical Company | Enzyme catalyst immobilized on porous fluoropolymer support |
| SG191155A1 (en) | 2010-12-14 | 2013-07-31 | Univ Singapore | Human monoclonal antibody with specificity for dengue virus serotype 1 e protein and uses thereof |
| DK2968606T3 (da) | 2013-03-15 | 2020-10-26 | Univ Loma Linda | Behandling af autoimmune sygdomme |
| WO2015183346A2 (en) | 2014-01-31 | 2015-12-03 | Washington University | Imaging and treatment of pathophysiologic conditions by cerenkov radiation |
| US9974870B2 (en) | 2014-06-09 | 2018-05-22 | Washington University | Compositions and methods for treatment and imaging using nanoparticles |
| ES2830392T3 (es) | 2014-07-23 | 2021-06-03 | Ohio State Innovation Foundation | Métodos y composiciones relacionados con fragmentos de anticuerpo que se unen a la glicoproteína 72 asociada a tumores (TAG-72) |
| EP3172222A4 (en) | 2014-07-24 | 2018-03-21 | Washington University | Compositions targeting radiation-induced molecules and methods of use thereof |
| US11788091B2 (en) | 2019-08-21 | 2023-10-17 | University Of Virginia Patent Foundation | Methods and compositions for diagnosing and treating prostate cancer based on long noncoding RNA overlapping the LCK gene that regulates prostate cancer cell growth |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3326866A (en) * | 1963-06-10 | 1967-06-20 | Mobil Oil Corp | Sulfonated resin catalyst with enhanced activity |
| NL6815256A (ja) * | 1968-10-25 | 1970-04-28 | ||
| JPS504638A (ja) * | 1973-04-06 | 1975-01-18 | ||
| FR2307817A1 (fr) * | 1975-04-14 | 1976-11-12 | Mitsubishi Chem Ind | Isomerase insoluble du glucose |
| US4141857A (en) * | 1976-04-30 | 1979-02-27 | Uop Inc. | Support matrices for immobilized enzymes |
| DE2834539A1 (de) * | 1978-08-07 | 1980-02-21 | Basf Ag | Makroporoese polymere als traegermaterial zur kovalenten bindung von proteinen |
| US4268419A (en) * | 1979-11-16 | 1981-05-19 | Uop Inc. | Support matrices for immobilized enzymes |
| US4268423A (en) * | 1979-11-16 | 1981-05-19 | Uop Inc. | Support matrices for immobilized enzymes |
| DE3037198A1 (de) * | 1980-10-02 | 1982-05-06 | Basf Ag, 6700 Ludwigshafen | Perlpolymerisat und dessen verwendung zur immobilisierung von enzymen |
| DE3248331A1 (de) * | 1982-12-28 | 1984-06-28 | Bayer Ag, 5090 Leverkusen | So(pfeil abwaerts)3(pfeil abwaerts)/imid-addukte, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als sulfonierungsmittel |
-
1982
- 1982-06-26 DE DE19823223885 patent/DE3223885A1/de not_active Withdrawn
-
1983
- 1983-06-17 JP JP58107985A patent/JPS596886A/ja active Pending
- 1983-06-20 DE DE8383105992T patent/DE3375402D1/de not_active Expired
- 1983-06-20 AT AT83105992T patent/ATE32086T1/de not_active IP Right Cessation
- 1983-06-20 EP EP83105992A patent/EP0097898B1/de not_active Expired
- 1983-06-23 US US06/507,108 patent/US4551482A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ATE32086T1 (de) | 1988-02-15 |
| DE3375402D1 (en) | 1988-02-25 |
| EP0097898B1 (de) | 1988-01-20 |
| EP0097898A2 (de) | 1984-01-11 |
| DE3223885A1 (de) | 1983-12-29 |
| US4551482A (en) | 1985-11-05 |
| EP0097898A3 (en) | 1986-01-15 |
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