JPS59500515A - フオスフオエノ−ルピルビン酸のカリウム塩の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ７オス７オエノールビルピン酸のカリウム塩の製造法技術分野 本発明１１、有機化学合成及び殊に燐酸化剤の合成に関するものでおる。

背景技術 ７オス７オエ／−ルビルピン酸（ＰＥＰ　）　ｌ’！、殊にＡＴＰ、すなわちア デノシン三燐ｅｆ再生するために望ましい酵素触媒反応によって促進さｎる有機 合成に対して特に有効な燐酸化剤を表わす。従って、そｆ′Ｌに、アセチル＠酸 （ＡｃＰ　）に対して１つの有用な選択性を成し、それにより若干の利点を有す る。実際に、ＰＥＰＩグ、ＡｃＰよりも高エネルギーの燐酸化剤と認められ、溶 液中でより安定であり、それ故に特に半工業的適用でより簡単に使用される。

本発明は、カリウム塩の形の７オス７オエノールビルビン酸、すなわちＰｉ−Ｈ の製造法に関するものである。カリウム（り、殆んどの酵素系に対して不活性で ちるので、その存在は、例えばピルビン酸キナーゼの作用を放出するために必要 であり、こうして得らｎた塩１グ、直接に燐酸化過程に使用することができる。

発明の要約 本発明方法は、連続的に実施さｎる２工程からなり、次に記載されているとおり である： ａ１式： ［式中、Ｒに別個に低級アルキル基を表わすり≧又（１−緒になって低級アルキ レニル基を表わす〕のエノールピルビン酸のジアルキルホスフェートを得るため のトリアルキルホスファイトを用いてのハロピルビン酸の処理、ならびに す、こうして得られた化合物の水性媒体中及び水酸化カリウムの存在下での面木 分解 本発明方法１は、次の反応式を使用して詳観することこうして得られたカリウム 塩（反応媒体中で不溶性）（１、簡単な濾過によって反応混合物から容易に分離 することができ、こうして燐酸化斧」として直接に使用することができる。

このことについて、その活性を確定する目的で、本発明方法によって得られた生 成物の試料（マ、グルコース−６−ホスフェートを合成するために使用さｎた。

次に、この方法（１、以下に詳細に記載さｎている。

ｆ　ル：７　Ｘ　Ｑ、（３Ｑ　Ｑ　％　ル、ＰＩＣＰ−Ｋ　ｏ、　８００　モ” 　、環化マグネシウム３５ミリモル、及び蒸留水８ｏ〇−中の２−メルカプトエ タノール１０ミリモルの溶ｍｆ固体のＫＯＨでｐＨ７，６に変え、次にｐＨ−測 定電極及び電磁攪拌機を装備した２１の３首フラスコ中に装入した。この溶液を アルゴンの流ｆ′ＬＫよって脱ガス化し、次にこれにＡＴＰ　１．２０ミリモル ならびにピルビン酸キナーゼ（１２６０Ｕ）及びヘキソキナーゼ（８６３Ｕ）（ この場合、各酵素１丁、ホリアクリルアミＰゲル中で先に固定さ九ているー”　 Ｊ、Ａｍ、Ｏｈｅｍ、Ｓｏｃ、　”、第１０２巻、第６３２４頁、ｌ：１９８０ 年〕、参照）の水性懸濁液（０，７８／）をアルゴン雰囲気下で添加した。この 反応混合物（２０℃で１２モルのＨＯＩの数滴の場合による添万口によってｐＨ ７，５〜７，６に保持さｎた）を８５日間攪拌した。Ｈ，Ｖ、ベルクマイヤー（ Ｂｅｒｇｍｅｙｅｒ）著、６メソツメ・オブ・エンザイマテイツク・アナリシス （Ｍｅｔｈｏａｓ　ｏｆ　Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　Ａ：ｎａｌｙｓｉｓ　）　”、 フエアラーク・ヒエミー・ワインハイム、アカデミツク拳プレス（Ｖｅｒｌａｇ 　Ｏｈｅｍｉｅ　Ｗｅｉｎｈｅｉｍ　、　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ）社（ Ｎ、Ｙ、在〕刊、（１９７４年）、に記載さ汎た方法により実施さ九た生化学試 験は、グルコース−６−ホス７エー）Ｇ−６−Ｐ　Ｏ，７７モルの存在を示した （収率９６％）。

前記のように、置換分Ｒ（ま、低級アルキル基、好ましくはメチル又１丁エチル を表わすことができるか又に例えば−〇Ｈ２−ＯＨ２−のような２価のアルキレ ニル基を表わすことができる。従って、例えばトリメチルホスファイト、トリエ チルホスファイト又はメチルエチレンホスファイトハ、トリアルキルホスファイ トとして使用することができ、この場合トリメチルホスファイトに、好ましいも のである。

ハロピルビン酸としては、クロルピルビン記文（クブロムピルビン酸を使用する ことができる。これらの化合物（１、公知方法によって得ることができる。

本発明方法の第１工程は、有機媒体中で、例えばエーテル、ジエチルエーテル、 エステル、例えばエチルアセテート、又（ヶ芳香族炭化水素、例えばトルエン又 （ゴベンゼンのような浴剤の存在下で実施される。最高の収率１丁、ジエチルエ ーテルを使用した場合に観察さｎた。

得られたホスフェートの面木分解よりなる次の工程の収率は、使用した水酸化カ リウムの量に著しく依存する。従って、ｐＨの最適な値に、はぼ１，７〜２．８ であり、こしに、使用したハロピルビン酸の初期量に対してほぼ０，７０〜０． ９０当量に等しい水酸化カリウムの量に相当する。

本発明方法によって得らｎた７オス７オエノ−ルビルピン配カリウム１１、非吸 湿性結晶生成物の形で存在する。七九に、安定性であυ、高い純度を有し、かつ 先の１製なしに直接に酵素合成に使用することができる。従って、本発明方法は 、ＰＥＰ製造の公知方法を越えた一定の利点を提供する。

これらの利点の中で、本発明方法によって形成されたカリウム塙の直接の沈殿に より万口水分解混合物七ｎ自体が得ら几ると（八う事実を強シすることは、妥当 なことである。従って、大量の水の非経済的な蒸発（１回避され、ならびにモノ シクロヘキシルアンモニウム塩の沈殿及びクラーク（０１ａｒｋ　）及びカーノ ζイ（ｘｘｒｂｙ）によって記載さ几た処理（以下の反応式、参照）のようなイ オン交換樹脂処理（１回避される。

好ましい実施態様の記載 不発明を次の実施例によってさらに詳説するが、この場合実施例中で温変に、摂 氏温反で記載されている実施例 ａ、２−ヒＰロキシアクリル叙のジメチルホス７エー２１９（４，３７モル）（ 純度９７　’ｉｏ　）　［”　Ｅｉｏｃｈｅｍ、Ｐｒｅｐ。

”、第１１巻、第１０１頁〜第１０４頁、（１９６６年）、に記載の方法によっ て得らｎた〕の溶液上３．５時間にわたって攪拌しながら無水エーテル３．８５ ｆｆｌ甲のトリメチルホスファイト５５７ｄ（４，７２モル〕の溶液に流面した 。添加速度をエーテルを一定の還流下で保持する程度に上節した。攪拌を室温で １時間連続させた後、この混合物を減圧下で濃縮し、所望の生成物から形成さｎ ｆｃ褐色の粘稠な油１００２ｇ’を得た。

ｂ、ＦＥＰ４０前記ａ、Ｋ記載の方法によって得られた油を蒸留水１．６７７に 溶解し、２００　で攪拌しながら１５時間保持した。この時間の間に観察さｎた 自然の加水分解により、１ｎＰ２６４モルを生じる（収率６０く）。この溶液を 水浴中で冷却し、次に固体のＫＯＨ２６ＴＩ！　（純度８ｏ呪＝４．０モル）を 添加し、次いで無水エタノール２．７１を添加した。こうして形成さｎた白色の 沈殿物を濾過によって捕集し、冷たい無水エタノール８００−で洗浄し、１為つ １３．３ｐａで乾燥してＰＥＰ−Ｋ　５３１１！　（純度９５呪；２．４５モル 、出発物質として使用したピルビン酸の重量に対する収率５０呪）を得た。

最適化試験に、ＫＯＨの種々のｆを用いる反応を実施することに二って行なわれ た。次表に（グ、得ら八た結果が鼾めら几ている。

（傘）ハロピルビン酸の初期ｆｌ　Ｋ　対ス；ｂ（ｒ＊）　ＦＥＰ−には沈殿し ないが、その代りに油の形で分唾する 国際調査報告・

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ０ の７オス７オエノールピルビン酸のカリウム塩（ＦＤＰ−Ｋ　）を製造する方法 ＩＣ５−て、２つの次の反応〔式中、Ｒは別個に低級アルキル基を表わすり４又 （まＪ’Ｍになって低級アルキレニル基を表わす〕のエノールピルビン酸のジア ルキルホスフェートを得るためのトリアルキルホスファイト’ｉＨ−用いてのハ ロピルビン酸の処理、ならびに す、こうして得らｎた化合物の水性媒体中及び水酸化カリウムの存在下での加水 分解 を連成的に実施することを特徴とする、式：の７オス７オエノールピルビン酸の カリウム塩（ＰＥＰ−Ｋ　）の製造法。 ２、トリメチルホスファイト又はメチルエチレンホスファイトラトリアルキルホ スファイトとして使用する、請求の範囲第１項記載の方法− ３、処理工程ａ、Ｋ定義さｎている反応をジエチルエーテル中で実施する、請求 の範囲第１項記載の方法４、　水酸化カリウムを初期ハロピルビン酸に対して０ ゜７０〜０．９５当量の量で使用する、請求の範囲島１項記載の方法。