JPS594438B2 - アスコルビン酸の燐酸エステルの製法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は広範囲の食品に使用しうる安定な栄養２０価値
のあるビタミンＣ源として有用なホスホリル誘導体類を
製造するためのモノアスコルビルーおよびジアスコルビ
ルー２−ホスフェートの合成法に関する。

さらに詳しくは、、本発明は、アスコルビン酸誘導体と
ホスホリル化剤とを第三級アミン２５の存在下に反応さ
せ、かつそのホスホリル化反応の全期間にわたつて反応
混合物のｐＨ値を比較的高水準に保つことを特徴とする
合成法に関する。このようにすると、目的のホスホリル
化生成物の極めて高い収率を達成することができ、そし
て分３０折曲に高純度な化合物が生成し、このものはビ
タミンＣ添加物として使用することができる。ジアスコ
ビルホスフエトの生成を目的とする場合には第三級アミ
ンを除外することができ、そして反応温度を高めること
ができる。３５Ｌ−アスコルビン酸（ビタミンＣ）は均
衡栄養食の必須成分であり、、このビタミンの推奨摂取
許容量は確立されている。

しかし、ビタミンＣは空気中の酸素と非常に反応性であ
るので、食品中で最も低安定なビタミンである。例えば
アスコルビン酸は酸素と迅速に反応してデヒドロアスコ
ルビン酸になることが知られている。このデヒドロアス
コルビン酸は完全なビタミンＣ活性を保有しているが、
このものは迅速かつ不可逆的に分解して、ビタミンＣ効
力のない化合物類になつてしまう、またアスコルビン酸
は酸性媒中で高温度において脱水反応により分解される
。従つてトウまたはバターに直接Ｌ−アスコルビン酸を
配合して、これを焼いたり、フライにしようとする試み
は、効果のないことが示されている。この理由はＬ−ア
スコルビン酸のビタミン活性の小量だけが高温における
調理に残存するにすぎないからである。その他の場合、
普通ビタミンＣのすぐれた担体と考えられるある種の食
品の色が、アスコルビン酸の添加により悪変することが
ある。例えば、ツルコケモモ（クランペリイ）・ジユー
ズ中の色素類はＬ一アスコルピン酸の添加により褪色し
、一方予備調理したジヤガイモのフレークにＬ−アスコ
ルビン酸を散布すると望ましくない桃色が発現する。Ｌ
−アスコルビン酸の２−ホスフエートエステル類はＬ−
アスコルビン酸自体ほどには還元力の強い化合物でない
ので、かかるエステル類を用いれば上記の如き望ましく
ない変色反応のいずれも発生しないと思われる。Ｌ−ア
スコルビン酸は、それを特定の化学誘導体に変えること
によつて、酸素および熱に対して＝層安定化されうるこ
とが知られている。

特にＬ−アスコルベート２−ホスフエートまたはＬ−ア
スコルベート２−サルフエートの如きアスコルビン酸の
２一位置の無機エステル類は、Ｌ−アスコルビン酸のよ
うには容易に酸化されない。さらには、Ｌ−アスコルビ
ン酸の２−ホスフエートおよび２−サルフエート誘導体
類は動物中でビタミン活性を示し、動物によつて有用な
安定なビタミンＣ誘導体とされ、このものは例えば魚の
餌の補充剤として用いられることが知られている。ホス
フエートエステル基を開裂することが知られている酵素
が動物の消化系に存在するから、かかる２−ホスフエー
トエステルは、殆ど全ての動物中で活性を示すと考えら
れる。Ｌ−アスコルベート２−ホスフエートを合成する
いくつかの方法が過去に提案されてきておりまた該ホス
フエートエステルが期待通り高ビタミンＣ効力を有する
ことが示されている。

例えば、クトロ（Ｅ．ＣｕｔＯｌＯ）およびラリツア（
Ａ．Ｌａｒｉｚｚａ）は、モルモツト（Ｇｕｉｎｅａｐ
ｉｇ）にＬ−アスコルベート２−ホスフエトマグネシウ
ム塩を給餌または注射すると、モルモツトが尿中にＬ一
アスコルベートを排泄することを発表している〔Ｇａｚ
ｚ．Ｇｈｉｍ．Ｉｔａｌ．９ｌ（１９６１）、９６４〕
。Ｌ−アスコルベート２−ホスフエートを与えられた動
物によつて排泄されたＬ−アスコルビン酸の量は、当量
のＬ−アスコルビン酸を与えた動物によつて排泄された
量と同じであつた。これらの結果は、Ｌ−アスコルベー
ト２−ホスフエートは腸内で定量的にＬ−アスコルベー
トと無機燐酸塩とに変化することを示している。同様な
結果は、ヒトの消化系におけるアルカリ性燐酸塩の作用
によつて、ヒトにおいても期待されよう。分析化学的に
純粋と見られるＬ−アスコルベート２−ホスフエトおよ
びその誘導体を工業的に実施しうる収率で合成しようと
する先行試行は、殆ど成功していない。かかる先行試行
は前述のクトロ等の文献、ならびにノムラ等のＣｈｅｍ
．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．ｌ９（７）（１９７１）１４
３３；ピンクレーの米国特許第３６７１５４９号明細書
；およびドイツ特許第１８０５９５８号明細書に記載さ
れている。しかし、一般にこれまでに提案されている方
法は、目的生成物の収率が比較的低いものや、ビタミン
Ｃ源として食品系に使用しうる分析化学的に純粋なホス
フエートエステル誘導体を与えることができないもので
ある。従つて、本発明の最も重要な目的は、分析化学的
に純粋な状態に容易に回収でき、しかも酸素の存在によ
りまたは高熱条件下で活性を失うことなく食品系中にお
けるビタミンＣ源またはビタミンプレミツクスとして使
用しうるアスコルビン酸のホスフエートエステルを高収
率で製造するための工業的に使用しうる方法を提供する
ことにある。

本発明によれば、５・６−イソプロピリデン一Ｌ−アル
コルビン酸の２一燐酸エステルを製造するに際して、約
０．３〜０．６モル濃度の５・６−イソプロピリデン一
Ｌ−アスコルビン酸、約１．５〜３．０モル濃度のピリ
ジンおよび初期にＰＨを約１２〜１３の値に上昇させる
に足る量のアルカリ金属水酸化物を水培質中で混合し、
その混合物に対してある量のオキシ塩化燐をホスホリル
化剤として添加し、その混合物の成分を約−１０℃〜１
０℃の温度で反応させ、この反応中に追加量のオキシ塩
化燐（ホスホリル化剤）、および反応の全期間にわたり
混合物のＰＨを約１２〜１３の値に維持するための追加
量のアルカリ金属水酸化物を混合物に添加して、５・６
−インプロピリデン一Ｌ−アスコルビン酸の２一燐酸工
、スチルを主として生成させる、各工程からなることを
特徴とする製法が提供される。

最も好ましい態様において、水中で５−６−０−イソプ
ロピリデン一Ｌ−アスコルビン酸、オキシ塩化燐および
該アスコルビン酸に対して約５倍過剰のピリジンを、約
−５℃〜＋５℃の温度において、かつそのホスホリル化
反応の全期間中に反応混合物のＰＨ値を約１２〜１３に
維持するに足る量のカリウム、セシウムもしくはルビジ
ウムの水酸化物の存在下で反応させることにより該アス
コルビン酸の２一燐酸エステルが得られる。

反応混合物に添加されるアルカリ金属水酸化物は、反応
混合物に混和性であり、適度な塩基強度を有し、かつ反
応混合物からピリジンを相分離させない。ジアスコルビ
ル一２・２′−ジホスフエートを実質上含まないＬ−ア
ルコルベート一２−ホスフエートを高収率で生成させる
のに最も好ましいアルカリ金属水酸化物は、カリウム、
ルビジウムまたはセシウムの水酸化物である。水酸化ナ
トリウムは実質上定量的な２−ホスホリル化を生じさせ
るが、反応生成物が可成りの量のホスフエートジエステ
ルを含むことがある。中程度の可溶性の水酸化リチウム
の存在下では、ホスホリル化反応はいく分か遅くなる。
この理由のため、水酸化リチウムを用いると反応混合物
中にいく分かの未反応アスコルビン酸原料が残る。従つ
て水酸化リチウムの使用は余り望ましくない。本発明方
法において２−ホスホリル化物の生成を増加するために
は、存在させる反応剤の量および反応条件を適切に制御
すべきことが判明した。

例えば原料のアスコルビン酸の量に対するピリジンの量
は最終収率に関係する一因子である。原料アスコルビン
酸に対してピリジンを約５倍程度（モル基準）の過剰で
存在させるのが有利であることが判明した。アルカリ性
反応媒質中における濃度範囲に関しては、ピリジンは約
１．５〜３Ｍの濃度となる量で添加されるべきであり、
一方原料アスコルビン酸はその濃度が約０．３〜０．６
Ｍになるような量で添加されるべきである。最も好まし
い態様では、ピリジンおよび原料アスコルビン酸の濃度
範囲は、それぞれ約２．２〜２．６Ｍおよび約０．４〜
０．５Ｍである。ホスホリル化反応の間に反応混合物に
添加するアルカリ金属水酸化物の量も２一燐酸エステル
生成物の生成を最大化するように制御でき、ホスホリル
化反応中に反応混合物のＰＨ値を約１２〜１３に維持す
るのがその目的に適切であることが判明した。

反応温度は約−１０℃〜＋１０℃の値に維持するのが適
当である。

反応温度は、反応混合物が液体状態に留まり、かつピリ
ジンが分離して分離相を形成しないような最も低い温度
であるのが好ましく、上記の温度範囲は本発明方法にお
いて満足すべきであることが判明した。アルカリ金属水
酸化物およびオキシ塩化燐（ホスホリル化剤）も必要な
時間間隔で反応混合物に間欠的に添加することにより２
一燐酸エステル生成物の生成を最大化できる。ホスホリ
ル化反応の完結後、２−ホスフエートモノエステルは、
無定形マグネシウム塩の形でまたは結晶性トリシクロヘ
キシルアンモニウム塩（ＴＣＨＡＰ）の形で単離するこ
とができる。

この塩のトリシクロヘキシルアンモニウム基は、ナトリ
ウム、バリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム
、鉄、コバルトおよび亜鉛の如きカチオン置換元素で置
換しうる。好ましい回収工程において、上記マグネシウ
ム塩およびトリシクロヘキシルアンモニウム塩は、ホス
ホリル化反応完結後に、反応混合物を水素イオン型の第
１のイオン交換塔に通し、その第１のイオン交換塔を洗
浄し、その流出物を捕集し、そして水酸化マグネシウム
をその流出物に添加してエステルのマグネシウム塩を形
成させることからなる工程によつて作られる。不溶性リ
ン酸マグネシウム除去後、水性溶液を蒸発させて小容積
とし、エタノールを添加してマグネシウムＬ−アスコル
ベートを沈澱させる。９５％エタノールで洗浄すること
によりマグネジウムＬ−アスコルベート２−ホスフエー
トを捕集および精製することができる。

このエタノール洗浄によつて、塩化マグネシウムおよび
マグネシウムジアスコルビル２・２′−ホスフエートが
除去される。この時で、単離されたマグネシウム塩は実
質的に純粋なＬ−アスコルベート２−ホスフエートであ
り、このものは痕跡の無機マグネシウム燐酸塩および塩
化物を含んでいる。結晶性ＴＣＨＡＰを単離するために
上記の単離マグネシウム塩を酸型の第２のイオン交換塔
に通し、その第２のイオン交換塔を水で洗浄し、その流
出物に適量のシクロヘキシルアミンを添加することによ
りアルカリ性のＰＨに調整する。この時点でトリシクロ
ヘキシルアンモニウム塩（Ｌ−アスコルベート２−ホス
フエートの場合にはトリシクロヘキシルアンモニウムＬ
−アスコルベート２−ホスフエート）は、結晶化法によ
り精製し、次いで水溶液として、これを水素イオン型強
酸性カチオン交換樹脂に通す。このイオン交換の流出物
を炭酸ソーダのような塩で塩基性ＰＨに調節し、得られ
る溶液を蒸発させる。このような操作によつて、ナトリ
ウムＬ−アスコルベート２−ホスフエートが高収率で得
られる。本発明方法によるアスコルビン酸の２−モノホ
スフエートエステルの高収率の原因となる機構は、完全
には解明されていない。

しかしながら、反応の全期間にわたるＰＨ維持が、小量
のホスホリル化剤を用いて、２一位置に迅速かつ実質上
完全なホスホリル化を可能にしているものと考えられる
。さらにはアスコルビン酸誘導体とオキシ塩化燐との間
の反応で生ずる初期生成物（Ｌ−アスコルベート２−ホ
スホルジクロジデート）と第３級アミンとが、反応して
中間体Ｌ−アスコルベート２−（ピリジニウムホスホル
クロリデート）を生じ）次いでこの中間体が迅速に加水
分解して目的モノエステルになるものと考えられる。反
応混合物にピリジンその他の第３級アミンが存在しなけ
れば、初期生成ジクロリデート中間体は、第２のアスコ
ルビン酸誘導体分子と反応して、ジアスコルビルホスフ
エート生成物を与えるものと考えられる。これに関連し
て、約１０７以下のイオン化定数（水中）を有する第３
級アミンを用いると、反応媒中でのホスホリル化剤の分
解が減少するであろうから、かかるアミンは一般に好ま
しい。下記実施例により本発明を説明する。

実施例 １ ２５ａ（３１０ミリモル）のピリジンおよび１００ＷＬ
Ｉの蒸留水（予め沸騰させ、窒素ガスでパージしたもの
）を、ＰＨ電極、磁気式撹拌棒および窒素導入管を備え
た小形ビーカ一に入れた。

Ｃａｎ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．４７（１９６９）、２４９４に
記載のＫ．Ｇ．Ａ．ジヤクソンおよびＪ．Ｋ．Ｎ．ジヨ
ンズの方法で作つた５・６−Ｑ−イソプロピリデン一Ｌ
−アスコルビン酸（以下、ＩＡＡと略記する）の１２．
３ｙ（５７．０ミリモル）をビーカ一に入れ、１０Ｍ水
酸化カリウム水溶液約１２ｍ１の添加により反応混合物
のＰＨを１３に調節した。このＰＨ調節の間、反応混合
物に窒素を吹き込み、かつ反応混合物を塩／氷浴で約−
５℃に冷却した。この時点における反応混合物中のピリ
ジンおよびＩＡＡの濃度はそれぞれ約２．３Ｍおよび約
０．４４Ｍであつた。次いでオキシ塩化燐（７．３ｒｎ
１１７９．８ミリモル）を注射ポンプを用いてプラスチ
ツク管（内径０．２５ｍ７１Ｌ）を介して、３ｒｎ１／
時の一定速度で反応混合物中へ圧入した。

この注射ポンプはハワード・アパラタス社（米マサチウ
セツツ州、メリス）製のコンパクト・インフユウジヨン
（ＣＯｍｐａｃｔＩｎｆｕｓｉＯｎ）ＭＯｄｅｌ應９７
５であつた。反応混合物の温度を約−５℃〜＋５℃の範
囲内に維持し、ＰＨを１０Ｍ水酸化カリウム水溶液の周
期的添加によつて約１３の水準に維持した。反応の間に
添加した１０Ｍ水酸化カリウム水溶液の量は約４６ｍ１
であつた。オキ乞塩化燐の添加を完了した後、反応混合
物に水を加えて、約２５０ｄの容積とし、この混合物の
１ｍ１を水素イオン型の強酸性カチオン交換樹脂（１５
ｍ１）に通した。

次いでイオン交換樹脂コラムを水（１５０ａ）で洗浄し
、流出液を約２５０ｄの容積として、この最後の溶液の
１．０ｍ１をＰＨｌＯ．Ｏの水で５０ＴＩＬＩ，の容積
にした。このＰＨｌＯ．Ｏの溶液の吸光度を２６４ｎｍ
で測定し、トリクロルヘキシルアンモニウム−Ｌ−アス
コルビン酸２−ホスフエートエステルの分子吸光係数（
ε＝１６．０×１０３）を用いて、２−ホスホリル化率
を推定した。溶液の吸光度は０．３５０であり、これは
２一位置のホスホリル化９６．３％に相当するものであ
つた。２−ホスホリル化度を推定するために２６４ｎｍ
およびＰＨｌＯにおける吸光度を使用することは、下記
の理由により可能である。

（１）未反応１ＡＡおよび３−ホスホリル化物は２一ホ
スホリル化物よりも低い吸光度を与えると考えられる。

（２） ＩＡＡのホスホリル化における主要な副生物す
なわちビス一（５・６−０−イソプロピリデン一Ｌ−ア
スコルビル）２・２′−ホスフエートの分子吸光係数は
３０．１Ｘ１０３（ＰＨｌＯにおいて）であり、従つて
この数値はＬ−アスコルビン酸２−ホスフエートの分子
吸光係数の殆ど２倍に達する大きさである。

これらの理由故にＰＨｌＯにおいて測定される高吸光度
は高度の２−ホスホリル化を示すものである。

しかしこのＵＶデータはＬ−アスコルビン酸２−ホスフ
エート、ホスフエートジエステルまたは他の可能な生成
物（例：２−ピロホスフエート）の間の区別のために使
用できない。反応混合物中の未反応１ＡＡの量は沃素滴
定法により測定した。

前記の２５０ｍ１の容積にした全反応混合物の一部（５
．０ｄ）を３％メタ燐酸水溶液５０ｒｎ１で稀釈し、こ
の混合物を濃塩酸でＰＨ２に調整し、０．１Ｍ沃素溶液
によつて未反応１ＡＡを滴定した。［ＡＡの対照試料の
滴定量から、ＩＡＡのわずかに２．２％のものが、その
末端ジオール基でホスホリル化されていないことが判つ
た。反応混合物中のホスホリル化された成分の数とそれ
らの量は、高圧液体クロマトグラフイ（以下１１ＰＬＣ
と略記）で測定した。使用クロマトグラフイ装置は、Ｕ
Ｖ検出器（２５４ｎｍ）を備えた米マサチユセツツ洲ミ
ルポートのウオータース・アゾシェード社製モデルＭ−
６０００であつた。粒子寸法３７〜５０ミクロンのアニ
オノ交換樹脂〔ウオータース・アゾシェード製のボンダ
パク（ＢＯｎｄａｐａｌｃ）ＡＸ／コラシル（ＣＯｒａ
ｓｉｌ）型〕を詰めた４フイートＸ１／８インチのステ
ンレス鋼管のコラムを用いて分析を実施した。濃塩酸で
ＰＨ４．４に調整した０．１Ｍ燐二水素カリウム水溶液
を溶離液として用いて、０．５ｍ１／分の流量で５０ポ
ンド／平方インチおよび２５℃においてコラムを操作し
た。イソプロピリデン基の加水分解除去前および後の両
方で、反応混合物をＨＰＬＣで分析した。

このθ点に関して、イソプロピリデン基の除去前にＨＰ
ＬＣによつて反応混合物を試験すると、反応混合物のそ
の各成分への分離が良好であるので、イソプロピリデン
基除去前のｌ［ＰＬＣ分析の方が有利である。

他方、脱アセトネート化生成物のＨＰＬＣ分析によると
、反応生成物のクロマトグラフイ特性と、充分に特性の
明らかな物質〔ビス＋Ｌ−アスコルビル）２・２′−ホ
スフエートバリウム塩およびトリシクロヘキシルアンモ
ニウムＬ−アスコルベート２−ホスフエート〕の分析化
学的に純粋な試料のクロマトグラフイ特性との直接比較
が可能であつた。従つて、予め２５０ａに稀釈してあつ
た全反応混合物の一部（１．０ｒｎ１）を５０℃以下で
減圧下に蒸発させてピリジンを除いた。残留したアルカ
リ性溶液を水で２５．０ｍ１に稀釈し、この溶液の２部
（１．０ｍ１）を、１００ｍ１目盛付フラスコ中のバリ
ウム−Ｌ−アルコルベート２−サルフエート・ジハイド
レートの標準溶液（水１００ａ中１００η）の１ｄと一
緒にした。得られた溶液の１０．０マイクロｌの３試料
（それぞれ２．３４ナノモルのＬ−アスコルベート２−
サルフエート含有）をクロマトグラフイ装置に注入し、
５・６−０−イソプロピリデン一Ｌ−アスコルベート２
−ホスフエートおよびビス（５・６−０−イソプロピリ
デン一Ｌ−アスコルビル）２・２′−ホスフエートの量
を、Ｌ−アスコルビン酸のクロマトグラフイ易動度に相
対して、それぞれ３．４および６．０のクロマトグラフ
イ易動度（Ｒａ）をもつ両ピーク下の領域（面積）から
求めた。反応試料の注入容積のわずかな差異に基く誤差
は、１．０ｍ１の内部標準溶液を１０．０ＷＬＩに稀釈
して得られた溶液を８回、１０マイクロｌづつ注入する
ことによつて現れた平均面積を用いて相殺した。反応混
合物について現れた５・６−０−イソプロピリデン一Ｌ
一ァスコルベート２−ホスJャGートの修正面積は、等モ
ル量のトリシクロヘキシルアンモニウムＬ−アスコルベ
ート２−ホスフエートと同じ面積を与えるものと仮定し
た。５・６−０−イソプロピリデン一Ｌ−アルコルベー
ト２−ホスフエートへのＩＡＡの転化率は計算で９７％
であつた。

２−ホスフエートエステルへのＩＡＡの高転化率は、イ
ソプロピリデン基の加水分解除去後のＨＰＬＣ試験によ
つて確認された。

前記の２５０ａにした反応混合物の一部（１．０ａ）を
、水素イオン型強酸性カチオン交換樹脂（１５ｍ１）の
コラムに入れた。コラムを水（１５０ｍ１）で洗浄し、
その流出液を２５０ｍ１の容積とした。ここに得られた
溶液の１０マイクロｌの三試料を注入し、Ｒａ−２．８
におけるピーク下の面積を積分した。分析化学的に純粋
なトリシクロヘキシルアンモニウムＬ−アスコルベート
２−ホスフエートの標準溶液（０．５ｆ７／ｌ）を１０
マイクロｌ注入し、その純粋化合物に対する装置の応答
領域を決定した。３試料のそれぞれの領域（面積）を用
いて計算したところ、出発物質（ＩＡＡ）の９６．２％
がＬ−アスコルベート２−ホスフエートに転化したこと
が認められた。

吸着帯もまた反応混合物には痕跡のホスフエートジエス
テルが含まれているにすぎないことを示した。さらには
吸着帯は、反応生成物がイオン交換コラムから溶離され
るやいなや、そのイソプロピリデン基は完全に除去され
ることも示した。ＵＶおよびＨＰＬＣにより分析した反
応混合物の残部（２４７ａ）を水素イオン型強酸性カチ
オン 二交換樹脂（６００ｍ１）のコラムに通した。

合計流出液が２０００ｒｎ１になるまでコラムを洗浄し
た。そのコラム流出液のＰＨｌＯおよび２６４ｎｍにお
ける吸光度は、ＩＡＡの化学量論的２−ホスホリル化に
対して期待されるＬ−アルコルベート２２一ホスフエー
トの理論量（５７ミリモル）の９３．４％の回収率（５
３．１ミリモル）を示した。コラム流出液（ＰＨｌＯ）
を２５℃で２時間靜置し固体炭酸マグネシウム（約１１
ｙ）を加えてＰＨを約９０に調節した。次いでこの混合
物を５３℃で一晩静置し、Ｆ過した。戸液におけるＬ−
アスコルベート２−ホスフエートの回収率は９１．７％
であつた。次にＦ液を減圧下で濃縮して５０ｄの容積に
し、この濃縮液を無水アルコール（３００ｍ１）に加え
た。沈澱したマグネシウムＬ−アスコ ３ルベート２−
ホスフエートを遠心分離で捕集し、９５％エタノール（
２×１００ＴＩＬＩ）で洗浄した。エタノール洗液を高
圧液体クロマトグラフイ０止ＬＣ）で試験したところ、
マグネシウムビスー（Ｌ−アスコルビル）２・２′−ホ
スフエートが ４そのエタノール洗液中に比較的高濃度
で存在し、固体残渣はかかるビス化合物の痕跡量を含む
にすぎないことが判つた。この不溶性物質を減圧下で乾
燥して、実質上純粋なマグネシウムＬ−アスコルベート
２−ホスフエート（１９．５７）を自由流動粉末として
得た（収率約８６％）。遠心分離工程の上澄液およびエ
タノール洗液を一緒にして得た溶液（このものは理論量
のＬ−アスコルベート２−ホスフエートの６％を含んで
いた）を減圧下に蒸発乾固した。

得られた固体残渣を水（５０ｗＬ１）中に溶解し、水酸
化バリウム（２ｙ）を加えて、バリウムＬ−アルコルベ
ート２一ホスフエートを沈澱させた。このバリウム塩は
ＰＨ７の水に難溶性であつたが、ＰＨ３〜４で可溶性に
なつた。バリウムＬ−アスコルベート２一ホスフエート
を遠心分離で捕集し、上澄液を棄てた（ＵＶ損失率０．
２４％）。沈澱バリウムＬ−アスコルベート２−ホスフ
エートを固体マグネシウムＬ−アスコルベート２−ホス
フエートと一緒にした混合物を、水素イオン型強酸性カ
チオン交換樹脂（６００ａ）のコラムに通した。コラム
流出液（２０００ａ；このものはＵＶ法で測定して理論
量のＬ−アスコルベート２−ホスフエートの８２％含有
）を、シクロヘキシルアミンでＰＨ９に調整し、減圧下
で濃縮して、濃厚なシロツプ状にした。無水アルコール
を添加し、一晩冷却することによつて、１８ｙの結晶性
トリシクロヘキシルアンモニウムＬ−アスコルベート２
−ホスフエート（ＴＣＨＡＰ）を得た。このものはＭｐ
ｌ７８〜１８２（分解）および旋光度〔α〕＋３０ｌ（
Ｑｌ．Ｏ，．Ｈ２Ｏ）を有していた。結晶の二回目の回
収（３．１ｆ７）によつて、全収量は２１．１ｙ（７０
％）になつた。母液はＵＶ分析により測定して、約１８
％のＬ−アスコルベート２−ホスフエートを保持してい
た。得られたＴＣＨＡＰの構造を元素分析、ＵＶ吸光法
および核磁気共鳴（Ｎｍｒ）法によつて決定した。ＴＣ
ＨＡＰの元素分析により、生成化合物ぱ、Ｌ−アスコル
ベートモノーホスフエートエステルであることが認めら
れた。この元素組成と、ＮｍｒおよびＵＶ法のデータに
よれば、ピリジンとアルカリとの混合物中における５・
６−０−イソプロピリデンＬ−アスコルピン酸およびオ
キシ塩化燐の反応から単離される主生成物がＬ−アスコ
ルベート２−ホスフエートであることは、殆ど疑いがな
い。

実施例 ２ ５・６−０−イソプロピリデン一Ｌ−アスコルビン酸（
［ＡＡ）のホスホリル化に対するＰＨ増大の効果を測定
するため下記の実験を行なつた。

６．１５ｙ（２８ミリモル）のＩＡＡ（初期には０．４
４Ｍ）、１０ｍ１のピリジン（初期には約１．９Ｍ）お
よび５５ｍ１の水酸化カリウムの水溶液からなる反応混
合物を用いて、実施例１の一般操作で実施した。

オキシ塩化燐（６．１ｙ１４０ミリモル）を点滴添加し
反応混合物のＰＨを、必要により ＊：く１０Ｍ水酸化
カリウム溶液の添加により、一定に維持した。すべての
反応における温度を−５℃〜＋５℃の範囲に維持した。
５つの別々の実験を、それぞれ、ＰＨ８、１０、１２、
１３および１４の水準で実施した。

それぞれの反応から回収したホスホリル化生成物を、実
施例１で述べたようにして、ＵＶｌ高圧液体クロマトグ
ラフイ（ＨＰＬＣ）および沃素滴定により分析して、２
一位置におけるホスホリル化度ならびにモノおよびジエ
ステル生成物のそれぞれの量を測定した。反応生成物に
ついてのこれらの分析の結果を下記の表１に示す。

上記のＵデータから、反応混合物のＰＨが８から１３に
増大すると、２−ホスホリル化度が６７％から９３％に
増加する一方、未反応１ＡＡが２４％から６．７％に減
少することが判る。

すべての反応混合物（１〜５）の最大ＵＶ吸収はＰＨ７
において２５８ｎＴｒＬで起こつた。このことは主たる
ホスホリル化反応が３−０Ｈ位置よりもむしろ２−０Ｈ
位置で起こることを示している。Ｌ−アスコルベート３
−ホスフエートの最大ＵＶ吸収＊引よ、ＰＨ７．Ｏにお
いて２３８ｎｍであると予想された。この値はＬ−アス
コルビル３−フエニルホスフエートの最大吸収である（
Ａ．Ｓ．ボンド等、Ａｒｃｈ．ＢｌＯｃｈｅｍ．ＢｌＯ
ｐｈｙｓ．、１９７２、１５３、Ｐ．２Ｏｌ）。下記表
に、５・６−Ｑ−イソプロピリデンＬ−アスコルビン酸
（ＩＡＡＳを出発物質として得たホスホリル化反応混合
物のＨＰＬＣ分析の結果を示す。

ＰＨｌＯにおいて得られた反応混合物（表１１反応滝２
）についてのＰ（３１）核磁共鳴の測定値によると、そ
の混合物にはわずかに２種類の有機ホスホリル化生成物
が存在することが証明された。

主３１Ｐ共鳴シグナルは５０％燐酸水溶液の外部標準の
シグナルから２．７９ｐｐｍにおいて観察され、弱い方
のシグナル成分は該標準から０．４ｐｐｍにおいて観察
された（いずれもダウンフイールドＤＯｗｎｆｉｅｌｄ
）。主３１Ｐシグナルは、反応混合物に加えて純粋トリ
シクロヘキシルアンモニウムＬ−アスコルベート２−ホ
スフエートのシグナルと同一であつた。３１Ｐの第３共
鳴シグナルも反応混合物に観察され、これはオルトホス
フエートのものと同一であつた。

実施例 ３ 本発明のホスホリル化反応に対するピリジンの効果を下
記のような実験により検討した。

さらにピリジンの代りにトリエチルアミンを用いること
による効果も試験した。実験６〜９は下記の表の脚注（
ａ）のようにして実施した。それぞれの反応でピリジン
濃度を変えた。出発物質は５・６−０イソプロピリデン
一Ｌ−アスコルビン酸であつた。表に示した結果から、
約１２〜１３の最も好ましいＰＨ水準において、ピリジ
ンの量を調節してホスフエートジエステルの生成を抑制
し、それにより、Ｌ−アスコルベート２−ホスフエート
の殆ど定量的な収率（９６％）を得られるようにすべき
ことが判る。

経済的な理由によつては、もちろん、低濃度ピリジンを
用いて所望の効果が得られる。反応混合物中において５
％のビス一（Ｌアスコルビル）２・２′−ホスフエート
は少ないように思えるけれども（表、実験廠６）、この
程度の量の不純物は、トリシクロヘキシルアンモニウム
Ｌ−アルコルベート２−ホスフエート（ＴＣＨＡＰ）の
結晶化を妨害する問題を引き起こしうる。

さらには、かかる不純物ホスフエートジエステルは、分
別結晶によつてＴＣＨＡＰから分離するのが困難であつ
た。もしピリジンの使用量が少なすぎると反応混合物中
のビス一（Ｌ−アスコルビル）２・ｉ−ホスフエートの
量が増大すると考えられる。他方、もしピリジンの使用
量が多すぎると、反応混合物が二つの相に分離してしま
つて、出発物質１ＡＡについての反応を完結するのに必
要なオキシ塩化燐の量を著しく増大させる。別の一連の
３実験において、表の実験７を繰返したが、この場合に
は、ピリジンの代りに等量基準でトリエチルアミンを用
い、そしてオキシ塩化燐を３種の濃度（１．４、１．８
および３．０当量）で用いた。これらの反応において、
未反応１ＡＡはそれぞれ２１％、１９％、および２０％
であつたが、２−ホスホリル化率はそれぞれ６２％、６
７％および６２％であつた。１．４当量のＰＯＸ３を用
いて得た反応混合物のＨＰＬＣ分析によつてその反応混
合物が５２％のＬ−アスコルベート２ホスフエートおよ
び１３％のジアスコルビル２・２′−ホスフエートを含
んでいることが認められた。

ホスホリル化反応から第３級アミンを完全に除いた場合
の効果を表に示す。ホスフエートジエステルの収率が３
％（ＰＨ８）から３２％（ＰＨｌ３）まで増大し、一方
、一未反応出発物質の量は３８％から〈１％まで減少し
た。出発物質は５・６−０−イソプロピリデン一Ｌ−ア
スコルビン酸であつた。上記の実験は、ホスホリル化反
応においては高ＰＨ値と共に比較的高いピリジン濃度が
、５・６一Ｏ−イソプロピリデン一Ｌ−アスコルベート
を高率でその２−ホスフエートエステルに変えるために
好ましいことを、示している。

これに関連して高ＰＨ値は反応初期ばかりでなく、ホス
ホリル化反応の間ずつと、反応混合物中で維持されるこ
とが重要である。実施例 ４ 種々のアルカリ金属水酸化物を用いて５・６一０−イソ
プロピリデン一Ｌ−アルコルビン酸（工ＡＡ）のホスホ
リル化を行なつた。

水（５０ｍι）とピリジン（１２．５ｍ１）との混合物
中にＮ２二を吹き込みつつ、６．１５ｙ（７）ＩＡＡを
溶解した。混合物を、ＩＯＭ濃度の水酸化ナトリウム、
水酸化カリウム、水酸化ルビジウムまたは水酸化セシウ
ムの水溶液の約６ゴの添加によりＰＨｌ３に調整した。
１．４当量のオキシ塩化燐を用いて実施例１と同様にホ
スホリル化反応を行なつた（一定反応ＰＨ＝１３、反応
温度−５℃〜＋ ５℃）。

種々の塩基を用いて得た反応混合物を前述のように分析
した。その結果を表Ｖに示す。上記の結果から、カリウ
ム、ルビジウムおよびセシウムの水酸化物は、アスコル
ビン酸の２−ホスフエートエステルを製造しようとする
場合には、最も好ましい塩基であることが判る。

低い水溶性の強塩基（例えば水酸化リチウム、水酸化バ
リウム、水酸化マグネシウムおよび水酸化カルシウム）
は、ホスホリル化反応において、反応ＰＨの維持に際し
て大量の水を導入しなければならないので、余り良い成
績を与えない。実施例 ５ この実施例は、ホスホリル化反応において工ＡＡの代り
にＬ−アスコルビン酸（ＡＡと略記する）を用いた場合
の効果を検討するために行な＞．つた。

この〒連の比較実験の結果を下記表に挙げる。この結果
から、Ｌ−アスコルビン酸の使用は可能であるが、ＩＡ
Ａ使用の場合と比較して収率がやや低下することが判る
。さらには、二つの実験（魔２２および２３）において
公知方法を用いた。実験魔２２ではピリジンを用いず、
ＰＨを初期達成水準に維持しなかつた。そして実験魔２
３において反応中のＰＨは約５．７〜 ４．５の範囲に
あつた。これら両実験において、収率は低く、それぞれ
２４％（魔２２）および１８％（▲２３）であつた。こ
れらの実験（魔１８〜２３）の結果を、反応条件と共に
、下表に示す。

上記の結果を検討すると、ＰＨを高め、それを維持する
と、２−ホスホリル化が向上する。

さらには、Ｌ−アスコルベートから出″発して得られた
ホスホリル化反応混合物のペーパークロマトグラフイ試
験によつて、５・６−０−イソプロピリデン一Ｌ−アス
コルベート（ＩＡＡ）から出発した反応混合物のクロマ
トグラムよりも、クロマトグラムの二量体またはジホス
JャGート領域において一層赤く着色したスポツト（塩化
第二鉄湿色剤）が観察された。Ｌ−アスコルベートにつ
いて達成された最大２−ホスホリル化率は９０％であつ
たのに対しＩＡＡについては９６％であつた（表、滝１
９および２１）。Ｌ−アルコルベートの２−ホスホリル
化率がこのように低いことは、Ｌ−アスコルベートから
出発して得られる反応混合物中に多くのジホスJャGート
エステルが生成していることを示すものでもある。なん
となれば、Ｌ−アスコルベートホスフエートジエステル
は、ＰＨｌＯおよび２６４ｎｍにおいてＬ−アスコルベ
ート２−ホスフエートよりも約６％低い吸光係数を有す
る。最後にホスホリル化反応中にＰＨ値を比較的高水準
に維持することの重要性は、実験腐２２および２３の極
めて悪い成績から明らかである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 約０．３〜０．６モル濃度の５・６−イソプロピリ
   デン−Ｌ−アスコルビン酸、約１．５〜３．０モル濃度
   のピリジンおよび初期にｐＨを約１２〜１３の値に上昇
   させるに足る量のアルカリ金属水酸化物を水培質中で混
   合し、その混合物に対してある量のオキシ塩化燐を添加
   し、その混合物の成分を約−１０℃〜１０℃の温度で反
   応させ、この反応中に追加量のオキシ塩化燐、および反
   応全期間にわたり混合物のｐＨを約１２〜１３の値に維
   持するための追加量のアルカリ金属水酸化物を混合物に
   添加して、５・６−イソプロピリデン−Ｌ−アスコルビ
   ン酸の２−燐酸エステルを主として生成させる、各工程
   からなる５・６−イソプロピリデン−Ｌ−アスコルビン
   酸の２−燐酸エステルの製法。 ２ 初期混合物中に５・６−イソプロピリデン−Ｌ−ア
   ルコルビン酸を約０．４〜０．５モル濃度で存在させる
   特許請求の範囲第１項に記載の方法。 ３ 初期混合物中にピリジンを約２．２〜２．６モル濃
   度で存在させる特許請求の範囲第１項に記載の方法。