JPS5934353B2 - ミコバクテリウムフオルトウイトウムの新規な突然変異微生物 - Google Patents
ミコバクテリウムフオルトウイトウムの新規な突然変異微生物Info
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Description
【発明の詳細な説明】
微生物によるステロイド類の転化は広く研究され、記録
されている。
されている。
明らかに、最初のこのような研究は、１９７３年のマモ
リ（Ｍａｍｏｌｉ）とヴエルセローネ（Ｖｅｒｃｅｌ
１ｏｎｅ ） 、 Ｂｅｒ、７０巻４７０頁及びＢｅｒ
、７０巻４７０頁及びＢｅｒ、７０巻２０７９頁による
ものである。
リ（Ｍａｍｏｌｉ）とヴエルセローネ（Ｖｅｒｃｅｌ
１ｏｎｅ ） 、 Ｂｅｒ、７０巻４７０頁及びＢｅｒ
、７０巻４７０頁及びＢｅｒ、７０巻２０７９頁による
ものである。
彼らは酵母発酵による１７−ケトステロイド類から１７
β−ヒドロキシステロイド類への還元を明らかにした。
β−ヒドロキシステロイド類への還元を明らかにした。
もつと最近では、ピーターソン（Ｐｅｔｅｒｓｏｎ ）
及びマレ−（Ｍｕｒｒａｙ）が、カビのリゾプス・ニグ
リカンス（Ｒｈ１ｚｏｐｕｓ ｎｉｇｒｉｃａｎｓ）に
よるグロゲステロンの１１α−ヒドロキシル化を明らか
にした。
及びマレ−（Ｍｕｒｒａｙ）が、カビのリゾプス・ニグ
リカンス（Ｒｈ１ｚｏｐｕｓ ｎｉｇｒｉｃａｎｓ）に
よるグロゲステロンの１１α−ヒドロキシル化を明らか
にした。
合衆国特許第２，６０２，７６９号（１９５２年）を参
照。
照。
また最近では、クレーキー（Ｋ ｒ ａｙ ｃｈｙ）ら
が合衆国特許第３，６８４，６５７号（１９７２年）で
、１７−アルキル側鎖中に少なくとも８個の炭素を含有
するステロイド類をミコバクテリウム・スペシーズＮＲ
ＲＬ Ｂ−３６８３によって発酵させ、アンドロスト−
４−エン−３，１７−ジオン、アンドロスト−１，４−
ジエン−３，１７−ジオン、及び２０α−ヒドロキシメ
チル−プレグナ−１，４−ジエン−３−オンを製造する
ため、微生物によるステロイドの１７−アルキルの選択
的減成分解を明らかにしている。
が合衆国特許第３，６８４，６５７号（１９７２年）で
、１７−アルキル側鎖中に少なくとも８個の炭素を含有
するステロイド類をミコバクテリウム・スペシーズＮＲ
ＲＬ Ｂ−３６８３によって発酵させ、アンドロスト−
４−エン−３，１７−ジオン、アンドロスト−１，４−
ジエン−３，１７−ジオン、及び２０α−ヒドロキシメ
チル−プレグナ−１，４−ジエン−３−オンを製造する
ため、微生物によるステロイドの１７−アルキルの選択
的減成分解を明らかにしている。
もつと最近では、マージニック（Ｍａｒｓｈｅｃｋ）ら
が合衆国特許第３．７５９，７９１号（１９７３年）で
、１７−アルキル側鎖中に少なくとも８個の炭素を含有
するコレスタン又はスチグマスタン系のステロイドをミ
コバクテリウム・スペシーズＮＲＲＬ Ｂ−３８０５に
よって発酵させることによる、アンドロスト−４−エン
−３，１７−ｓ；オンの微生物学的な選択的製造を明ら
かにしている。
が合衆国特許第３．７５９，７９１号（１９７３年）で
、１７−アルキル側鎖中に少なくとも８個の炭素を含有
するコレスタン又はスチグマスタン系のステロイドをミ
コバクテリウム・スペシーズＮＲＲＬ Ｂ−３８０５に
よって発酵させることによる、アンドロスト−４−エン
−３，１７−ｓ；オンの微生物学的な選択的製造を明ら
かにしている。
下記化合物■の７α−メチル−パーヒドロインダンジオ
ン−（１５５）−（β−プロピルアルコール−（４）〕
の環開裂型は、ミコバクテリウム・スメグマチス（Ｍｙ
ｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｍｅｇｍａｔｉｓ）による
ブロケステロンの減成分解の中間体として、シューベル
ト（Ｓｃｈｕｂｅ ｒｔ ）らが１９６４年（田テロイ
ド類」４巻５８１〜５８６頁）で明らかにしたものであ
る。
ン−（１５５）−（β−プロピルアルコール−（４）〕
の環開裂型は、ミコバクテリウム・スメグマチス（Ｍｙ
ｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｍｅｇｍａｔｉｓ）による
ブロケステロンの減成分解の中間体として、シューベル
ト（Ｓｃｈｕｂｅ ｒｔ ）らが１９６４年（田テロイ
ド類」４巻５８１〜５８６頁）で明らかにしたものであ
る。
突然変異株は、２〜１０個の炭素原子の１７−アルキル
側鎖を伴った、又は伴わないステロイド類を選択的に減
成分解させ、発酵液中に主に次の化合物類を蓄積する能
力によって特徴づけられ３ａα−Ｈ−４０＜−（３’−
プロパ／−ル：） −７ａβ−メチルへキサヒドロ−１
，５−インダンジオンへミケタール ハ （以下化合物Ｉと称する）、及び ３ａα−Ｈ−４ＣＸ−（３’−プロパツールシー５α−
ヒドロキシ−７ａβ−メチルへキサヒドロ−１−インダ
ノン （以下化合物■と称する） これらの突然変異株は、本明細書に明らかにされている
突然変異手順又はのの他の突然変異手順を使用して、ス
テロールを減成分解させる次の属の微生物から得ること
ができる。
側鎖を伴った、又は伴わないステロイド類を選択的に減
成分解させ、発酵液中に主に次の化合物類を蓄積する能
力によって特徴づけられ３ａα−Ｈ−４０＜−（３’−
プロパ／−ル：） −７ａβ−メチルへキサヒドロ−１
，５−インダンジオンへミケタール ハ （以下化合物Ｉと称する）、及び ３ａα−Ｈ−４ＣＸ−（３’−プロパツールシー５α−
ヒドロキシ−７ａβ−メチルへキサヒドロ−１−インダ
ノン （以下化合物■と称する） これらの突然変異株は、本明細書に明らかにされている
突然変異手順又はのの他の突然変異手順を使用して、ス
テロールを減成分解させる次の属の微生物から得ること
ができる。
アースロバフタ−（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ） 、
バチルス（１３ａｃｉｌｌｕｓ ）、プレヴイバクテリ
ウム（Ｂ ｒｅｖ １ｂａｃ ｔｅ ｒ ｉｕｍ ）、
コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ
）、ミコバクテリウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
）、ノカルディア（Ｎｏｃａｒｄｉａ）、プロトアミノ
バクター（Ｐｒｏｔｏａｍｉｎｏｂａｃｔｅｒ）、セラ
ティア（Ｓｅｒ−ｒａｔｉａ）及びストレプトミセス（
Ｓ ｌ ｒｅｐｔｏｍｙ −ｃｅｓ ）。
バチルス（１３ａｃｉｌｌｕｓ ）、プレヴイバクテリ
ウム（Ｂ ｒｅｖ １ｂａｃ ｔｅ ｒ ｉｕｍ ）、
コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ
）、ミコバクテリウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
）、ノカルディア（Ｎｏｃａｒｄｉａ）、プロトアミノ
バクター（Ｐｒｏｔｏａｍｉｎｏｂａｃｔｅｒ）、セラ
ティア（Ｓｅｒ−ｒａｔｉａ）及びストレプトミセス（
Ｓ ｌ ｒｅｐｔｏｍｙ −ｃｅｓ ）。
好ましい属はミコバクテリウムである。この属の例示的
な種はエム・フレイ（Ｍ、 ｐｈｌｅｉ）、エム・スメ
グマチス（Ｍ、 ｓｍｅｇｍａｔｉｓ）、エム・ロード
クロクス（Ｍ、 ｒｈｏｄｏｃｈｒｏｕｓ ）、エム。
な種はエム・フレイ（Ｍ、 ｐｈｌｅｉ）、エム・スメ
グマチス（Ｍ、 ｓｍｅｇｍａｔｉｓ）、エム・ロード
クロクス（Ｍ、 ｒｈｏｄｏｃｈｒｏｕｓ ）、エム。
ムコスム（Ｍ 、 ｍｕｃｏｓｕｍ ）、エム・フォル
トクイトラム（Ｍ 、 ｆｏｒｔｕｉ ｔｕｍ）及びエ
ム・ブチリクム（Ｍ、 ｂｕｔｙｒｉｃｕｍ）である。
トクイトラム（Ｍ 、 ｆｏｒｔｕｉ ｔｕｍ）及びエ
ム・ブチリクム（Ｍ、 ｂｕｔｙｒｉｃｕｍ）である。
本明細書に特定的に例示されているのは、新規な突然変
異株の微生物ミコバクテリウム・フォルトクイトラム（
Ｍ ｙ ｃ ｏ ｂ −ａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｏｒｔ
ｕｉｔｕｍ）、ＮＲＲＬ Ｂ−８１２９である。
異株の微生物ミコバクテリウム・フォルトクイトラム（
Ｍ ｙ ｃ ｏ ｂ −ａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｏｒｔ
ｕｉｔｕｍ）、ＮＲＲＬ Ｂ−８１２９である。
これは２〜１０個の炭素原子を含有する１７−アルキル
側鎖を伴った、又は伴わないステロイド類を選択的に減
成させて化合物Ｉ、及び■を得るのに用いられる。
側鎖を伴った、又は伴わないステロイド類を選択的に減
成させて化合物Ｉ、及び■を得るのに用いられる。
適当なステロイド類ノ例ハ、シトステロール、コレステ
ロール、スチグマステロール、カンペステロール等の、
２〜１０個の炭素原子の１７〜アルキル側鎖をもったス
テロイド類、それにアンドロスト−４−エン−３，１７
−ジオン、アンドロスタ−１，４−ジエン、−３，１７
−ジオン、デヒドロエピアンドロステロン、及びテスト
ステロンである。
ロール、スチグマステロール、カンペステロール等の、
２〜１０個の炭素原子の１７〜アルキル側鎖をもったス
テロイド類、それにアンドロスト−４−エン−３，１７
−ジオン、アンドロスタ−１，４−ジエン、−３，１７
−ジオン、デヒドロエピアンドロステロン、及びテスト
ステロンである。
これらのステロイド基質は精製型又は粗製型でありうる
。
。
微生物
２〜１０個の炭素原子を含有する１７−アルキル側鎖を
もった、又はもたないステロイド類を選択的に減成分解
させ、発酵液中に化合物■、及びＩＶを蓄積する能力に
よって特徴づけられる突然変異株は、次の属すなわちア
ースロバフタ−、バチルス、ブレウ゛イバクテリウム、
コリネバクテリウム、ミコバクテリウム、ノカルディア
、フロドアミノバクター、セラチア、及びストレプトミ
セスの、ステロールを減成分解させる微生物を突然変異
化させることによって得られる。
もった、又はもたないステロイド類を選択的に減成分解
させ、発酵液中に化合物■、及びＩＶを蓄積する能力に
よって特徴づけられる突然変異株は、次の属すなわちア
ースロバフタ−、バチルス、ブレウ゛イバクテリウム、
コリネバクテリウム、ミコバクテリウム、ノカルディア
、フロドアミノバクター、セラチア、及びストレプトミ
セスの、ステロールを減成分解させる微生物を突然変異
化させることによって得られる。
本明細書に記載のとおりにミコバクテリウム・フォルト
ウィトラムＡＴＣＣ６８４２を突然変異化させると、新
規な実験室的突然変異株の微生物を生ずる。
ウィトラムＡＴＣＣ６８４２を突然変異化させると、新
規な実験室的突然変異株の微生物を生ずる。
１９７４年度ＡＴＴＣカタログは、ＡＴＣＣ６８４２の
名簿と共に以下を明らかにしている。
名簿と共に以下を明らかにしている。
ジエイ・シー・クルズ（Ｊ 、 Ｃ，Ｃｒｕｚ） ２
、 Ｃｏ１ｄ ａｂｓｃｅｓｓ。
、 Ｃｏ１ｄ ａｂｓｃｅｓｓ。
Ａｃｔａ Ｍｅｄ、 Ｒｉｏ ｄｅ Ｊａｎｅｉｒｏ
１巻１頁（１９３６年）。
１巻１頁（１９３６年）。
Ｍｅｄｉｕｍ ９０ ３７ＣｏＭ、フォルトウィトラム
ＡＴＣＣ６８４２はステロール類を小分子量の化合物類
、例えばＣＯ２＋Ｈ２０へ非選択的に減成分解させる。
ＡＴＣＣ６８４２はステロール類を小分子量の化合物類
、例えばＣＯ２＋Ｈ２０へ非選択的に減成分解させる。
このためこの微生物は選択的なステロイド減成分解生物
として適当ではない。
として適当ではない。
ニトロソグアニジンを使用するＭ、フォルトウィトラム
ＡＴＣＣ６８４２の突然変異化は、２〜１０、個の炭素
原子の１７−アルキル側鎖をもつ又はもたないステロイ
ド類を選択的に減成分解させて発酵液中に優勢的（実施
例２でＩ及びＹを出発物の約３０及び約３０重量％）に
化合物類■、及びｗ４つくるような新規な突然変異種の
産生をもたらした。
ＡＴＣＣ６８４２の突然変異化は、２〜１０、個の炭素
原子の１７−アルキル側鎖をもつ又はもたないステロイ
ド類を選択的に減成分解させて発酵液中に優勢的（実施
例２でＩ及びＹを出発物の約３０及び約３０重量％）に
化合物類■、及びｗ４つくるような新規な突然変異種の
産生をもたらした。
このエム・フォルトウィトラムの突然変異ｌ生物は永久
保存株中に寄託されている合衆国イリノイ州ビオリアの
合衆国農務省北部地域研究所により、ＮＲＲＬＢ−８１
２９という登録番号を与えられた。
保存株中に寄託されている合衆国イリノイ州ビオリアの
合衆国農務省北部地域研究所により、ＮＲＲＬＢ−８１
２９という登録番号を与えられた。
この微生物の二次培養基は、ここへ要求すればこの寄託
所から自由に入手できる。
所から自由に入手できる。
日本においては上記菌株は昭和５１年１１月１２日に、
Ｔ兼技術院微生物工業技術研研所に保管委託申請した。
Ｔ兼技術院微生物工業技術研研所に保管委託申請した。
その微生物受託番号は第３８０５号である。
二次培養基が入手できるからといって、政府命令によっ
て証書と共に授与される特許権を侵害して本発明を実施
するという実施権を構成するものではないことを理解す
べきである。
て証書と共に授与される特許権を侵害して本発明を実施
するという実施権を構成するものではないことを理解す
べきである。
Ｍ、フォルトウィトラムＮＲＲＬＢ−８１２９の形態及
び薬剤感受性は親のＭ、フォルトクイトラムＡＴＣＣ８
６４２のそれと区別できない。
び薬剤感受性は親のＭ、フォルトクイトラムＡＴＣＣ８
６４２のそれと区別できない。
双方のＭ。フォルトクイトラムの培養基はアクチノミセ
タレス（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔａｌｅｓ）目のミコバ
クテリアセス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ ）
科に属する耐酸性で非自動型の胞子を形成しない杆菌で
ある。
タレス（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔａｌｅｓ）目のミコバ
クテリアセス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ ）
科に属する耐酸性で非自動型の胞子を形成しない杆菌で
ある。
ラニョンの分類（ラニョン・イー・エイチ（Ｒｕｎｙｏ
ｎ 。
ｎ 。
Ｅ、Ｈ，）、１９５９年Ｍｅｄ、 Ｃ１１ｎ、 Ｎｏｒ
ｔｈＡｍｅｒｉｃａ ４３巻２７３頁）によると、これ
は非色素群■のミコバクテリウムである。
ｔｈＡｍｅｒｉｃａ ４３巻２７３頁）によると、これ
は非色素群■のミコバクテリウムである。
すなわち低温で急速に生育して、比較的簡単な培地上で
色素をもたない集落をつくる。
色素をもたない集落をつくる。
ステロイド分子に対する作用においては、Ｍ、フォルト
ウィトラムＡＴＣＣＢ−８６４２とＭ、フォルトウィト
ラムＮＲＲＬ Ｂ−８１２９は明瞭に区別できる。
ウィトラムＡＴＣＣＢ−８６４２とＭ、フォルトウィト
ラムＮＲＲＬ Ｂ−８１２９は明瞭に区別できる。
上に明らかにされたように、Ｍ、フォルトウィトラムＡ
ＴＣＣ８６４２はステロイド類の減成分解生成物である
のに反し、Ｍ、フォルトウィトラムＮＲＲＬ Ｂ−８１
２９は選択的な減成分解生物である。
ＴＣＣ８６４２はステロイド類の減成分解生成物である
のに反し、Ｍ、フォルトウィトラムＮＲＲＬ Ｂ−８１
２９は選択的な減成分解生物である。
Ｍ、フォルトウィトラムＮＲＲＬＢ−８１２９のこの性
状によって、本明細書で明らかにされたように非常に有
用なものとなっている。
状によって、本明細書で明らかにされたように非常に有
用なものとなっている。
Ｍ、フォルトウィトラムＮＲＲＬＢ−８１２９をつくる
ためのＭ、フォルトウィトラムＡＴＣＣ６８４２の突然
変異化は、ニトロソグアニジンを用いて達成される。
ためのＭ、フォルトウィトラムＡＴＣＣ６８４２の突然
変異化は、ニトロソグアニジンを用いて達成される。
手順の詳細はあとに記載されている。突然変異化の千瞳
は一般にこの技術に知られているが、この突然変異の手
順を用いて得られる突然変異株の種類を教示したり、或
は示唆したりさえするような既知の技術はまたない。
は一般にこの技術に知られているが、この突然変異の手
順を用いて得られる突然変異株の種類を教示したり、或
は示唆したりさえするような既知の技術はまたない。
また本明細書に明らかにされた突然変異及び転化手順は
ミコバクテリウムに対して詳細に記載されているが、同
様な又は均等の手順を本明細書に明らかにされているそ
の他の属の微生物に対して使用できることを理解すべき
である。
ミコバクテリウムに対して詳細に記載されているが、同
様な又は均等の手順を本明細書に明らかにされているそ
の他の属の微生物に対して使用できることを理解すべき
である。
転化方法
本発明の選択的転化は、選ばれたステロイド基質を培養
基間中に培養基へ加えるか、又は接種に先立って栄養培
地へこれを混入させることによって、Ｍ、フォルトウィ
トラムＮＲＲＬＢ−８１２９の生育する培養基中で実施
できる。
基間中に培養基へ加えるか、又は接種に先立って栄養培
地へこれを混入させることによって、Ｍ、フォルトウィ
トラムＮＲＲＬＢ−８１２９の生育する培養基中で実施
できる。
ステロイドを単独で、又は他のステロイドと組合わせて
添加できる。
添加できる。
培養基中のステロイドの好ましいが限定的でない濃度範
囲は、リットル当り約０．１ないし約１００ｇである。
囲は、リットル当り約０．１ないし約１００ｇである。
炭素源、例えば同化できる炭水化物、及び窒素源、例え
ば同化できる窒素化合物又は蛋白質材料を含有する営養
培地中で培養基を生育させる。
ば同化できる窒素化合物又は蛋白質材料を含有する営養
培地中で培養基を生育させる。
好ましい炭素源はブドウ糖、黒砂糖、蔗糖、グ刃セロー
ル、殿粉、コーンスターチ、乳糖、デキストリン、糖蜜
等である。
ル、殿粉、コーンスターチ、乳糖、デキストリン、糖蜜
等である。
好ましい窒素源はコーンスタープリカー、酵母、固形乳
を加え自己消化せしめたビール酵母、大豆粉、綿実粉、
コーンミール、固形乳、カゼインのすい液消化物、魚粉
、デイスチラーズソリッド、動物ペプトン液、肉と骨の
砕片、アンモニウム塩等を包含する。
を加え自己消化せしめたビール酵母、大豆粉、綿実粉、
コーンミール、固形乳、カゼインのすい液消化物、魚粉
、デイスチラーズソリッド、動物ペプトン液、肉と骨の
砕片、アンモニウム塩等を包含する。
これらの炭素源と窒素源の組合わせを有利に使用できる
。
。
痕跡の金属類、例えば亜鉛、マグネシウム、マンガン、
コバルト、鉄等は発酵培地に加える必要がない。
コバルト、鉄等は発酵培地に加える必要がない。
というのは、培地の券菌前に培地の成分として水道及び
未精製の成分を使用するからである。
未精製の成分を使用するからである。
転化方法は約７２時間から１５日までの範囲でありうる
。
。
転化過程中の培養温度は約２５℃ないし約３７℃の範囲
であり、３０’Ｃが好ましい。
であり、３０’Ｃが好ましい。
微生物の生育を容易ならしめ、転化過程の有効度を強め
るため、転化容器の内容物に減菌された空気を通してか
きまぜる。
るため、転化容器の内容物に減菌された空気を通してか
きまぜる。
シリカゲル板（Ｅ、メルク社、ダルムシュタット）及び
２：３（容量比）の酢酸エチルーシクロヘキサンからな
る溶媒系を使用する薄層クロマトグラフィによって証拠
室てられるように、転化方法の終了後、望んでいる転化
されたステロイド類はこの技術によく知られた手段によ
って回収される。
２：３（容量比）の酢酸エチルーシクロヘキサンからな
る溶媒系を使用する薄層クロマトグラフィによって証拠
室てられるように、転化方法の終了後、望んでいる転化
されたステロイド類はこの技術によく知られた手段によ
って回収される。
例えば発酵液と菌体とを含んだ発酵（転化）反応混合物
をステロイド用の水と混ざらない有機溶媒で抽出できる
。
をステロイド用の水と混ざらない有機溶媒で抽出できる
。
適当な溶媒は塩化メチレン（好適）、クロロホルム、四
塩化炭素、塩化エチレン、トリクロロエチレン、エーテ
ル、酢酸アルミ、ヘンゼン等である。
塩化炭素、塩化エチレン、トリクロロエチレン、エーテ
ル、酢酸アルミ、ヘンゼン等である。
その代わりに、発酵液と菌体をまず慣用方法、例えばろ
過又は遠心分離によって分離し、次に適当な溶媒で別々
に抽出する。
過又は遠心分離によって分離し、次に適当な溶媒で別々
に抽出する。
菌体を水と混ざる、又は水と混ざらない溶媒で抽出でき
る。
る。
菌体を含んでいない発酵液を水と混ざらない溶媒で抽出
できる。
できる。
抽出液を硅藻土に通してろ過し、ろ液を乾固するまで真
空蒸留できる。
空蒸留できる。
望んでいる転化ステロイドを含有する残留物をスケリソ
ルブＢ中の１０％クロロホルム中に溶解し、スケリソル
ブＢ（異性体ヘキサン）及びそれと増加量の酢酸エチル
との混合物を展開溶媒として使用して、シリカゲル上の
クロマトグラフィにかける。
ルブＢ中の１０％クロロホルム中に溶解し、スケリソル
ブＢ（異性体ヘキサン）及びそれと増加量の酢酸エチル
との混合物を展開溶媒として使用して、シリカゲル上の
クロマトグラフィにかける。
この手順により、化合物Ｉが溶離される。
化合物■は例えば酢酸エチル中の５％メタノールで溶離
できる。
できる。
結晶生成物は溶媒、例えば酢酸エチルを用いて得られる
。
。
次に沈殿したステロイドを除くために、溶液を室温に冷
却してろ過する。
却してろ過する。
望んでいる転化生成物は、又残りの上澄液から、上澄液
中の溶媒蒸発によって得られる。
中の溶媒蒸発によって得られる。
化合物■、及び■は有用なステロイド類の化学合成にお
ける中間体として有用である。
ける中間体として有用である。
例えば、本化合物類は、有用な１９−ノルステロイド類
の全合成法を明らかにした合衆国特許第３，８８０，８
８４号の方法に対する出発材料へ転化できる。
の全合成法を明らかにした合衆国特許第３，８８０，８
８４号の方法に対する出発材料へ転化できる。
出発材料へのこの転化は、この技術に知られた手順、例
えば酢酸中のクロム酸によって酸化させ、続いて無水酢
酸と酢酸ナトリウム処理によって行なわれる。
えば酢酸中のクロム酸によって酸化させ、続いて無水酢
酸と酢酸ナトリウム処理によって行なわれる。
Ｂｉｏｃｈｅｍ２巻１２３８−１２４３頁及びＪ。Ａ、
Ｃ，８，８５巻２１３５〜２１３７頁を参照。
Ｃ，８，８５巻２１３５〜２１３７頁を参照。
以下の実施例は本発明の方法と生成物の例示であるが、
限定的に考えられてはならない。
限定的に考えられてはならない。
他に注意がなければ回分率はすべて重量によるものであ
り、またあらゆる溶媒混合物の割合は容量による３実施
例 Ｉ Ｍ、フォルトウィトラムＡＴＣＣ６８４２から突然変異
株Ｍ、フオルトクイトクムＮＲＲＬＢ−８１２９の調製 ａ）ニトロソグアニジンによる突然変異種Ｍ、フオルト
ウイトウムＡＴＣＣ６８４２の菌体を２８°Ｃで次の無
菌的な種菌培地中で生育させる。
り、またあらゆる溶媒混合物の割合は容量による３実施
例 Ｉ Ｍ、フォルトウィトラムＡＴＣＣ６８４２から突然変異
株Ｍ、フオルトクイトクムＮＲＲＬＢ−８１２９の調製 ａ）ニトロソグアニジンによる突然変異種Ｍ、フオルト
ウイトウムＡＴＣＣ６８４２の菌体を２８°Ｃで次の無
菌的な種菌培地中で生育させる。
栄養培養液（ディフコ） ８ Ｅｌ／１酵母
エキス １ ｇ７１１プロピオン
酸ナトリウム ０．５＆＃蒸 留 水
１１とするのに十分な量ｌＮＮａＯＨでｐＨを７．
０に調整してから、１２１℃で２０分減菌する。
エキス １ ｇ７１１プロピオン
酸ナトリウム ０．５＆＃蒸 留 水
１１とするのに十分な量ｌＮＮａＯＨでｐＨを７．
０に調整してから、１２１℃で２０分減菌する。
菌体を約５ Ｘ １０８／ｍの密度まで生育させ、遠心
分離によってペレット化し、次いで同量の無菌的な０．
１Ｍ＜えん酸ナトリウム（ｐＨ５，６）で洗う。
分離によってペレット化し、次いで同量の無菌的な０．
１Ｍ＜えん酸ナトリウム（ｐＨ５，６）で洗う。
洗った菌体を同量のくえん酸緩衝液に再懸濁し、滴定（
菌の計数）のため試料を除き、ニトロソグアニジンを５
０μ９／ｒｎｌの最終濃度になる様に加える。
菌の計数）のため試料を除き、ニトロソグアニジンを５
０μ９／ｒｎｌの最終濃度になる様に加える。
菌の懸濁液を３７℃の水浴中で３０分温ため、次いで試
料を滴定のため除去し、残りを遠心分離し、同量の無菌
的な０．１Ｍ燐酸カリウム（ｐＨ７，０）で洗う。
料を滴定のため除去し、残りを遠心分離し、同量の無菌
的な０．１Ｍ燐酸カリウム（ｐＨ７，０）で洗う。
最後に以下からなる炭素源をとり去った無菌的な最少量
の塩媒質中に菌体を再懸濁させる。
の塩媒質中に菌体を再懸濁させる。
ＮＨ４ＮＯ３１，ＯＦｌ／ｌ！
に２ＨＰＯ４０，２５９／ｌ
ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，２５ｇ／ｌ
ＮａＣ１０，００５＆／ １
ＦｅＳＯ・７ Ｈ２Ｏ０，００１ｇ ／ １蒸 留 水
１１とするのに十分な量ｌＮＨＣｌでｐＨ
を７．０に調整してから、１２１℃で２０分滅菌する。
１１とするのに十分な量ｌＮＨＣｌでｐＨ
を７．０に調整してから、１２１℃で２０分滅菌する。
次に突然変異株を選び出すたみに菌体をプレート上に広
げる。
げる。
ｂ）突然変位株Ｍ、フオルトウイトウムＮＲＲＬ Ｂ−
８１２９の選択と単離 上記のとおりに突然変異化された菌体を希釈し、次のも
のからなる培地（フレーザー（Ｆｒ−ａｓｅｒ ）及び
ジエレル（Ｊｅｒｒｅｌ） 、 １９６３年、Ｊ、Ｂｉ
ｏｌ、 Ｃｈｅｍ、 ２０５巻２９１〜２９５頁から変
更したもの）を含有するプレート上へ広げる。
８１２９の選択と単離 上記のとおりに突然変異化された菌体を希釈し、次のも
のからなる培地（フレーザー（Ｆｒ−ａｓｅｒ ）及び
ジエレル（Ｊｅｒｒｅｌ） 、 １９６３年、Ｊ、Ｂｉ
ｏｌ、 Ｃｈｅｍ、 ２０５巻２９１〜２９５頁から変
更したもの）を含有するプレート上へ広げる。
グリセロール １０．０ｇ／ｌＨａ ２
ＨＰｏ ４８．４ ｇ ／ ｌＫＨ２ＰＯ４４，５ｇ／
１３ ＮＨ４Ｃ１２，Ｏ、！ｉ’ ／１ ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，３ｇ／ｌ ＦｅＣｌ３・６Ｈ２００，０５ｇ／ｌ 蒸 留 水 １１とするのに十分な量寒天（
１５ｇ／ｌ）を加え、培地を１２１℃で３０分間オート
クレーブ処理し、次いで無菌のペトリ皿に注ぐ。
ＨＰｏ ４８．４ ｇ ／ ｌＫＨ２ＰＯ４４，５ｇ／
１３ ＮＨ４Ｃ１２，Ｏ、！ｉ’ ／１ ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，３ｇ／ｌ ＦｅＣｌ３・６Ｈ２００，０５ｇ／ｌ 蒸 留 水 １１とするのに十分な量寒天（
１５ｇ／ｌ）を加え、培地を１２１℃で３０分間オート
クレーブ処理し、次いで無菌のペトリ皿に注ぐ。
この培地の生育は、突然変異種生成手幀によってつくら
れるほとんどの栄養作用物質を排除している。
れるほとんどの栄養作用物質を排除している。
例えば化学的に定義された培地上での生育のためにビタ
ミン類、生長要素等を必要とする培養基は排除される。
ミン類、生長要素等を必要とする培養基は排除される。
２８℃で約７日間培養後、生ずる集落を突然変異の選定
に適した試験プレート上へ複製し、次いでグリセロール
基盤の培地を含有する対照プレート上へ戻す。
に適した試験プレート上へ複製し、次いでグリセロール
基盤の培地を含有する対照プレート上へ戻す。
試験プレートはピーターソン・ジー・イー（Ｐｅｔｅｒ
ｓｏｍ、 Ｇ、 Ｅ、）、エイチ・エル・ルイス（Ｈ，
Ｌ、 Ｌｅｗｉｓ）及びジエイ・アール・デービス（Ｊ
、 Ｒ，Ｄａｖｉｓ） １９６２年「寒天培地中におけ
るコレステロールその他の水に溶けない炭素源の均一分
散物の調製Ｊ Ｊ、 Ｌｉｐｉｄ Ｒｅ５−ｅａｒｃｈ
３巻２７５〜２７６頁に記載のとおりにつくられる。
ｓｏｍ、 Ｇ、 Ｅ、）、エイチ・エル・ルイス（Ｈ，
Ｌ、 Ｌｅｗｉｓ）及びジエイ・アール・デービス（Ｊ
、 Ｒ，Ｄａｖｉｓ） １９６２年「寒天培地中におけ
るコレステロールその他の水に溶けない炭素源の均一分
散物の調製Ｊ Ｊ、 Ｌｉｐｉｄ Ｒｅ５−ｅａｒｃｈ
３巻２７５〜２７６頁に記載のとおりにつくられる。
これらのプレート中の最少塩培地は、実施例１の（ａ）
節に記載されたとおりである。
節に記載されたとおりである。
寒天（１５ｇ／ｌ）と、シトステロール又はアンドロス
テンジオン（ＡＤ）のような適当な炭素源（ｔｏｇ／ｌ
）を加え、生ずる懸濁液を１２１℃で３０分オートクレ
ーブ処理する。
テンジオン（ＡＤ）のような適当な炭素源（ｔｏｇ／ｌ
）を加え、生ずる懸濁液を１２１℃で３０分オートクレ
ーブ処理する。
次に減菌された熱い混合物を無菌の配合容器に注ぎ、数
分間配合し、次いで無菌のペトリ皿へ注ぐ。
分間配合し、次いで無菌のペトリ皿へ注ぐ。
この手順で発泡が問題となりがちであるが、混合物が熱
しているうちに配合すること、溶融寒天のプレート表面
に炎を当てることによって減少できる。
しているうちに配合すること、溶融寒天のプレート表面
に炎を当てることによって減少できる。
こうして非常に均質であるが不透明な寒天グレートの調
製を容易ならしめるような、水に溶けない炭素源の均質
分散が得られる。
製を容易ならしめるような、水に溶けない炭素源の均質
分散が得られる。
対照プ１ノート上で生育するが、唯一の炭素源としてＡ
Ｄを含有する試験プレート上では生育しない集落は、栄
養寒天プレート上の画線分離によって精製される。
Ｄを含有する試験プレート上では生育しない集落は、栄
養寒天プレート上の画線分離によって精製される。
２８℃で生育後、個々の集落を滅菌したつまようじで栄
養寒天プレートから取上げ、炭素源としてＡＤを含有す
るプレートへの穿刺によって接種して再試験をする。
養寒天プレートから取上げ、炭素源としてＡＤを含有す
るプレートへの穿刺によって接種して再試験をする。
栽培養基とは異なる表現型を示す精製された単離物は、
振とうフラスコで評価される。
振とうフラスコで評価される。
Ｃ）振とうフラスコ評価法
振とうフラスコ（５００ｍｌ）は以下の成分からなる生
物転化培地１００ｍ１を含有する。
物転化培地１００ｍ１を含有する。
グリセロール １０．０．！９／１Ｎａ
２ＨＰＯ４８，４ｇ／ １ ＫＨ２ＰＯ４４，５、！９ ／１１ ＮＨ４Ｃ１２，０９７１ ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００３ｇ／１ ＦｅＣ１・６Ｈ２００，０５ｇ／１ 蒸 留 水 １１とするのに十分な量大豆粉
（１９／ｌ ）を培地へ配合し、次にシトステロール（
１０＆／ｌ ）を培地に配合する。
２ＨＰＯ４８，４ｇ／ １ ＫＨ２ＰＯ４４，５、！９ ／１１ ＮＨ４Ｃ１２，０９７１ ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００３ｇ／１ ＦｅＣ１・６Ｈ２００，０５ｇ／１ 蒸 留 水 １１とするのに十分な量大豆粉
（１９／ｌ ）を培地へ配合し、次にシトステロール（
１０＆／ｌ ）を培地に配合する。
フラスコを１２１℃で２０分オートクレーブ処理してか
ら、２８°Ｃに冷却し、次いで以下のようにして調製さ
れた種菌生育物ＬＯｍｌを接種する。
ら、２８°Ｃに冷却し、次いで以下のようにして調製さ
れた種菌生育物ＬＯｍｌを接種する。
ｂ）部からの精製された単離菌を２８℃で寒天斜面培地
に生育させる。
に生育させる。
斜面培地からの−すくいの菌体を取って、次の成分から
なる減菌した種菌培地１００１ｎｌを含有する５００ｍ
１フラスコに接種する。
なる減菌した種菌培地１００１ｎｌを含有する５００ｍ
１フラスコに接種する。
栄養培養液（ディフコ） ８ｊｊ／１酵母エ
キス ＩＥ／／１グリセロール
５ ｇ／ｌ蒸 留 水 １
１とするのに十分な量ｌＮＮａＯＨでｐＨを７．０に調
整してから、フラスコを１２１℃で２０分オートクレー
ブ処理する。
キス ＩＥ／／１グリセロール
５ ｇ／ｌ蒸 留 水 １
１とするのに十分な量ｌＮＮａＯＨでｐＨを７．０に調
整してから、フラスコを１２１℃で２０分オートクレー
ブ処理する。
種菌フラスコを２８℃で７２時間培養する。
上に明らかにされたように、種菌生育物１０ｍ１を使用
して減菌した転化培地１００ＴＬｌを含有する各５００
ｍ１フラスコを接種する。
して減菌した転化培地１００ＴＬｌを含有する各５００
ｍ１フラスコを接種する。
次にフラスコを回転振とう機上で２８℃ないし３０°Ｃ
で培養し、種々の間隔で試料を採取する。
で培養し、種々の間隔で試料を採取する。
１０ｍ１試料を除去し、３倍量の塩化メチレンと共に振
とつすることによって抽出する。
とつすることによって抽出する。
抽出液の一部はシリカゲル及び上記の溶媒系すなわち２
：３（容量比）の酢酸エチル−シクロヘキサンを使用ス
る薄層クロマトグラフィ、及び気液クロマトグラフィに
よって分析される。
：３（容量比）の酢酸エチル−シクロヘキサンを使用ス
る薄層クロマトグラフィ、及び気液クロマトグラフィに
よって分析される。
化合物類１及び■が存在する証拠は、親Ｍ、フオルトウ
イトウムＡＴＣＣ６８４２からつくられる新規突然変異
株によるシトステロールの選択的減成分解を確証してい
る。
イトウムＡＴＣＣ６８４２からつくられる新規突然変異
株によるシトステロールの選択的減成分解を確証してい
る。
実施例 ２
シトステロールから化合物Ｉ及び■への転化使用の培地
は実施例１ｃにおけるものと同じである。
は実施例１ｃにおけるものと同じである。
この培地を１２１℃で３０分加熱することによって減菌
する。
する。
次いでこれを３０℃に冷却し、実施例１ｃで述べたとお
りに調製された突然変異株の微生物エム・フォルトウィ
トラムＮＲＲＬＢ−８１２９の種菌培養基１０部を接種
する。
りに調製された突然変異株の微生物エム・フォルトウィ
トラムＮＲＲＬＢ−８１２９の種菌培養基１０部を接種
する。
水面下の生育を促進するためかきまぜながら、接種され
た混合物を３０℃で３３６時間培養する。
た混合物を３０℃で３３６時間培養する。
培養後、混合物を塩化メチレンで抽出する。
抽出液を砂礫土に通してろ過し、ろ液を乾固するまで真
空蒸留する。
空蒸留する。
残留物をスケリソルブＢ中の１０％クロロホルム中に取
上げ、シリカゲル上でスケリソルブＢ及びそれと増加量
の酢酸エチルとの混合物を展開剤として使用しクロマト
グラフィ処理にかける。
上げ、シリカゲル上でスケリソルブＢ及びそれと増加量
の酢酸エチルとの混合物を展開剤として使用しクロマト
グラフィ処理にかける。
この手順により化合物Ｉが溶離される。化合物■は酢酸
エチル中の５％メタノールによってカラムから溶離され
る。
エチル中の５％メタノールによってカラムから溶離され
る。
化合物類の溶離順序は１→■である。
薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）によるこれらの化合物
のＲｆ値は、次のとおりであル（シクロヘキサン−酢酸
エチル３：２）。
のＲｆ値は、次のとおりであル（シクロヘキサン−酢酸
エチル３：２）。
Ｉ＝０．３７
１／＝０．０５
ＴＬＣで決定されるとおりに適当なフラクションを一緒
にして乾固するまで蒸発させると、化合物■とＭの良好
な収量を生ずる。
にして乾固するまで蒸発させると、化合物■とＭの良好
な収量を生ずる。
（Ｉは出発物質の約３０重量楚、■は約３％）。
酢酸エチルから再結晶後、２つのエピマーの１：１混合
物である化合物Ｉは、融点１００〜１１２゜であり、化
合物Ｖは１４８〜１５℃である。
物である化合物Ｉは、融点１００〜１１２゜であり、化
合物Ｖは１４８〜１５℃である。
薄層クロマトグラフィにより、痕跡量の３ａα−Ｈ−４
α−〔３′−プロパナール〕−５α−ヒドロキシ−７ａ
β−メチルへキサヒドロ−１−インダノンヘミアセター
ル及び３ａα−Ｈ−４α−〔３′−プロピオン［１−５
α−ヒドロキン−７ａβ−メチルへキサヒドロ−１−イ
ンダノン−δ−ラクトンの存在が示された。
α−〔３′−プロパナール〕−５α−ヒドロキシ−７ａ
β−メチルへキサヒドロ−１−インダノンヘミアセター
ル及び３ａα−Ｈ−４α−〔３′−プロピオン［１−５
α−ヒドロキン−７ａβ−メチルへキサヒドロ−１−イ
ンダノン−δ−ラクトンの存在が示された。
実施例 ３
実施例２のシトステロールの代わりにコレステロールを
使用して、化合物１及び■が得られる。
使用して、化合物１及び■が得られる。
実施例 ４
実施例２のシトステロールの代わりにスチグマステロー
ルを使用して、化合物Ｉ及び■が得られる。
ルを使用して、化合物Ｉ及び■が得られる。
実施例 ５
実施例２のシトステロールの代わりにカンペステロール
を使用して、化合物Ｉ及びＶが得られる。
を使用して、化合物Ｉ及びＶが得られる。
実施例 ６
実施例２のシトステロールの外に実施例３−５の任意の
ステロール添加するか、又はシトステロールの代わりに
、実施例３〜５の任意のステロイド類におきかえて、化
合物Ｉと■が得られる。
ステロール添加するか、又はシトステロールの代わりに
、実施例３〜５の任意のステロイド類におきかえて、化
合物Ｉと■が得られる。
参考例 １
実施例１のミコバクテリウム・フォルトウィトラム（Ｍ
ｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｏｒｔｕｉｔｕｍ）ＡＴ
ＣＣ６８４２の代わりに次の属、すなわちアースロバフ
タ−（Ａｒ ｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ）、バチルス（Ｂ
ａｃｉｌｌｕｓ）、プレヴイバクテリウム（Ｂｒｅｖｉ
ｂａｃｔｅ−ｒｉｕｍ）、コリネバクテリクム（Ｃｏｒ
ｙｎｅｂａｃｔ−ｅｒｉｕｍ）、ノカルディア（Ｎｏｃ
ａ ｒｄ ｉａ ）、プロトアミノバクター（Ｐｒｏｔ
ａｍｉｎｏｂａｃｔｅｒ ）、セラティア（Ｓｅｒｒａ
ｔｉａ ）及びストレプトミセス（Ｓ ｔ ｒｅｐｔｏ
ｍｙｃｅｓ ）からのステロールを劣化分解させる微生
物を使用して、２〜１０個の炭素原子の１７−アルキル
側鎖をもった、又はもたないステロイドを選択的に減成
分解させて発酵液中に化合物Ｉ及びＭを蓄積する能力に
よって特徴づけられる突然変異株の微生物が得られる。
ｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｏｒｔｕｉｔｕｍ）ＡＴ
ＣＣ６８４２の代わりに次の属、すなわちアースロバフ
タ−（Ａｒ ｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ）、バチルス（Ｂ
ａｃｉｌｌｕｓ）、プレヴイバクテリウム（Ｂｒｅｖｉ
ｂａｃｔｅ−ｒｉｕｍ）、コリネバクテリクム（Ｃｏｒ
ｙｎｅｂａｃｔ−ｅｒｉｕｍ）、ノカルディア（Ｎｏｃ
ａ ｒｄ ｉａ ）、プロトアミノバクター（Ｐｒｏｔ
ａｍｉｎｏｂａｃｔｅｒ ）、セラティア（Ｓｅｒｒａ
ｔｉａ ）及びストレプトミセス（Ｓ ｔ ｒｅｐｔｏ
ｍｙｃｅｓ ）からのステロールを劣化分解させる微生
物を使用して、２〜１０個の炭素原子の１７−アルキル
側鎖をもった、又はもたないステロイドを選択的に減成
分解させて発酵液中に化合物Ｉ及びＭを蓄積する能力に
よって特徴づけられる突然変異株の微生物が得られる。
参考例 ２
実施例２〜６のエム・フォルトウィトラムＮＲＲＬ Ｂ
−８１２９の代わりに参考例１で得られる突然変異株の
微生物を使用して、化合物■及び■が得られる。
−８１２９の代わりに参考例１で得られる突然変異株の
微生物を使用して、化合物■及び■が得られる。
参考例 ３
実施例１のエム・フォルトウィトラムＡＴＣＣ６８４２
の代わりにミコバクテリウム・フレイ（Ｍｙｃｏｂａｃ
ｔｅｒｉｕｍ ｐｈｌｅｉ ）、エム・スメグマチス（
Ｍ、 ｓｍｅｇｍａｔ ｉ ｓ ）、エム・ロードクロ
ウス（Ｍ、 ｒｈｏｄｏｃｈｒｏｕｓ ）、エム・ミュ
コスム（Ｍ、 ｍｕｃｏｓｕｍ）、及びエム・ブチリク
ム（Ｍ。
の代わりにミコバクテリウム・フレイ（Ｍｙｃｏｂａｃ
ｔｅｒｉｕｍ ｐｈｌｅｉ ）、エム・スメグマチス（
Ｍ、 ｓｍｅｇｍａｔ ｉ ｓ ）、エム・ロードクロ
ウス（Ｍ、 ｒｈｏｄｏｃｈｒｏｕｓ ）、エム・ミュ
コスム（Ｍ、 ｍｕｃｏｓｕｍ）、及びエム・ブチリク
ム（Ｍ。
ｂｕｔｙｒｉｃｕｍ）からなる群から選ばれるステロー
ルを減成分解させる微生物を使用して、２〜１０個の炭
素原子の１７−アルキル側鎖をもった、又はもたないス
テロイドを選択的に減成分解させて発酵液中に化合物Ｉ
及び■を蓄積する能力によつて特徴づけられる、突然変
異株の微生物が得られる。
ルを減成分解させる微生物を使用して、２〜１０個の炭
素原子の１７−アルキル側鎖をもった、又はもたないス
テロイドを選択的に減成分解させて発酵液中に化合物Ｉ
及び■を蓄積する能力によつて特徴づけられる、突然変
異株の微生物が得られる。
参考例 ４
実施例２〜６のエム・フォルトウィトラムＮＲＲＬ Ｂ
−８１２９の代わりに参考例３で得られる突然変異株を
使用して、化合物Ｉ及びＭが得られる。
−８１２９の代わりに参考例３で得られる突然変異株を
使用して、化合物Ｉ及びＭが得られる。
実施例 ７
実施例２のシトステロールの代わりにアンドロスト−４
−エン−３，１７−ジオン、アンドロスタ−１，４−ジ
エン−３，１７−ジオン、デヒドロエピアンドロステロ
ン及びテストステロンからなる群から選ばれる化合物を
使用して、化合物Ｉ及びＭが得むれる。
−エン−３，１７−ジオン、アンドロスタ−１，４−ジ
エン−３，１７−ジオン、デヒドロエピアンドロステロ
ン及びテストステロンからなる群から選ばれる化合物を
使用して、化合物Ｉ及びＭが得むれる。
実施例 ８
実施例２のシトステロールの代わりにシトステロール、
Ｄ レス７Ｄ−ル、スチグマステロール、アンドロスト
−４−エン−３，１７−ジオン、アンドロスタ−１，４
−ジエン−３，１７−ジオン、デヒドロエピアンドロス
テロン、及がテストステロンからなる群から選ばれる２
種又はそれ以上の化合物類の組合せて使用して、化合物
Ｉ及び■が得られる。
Ｄ レス７Ｄ−ル、スチグマステロール、アンドロスト
−４−エン−３，１７−ジオン、アンドロスタ−１，４
−ジエン−３，１７−ジオン、デヒドロエピアンドロス
テロン、及がテストステロンからなる群から選ばれる２
種又はそれ以上の化合物類の組合せて使用して、化合物
Ｉ及び■が得られる。
参考例 ５
実施例７及び８のエム・フォルトウィトラムＮＲＲＬＢ
−８１２９の代わりろ参考例１で得られる突然変異株を
使用して、化合物Ｉ及びＶが得られる。
−８１２９の代わりろ参考例１で得られる突然変異株を
使用して、化合物Ｉ及びＶが得られる。
参考例 ６
実施例７及び８のエム・フォルトウィトラムＮＲＲＬＢ
−８１２９の代わりに参考例３で得られる突然変異株を
使用して、化合物Ｉ及が駅が得られる。
−８１２９の代わりに参考例３で得られる突然変異株を
使用して、化合物Ｉ及が駅が得られる。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 好気的条件下、水性栄養培地中で２〜１０個の炭素
原子の１７−アルキル側鎖をもった又はもたないステロ
イド類を選択的に減成分解させ１発酵液中に３ａα−Ｈ
２Ｃ−〔３′−プロパツール〕−７ａβ−メチルヘキサ
ヒｌ−’Ｏ−１，５−インダンジオンへミケタール及び
３ａα−Ｈ−４α−〔３′−グロパノール〕−５α−ヒ
ドロキシ−７ａβ−メチルへキサヒドロ−１−インダノ
ンを優勢的に蓄積する能力によつで特徴づけられる新規
な実験室に於ける突然変異化により得られた突然変異株
ミコバクテリウム フォルトウィトラム（Ｍｙｃ−ｏｂ
ａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｏｒｔｕｉ ｔｕｍ）。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US05/632,635 US4039381A (en) | 1975-11-17 | 1975-11-17 | Composition of matter and process |
| US632635 | 1975-11-17 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS561882A JPS561882A (en) | 1981-01-10 |
| JPS5934353B2 true JPS5934353B2 (ja) | 1984-08-22 |
Family
ID=24536310
Family Applications (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP51137431A Granted JPS5264489A (en) | 1975-11-17 | 1976-11-17 | Composition of substance and method |
| JP55004671A Expired JPS5934353B2 (ja) | 1975-11-17 | 1980-01-21 | ミコバクテリウムフオルトウイトウムの新規な突然変異微生物 |
| JP467280A Pending JPS55131395A (en) | 1975-11-17 | 1980-01-21 | Production of compound by microorganism in presence of steroid |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP51137431A Granted JPS5264489A (en) | 1975-11-17 | 1976-11-17 | Composition of substance and method |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP467280A Pending JPS55131395A (en) | 1975-11-17 | 1980-01-21 | Production of compound by microorganism in presence of steroid |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4039381A (ja) |
| JP (3) | JPS5264489A (ja) |
| CH (1) | CH634350A5 (ja) |
| DD (1) | DD128789A5 (ja) |
| DE (2) | DE2660114C2 (ja) |
| FR (1) | FR2333043A1 (ja) |
| GB (1) | GB1570621A (ja) |
| IE (1) | IE44670B1 (ja) |
| IL (1) | IL50894A (ja) |
| NL (1) | NL169196C (ja) |
| PL (1) | PL106849B1 (ja) |
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| US3684657A (en) * | 1970-05-11 | 1972-08-15 | Searle & Co | Selective microbiological degradation of steroidal 17-alkyls |
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- 1975-11-17 US US05/632,635 patent/US4039381A/en not_active Expired - Lifetime
-
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- 1976-11-17 FR FR7634672A patent/FR2333043A1/fr active Granted
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- 1976-11-17 IE IE2539/76A patent/IE44670B1/en unknown
- 1976-11-17 DD DD7600195817A patent/DD128789A5/xx unknown
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- 1976-11-17 DE DE2660114A patent/DE2660114C2/de not_active Expired
- 1976-11-17 DE DE2652377A patent/DE2652377C3/de not_active Expired
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1977
- 1977-02-10 US US05/767,368 patent/US4098647A/en not_active Expired - Lifetime
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- 1980-01-21 JP JP55004671A patent/JPS5934353B2/ja not_active Expired
- 1980-01-21 JP JP467280A patent/JPS55131395A/ja active Pending
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