JPS59227744A - Ｄｎａ回収用ガラス粉粒物 - Google Patents
Ｄｎａ回収用ガラス粉粒物Info
- Publication number
- JPS59227744A JPS59227744A JP10243583A JP10243583A JPS59227744A JP S59227744 A JPS59227744 A JP S59227744A JP 10243583 A JP10243583 A JP 10243583A JP 10243583 A JP10243583 A JP 10243583A JP S59227744 A JPS59227744 A JP S59227744A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- granular
- glass
- dna
- glass powder
- powdery glass
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Surface Treatment Of Glass (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、ＤＮＡ回収用ガラス粉粒物、更に詳しくはＤ
ＮＡを含むアガロースゲルから該ＤＮＡを簡易且つ高率
にそして高分子のＤＮＡでもこれを損なうことなく回収
し、回収ＤＮＡのその後の酵素処理等各種展開に極めて
有利なりＮＡ回収用ガラス粉粒物に関する。
ＮＡを含むアガロースゲルから該ＤＮＡを簡易且つ高率
にそして高分子のＤＮＡでもこれを損なうことなく回収
し、回収ＤＮＡのその後の酵素処理等各種展開に極めて
有利なりＮＡ回収用ガラス粉粒物に関する。
従来、ＤＮＡを含むアガロースゲルから該ＤＮＡを回収
する場合、低融点アガロースを用いる手段やアガロース
を破砕して自然拡散する手段、更には電気泳動による手
段等が行なわれている。
する場合、低融点アガロースを用いる手段やアガロース
を破砕して自然拡散する手段、更には電気泳動による手
段等が行なわれている。
ところが、これらの従来手段によると、単に回収操作が
煩雑且つ面倒であるというだけでなく、回収率が最大６
０％程度といわれているものの、実際のところは３０〜
４０％と低く、また高分子のＤＮＡは回収途中において
損なわれることも多く、更にその性質上回収ＤＮＡの濃
度が低くなって、該回収ＤＮＡのその後の酵素処理等各
種展開をするには加えて厄介な濃縮操作等を強いられる
こと等、多くの欠点がある。
煩雑且つ面倒であるというだけでなく、回収率が最大６
０％程度といわれているものの、実際のところは３０〜
４０％と低く、また高分子のＤＮＡは回収途中において
損なわれることも多く、更にその性質上回収ＤＮＡの濃
度が低くなって、該回収ＤＮＡのその後の酵素処理等各
種展開をするには加えて厄介な濃縮操作等を強いられる
こと等、多くの欠点がある。
本発明者らは、斜上の如き実情に鑑み、従来欠点を解消
するべく、アガロースゲルに含まれる貴重なりＮＡの新
たな回収手段について鋭意研究した結果、特定のガラス
粉粒物を使用すると、所望通りＤＮＡが該ガラス粉粒物
に付着回収されることを見出し、本発明を完成するに至
った。
するべく、アガロースゲルに含まれる貴重なりＮＡの新
たな回収手段について鋭意研究した結果、特定のガラス
粉粒物を使用すると、所望通りＤＮＡが該ガラス粉粒物
に付着回収されることを見出し、本発明を完成するに至
った。
すなわち本発明は、濃塩酸及び濃硝酸処理をした後、純
水で充分に洗浄し、次いで低沸点アルコール処理をして
乾燥した、平均粒径３〜５０μのＤＮＡ回収用ガラス粉
粒物に関する。
水で充分に洗浄し、次いで低沸点アルコール処理をして
乾燥した、平均粒径３〜５０μのＤＮＡ回収用ガラス粉
粒物に関する。
以下、本発明の構成を詳細に説明する。
本発明において対象となるガラス粉粒物は、その材質に
特に制限はない。しかし、所謂低カリガラスが好せしい
０アルカリガラスや鉛ガラス等も後述するような処理を
行なえば使用可能ではあるが、回収ＤＮＡの酵素処理等
に弊害を生じるおそれがあるため、避けた方がよい。そ
して、該ガラス粉粒物は、平均粒径３〜５０μのものを
対象とする。これらは、沈降分離法、例えば水沈降分離
法で分別できるが、平均粒径３μ未満のものは事実上分
別が困難であり、また平均粒径５０μを超えるものはＤ
ＮＡの回収効率が悪い０平均粒径５〜１０μのものを使
用対象とすると、所望の効果が安定発揮され、本発明の
目的に照らして一層好適である。ガラス粉粒物の分別は
、例えば東芝ノくロティー二社製のＥｇＢタイプ３７μ
以下のものを用いて水沈降分離法で容易になされるが、
これは後述する処理の前、処理の後又は処理中のいずれ
の段階で行なってもよい。但し、純水洗浄後低沸点アル
コール処理前の段階で行なうのが好ましい。
特に制限はない。しかし、所謂低カリガラスが好せしい
０アルカリガラスや鉛ガラス等も後述するような処理を
行なえば使用可能ではあるが、回収ＤＮＡの酵素処理等
に弊害を生じるおそれがあるため、避けた方がよい。そ
して、該ガラス粉粒物は、平均粒径３〜５０μのものを
対象とする。これらは、沈降分離法、例えば水沈降分離
法で分別できるが、平均粒径３μ未満のものは事実上分
別が困難であり、また平均粒径５０μを超えるものはＤ
ＮＡの回収効率が悪い０平均粒径５〜１０μのものを使
用対象とすると、所望の効果が安定発揮され、本発明の
目的に照らして一層好適である。ガラス粉粒物の分別は
、例えば東芝ノくロティー二社製のＥｇＢタイプ３７μ
以下のものを用いて水沈降分離法で容易になされるが、
これは後述する処理の前、処理の後又は処理中のいずれ
の段階で行なってもよい。但し、純水洗浄後低沸点アル
コール処理前の段階で行なうのが好ましい。
かかるガラス粉粒物を次のように処理する。本発明者ら
は、本発明完成過桓において、簡単な純水洗浄以外には
特に何らの処理もすることなく、各種（材質、平均粒径
）のガラス粉粒物を用いてＤＮＡ回収試験を行なった。
は、本発明完成過桓において、簡単な純水洗浄以外には
特に何らの処理もすることなく、各種（材質、平均粒径
）のガラス粉粒物を用いてＤＮＡ回収試験を行なった。
その結果、少なくも従来手段に比べ、ＤＮＡの回収操作
や回収率は著るしく向上した。しかし、回収ＤＮＡを用
いてその後の利用展開である例えば酵素処理をすると、
予期し得ない程度に不規則な酵素活性阻害が頻繁に発生
した。しかして本発明者らは、その原因を追究すると、
回収操作段階において使用したガラス粉粒物とともに持
ち込まれる金属類によることが判った。ＤＮＡ回収操作
や回収率の向上に加えて、回収ＤＮＡのその後の利用展
開に安定と便宜を供するには、ガラス粉粒物を次のよう
に処理することが肝要である。
や回収率は著るしく向上した。しかし、回収ＤＮＡを用
いてその後の利用展開である例えば酵素処理をすると、
予期し得ない程度に不規則な酵素活性阻害が頻繁に発生
した。しかして本発明者らは、その原因を追究すると、
回収操作段階において使用したガラス粉粒物とともに持
ち込まれる金属類によることが判った。ＤＮＡ回収操作
や回収率の向上に加えて、回収ＤＮＡのその後の利用展
開に安定と便宜を供するには、ガラス粉粒物を次のよう
に処理することが肝要である。
先ず、ガラス粉粒物を濃塩酸及び濃硝酸処理する。これ
らは別々に行なっても又は同時に行なってもよいが、操
作の安全を期するため、別々に行なう方がよい。例えば
、ガラス粉粒物をその４〜５倍容量の濃塩酸に入れ、要
すれば若干の加熱をしつつ、３〜５時間程度静かに攪拌
する。この場合、室温静置であってもよい。そして、濃
塩酸を切シ、再び新たな濃塩酸を同様に加えて処理する
。
らは別々に行なっても又は同時に行なってもよいが、操
作の安全を期するため、別々に行なう方がよい。例えば
、ガラス粉粒物をその４〜５倍容量の濃塩酸に入れ、要
すれば若干の加熱をしつつ、３〜５時間程度静かに攪拌
する。この場合、室温静置であってもよい。そして、濃
塩酸を切シ、再び新たな濃塩酸を同様に加えて処理する
。
このような操作を３回程度繰り返した後に、水洗浄して
塩酸成分を除去する。次いで、濃塩酸処理とほぼ同様に
濃硝酸処理を行なう。一応の目安として、濃硝酸溶液が
着色しないようになるまで行なう。
塩酸成分を除去する。次いで、濃塩酸処理とほぼ同様に
濃硝酸処理を行なう。一応の目安として、濃硝酸溶液が
着色しないようになるまで行なう。
次に、純水（精製水、蒸留水）でガラス粉粒物を洗浄す
る。例えば、前述の如く濃硝酸処理をした後、濃硝酸を
切シ、上澄液がｐＨ５〜７程度になるまで純水で洗浄し
て、硝酸成分等を除去する。
る。例えば、前述の如く濃硝酸処理をした後、濃硝酸を
切シ、上澄液がｐＨ５〜７程度になるまで純水で洗浄し
て、硝酸成分等を除去する。
粒径分別されていないガラス粉粒物を対象とした場合に
は、この段階で分別するのがよい。前述の如き酸処理等
におけるガラス粉粒物の予期せぬ破砕や、後述の如き低
沸点アルコール処理後における不用意な有機成分の付着
等による悪影響を安全排除するためである。具体的に分
別は、例えば、前述の如く純水洗浄したものから、水（
純水）沈降分離法で、平均粒径３〜５０μ、好ましくは
５〜１０μのガラス粉粒物を得る。
は、この段階で分別するのがよい。前述の如き酸処理等
におけるガラス粉粒物の予期せぬ破砕や、後述の如き低
沸点アルコール処理後における不用意な有機成分の付着
等による悪影響を安全排除するためである。具体的に分
別は、例えば、前述の如く純水洗浄したものから、水（
純水）沈降分離法で、平均粒径３〜５０μ、好ましくは
５〜１０μのガラス粉粒物を得る。
最後に、ガラス粉粒物を低沸点アルコール処理して乾燥
する。例えば、前述の如く純水で洗浄した後（更に要す
れば分別した後）、純水を切り、メチルアルコールやエ
チルアルコールの如き低沸点アルコールを用いて、前述
した酸処理とほぼ同様にガラス粉粒物を処理する。ガラ
ス粉粒物に付着していることのある有機成分を除去し、
同時にガラス粉粒物を乾燥し易くしてから、常法により
乾燥する。
する。例えば、前述の如く純水で洗浄した後（更に要す
れば分別した後）、純水を切り、メチルアルコールやエ
チルアルコールの如き低沸点アルコールを用いて、前述
した酸処理とほぼ同様にガラス粉粒物を処理する。ガラ
ス粉粒物に付着していることのある有機成分を除去し、
同時にガラス粉粒物を乾燥し易くしてから、常法により
乾燥する。
かくして得られるＤＮＡ回収用ガラス粉粒物は、コレラ
用イてＤＮＡを含むアガロースゲルかう該ＤＮＡを付着
回収するに、操作が簡単で、回収率が７５％以上と高く
、０．２〜１９ＫＢの範囲のＤＮＡを損なうことなく回
収でき、しかも回収ＤＮＡの多方面への利用展開がし易
く、例えばその酵素処理において悪影響が全くない。
用イてＤＮＡを含むアガロースゲルかう該ＤＮＡを付着
回収するに、操作が簡単で、回収率が７５％以上と高く
、０．２〜１９ＫＢの範囲のＤＮＡを損なうことなく回
収でき、しかも回収ＤＮＡの多方面への利用展開がし易
く、例えばその酵素処理において悪影響が全くない。
・実施例
ガラス粉粒物（東芝バロティー二社製、ＥｇＢりイブ、
３７μ以下）に、該ガラス粉粒物の５倍容量の濃塩酸を
加えて室温で静かに３時間攪拌した後に濃塩酸を切る、
という操作を３回縁シ返し、水洗浄して塩酸成分を除去
した。このガラス粉粒物に濃塩酸処理とほぼ同様の濃硝
酸処理を３回繰り返し、濃硝酸を切ってから、上澄液の
ｐＨ６になるまで蒸留水で繰り返し洗浄した０洗浄した
ガラス粉粒物を、蒸留水で水沈時分離し、平均粒径５〜
１０ ＩＩのものを分別した。そして、分別後のガラス
粉粒物に、その５倍容量のエチルアルコールを加えて室
温で静かに３時間攪拌した後にエチルアルコールを切る
、という操作を２回繰り返し、室温で真空乾燥して、本
発明に係るＤＮＡ回収用ガラス粉粒物を得た。
３７μ以下）に、該ガラス粉粒物の５倍容量の濃塩酸を
加えて室温で静かに３時間攪拌した後に濃塩酸を切る、
という操作を３回縁シ返し、水洗浄して塩酸成分を除去
した。このガラス粉粒物に濃塩酸処理とほぼ同様の濃硝
酸処理を３回繰り返し、濃硝酸を切ってから、上澄液の
ｐＨ６になるまで蒸留水で繰り返し洗浄した０洗浄した
ガラス粉粒物を、蒸留水で水沈時分離し、平均粒径５〜
１０ ＩＩのものを分別した。そして、分別後のガラス
粉粒物に、その５倍容量のエチルアルコールを加えて室
温で静かに３時間攪拌した後にエチルアルコールを切る
、という操作を２回繰り返し、室温で真空乾燥して、本
発明に係るＤＮＡ回収用ガラス粉粒物を得た。
得られたガラス粉粒物を用いてＤＮＡの回収試験を次の
ように行なった。ｌ０ＫＢのＤＮＡ０．１７μｇを含む
０７％アガロースゲルに、ガラス粉粒物１０〜と飽和ヨ
ウ化ナトリウム水溶液（１０ｍＭの亜硫酸ナトリウムを
含む） ０．４ ｔｎｌを加え、室温で４時間、ゆっ〈
フと振盪した後、１００００Ｇ×５分で遠心分離して上
液を廃棄した。これに、７０％（Ｗ／Ｖ ）ヨウ化ナト
リウム水溶液１ ｍｌを加えて室温で１時間ゆっくシと
振盪した後に１ｏ。
ように行なった。ｌ０ＫＢのＤＮＡ０．１７μｇを含む
０７％アガロースゲルに、ガラス粉粒物１０〜と飽和ヨ
ウ化ナトリウム水溶液（１０ｍＭの亜硫酸ナトリウムを
含む） ０．４ ｔｎｌを加え、室温で４時間、ゆっ〈
フと振盪した後、１００００Ｇ×５分で遠心分離して上
液を廃棄した。これに、７０％（Ｗ／Ｖ ）ヨウ化ナト
リウム水溶液１ ｍｌを加えて室温で１時間ゆっくシと
振盪した後に１ｏ。
００ＧＸ ５分で遠心分離して上液を廃棄する、という
操作を３回繰り返した。引き続き、エチルアルコールｌ
ｙｔｔｌを加えて室温で１時間ゆっくりと振盪した後
に１００００ＧＸ ５分で遠心分離して上液を廃棄する
、という操作を３回繰り返した。そして、以上の如く処
理したものを室温で真空乾燥し、ＤＮＡの付着したガラ
ス粉粒物を得た。この乾燥したガラス粉粒物に、蒸留水
０．１５ ｙｔｔｌを加えて３７℃×３０分間静置した
後に１００ＯＯＧＸｓ分で遠心分離して上液を回収する
、という操作を２回縁シ返した。合わせた上液中に回収
されたＤＮＡは、何ら損なわれておらず、放射性同位元
素を用いてのその回収率は８５．６％の高率であり、そ
の酵素処理等展開利用は極めて円滑であった。
操作を３回繰り返した。引き続き、エチルアルコールｌ
ｙｔｔｌを加えて室温で１時間ゆっくりと振盪した後
に１００００ＧＸ ５分で遠心分離して上液を廃棄する
、という操作を３回繰り返した。そして、以上の如く処
理したものを室温で真空乾燥し、ＤＮＡの付着したガラ
ス粉粒物を得た。この乾燥したガラス粉粒物に、蒸留水
０．１５ ｙｔｔｌを加えて３７℃×３０分間静置した
後に１００ＯＯＧＸｓ分で遠心分離して上液を回収する
、という操作を２回縁シ返した。合わせた上液中に回収
されたＤＮＡは、何ら損なわれておらず、放射性同位元
素を用いてのその回収率は８５．６％の高率であり、そ
の酵素処理等展開利用は極めて円滑であった。
特許出願人 理科研株式会社
代理人 弁理士 入山宏正
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 濃塩酸及び濃硝酸処理をした後、純水で充分に洗浄
し、次いで低沸点アルコール処理をして乾燥した、平均
粒径３〜５０μのＤＮＡ回収用ガラス粉粒物。 ２平均粒径が５〜１０μである特許請求の範囲第１項記
載のＤＮＡ回収用ガラス粉粒物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10243583A JPS59227744A (ja) | 1983-06-08 | 1983-06-08 | Ｄｎａ回収用ガラス粉粒物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10243583A JPS59227744A (ja) | 1983-06-08 | 1983-06-08 | Ｄｎａ回収用ガラス粉粒物 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59227744A true JPS59227744A (ja) | 1984-12-21 |
Family
ID=14327384
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10243583A Pending JPS59227744A (ja) | 1983-06-08 | 1983-06-08 | Ｄｎａ回収用ガラス粉粒物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59227744A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1989002436A1 (fr) * | 1987-09-17 | 1989-03-23 | Appligene | Procede de fixation et de separation de molecules comportant au moins un fragment d'adn naturel ou synthetique |
| FR2620706A1 (fr) * | 1987-09-17 | 1989-03-24 | Appligene Sa Labo Biolog Molec | Procede de traitement par solvants d'adn en phase heterogene |
| FR2623505A1 (fr) * | 1987-11-25 | 1989-05-26 | Appligene Sa | Procede de fixation et de separation de molecules comportant au moins un fragment d'adn naturel ou synthetique |
| EP0819696A3 (en) * | 1989-03-23 | 1998-07-15 | Akzo Nobel N.V. | Process for isolating nucleic acid |
| US8586350B2 (en) | 2004-02-12 | 2013-11-19 | Gl Sciences Incorporated | Mechanism of separating and purifying DNA and the like |
-
1983
- 1983-06-08 JP JP10243583A patent/JPS59227744A/ja active Pending
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1989002436A1 (fr) * | 1987-09-17 | 1989-03-23 | Appligene | Procede de fixation et de separation de molecules comportant au moins un fragment d'adn naturel ou synthetique |
| FR2620706A1 (fr) * | 1987-09-17 | 1989-03-24 | Appligene Sa Labo Biolog Molec | Procede de traitement par solvants d'adn en phase heterogene |
| FR2623505A1 (fr) * | 1987-11-25 | 1989-05-26 | Appligene Sa | Procede de fixation et de separation de molecules comportant au moins un fragment d'adn naturel ou synthetique |
| EP0819696A3 (en) * | 1989-03-23 | 1998-07-15 | Akzo Nobel N.V. | Process for isolating nucleic acid |
| US8586350B2 (en) | 2004-02-12 | 2013-11-19 | Gl Sciences Incorporated | Mechanism of separating and purifying DNA and the like |
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