JPS59210898A - ゲル化性物質およびその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は半合成ダル化性物質、その製造法及びその応用
とくに微生物用培蛙基中の寒天の代替物としての応用に
ｌｙｌする。

微生物学分析実、験室（てち・いて現在実施さ几ている
微生物の分子“１４１・Ｙ・作は、こｎ２らの微生物が
適切（・て定められた物理化学的条件下において発育す
る培養クイ（中又嬬−その表面にこ２しらの微生物の接
種を行なうことイ「包含する。こ（７）接ｒ４ｒ　ｔ・
：ｌ：　Ｌばし１・寸ゲル中に含丑れている栄香苅素か
らなる固体培ｆヒ基の衣■１に行なわ九る。杵にＩｌｌ
　ｅ＋’［にｔ〈１〕灯しながら力嶺（［さ几たコロニ
ーを形成する 水性り装体中において凝向しｊ！ｆるゲルを形成するこ
とのできる多数の物１ｔ′」が公知である：こｎ、らの
物質（仕たとえばｆ、・成高分子物質（ポリアクリルア
ミド、ポリカルシン８？キシルビニル ど鉱物質である。しかしながらこｆらの物質は可逆性で
ないので培養基の形成にも容易な調製にも適応していな
い；そのうえ合成高分子の場合にはゲルの形成を生起さ
せるためにそｒしらに重合剤全添加する必要があり、そ
のため乾燥粉末への単なる水の添加による培養基の調製
とは両立し得ない。

同様に温度の作用下でゲルを形成することのできる天然
の高分子物質も多数存在している：たとえばゼラチン及
びペクチンの場合であジ、こ几らは培３Ｙ・１（と両立
できるが細菌学の分野での応用がＩｓＪ”、らｆている
；実際にこ１，らのゲルは多数の細菌によって侵さ几る
。

今日まで天然の寒天のみが細菌学の分野において一般的
１，Ｃ使用することを可能にする特性金偏えている。こ
几は可逆性ゲルを形成する唯一の材料であり融点（７０
０℃）がゲル化温度（ｌＩ−０℃）より洛かに高く安定
である。そのうえ細菌によって急速には侵さ九ずまた何
ら毒性のない物質である。

天然の寒天すなわちゲロース（ｇｃｌｏｓｅ）は紅藻類
（でｋＳする利遥々の海）、名から抄１　？ｆ’ｔ　し
てイ（）ら几る。そノＬはアガロースと呼（ゴー八でい
る、市販の形で（はつねに大なり小なり乙（Ｑ］１（ヲ
イイする（／・・・３）β−Ｄ−　カフ／　ｈ−スｆＬ
６ン、’ト（　／−’ｌ　）　３　、　ｌ　−　７　ｙ
ヒドロ−ａ　””　Ｊ−１−カラクトースの単位とが交
互の反イア；ジによって形成さノア、るポリガラクタン
の骨格全すべて偵えている多？）１：＋類のドライ（な
混合物である。ふ１１粋なアガロースｌ′：Ｊ：″）−
コ１ジ，−（（に１３天然シて（伐存在していない。

２ｊ℃の水には実，ｊ１Ｆ上不酌のり質であり７００℃
に近づくと水中（ｌこ分ｊ攻してコロイＩＳ〃）液を牛
し、その粘度はその起て）ヴ及び４度によって変化する
。

少なくとも０は飴の１１゛二度では冷却によってゲルを
形成し７、とｆ！（は安定性がよく可逆性である（加熱
すると督にＩＩ！　Ｌ２、グＯ℃未４１・ｋの温度で再
ひゲル化する）。こｎ、らのゲル（ｉその動的ゲル化温
度（冷却による溶液状態からゲル状態への移行）及び等
温湿ル（穴天酬液がゲル全作らずに無限に保１１さｎ得
る最低温度）によって％徴づけら几る。これらの″う・
ｌ−夕もまた寒天の起源、その分子Ｎ４　、製造ロット
及びゲル１度によっても変化する。

り）コ天全ゲル化性物質として用いる固体培養基のｉｉ
！．Ｉ製は、この寒天を適当な栄養物質と混合し次に水
の添加後に全体をオートクレーブ中を通過させることに
よって滅菌しながら可溶化することからなる。

現在せで、寒天及び適当な栄養物質を混合して含んでい
るｉ￥ｉちに使用できる乾燥粉末が知ら几ている；こ几
ら滅菌してない粉末は少なくともＳＯＯ２のロットとし
て市販さ几ている、と几らの粉末からの培養基の調製（
ｄ、下記の一連の操作を要するニー所望の針金秤量する
（たとえば水／ｌあたりａｏｙ　　）　ニ ー沸ル３−させながらこの粉末を水に誤解するニーこの
溶液を少なくとも．２０分間７ノθ℃のオートクレーブ
中全通過させる； 一手作業により又は機械を用いて培養容器（ペトリ皿等
）へ配分する： こ九らの操作全体には少なくとも７時間を要する。こ几
には単位使用量（単一の培養テストを実施するのに必要
な粉末の柘）にと几らの粉末を分包することは除外しで
ある。つねに少なくとも、２０乃至４１−０個のペトリ
皿全／回に１１′ｉ◇１１１するが、このことはとくに
しばしば予測の困ＩＱ々実験室での日日の使用量の変動
が原因で別の不都合がある。

本発明ばこ几らの不都合全排除することを目的とする。

本発明者らは寒天に代Ｖ得る新規の半合成ゲル化性物質
であってかつ乾燥粉末の形で使用する際に、とくに培養
基として使用する際に、その溶解全完全にしかつその滅
菌Ｔｆ　イ１！ｐ実にするためのオートクレーブ通過の
必要性をとくに省略することによって、こフ１．らの培
養基の調製の時間全大幅に短縮ｌ〜得るゲル化物質の完
成に成功した：かくしで滅菌的に取扱いできる滅菌した
同一の容器内にゲル化性物質と使用定薩の栄養物質粉末
と分包して単位用（１￥の形のこ几ら培養基を調製する
ことが可能である。

従って本発明は新規なゲル化性物質であって、本質的に
は寒天と同様に、１）形及びＬ形のガラクトースが交互
に配列さｆ′１２ている、測針のないポリガラクタンの
比較的短かいかつ交錯している分子イ・ｉ、ｌｔから＋
１斤成さ几ていること？特徴とするゲル化性セ・・質を
提供することを目的とする；この物質中には上記の骨格
を備えた、抽出により又は化学合成により得られるイし
１ノの物質が何ら存在していないの子付゛シがより短か
くかつ交錯して′！＝−９、かつ、アルミニウム、珪素
及びチタンの酸化物のごとき不活性斤金属酸化物オでｌ
子音結合している点で寒天とは！ラヲっている。ポリガ
ラクタンに対する金属酸化物の７１１合はポリガラクタ
ン分子鎖の長さに逆比例するが、この割合は１０乃至と
０係であることがイ１／ｉ：ｌｌである。

本発明によるゲル化性物質ｃ以下においては合成ガラク
タン−咳化物又はＰＧＳ−０と称する）ｉｌ−１，寒天
に類似する物理化学的性質を有する；すなわち１．２夕
℃の水に（は実質上不溶であるがざ０℃からの水中には
分散する；冷却によりゲルを形成する；水中にｔ容解す
ると（１俄に応じて粘度の変化する分散液全形成する；
少なくともＯ１！係の両度では安定かつ可逆性のゲルを
形成する；という寒天の性質に類似する性質を有する。

しかしＰ　Ｇ　Ｓ　−０（ｒ、（アガロ−スジこ比べて
下記の本Ｔコ的な相違及び特性不−有するニ ーＰＣ）Ｓ　−Ｏｆｄ８′０℃の温度から溶液全形成す
るのに対し、同じ部層で同一粒度の寒天粒子１ｄ　Ｗ解
せずに形暑１１する。従ってＰＧＳ−Ｃ）の本質的特性
は、１０℃の温度から水に完全に溶解′１″ることであ
る。

ｍ−アガロース分子鎖は相互間でのみ架橋全形成し７、
このことにより外観が結晶状のゲルが得られる。こ几に
対してＰＧＳ　−０分子鎖は余病［唆化物粒子を結合し
ており従って水中の酸化物粒子県岨濁液全ゲル化する。

第１図ｄ、この４］’Ｌ造の１渭的に示したものである
。

−Ｐ　（Ｊ　Ｓ　−Ｏ分子／４１ｉはアガロース分子鎖
より遥かに小さい。分子％１’ｊの長さは、この分子鎖
は分子ｉｉ’（３，２夕（）１２０）の置換基のない１
１１１〜のジサッカリ１７が反復しているものからなる
ので分子付に、ｒ、’）　８１１１定する。Ｐ　Ｇ　Ｓ
　−（、）の使用可能な分子’：？ｉ４　ｉｒｊ分子ｈ
ｉ″カｌ　０００乃示／　ｊ　０００　（！ｌ：変動し
従ってジザツカリド゛の個数ｎば／２乃至ＩＩＱ−３”
０と俊：　１ｉｌｂする。アガロースではｎが天然寒天
の起栃（シでよって名−しく変動する（２０乃至！００
）。ＰＧＳ−０の分子力づ′娃：各製作ロットことに測
定さγＩ、使用者へ通知さｔ′する（たとえ（・；じＰ
Ｇ８１０００、と０００、・・・・・・全含むａ−ｑ品
）がこのことは裸火については不可能である；この１ｌ
ｉｉｊ定は分子篩での試験ヲ行なう必、要があり寒天（
２つねに大なり小なり置換基のある同じ官格の多糖類の
混合物からなる。

Ｐ　ＧＳ　−（、）の粉末は白色であり厚さが／／’１
００伽未６（ηの術細なフレークの形をしている。細菌
学に用いら几る１）Ｏ８−ＯＶ７Ｃついては見かけ７６
度が寒天のく、のより小さい。たとえばｉ面１１学的品
質のＰＧＳ−０であって分子計が／、２θ０θであＩｆ
）　Ａｔ２０３？　Ｔ　ｉ０２及び５ｉ０２　ｆ　ｌ−
１：／７：／ｌ：０／（実用例／参照）の割合で含んで
いるものは児かけ密度（嵩密度）がθ、／／とであり、
一方同じ用途に用いら几る細菌学的寒天は児かけ密度が
０．３　ｆμであり第１７子を形成する。

（粉末の見かけ落度はガレノス調剤術において用いらガ
る尺度である。こ２１は圧縮（質密化）してない、ある
容積の粉末のＶ届と定Ｑｌ、ｉ。

さ几る：たとｉ　（４Ｐ　ＯＳ　−０１Ａ　、　／　７
　、／　Ａ　、　０　／の圧縮してないものの／Ｌは／
／に７の重量を有する）こ几に反して直の■〒度はＰＧ
Ｓ−０の方が寒天より大きい（ブに天け／内外、ＰＣ）
Ｓ−Ｏｔｔ、／７．１５０／（ｄ／、３　；　こｎは金
属酸化物の存在による）。

−Ｐ　Ｇ　Ｓ　−０の粉末は顆粒化及び圧縮に耐える二
ＰＧＳ−０粒子はごｔ集でき圧縮後に相互連結さｆした
ま寸でいることができる。顆粒又圧粗した固体で脆くな
いものが得ら几、こ几らば１０−１００℃の水に溶角了
する。このことは＋１１販の寒天では不可能である。

−アガロースのゲルでは分子錠が平行で規則的であるが
一方、ＰＧＳ−０のゲルでは紙のセルロース横細のよう
にからみあっている。この何件は容易にＸ線の回折によ
って験証できる：アガロースは反復構造？示しく結晶域
）、一方ＰＧＳ−０は回折のかさくｈａｌｏ’＞ｅ現わ
すのみで構造の規則正しさを示さない〔無定形域）。

−化学分析によりもちろん（ポリガランクンのみケ含ん
でいる）アガロースと１ｌｊｐ々の金属酸化物全含有す
ることを特徴とする本発明による各７７ｐｏｓ−ｏとを
区別することができるー第３図及び第μ図に示しである
アガロースとＰＧＳ−０とのＮＭＲスペクトルは近似し
ているが明らかに区別することが可能である。

市販の寒天について炭素／３を検出に用いるＮＭＲによ
って得られるスペクトル〔第３図）は炭素原子（複数）
に相当する／、２の異なる主要信号を明かに示しており
、と几は、アガロースが同じジル゛ツカリド単位が反復
している規則正しい構造を備えていること全示す、１０
３．４Ｌ及びＰ　！ｌ；’、、２ｐｐｍに記録さ几た信
号はβ−Ｄ−ガラクトピラノシルの炭素Ｃ！及び３．ｚ
−アンヒドロ−α−Ｌ−ガラクトピラノンルの炭＊ｃ１
に帰ぜらノする；にλ、４ｔｐｐｍのｆＮ号ばＤ−ガラ
クトースの０６の炭素に帰せられる。その他の信号Ｖｊ
ジサッヵリド単位台構成する他のり個の炭素に相当しピ
ークの高さはこれら炭十にある置換ノｘの性質とともに
変化し或いはｔ　ｏ　ｐｐｍのメトキシル寿５のどとき
ｉａ　Ｍｙ基に・泪当する ＰＯ３−０（第４図）では酸化！吻がアガロースで（は
見出たさｎない動機のある吸収を示す。ボリガラククン
に相当する域Ｕてあ・いては炭素の各々（・て１４］当
する７、２の主要ピークが見出ださ九るがＰにＳ−０で
は置喚基にイｊ４当するピークを示さず得らｎたピーク
の１７！；さは（市ｊ（１！の寒天と（は只々って）一
定ｊ−で因る。こ几に反して寒天と同イｔに、交互に配
列さＡているＤ形及びＬ形ガラクトースについて特徴的
な１０３．グ及びタタ、２のピークが見出ださノ１．る
。

炭素／３のＮ１〜ｉＲスペクトルは従ってＰＧＳ−０製
造の最良の制御法と思ゎｎる。

、１，３．後に乾燥物質の重量が等しい場合、ＰＧＳ−
Ｏのゲルは、多か九少なか几不透明な白色であり、一方
アガロースのゲルは多か２’Ｌ少なかｆ′Ｌ透明である
。そのほか、アガロースに、１’０８−Ｏｆ／こ含有さ
几ているものと同様の金属酸化物を単に添加した場合に
はアガロースの性質全変性することはできず、また、Ｐ
ＧＳ−０の諸性質とくにざ０℃前後の温度で溶液を形成
するという性質も付与さ几ないことに１り１゛意すべき
である。

本発明は、更に、ボリガラクツンー＋、ｚ化物の生物学
的合成方法を提供することを目的とする。本発明の方法
によγＬば、すでにＤ及びＬガラン）−スケ含んでいる
原料に由来するオリゴザツカリドから、Ｄ及０．Ｌの形
が交互に配列している、側錦のないポリカラククンの骨
格を合成するために酵素を・産生する微生物ケ用い、そ
して該微生物の培ぢシ全金属酸化物の微粉末を撒布しで
ある多孔性１トスを）＋ｊ’ｌ過させて行う。

本発明の望ましい製法によると微生物はまず第１にアガ
ロースの加水分解により７ｆｔ成されたオリゴ−サツカ
リドから分ＩＮＪされる。ある）、’１ｉの微生物はア
ガロース勿加水分解しオリゴサツカリドを遊ばする酵素
７有することは公知であるニー弘−〇−β−１）−ガラ
クトピラノシル（／→４Ｌ）３、乙−アンヒドローα−
Ｌ−ガラクトース、アガロビオース単位の反俣（オリゴ
サツカリドＡ−Ｂ）に（１幽するもの −０−，３，乙−アンヒドロ−α−し一ガンクトピラノ
シル（／→３）−β−１〕−ガラクトース、ネオアガロ
ビオース単位の反・ｔｉ　（オリゴサツカリドＢ−Ａ）
に、泪当するもの。

これらの醇系は下記図式に従ってβ−Ｄ−（／→１ｌ−
）及びα−Ｌ−（／→３）ガラクトースの？請合を切断
する： 酵素は可逆作用があること及び加水分解させる性質のあ
る同じ微生′［ソが逆に恵合せる性質も１ｌｉｉｆえイ
号ることは注目すべきである。

アガロースから作られるこれらのオリゴサツカリドはポ
リメラーゼ全産生する微生物ケ７メ択するのに役立つ オリゴサツカリドから、合成アガロース又はポリガ之り
タンを合）戊することのでさる微生物の分離は下記の過
程に従って行なわれるニ ーアガロースの〃目水分屏により形成されたオリゴサツ
カリドｒ用いて、滅田目・Ｊに合成固体培養基を調製す
る。この培養端の次間Ｑこ莢膜多糖（ｃａｐｓｕｌ−ａ
ｒ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）’ａ：生成１−る
ことが公知の粘液菌（ｍｙｘｏｉｄ　ｂａｃｔｅｒｉａ
）２４６．イ■する。これらの計１日には多独釦１のも
の、例えはシュードモナス（ｐＳｅ−ｕｄｏｍｏｎａｓ
）、アグロバクテリウム（Ａｇｒｏｌ）ａｃ　ｔｅｒ　
１−ｕｌｎ）、エンテロバクテリア（Ｅｅｎｔｅｒｏｂ
ａｃｔｅｒｉａ）　号の公知の菌がある。従ってアガロ
ースｒ加水分屏させるものとしてよく知られｆｌ　ｎ、
Ｉｌｌ　Ｌ、シュードモナス　アトランチイス（ｐｓｅ
ｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｔｌａｎｔｉｓ）’（５有利に１
史用し、（ポリサツカリドによる粘性外観のある）谷咄
粘液菌を選択することができる。

−選別（ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ）及びクローニング（ｃｌ
ｏｎｉｎｇ）によシアガロースの構造に近い構造のポリ
サツカリドを合）戎できる困株勿見出すことができる；
すなわち、媒体のオリゴサツカリドから、分子鎖？長く
することのできる株葡見出し得る。これらのオリゴザツ
カリドはジサツカリド単位コ、３個以上勿含んでいるも
ので開始剤として用いられる。

分子鎖の延長ができる微生物は、ヘキソース・トランス
フェラーゼ（ヘキソースｔつさ゛つぎに付は足して分子
類を延長する酵素）によってそれ２行なう。微生物から
ヘキソース・トランスフェラーゼを抽出し、試放管内に
おいて公知の酵素学開方ぬに従って作用させることがで
きる。（／→３）及び（／−≠）結合に特有のヘキソー
ス−１−ランスフェラーゼは生物学において公知の重合
法に従って分子鎖ケ延長する。ガラクトースのＤ形とＬ
形と、（／→３）結合と（／−＋≠）結合との父曽はオ
リゴサツカリドＡ−Ｈに（ｌ→３）β−Ｄ−ガラクトー
ス・トランスフェラーゼを、また、オリゴサツカリドＢ
　−Ａに（／→４ｌ−）−α−Ｌ−ガンクトースΦトク
ンスフエシーゼ２作用させて祷られる。

この選別は潅注にｊ１］函から出発した場合でも比教的
長時１昌］ヲ女するが、冷水又は３０℃に分いても不溶
のポリサツカリドか児１５　Ｇ　ｔＬでいるので比較的
容易である。従って不（容性の塊會作るもののみｒ保留
するため、バ洒のコロニー７洗浄づ−ることかできる。

こうして生督薗上のよい領生物株２分ら、［シ遺伝狡移
によってこれら奮改良することかできる。

このアガロースのオリゴサツカリドからアガロースに近
いポリガラクタンτ合成することのでさる斤ｉｉ］ｖは
、他の原料に由シロするオリゴサツカリドからこの合成
２イ］なうこともできる。

従ってすてＶｃＤ及びＬガラクトースヲ昔んでいる原４
斗【退ぶのがｗ：ＡＩＪである。これらのヘキソースを
含んでいる安い天然吻は多献める：たとえはフコサンｉ
；ｎ　（乙−デツキシー１）−ガラクト−ス及び乙−デ
ツキシート−ガラクトースの反り体文はＵＤ及びＬフコ
ースの反復体斥含んでいるツーカス（Ｊｕｃｕｓ；ひば
また類）のごとき寒天産生のないイ１σ藻ならびに郊天
【産生する海藻がわり、そのとき住じた寒天はこれら常
法に便って分離し、残部（通常は廃品とされるもの）ｉ
ＰＧｓ−Ｏｒ作るの（て月Ｊいる。

乙−デツキシーＤ−ガラクトース及び６−デジキシ−１
ヨーガラクトースからＤ−ガラクトース及び３＋　６−
アンヒドロ−Ｌ　−−ｉラクトースへ）変化に公知の方
法に従って化学的及び生物学的になされる。

海藻のほかに、多すの１唖上の生物（和物及び微生物）
でめってＤ及びＬ−ガラクトースの反俵又はガラクトー
ス訪導体（ペクチンンｒ逓生するものが使用できる。征
って原料の選択は地域又は工業の性質により左右される
。

Ｌ及びＤガラクトースが交互に現われる系統のみケ保留
すべきである。寒天産生海藻のほかにたとえば寒天非産
生海藻（寒天産生海藻のないところに成長するひは該た
属）を用い化学的に七の系Ａりは几及びＤガラクトース
が交互に現われさせるように変えることができる。

合成ポリガラククンー酸化物の工業的製法ケ第λ図ケ径
３ｊして以下（Ｃおいて詳＋ｉ’ｆｌｌに１尻明する。

同図ｖ′？Ｃおいて（２）は同製谷器、（３）は多孔性
膜、（≠）は金属Ｉ収１ぴ１勿１’ｋ、（Ｊ−）はオリ
ゴザツカリド又は目−ｊ几シム体を名′ん−Ｃいる栄誉
媒体及び（ｇ）は得られた合１灰ポリサツカリド−１）
し化吻泣次わラー。

滅菌されたオリゴサツカリド旨呑液７ととえはすでにに
大が仙出訟れた尽大ノ上生海沫残潴の１０％祇ン蜀７ダ
γ↑′「り必↓ｄな＋１ｌｉｊｌ函九肯因子（窒素Ｏメ
、ビタミン、０．２φ力ゼイ／加水分ｉ゛ｊ４１勿、・
−）ｋ肌える。

この溶液Ｃ５−１中において多孔社膜會弁して公知の膜
培養法に従って月ゼリガラククンを生じ倚る六１１１困
を培養する。この股上には囲！１′門１りが同定しであ
る酸化アルミニウム（クロマトグラフィー用中住Ｊｓ−
ｔ−２０：＋）＆び［β化チｌ　７　（ＴｉＯ２）ノｖ
ｉ、＞９　不が］散布しテ、６／：）。全体が尿（≠）
勿形１Ｊスしそこで細１ｄが改化吻粒子ｖｃ付Ａｔ　ｌ
／て取付する。オリゴザツカリド分子釦は漸次延伸し、
酸化物及び細菌會包んで連続の広がシ（句を作る。

周期的にこの広がＤ　（Ａ）を採果し、オートクレーブ
処理して庄田菌を殺し酵素活性？消滅させる。生じたポ
リガラクタンは冷水に不溶でお夕、この生成＃全洸浄す
る。不溶性部分のみを残留させ水分を切ってペースト状
のもの全得る。このペースト定メチルアルコールで処理
しポリテトラフルオルエチンン・フィルム上での水素結
合の形成に有利１’ＣＴる７ヒめ、極めて厳密なｐＨ朱
件において温湿（／グ０°Ｃ）で乾燥させる。これらの
フィルム上でｑ２燥させてポリガラクタンフィルレム紮
形）ＪＡするが七の厚てば／／１００ｍｒｎｋ超えては
ならない。

培養温度、ｐＦｌ、窒素源、ポリサツカリドの起源、発
−ａ時間に応じ−Ｃ分子鎖の長さに大小が生じる。酸化
物とテ后什して分子鎖は、；イ４目を形）戊しそして−
との硬匿は七の長ぢ及び結合厩の増大とともに増大する
。

分子項が極めて長いときは酸１こ物ヶ排除して透明なゲ
ルで作ることができる。

所定のノξラメータを組合せることにょシ極めて再現性
のあるポリガラクタン分子鎖ることができるＰＧＳ分子
鎖と結合された酸化′勿粒子の住血によりゲルの気孔度
は天然寒天のものよシ大きくなるが網目はｉｉ＃ｆｌ菌
ｅＣ対して不透過性のままである。

培養基中に用いじれる１ｂ学′１必亘のみが網目中でょ
Ｉ）速く拡散しこのことがこ匈りらの培９Ａ　笛Ｎ’Ｊ
　ｍＡ　（ＣとってＡ用点葡構成する。

そのほかＰＯ３−０分子鎖か短かりれば短がいほと一製
造が谷筋で梃って女１曲であるニ ー融点が低い； 一ゲルが脹れ易い； 一安定なゲル２作る／こめ余分のＰＧＳ−０乾しこ７目
料ｒ必安どする 一女定なゲル定１′トるため順化物の比率を太さくしな
くてはならない 一気孔践が太さい ことが推定で訃− 逆Ｋ　Ｐ　Ｇ　Ｓ　−０鎖が太さけれは大きいはど一一
製、森が困如鉛で従って、聞１曲となる一酸化物の量が
低減できこのことはゲルをよシ透０　　明にするのにま
たはほとんど透明にするのに有利である。

理論上は艮いポリガラクタン分子鎖で構成されたかつ透
明化てれたゲルはアガロースと同じ品質ヶ備えることが
できる（ただし原価の犠牲においてである）。

’　ｌ−６７ｃ　ｐ　（７）　Ｐ　Ｇ　Ｓ　−Ｑの量、
ＰＧＳ−０中の１亥１ヒ物の比率、ポリガラクタン分子
鎖の推定される長さは棹々の用途に適したあらゆる榎類
の品質奮イＵることｋ　’＋ｘＪ−能にし、それは下表
によって予め定めることができる。表中ＷはＰＧＳＯＭ
量、Ｘ。

ｙ及び２は谷ｑ４酸１じ物のそれぞれの止置（本例では
ｘ　＝　Ａ／−２０３の重量、ｙ　””　ＴｉＯ２のＭ
”ｉ及びＺ−＝：５ｉ（Ｊ２の重量）である。

Ｗ　　　６０　６０　８４　６６　３０ｘ　　　２０　
１８　　２　１７　３０ｙ　　　２０　２０　１０　　
１６　３０２４１１０ 以下においては本発明にょるグル化性物質の培８基Ｍ製
への適用全下記の実施例により説明する。

これら実施例に水元す］をレボするものではない。

トリ皿の詳１製 処方（力 Ｐ（ｊｓ　−Ｕ　　　乙す、／７．　　／ｂ、ｏ／　　
　　　　　　　３３．ｇ、：ｚ’Ｉ−ｆｚ　ｆ）　Ｃ）
　ＰＧＳＡ６９．　Ａ１２Ｕ３　／ａ９．　ＴｉＯ２／
１９．　ＳｉＱ／９ ペンのトン　　　　　　　　　３６．３≠Ｊｌ！汁塩　
　　　　　　　　　　λ、７２塩化ナトリウム　　　　
　　　２．０ｇンクトース　　　　　　　　　１８″、
／７ニユートラルレツド　　　　　。、　Ｏｊ２クリス
タル　バイオレット　　　　　。、　ｏｉｇ・この培養
基の欧酌便用証すなわち／、　３７ｔｊ）ｆ滅菌蒸溜水
、２３ｍ、ｌに〃１１える。

・ど０℃に１分１−ｉｉ１加熱する。

・直径９像のイトリ皿へ注ぐ。

・ケゞル化さぜる；冶お示は直ちに使用できる。

結果 媒体は不透明で明るい鮭肉色を有する。

ラクトース同性のコロニー１は赤色である。

ンクトース陰性のコロニーは黄色である。

腸内細菌のみが発育する。

天然寒天ケ用いるＭａｃ　Ｃｏｎｋｅｙ培養基に比べて
、結果は同じであるがニア０ニーはそれらの大きさに拘
わらず不透１男な底上でよジよく目に見える。

実施例２．二厘層培養基のＷ１℃製 ｉｉ質の異なる二種のＰＧＳ−０グルを■ねて培養基を
作成することができる。

第１の場合 ＰＧＳ−０３０，３０，３０，１０ｆ用いて水及び栄養
分の保留に役立つ安価な厚い、多孔性・吸収性の第１層
すなわちＰＧＳ　３ｏｑｂｒ　１２０３３ｏ係、　Ｔｉ
ｅ２３ｏｑｂＣａＨＰＯ４／θ条の層へを注形する。

その上に極めて貿密な半透明の、たたし艮いコロニー全
作るブこめ高価なＰＧＳ−０の、ｌ乃至、２椙の極めて
薄い層、ＰＧＳ−ＯＹｌｒ、　ｏ２．ｏｒすなわちＰ　
ＧＳ９　Ａ　％　、Ａｌ２Ｏ３２％−ＴＩＯ，＋　Ｊ　
％Ｃ１層Ｂ’ｉ注形する。

そのほか半透明の上履ヲ極めて純粋なアガロース層で代
替することができる。

この集成体は寒天のみからなる培養基に比べて経済的で
ある（何Ｋｆもの培￥５基が必要な萌芽の培養への適用
）。

第２の場合 ７００℃で融ける栄養のめる固いケ８ルを形成する第ｌ
のＭ（層Ａ）全注形する。

りゞル化後”ｌ　Ｆｉ＋ｌ”Ａ’Ｋができるだけ低いた
とえば乙Ｏ℃の加血球を含んでいる第！のＪ曽（層Ｂ）
ｋ注形する。

）ｅｉＡ　　　層Ｂ ＰＧＳ　　　　乙ｇ　　　　ｔｉ−ｏ　　　短繊維Ａ７
２０３／７　　　３０ Ｔｉｅ２＃　　　　３０ Ｓｉ０２　　　　／　　　　　− かくして最高１０ｊの材料赤血球の節約が達成されまた
垢血球は熱にＣ３めて敏感であるので、笑ガ也が容易化
される。

実施例３゜ 極めて短かいＰＧＳ分子鎖及びある割合の金属酸化物を
含んでいるＰＧＳ−０は、寒天中よＶ速かに化学物質が
拡散するグル全形成する。これらのグルは細菌又は微生
物の表面培養を可能にするのに十分に固い。これらを用
いて下記の何れかの方法により連続の培養基を作ること
ができる一一これらの栄養媒体を含んでいる支持体たと
えば乾繰物質を含浸させた吸取紙上にグルを流す。

物質の溶解及び拡散は極めて速い。

−吸取紙など多孔質の支持体又は回収可能の多孔質支持
体（たとえはフリットつきステンレス鋼）上にグル全波
ぎ続いて栄養−買上含浸させる。

このことがこの含浸を更新すると微生物とくに萌芽のコ
ロニーの連続培養の実施を可能にする。

この方法はとくに細菌又は；随物の突然変異体の研究用
に極めて有利である。

本発明による新規のグル化性物質の利点は上記のことか
らよく判明する：　これを下記のとおり要約できる： ＰＧＳ−０はオートクレーブ処理せずに栄養塑粉末とし
て溶Ｊ管可能でンうり同一の＝＜ｍしであるかつ截珀的
に取扱い可能の容器中に培養基としての所要量（滅菌の
栄、詰（り追、ω末）全分包することができる。

合成にまり涙週さ７しるのでその物理化学的ｈＡ仙゛性
はよジ容易に？１ｉ１１伸できる；捉ってよジよく定犠
δれよりよく規格された培鉄糸のｄｏ１製を可能にする
。

乾原状態においてはその衰面に堵養基朱孜物質全労、収
する（粉状の小薄片の形で現われる口」油性のため）。

このことが５．全包中の政酊した粉末混合物の形、錠剤
又σ！＋４粒の形、あるいは同−薬包中の粉末・顆粒及
び〃？ハリの混合’ｉ′／Ｊの形で培斐基栄養物負と「
〕１級？ＬＤ合して包・畏１−ること俊町舵にする。

かくして微生物学名（な極めて多録の乾燥培養基の一変
形全常温（心おいて・、：４めて長ル；」向（１年以上
）貯蔵することがてき、必ｊ交に応じて伺らの損失なく
数分１■」」で培５〕〜恭′ｄ：ｊｊＪＬｊ訳すること
ができる。

グ１図田１の１窮単な串？、１カニ 第７図は本発明のＰＧＳ−０の構造の図解、第２図は本
発明によるＰＧＳ−０の工業的製法の図解、第３図は市
販の寒天からの炭素のＮＭ几スペクトル 第弘図は本発明によるＰＧＳ−０のＮＭＲスペクトル金
示す。

第２図において、 ２、　調製容器 ３、多孔性膜 グ、金机酸化物床 ！、宋搭媒体（オリゴザツカリド又はＦ１４Ｊ駆体會含
むもの）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ／、　　Ｄ形およびＬ形ガラクトースが交互に配列［、
   ている、側匂のないポリガラクタンの、交錯したかつ比
   較的短かい分子鎖から本質的に構成されており、かつこ
   の分子鎖に金属酸化物粒子が結合しており、しかも結合
   さｎた酸化物とポリガラクタンとは単なる混合物ではな
   しに錯体を形成していること全特徴とする、ゲル化性物
   質。 ２　金属酸化物（徒アルミニウム、珪素及びチタンの酸
   化物から選ばれる特許請求の範囲第１項記載のゲル化性
   物質。 ３　ポリガラクタンに対する金属酸化物の比率はポリガ
   ラクタン分子イ萄の長さ又はそれらの分子量に逆比例し
   、１０乃至１０％である特許請求の範囲第１項丑たは第
   ２項記載のゲル化性物質。 グ　幀粒化及び圧縮に耐久性があり、こ几ら二つの工程
   を行うのに有利である、特許請求の範囲第１項〜第３項
   のいずｎかに記載のゲル化性物質。 ｊ　乾燥状態においては厚さ／／１０Ｏ？未満のフィル
   ムを特徴する特許請求の範囲第１項〜第グ項のいず九か
   に記載のゲル化性物質。 乙　ざ０℃からの水に酵解して溶液となる、特許請求の
   範囲第１項〜第夕項のいずれかに記載のゲル化性物質。 ７　Ｄ形及びＬ形ガラクトース全含んでいる原料に由来
   するオリゴサツカリドから、酵素全生産する微生物全使
   用して、Ｄ形及びＬ形ガラク）−スが交互に配列されて
   いる側鎖のないポリガラクタンの骨格を合成すること、
   およびその際、該微生物の培養全金属酸化物の微粉末が
   撒布しである多孔性膜を通過させて行なうことを特徴と
   する、Ｄ形およびＬ形ガラクトースが交互に配列してい
   る、側鎖のないポリガラクタンの、交錯したかつ比較的
   短かい分子鎖から本質的に構成さ几ており、かつこの分
   子鎖に金属酸化物粒子が結合しており、しかも結合さ几
   た酸化物とポリガラクタンとは単なる混合物ではなしに
   錯体を形成しているゲル化性物質の製造方法。 ｇ　微生物を、まずアガロースの加水分解から由来する
   オリゴザツカリドから分離する特許請求の範囲第７項記
   １１Ｕ６の方法。