JPS59170769A - 免疫検定法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

本姑明は酵系鋼僧犀」標、雄兎投慣定法に関づ−る。 を膵素免投倹足の一般的概念については多くの文献に６
内にされている。截括旧な報舌としては１モ役１りΣ定
、　１９８Ｕｌｌｔこの＠　４Ｍ　イυトらにＬす丁ス
支術Ｊ（１；ａｂｏｒａｔｏｒｙａｎｄＲｅｓｅａｒｃ
ｈ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　　ｉｎ’　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎ
ｄＭｅｄｉｃｉｎｅ　’ｒｄ　４−ｓ’ｖ’、１（、矢
カムラ、ＷＡＬ、デーイト−１Ｅ、　Ｓ’、　　／ｌ／
　ッ７Ｊ　　３　ｔＬｔ’ｘ、ｍ、Ａ、　Ｒ，リス出版
（１９８０１仁　）　）がある。 ト系二手、没１央ポを工、（冗虎１土の扱分釘吻を限定
さゎた叡の仇坏結付もＩＳ泣ｌこメ・１して既知型の抗
原と兇泣化学反応ににいて競争させる。抗体に植付した
該既知型の（５′ｃ涼の割廿を測定するには酔累が用い
られ、試料中の扱分析吻の重を標準・灰定棺釆に比軟し
て計Ｊ！することが９龍である。酔系兎投恢建は、塙矧
菫の抗原の中抗体に粘付した割付？咲却するために使用
される方法によ・〕分４Ａ丁Ｑと、おＳむね２徨烟に分
げられる。 七の第１は不同−系醇累兄役決定（ｈｅｔｅｒｏｇｅ−
ｎｅｏｕｓ　ｅｎｚｙｍｅ　ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ）
である０この恢足ｖＣにいては、既知友の抗月または抗
体のいずれか一万を固相上に固定し、他方をなんらかの
方法で郁譚する。抗原１５Ｅ扱分仇物を′ざむ試軒玲頭
との反応咬句相を試料浴液刀）ら物理はジに除−去し流
部する。仄いで検線が活性を有３−る重賞を固相と接臆
させ既知嘘の抗原に結付し１こ抗体の竹を測定する。 この型の酵素免疫検定の利点は、物理的分離抗質慄作に
より、試料から付込まれた異物を噸云ｊろことによって
慣足硝吸を市めることンハでざる点で　　　　　゛ある
。この不為−系＃素兎役恢にの短所は１８分離工程は時
間がＤ）かり、またある程度の情＋ｇ技術を心安とする
ことである。 第２はり一系ｎ２　叱Ｒ４”ｆ　（ｈｏｍｏｇｅｎｅｏ
ｕｓｅｎｚｙｍｅ　ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ　　）であ
る。この瑛定にＸいては、抑］定は惟酩がつけられる抗
原性紋分仇吻にｉ＝目ｂＪ−る・・ジオンに行Ｌ１本が
結合づ−る時の１票猷の１（ト蓚の変化に９にイチする
、。この・・ジオンは抗原注仮分古物と共通の少くとも
１つの抗原性決定基を有し、限られた損の抗体に灯し抗
原と競争して結付Ｉ−る。Ｉ竺ノー糸醇木元役恢定に２
いては、憚識の１１′員の相対Ｇ’、ｌｌ　ｆ　ｆヒを
側ｆ−ｆることにより、結合Ｌ１こ健鷹・・７″グンの
、ｌｌｌ１ざる・測定でざる１ので、帖合し１こ俳疏パ
ゾテンと仇ａｊｌ’＝促慮−・ジオンを分離することは
不必較である。このようＶＣ分離工程がないので、均−
系兎役恢定はに１↓ＩＳする不拘−系兎役萩定より央Ｗ
ｑシ易く、速度も早くかつ安価である。 不冗明に２し・ては為−系兎役、ψ足を用いることがｑ
了よしいが、不向−糸・氾没瑛定を用いることもで達仏 均−系定役萩定の一種は、抗体２＋Ｅ酵素で醐繊され１
こ凱原に納会１−る時の丑異的な酵素活性の変化に依存
する。この種の免役恢頑は均−系Ｃ作素憧歇兇役瑛定と
して知られて（ゐ。勾−系ｒ腎素憚緒兇投挾定に２いて
はハシテンは、ＩＭ：巣が活性を■１−ろ基質に対する
醇累の触媒作用が夫買釣ＶＣ阻督されないような酵素の
ｔ古注部位に刈する位置に納会する。、便柑中抗庫はハ
プテンに納会（ることができ、この結付によりｃｈ索の
慣−異げジ粘性を減少牙Ｔ二は１校壊Ｔる。この酵素活
性の叫順は、立坏陣害即ち泰′肖が酵素の粘性部位と接
触することを抗体が妨げることＶＣよって生じ、ｆにあ
る場合には酵素のコンホメーション上の＝ｍ性が制限さ
れることにより酵素活性が妨げられることによって生じ
るものと考えられる。同−系酵素椰疏児役侠定にバいて
ハプテンが酵素に結合した時酵素の特異的活性を阻害す
る例はいくつかある。抗体のハｆテンに肘するｆｊｆｊ
＠は酵素を「不粘性化」する。 均−系酔索憚繊兎投恢定の茂何はたとえば雫牧、血液、
尿寺の体液中の薬物や淋薬の便用に応用することができ
（英し！ｉＩ％ｆｆ第１４０１２９７号明細沓杉照）、
また乳中のステロイド唄の演出にも応用することができ
る（同時１系属中の公告英国特許出願！１’、２１２０
７８錦零照）。 第２の橡の拘−系兎役１・時定は、酵素阻吾酌によって
僚朦された板分灯物対応抗原に抗体が納会する１１在の
Ｉ＃素甫害γ古１生の変化に１バ存１−る。この型の１
漣匣を以陵月−禾酵累阻害１（ＩＩ標繊児投梗定と呼ふ
ことに′１−６゜均−系Ｉ４ヤ素１）１１沓削健遠児役
１英定においては、ハプテン（ま、その結果生じる憚識
ハゲテンが１ｆｉＪ　Ｑ　ＬＦＪな１１中的２１１山’
ｆ：ｆ在（ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｂｅｔｅｒｏｂｉ
ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ
ｓ　）　’にボさないように、ハプテンがｒ忰素由害剤
分子に納会する。すなわら、この分子はハシテンに訂す
る拐Ａ本ｆ定は酵素１狐吉１１す力Ｓ？古性を有する酵
素の活性都１Ｊのいずれか一力に粘合１−ゐことかで穴
る。ハプテンの抗体にズ・１１−る結付は阻告酌が酔系
に納会することを１双１に７７、））げその結果１凪害
網によってイ岸繊されｆこハシテンのＩｎ−１督粘注を
値上する。この１φ止は１１１素活性の〜１書の度付を
抑］定することにより演出すにとかできる。 ・易１の型の勾−ホ児役恢定すなわち均−系俳索慄繊児
役恢定の限界の一つは酔索憚繊／・プデｙｖＴ−多くの
場合王座のイま顧在と書生雌ｏ、ｌ雇汗が纒ｌ〜い点で
ある。第２の型の４−系兎役慣定すなわち刈−系酵素阻
沓剤漂識叱疫検定は、多くの場合化学的甘酸がし易くか
つハプテン部分な容易Ｖｃ〆５力１１１゜うる憾小で明
確な化学構造を有する阻害ｉ１Ｊを使用しなければなら
ない。 邑索阻督刑標識元疫検足の便用法と組成は米国特、ｆＦ
、４４１３４７９２号明細省、に記載されている。この
吠＋ｉｌ＋沓は、ジニトロフェニルＶＣｊ列するＭ索１
羽Ａ崖ｊ城鐵兎Ｊ丈中芙定につり・てｄ己載している。 この兎役便、：Ｊ　Ｑまジニトロフェニル部分とアセタ
ゾールアミド部分を含む図会分子を使用する。アセタゾ
ールアミド郡分は炭酸脱水酵素の特異的活性に対し阻害
作用を有する。この阻害ＭＩＪは俵会分子とジニトロフ
ェニルに対する抗体とのＩＷ］の兇疫複合棒の形成によ
り調節される。 六回の酪話兇疫恢定妓何の共進の待皮は分ゼｒされる拭
糾に熊１関係７１基賞に対し？占１午を自するＣ作業を
用いることである。失除多くの場合基質自体が惧ポに調
＠されねばならないし、また酵素反応は慎重に解釈され
ねばならない。このため検定方法は仮雑化し、時間がか
かり操作が複雑となるきらいがある。 本発明の第１の１１１１面に８いては、試料中の抗原性
被分析物の一度を測定するための酵素阻害剤標諌児投倹
定法であって、該酵素に対する基質が試料の少くとも一
節を形成する尼役慣定法が提供される。 本発明の第２のｊｋｌｌｌ　５月ｃｇいては、試料中の
抗原性被分析物の祷ｊ」２な測定−する７之めの酵素阻
害刑悼識兎役瑛定法であって、該阻菩剤憚識は乳を縦固
さセつる１や索のｔ６性を阻害することができる阻害剤
である免役検定法が提供される。好ましくはこの免役検
定法は、乳を含みまたは乳からなる試料中の抗原件被分
市口勿の嬢Ｉ尾を測定するための酵素１訂Ｍ剤憚練免役
恢定法であって、該阻害剤は乳を該抗原性被分析物と共
剋の少くとも１つの抗ＩＩＸ犬定基を有する部分を具え
、該部分は、咳部分への抗体の免役化学的繕合により阻
害剤のと古注が減少または排除されるように、乳凝固酵
素の活性な阻害することのできる阻害剤に結付している
複仕分子、該Ｏ会分子または該抗原性仮す何物に対し完
投化学的結合を形成しつる抗体、および乳を縦固しうる
酵素を含み、かつ該乳試料中の抗原性仮分浄 折物、夕償合分子および該抗体の間に脱感反応が匙るこ
とを許容する工程と、乳を絣面させ５る該酵素の該乳試
料に刈する活性を決定する工程とを含む。 本明綱豊で柑いられるＦ涜ＩＪ定する」という用語は、
試料中の被分析物の＃度の定値的測定と、試料中に被分
析物が所駕衾度以上または以下存在するＤ）否かの慎重
の双方を含む。本慣定は′ｌＬ錠固の存在または不存在
によってＦ９Ｔ趙の終点を決めるように使用することが
好ましい。 本倹定で用いる乳はどんな呻乳動物の乳でもよいが乳を
産生する家畜たとえは牛、手、山羊等の乳が好ましく、
籍に牛乳がもつとも好ゴしい。 本暎定に使用１″る酵承としてはキモシン（ｃｈｙ−ｒ
ｎｏｓｉｎＪが好適である。キモシンは離乳していない
子牛の第４冑（ａｂｏｍａｓｕｍ　）から分泌される多
くのタン／ｅり寅沖解解素の一桶である。キモシンハレ
ンニン（レンネットとしても知られる）の粘性成分であ
って、叡ピ年もの間チーズの生紘に使われて米た。キモ
シンの天然の基質は乳の固形分として存在するタンノξ
り賀であるカゼインである。 乳の中でカゼインはカゼイン分子の安定ナコロイドとし
て存在ｆΦ。キモシンを乳に怒加するとカゼインの分装
を荘に子してカゼインはコロイドとしては安定でないタ
ンパク買になる。そこでこの分裂の佑来タンノモク歳の
縦梁が起る。これが肉視１灼に彎固として惧側される効
果である。キモシンは子牛からｓ離し定大然キモシンで
もよいし、組換え１）ＮＡ技術によって１１師された偵
王有機坏によって雄牛されるキモシンまたはキモシン類
似棒でもよい（同時函Ａｉｔ４中の公舌英ｌ！ｉｌ籍計
出願第２１００７３７号奈照）。本児明の検定に使用し
５る乳鎌固酵素はベゾシンおよびその頌１以体等のタン
Ａり貞分屏酵素およびＭｕｃｏｒｐｕｓｉｌｌｕｇ、Ｍ
ｕｃｏｒ　ｍｅｉｈｅｉ。 Ｅｎ４ｏｔｈｉａ　ｐａｒａｓＨ３ｅａ等の菌体から侍
られる酵素を含む。 阻害剤標識ノ・ブテンを作るために用いもねる阻害剤は
乳を凝ｔｉ！ｉｌ＋させうる酵素の特異げソ清任ン減少
ないし排除しつるものでなければならず、かつ・・ブテ
ンに鯖会し定時抗体のＩ・ブテンへの結付によってその
阻害活性が減少″ｆるものでなければならない。多くの
このような阻害剤は公知である（本明細書末尾の文献一
覧表β照）。 阻害剤は４つの柱の阻害剤の甲から迷ふことかでざる。 （以下に述べるアミノＩ！！！配列はアミノ酸残基の標
準表示法（例ｖａｌ　＝バリル基、ａｌａ＝ｌミニアラ
ニルにより表す。アミン醒のスタチン（ｓｔａｔｉｎｅ
）は正式の化学名４（Ｓ）−アミノ、３（８１−ヒドロ
キシ、６メチルヘゾタノインク酸（４（８１−ａｍｉ　
ｎｏ、３（Ｓｌ−ｈｙｄｒｏｘｙ　。 ６　ｔｎｅｔｈｙｌｈｅｐｔａｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　）
を有スる。 第１の群はポリペプチドである次式のベグスタチン（ｐ
ｅｐｓｔａｔｉｎ）またはベスタチン類似棒を含む。 ペプスタチン鶏似体としては、左とえばＮ−アセチル−
ｖａｌ　−ｖａｌ　”　ｓｔａ　−ａｌａ−スタチン、
Ｎ−アセチル−ｖａｌ　−ｓｔａ　−ａｌａ−スタチン
、Ｎ−アセチルースクチン＋Ｎ−アセチル〜ａｌａ−ス
タチン、Ｎ−アセチル−ＶＦＬＩ−スタチン、スタチン
、ａｌａ−スタチン、 Ｉｖａ−ｖａｌ−ｖａｌ−ａｔａ−ａｌａ−Ｎｌｉ−Ｃ
ｉｉ−Ｃｆｉ＝ＣＨ−Ｃ０２Ｈ＋Ｎ−アセチル−ｓ　ｔ
　ａ−ａ　ｌ　ａ　、ＮＨ（−ｓｏｕ、Ｉｖａ−ｓｔａ
−ａｌａ−ＮＨ’Ｃ５Ｈ，、Ｉｖａ−ｖａｌ（３Ｓ、４
Ｓ）−ｓｔａ−ａｌａ−ＮＨ１Ｃ５Ｈ１１、Ｉｖａ−ｖ
ａｌ−（３Ｒ，４Ｓ）−ｓｔａ−ａｌａ−ＮＨ’Ｃ３Ｈ
１１、Ｉｖａ−ｖａｌ−（３Ｓ、４Ｓ）−（４−アミノ
−３−ヒドロキシ−５〜フエニルペノタノヤフフ酸）＝
！Ｌ　ｌ　ａ−ＮＨ’　Ｃ５Ｈｕ　−Ｉ　ｖ　ａ−ｖ　
ａ　ｌ　−（’、’ｌＢ　＋　４ｂ　）−（４（ｂｌ−
アミノ−６−メナルヘゾタノｔりｊ［投）−ａｌａ−Ｎ
Ｈ’Ｃ３Ｈ１ｌ＋Ｉｖａ−ｖａｌ−ｓｔａ、　　Ｉｖａ
−ｖａｌ−ｖａｌ−ｓｔａ。 −Ｃ０ＮＨＣＨＣＨ□ｃｘｉ２ｃｏ□Ｈ１１ｖａ−ｖａ
ｌ−ｓｔａｔｏｎｅ−ａｌａ−ＮＨ’ＣＩ（およびＪｖ
ａ−ｖａｌ−（４１８１−アミノ−６−メチルヘプメ謀
〕−ｘ　ｒ伎）　−ａ　１　ａ　−ＮＨ’　Ｃ５ｎ　１
１がある。 ベゾスタチンｙ７１−はベゾヌタチン類似体はＣ本Ｖ７
ｔＡ　４＜５、特に−ａｒｇ−Ｕｍｅ、　−ａｓｐ、　
−ｇｌｕ、　−ａｓｐ−ｈｒｇ、−ｇｌｙ−１ｙｓ−１
ｙｓＪｉから６ばれたものによりてさら（／ｃ１＊　Ｍ
＋−４−ろことかで％’　＞５、−ｇｌｙ−１ｙｓ−１
ｙｓヲヘフスタｆンｆムニはベゾスタチン訪導体のＣ末
４に、ｉ）ｌ］えることにより誘導体の水浴性を瑠′１
−ことが−（゛きる。 ｒｉ’、　２の（１トは次の一叙式で示す礪造を持つ合
成ボリベゾチドな”；ａ−（ｓ　。 Ｒ−ｐｈｅ−ｐｈｅ−Ｍ−人 定だしＸはＣ木端Ｄ−アミノ区葉、Ｗはアミノ酸基、Ｒ
はアミノ改革ま定は２またはそれ以上の′ｆアミノ酸ｔ
Ｊテるボリベゾチド基であゐ。好ましく’ｖｓｘはり、
）−ロイジノ、Ｗはノマリ／、Ｒはｐｒｏ−１Ｄ−ｐｈ
ｅ−ｐｒｏ−５ｇｌｕ−Ｄ−ｐｈａ−ｐｒｏ−、Ｄ−ｇ
ｌｕ−１）ｐｈｅ−ｐｒｏ−の中から選ばれムニー穴で
１ト、る。 ム！３０群は次の一般式でボ１−・ｊ４遣を持つ合成＋
ｌ？リベプチドを含む。 Ｈ−旧、　５−ｏｒｏ−ｐｈｅ−ｈ　ｉ　５−Ｙ−ｖａ
　Ｉ　＝ｔｙ　ｒ−Ｏｒ−まただしＹは −ＣＨ−ＣＨ−ＮＨ−ＣＨ−’！７．．：二は−ＣＨ−
ＣＨ５−ＮＨ−Ｃ１（−である。 偽４のイ拝ま、仄の借瑣を持つ台咲ボリベノチドを沈む
。 Ｐ−ｓｅｒ−Ｚ−ａｌａ−Ｑ、　Ｐ−ｖａｌ−Ｚ−ｖａ
ｌ−Ｑ　’ｆ　７ｊはＰ−ａｓｐ−Ｚ−ａｌａ−Ｑ ＴこだしＺはスタナンまには次の一般式のシラノカルで
あり、 −Ｎｒｉ−ＣＨ−Ｒ１−ＣＨ−Ｃ− ― ０−　　　　　　　　　　　０ （反獣被プチド頓似１本−）であり、 Ｒ２は−に、、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ｃＨ２Ｓ
Ｏ）１３ｆ７．ｍ＋’１−ＨｌＰはＡ−１ｈｉｓ−Ａ−
１ｐｒｏ−ｈｆａ−Ａ、　ｈｉｓ−ｐｒｏ−ｈｉｓ−Ａ
−１ｐｒｏ−ハ１ｓ−ｐｒｏ−ｈｉａ−Ａ％　ｈｉｓ−
ｐｒｏ−ｈｉｓ−ｐｒ。 −ｈｉｌｌ−Ａ：Ｆ６よびａｒｇ−ｈｉｓ−ｐｒｏ−ｈ
ｉｓ−ｐｒｏ−ｈｉｓ−Ａ（Ａはロイシン基筐たはノリ
ン基）から選ばれ、Ｑは−Ｂ、　−Ｈ−ｐｒｏ、　−Ｂ
−ｐｒｏ−ｐｒｏ、　−Ｍ−ｐｒｏ−ｐｒｏ−１ｙｓ、
　−Ｂ−ｐｒｏ−ｐｒｏ−１ｙｉ−１ｙｓ　Ｍよび−Ｂ
−ｐｒｏ−ｐｒ。 −１’ｙｓ−１ｙｓ−ａｓｎ　（ＴコだしＢはインロイ
シン−４マＴこはロイシン−４）からＩへばれる。 υＨ Ｈ（８す る。 ｇｆましくは第４の群の阻害剤は次の一般式の合成ポリ
被グチドである。 １ｅｕ−ａｓｐ　−Ｚ−ａｌａ−ｊｌｅ−ｐｒｏ−ｐｒ
ｏ−１７８−１７ｓ。 ｈｊｓ　１ｅｕ−ａｓｐ　−Ｚ−ａｌａ−１１ｅ−ｐｒ
ｏ−ｐｒｏ−１ｙｓ−１ｙｓ、Ｉｅｕ−ｓｅｒ−Ｚ−Ｉ
Ｌｌａ−ｊｌｅ−ｐｒｏ−ｐｒｏ−１ｙｓ−１ｙｓ’！
Ｊｊはｈｉｓ−１ｅｕ−ｇｅｒ−Ｚ−ａｌａ−ｉｌｅ−
ｐｒｏ−ｐｒｏ−１７ｇ−１ｙＢただしＺは上記定義の
とＲつである。好里しぐは２はスタチンである。 したがって次の第４群阻害剤は特に好適なものである。 ｈｉａ−１ｅｕ−ｓｅｒ−ｓｔａ−ａｌａ−ｉ　１ｅ−
ｐｒｏ−ｐｒｏ−１ｙｓ−１ｙｓＩｅｕ−ｓｅｒ−ｓｔ
ａ−ａｌａ−ｉｌｅ−ｐｒｏ−ｐｒｏ−１ｙｓ−１ｙｓ
上記阻害剤のいずれのＣ末端Ｓよひ／またはＮ床端アミ
ノ酸もｆＩｔ僕がｉＴＪ罷である。たとえばＣ末癩アミ
ノ酸をエステル化すること２よび／またはＮ床端アミノ
酸をアシル化することかできる。 不発明の酵素阻害Ｍ僅識免投瑛定の根拠は仮分折物、標
識されたハプテン（俵せ分子とも称するうおよび眠られ
た童の抗体の間に起る競争免役反応である。抗体は、モ
ノクローナル抗体でもよいしポリクローナル抗体でもよ
いが、被分析ｖｌＪ？よびバッテンの両刀に共通の１ま
たは複数の決定基に灯し特異性を持つ。ハシテンは乳を
凝固させ得る酵素の活性を減少することかでざる分子と
の複合により憚故される。生成複合分子も単独で乳を凝
固さ・ぜうる酢累のγ古注を減少させることがで破る。 この慄識ハプテンは抗体がバッテンに姑＠する時阻害卸
」が小活性化されるように博成されて（・る。 この方法Ｖこより、ヤμｓ定８ＪＫ、軒中で抗体に結合
せずに残された憚識ハゾグンの割合は、乳試料に祭カＵ
される刀・含有される乳を蘭＠させうる酸系の乳薯固を
古イ午に対する標識ハプテンの影會によって決定するこ
とができる。 試暎中の乳臥料甲ＶＣ破分仇物が存在する時は１、ｌ英
雉構成成分１＝」の反応の冶果Ｄ）なりの割合の憾淑ハ
プテンが抗体Ｄ＝ｒ−）遊離して存在している。次い一
＆　１４　＠　ｔＷ、ハシテンは、その阻害剤像−を介
して、試料に絵１１０１には百合されている屏素と結甘
し解累を不ｒ古性化する。酢累の活性は、酵素を一定鴬
の乳試料中Ｋ　＠　）ＪＤま定は含有せしめることによ
り容易に試験することができる、１成歌中の試料に扱分
仰吻が存在する時は乳の炭固は咬測さｎない。 扱分）ｆＴ物が試験中の試料中に存在しない時は、倹定
構成成分曲の反応の結果かなりの削片の標識ハシテンが
抗体に結合ｊろ。ハシテンの阻ぎ刹憚敵は不ン古性化さ
れ、そり紹釆酔累の不ｒ占性化はほとんど生じない。し
たがって板分徘吻が存在しないＤ−存在して−・でもそ
の＃度が非″にに低い時は、試料に箔刀■夫は含まれる
乳の裁置が開側きれる。 ・酒定拭系と試料はどのような車圧ま１こは紺合せでも
混合才ることができる。 ＋、発明の具体的応用例として、均一系酵素１料害削憚
識免投検定は牛乳中に大だに存在するホルモンの酸度を
決定するために使用される。 語噴の柱崎性は雌牛ｌ胆が毎年子牛を１頭産むことを要
求する、これは乳牛群からの充分かつ不λ　断の千乳供
鮒を保旺する１こめに必−ヅなことである８雌牛の子牛
出生Ｊｉｍｌ　（ｃａｌｖｉｎｇ　１ｎｄｅｘ　　）は
遅恍１−る子午出生間の日数である。し１こがって理想
的な千生出生指数は３６５０でありこれを超える日数は
雌牛の利益率に悪影響を及ぼす。受検のために正確な時
期を迅択し、力・っ瞳ｄ受胎が付ゎれ定ことを保証する
チェック方法が仔在することは健全な牛の！埋上承要な
ことである。 １疋米雌牛の受検を何５ための正確な時期は雌牛の挙動
にもとすいて牛の官埋者が＋Ｊ助してぃ１こ。 また妊娠の診断は１Ｉｉ１１牛のその鏝の挙動ρ）また
。ま貨イ゛ｎ咬約１０〜１５週１１４］段に臥医が何５
直腸快食に依存していた。牛の才坏慣食を行うまでには
しばしばかなりの時間を肇れが必要である。しかしこの
ような伝統旧方法（佳いよだに広範四に１更用されてい
る。 乳牛の乳の中のプロゲストゲンのレベルがＵＦ卯を出動
を反映しているということは公知である。競牛は多発１
＊動物であり約２１１＝１の周期を待つ元慣周勘で自然
に排卵１ろ。乳中の首足のプロゲストゲンであるグログ
スゲロンのレベルは谷すド卵の曲の期間中周期的に変化
−「Φ０牛乳中のグログステロンＣ裟駿は光１肯１友弁
吊に１仄（・レベル力）らｔ大手に壇〃［］し牛乳１梗
あたり２！〕ｎｇ（７）動源レベルにｔＴる。 そして次の排卵の直前には非常に低いレベルに思激に一
低下する。また発信ｄに受検が成功丁れは牛乳中のプロ
ゲステロンは妊に中子つと尚レベルを保つことも公知で
ある。 延画褥許第１４０２２６３号　明紺薔は受検し１こ乳を
互生する家畜の妊娠を診断′１″′６方法についてｄピ
滅しているにぐ）方法に２いては、プロゲストゲン践度
が周Ｍ的に変化するか尚い１曲で一足レベルを保ってい
るかを確かめるためにｌｌ１２Ｉ物の乳についてプロゲ
ストゲンの快定を行う。プロゲストゲン癲吸が尚（・価
で一足していればそれは帽＝娠を乃り１−６−二を己莢
画特に中手１４０２２６３考明イ出ｌＮ゛に６已載され
１こ；英定方法は競伊メンノにり買帖せ瑛定ぬ２よび）
■射匈兎役イ失足法である。これら２つの演Ｗ法は（・
丁ｎも熟株江東と寺門的な若δ具を必要とし、またしは
しはυ）な９の時間遅れケ土しる。 雌牛の妊娠を診断１゛る他の方法として、央画狩奸弔２
０４００４３考明細沓に記載され１こ力？去がある〇孔
中のエストロゲン中１１」代謝゛勿である４ＤｉＣｊａ
ミニストロンレベルは妊娠中＃］瑠し、′受持の成功を
ボ１他のしるしとなる。英国丑杆第２０４００４３号明
袖簀は、比色矩中法１」す、ド点決冗を用いる酵索紹台
元役模′ホを用いて：１１４中のｌｌｔ　ｉ’夜エスト
ロンのレベルを（１１１定′１−る方法について舶ｒ代
している。このよ５なト芙χＶは７則足渚の鰍）か４！
は一＋：扛はと硬しないがいせんとして時ＴＬｔｌがか
Ｌ）す、浅維である。 多くの画には現任グログスゲロン（ｊＩＩＪ鮒の定め乳
試料を煉駕する１％４．１液「リイｏｔ元ｌ旭設がある
。このよ５な更１究１１ξ設ににいてもつとも背理に１
史出される［交情は放射瘤叱投ｆ（Ｗ法である。このト
央定法は時ｊｉｊｌ遅れケ生じることは不用厩であり、
晃消を、ｖｍｌべゐ［ＴＩ　＋ｒｇでこの侠ボを用いる
４台は（則定粘米が工１」揃Ｉ−る力が遅１−さる１こ
ぬ１０党を吋の成功の１こめには回に什わないことにな
る。 し１こηユつて陥農条界においては、午の官埋省が元−
１ｌｌｉよ１こは妊娠Ｖこついての子側の拭嵌を何５こ
とがで破Φようなプロゲストゲン、プロゲストゲン中１
ｆｆ１代ｉｍ→勿、エストロゲンＳよひエストロゲン中
ＩＷＩへｇ動についてＱ〕間早で有効な決定法に対丁Φ
必堤↑土が側（・ｏ１ホ嶋中の公舌央画時粁出蝕鋼２１
２０７８５号は礼馨哩生する水甫の発情または妊娠を調
べるために用いられる課系憚鐵児投快定について記載し
ている。 本％明の第３の１日１１而にオｉいて、試料中のステロ
イド潰爽を測定する師素阻ｇ宮り様繊叱没４乾定法であ
って、ステロイドがプロゲストゲン、プロゲストゲン甲
間代洲物、エストロゲンによぴエストロゲン中間代謝（
勿からなる評から瀉択される炭定Ｗを提供する。２−１
−ましくは試料は乳を産生する家前、時に好ましくは１
砒午の乳試料である。好ましくはステロイドはグログス
ゲロン、１１シ１ム淑エストロンまたはいずれかの類供
体である。 本発明の１ｙｌ定法により雌牛ＶＣ病出し５る叔多くの
給餌テストがｏ］′能となる。 本発明の第４の１Ｈ１１而に？いて、杢祐明の決定法を
用いて雌牛、羊、山羊導孔を植生する水着の乳の中のグ
ログスゲロンのレベルをｆＪＪＥすることにより、こγ
しら家畜の発１育を便用することかできる。 杢４英ボ法１・ま１ことえは動→勿の乳の甲のグログス
ゲロンのレベルが所定１１１以下にいっドっ１こＬ・を
ボすために便用さ扛る。勾−系酔素阻筈ｇ１１襟繊叱役
恢建を使用する一般的方法にどいては、プロゲスグロン
分子＜’ｔたはグログステロンと共通の抗原決足泰を少
くとも１つ＋Ｊ１−る分子）は阻害剤分子と化学的に結
付している。偵定を夾Ｊ’する鵬には、ズログステロン
ー阻害刑俵会分子、プロゲステロンに対する限られた娘
の抗体Ｊ６よび符にプロゲステロンとカセインヶ言有す
る乳拭料力・らなるン昆会物を−・１幣する。すると遊
離プロゲステロンとプロゲステロン−ＩＳＩＴｉ沓犀ｊ
１友甘分子がせられた柑の抗体を１指して硫争する４ψ
平圓が生じる。キモシンは般初の混合物に宮ませてｋい
てもよいし、平歯に媚してＤ・ら傘ノ用してもよい。ソ
゛ログステロンが乳試料中に存在しないＶ）、存在して
いても低い礎曲の場せは、抗体のかなりの部分がプロゲ
スグロン−１訂舎創嶺曾分子に粘付する。キモシンに対
する阻害剤の作用は両舌され、乳の凝固が親飼される。 迎に乳試桝中に１０ゲスゾロンが存在していしは、十ｌ
［悴のＤ）な９の部分力Ｓ試料中のプロゲステロンにｆ
Ｆ８　＄　＝４−る。七の鮎米試料中に兎役俵什体化し
ていないグログステロン−阻合剤値会分子が存在するこ
とになり、したがってキモシンは夷貝的に不γ占性化し
、乳試料の凝固は＠狽すされない。検定の感度は、検定
に使用する種々の試薬の重度を変えることにより調節す
ることがでざる。また試薬を混せする順序を変えること
によっても検定の感度な調パｌ′ｌすることができる１
、たとえば、グロゲステロンー阻害刑破合分子よりもｉ
ｉＪに抗体を乳拭科に除力口することは感度にψ倭を与
える。一般に４ｎｇ／−未満のプロゲステロンのレベル
は発情の到来を示すものである。 欠除の使用に除しては、員漬派は節農場にいる闇に雌牛
から乳の試料を採取１−ることかできる。 試料は過当な受器に入れ種々の試薬を加えるか、ｉＴＣ
は試料を過当な１５２器中の試薬に加える。波初の混会
の結果凝固の有無を、観測する。プロゲステロンについ
て本検定？使用する場曾は、弗横幽から凝固への変化は
発情の到来を不すものと考えることがで破る。それは牛
乳中のプロゲスグロン一度が所定製置以下に下ったこと
をボしているからである、 さらに、本発明の第５の側面に２いて、乳を産生する球
付の乳の中のプロゲステロン僕匿を検音てるために本鶴
明にかかる酵素阻害剤憚鑞兎投恢′ｉｇを使用し、発悄
予定時にゾロゲスゾロン一度がＨ［定Ｃ虞匿を賄えてＦ
降することがないことによって妊娠が宿下されるボ蕾の
妊娠を瑛知する方法か提供される。 さらに、本発明の弔６の１Ｕｌ１面に２いて、礼を産生
する家畜の乳の中の慨酸エストロン濃度を１・欠食−ぐ
るために不発明の酬索１Ｉ１４害剤慎繊免役瑛矩法を１
史用し、所定（ＩｉＺ　〕良？超える嘘曜エストロンー
ｒ酸によって叶砺がづ盲７Ｊ（される家畜の妊娠を梗矧
する方法が従倶される。 現在酪農業界ＫＪ＝３いて、アフラトキシンＭ□として
川りれる＃賞の１・火山に黍大の関心が薔せられている
。アフラトキシンはある檀の水量飼料の困に、にる汚架
から生じる田毒索（ｍｙｃｏｔＯＸｉｎ　　）である。 この化せ物とその中１川代ｍ物は突然変典旺であり、発
がん注であり、釘形を発生し易い。アフラトキシン」町
はアフラトキシンｒ−１−’ｌ司代ｄ’ｌｌの１っであ
り、非′だに強い禅性を維持し、汚染飼料を食べた午の
乳に現われるために待に関心が待たれている。明ら７１
１）にアフラトキシン丑にアフラトキシンＭ□を含む乳
が消ｆｅ省に届かないことを確実にするため迅速で信頼
のおける検定法が必要である。 アフラトキシン〜１□はステロイドに似た分子サイズで
あり、乳中の許容、貞度は乳の中に天然に存在するステ
ロイド中田１代謝物の奸谷夢鍵に冠い−不発明の第７の
１ｉ＋＋　＠において、乳を産生する家畜の乳の中のア
フラトキシン中１月１代謝吻待にアフラトキシンＭ１の
襄菱を慣食するため、不発明の醇素阻薔剤憚繊兎役検定
法を聞出イ゛る方法が提供される。 上記の諸方伍は雌牛および牛乳について遡用されること
が望ブしい〇 本光明の第８の側面に８いて、礼を咲同させ５る酵素の
阻害剤であって上記粥４の群の８成ポリペプチドである
阻害剤が提供される。 不発明の第９の御１面に２いて、乳を蘭面させつる＃累
のγ古注を阻害しうる阻否卸ｊで襟猷さ才したハゾテン
を′言む饅合分子が提供される。憚識バズ１ンは、４冗
体がハズデンＫｆｉ宕曾す０１時絹否六１］が央ｌべ的
に不ｌ占性化するように愼成されている。ハシテン１工
いかなる４冗１京分子でもよいが、上記不兄明の・″」
１４、第５５．り）６の谷ｌ↓（１１而に関して述べ１
こステロイド、上記鋼７の１ｔｌｌ　１ＩＩＩｆ７こ１
シー１シて運べ１こトキンンは待に好適である。１・ｌ
〃犀］は上記のいＤ＝なる１壜舎削でもよ（・が、上ｄ
ｇ・４人４の、ト１の阻舊削から遇択１−ること力）望
！しい。 特に、本発明の４；　４おまひ第５の１１１１面に・媚
しては、イ痩合分子は次の（Ｊｌ：から１ｆＳぼれるこ
とが対ましく・。 （＋＜３は角１己β且否岸ｊの１つＤ・らイ静られる卆
まムニは一〕符に好よしいものは、Ｒ３として上記第４
の群の１１ｉＬ！、　：％Ｆ列の（・ずれ力・を有する
初会分子で矛）る。 過当な仮置分子は仄のもσ）を含む。 および 、、＋発１月の４３の用１ｊ而σ）ｊ欠定？去にゴロい
て（・；、プロゲスゾロン抗体・、ま、プログスグロ／
バズテンがＣ−月ａ直寸央基ン介して−Ｉ旦体タンノ七
り貞に粕汁するｔ’ｊｉ：ｊ方でゾロゲスゾロン兎）オ
原にｘ寸し′ト匙さスすることル第ましい、 ノ１

【発明の第１０の１側聞ＶＣおいて、本発明にかか
る兇役恢定法を何５ための試薬キットが提供される。 このシ（・湊キットは、＋蛇明の２Ａも９の狽１１面の
仮台分子、該伏せ分子の仇１ボ決定暴に粕会し５る抗体
Ｚよひ乳を〔碇向させ５　＜１　ｉ”＋１−沼を七ｊｔ
ぞル刀１」１固に、ｆＹこは＝＋ｉ、　＝ぜγコモのを
含む。このキットは１ことえｊｔｆ　４ｚ　’ｙ５’ｙ
：ｉｎ・青−１当な谷と、７の中に、■併わされた拭系
火言むことができる。１ｆごこのキットは、別１面に包
装された試薬止１こはその中の２つが組として＃！ｉ台
わされ、３蚕目のものが別１固に包装された試薬を沈む
こと力Ｓでそる。試薬はＬ二とえば、声結夛ｊ５仝綽燥
晋ｔにより安定した形状にしてＳくことかでμる。 以下界句凶面を参照して本発明の夷ｆ４汐りについて祝
明１−る。 ）京　科 ］、抗体 プロゲステロンＫｎするポリクローナル抗血７１１１は
、獣医手研４ｕ所乳市場局（Ｍｉ　ｌｋ　Ｍａｒｋｅｔ
ｊｎｇＢｏａｒｄ）　ｆ：英国ウースター、ロワーウィ
ンク、クリープハウス（Ｃ１ｅｅｖｅ　Ｈｏｕｓｅ、　
Ｌｏｗｅｒ　Ｗｉｃｋ　＋Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ＋　Ｅｎ
ｇｌａｎｄ　）　］　Ｍよびザリー大字生化学が一床生
化学科、ギルドへイアンチセラ（Ｇｕｉｌｄｈａｙ　Ａ
ｕｔｌｓｅｒａ、　Ｄｉｖｉｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｃ１１ｎ
トｃａｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　Ｄｅｐａｒｔ
ｍｅ、ｎｔ　ｏｆ　Ｂｉｏｃｈｅ−ｍｉｓｔｒｙ、　Ｕ
ｎｉｖｅｒａｊｔｙ　ｏｆ　５ｕｒｒｅｙ）　Ｃ英国、
サリー、ギルフォード（Ｇｕｊｌｆｏｒｄ　、　５ｕｒ
ｒｅｙ　＋Ｅｎｇｌａｎｄ）７０Ｊ・ら入手した。花市
場＠よりの仇血苗゛は兎没涼プロゲステロン−１〕α−
へミサクシニルー十皿ン８アルブミンに対してイく＋ら
れ、？：にギルドヘイ抗血清はプロゲスグロン−１］α
−へミサクシニルーオバルブミンに刈して４％られた。 モノクローナルグロゲステロン抗体はインペリアル癌研
兇Ｍ　−ｎ＝　ｍｔ　９ｅ所（ｔｈｅ　Ｉｍｐｅｒｉａ
ｌ　ＣａｎｃｅｒＲｅｓＯａｒｃｈ　Ｆｕｎｄ　Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｉｅｓ　）のウオンｆＷａｎｇ）博士〔英
画ロンドン市すンカーンでイン（Ｌｉｎｅａｌη５Ｉｎ
ｒ＋　＋　Ｌｏｎｄｏｎ　＋　）’シｎｇｌａｎｄ　　
）　〕より入手しＴこ。こレバ叱投原グログステロンー
月−へミサクシニルー午血７肖アルブミンに灯しＶ、Ｅ
、ファンドル、０、Ｙ、ウオンχよひＲ，、Ｅ　、ニパ
の方ｉｃｒステロイド生１＆Ｉ化年死（Ｊ、　５ｔｅｒ
ｏｉｄ　Ｂｉｏｃｈｅｍ）Ｊ１９８２年、１７巷、１２
５〜１３０ページ〕によって焙られ１こ。以下に述べ勺
具体的な暎定において柑いる１こめに惑択され１こモノ
クローナル抗体は上述の−）ＩＩ何４勿中月Ｐ　１２と
して７Ｊ＜されている、２、キモシン 子牛キモシン（Ｅ　Ｃ３，４，２３，４）はシグマ、ケ
ミカル、カンパニー、リミテッド（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅ
ｍｉ−ｃａｌ　Ｃｏ、Ｌｔｄ、）Ｃ英（謳ドーセント、
プール、ファンシーロート（Ｆａｎｃｙ　＋ｔＯａｄ　
＋　Ｐｏｏｌｅ　、　Ｄｏｒｓｅｔ　。 Ｅｎｇｌａｎｄ）　Ｊから人手するＬ）、Ｌトるいはセ
ルデツ・り、リミテッド（’Ｃｅ１ｌｔｅｃｈＬｔｄ、
　　）　Ｃ４画パークシャー、スロー、パスロード　２
４４−２５０　（２４４−２５０Ｂａｔｈ　Ｒｏａｄ、
　Ｓｌｏｕｇｈ　、　Ｂｅｒｋｓｈｉｒａ　。 Ｅｎｇｌａｎｄ）　〕により供耐され７ＣＥ　−Ｃｏ　
Ｉ　ｉ　甲で１咀さｎ定粗換えプロキモシンから慢定。 このキモシンをピアース、ケミカル、カンノ々ニー（Ｐ
ｉｅｒｃｅＣｈｅｍｉｃａｌ　　Ｃｏｍｐａｎｙ）　（
未ｌＮ６１１０５イリノイ州ロツクフオートノＤ）ら侍
１こシアξノジグロビルアミンーベノスタチン「セファ
ローズＣＬ−６ＢＪ　ｋ中い、Ｂ、コバギシ１６よびに
、ムラカミの力Ｅ　（「’　Ａｇｒｉｃ、　Ｂｉｏｌ。 Ｃｈｅｍ、Ｊ　１９７８年、４２　（１２）、２２２７
−２２３１−２−ジ）に１疋ってアフィニティー、クロ
マトグラフィーにより精製し１こ□ ３、ステロイド類 プロゲステロン−１】α−グルクロニドはＪ、Ｅ。 Ｔ、クリ−（Ｃｏｒｒｊｅ　　）、Ｗ、Ｐ／１．　　／
Ｓンター（、Ｈｕｎｔｅｒ）によびＨ，Ｓ、　マンクフ
ァーソン（ＭｕｃＰｈｅｒｓｏｎ）（Ｊ’Ｃ１１ｎ　Ｃ
ｈｅｍ、ｊ　１９８１年、２７誉、り９４−５９９ベー
ジンの万象によって８成され之。プロゲステロン−１］
ａ−カルボキシメチルエーテルはＰ、Ｎ、ラオ（Ｒａｏ
　）、Ｋ、Ｍ、　　ダモダラン（Ｄａｒｎｏ＋ａｒａｉ
＋）、Ｐ、　Ｉ（、ムーアジュニア（Ｍｏｏｒｅ　ＪＲ
，）、Ｃ，デスジャルデインズ（Ｄｅｓｊａｒｄｉｎｓ
　）ｊ６よびＰ、ガルザ（Ｇａｒｚａ　）の方ｊＨ（ｒ
　Ｊ、５ｔｅｒｏｉｄ　ＢｉｏｃｈｅｍＪ。 １９８２年、・１７巷、５２３−５２７ページ）によっ
て合成され友。トリチウム含有プロゲステロンはアマ−
ジャム、インターナショナル、ノミフリックコーポレー
ション（Ａｍｅｒｓｈａｍ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａ
ｌ　Ｐｉｅ）（英ｔｆｆｌｌ　ハッキンガムシキー、ア
マ−ジャム、ホワイトライオンロード）　７３）ら入手
した。 ４色素原ペゾチド菱（痩 色票）ｊＡ−ｅゾテド基貞はフロリダ大学生化学ｇよび
分子生吻学Ｓ（米国フロリダ州ゲインズビル）のＢ、Ｍ
、　　ダン（Ｄｕｎｎ　　月専士によって供帖され１こ
。 ５、乳蒼買 兇役４炙軍法の派理乞明らかにするために用いる基負は
市販中の初末、脱脂乳か、あるいは最近出産（出圧殻７
乃至１４日）した鵡牛もしくは発情期にあると幌＠され
定逝午から侍に全牛乳から調製された。スキムミルク巷
′］浴孜は、イげ水孔を埴化カルシウム４０　ｄ中ＶＣ
浴解して２４［有］（Ｖ／／Ｖ　）の故１斐をイ静、仄
いでこの乳浴液を、予めメタノール（５−）と水（５イ
）で湿潤させ定ｒ　５ＥＰ−ＰＡＣＫ　Ｃ１司カートリ
ツジ内にカートリッジ当りスキムミルク１０燻の法要で
月１＠させることにより７調製した。 ′　　　　　　ス゛′ 〔「５ＦＪＰ−ＰＡＣＫ」　カートリッジはウォーター
で、アンシエーツ（米１ＮＯ１７５７ミ不ンタ州ミルフ
ォード、メープルヌトリート）かも人手し１こ〕。スキ
ムミルクＤ）ら内生ステロイド類を除去するには連怜（
ｒｅｖｅｒｓｅ−ｐｈａｓｅ　）処理が必がである。牛
乳に粘晶項化カルシウムｊ：！ｒ、６釦７ｊｌｌ　して
補相することによりｍ　１ｉｊｌ　４０　ｍ　ｙｉとし
た。両ケース共使用に元立ち、蕪買浴液を３７℃で少な
くとも１５分間株温し定。 ６、モシン　　　　′　。 ２Ｍ　６．０に’Ｍげる０、０１３Ｍ２−　［Ｎ−モリ
ホリノ］エタンスルホン酸（ｍｓ　）坂宵液。 ７、広射巌兎役慄定柑緩倹敵 ０．９％塩化カルシウム、０．１４ゼラチン２よひ０．
１％アジ化ナトリウムＭ贋剤を言句１〜るｐ８７．５の
０．０’５　Ｍリン数基。 ８．　＠　財ｒＴｈ定用ノ゛レー　ト　（ｍ１ｃｒｏｔ
ｉｔｅｒ　　ｐｌａｔｅ　　）この兎投検定万式は検定
をポリ塩化ビニルＵ字形つェル做堆藺定用プレートから
ノ成るウェルの甲で何５ことＫＪ、り示された。これら
のウェルはグイナテツク、リミテッド〔英国サセックス
、ビリ自＼ ングスサースト、デュアクスロード（Ｌ）ｕａｘ　Ｒｅ
ａｄ。 ＢｉｌｌｉｎｇＢｌｌｌｉｎ、Ｓｕｓｇｅｘ、Ｅｎｇｌ
ａｎｄ）　〕から人手した。 以ドに述べる快足は１政整刊足用グレート定温器（グイ
ナテツク、リミテッド）を用いて３７℃で何っだ。 １（Ｊ、七の他の試薬 七の池の試、朶、まシグマ、ケミカル、カンノミニー、
リミテツＦ’７Ｊ・ら入手した。 力　　法 会捧のｒＪｆｉＪ製 ４つの硅かも成る阻害剤につ（・て２橿褪の合成阻害剤
を胸裏した。 これらの阻害剤はアミノ酸スタチン（４（Ｓｔ−アミノ
、３（＄１−ヒドロキシ、６メチルへブタノン酸）を含
み、これは以下に示″′３−図式にだいて説明される合
成によって保務された形、６においてｄ周製された。こ
の図式中、２はベンジルオキシカルボニル保護基、１）
ＩＢＡＬは水素化ジインブチルアルミニウムを示し、Ｔ
ＨＦはテトラヒドロフラン、’ｒ）ｉＰは方トラヒドロ
ピラニル、２よひＦΔ１０Ｃは９−フルオ上記図式に示
した反応は以下のようにして何われる。　・ ｔａ＋　　エーテル（２００＊＆　）中のＺ−８−０イ
シ７１（２９ｇ−０，１１モル）の水市倚ｆ仮にエーテ
ル（６ｇ、０．１１モル）中のジアゾメタン浴液を硝加
した７、窒素の発生フ７・１・亭１ヒした陵、混合物を
真空中で油状（化合物Ｉｌ）になるｆでぴ紬した。化合
物■は個装せ１゛に欠の反応で用いた。 ｔｂ＋　　乾燥トルエン（２１０！′ｎｆり中の化合物
１１（１４，４９ｇ、４８．９　ミＩＪモノリから成る
激しく攪拌した浴液に、’ｄ素上下−７０℃に８いてヘ
キサン中の水素化ジイソグチルアルミニウム（１）ＩＢ
Ａｆ、）　（１２４、＃リモル）から成る１Ｍｍ液を添
加した。６分段、メタノール（１２噌）を添加し、直ぐ
引続いて飽和ロシェル項浴ａ（５００ｒｎ／２）を添加
した。反応混合物を業温に暖めて、久いでエーテル（３
Ｘ　３００．Ｊ　）で抽出した。有機層を飽不ロ塩化ナ
トリウム溶液で連続的に抗堕し、（Ｉｉｌｔ酸ナトリウ
ムで乾探し、油状になるまで濃縮した。化合物■σ）収
酊は７．９ｇであった。この化合物は一加℃で保イＪ、
　Ｌ、七してその陵の梢整をしないでで？するだけ端く
列用した。 （ｃｌ　　−素工、乾燥氷／クロロホルム府内の乾燥力
トラヒドロフラン（Ｔｆ（Ｆ）（４！Ｍり中のジイソグ
ロビルアミン（１９，２ｉ＆、１３７ミリモル）に、注
射器でヘキサン（８５，６２櫂、１３７ミリモル）中の
１．６　Ｍ　ｎ−ブチルリチウムを祭力０しブこ、、１
時向咬、この浴は乾燥氷／エタノール浴で圓式候え、そ
して温度を約−７０℃　に保持しながら乾床酢改エチル
（１３，４Ｊｎｅ、１３．７ミリモル）をゆっくりと績
３力１】した。征７ＩＯｔ＆、反応混合物を１５分１ｈ
Ｊｓえ拝したまよにして置ぎ、この時ＶＣ温度を一６５
℃末＃に保持しながらＫ　保ＴＨＦ　（９０＋ｄ　）中
の化合物層（２２，８ｇ、９２ミリモル）を添加した。 この反応混合物を５分間攪拌し、このときＩＭの塩化水
素散（３００噌）を６加し、そして反応混合物を室温に
暖めて、酢酸エチル（３Ｘ２００ｄ）で抽出した。その
旬−機層を飽和塩化ナトＩＪウム浴液（１１）で連続的
に洸伊し、Ｍｔ＋設ナトナトリウム゛轄し、そして？山
状のａ原料になるまでｐ怖した。化合物■を含有する収
縦は３１　ｇであった。この物置はシリカゲルクロマト
グラフィによって２回梢製したδ 第１回クロマトグラフィψ件 柑１東科３１ｇを［−メルク９３８５Ｊシリカゲル５０
０ｇに対し用いた。（クロロホルム２リツトル、１視い
てクロロホルム／酢鈑エチルＣ９５：５）２＋）ットル
を用いた。）これによってＲｆ　２．０　（トルエン中
のｌ」係酢酸エチル）を有する未分離の２徨唄の異性体
からｂｙ、る化合物（Ｍｌ（３Ｒ，４ｓ忘よび３ｓ、４
８）めｇを慢だ。 第２０クロマトグラフイ＋Ｗ 酸エチル（９：１）１リツトル、引続いて酢酸エチル（
８５：　１５　）　ｌリットル、引続いてトルエン／酢
酸エチル（４：、　１　）　２リツトルを用いた。）６
０棟類の刃−画分を収東した。 Ｅｌｆ　　Ｏ，２３を有する化合物■ρ）ら成る所要の
異性体２，４ｇをＲｆ　０．１７を有する不必要な異性
体（３Ｒ１４８）１．１ｇから分離した（トルエン中の
′、！ｉＪ％酢咳エチルによる俗離）。 （ｄｉ　　乾燥ジオキサン（３０−中の化合９勿Ｍ（２
，９ｇ、８．６ミリモル）に、攪拌しながらジヒドロビ
ラン（４頑、５１．６ミリモル）を姉加し、引続いてＰ
−トルエンスルホン酸ｌ水化物を添加した。２時間段、
暗Ｈ，Ｐ、Ｌ、Ｃ，における撹件が反応の完了を示した
。このｆ（ＰＬＣは超球形赫相ＨＰＬＣカラム（よＩｃ
ＩＩＬＸ４”）を用いて灯った。充電毎分１祿；俗媒Ａ
：水、浴媒Ｂニジアン化メチル；λ：２６０ｎｒｎ　０
（Ｏｅ　−Ａ　６０％、８４０％；１５分−人加係、８
８０％；ａｎ−Ａ２（Ｊ％、８８０％）、、保持時間ｌ
」分によって化合物■によるピークが消失したとき、反
応は完了した。この反応混合物を炭酸水垢ナトリウム飽
和水ｔ６改で十分に振と５し、そしてジクロロメタン（
３Ｘ２００ｄ）で抽出した。有機層を炭酸乃く素ナトリ
ウム妃不り水浴液（Ｉ　Ｘ　３００ｍＱ　）　Ｍ　、Ｊ
：びＩＫ　（ｌ　Ｘ　２００　ｒｒ＋９　）で況伊し、
そして油にチで濃縮した。この、・田を重度のＡ仝（約
１（＋−１トル）中に一装置いて過剰のジヒドロビラン
を除去した。 化＠−物Ｖ（協然として存征丁心ジオキサンと共に）の
収敵は３．８ｇであつ１こ。この化合物は史に鞘表±ｗ
’１−ることなく１更用した。 （ｅｌ　　ジオ＃す７　（３５、ｒＪ　）中の化ｋｍ（
Ｖ）（約２．７ｇ、約６ばリモル）に、１覚件しながら
ＬＭ水酸化ナトリウム水浴漱（３ｐｌＪ）を姉加した。 加分陵、透明酪牧が生成し、セして）ＩＰＬＣは２時曲
段に反応が完了し１ここと馨不した。ＨＰ　Ｌ　Ｃの条
４ｆ−Ｆｙよびプロトコルは上記（ｃｔ＋のようであり
、反応混合＠加μｌをアリスター（ａｒｉｓｔａｒ）氷
酢酸２μｌと混甘し、そしてこのようにして優られた混
台蜀ｌＯμノをカラム中に注入した。保持時１南１７分
によって化合物■に基因するビークが肉夫し１ことき反
応は完了した。水（５１ＪｎＪ　）をＩＮ　）ｊｕ　Ｌ
、そしてこの水浴液をニーデル（３Ｘ５１Ｊ、ヅ）、酢
酸エチル（２×刃・）Ｉｆりで抗浄し、そしてそのｐＩ
′Ｉを譲塩化ポ素醒を用いてｐｉｑ６．００九〜＝１整
し定。借られた２ＨＨａ大浴ｄ文を庁゛ｒ酸エチル（４
Ｘ　７５７ｆ　）で直）ＫＭ出した。１１」座の抽出を
装丁ゐりはテトラヒドロビラン（Ｔｌ（Ｐ　）　、にの
不安定性の故である。嘴磯層を７１（（ＩＸ５０梗）で
洗伊し、硫酸ナトリウムで礼・入渠し、そして蒸兄して
Ｙ山を潜だ。 化合物■の収麓は１．９２　ｇ　であった。この化合物
はにに６１褒することなく便用した。 （ｆ）　　メタノール（６頑）中の化合物ｉ■＋（１，
９２０ｇ、・１．７ばり七ル）に、５％Ｐｄ／Ｃ触Ｓ（
０，５０ｚ　）を拳〃口した。１時間にわたゐ蜘拌を何
いながら屁せ物に７に系を通過させる。この反応混合物
をセライトヲ介して２週し、そしてメタノール（５Ｍ）
中の１０％の水により洗浄した。収束したｐ液を画体［
−Ｅで濃縮した。ニンヒドリンスグレーで展開し？−′
ｒｒ、ｃエタノール／ヘキサン、２　：　１　（ｖ／ｖ
）ｉ工Ｒｆ（１，１３に生１）（゛デク、１スポツトを
生じた。 化付物Ｘ１の収旬は１．１１ｇ　であった。この化せト
Ｑη（ま史に硝・授することｆ、

【ぐ１史中した。 （ｇｌ　　ｌｕ％（ｗ／ｖ　）　ｉ、ｉｊ　宝ナトリウ
ム水浴、イｙ、（５，４Ｕ）Ｘよひジオキサン（２イ）
中の化合物■（０，５２６ｇ、２ｑリモル）ＩＪ′−ら
我ろ浣件した浴液に、ジオキサン（５・〃ρ）中の９−
フルオレニルメトギシ力ルポニルクロリｓ　）’；ｖｌ
Ｕｃ　−ｅ７１！（０，５４４ｇ、２．１ミリモル）を
加号曲にわたり深川」した。透明な浴数を冴持１−るた
めに、このθｊΣ力ロ中に、史に用係（ｗ／ｖ）、ｈＪ
１″ｉジナトリウム水浴牧（＋：＋・Ｍ）を四−のｔ棒
１ｎｊにゎたり怖ＩＪＩ　シた。ｔ＋１′ｒ＋−が阪に
ボ（ム」訊）を象力０し、ぞＩ７て混合物を、七の当初
容重の約半分ズで瘤陥し−たーこＱ）丑付勿タエーテル
（４Ｘ　２００　、象）で抗律−（るｒ＋ｉ＋に、児に
水（２００輌）を奈ｉＭＩＬ　ｆこ。、■戦ケ珈化７Ｊ
＜素虐で江息尿＜　＋ｉ＋’４１節してｐｉ（６−５と
し、次いで１什１＋づエチル（４Ｘ　１５０智〕で旦ち
に抽出した。 ・約１が層も王水（ｉ［Ｊ（ｌＱ〃）で仇即し、浣酸ナ
トリウム−ｅ　ｌｌｄ　＋Ｓ　ｔ、、セし２で向１４−
　（０，７４０ｇ　）となるまで破ィイ６した。 ・＋、我物化合物４ばＦ記栄件下で連相クロマトグラフ
ィによｔ）哨袈した。 Ｕリキロゾレソゾ（Ｌｉｃｈｒｏｐｒｅｐ　）　ｉ＜Ｐ
　　１８　Ｊを光項し定２．５．．．丑×加、１カラム
刃循メメ７′−ル／水−１００％メタノール２リットル
Ｉとイ域 １００係メタノール　１リツトル ２００−ρ画分を収集した。 生成’ｊ９．Ｑ　’ｌ：１　？４府しＴこ仇汁１０１〜
１１８火プールし、七〇拘初谷敵の早発に１≠縮し、Ｊ
Ｊ’：（５００，仇）ｒ／こ刈」え、ヤしてノクロロメ
タン（３Ｘ　５００　ｖ＋＆　）　テｍ　出した。有憎
層ンボ（１００切）で抗伊し、硫酸ナトリウム十で転メ
呆し、そして内棒（０，４５０ｇ　）になる丈で、侍額
した。 Ｎｍｒ（ＣＤＣｌ２）；Ｔ９．０（６Ｈ，ｄ、　（Ｃ！
！：３）２ＣＭ２）；８．６−１ｔ、（Ｊ（９Ｊ（、Ｍ
、ＴＨＰ）；７．４（２Ｈ，ｄ、Ｃす、、−ＣＤ２）１
　）；　ｂ、５（２Ｈ、ｄ　、　Ｃ）ｉ２ＱＣ（ＯＪ　
）　；２．７−２．０　（８）１，１Ｖｌ（Ｃ６１１４
）２Ｃｔ１２；１．１（ＩＨ，６ｂｒＳ、ＣＤ２１−ｉ
）。 土配工程（ａｌ　−（ｇｌによりＩＥ、戟さおだ床湖ス
タナ／は、ｌ（的にアザ−トン（Ａｔｈｅｒｔｏｎ　）
ＭＱにより、吉川された刀法（ｉ’　Ｐｒｏｃ、・君１
７回欧州被ゾナドシ７ｒｊどジウム（Ｐｒｏｃ、　１７
ｔｈ　ＥＥｕｐｒｏｐｅａｎ　ＰｅｐｔｉｄｅＳｙｍｐ
、　）　Ｊ　、、　拘憤Ｊプラ”　（Ｂｊａｈａ　）　
、　Ｋ、ｊｃＦよびマロノ（Ｍａｌｏｎ　）　、　Ｐ、
　：：４１−：：４６ページ（１９８２・１−））によ
るボリアζ゛ド支持、部分的保護デカベノｙ−１・“■
のｉｉｔ＃Ｖｃ：ヌして甲いられ１こ。 （ＪＴＨＰ Ｈ−ｈｉｓ−１ｅｕ−ｓｅｒ−ｓｔａｔ−ａｌａ−ｉｌ
ｅ−ｐｒｏ−ｐｒｏ−１ｙｓ１ （Ｌ”ｌ　　　　　　　　　　（ＪＨ（ｕ　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　ＴＦ’Ａ
−’ＩＹ・−（Ｃ １゛■（Ａ （ＯｔＨリー椙３ノー・−Ｖシ＋　１’ＦＡ　＝＝　ｉ
リフルオル用１閣、（秒ニポリアミ　ド☆［ダｊ体）。 凹−・９）方法を用いて７ドリアミド文待、部分１保ｉ
５１士ベプチドり社だ・・・バルン゛・−〇Ｃ）Ｔ）Ｉ
Ｐ 警 （Ｚ；ベンノルオギ・ンカルボニルン。 １ヒせｍＸぢ４Ｌび■はキモシン活１王のｊ）１４書削
である。 ２．２．上の２．１に２いてａｉｔ明しムニカ法ＶＣよ
り生成さＪ’した調香ｉすはＦ記の反応にゑ５いてゾロ
ゲスゾロン台６分Ｋｉ活合されケニ。 （ＩＩＤＱ＝ ２−イソブトキシ−１−インブトキシカルボニル−１、
２，−ジヒドロキノリン、インブチル１．シージヒドロ
−２−インブトキシ−１−キノリンカルボキシレート。 ＤＭＦ　＝ジメチルホルムアミド）化せ物１１：　（２
（１０視、約０．０４ミリモル）をｔ−アミルアルコー
ル、聰化水素酸水＃８液、ｐＨ４，５（２×３分）、ｔ
−アミルアルコール、Ｌ）ＭＦ％ＤＭＦ中１υ％ジイソ
ゾＵｌビルエチルアばン（２Ｘ　：３分）２よびＤＭＦ
　ＶＣＬ　’）予ｉ＃ｉ＋抗浄した。ＤＭＦ（２ηＪ）
中のｒ’ｋ（４＋したｆヒＯＷｎ　ｉＸ　ＶＣ５化会吻
ＸＩ　（０，０８４ｇ、０．１６ミリモル）およびＩ　
Ｉ　ＤＱ　（０，０５２−１約０．１８０ミリモル）を
冷加した。ポリアミド制脂のニンヒドリン試験は４８時
間・′をに反応が完了したことを示した。生成物は９５
リトリフルオル酢酸によって切脂から開裂され、そして
１Ｍピペリジン水浴液によって保ＩＪＩＮ４Ｗ　（ｄｅ
ｐｒｏｔｅｃｔ、ｅｄ　）された。生成物刈は［シンク
ＯＡツタ（５ｙｎｃｈｒｏｐａｌｃ　）　ＣＭ　３００
　Ｊカラムに対する陽イオン交換クロマトグラフにより
軸装され１こ。化合吻刈の収重は４ｑであった。 この化合物は逆ａＨＰＬｃ（１μジンクロノξツクＣ１
８」に対し均一であり、そしてＦＡＲ貞魔分元分仰法は
対応する正しい分裂を忰った正しい（Ｍ十Ｈ）十イオン
１６３５を示した。 ｆｂｌＸ十 １　）　　ＤＣ’ＣＩ／ＤＭＦ ２）９５％トリフルオル酢酸 （ＤＣＣＩ＝ジシクロへキシルカルボシイεド化合物Ｘ
１ｌｌ　（０，’０５９　ｇ、　０．１５ミリモル９を
５ｍρのジクロロメタン中に浴解し、そしてＤＣＣＩ　
（０，０１６ｇ、０．０７５ミリモル）を添加した。こ
の反応混ぜ切は１時１ｉＪ放直し、この時曲経過醗醗媒
を真空中で萌３　ｉ、：　ｔ、　？二。残留」勿をＤル
゛（３増）中に浴解し、Ｉ濾過し、そして化合吻Ｘ　（
１８０’＋）＃　）に加えた。ポリアミド４ソ（脂のニ
ンヒドリン試験は４０分段に反応完了を示した。この生
成物は９５％　トＩＪフルオル酸によって４９（血から
保喪解咋され、そして開裂された。生ｊ戊（勿ＸＶヲ［
ジンフロノミツクＣＭ　３００Ｊ　７１ラムに対′１″
る陽イオン父侯クロマトグラフィにより４＾装し、史に
逆相［シンクロノモンクＲＰ−ＰＪ上で４＾・袈した。 化合物の収叶はＦＡＲ”夙量分ブＣ分市Ｔ法により確４
され、これは箇力な俊分子イオン（１３８０）ｋ庄うｊ
二［いスペクトルを示した。 加水分解を分光元度釣にフォローできるように、切ｈ　
易い納金１立直（こ究色ニトロフェニルアラニン残基を
含有ｊる曾成挾ゾテド基負を中いて酩累σ）１剌告を達
Ｉ反した。刀日水什屏は３００　ｎｍでフォローし１こ
。またこの泰貞は酵素がｔＩ５性である凡ゆるｐＨｎｌ
＋＋　（　ｋｇ　２乃至６）にＲいて用いることができ
る。 異なつ１こメイズによる咄乳動吻アスノξラギンプロデ
ィナーゼによる発色ペプチド基質の加水分解に関する運
動パラメータがＪ．ケイ、ｊ■．Ｊ．ヴオーフ（　Ｖａ
ｌｌｅｒ　）およびＢ．Ｍ．ダン（　Ｄｕｎｎ）による
「プロディナーゼ阻害創におけるアス・ξラギンズロ方
ィナーゼの自然発生的阻害剤（　Ｎａｔｕｒａｌ．ｌｙ
−ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ　ｏｆ　
Ａｓｐａｒｔｉｃ　Ｐ＋ｏ−ｔｅｉｎａｓｅｓ　ｉｎ　
Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ　）　Ｊ
　；Ｎ．カンヌマ、Ｈ．ウメザワおよびＨ．ホルツアー
（　Ｈｏｌｚｅｒ　）　ｍＭｋ　（　１９８３年）スズ
リンガ−出版社（　Ｓｐｒｉｎｇｅｒ　−　Ｖｅｒｌａ
ｇ　）　、ベルリン（印刷ンによって報告されている。 トラン改瀞号離による紹台屓び遊喘ゾロゲステロンを使
用する放射線免役悦定法を利用して、Ｒ。 Ｂ．ヒープ（　Ｈｅａｐ　）、Ｒ．Ｊ．ｆ．−ルズワー
ス（　Ｈｏｌｄｓｗｏｒｔｈ　）、Ｊ’．Ｅ．ギャズビ
−（Ｇａｄａｂｙ　）、Ｊ．Ａ．レイング（　Ｌａｉｎ
ｇ　）Ｍよびυ．Ｅ．ウオルターズ（　Ｗａｉｔｅｒｓ
　）ｒ　Ｂｒｔｔ．Ｖｅｔ．Ｊ．Ｊ　　（　　１９７６
年）、１３２．４４５−４６４イージ圧よる方法に従い
、プロゲスゾロン誘導体およびモノクローナルによびポ
リクローナル抗血清とのプロゲステロン＋５ｍ　’Ｗ　
ｆｄ）　ｕ合体の放射線活性を評価した。 （下掲）第１表に本発明に？いて用いられるペプチド訪
導体によびプロゲスゾロン候会体に関する酬素の阻害な
らびにビ役活性データを装約して示す。 第１．虎に関する旺 １７”ロゲスアロン−１】α−グルクロニド■　プロゲ
ステロン−１ｊα−カルボキシメチルエーテル ＩＩＩ　　Ｈｉｓ−１ｅｕ−ｓｅｒ−ｐｈｅ−ｓｔａｔ
−ａｌａ−ｉｌｅ−ｐｒｏ−ＨＯｒｏ−１ｙｅ−１ｙｓ ＩＶ　　Ａｃ−ｈｉｓ−１ｅｕ−ｓｅｒ−ｓｔｕ−ａｌ
ａ−ｉｌｅ−ｐｒｏ−ｐｒｏ−１７ｓ−１ｙｓ ｋ’ｓＰ１ 〜１ Ｐ：３Ｐ２゜ ４、プロゲステロン仇本との反応［Ｊ：るキモシン礼て
の試験 孔・震唾・演定は政翳崗だ用プレートのウェルの中で行
われた。谷侠定に除して、迩切な反応時間咬ＶＣ倣幇崗
定用プレートを遊転した。遊園が生じた場せ、険固り吻
はプレートのウェルの中に残部し、−力ｌ焚向しなかっ
た場合ウエルの中の同各（勿は０１を出した。 萌゛茗の一傅定刀法は以下のコ用９である。 ０．２壬牛血ンにアルブミンを含有でる恢定用後倒欣１
１ｒｐ／ｌを倣・随關定用プレートのウェルの中にピペ
ットで採傘し１こ。こｎに引続いて、恢定柑様湖孜のみ
を謳μｅピペット妹取するＤ）、所望舛匿のグロゲスデ
ロン阻省燵（］火合体を宮刹する恢定用糾向ノ俟、セし
てこれに引続きτ芙定中仮１両液のみをｂμｇビ被ント
珠柩丁ΦＤ）、あるいは所望０度のグロゲステロン仇捧
をせ旬する４更足用椴穐Ｉ液をピペット採取した。ツガ
屋（嗟度のキモシンな言句する検定用綾悔液加μｌを隙
加した。これに、引続いて乳革具俗故１００μｌを姉加
した。Ｉ朕定用混合物を採取したは重崗定用プレートは
１時１ｂｊにわたり３７℃で定温器内に配置した。この
時間の来期に、このグレートを流しの上で迎さにし、紬
ぐたたぎ、仄いでテイシューベーノ七−の上に逆さにし
て配ＩＩイした。併置の有８を工容易に卸祭され、そし
てこれを家被崗定用プレート図表上ＶＣ記Ａ丁勺か、あ
るいは遊転したプレートを暗い背景に対しフォトコピー
した。 ｆロ’ｌステロン阻害剤複合体ｔこよるキモシン乳髪向
ご古注の１町害はプログメテロノ、狼静前り俵せ体を用
いる抗体の免役反応によって変調川口しであるこ、とを
示すために、一連の令釈凝を翁１−６キモシンン、−足
首のプロゲステロン１湘腎削懐台坏（酔鳶油件の著しい
阻害をもたらすに足る）、一連の布釈度を有するグロゲ
スグロン抗悴２よび前記した＋矢炬憬式中の礼基買と共
に柑いに０ ｆ英足用紗曽牧中のキモシンの布択度は１／１０００．
１／１１００．１／１２１０．１／１３３１．１／１４
６４．１／１６１１、１／１７７２、ｌ／１９４９にぢ
いて調製し１こ。谷希択ｒγ７累俗漱、幻μｌを谷（叔
咄：ン薗定用つェル中で用い１こ。 Ｐ４ＳＰ２で衣わされるプロゲステロン１５１１否酌の
Ｋｒ欣欠（＋、４朋４１ＪＰモル／ｄで調表し、かμｌ
　（１１モル）を人々の１改１目固定出ウエルＶＣｊ６
いて用いに。 乍ポリクローナル（）Ｉ′、ＩＩＪｌ、？盲ＨＰＳコ３
−　ＩＩｂ（ゝギルドへイアンチセラＩにより供袷され
た）の希釈度ば１１５０．１　／１００左よひ１　／２
００で調製され、谷イｆコ釈ｌＩｉσ）もの為μｌ４人
々の閘知゛、・ド（室中ウェル内で川（・ムニ。 ＋ｊロー、沖くプロトコルは上記のｌ「１りであった。 夷・、沃の４古来は第１図Ｒよび第２図中Ｖこｄくす。 第１８１は〕′ロゲスデロン阻ｉ１ｒ盲り伏付犀Ｐ４８
Ｐ２によって付ねＪシ１こキモシンの乳縦固粘性の阻害
が、抗体の余力１ｆ／ｉ’：より変顔拐口」匣であるこ
とをン下している。第２１閃はゾロゲスグロン）狐古１
Ｍ１）仮台１杢が全く仔仕しな（゛場付のに１朋、に躾
の姑米父ポしている。 ５、孔中のスゲロイドに恢疋するｋめの兇役１゛す矩咬
瓦 −Ｆ貢尼の一友、暎程ｉ−爪は、キ七シン乳１陵［萌を
占珪阻告の夏、Ａプバ用匂目である抗体の譲ｒ紺を迅だ
するためにｌ旧いた。次に四に実験を何つ°で、抗体て
よる阻害削粘柱の変調（（灯する遊離スゲロイドの動子
を調べた。 抗体灯グロゲステロン（ＨＰＳ：ｈ３　Ｉ　Ｉｂ・・・
１ギルドへイアンチセラｌ）の１１５ｏイ６択度のもの
ヲＵｆ矩！、甚変のゾログステロン阻害蛸ｆ又せ体Ｐ４
ＳＰ２（１００Ｐモル／１被）と共にＮ４１　（・ムー
。伏曾体の餉斡・層間はｌＰモル／ウェルであった。ズ
ロゲス７ｕンは恢足ｉＨホψ１鳶孜中にイ戻度０．５ｎ
七ル／・ｒｔ＆で浴ｌ眸して最終葉基７．５Ｐモル／ウ
エルケ侍た。ｔＪ、２毛ＢＳＡ　’（”ｋ　ＬＮ’Ｊｚ
定巾緩伽室中　０　、５７１．４、ｒｆ’ｉ４浴／ｆｆ
１ｏ、７１４７ｑβ、決定用緩償欣甲のプロゲステロン
０．４２９　側、ＳＪ−び阻−吾削醒合体０．２８６―
馨言自１−る保温用混合物をＪ４製しムニ。対照インキ
コルベート（ｆｎｃｕｂａｔｅｓ　）もｆた調製したが
、この場せ４ｊｔ捧、プロゲステロン、またはこれら両
名を等容１に０）恢矩用抜伺ｆ吹により１α侠し１こ。 ｉた、！ログステロン阻害酌謀せ捧を恢足用枕伽孜で直
侠し友、割１似の一連の株（品用、屁＠′物もＡ袈した
。これらの屁会物は４℃ＶＣ爪（いて２時間１呆稲しｆ
こ。この保温の末期ｖｃ−ｈいて、７０μｌのインキュ
ベートゲ＋〕ｌ　童ｒ向足用ゾレート上の谷ウェルにニ
タＩ］にイ々し１こ。侠ボ用緩仙Ｉ故中のキモシンｌ　
ｒｎぴ／イ俗牧の希釈度は次のように調製し１こ。すグ
ｆわ゛ら、　ｌ／１２１０、１／１３３１、１　／１４
６４、ｌ／１６１１．１／１７７２．１／１９４９．１
／２１４４．１　／２３５８．１　／２５９４、’ｌ／
ｚｓ３５、ｌ／’３１３８．１／３４５２　でｈ　＞、
＞、喬分獣Ｉ勿３０μ１４ピ１．収−こ、ｉ、　１’ｊ
ｉｉｉ定Ｊ旧グレートＤゝもｉノ％るカラム中の合ウェ
ル［（％力［１シ１こ。これらの在釈吻はｒｉ’〜）：
終ノｇコト（！１場−：（Ｊ、７１　、０．６４、　０
．５８、　０．５３、０．４８．０　、４．４．０．４
０．０，３６．０．３３、ｔ）、３０．０．２７渥よび
０．２５Ｐモル／ウェルと１ｆつ１こ。礼、ｎＮ１ｃｌ
ｏμｌな谷りエルにＦｊＳ卯し、そしてゾレートは一１
＄［ｉＴｈの快Ｉｊｉの１（１■に３７℃で１す、ｆｉ
ｌｉｌ　’＋’＆イ晶し１こ。１尋られ１こ紹未Ｑエフ
躬３凶して７Ｊり丁。ヌ・を中褒グレートにより１号ら
れムニ結七は弔４凶にボす。ゾロゲスゾロン、抗体によ
ひズロゲ７グ０ン１＞ｌ−４害則災甘１１さＱ）不存在
にに（・て、１旬オニｊ＋！＋４　（／ｊ必′ななキモ
シンθ）威井１にはＯ６該Ｌモル／ウェル−Ｃあゐ。ゾ
ロゲス１０ンのみの仔仕にＪ６ケ金眠昇良度は四−であ
るのＶＣ対し、すＮ４庫の仔在におし・て映界・Ｃ戸尻
は０．４０Ｐモル／ウェルに端″ｊ　ＩＩＩＩ−ｒ心。 １羽査削ＩＰモル／ウェルが任（ｆする場せ、・鈍＋Ｍ
］は阻鮮され、七〇）粕果祝品りし優る１軒ｌう１をも
ｆこら１“一定めにはキモシン０．４４Ｐモル／ウェル
７必埼と丁ゐ、・九〇’＋　４．Ｎ４候におし・て兄ら
れΦように、櫟固は抗体の仔−土Ｆでイ限ン占する。し
っ）シ、プロゲステロンの子トイ１三ＦでＶま１呆（ロ
）を古汀θ）拉［杢イ易）′、シｉζ圭セこなわ几ムニ
〇参オ又献−寛代 １、　　ｌ”ｊ）　ルホ＊　’／　ｆ　Ｏ７−／”　　
−＋＝　ノ４ｆ’ｊ　、直と１’Ｌ”　Ｎ４−Ｉ　Ｋ　
ｔｌ＜ける、＋焦ｍ（Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈ
ｅ　５ｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄ　　Ｆｕｎｃｔｉｏｎ　
　ｏｆ　　Ｃａｒｂｏｘｙｌ　　Ｐｒｏｔｅａｓｅ）Ｊ
ン〉ヨーダンタン（Ｊｏｒｄａｎ　Ｔａｎｇ　）　’　
１Ａａ１゜ＣｐＨ，Ｂｉｏｃｈｅｍ、　’　１９７９　
’４Ｈ１ａ＋（２１９３−１０９ベー、）。 ２、［ノアゾアセチルーノルロイソンメナルエーテルに
よるベゾシンノ）不ｒ占１土１シ（’ｌ’ｈｅ　ムｎａ
ｃｔｉ−ｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｅｐｓｉｎ　ｂｙ　Ｉ
）ｉａｚｏａｃｅｔｙｌ　−ｎｏ−ｒｌｅｕｃｉｎｅ　
Ｍｅｔｈｙｌ　ＥｓｔｅＪ　　ｆ、Ｇ、　　ラノヤゴノ
８□ラン（ｌ（ａｊａｇｏｐａｌａｎ）、ｖＶ、ｉ（、
ス１イン（Ｓｔｅｉｎ）ｋよひＳ、ムアー（Ｍｏｏｒｅ
　）　’　Ｊ、　Ｂｌｏｌ、　ＣＩ＋ｅ＋ｎ’１９６６
年、２４１併、４２９５−４２９７波−ジ。 ３．１虚ゾロテアーゼ、小道、作用および生后税家（Ａ
ｃ１ｄ　Ｐｒｏｔｅａｓｅ、　５ｔｒｕｃｔｕｒｅ、　
Ｆｕｎｃｔｉｏｎａ、ｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｙ）Ｊジョー
ダンタン編、プレナムゾレス（Ｐｌｅｎｕｍ　Ｐｒｅｓ
ｓ　）　、　Ｆ″−ヨーク方よｔトロントン、１９７７
年。 ４、「ブロテイナーゼおよびそれらの阻舎卸」、檜、負
、作用および応用１目１１面（Ｐｒｏｔａｉｎａｓｅａ
　ａｎｄｔｈｅｊｒ、ｊｎｈｊｂｊｔｏｒｓ、５ｔｒｕ
ｃｔｕｒｅ、Ｆｕｎｃｔｊｏｎａｎｄ　Ａｐｐｌｉｅｄ
　Ａｓｐｅｃｔｓ　）Ｊ　Ｐｒｏｃ、　Ｉｎｔｅｒｎ。 Ｓｙｍｐ、　Ｐｏｒｔｏｒｏｚ　、ユーゴスラビア、１
９８０　年。 １９８１正出版、ベルガノンプレス（Ｐｅｒｇａｎｏｎ
ｐｒｅｓｓ　）　。 ５、　１酸：ｆロチアーゼに膚する被プスタテンの幼果
（Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｐｅｐｓｔａｔｉｎ　ｏｎ　Ａ
ｃ１ｄ　Ｐ’ｒｏｔｅ−ａｓｅｓ）　Ｊ　’Ｉ’、アオ
丁ギ、Ｓ、クニモト、ＩＨ，モリシタ、Ｔ、タケウチお
よびＨ，ウル不ザワ、ＩＩＪ。 、史 Ａｎｔ＋ｂ＋ｔ、’１９７１ど〔［丑、２４（Ｊ（υ、
６８７−６９４べ一九 ６．１力ルポキシルゾロテアーセ困舎合１−Ｅ’ブスタ
ｏｆ　　ｔｈｅ　　Ｃａｒｂｏ’ｘｙｌ　　Ｐｒｏｔｅ
ａｓｅ　　ｊｎｈｉｂｉｔｏｒＰｅｐｓｔａｔｉｎ）　
Ｊ。［ベゾシン左よひレニンの１氾害シ′Ｃ区する極遺
の勘未（Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　５ｔｒｕｃｔｕｒｅｏｎ
　　Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　　ｏｆ　　Ｐｅｐｓｉｎ　
　ａｎｄ　　Ｒｅｎｊｎ　）ＪＤ、ｆ（、リッチ（Ｒｉ
ｃｈ　）、Ｅ、’ｌ゛、（Ｊ、サン（Ｓｕｎ　）ｓ、に
びＥ、゛ウルン、　（Ｕｌｎ、）、’　Ｊ、、、　Ｍｅ
ｄ、　Ｃｈｅｍ、　’１９８０年、お４ｚ′−おページ
。 ７、ｒヘズスタチンによるペプシンの阻害の機憚（Ｍｅ
ｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　
Ｐｅｐｓｉｎｂｙ　Ｐｅｐｓｔａｔｉｎ　）　Ｊ。１−
解離定数２よび時間値４ｆｔ阻害に＠する阻害斧１構遺
の効釆（Ｅｆｆｅｃｔｏｆ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　ａｔ
ｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｎ　ｄｌａｓｏｃｆａｔｉｏｎｃｏ
ｎｓｔａｎｔ　ａｎｄ　Ｔｉｍｅ−Ｄｅｐｅｎｄｅｈｔ
　Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ月０１）　、　Ｈ，リッチによ
びＥ、Ｔ、０．サン、’　Ｂｉｏｃｈｅｍ。 Ｐｈａｒｍａｃａｌ　’、１９８０年、７９巻２２０５
−２２１２ページ。 ８、「ベゾスタテンと相同の耕しいレニン阻否沖」（Ｎ
ｅｗ　Ｒｅｎｆｎ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｇ　ｈｏｍｏｌ
ｏｇａ−ｕｓｗｉｔｈ　　ｐｅｐｇｔａｔｉｎ）　、Ｊ
　（ｌ　Ｉｖｌ＋エイド（Ｅｌｄ、八Ｇ。 エヴイン（Ｅｖｉｎ）、Ｂ、カスドロ（、Ｃａ５ｔｒｏ
　）、Ｊ、メナード（Ｍｅｎａ　ｒｄ　）　オよびＰ、
コーヴオル（ＣｏｒｖＱｌ、）、’　　Ｈｉｏｃｈｅｍ
　　Ｊ　’　１９８１年、１９７巷４６５−４７１ペー
ジ。 ９．１敗ゾロダイナーゼグノｆ占１住部位（Ｔｈｅａｃ
ｔ−ｉｖｅ　５ｉｔｅ　　ｏｆ　Ａｃ１ｄ　ＰｒｏｔＦ
ｅｉｎａｓｅ）ｊｃ＋　Ｔ、Ｌ。 プランデル（Ｂｌｕｎｄａｌｌ）、ｆ（、Ｂ、ジョーン
ズ（Ｊｏｎｅｇ）、Ｃ，７フーン（Ｋｈａｎ　）、Ｇ、
テーラ−（Ｔａｙｌｏｒ　）、ｐ、、　Ｔ、シウエ／ｌ
／　（Ｓｅｗｅｌｌ　）、Ｌ、Ｈ，Ｐｅａｒ　ｌ　１６
よひＳ、Ｐ、ウッド（Ｗｏｏｄ）。 ’　ＦＥＢＳ　Ｐｒｏｃ　’、１９８０年、６０巷、２
８１−２８８ページ。 １（１，１−＝プスタチンの３−オキソ−４（Ｓ）−ア
ミノ５’Ｚ　唄似坏の合成（５ｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ
　ａ　３−ｏｘｏ　−４（Ｓｌ−ａ＋ｎ１ｎｏ　ａｃｉ
ｄ　ａｎａｌｏｇ　ｏｆ　ｐｅｐｓｔａｔｉｎ）Ｊ。 １ソノルｉ（４キシル（カルボン、’：１ｋ）ｆロチア
ーゼθ）＃ｒ　ｍ　ｌ＞目害自η　（Ａ　　Ｎｅｗ　　
１ｎｈｉｂｉｔｏｒ　　ｏｆ　　　Ｃａｒｂｏｘｙｌ（
ａｃｉｄ）　ｐｒｏｔｅａ’５ｅａ）　Ｊ　、　ｌＪ、
Ｈ，リッチ、Ａ、Ｓ。 ボッ上ライ（’　ｆ（ｏｐａｒａｉ　）　ｋｊよび１屯
Ｓ、ベルナトウィッチ（ＢｅｒｎａｔｏｗｉＣｚＪ、’
　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　ＩＩＨｏｐｈｙＳＲｅｓ、Ｃｏｍ
ｍｕｎ、’１９８２年、　１０４（３１、１１２７−１
１３３ページ。 １］、　　ｒへＶ’シンに対するスピン像線ペプスタチ
ン結合（５Ｐｉｎ−１ａｂｅｌｌｅｄ　Ｐｅｐｓｔａｔ
ｉｎ　Ｂｉｎｄｉｎｇｔｏ　Ｐｅｐｓｉｎ）Ｊ。Ｕ醒子
スビ／共腸２よびｆＸＸ気気共鳴よる検ＦＦｆ　（Ａ　
５ｔｕｄｙ　ｂｙ　’Ｅｌｅｃｔｒｏｎｓｐｉｎ　Ｒｅ
５ｏｎａｎｃｅ　ａｎｄ　Ｎｕｃｌｅａｒ　Ｍａｇｎ−
ｅｔｉｃＲｅｓｏｎａｎｃｅ　）　Ｊ　ｎ　Ｐ、Ｇ、ツ
ユミツト（Ｓｃｈｍｉｄｔ）、Ｍ、Ｓ、ベルナトウィッ
チＲよびり、Ｈ，リッチ萼王化字（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓ
ｔｒｙ　）　Ｊ、１９８２４．２１巻、１８３０−１８
３５ページ。 １２、「重速用に４切なｒｊＪ浴住Ｒズスタチ／誘導坏
の固相＠Ｊｊ５ｔ　（５ｏｌｉｄｐｈａａｅ　５ｙｎｔ
ｈｅｓｉｓ　ｏｆ　ａｓｏｌｕｂｌｅ　ｐｅｐｓｔａｔ
ｉｎ　ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ　５ｕｉｔａｂｌｅｆｏｒ
　ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　ｕｓｅ　）　Ｊ。Ｂ、、Ｍ
、　オースオン（Ａｕ５ｔｅｎ　）、Ｔ、Ｆ’、フォー
ド（Ｆｏｒｄ）、υ。 Ａ、Ｗ、、グラ゛ント（Ｇｒａｎｔ　）　ＭよびＪ、、
、−エアーテーラ−（’Ｈｅｒｍｏｎ−Ｔａｙｌｏｒ）
　。’バイオサイエンスリボート（Ｂｆｏｓｃｉｅｎｃ
ｅ　Ｒｅｐｏｒｔｓ　）　’ａ１９８２年、２＠、４２
７−４３２ページ。 （１ｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　　ｏｆ　　Ｃａｔｈｅｐｓｉ
ｎ　　Ｄ　ｂｙ　　５ｙｎｔｈｅ−ｔｉｃ　　（Ｊｌｉ
ｇｏｐｅｐｔｉｄｅｓ　）Ｊ　ｏ　Ｔ　−Ｙ、リン（Ｌ
ｉｎ）忘よびＬ［ｔ、　　ウィリアムズ（Ｗｉｌｌｉａ
ｍｓ　）１．Ｊ。 Ｈｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、’Ｊ　１９７９年、１１８７５
−１１８８３ページ。 ｔヌ１１川の１１１］Ｊ具な説司」 ４！、　Ｉ　ｌ：イ１はキモシン阻、＋４９１１−プロ
ゲスグロン康６分子σノ伴在下のキモシンと抗グログス
テロンの１中々０）荀択欣か乳拭科に対して及は１彰・
−を不才＋ｎ１ｃｒｏｔｊｔｅｒヲル−ト上ｖ）「チェ
ッカーホード」ｔｌｌ・１重の結氷をボ１−凶、−ｉｇ
　２凶はキモシン阻吾犀」−ゾロゲステロン域台分士か
存在しない場合の第ＩＬメ１とｊｉｊＪもＸυ）１−チ
ェッカーホード」ン向足の結果を７バ１−図、ｔｉ４３
区１−１９九ソロゲスゾロン！８たくまゾロゲスゾロン
ｆｋはヤのｘ＊Ｊ−台せの存什下α〕キモシン０身１ｔ
シ々（ハイＩｉ　Ｎ＋＜　ｔｌｌ　７Ｊ晴Ｌ　Ｃい針に
与え６　＊＊ｗ示すｍ　１’ＣｒＯｔ＋　ｔｅｒプレー
ト上の崗冨の結末ン７ＪＣす図、第４凶はキモ７ン１相
籍７ｊリーグロゲスｆロンｒ）ｉせ分子が存在しない１
合σ）第３区１と同ｉｆ／’）ｍｉｃｒｏｔｉｔｅｒフ
ンートーヒの１′１に１定の結果を示￥区ｊである。百
図中の円はｍ１ｒｒｏｔｉｔａｒ　′ｆレートＪ）ウェ
ル促表１゜円の甲のＸ印は乳の硬固が明確に認められ１
こことｋが１゛７、（Ｑこ十ｙａｓ　１　′’ｒｒ　） ＦＩｏ、　２ 優先権主張　＠１９８３年７月２６日■イギリス（ＧＢ
）■８３２０１６４ 優先権主張　＠１９８４年１月１３日■イギリス（ＧＢ
）■８４００９２１ ０発　明　者　マイケル・ジョゼフ・パラエルイギリス
国ニスエル６２エイ チジー・バークシア・メイドン ヘッド・ホリーボート・エイス ガース・パーク８９番 ０発　明　者　リチャード・チャールズ・ティトマス イギリス国バークシア・メイド ンヘッド・ブルターズ・ロック ・プリンス・アンドリューバク ロース２６番

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、試料中の抗原性被分析物の糸度を測定するための酵
   累阻害削愉識児没灰定法であって、該１９素に対する氷
   質が試料の少くとも一部を形成−ｆる免疫検定法ｎ ２、試料中の抗原性伝号ぞ［物の濃度を測定するたｙ〕
   のｒＡ？素ｊＳ）ｉ害刑憚識兇投恢定法であって、該１
   羽書阿ｌｈ票識は乳を友１改１させつる酵素の活性を阻
   害１−ることかできる；）１１臀ｔ＜ＩＪである免疫検
   定法。 ３、乳を含みまた（・ま乳からなる試料中の抗原性破〃
   ・ゼｆ９勿の一度をｄｌｌｌ定するＴこめの自γ素阻害
   當り椀諌叱役づψ足法であって、１咳阻沓剤は乳を凝固
   させ５る酵素のン古江を、）Ｈ吾することができる１岨
   讐卸ｊである一ｒ（ｆＦｉ′＋請求の範囲第１項まには
   第２項記載の児う史漬だ法。 ４、乳試料中の抗原性被分析物の濃度を測定するための
   酔累阻沓剤襟繊免投俣矩法であって、該免疫検定法は、 （１）乳試料 ｆｆ１ｌ　　Ｍ抗原注仮分析物と共通の少くとも１つの
   抗庫決足基を有する部分を具え、形部分は、該部分への
   抗体の免疫化学的結合により阻害嗣の粘性が減少または
   排除さｉｔ心よう虻、乳俣面酵素の活性を阻害すること
   ので２る岨害罰に結合している榎曾分子 ＯｔＵ　　該復合分子１には該抗原住晟分町物に対し免
   疫化学的結合を形成しうる（）Ｅ坏 （１ｖ）　　乳を凝固しうる酵素をきみ、かっ該乳試料
   中のｆｆｃ涼在破分析物、受復合分子どよび、該抗寄を 体の間にａ半反応が起ることを、ｒ！ｆ谷する工程と、
   乳を・凝固させうる該酵素の該乳試料に対する活性を決
   足′１−る工程とを含む有奸謂氷の範囲、ｇ１項ないし
   第３項記載の免疫検定法。 ５、免疫イ寅定に使用する該酪禦はキモシンである＃ｆ
   Ｆ錆水の範囲第１項ないし第４項記載り酵素阻−Ｆ、・
   １り千鍼起ａｉｉ（叱Ｂ２・灰定ｌ去。 ６　該抗原１（１ユ被分伯１勿はプロゲストゲン（ｐｒ
   ｏｇｅｓｔ、ａｇｅｎ　）　、＋プロゲストゲン中間代
   謝ゾ、ニスｉ０グン（ｏｅｓｔｒｏｇｅｎ　）、エスト
   ０ゲン中間代謝物かりノｊ−るｉμＤＩら、へ択される
   ステロイドでル・・Ｓ仔Ｍｉ−Ｎ＊水θ）軸、四個）Ｉ
   Ｊ貞！丁いｔ、第５項ｉ己載の画素４狙害渭４．♀な記
   役妖シｒ法− ７、該抗原’ＬＥ　ｆｈｋか４Ｊ［暖は）゛［コゲスデ
   ロン（ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎ；　）である’＋＋　ｒ
   ＋　ｆｌ肯＞、ｇのル厄Ｉ用第６項計：成の酵素ＶＡＬ
   ”＝“＋’　ｊｌ’ｌ標識兎役懐定法。 ８、夜禎、扉ｆ＋、　４Ｘ　ツナ古物は１ヰ岐エストロ
   ン（ｏｅｓｔｒｏｎｅ　５ｕｌｐｈａｔｅ　）である萄
   鵠’Ｍ　求の範囲第（１坦記載の酵臆１５１１古犀ｊ餞
   癲兎投恢定法。 ミ）　乳をνを午→−６猿合の１１．Ｑ中α９〕プし■
   ゲステロンｏｎ　１ｊｊ−を１ｉｖ　＊−Ｊ　　４）−
   、’Ｃｈ　ｌｔ　ｆ＊ｓ干ｓｆ＋氷のａ　ｉ用４Ｍ　　
   ７　、ＬＪ４　ｉｉｄ・ｉｉｌ：　の１゛片素ｉＬ↓古
   ・’ｌ’ｉ　４Ｍ　（・・ス　）Ｃ，プ丈＾・９之定Ｌ
   ノミ苓−１町ＥＭＬ　、　ノ・ノ１定ｔｂ％　児未７Ａ
   のンＩ−グスデコン、宸度によＩフ光酌が不さ才しる存
   市のうＴｊ　’ｌ’ｌ’ｌを快知する方法。 １（＋。乳を・紐引−１イ）水奇の乳のノロゲステロン
   ａ　ｔＬう・、央＊−■る１、二ｙ＞　＋ｃ　９音計ｔ
   α刃（の缶龜囲絹７項古ピ幀の酔素阻者削憚識兎役恢定
   法を使用し、冗１＾−］；定時にズロゲステロン護度が
   所定（９層−を越えてトビ、￥＝１−ることがないこと
   によってＩｄ−娠が示されろ床ｉｆの妊娠を・関知する
   方法。 １１、　　礼夕顔生する家畜の乳の中のルｆｔソエスｉ
   ｒｉン、矯呟を快食するために特許請求の範囲第８ＪＡ
   ｉｉピｉｉ、ｉｋ、　（’）酵素１且害刑イ候識兎投瑛
   定広を１更用１−１ｅ／ｒ定ｌ・ＩＧ笈を趙える鎖酸エ
   ストロン誂・リニによって妊々ＪＩＸ−・乍示される牙
   會の妊娠を瑛知する方法。 １２、該＠、原ｆｔ肢分析物はアフウｊ・キシン甲＋Ｍ
   Ｊ　代課辺でも・５府訂請求の範囲第１項ｌ［いし第５
   １県ＳＣ。 絨のｉψ累阻害刑憬識免没恢定沃。 １３、　　ｆ識＜生ｆる振合の乳の中のアフラトキシン
   中１７ｊ１代翻９勿１償咬を喫食１−るた＾’）ｖｃ待
   針杆１η３木範囲Ｊ１２項記載の＃素阻沓沖ｊ慄繊メ−
   ・、殺：ケ矢定法を１史川づ−る乳の中のアフラトキシ
   ー′４′恢五１−る力ｌノ５９．１６１、アフラトギシ
   ン中曲弐〇蓄働はｆフラトキ６□である萄許請水の範囲
   第１２唄Ｃ信、戟の兎ヲ丈恢Ｗ汰１ｆこは待計梢水の範
   囲第１３項、＋＝祇σ−）力を去。 １５゜゛ｒ１．苓′覧向させうる酵素阻害剤“’（−□
   ｌ；）って、仄の什舎物ばから定り」ノ＜されるｊ＞ｆ
   ｌ　’４消Ｐ　−ｓ　ｃ、、ｒ−Ｚ−ａ、　ｌ　ａ−Ｑ
   、　　Ｐ−ｖａ　ｌ　−Ｚ−ｖａ　ｌ　−Ｑ　’ＩＩ：
   　ＩＪ＋１Ｐ−ａｓｐ−Ｚ−ａｌａ−Ｑ ムーだし２はスｐ−ｙン（５ｔａｔｉｎｅ）　”：ｆ：
   には仄の−・刊又′式のジ゛ノジカル（ｄｉｒａｄｉｅ
   ａｌ　）でトリーＮＨ−ＣＩ（−Ｒ，−ＣＨ−Ｃ− ＣＨ，。 −１ ＼１ ＣＨ （ただしＲ１は−ＣＨ２−ＮＨ−１−ｃ　−ＣＨ，、−
   １−」 Ｈ（Ｓ） ０（汁Ｉ　　　　　Ｏ ＩＩ　　　　　　　ｊ　　　　Ｉ１ １０− ０〇　リ １ −８−Ｃｌ　　−５−ＣＨ□−ｊｉたは−Ｎ）ｆ−Ｃ−
   （反転ペゾか １ （−） す１ゝ填似体（’　ｒｅｔｒｏｉｎｖｅｒｓｏ　ｐｅｐ
   Ｎｄｅａｈａｌｏｇｕａ、　　）　　）　　でｉ（コ一
   ）　　Ｑ　、　　　Ｒ２１プ、　（りｌ−１２Ｃ）１２
   Ｃ）ｉ　２Ｃｆｉ、　、＝〜ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３また
   は−Ｈ）ＰはＡ−１ｈｉｑ−Ａ−５ｐｒｏ−ｈｉｓ−Ａ
   、　ｈｉｓ−ｐｒｏ−旧１ｌ−Ａ−ｐｒｏ−ｈｉｓ−ｐ
   ｔ°０−ｈｉｓ−Ａ、　ｈｉｓ−ｐｒｏ−ｈｉｓ−ｐｒ
   ｏ−ｈｉｓ−Ａ％よひａｒｇ−ｈｉｓ−ｐｒｏ−ｈｉｓ
   −ｐｒｏ−ｈｉｓ−Ａ　（Ａはｕ／１シン基寸たはバリ
   ン基）から薫にニオ１７、Ｑは−Ｂ、−〇−ｐｒｏ、　
   −Ｂ−ｐｒｏ−ｐｒｏ、　−Ｈ−ｐｒｏ−ｐｒｏ−１ｙ
   ）ｌ。 −Ｂ−ｐｒｏ−ｐｒｏ−１ｙｓ−１ｙｓ　Ｍよび−Ｂ−
   ｐｒｏ−ｐｒｏ−１ｙｇ−１ｙａ−ａｓｎ　　（ただし
   −１（はイ′ロイシンＪｌ　ｆｌ、二はロイシン基）　
   ７３．ｚら選シまれる。 Ｌイー　　６（の溝汚を有する化合物）ｈｉｓ−１ｅｕ
   −ｓｅｒ−ｓｔａ−ａｌａ−ｉｌｅ−ｐｒｏ−ｐｒｏ−
   １ｙｓ＝ｌｙｓ。 １７、　　（ＫＯ）構造を自する化合物１ｅｕ−ｓｅｒ
   −ｓｔａ−ａｌａ−ｉｌｅ−ｐ＋ｏ−ｐｒｏｉｙｇ−１
   ｙａ、。 １８、乳を架内さ一１ニジ：＝つる酵素の７２１件り・
   １（且ｇし５るｉｌ害畑で標識されたハプテンへ谷・表
   、該阻害剤の活性は該ハシテンと抗体と（ン）ｌｆ４１
   の体、拗化′４：ｌｌ″ｌｌ、ゴ・会の形成により調節
   される棋台分ゴー。 １９、該ハシテンはプロゲストゲン、ソ′ロゲストゲン
   中間代謝゛泌オよびエストロゲンまたはエストロゲン中
   ＋’ｔ４ｊ代謝９勿と共通の少くとも１つの抗原決定基
   を有づ−る特許請求の範囲第１８項記載の接合分子。 肋、仄の押力・ら応択される特許６ｎ求の範囲第１９項
   ｊ尼俄のｐＱ合分子 （Ｒ３は前記阻沓剰σ月つから優られる基またはシラノ
   カル、Ｒ’？まアフラトキシンＭ１）２】、久の構造の
   複合分子。 乙、仄の構造の複合分子。 看、　　？ＸＯ）構成を別閾にまたは組会セて含む、特
   許請求の範囲弔２唄ないし第８ｊＪｌｊｃｔよび第１２
   項記戦の酵素阻害創襟鐘兎投俣定法筐たは特許請求のｊ
   範囲第９」貝ないし第１】項および第１３項記載の方法
   な付うための風薬キット （１）特許請求のＵｄ囲第１８項記載の複合分子（１１
   ）該複合分子の抗原決定４に結合しつる抗体ｔ＋＋Ｕ　
   　乳を凝固させうる屏素