JPS59163555A - 複数成分の迅速な分析方法 - Google Patents
複数成分の迅速な分析方法Info
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- G01N2333/9029—Oxidoreductases (1.) acting on -CH2- groups (1.17)
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- G01N2333/902—Oxidoreductases (1.)
- G01N2333/906—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.7)
- G01N2333/90688—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.7) acting on other nitrogen compounds as donors (1.7)
- G01N2333/90694—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.7) acting on other nitrogen compounds as donors (1.7) with oxygen as acceptor (1.7.3), e.g. uricase (1.7.3.3)
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- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/91—Transferases (2.)
- G01N2333/91091—Glycosyltransferases (2.4)
- G01N2333/91142—Pentosyltransferases (2.4.2)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
不発明は複数の成分の迅速な分析方法に関する。更に詳
しくは、不発明は例えばアミノ酸、核酸、糖類、脂質な
どの生体成分あるいは食品成分の生物電気化学的分析方
法に関する。
しくは、不発明は例えばアミノ酸、核酸、糖類、脂質な
どの生体成分あるいは食品成分の生物電気化学的分析方
法に関する。
従来、アミノ酸、核酸、糖類、脂質、ビタミンなどの分
離分析方法としては、クロマトグラフ法が知られている
。しかし、この方法は各成分の分離に多くの時間と試薬
と高度の技術を必要とする欠点があった。その方法に用
いる装置は複雑で高価なものである。
離分析方法としては、クロマトグラフ法が知られている
。しかし、この方法は各成分の分離に多くの時間と試薬
と高度の技術を必要とする欠点があった。その方法に用
いる装置は複雑で高価なものである。
また近年、酸素電極や過酸化水素電極等の電気化学セン
サーと、酵素、微生物等の生体触媒を用いて複数の成分
の内の特定の成分だけを簡易、迅速かつ選択的に定置す
る方法が提案されている（千畑一部編、固定化酵素、講
談社サイエンティフィック、１９７７年）。
サーと、酵素、微生物等の生体触媒を用いて複数の成分
の内の特定の成分だけを簡易、迅速かつ選択的に定置す
る方法が提案されている（千畑一部編、固定化酵素、講
談社サイエンティフィック、１９７７年）。
しかし、この方法では複数の成分を同時に分析すること
ができない。
ができない。
本発明の目的は前記したような複数の成分を同時に迅速
かつ節易匠分析することのできる分析方法を提供するに
ある。
かつ節易匠分析することのできる分析方法を提供するに
ある。
本発明は、外気の酸素の侵入のないようにした反応槽に
ｐＨ緩衝剤及び被検液を入れ、溶存酸素の吸収反応を生
起させる複数の生体触媒を順次添加し、複数の成分を選
択的かつ段階的に酸化し、その酸化過程をセンサーによ
り自動記録して溶存酸素のステップダウン曲線を求め、
添加触媒の種類及び添加順序から成分を定性し、溶存酸
素の減少幅から定量をおこなうことを特徴とする複数の
成分の迅速な分析方法を提供する。
ｐＨ緩衝剤及び被検液を入れ、溶存酸素の吸収反応を生
起させる複数の生体触媒を順次添加し、複数の成分を選
択的かつ段階的に酸化し、その酸化過程をセンサーによ
り自動記録して溶存酸素のステップダウン曲線を求め、
添加触媒の種類及び添加順序から成分を定性し、溶存酸
素の減少幅から定量をおこなうことを特徴とする複数の
成分の迅速な分析方法を提供する。
本発明を実施するためには、溶存酸素（以下Ｄｏと略記
）の連続測定記録装置が必要であり、そのだめのセンサ
ーとしては、クラーク電極、すなわちポーラログラフ式
隔膜被覆電極やガルバニ電池式ＤＯ！極、最近（：ｏｎ
ｎｅｒｙの発明による酸素圧平衡式ＤＯ電極等の任意の
ものが用いられる。
）の連続測定記録装置が必要であり、そのだめのセンサ
ーとしては、クラーク電極、すなわちポーラログラフ式
隔膜被覆電極やガルバニ電池式ＤＯ！極、最近（：ｏｎ
ｎｅｒｙの発明による酸素圧平衡式ＤＯ電極等の任意の
ものが用いられる。
次に、上記のＤｏセンサーを挿入あるいは固定し、外気
の酸素の侵入なしに反応液の１）０ρ変化を正確に測定
でき、かつ反応の制御用の試薬、触媒等を随時添加でさ
る反応槽が必要である。第１図はその一例で、谷槓約２
ｍｌの小槽１の側壁にＤｏセンサー２を固一定し、さら
に上方を細穴３をうがった栓４でフタをして外気から酸
素の侵入を防止し、かつこの穴を通じて前記した反応制
御剤をマイクロシリンヂ等で注入できるようにしである
。反応温度はジャケット５に恒温水６を循環して制御し
、マグネチツクスターラー７で反応液の混合、攪拌をお
こなうことができる。な２具体的デザインはこの事例に
限定されるものでない。
の酸素の侵入なしに反応液の１）０ρ変化を正確に測定
でき、かつ反応の制御用の試薬、触媒等を随時添加でさ
る反応槽が必要である。第１図はその一例で、谷槓約２
ｍｌの小槽１の側壁にＤｏセンサー２を固一定し、さら
に上方を細穴３をうがった栓４でフタをして外気から酸
素の侵入を防止し、かつこの穴を通じて前記した反応制
御剤をマイクロシリンヂ等で注入できるようにしである
。反応温度はジャケット５に恒温水６を循環して制御し
、マグネチツクスターラー７で反応液の混合、攪拌をお
こなうことができる。な２具体的デザインはこの事例に
限定されるものでない。
次に本発明に用いる生体触媒としては、例えば糖類の分
析には、インベルターゼやアミラーゼのような加水分解
酵素や、グルコース酸化酵素（ＣＯＤ）のような酸化酵
素が用いられ蛋白、アミノ酸の分析にはグロテアーゼ、
ペプチダーゼ、アミノ酸酸化酵素が用いられ、コレステ
ロールの分析には、コレステロールエステラーゼ、コレ
ステロール酸化酵素カ用いられ、核酸関連物質、例えば
ＡＴＰ分解物のイノシン酸（ＩＭＦ ）の定量には、ヌ
クレホ オチダーゼ、ヌクレオシド奔→スホリラーゼ、キサンチ
ンオキシダーゼ等が用いられる。
析には、インベルターゼやアミラーゼのような加水分解
酵素や、グルコース酸化酵素（ＣＯＤ）のような酸化酵
素が用いられ蛋白、アミノ酸の分析にはグロテアーゼ、
ペプチダーゼ、アミノ酸酸化酵素が用いられ、コレステ
ロールの分析には、コレステロールエステラーゼ、コレ
ステロール酸化酵素カ用いられ、核酸関連物質、例えば
ＡＴＰ分解物のイノシン酸（ＩＭＦ ）の定量には、ヌ
クレホ オチダーゼ、ヌクレオシド奔→スホリラーゼ、キサンチ
ンオキシダーゼ等が用いられる。
なお、直接的には酸素吸収をしない脱水素酵素例えば乳
酸脱水素酵素（ＬＤＨ）’Ｐアルコール脱水素酵素（Ａ
ＤＩ（）等も助酵素（ＮＡＤ）および水素転移剤（ｈｙ
ｄｒｏｇｅｎ ｔｒａｎｓｆｅｒａｇｅｎｔ ）のフェ
ナジン メタサルフェート（ｐｈｅｎａｚｉｎｅ ｍｅ
ｔｈａｓｕｌｆａｔｅ ） ％の助剤と併用すれば、乳
酸、アルコール等の分析に用いられる。まだ、時には倣
°生物菌体も用いられる。
酸脱水素酵素（ＬＤＨ）’Ｐアルコール脱水素酵素（Ａ
ＤＩ（）等も助酵素（ＮＡＤ）および水素転移剤（ｈｙ
ｄｒｏｇｅｎ ｔｒａｎｓｆｅｒａｇｅｎｔ ）のフェ
ナジン メタサルフェート（ｐｈｅｎａｚｉｎｅ ｍｅ
ｔｈａｓｕｌｆａｔｅ ） ％の助剤と併用すれば、乳
酸、アルコール等の分析に用いられる。まだ、時には倣
°生物菌体も用いられる。
なお、本発明による分析対象成分の濃度は反応槽におけ
る初濃度が０．１μｍｏｌ ／ ｒｎｌ程度であること
が望ましい。その理由は−（法に用いられるＤＯの空気
による飽和濃度が０．２μｍｏｐ ／ ｒｎｌのオーダ
ーであることなてよる。濃度の調整は反応槽中でｊにな
うことかできる。
る初濃度が０．１μｍｏｌ ／ ｒｎｌ程度であること
が望ましい。その理由は−（法に用いられるＤＯの空気
による飽和濃度が０．２μｍｏｐ ／ ｒｎｌのオーダ
ーであることなてよる。濃度の調整は反応槽中でｊにな
うことかできる。
本発明の方法によって前記したイｄ叔の１ｊｋカーを最
も能率的に分析する操作は種々工夫できるが、その準備
のために、その成分が分っている場合は各々の標品につ
いて単一成分ぐこついての反応特性を本発明の反応槽を
用いてしらべておくことが有効である。即ち、例えば酵
素量、反応液のｐＨ、緩衝液の組成、温度等を変え、所
望の酸化反応が迅速に進行する条件を酸素吸収曲線の勾
配の比較により確かめる。
も能率的に分析する操作は種々工夫できるが、その準備
のために、その成分が分っている場合は各々の標品につ
いて単一成分ぐこついての反応特性を本発明の反応槽を
用いてしらべておくことが有効である。即ち、例えば酵
素量、反応液のｐＨ、緩衝液の組成、温度等を変え、所
望の酸化反応が迅速に進行する条件を酸素吸収曲線の勾
配の比較により確かめる。
なお、期待されるいくつかの成分の酸化酵素次々と添加
してみて、どの酵素により酸素吸収が生起するかを曲線
の下降現象の有無から判断して定性分析をおこなうこと
ができる。
してみて、どの酵素により酸素吸収が生起するかを曲線
の下降現象の有無から判断して定性分析をおこなうこと
ができる。
また、触媒を添加する前と酸素吸収反応（ＤＯの減少）
が停止した時点との出力の減少幅はその触媒の機能にレ
スポンスする成分の濃度に対応するものであるから、定
性分析と同時に定量分析ができる。
が停止した時点との出力の減少幅はその触媒の機能にレ
スポンスする成分の濃度に対応するものであるから、定
性分析と同時に定量分析ができる。
なお、空気を飽和した緩衝液を反応槽に満たし、センサ
ーの出力を測定すれば、測定温度に対する酸素溶解度を
表（例えばＪＩＳＫＯＩＯＩ 、０１０２ 工場用水
、同排水試験法、溶存酸素の項参照）から求めることに
より、出力の減少幅をＤＯ値に換算することかできる。
ーの出力を測定すれば、測定温度に対する酸素溶解度を
表（例えばＪＩＳＫＯＩＯＩ 、０１０２ 工場用水
、同排水試験法、溶存酸素の項参照）から求めることに
より、出力の減少幅をＤＯ値に換算することかできる。
そして濃度既知の標品についてその濃度とＤＯ減少量を
対比すれば標品単位量の酸素吸収量が分る。かくして、
その成分については酸素吸収量から標準液を用いないで
直ちに成分の濃度を知ることが可能となる。
対比すれば標品単位量の酸素吸収量が分る。かくして、
その成分については酸素吸収量から標準液を用いないで
直ちに成分の濃度を知ることが可能となる。
なお、そのままでは酸化酵素の作用を受けないため、Ｄ
ｏ減少のみ゛られない成分、例えばスノクロースにおい
ては、これを反応性に変えるだめの加水分解酵素である
インベルターゼを作用させ、グルコースを生成させてＧ
ＯＤにより酸化させるような予備反応を選択して用いる
。
ｏ減少のみ゛られない成分、例えばスノクロースにおい
ては、これを反応性に変えるだめの加水分解酵素である
インベルターゼを作用させ、グルコースを生成させてＧ
ＯＤにより酸化させるような予備反応を選択して用いる
。
ソシテ、クルコース、スークロースの混合液については
、（ＣＯＤ）→（インベルターゼ）の順で酵素碓加をお
こなうことにより、二段のＤＯステップダウン曲線を求
め、第一段の降下幅からグルコース濃度を、第二段の降
下幅からスヂクロースを求めることができる。こうした
予備反応は必要に応じて加水分解酵素や転移酵素等で二
段、三段と分けて名こなうことができる。
、（ＣＯＤ）→（インベルターゼ）の順で酵素碓加をお
こなうことにより、二段のＤＯステップダウン曲線を求
め、第一段の降下幅からグルコース濃度を、第二段の降
下幅からスヂクロースを求めることができる。こうした
予備反応は必要に応じて加水分解酵素や転移酵素等で二
段、三段と分けて名こなうことができる。
また、酸化酵素も複数に用いることができこうした反応
の組み合わせによりより多（の成分の定性と定量ができ
る０、 以下、実施例について具体的な説明をおこなう。
の組み合わせによりより多（の成分の定性と定量ができ
る０、 以下、実施例について具体的な説明をおこなう。
〔実施例１〕 ヒポキサンチン（Ｈｘ）とキサンチン（
Ｘ）の混合液の分析 Ｈｘ Ｘ （ヒポキサンチン）（キサンチン） Ａ （尿酸） Ａｌａｎｔｏｉｎただし、ＸＯ
：キサンチンオキシダーゼ、ＵＯ：ウリカーゼ ２、装置と材料 （］）Ｄｏセンサー：白金カソード（直径３ｍｍ）、厚
さ１／１０００インチのＦ ＥＰ膜被覆のクラーク電 極（オリエンタル電気製） ；加電圧−〇、 ７ Ｖ、ｉ）、Ｃ （２）記 録 計 ：島津製作所製 １００ ｍＶ フルスケール。
Ｘ）の混合液の分析 Ｈｘ Ｘ （ヒポキサンチン）（キサンチン） Ａ （尿酸） Ａｌａｎｔｏｉｎただし、ＸＯ
：キサンチンオキシダーゼ、ＵＯ：ウリカーゼ ２、装置と材料 （］）Ｄｏセンサー：白金カソード（直径３ｍｍ）、厚
さ１／１０００インチのＦ ＥＰ膜被覆のクラーク電 極（オリエンタル電気製） ；加電圧−〇、 ７ Ｖ、ｉ）、Ｃ （２）記 録 計 ：島津製作所製 １００ ｍＶ フルスケール。
記録速度１ ｃＭ／ ｍ ｉ ｎで使
用
（３）反 応 槽 ：３７℃に調整、容積２，０００μ
Ｂ （４）酵 素 ：ＸＯ・−・ベーリンガーマンハイ
ム製 ０．４１．Ｌ］／ｍ１ ３、２ ｉＶＩ硫安硫安ザクベン ジ ョン・・・オリエンタル酵母 工業製 ０．４１．０７ｍ１ ５０ ｍＭホウ酸緩衝液 （５）基礎液 ３７℃で空気飽和した１ ／ １５＊ｖＩ ｉ、ｌン酸
緩衝液（Ｐ、Ｂ、Ｓ ） ＤＯ濃度： ０．２１４ μｍｏｌ／ ｒｒｔｌ （３
７℃）（６）被検液 Ｈｘ ： １０ ｔｔｍｏ１３ （１，３６ｍ９ ）／
ｍｌＸ：１０μｍｏ−ｇ （１，５２ｍ９ ） ７ｍ１
Ｈｘ 、 ｘ ： 混合液 ３、操 作（第２〜３図参照） 第１図の反応槽に２０００μＢよりやや多いＰ、Ｂ、Ｓ
を入れ栓をしく液の一部が細大までくるようにする）、
ＸおよびＨｘの被検液（５又は１０μ！ｌ？りをマイク
ロシリンヂに採り、攪拌しなから細穴から注入、次に酵
素Ｘ０２０μ看を注入、Ｄｏセンサーの出力の減少ｄ１
を見守り、それが停止した時点で第２図中に示しだよう
にＵＯ２０μ形をすばやく添加しＤＯの２段のステンプ
ダウン（ｄ２）曲線を得た。
Ｂ （４）酵 素 ：ＸＯ・−・ベーリンガーマンハイ
ム製 ０．４１．Ｌ］／ｍ１ ３、２ ｉＶＩ硫安硫安ザクベン ジ ョン・・・オリエンタル酵母 工業製 ０．４１．０７ｍ１ ５０ ｍＭホウ酸緩衝液 （５）基礎液 ３７℃で空気飽和した１ ／ １５＊ｖＩ ｉ、ｌン酸
緩衝液（Ｐ、Ｂ、Ｓ ） ＤＯ濃度： ０．２１４ μｍｏｌ／ ｒｒｔｌ （３
７℃）（６）被検液 Ｈｘ ： １０ ｔｔｍｏ１３ （１，３６ｍ９ ）／
ｍｌＸ：１０μｍｏ−ｇ （１，５２ｍ９ ） ７ｍ１
Ｈｘ 、 ｘ ： 混合液 ３、操 作（第２〜３図参照） 第１図の反応槽に２０００μＢよりやや多いＰ、Ｂ、Ｓ
を入れ栓をしく液の一部が細大までくるようにする）、
ＸおよびＨｘの被検液（５又は１０μ！ｌ？りをマイク
ロシリンヂに採り、攪拌しなから細穴から注入、次に酵
素Ｘ０２０μ看を注入、Ｄｏセンサーの出力の減少ｄ１
を見守り、それが停止した時点で第２図中に示しだよう
にＵＯ２０μ形をすばやく添加しＤＯの２段のステンプ
ダウン（ｄ２）曲線を得た。
第３図は上記液単独２よび混合液についての組成比とス
テップダウン比、即）ｄ、／ｄ２比との関係を示したも
ので、Ｘは（１１／ｄ２＝１であるのにｌ（ｘは２の値
でその混合液は混合比による直線関係がある。
テップダウン比、即）ｄ、／ｄ２比との関係を示したも
ので、Ｘは（１１／ｄ２＝１であるのにｌ（ｘは２の値
でその混合液は混合比による直線関係がある。
なお、ＤＯの減少と基質濃度との関係をみると、Ｘ ＋
ｆ（ｘ何れもＵＯ添加にょるｏ２吸収量ｏ、、９と基
質濃度が等しい関係にある。
ｆ（ｘ何れもＵＯ添加にょるｏ２吸収量ｏ、、９と基
質濃度が等しい関係にある。
第１表 Ｘ、ＨＸの濃度と０２吸収量の関係したがって
Ｘ 、 Ｈｘ混合液のｄ２かも（Ｈｘ＋Ｘ）のｍｏｌ濃
度が求まり、さらに第３図からその量比がわかるので、
夫々の濃度がわかることになる。
Ｘ 、 Ｈｘ混合液のｄ２かも（Ｈｘ＋Ｘ）のｍｏｌ濃
度が求まり、さらに第３図からその量比がわかるので、
夫々の濃度がわかることになる。
これらの成分は、・動物体ＰＪにおいてＡＴＰか分解す
れ尿酸として排泄される中間代謝物で、これらの分離定
量は医学、生化学、食品化学およびｉ−Ｊ連産業におけ
る高度の利用価値を有するものである。こ２ｔらはクロ
マトグラフ法でも従来の酵素法（光学的検出定量による
）でも分別定性か仲々困難なものであったが、４１：発
明によれば第２図から分るように５分以内の短時間にき
わめて前単にしかも標準液がな（でも正確に各成分の定
清かできる。
れ尿酸として排泄される中間代謝物で、これらの分離定
量は医学、生化学、食品化学およびｉ−Ｊ連産業におけ
る高度の利用価値を有するものである。こ２ｔらはクロ
マトグラフ法でも従来の酵素法（光学的検出定量による
）でも分別定性か仲々困難なものであったが、４１：発
明によれば第２図から分るように５分以内の短時間にき
わめて前単にしかも標準液がな（でも正確に各成分の定
清かできる。
〔−火施例２’ｌｌ ＡＴＰ分解物の定量イノシンｄ
（Ｉｆｖ’ＩＰ）、イノシフ（ＨＸＲ）。
（Ｉｆｖ’ＩＰ）、イノシフ（ＨＸＲ）。
ヒボキサンチン（１（Ｘ）の分別足蹴例をのべる。
（ＩＭＦ） （ｉ（ｘＲ）
但し
一ゼ
ＵＡ：尿酸
（４）酵 素
ＡＰＥ：３．２Ｍ硫安サスペンション。
６５ ｔ、Ｕ／ｍｌ（３７°Ｃ）
ＮＰ：３．２Ｍ硫安サスペンション。
２０１、Ｕ／ｙｕ （２５℃）
ＸＯ：３．２Ｍ硫安サスペンション。
０．４１．Ｕ／〃ＩＪ
何れもベーリンガーマンハイム社製品を使用した。
（５）基礎液
Ａ液：１／１５Ｍ グリシ７−ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ
１０，５） 上記２ｒｎｌに対し、Ｏ，Ｉ Ｍ ＺｎＣ１／２２μ（
３，０，Ｉ Ｍ ＭｇＣ，８２２μ沼を添加したもの Ｂ液： １／１５ Ｍ Ｐ、Ｂ、Ｓ （前出）（６）
被 検 液 Ｉ ＩＶｆ Ｐ 、 ＨｘＲ、ｉ（ｘ の等最混合液（
１０μｍｏ−ｅ３／ ｒｒｔｌ ） ４μ形を使用３、
操 作（第４図参照） 各種の操作手順が工夫できるが酵素の使用量が少なく操
作も簡易な方法の一例をフローシートで示す ４、濃度計算 ＣＨＸ−−４−×０．１０７ （μｍｏＡ ／ ｍｌ
） （３）但し、ｄｏ；空気飽和水の出力に相当する
記録計スパン（刑） ＣＨｘ、ＣＩＶＬＦ）、 Ｃｆ（ｘＲ’ Ｈｘ 、 Ｉ
ｆｖｉＰ 。
１０，５） 上記２ｒｎｌに対し、Ｏ，Ｉ Ｍ ＺｎＣ１／２２μ（
３，０，Ｉ Ｍ ＭｇＣ，８２２μ沼を添加したもの Ｂ液： １／１５ Ｍ Ｐ、Ｂ、Ｓ （前出）（６）
被 検 液 Ｉ ＩＶｆ Ｐ 、 ＨｘＲ、ｉ（ｘ の等最混合液（
１０μｍｏ−ｅ３／ ｒｒｔｌ ） ４μ形を使用３、
操 作（第４図参照） 各種の操作手順が工夫できるが酵素の使用量が少なく操
作も簡易な方法の一例をフローシートで示す ４、濃度計算 ＣＨＸ−−４−×０．１０７ （μｍｏＡ ／ ｍｌ
） （３）但し、ｄｏ；空気飽和水の出力に相当する
記録計スパン（刑） ＣＨｘ、ＣＩＶＬＦ）、 Ｃｆ（ｘＲ’ Ｈｘ 、 Ｉ
ｆｖｉＰ 。
ｆ（ＸＲの濃ｒｐｌ−（ｐ ｔｎｏ沼７ｍｌ ）を示す
。
。
上記の計算から各成分濃度が求まる原理は反応式（２）
から理解できるが、前記各成分は何れも１１ηｏＪ３当
り２ ｍｏｌの０２を吸収するので、０．２１４／２
＝ ０．１０７が係数として用いられる。ＸＯのみでは
Ｉ ｒｖＩ Ｐ 、 ＨｘＲは０２吸収をしないので（
３）式でＣＨＸの求まること（ま明らかであり、次にｄ
２に対応する反応はＸＯ添加ですでにＨｘが消失してい
るから、ｃ（ｉｉ’ｙ＋□７ＩＸＲ）が求まることにな
る。したがって（ｄｌ＋ｄ２）は全成分のｍ０石数に対
応する。さらに、ｄ３に対応する反応では初めに加えた
成分は消失してＳす、ｐＨが中性であるためＡＰは存在
していても作用できないので、ＩＭＦを除（成分が検出
できるので（ｄｌ＋ｄ２）とｄ、の差から（４）により
Ｉ Ｍ Ｐの濃ＩＷが分る。Ｃ，ｔ（ｘＲの計算は特に
説明するまでもないことであろう。
から理解できるが、前記各成分は何れも１１ηｏＪ３当
り２ ｍｏｌの０２を吸収するので、０．２１４／２
＝ ０．１０７が係数として用いられる。ＸＯのみでは
Ｉ ｒｖＩ Ｐ 、 ＨｘＲは０２吸収をしないので（
３）式でＣＨＸの求まること（ま明らかであり、次にｄ
２に対応する反応はＸＯ添加ですでにＨｘが消失してい
るから、ｃ（ｉｉ’ｙ＋□７ＩＸＲ）が求まることにな
る。したがって（ｄｌ＋ｄ２）は全成分のｍ０石数に対
応する。さらに、ｄ３に対応する反応では初めに加えた
成分は消失してＳす、ｐＨが中性であるためＡＰは存在
していても作用できないので、ＩＭＦを除（成分が検出
できるので（ｄｌ＋ｄ２）とｄ、の差から（４）により
Ｉ Ｍ Ｐの濃ＩＷが分る。Ｃ，ｔ（ｘＲの計算は特に
説明するまでもないことであろう。
上記した本発明の特長と利点を列挙する。
（１）検液の着色、′１！Ａす、紫外吸光性等の影響を
受けないので試料あ前処理が楽である。
受けないので試料あ前処理が楽である。
（２）測定が極めて迅速である、っ
（３）分別２選択性が高い。
（４）装置がきわめて簡単なものでよい。
（５） ０．１μｎ〕０．８以下０．００５ ｔｔ ｍ
ｏ、ｅ／ ｈ＋ｊ！ ノ低凍度で測定でき、極めて高感
度である。
ｏ、ｅ／ ｈ＋ｊ！ ノ低凍度で測定でき、極めて高感
度である。
（６）酵素の使用量が小さい反応槽により節約できる。
しかも実施例２のように−ｉ！添加した酵素を（つかえ
して利用すること（ＸＯ。
して利用すること（ＸＯ。
３回、Ｉぐ２２回）もできる１、
（７）常温ですべての操作をおこｌよい、かつ危険な薬
品を使わないのできわめて安定である。
品を使わないのできわめて安定である。
本発明の方法は以上の利点を有するため前記した諸成分
の分析にきわめて有効な・ものである。
の分析にきわめて有効な・ものである。
第１図は本発明に用いる反応槽の側断面の略図、第２図
はキサンチン（Ｘ）、ヒポキサンチン（Ｈｘ）の分析の
さいのＤｏのステップダウン曲線、第３図は、キサンチ
ン、ヒポキサンチン混合比とキサンチン酸化酵素（キサ
ンチンオキシダーゼ）、ウリカーゼとの二段酸化反応の
心流減少比（ｄｌ／ｄ２）との関係線であり、第４図は
、イノシン酸、イノシン、ヒポキサンチン混合液の分析
のさいの三゛段酸化反応のＤＯステップダウン曲線であ
る。 第４図 （ｔｏｍＶ７区分） ［Ｙｎ −４馴ｊｍ４Ｍ区分） ３２５−
はキサンチン（Ｘ）、ヒポキサンチン（Ｈｘ）の分析の
さいのＤｏのステップダウン曲線、第３図は、キサンチ
ン、ヒポキサンチン混合比とキサンチン酸化酵素（キサ
ンチンオキシダーゼ）、ウリカーゼとの二段酸化反応の
心流減少比（ｄｌ／ｄ２）との関係線であり、第４図は
、イノシン酸、イノシン、ヒポキサンチン混合液の分析
のさいの三゛段酸化反応のＤＯステップダウン曲線であ
る。 第４図 （ｔｏｍＶ７区分） ［Ｙｎ −４馴ｊｍ４Ｍ区分） ３２５−
Claims (1)
- 外気の酸素の侵入のないようにした反応槽にｐＨ緩衝剤
及び被検液を入れ、溶存酸素の吸収反応を生起させる複
数の生体触媒を順次添加し、複数の成分番選択的かつ段
階的に酸化し、その酸化過程をセンサーにより自動記録
して溶存酸素のステップダウン曲線を求め、添加触媒の
種類及び添加順序から成分を定性し、溶存酸素の減少幅
から定量をゴになうことを特徴とする複数の成分の迅速
な分析方法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58036736A JPS59163555A (ja) | 1983-03-08 | 1983-03-08 | 複数成分の迅速な分析方法 |
| US06/584,347 US4725539A (en) | 1983-03-08 | 1984-02-28 | Method for analyzing plural oxidizable components in a liquid |
| DE3408502A DE3408502C2 (de) | 1983-03-08 | 1984-03-08 | Verfahren zur Schnellanalyse von mehreren in einem flüssigen System vorhandenen Bestandteilen |
| US07/616,766 US5175088A (en) | 1983-03-08 | 1990-11-20 | Rapid analysis of plural components |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58036736A JPS59163555A (ja) | 1983-03-08 | 1983-03-08 | 複数成分の迅速な分析方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59163555A true JPS59163555A (ja) | 1984-09-14 |
| JPH0366614B2 JPH0366614B2 (ja) | 1991-10-18 |
Family
ID=12478015
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58036736A Granted JPS59163555A (ja) | 1983-03-08 | 1983-03-08 | 複数成分の迅速な分析方法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4725539A (ja) |
| JP (1) | JPS59163555A (ja) |
| DE (1) | DE3408502C2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5175088A (en) * | 1983-03-08 | 1992-12-29 | Oriental Yeast Co. Ltd. | Rapid analysis of plural components |
| CN107185421A (zh) * | 2017-07-18 | 2017-09-22 | 汇森生物设备镇江有限公司 | 一种用于高粘度料液的精确配液系统 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3879263A (en) * | 1973-09-06 | 1975-04-22 | Du Pont | Method for the determination of amylase |
| US4040908A (en) * | 1976-03-12 | 1977-08-09 | Children's Hospital Medical Center | Polarographic analysis of cholesterol and other macromolecular substances |
| DE2965849D1 (en) * | 1978-08-18 | 1983-08-18 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | Method and test composition for the determination of a substrate for xanthine-oxidase, including a novel xanthine-oxidase and method for the preparation thereof |
| JPS6031472B2 (ja) * | 1978-12-14 | 1985-07-22 | 協和醗酵工業株式会社 | 酸性ウリカ−ゼ |
| JPS55149050A (en) * | 1979-05-08 | 1980-11-20 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | Enzyme electrode |
| JPS5697863A (en) * | 1980-01-07 | 1981-08-06 | Hitachi Ltd | Method and apparatus for analyzing amylase |
| JPS56164797A (en) * | 1980-05-21 | 1981-12-17 | Toyo Jozo Co Ltd | Improved method of determining components in samples |
| JPS5783287A (en) * | 1980-11-14 | 1982-05-25 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | Elimination of hydrogen peroxide |
| JPS57177699A (en) * | 1981-04-28 | 1982-11-01 | Fuji Electric Co Ltd | Determination of alpha-amylase by means of enzyme electrode method |
| JPS5948097A (ja) * | 1982-09-14 | 1984-03-19 | Amano Pharmaceut Co Ltd | ポリアミン及びアセチルポリアミンの分別定量方法 |
| IT1179354B (it) * | 1984-03-22 | 1987-09-16 | Miles Italiana | Composizione e dispositivo per la determinazione enzimatica di fosfati inorganici in campioni di fluidi quali urina e sangue |
-
1983
- 1983-03-08 JP JP58036736A patent/JPS59163555A/ja active Granted
-
1984
- 1984-02-28 US US06/584,347 patent/US4725539A/en not_active Expired - Fee Related
- 1984-03-08 DE DE3408502A patent/DE3408502C2/de not_active Expired
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5175088A (en) * | 1983-03-08 | 1992-12-29 | Oriental Yeast Co. Ltd. | Rapid analysis of plural components |
| CN107185421A (zh) * | 2017-07-18 | 2017-09-22 | 汇森生物设备镇江有限公司 | 一种用于高粘度料液的精确配液系统 |
| CN107185421B (zh) * | 2017-07-18 | 2023-08-29 | 汇森生物设备镇江有限公司 | 一种用于高粘度料液的精确配液系统 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0366614B2 (ja) | 1991-10-18 |
| DE3408502C2 (de) | 1986-11-13 |
| DE3408502A1 (de) | 1984-09-20 |
| US4725539A (en) | 1988-02-16 |
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