JPS5916216B2 - 電気泳動分析用脱色液の処理方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は濾紙、セルロースアセテートフィルム −２等
の電気泳動用支持体片の脱色に用いる脱色液の処理方法
に関するものである。

電気泳動法は血清等の体液の蛋白成分の分離定量法とし
て臨床検査の分野で盛んに用いられている方法である。

分析のプロセスは、濾紙、セルロ 、９−スアセテート
フイルム等の支持体片に塗布された血清を泳動分離させ
、次いで支持体片上で分離された成分を染色し、更に支
持体片の血清成分以外の部分を脱色し、その後各成分の
光学的密度を濃度計で定量測定するという順序で行なわ
れる。このような分析プロセスに対して電気泳動学会で
は標準操作法を制定している。従来このような電気泳動
法による分析は総て人手で行なつている。

すなわち、血清を泳動分離させた支持体片を染色液中に
浸して染色し、次いで脱色液中に浸して分離成分以外の
部分を脱色するプロセスを人手で行なつている。しかし
、電気泳動法が広く用いられるようになつてくるのに伴
なつて検体数が増大し、特に研究所、大病院では一田こ
非常に多くの検体の定量測定を行なう必要が生じてきた
。このために、人員の確保が必要となフ ると共に比較
的単純な操作を多数回繰返すことによる人的誤差が生ず
る可能性が生じてきた。従つて、上述した分析操作を自
動的に行なう自動染色処理装置が望まれるようになつた
。従来の用手法による染色および脱色は各支持体； 片
に対して常に新しい染色液および脱色液を用いているの
で、これをそのまま自動化すると多量の染色液および脱
色液が必要となり、分析コストが高くなると共に染色液
および脱色液のための貯蔵スペースが大きく必要となり
、装置が大形となるフ といつた欠点が生ずる。

一方、毎回の染色液および脱色液の使用量を少なくする
と、従来の標準操作法の条件を満足できないものとなり
、所要の信頼度が得られないという欠点が生ずる。本発
明者は、このような欠点を除去し、電気泳５ 動法にお
ける支持体片の染色、脱色を標準操作法に準じて自動的
に行なうことができ、しかも染色液、脱色液の使用量を
少なくするために、同一の染色液を複数の支持体片に対
して繰返し用いながら、各支持体片に染色液を供給して
染色し、染色０ を終つた各支持体片に、複数回脱色液
を供給して脱色する方法を開発した。

このような方法では脱色液は繰返し使用中にその効果が
低減して行くので、疲労度を検出し、或る程度以上に疲
労した場合には補給または交替を”５ しなければなら
ず、そのためには疲労度を検知することが必要となる。

しかし、脱色液の疲労度を検知することは非常に困難で
あり、一般に相当複、１−雑で高価な測定装置が必要と
なる。

さらに、このように同一の脱色液を用いて複数回脱色を
行なう場合には、各回の脱色効果が順次の支持体片に対
してほぼ均一となるようにしないと、泳動測定がばらつ
き、正確な分析ができなくなる欠点がある。本発明の目
的は、同一の脱色液を複数回の脱色に使用でき、しかも
各支持体片に対する各回の脱色をほぼ疲労度の等しい脱
色液で行なうことができ、きわめて簡単に判定すること
ができる方法を提供しようとするものである。本発明は
、電気泳動法により各検体の成分を分離させ、染色液に
より染色した複数の支持体片の各々を順次に複数回に亘
つて脱色するに当たり、最終回の脱色は新しい脱色液で
行ない、それ以前の脱色は少なくともｌ回脱色に使用し
た古い脱色液で行ない、この古い脱色液をその疲労度に
応じて予じめ決めた回数だけ脱色に使用した後に廃棄す
ることを特徴とするものである。

次に図面を参照して本発明を詳細に説明する。

第１図は本発明の判定方法を適用した自動染色処理装置
の一例の構成を線図的に示すものである。本例では、支
持体片１を、電気泳動法の中で現在最も広く用いられて
いるセルロースアセテートフイルムとする。第１図に示
すように、電気泳動分離された支持体片１を多数収納し
、かつ順次に１個づつ送り出すことができる供給ラツク
２を設ける。各支持体片１は第２図に示すように、セル
ロースアセテートフイルム１ａの両側縁にプラスチツク
枠１ｂ，１ｃを取り付けた構造とする。供給ラツク２の
近傍に連続的に移動する無終端チエーン３を設ける。供
給ラツク２から送り出される順次の支持体片１はこのチ
エーン３の各区画内に装填され、プレート４上を順次に
矢印で示すように右方に送られる。このプレート４は第
３図に示すように両側縁４ａ，４ｂを僅かに突出させた
浅い樋状とする。従つて順次の支持体片１の枠１ｂ，１
ｃがこのプレート４の突縁４ａ，４ｂ上に乗つかつて案
内されることになる。プレート４は染色区間Ｓと、脱色
区間Ｄとを有している。

第３図はプレート４の染色区間Ｓを示し、この区間Ｓに
おいてプレート４には染色液注入孔Ｓ１と、染色液流出
孔Ｓ１′とを形成する。

脱色区間Ｄにおいても、同様の構造の注入孔と流出孔と
の組を５組Ｄｌ，Ｄｌ′；Ｄ２，Ｄ２′；・・・Ｄ５，
Ｄ５′（第１図参照）設ける。第１図に示すように、こ
れらを支持体片１の移動方向に順次に配置する。またプ
レート４の表面には注入孔Ｓ１と連通する条溝４ｃを形
成する。支持体片１が染色液注入孔Ｓ１の位置にくると
、弁Ｂ１を閉じ、弁Ｂ２を開き、ポンプＰ１を働らかせ
て、染色液槽Ｃ。

内の染色液を一定量吸引する。次に弁Ｂ２を閉じ、弁Ｂ
１を開いてポンプＰ１を働かせ、吸引した一定量の染色
液をプレート４の染色液注入孔Ｓ１から注入し、条溝４
ｃ内に充満させる。支持体片１とプレート４との間の間
隔は小さいから、注人孔Ｓ１から注入された染色液は毛
細管現象で支持体片１とプレート４との間に広がり、支
持体片１の全面に染色液が被着することになる。この染
色液は、その粘性および表面張力によつて、支持体片１
とプレート４との間に保持されたま＼支持体片１の移動
に伴なつて移動し、染色液流出孔Ｓ１′の位置に達する
。支持体片１がＳ１からＳ／まで移動する時間を、１分
３０秒〜３分の間の適当な時間に定め、この時間中に規
定の染色処理が行なわれるようにする。

流出孔Ｓ／の位置に達すると染色液は流出孔Ｓ１′を経
て流下し、染色液槽Ｃ。中に戻る。このようにして染色
液は循環しながら、順次の支持体片１を染色することに
なる。このように同一の染色液を多数の支持体片の染色
に使用することができるので、染色液の使用量は少なく
て済み、染色液槽ＣＯを、容積の小さいものとすること
ができると共に処理コストを下げることができる。染色
液としては、ホンソー３Ｒを６％のトリクロル酢酸水溶
液に０，４〜０．８％に溶解したものを用いる。プレー
ト４の脱色区間Ｄでは脱色操作が行なわれ、支持体片上
に分離された血清成分以外の部分は脱色される。本例装
置では、５個の脱色液槽Ｃ１〜Ｃ５を設け、これら液槽
中の脱色液を１台のポンプＰ２によつて吸排し、順次の
脱色位置で順次の支持体片１に脱色液を被着し得るよう
にする。すなわち、或る支持体片１に注目した場合、こ
れが第１の脱色液注入孔Ｄ１の位置にあるとき、弁Ｅ２
を開いてポンプＰ２を作動させ、第１の脱色液槽Ｃ１か
ら一定量の脱色液を吸引する。この場合、他の弁Ｅｌ９
ｆｌ９ｆ２９ｇｌ９ｇ２９ｈレＨ２！Ｉｌｐｌ２は総て
閉じている。次に弁ｅ１を開き、弁Ｅ２を閉じてポンプ
Ｐ２を駆動し、脱色液注入孔Ｄ１から脱色液を注入する
。注入後弁ｅ１を閉じる。上述した染色区間Ｓにおける
のと同様に、脱色液は毛細管現象により支持体片１とプ
レート４との間に充満し、更に支持体片１と一緒に脱色
液流出孔Ｄ１′の位置まで移動し、ここから流出する。
この流出される脱色液は染色液により著しく汚染されて
いるから廃棄する。この支持体片１が第２の脱色液注入
孔Ｄ２の位置に来ると、弁Ｆ２を開き、ポンプＰ２を再
び駆動し、脱色液槽Ｃ２から一定量の脱色液を吸引する
。次に弁Ｆ２を閉じ、弁ｆ１を開いて吸引した脱色液を
第２脱色液注入孔Ｄ２を経て支持体片１とプレート４と
の間に注入する。注入後弁ｆ１を閉じる。支持体片１が
第２の脱色液流出孔Ｄ２′の位置に来ると、支持体片１
とプレート４との間に保持した脱色液を流出孔Ｄ２′を
経て流出させる。この脱色液は第１の脱色液槽Ｃ１に戻
す。以下、支持体片１が第３，第４，第５の脱色液注入
孔Ｄ３，Ｄ４，Ｄ５の位置に来たときに第３，第４，第
５の脱色液槽Ｃ３，Ｃ４，Ｃ５から脱色液を注入し、第
３，第４，第５の流出孔Ｄ３′，Ｄ４′，Ｄ５′を経て
流出させ、第２，第３，第４の脱色液槽Ｃ２，Ｃ３，Ｃ
４に戻す。第５の脱色液槽Ｃ５には新たな脱色液を補給
するようにする。このように構成することにより、順次
の脱色液槽Ｃ１〜Ｃ５には染色液で汚染される程度の少
ない脱色液が収容されているため、きわめて少量の脱色
液で理想的な脱色操作が行なわれる。脱色液としては、
１〜３０１）の酢酸水溶液を用いる。

また支持体片１がＤ１からＤ，′，Ｄ２からＤ２′・・
・Ｄ５からＤ５′まで移動する時間がｌ〜２分となるよ
うにする。第１図の区間Ｋは加熱区間であり、ヒーター
５により加熱した空気を支持体片１に送り、乾燥する。

このようにして、染色、脱色、乾燥処理の終つた支持体
片１はプレート４の右端でプレート４から落下し、収納
ラツク６内に収納される。第１図において、染色液槽Ｃ
。内に収容された染色液は順次の支持体片の染色に使用
して行くのに伴つてその量が徐々に減少すると共に染色
効果が低下する。従つて、本例においては例えばカウン
ターによつて検体数をカウントし、所定の検体数だけ処
理した後に、染色液を補給するか交替するようにする。
また第５の脱色液槽Ｃ５内の脱色液も処理が進むにつれ
て減少するから、処理検体数をカウントし、所定の検体
数だけ処理した後に脱色液を補給するか交替するように
する。第１図においては、符号７で示す疲労判定および
液補給交替制御プロツクがこのような機能を有するもの
である。第４図は１台のポンプＰ２によつて脱色液の注
入を行なう場合、同時刻に弁の動作が重ならないように
するためのタイミングを示す線図である。

順次の支持体片１の移送間隔をｐとし、順次の脱色液注
入孔と流出孔との間隔ＤｌＤｌ′−Ｄ２ＤＪ＝Ｄ３Ｄ３
′＝Ｄ４Ｄ４′＝Ｄ５Ｄ５′＝ｑとし、順次の脱色液注
入孔の間隔をＤｌＤ２−１１，Ｄ２Ｄ３＝１２，Ｄ３Ｄ
４−１３，Ｄ４Ｄ５−１４とするとき、のような位置関
係をもたせることによつて弁が同時に開くことを阻止す
ることができる。ここにＭ，ｎは正数であつて、ｍは支
持体片１の移動速度、装置の寸法等の設計要素によつて
適当な値に選定され、ｎは脱色液注入孔の個数によつて
定められる。電気泳動学会によつて制定された標準操作
法によれば、脱色液を５回変える方法が推奨されている
ので、その場合には、ｎ−５とすればよい。第１図およ
び第４図はｎ＝５の例であり、支持体片群が右方へ移送
されるものであり、支持体片１１に脱色液が注入された
後、支持体片群が−５Ｐだけ右方へ移動すると、支持体
片１−２に脱色液が注入される。更に−ｐだけ移動して
支持体片１−３に脱色液が注入される。

以下、支持体片が査ｐだけ移動する毎に支持体片１−３
，１−４，１−５に脱色液が注入される。更に−５Ｐだ
け移動すると、脱色液注入孔Ｄ１の位置に来る支持体片
１−１＊に脱色液が注入され、以下−ｐだけ移動する毎
に支持体片１−２＊，１−３＊，１−４＊，１−５＊に
脱色液が注入される。このように脱色液の注入タイミン
グをずらすことにより、ｌ台の比較的小型のポンプを用
いることができ、この場合、脱色液間の混合も起らない
。これに対し総ての脱色液の注入をｌ台のポンプにより
同時に行なうとすると大型のポンプが必要になると共に
脱色液の混合が起る惧れがある。上述したように本発明
の脱色液処理方法によれば、少量の脱色液を用いても電
気泳動学会で推奨している標準操作法と同等の良好な脱
色を行なうことができ、したがつて処理コストを低減す
ることができる。

また、脱色液の使用量が少ないのでこれらの保守管理が
簡単となると共に貯蔵スペースを少なくすることができ
、したがつて装置全体を小形かつ簡単とすることができ
、安価とすることができる。しかも良好な脱色および染
色を高い信頼度で自動的に行なうことができるので、省
力化、処理能率の向上、誤差の低減等の利点も得られる
。さらに、最後の脱色は常に新しい脱色液で行なうと共
に古い脱色液はその疲労度に応じた回数だけ脱色を行な
つた後に廃棄するようにしたため、各支持体片に対する
脱色効果はほぼ均一となり、泳動測定の精度が向上する
ことになる。本発明は上述した例にのみ限定されるもの
ではなく、幾多の変更゛を加え得ること勿論である。例
えば上述した例ではチエーン３を用いたが、ベルトその
他の適当な移送機構を用いることもできる。またチエー
ン、ベルト等は必らずしも連続的に送る必要はなく、間
欠的に送ることもできる。さらに上述した例では染色液
および脱色液の双方の疲労度を判定するようにしたが、
いずれか一方の疲労度を判定することもできる。特に染
色液は多数の支持体に対して用いることができるので染
色液の疲労度だけを検体数の計数値に基づいて判定する
ことができる。また、上述の例では、染色処理した支持
体片１を収納ラツク６に落し込むようにしたが、順次の
染色処理した支持体片１を濃度計に直接送り込んで光学
的密度を測定して定量分析するようにすることもできる
。

この場合には電気泳動法による分析定量を行なう自動測
定装置が得られる。更に上述した例では１台のポンプに
よつて５回の脱色液注入を行なうようにしたが、例えば
５個のポンプを設けることもできる。この場合にはこれ
ら５個のポンプを同時に駆動することができる。また染
色液、脱色液注入、流出機構も上述した例だけに限定さ
れるものではなく、他の任意の注入、流出機構を用いる
ことができる。また上述した例では支持体片１にはｌ検
体分のフイルム１ａを収納したが複数の検体のフイルム
を同時に収納することもできる。またフイルム１ａは上
述したように枠１ｂ，１ｃで両側縁を狭んだ構造とする
必要になく、例えばプラスチツクケース内に収納するこ
ともできる。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の脱色液処理方法を適用した自動染色処
理装置の一例の構成を示す線図、第２図は第１図に示す
自動染色処理装置に用いる支持体片の構成を示す斜視図
、第３図は第１図に示す自動染色処理装置のプレートの
構造を示す斜視図、第４図は第１図に示す自動染色処理
装置における脱色操作を示す線図である。 １・・・・・・支持体片、２・・・・・・供給ラツク、
３・・・・・・無終端チエーン、４・・・・・・プレー
ト、５・・・・・・ヒーター６・・・・・・収納ラツク
、７・・・・・・疲労判定および液補給、交替制御プロ
ツク、Ｓ・・・・・・染色区間、Ｄ・・・・・・脱色区
間、Ｋ・・・・・・乾燥区間、Ｐ１・・・・・・染色液
供給ポンプ、Ｐ２・・・・・・脱色液供給ポンプ、ＣＯ
・・・・・・染色液槽、Ｃ１〜Ｃ５・・・・・・脱色液
槽。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ 電気泳動法により各検体の成分を分離させ、染色液
   により染色した複数の支持体片の各々を順次に複数回に
   亘つて脱色するに当たり、最終回の脱色は新しい脱色液
   で行ない、それ以前の脱色は少なくとも１回脱色に使用
   した古い脱色液で行な い、この古い脱色液をその疲労
   度に応じて予じめ決めた回数だけ脱色に使用した後に廃
   棄することを特徴とする電気泳動分析用脱色液の処理方
   法。